CN109576251A - 玉米腺苷酸环化酶ZmRPP13-LK3、其编码基因及其应用 - Google Patents

玉米腺苷酸环化酶ZmRPP13-LK3、其编码基因及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种玉米腺苷酸环化酶ZmRPP13‑LK3、其编码基因及其应用，旨在解决高温胁迫伤害的技术问题。本发明筛选一种玉米腺苷酸环化酶ZmRPP13‑LK3，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，并将该腺苷酸环化酶在玉米抵制高温胁迫伤害中的应用；设计一种编码玉米腺苷酸环化酶ZmRPP13‑LK3的基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，并将该基因在玉米高温抵制调控和耐高温玉米育种中应用。本发明首次筛选出了玉米中抵抗高温胁迫的苷酸环化酶ZmRPP13‑LK3及其编码基因，探明了部分玉米高温胁迫伤害作用机制，为玉米生产中解决高温胁迫伤害提供了新的思路，为玉米抗高温胁迫育种提供了新的技术基础。

Description

玉米腺苷酸环化酶ZmRPP13-LK3、其编码基因及其应用
技术领域
本发明涉及分子生物学技术领域，具体涉及一种玉米腺苷酸环化酶ZmRPP13-LK3、其编码基因及其应用。
背景技术
近年来，随着大气中CO2等温室气体浓度不断的升高而导致全球气候变暖加剧。而全球气候变暖趋势的愈加明显，高温对农作物的生长发育和产量的影响也愈加严重。尤其是夏季高温，对绿色农作物影响较大，长时间的高温胁迫会影响到农作物的形态、生理结构，以及植株体内的细胞光合作用。
禾谷类作物获得高产量的适宜温度一般在20～30℃。在我国粮食作物占据重要地位的玉米就是一种喜温作物，温度对其生长发育以及生理起着重要作用。适宜的温度可以促进玉米的正常生产，但如果夏季高温超过其适宜的范围，所形成的高温胁迫就会成为其新陈代谢、光合作用的严重障碍。在我国实际的玉米生产中，玉米生殖生长期经常遇到32℃以上的高温；而在世界主要玉米产区，高温也是一个常见的非生物胁迫，是玉米产量降低的主要原因之一。
为解决高温对玉米生长所造成的高温胁迫伤害的问题，目前多采用的技术途径是选育耐高温玉米新品种，即将玉米的丰产性和抗热性结合起来统筹考虑，以选育出集丰产、耐热于一体的优良玉米品种。虽然取得了一定的研究成果，但是该方法需要筛选积累大量的种质资源，耗时耗力，需要长期的研究和大量持续的资金投入，而且进展较为缓慢，满足不了当前玉米种植产业的迫切的需要。
而要从根源上解决玉米高温胁迫伤害的问题，需要加强玉米高温胁迫分子生物学方面的研究。但是目前为止，尚缺乏高温胁迫对不同基因型的玉米响应的生理机制的深入了解和掌握。因此，亟待研究能够响应高温胁迫的作用机理及其中的关键反应酶，以期为玉米抗高温胁迫育种提供新的技术支撑。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种玉米腺苷酸环化酶ZmRPP13-LK3、其编码基因及其应用，以期从分子生物学层面探明玉米高温胁迫伤害作用机制、进而从基因调控、分子育种等方面探求解决玉米受高温胁迫伤害的技术问题。
为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：
筛选出一种玉米腺苷酸环化酶ZmRPP13-LK3，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述序列具有保守的ATP结合位点和AC催化中心基序。
所述玉米腺苷酸环化酶ZmRPP13-LK3能够在玉米抵制高温胁迫伤害中进行应用。
编码所述玉米腺苷酸环化酶ZmRPP13-LK3的基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
编码玉米腺苷酸环化酶ZmRPP13-LK3的基因能够在玉米高温抵制调控中进行应用。
为减少高温诱导的HSP基因表达，并抑制高温诱导的H2O2和MDA含量的增加，在玉米中过表达所述编码玉米腺苷酸环化酶ZmRPP13-LK3的基因。
所述编码玉米腺苷酸环化酶ZmRPP13-LK3的基因还可以在耐高温玉米（基因工程）育种中应用。
与现有技术相比，本发明的有益技术效果在于：
1.本发明首次筛选并验证了玉米中抵抗高温胁迫的功能基因及其表达的玉米腺苷酸环化酶ZmRPP13-LK3，具有重要的应用价值。
2.本发明研究探明了部分玉米高温胁迫伤害作用机制，为玉米生产中解决高温胁迫伤害、选育耐高温新品种提供了新的思路及技术途径。
3.本发明研究验证了高温胁迫的部分作用机理及其中的关键反应酶，为玉米抗高温胁迫育种提供了新的技术途径。
附图说明
图1为 ZmRPP13-LK3蛋白结构以及活性位点预测图。
图2为原生质体瞬时干扰处理后模拟高温胁迫cAMP的含量测定图；
其中，CK为对照；H为原生质体高温胁迫处理；PEG+H为原生质体转化蒸馏水后高温胁迫处理；ds-PSIP+H为原生质体经转化dsPSiP之后高温胁迫处理；ds-RPP13-LK3+H为原生质体经转化dsRPP13-LK3之后高温胁迫处理；平均值为±SE(n=6)，同一字母表示的均值在P<0.05时无显着性差异。
图3为WB检测电泳图。
图4为ZmRPP13-LK3和PSiP活性检测曲线图。
图5为在HEK293细胞中瞬时过表达PSiP和RPP13-LK3后cAMP的含量测定图；
其中，proEM为HEK293中转染空载proEM；proEM-PSIP为转染重组质粒proEM-PSIP；proEM-RPP13-LK3为转染重组质粒proEM-RPP13-LK3；平均值为±SE(n=6)，同一字母表示的均值在P<0.05时无显着性差异。
图6为RNAi干扰ZmRPP13-LK3对高温诱导的玉米HSP16.9表达检测图。
图7为RNAi干扰ZmRPP13-LK3对高温诱导的玉米HSP17.4表达检测图。
图8为RNAi干扰ZmRPP13-LK3对高温诱导的玉米HSP70表达检测图。
图9为RNAi干扰ZmRPP13-LK3对高温诱导的玉米HSP82表达检测图。
图10为RNAi干扰ZmRPP13-LK3对玉米高温引起的MDA积累检测图。
图11为RNAi干扰ZmRPP13-LK3对玉米高温引起的H2O2积累检测图。
在上述图6～11中，CK为对照；H为原生质体高温胁迫处理；PEG+H为原生质体转化蒸馏水后高温胁迫处理；ds-PSIP+H为原生质体经转化dsPSiP之后高温胁迫处理；ds-RPP13-LK3+H为原生质体经转化dsRPP13-LK3之后高温胁迫处理；平均值为±SE(n=6)，同一字母表示的均值在P<0.05时无显着性差异。
具体实施方式
下面结合附图和实施例来说明本发明的具体实施方式，但以下实施例只是用来详细说明本发明，并不以任何方式限制本发明的范围。
在以下实施例中所涉及的仪器设备如无特别说明，均为常规仪器设备；所涉及的试剂如无特别说明，均为市售常规试剂；所涉及的试验方法，如无特别说明，均为常规方法。
实施例一：玉米腺苷酸环化酶ZmRPP13-LK3的鉴定
真核生物中，腺苷酸环化酶家族是由大量的跨膜12次的腺苷酸环化酶（tACs）和小量的可溶性的腺苷酸环化酶（sACs）组成。腺苷酸环化酶(ACs)能够催化cAMP的合成，cAMP在玉米耐高温胁迫中有一定的作用。ZmPSiP是一个已被证实的腺苷酸环化酶是玉米花粉管萌发蛋白(ZmPSiP；AJ307886)，其在花粉管的生长和定向发挥着重要功能。
1. 筛选和比对
基于iTraq量化蛋白质组学，筛选出一个被高温及cAMP外源处理显著诱导的玉米腺苷酸环化酶序列，命名为ZmRPP13-LK3，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
利用Omega将以上序列与7个已鉴定的植物中的ACs序列进行了比对，发现ZmRPP13-LK3与ZmPSiP的同源性最高，并且具有相对保守的ATP结合位点和AC催化中心基序。
在https://zhanglab.ccmb.med.umich.edu/I-TASSER/output/S416810/7oxvzc/网站上预测蛋白结构，如图1所示，a为RPP13-LK3蛋白结构预测图；b为预测ATP结合位点，与ATP结合的氨基酸残基为D71、I76、G107、A108、G109、K110、S111、T112、R260、L288 、P323、L324、I327；c为预测Mg2+结合位点，与Mg2+结合的氨基酸残基为S111、D231、T258；d为预测ANP结合位点，与ANP结合的氨基酸残基为P105、G106、G107、A108、G109、K110、S111、T112、D232、A260、S285、I327。
编码玉米腺苷酸环化酶ZmRPP13-LK3的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
在植物中，cAMP作为信号分子正在逐渐被证实具有多种功能。目前，在植物细胞中只有7种ACs被鉴定，且被证实具有不同的功能。第一个被证实的腺苷酸环化酶是前述米花粉管萌发蛋白(ZmPSiP；AJ307886)；在拟南芥中，五肽重复蛋白(AtPPR-AC；AT1G62590)和K-吸收渗透酶(AtKUP 7；AT5G09400) 被证实是腺苷酸环化酶，但蛋白功能未知，而网格组装蛋白(AT1G68110；AtClAP)被证实是腺苷酸环化酶且被预测具有防御功能；烟草中的腺苷酸环化酶 (NbAC；ACR77530)参与烟草毒素-β-内酰胺诱导的细胞死亡和野火病的发生；朱顶红中的腺苷酸环化酶（HpAC1；ADM83595）参与机械损伤和纳氏原虫感染引起的应激反应；地钱中的腺苷酸环化酶（MpCAPE）可能参与了雄性生殖过程。这些结果表明，植物中的腺苷酸环化酶基因被广泛的大基因家族所掩盖，并且其表达、结构、活性和调控等方面都存在差异。
而本发明人所发现的玉米腺苷酸环化酶ZmRPP13-LK3与以上已知的酶类均不相同，是一种新的腺苷酸环化酶，能够催化cAMP的合成。
2. 腺苷酸环化酶ZmRPP13-LK3活性验证
为了证明ZmRPP13-LK3是否具有腺苷酸环化酶催化活性，采用了以下三种不同的方法进行验证。以已注释且实验证实的玉米ACZmPSiP为AC活性试验的阳性对照。
（1）在高温胁迫下对ZmRPP13-LK3和ZmPSiP进行瞬时RNA干扰（RNAi），转化后的原生质体在25℃孵育12h，并在高温胁迫(38℃)下孵育30min，通过LC/MS分析鉴定了玉米叶片原生质体中cAMP的含量。
结果如图2所示，与对照相比，高温胁迫显著增加了cAMP含量，而RNAi干扰ZmRPP13-LK3或ZmPSiP的表达后显著降低了高温诱导的cAMP增加量。此外，RNAi干扰ZmRPP13-LK3和ZmPSiP对高温诱导的cAMP降低程度是完全一致的。
（2）为验证ZmRPP13-LK3是否能够在体外催化ATP生成cAMP，利用真核蛋白诱导表达技术在人肾上皮细胞系HEK293中分别诱导表达ZmRPP13-LK3和ZmPSiP，并用亲和纯化法进行纯化。
结果如图3所示，利用His抗体，WB检测真核诱导表达纯化的PSiP和RPP13-LK3的完整性。
然后体外检测真核重组表达出的PSiP和RPP13-LK3的腺苷酸环化酶的活性，以ATP为底物，Mn2+为辅助因子，Ca2+为调节剂，分别加入纯化出的ZmRPP13-LK3或ZmPSiP，之后进行室温孵育，利用LC/MS测定反应终体系中的cAMP含量。
结果如图4所示，反应30 min后，ZmRPP13-LK3的最大活性达到1.1μg/ml，60 min后PSiP也达到最大活性达到1.2μg/ml。
（3）利用HEK 293细胞进行ZmRPP13-LK3和ZmPSiP瞬时过表达，检测细胞内cAMP积累水平，其中以转染空载proEM的HEK293细胞作为对照。
结果如图5所示，与对照相比，瞬时表达ZmRPP13-LK3或ZmPSiP的HEK293细胞中cAMP水平显著高于空载体proEM的HEK293细胞，且ZmRPP13-LK3瞬时表达的HEK 293细胞中cAMP水平高于HEK293细胞中ZmPSiP的瞬时表达中的水平。
以上结果表明，ZmRPP13-LK3具有与ZmPSiP相似的AC活性，能够催化ATP生成cAMP。
实施例二：玉米腺苷酸环化酶ZmRPP13-LK3的耐高温功能检验
热休克蛋白（HSPs）是重要的分子伴侣，在胁迫条件下维持蛋白质的可溶状态，使解折叠的蛋白质重新折叠成有活性的构象，在提高植物对干旱、高温等胁迫的应激能力上起着关键的作用。丙二醛（MDA）含量是植物细胞膜质过氧化程度的体现，丙二醛含量高，说明植物细胞膜质过氧化程度高，细胞膜受到的伤害严重。
为确定玉米腺苷酸环化酶ZmRPP13-LK3是否参与玉米对高温的抵制，利用原生质体RNAi干扰技术，将ZmRPP13-LK3及ZmPSiP的双链RNA和蒸馏水分别转化入玉米叶片原生质体中，室温孵育12h，然后在高温胁迫（38℃）下孵育30 min。
利用qRT-PCR检测在高温胁迫下原生质体中sHSP17.4、sHSP 16.9、HSP70和HSP82基因的表达，并测定MDA和H2O2的含量。
结果如图6～11所示，RNAi干扰ZmRPP13-LK3和ZmPSiP表达后，显著抑制了高温诱导的HSP基因表达的增加，但显著促进了高温诱导的H2O2和MDA含量的增加。
综上所述，玉米腺苷酸环化酶ZmRPP13-LK3参与了玉米对高温的抵制，在玉米中过表达ZmRPP13-LK3，可催化cAMP的合成、促进高温诱导的HSP基因表达、抑制高温诱导的H2O2和MDA含量，进而能有效抵制高温胁迫产生的伤害。
上面结合附图和实施例对本发明作了详细的说明，但是，所属技术领域的技术人员能够理解，在不脱离本发明宗旨的前提下，还可以对上述实施例中的各个具体参数进行变更，形成多个具体的实施例，均为本发明的常见变化范围，在此不再一一详述。
SEQUENCE LISTING
<110> 河南农业大学
<120> 玉米腺苷酸环化酶ZmRPP13-LK3、其编码基因及其应用
<130> 2018
<160> 2
<170> PatentIn version 3.2
<210> 1
<211> 833
<212> PRT
<213> Zea mays
<400> 1
Met Ser Lys Tyr Ala Cys Phe Pro Ile Tyr Leu Thr Arg Leu His Lys
1 5 10 15
Leu Gly Ser Arg Ile Asp Ser Thr Glu Glu Arg Met Lys Lys Leu Phe
20 25 30
Gly Asp Phe Glu Lys Phe Asn Ile Ala Ala Asn Ala Ile Ala Glu Glu
35 40 45
Pro Arg Arg Tyr Ile Thr Glu Asp Asp Asp Ile Arg His Arg Arg Leu
50 55 60
Val His Pro Asn Ser Gly Asp Gln Val Gly Val Ile Gly Phe Asp Glu
65 70 75 80
Gln Ile Lys Gln Ile Glu Tyr Asp Leu Leu Asp Thr Lys Asn Arg His
85 90 95
Leu Thr Val Val Ser Ile Val Gly Pro Gly Gly Ala Gly Lys Ser Thr
100 105 110
Met Ala Lys Lys Val Tyr Ser Leu Pro Ala Val Lys Gly His Phe Lys
115 120 125
Val His Cys Trp Leu Thr Val Ser Gln Arg Ala Val Ala Thr His Asp
130 135 140
Phe Leu Lys Glu Val Val Lys Met Val Val Pro Ser His Leu Met Lys
145 150 155 160
Val Met Val Leu Arg Val Met Gly Asp Val Lys Val Lys Lys Val Asp
165 170 175
Asn Ala Arg Lys Met Met Thr Glu Lys Glu Glu Lys Lys Ile Trp Glu
180 185 190
Asp Gln Lys Ala Lys Glu Leu Glu Glu Ala Lys Glu Leu Asp Lys Leu
195 200 205
Glu Glu His Glu Val Lys Lys Leu Leu His Glu Phe Ala Leu Ser Gln
210 215 220
Arg Tyr Leu Ile Val Leu Asp Asp Ile Trp Ser Lys Asp Ala Trp Asp
225 230 235 240
Ala Ile Lys His Ala Phe Pro Asn Gln Lys Asn Gly Ser Arg Ile Ile
245 250 255
Leu Thr Thr Arg Asn Val Asp Val Ala Lys Leu Pro Gly Ala Arg Lys
260 265 270
Lys Ile Tyr Arg Pro Lys Leu Leu Asn Glu Asp Glu Ser Thr Gln Leu
275 280 285
Leu Leu Thr Thr Ala Leu Pro Glu Tyr Ile Leu Asp Gly Gly Gln Asn
290 295 300
Leu Asp Glu Leu Lys Glu Leu Gly Lys Glu Leu Ala Ile Lys Cys Gly
305 310 315 320
Gly Leu Pro Leu Ala Leu Ile Val Leu Gly Gly Tyr Leu Ser Arg Asn
325 330 335
Leu Asp Val Gly Glu Trp Lys Arg Leu Leu Thr Asn Ser Met Asp Trp
340 345 350
His Asp Leu Ile Thr Ser Asp Arg Val Ile Gly Ala Ile Leu Asp Leu
355 360 365
Ser Tyr Tyr Asp Met Pro Ser His Leu Arg Ser Cys Phe Met Tyr Thr
370 375 380
Thr Ala Phe Pro Glu Asp Ser Pro Ile Asp Val Arg Val Leu Ala Met
385 390 395 400
Leu Trp Ile Ala Glu Gly Phe Ile Pro Leu Val Arg Gly Gln Thr Arg
405 410 415
Glu Lys Val Ala Leu Lys Tyr Val Ala Glu Leu Val Gln Arg Cys Met
420 425 430
Ile Gln Ala Glu Gly Trp Thr Asn Ser Gly Met Ile Lys Val Val Lys
435 440 445
Val His Asp Ile Leu Arg Glu Trp Gly Phe Gly Arg Ala Gln Arg Glu
450 455 460
Gly Phe Met Lys Asp Cys His Ser Ala Glu Asp Ile Glu Val Ala Tyr
465 470 475 480
Ser Gly Glu Glu Met Met Lys Ala Tyr Arg Val Val Leu His Ser Ser
485 490 495
Leu Ser Leu Glu Arg Gly Val Gly Thr Thr Thr Arg Lys Leu Arg Thr
500 505 510
Leu Leu Asp Phe Asn Asn His Thr Ser Val Gln Val Pro Lys Ser Phe
515 520 525
Gln Gly Leu Arg Val Leu His Leu Asn Cys Ser Gly Glu Val Ser Leu
530 535 540
Pro Lys Asp Ile His Gln Met Arg Tyr Leu Arg Tyr Leu Gly Leu Gly
545 550 555 560
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565 570 575
Leu Glu Thr Leu Tyr Cys Thr Ala Ser Ile Asp His Ile Pro Ala Ser
580 585 590
Leu Trp Arg Asn Arg Thr Leu Arg Gln Val His Ile Pro Tyr Ala Arg
595 600 605
Ser Leu Ser Ser Pro Gln Ile Gly Ser Gln Ser Ser Lys Val Leu Val
610 615 620
Ile Leu Val Asp Cys Gly Ser Ser Thr His Met Asp Asp Ala Lys Arg
625 630 635 640
Ile Val Glu Lys Thr Arg Arg Gln Val Leu Arg Asn Lys Asn Leu Asp
645 650 655
Leu Ser Phe Cys Leu Gly Val Glu Tyr Gly Lys Tyr Gly Met Glu Val
660 665 670
Ile Gly Arg Cys Asn Thr Gly Val Gln Phe Pro Ile Asp Leu Leu Asn
675 680 685
Phe Asp Glu Thr His Asp Tyr Trp Glu Leu Lys Ile Cys Cys Ala Asn
690 695 700
Leu Leu Ser Asn Asp His Lys Ile Leu Glu Leu Gly Arg Ile Lys Asn
705 710 715 720
Leu Lys Val Leu Glu Ile Gly Glu Gln Ser Tyr Thr Gly Lys Val Met
725 730 735
Val Phe Pro Ser Gly Ser Phe Met Thr Leu Glu Arg Leu Val Leu Tyr
740 745 750
Asp Leu Ala Val Glu Lys Trp Lys Ile Glu Cys Gly Ser Met Ile Cys
755 760 765
Leu Arg Val Leu Thr Leu Cys Lys Cys Pro Lys Leu Val His Leu Pro
770 775 780
Glu Glu Leu Leu Arg Leu Pro Lys Leu Arg Ser Leu Ala Leu Ile Ala
785 790 795 800
Met Pro Leu Gly Cys Tyr Gln Lys Gly Glu Val Pro Gln Gly Val Lys
805 810 815
Ile Ser Glu Ser Asp Asp Glu Lys Val Phe Gln His Leu Pro Ile Trp
820 825 830
Arg
<210> 2
<211> 2502
<212> DNA
<213> Zea mays
<400> 2
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gctgctaatg caattgcaga agaaccacgg cgttacatca ccgaggatga tgacattcgg 180
cataggcgat tggttcatcc caactcgggt gatcaagttg gtgtcattgg gtttgatgag 240
cagattaaac agatcgagta tgacttgcta gacacaaaga acaggcacct aaccgttgtt 300
tccattgtag gtcccggtgg ggcaggcaaa tcaacaatgg ctaagaaggt gtatagtttg 360
cctgcagtga agggacactt taaagttcat tgttggttaa ctgtgtccca acgagctgtt 420
gcaactcatg attttttgaa agaggtggtt aagatggttg tgccttctca cctcatgaaa 480
gttatggttc tgcgtgtgat gggggatgtc aaggtcaaga aagtcgacaa cgctagaaag 540
atgatgaccg agaaggagga gaagaaaatt tgggaagacc agaaagctaa agagctcgag 600
gaagctaaag agcttgataa gctggaggag catgaggtga aaaagctgct tcacgagttt 660
gcactgagtc aaaggtattt gatagtgttg gatgatatat ggagcaaaga tgcctgggat 720
gctatcaagc atgccttccc taatcagaag aatggcagca gaatcattct gaccacacgc 780
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aatgaagatg aaagcaccca gttgcttctt accacggccc tcccagagta catcttggat 900
ggcgggcaaa acttggacga gttgaaggag ctgggcaaag agcttgcaat aaaatgtggt 960
ggcctgcctc ttgctttgat tgttttgggg ggatacctgt caaggaatct tgatgttggc 1020
gagtggaaga ggttgttaac aaacagtatg gattggcatg atttgatcac ctccgatagg 1080
gtcattggtg ccatactgga tcttagttac tatgacatgc cgagtcatct gagatcatgc 1140
ttcatgtaca ccacggcctt ccctgaagac tctcctattg atgtgcgagt tctggcaatg 1200
ctatggattg ctgagggttt catcccgctg gtccgaggcc agacccgcga aaaagtagcc 1260
ttaaagtatg tggctgagct agtgcagcgg tgcatgatcc aagcggaggg atggacgaac 1320
tctgggatga tcaaggtggt caaggtgcat gacatcctgc gcgagtgggg gtttggacga 1380
gctcagagag aagggtttat gaaagattgc cattctgcgg aggatatcga ggtggcctac 1440
tcgggggagg agatgatgaa agcttaccga gtggtgctcc acagctcact gtcactggaa 1500
aggggagttg gaaccaccac gagaaagctt cgcactctat tagacttcaa caaccacaca 1560
tcagtacagg tgccaaaatc gttccagggt ttacgcgtgc ttcacctgaa ctgttctggc 1620
gaggtttctc tgccaaagga tattcaccag atgaggtatt tgagatatct tggcttggga 1680
ggcaactgct cctatgatct cccttccaac attggaggcc tcttaagcct cgaaacactg 1740
tactgcacag caagtataga ccacatccca gcatcattgt ggcggaacag gacactgagg 1800
caagtgcata tcccctatgc tagaagctta tcatcaccac agatcggttc acagtcatca 1860
aaggttcttg ttatactagt agattgtggg agcagtaccc atatggacga tgctaagcgg 1920
attgtggaga aaactagaag gcaagtgctg aggaacaaga acctggatct ctcgttctgc 1980
ttgggggtgg agtatgggaa atatggcatg gaagtcatag ggagatgcaa tacgggggtc 2040
cagttcccca tcgacctcct caattttgat gagacgcatg attactggga actgaagatt 2100
tgctgcgcca atctactcag caatgatcac aagatcctgg agcttgggag gataaaaaac 2160
ctcaaggtgc tagagatagg cgagcagtca tatactggca aggtgatggt tttcccgtca 2220
ggcagcttca tgacacttga acgactggtg ctctacgatc ttgcagtgga gaaatggaaa 2280
attgagtgtg gatccatgat atgtctcagg gtgttgacgc tttgcaagtg ccccaaactg 2340
gtccacctgc ctgaagagtt gttaaggctt ccgaaactac gcagtctggc tcttatcgca 2400
atgcctctgg gttgctacca gaaaggtgag gttcctcagg gggtgaagat ttcagagtca 2460
gatgatgaga aagttttcca gcatcttcct atttggcggt aa 2502

Claims (7)

1.一种玉米腺苷酸环化酶ZmRPP13-LK3，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.根据权利要求1所述的玉米腺苷酸环化酶ZmRPP13-LK3，其特征在于，所述序列具有保守的ATP结合位点和AC催化中心基序。
3.权利要求1所述玉米腺苷酸环化酶ZmRPP13-LK3在玉米抵制高温胁迫伤害中的应用。
4.一种编码权利要求1所述玉米腺苷酸环化酶ZmRPP13-LK3的基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
5.权利要求4所述的编码玉米腺苷酸环化酶ZmRPP13-LK3的基因在玉米高温抵制调控中的应用。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，在玉米中过表达编码玉米腺苷酸环化酶ZmRPP13-LK3的基因。
7.权利要求4所述编码玉米腺苷酸环化酶ZmRPP13-LK3的基因在耐高温玉米育种中的应用。
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US20080057093A1 (en) * 2006-08-07 2008-03-06 University Of Missouri Board Of Curators LysM Receptor-Like Kinases To Improve Plant Defense Response Against Fungal Pathogens
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WARE,D.: "Putative disease resistance RPP13-like protein 3 [Zea mays]", 《GENBANK: AQL02443.1》 *

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