一种高效复方抗皱提取液及其功效评价方法
技术领域
本发明涉及化妆品领域,尤其涉及一种高效复方抗皱提取液及其功效评价方法。
背景技术
皮肤是人体中最大的器官,是机体的主要保护屏障,机体的异常情况也可以在皮肤上反应出来,因此皮肤对机体的健康至关重要。伴随着老龄社会的加速到来,抗衰老研究日益深入,皮肤,特别是暴露部位的皮肤即是机体衰老过程中较早出现衰老特征,又是引人注目的审美器官。当今世界范围的美容热,尤其是肌肤的美容热深受关注。而回归自然的理念使人们在选择护肤品时更倾向于选择天然植物提取物,因此天然的护肤品深受广大消费者的青睐。
皮肤抗衰老主要着眼于真皮层细胞。正常情况下,人体需要适量的ROS;适量的ROS会激活Nrf2-Keap信号途径,Nrf2进入细胞核内,激活抗氧化酶基因的转录水平,从而调节体内的抗氧化酶活力,清除过量自由基;保持肌肤的年轻;在氧化应激的情况下,ROS在细胞内过量积累,产生大量脂质过氧化物,损伤细胞膜,进而引起蛋白和核酸损伤,最终导致皮肤衰老。
西洋参(学名:Panax quinquefolius)又名花旗参、洋参、西洋人参等,是五加科人参属多年生草木植物,主根呈圆形或者纺锤形,表面浅黄色或者黄白色,色泽油光,皮纹细腻,质地饱满而结实,断切面干净。现代医学研究证明,西洋参具有抗疲劳、抗衰老、抗休克、提高思维、改善记忆及调节内分泌、增强人体免疫力及改善心血管功能等作用。
党参(学名;Codonopsis pilosula (Franch.) Nannf. )桔梗科党参属,多年生草本植物,有乳汁。茎基具多数瘤状茎痕,根常肥大呈纺锤状或纺锤状圆柱形,茎缠绕,不育或先端着花,黄绿色或黄白色。党参为中国常用的传统补益药,古代以山西上党地区出产的党参为上品,具有补中益气,健脾益肺之功效。党参有增强免疫力、扩张血管、降压、改善微循环、增强造血功能等作用。
白芷(学名:Angelica dahurica (Fisch. ex Hoffm.)Benth. et Hook)多年生高大草本,基生叶一回羽状分裂,复伞形花序顶生或侧生,果实长圆形至卵圆形。以根入药,有祛病除湿、排脓生肌、活血止痛等功能。主治风寒感冒、头痛、鼻炎、牙痛。
当归Angelica sinensis(Oliv.)Diels为伞形科植物当归的干燥根。主产于我国甘肃岷县。其根可入药,是最常用的中药之一。味甘、辛、性温,归肝、心、脾经,具有补血活血、调经止痛、润肠通便之功效,兼有滋补壮阳,扶正固本及活血化淤的作用。
本发明旨在提供一种高效复方抗皱提取液,主要包括五种植物提取物的复合,包括西洋参提取物,党参提取物,白芷提取物,当归提取物。并阐明高效复方抗皱提取液制备工艺。
本发明的目的之一是,提供一种高效复方抗皱提取液制备方法。
本发明的目的之二是,提供该高效复方抗皱提取液的抗皱功效评价。
本发明的目的之三是,提供一种安全可靠的化妆品原料添加剂。
发明内容
本发明实施例提供了一种高效复方抗皱提取液及其功效评价方法,能够实现多途径高效抗皱,且工艺简单,安全性高。
为达到上述目的,本发明实施例采用如下技术方案:
一种高效复方抗皱提取液,所述高效复方抗皱提取液是由西洋参、党参、白芨、当归四种植物原料按照1:2:2:2的比例混合、并于万级制备车间,0.22μm过滤除菌提取的。
一种高效复方抗皱提取液的功效评价方法,所述方法包括以下步骤:
(1)将原料西洋参、党参、白芨、当归按比例混合,并粉碎;
(2)将步骤(1)中的粉碎原料用乙醇水溶液进行超声提取,得到提取液,提取液用80目筛进行过滤;
(3)将步骤(2)中过滤后的提取液进行浓缩,得到浓缩液;
(4)将步骤(3)中的浓缩液,用石油醚进行萃取,弃掉上层石油醚相,得到下层水相1;
(5)将步骤(4)中的下层水相1,用乙酸乙酯进行萃取,弃掉上层乙酸乙酯相,得到下层水相2;
(6)将步骤(5)中的下层水相2,用正丁醇进行萃取,弃掉上层正丁醇相,得到下层水相3;
(7)将步骤(6)中的下层水相3减压浓缩至浸膏;
(8)将步骤(7)中的浸膏冷冻干燥成固体粉末;
(9)将步骤(8)中固体粉末配制成高效复方抗皱提取液,于万级制备车间,0.22μm过滤除菌;
(10)用步骤(9)所得提取液在基因和蛋白水平对其进行功效评价。
进一步地,所述步骤(1)中,西洋参、党参、白芨、当归混合比例为1:1:2:2,粉碎粒度为过30目筛。
进一步地,所述步骤(2)中,乙醇水溶液为75%的乙醇,超声提取时间为1h,料液比1:8,提取次数3次。
进一步地,所述步骤(3)中,浓缩温度为60℃,浓缩液热比重为1.3。
进一步地,所述步骤(4)中,石油醚用量为1-2倍体积,萃取次数为3-4次,静置时间为6-8h;所述步骤(5)中,乙酸乙酯用量为1-2倍体积,萃取次数为3-4次,静置时间为6-8h;所述步骤(6)中,正丁醇用量为1-2倍体积,萃取次数为3-4次,静置时间为6-8h。
进一步地,所述步骤(7)中,浓缩温度为48-68℃;所述步骤(8)中,冷冻干燥温度为-78℃,冷冻时间为48-72h。
进一步地,所述步骤(9)中,高效复方抗皱提取液浓度为50mg/mL。
进一步地,所述步骤(10)中,分别在Mn-SOD、MMP1、Collagen1和Elastin基因水平对高效复方抗皱提取液进行功效评价。
发明中以正常细胞为空白组,以添加强抗氧化剂VC的细胞为对照,和添加高效复方抗皱提取液的细胞进行实验对比。利用RTPCR检测仪检测Mn-SOD 、MMP1、 Collagen1、Elastin对应mRNA的表达量,在基因水平对高效复方抗皱提取液进行功效评价,见附图2。Mn-SOD为超氧化物歧化酶,可以清除自由基,延缓衰老;MMP1为间质性胶原酶,可以溶解胶原蛋白;Collagen1为胶原蛋白,构成胶原纤维;Elastin为弹力蛋白,维持皮肤的弹性。
进一步地,所述步骤(11)中,在细胞水平,以ROS(活性氧)为依据,对高效复方抗皱提取液进行功效评价。
发明中以正常细胞为空白组,以阳性组为对照组,和添加高效复方抗皱提取液的细胞进行实验对比。利用荧光探针DCFH-DA进行ROS(活性氧)检测,CP-W作用成纤维细胞一定时间后,细胞装载探针,胞内ROS(活性氧)可氧化无荧光的DCFH生成有荧光的DCF,因此清除活性氧能力越强,荧光越弱。通过荧光显微镜拍照观察得出,添加高效复方抗皱提取液的细胞中荧光最弱,见附图2。
本发明的有益效果:
(1)本发明的优点和效果在于采用常温常压超声提取。
(2)本发明的优点和效果在于在基因水平和蛋白水平对高效复方抗皱提取液进行功效评价。
(3)本发明的优点和效果在于在细胞水平对高效复方抗皱提取液进行功效评价。
附图说明
附图1高效复方抗皱提取液的制备工艺流程图;
附图2高效复方抗皱提取液作用24h后抗氧化相关基因的变化;
附图3 高效复方抗皱提取液作用后ROS活性检测结果。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图,对本发明实施例中的技术方案进行详细地描述。
本发明实施例提供一种高效复方抗皱提取液的生产制备工艺如图1所示,具体过程如下:
取西洋参500g,党参1000g,白芨1000g,当归1000g,用粉碎机粉碎,过30目网筛,加入28L 75%乙醇水溶液,进行超声提取,提取温度为常温,提取时间1h;提取三次,混合三次提取液后总共得到提取液76L,将提取液过80目网筛过滤。将过滤后的提取液减压浓缩,浓缩温度45℃,浓缩至3L。在浓缩液中加入6L石油醚,每隔20min充分搅拌使混合均匀,常温静置6h,吸出上层液体并弃掉,重复三次;在下层水相中加入6L乙酸乙酯,每隔20min充分搅拌使混合均匀,常温静置6h,吸出上层液体并弃掉,重复三次;在下层水相中加入6L正丁醇,每隔20min充分搅拌使混合均匀,常温静置6h,吸出上层液体并弃掉,重复三次。将经过石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取的下层水相减压浓缩,浓缩温度60℃,浓缩至浸膏。将浸膏放入-80℃冰箱冷冻4h后移入冷冻干燥机,在-78℃下冷冻72h,得到固体粉末630g。将630g固体粉末加入6.2L的去离子水中,搅拌使充分溶解,再加入6.2L丁二醇,充分搅拌使混合均匀,于万级制备车间,0.22μm过滤除菌,得到12.2L的高效复方抗皱提取液。
具体的,主要包括以下几个步骤:
(1)将原料西洋参、党参、白芨、当归按1:2:2:2比例混合,并粉碎,过30目网筛;因为粉碎粒度过大,会影响提取速率和收率,粉碎粒度过小,会影响提取液过滤速率,最终选择过30目筛。
(2)将步骤(1)中的粉碎原料用75%乙醇水溶液进行超声提取,超声时间为1h,料液比1:8,提取温度为常温,提取次数为3次,所提取液用80目筛进行过滤。
(3)将步骤(2)中的过滤后提取液进行减压浓缩,浓缩温度控制在60℃,得到浓缩液,浓缩液热比重控制在1.3。
(4)将步骤(3)中的浓缩液,加入1-2倍体积石油醚,每隔20min搅拌一次,使其充分混合,在常温下静置6h,弃掉上层石油醚相,重复萃取3-4次,得到下层水相1。
(5)将步骤(4)中的下层水相1,加入1-2倍体积乙酸乙酯,每隔20min搅拌一次,使其充分混合,在常温下静置6h,弃掉上层乙酸乙酯相,重复萃取3-4次,得到下层水相2。
(6)将步骤(5)中的下层水相2,加入1-2倍体积正丁醇,每隔20min搅拌一次,使其充分混合,在常温下静置6h,弃掉上层正丁醇相,重复萃取3-4次,得到下层水相3。
(7)将步骤(6)中的下层水相3减压浓缩至浸膏,浓缩温度为48-68℃。
(8)将步骤(7)中的浸膏冷冻干燥成固体粉末,冷冻干燥温度为-78℃,冷冻时间为48-72h。
(9)将步骤(8)中的固体粉末配制浓度为50mg/mL的高效复方抗皱提取液,于万级制备车间,用0.22μm微孔滤膜过滤除菌。
(10)用步骤(9)所得提取液在基因和蛋白水平对其进行功效评价。发明中以正常细胞为空白组,以添加强抗氧化剂VC的细胞为对照,和添加高效复方抗皱提取液的细胞进行实验对比。利用RTPCR检测仪检测Mn-SOD 、MMP1、 Collagen1、Elastin对应mRNA的表达量,在基因水平对高效复方抗皱提取液进行功效评价,见附图2。Mn-SOD为超氧化物歧化酶,可以清除自由基,延缓衰老;MMP1为间质性胶原酶,可以溶解胶原蛋白;Collagen1为胶原蛋白,构成胶原纤维;Elastin为弹力蛋白,维持皮肤的弹性。
(11)用步骤(9)所得提取液在细胞水平对其进行功效评价。发明中以正常细胞为空白组,以阳性组为对照组,和添加高效复方抗皱提取液的细胞进行实验对比。利用荧光探针DCFH-DA进行ROS(活性氧)检测,CP-W作用成纤维细胞一定时间后,细胞装载探针,胞内ROS(活性氧)可氧化无荧光的DCFH生成有荧光的DCF,因此清除活性氧能力越强,荧光越弱。通过荧光显微镜拍照观察得出,添加高效复方抗皱提取液的细胞中荧光最弱,见附图2。
以上所述,仅为本发明的具体实施方式,但本发明的保护范围并不局限于此,任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内,可轻易想到变化或替换,都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此,本发明的保护范围应以所述权利要求的保护范围为准。