CN109528687B - 一种负载5-氨基酮戊酸的纳米药物传递系统及其制备法方法与应用 - Google Patents

一种负载5-氨基酮戊酸的纳米药物传递系统及其制备法方法与应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种纳米药物传递系统，其特征在于，由CDG2、5‑ALA和透明质酸通过静电作用复合而成，所述CDG2是通过在α‑环糊精的外部接枝PAMAM‑G2得到，该纳米药物传递系统更易于在细胞内裂解成单独的5‑ALA，并在黑色素瘤细胞系中高效产生具有光敏作用的PpIX，能够有效诱导肿瘤细胞凋亡，其制备与使用方便，对5‑ALA治疗黑色素瘤具有增效作用，且药物副作用小。

Description

一种负载5-氨基酮戊酸的纳米药物传递系统及其制备法方法 与应用
技术领域
本发明属于医药领域，特别涉及一种负载5-氨基酮戊酸的纳米药物传递系统及其制备法方法与应用。
背景技术
黑色素瘤是一种来源于皮肤黑色素细胞的恶性肿瘤，具有易转移、高侵袭、预后差和难治疗的特点。近年来，它的新发病率和死亡率持续上升，且一旦发生全身转移，患者10年内的生存率只有10-15％。黑色素瘤在临床上分为四期，I期和II期黑色素瘤在皮肤原位，可通过手术切除治疗。而III期和IV期黑色素瘤发生了淋巴窦和远端器官转移为晚期黑色素瘤，无法用手术清除，需进行药物治疗。目前被批准用于治疗的黑色素瘤药物有化疗药物达卡巴嗪、小分子靶向制剂、免疫检查点抑制剂PD-1/PD-L1抗体等，但化疗药物往往出现毒副作用大，免疫疗法药物只对10-20％的黑色素瘤患者有较好的治疗反应且价格昂贵。因此，研发高效、经济、适用患者比例高的治疗晚期黑色素瘤药物及其制剂具有重要的临床价值。
5-氨基酮戊酸(5-ALA)作为第二代光敏剂，临床上常被用来治疗皮肤疾病。它自身不具有光敏作用，可经过色素生物合成路径衍生成具有光敏作用的原卟啉IX(PpIX)。PpIX在635nm的激光照射下，可生成大量具有细胞毒性进而杀伤肿瘤细胞的活性氧。但应用过程中由于5-ALA为极性小分子，难以透过细胞膜进入靶细胞，导致其诱导肿瘤细胞内PpIX产生的量不能达到有效杀灭肿瘤细胞的剂量，疗效不显著，限制了5-ALA的临床应用。因此，有必要提供一种药物传递系统，为黑色素瘤治疗提供新的药物递送和治疗策略。
发明内容
基于此，本发明的目的在于提供一种增效5-ALA治疗黑色素瘤的纳米药物传递系统，克服现有的光敏剂5-ALA存在难以透过生物膜屏障的问题，从而达到诱导肿瘤细胞内PpIX的产生达到有效杀灭肿瘤细胞的剂量。
为实现上述目的，本发明提供了如下技术方案：
一种纳米药物传递系统，由CDG2、5-ALA和透明质酸通过静电作用复合而成，所述CDG2是通过在α-环糊精的外部接枝PAMAM-G2得到。
本发明的还提供了一种纳米药物传递系统的制备方法，具体技术方案如下：
一种上述纳米药物传递系统的制备方法，包括以下步骤：
(1)取CDG2溶解于水中，缓慢加入5-ALA的水溶液，所述CDG2与所述5-ALA的摩尔比为1:(2～3)，搅拌22～28h，超滤得CDG2/5-ALA复合物；
(2)向所述CDG2/5-ALA复合物的水溶液中缓慢加入透明质酸的水溶液，搅拌11～13h，超滤，即得。
本发明的还提供了上述纳米药物传递系统在制备抗黑色素瘤的药物中的应用。
基于上述技术方案，本发明具有以下有益效果：
本发明所述的纳米药物传递系统能够通过静电结合高效负载5-ALA，形成分散性良好，粒径适宜的粒子，该药物传递系统是通过CDG2与5-ALA的静电作用负载5-ALA，与化学键作用负载生成5-ALA酯类相比，本发明所述的纳米药物传递系统更易于在细胞内裂解成单独的5-ALA，并在黑色素瘤细胞系中高效产生具有光敏作用的PpIX，能够有效诱导肿瘤细胞凋亡，其制备与使用方便，对5-ALA治疗黑色素瘤具有增效作用，且药物副作用小。
附图说明
图1为本发明实施例1所述的增效5-ALA治疗黑色素瘤的纳米药物传递系统的制备流程图；
图2为本发明所述增效5-ALA治疗黑色素瘤的纳米药物传递系统CAH(2:1)的透射电镜图；
图3为本发明所述增效5-ALA治疗黑色素瘤的纳米药物传递系统在体外两种黑色素瘤细胞系中生成PpIX荧光分布图；
图4为本发明所述增效5-ALA治疗黑色素瘤的纳米药物传递系统在体外诱导黑色素瘤细胞B16的凋亡图；
图5为本发明所述增效5-ALA治疗黑色素瘤的纳米药物传递系统在体外诱导黑色素瘤细胞A375的凋亡图。
具体实施方式
为了便于理解本发明，下面将参照实施例对本发明进行更全面的描述，以下给出了本发明的较佳实施例。但是，本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。提供这些实施例的目的是使对本发明的公开内容的理解更加透彻全面。
除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。本文所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。
本发明提供了一种纳米药物传递系统，该系统由CDG2、5-ALA和透明质酸通过静电作用复合而成，所述CDG2是通过在α-环糊精的外部接枝PAMAM-G2得到。其中，上述纳米药物传递系统中-NH2与-COOH摩尔比即CAH(M-NH2/M-COOH)摩尔比为3:1～1:3，优选地，CAH(M-NH2/M-COOH)摩尔比为3:1～1:1，更优选地，CAH(M-NH2/M-COOH)摩尔比为2:1。在其中一些实施例中，CAH(M-NH2/M-COOH)摩尔比为3:1；在另外一些实施例中CAH(M-NH2/M-COOH)摩尔比还可以为2:1、1:1、1:2、或1:3。进一步地，所述纳米药物传递系统中CDG2、5-ALA和透明质酸的摩尔比为1:(2～6):(1～3)。该纳米药物传递系统，具有高包封率、高载药率，其中CDG2/5-ALA中的5-ALA的载药量为3.29％～24.42％，包封率为29.65％～75.30％，其粒径小且分布均匀，具有合适的Zeta电位。该药物传递系统表面修饰有合适比例的HA并且保证足够的氨基数量使该药物传递系统能够带正电荷，从而易于透过细胞膜进入细胞、更易于在细胞内裂解成单独的5-ALA，并在黑色素瘤细胞系中高效产生具有光敏作用的PpIX，能够通过光照控制，有效诱导肿瘤细胞凋亡。
上述纳米药物传递系统的制备方法如下：
取CDG2溶解于水中，缓慢加入5-ALA的水溶液，所述CDG2与所述5-ALA的摩尔比为1:(2～3)，搅拌22～28h，超滤得CDG2/5-ALA复合物；向所述CDG2/5-ALA复合物的水溶液中缓慢加入透明质酸的水溶液，搅拌11～13h，超滤，即得。具体地，其制备方法包括：称取110～130mg的CDG2，溶解于水中，缓慢加入150～170mg的5-ALA的水溶液，搅拌22～28h，超滤、冷冻干燥得CDG2/5-ALA复合物；向所述CDG2/5-ALA复合物水溶液中缓慢加入110～120mg的透明质酸的水溶液，搅拌11～13h，超滤、冷冻干燥，即得。在一些实施例中，所述超滤为：于10000～14000rpm条件下，超滤18～22min。优选地，超滤条件为12000rpm条件下，超滤20min。
其中，所述CDG2的制备方法包括如下步骤：用α-环糊精取代偶联剂N,N'-羰基二咪唑上的其中一个咪唑基，制备得到N,N-羰基二咪唑-环糊精；将PAMAM G2与N,N-羰基二咪唑-环糊精连接，即得。具体地，所述PAMAM G2与N,N-羰基二咪唑-环糊精连接为：PAMAM G2的氨基与α-环糊精外部的羟基在偶联剂N,N-羰基二咪唑的作用下通过化学键和而成。优选地，所述α-环糊精、N,N'-羰基二咪唑和PAMAM G2的质量比为1：(2～3)：(6～7)。更优选地，所述α-环糊精、N,N'-羰基二咪唑和PAMAM G2的质量比为1：2.5：6.5。
其中本发明制备过程中所使用到的原料如下：
5-氨基乙酰丙酸(5-ALA)购自麦克林生物公司，简称为5-ALA；
透明质酸购自山东华熙福瑞达生物医药有限公司，简称为HA；
PAMAMG2为第二代树枝状大分子-聚酰胺胺状聚合物购自西安瑞禧生物科技有限公司；
α-环糊精(α-CD)购自山东智源生物公司；
CDI：偶联剂N,N'-羰基二咪唑购自Aldrich公司；
以α-环糊精为核心接枝聚酰胺-胺PAMAM G2，简称CDG2，其具体制备方法包括以下步骤：
(1)N,N-羰基二咪唑(CDI)-环糊精的制备：
分别称取6.35g CDI和0.47g α-环糊精，在真空干燥箱于40℃条件下干燥12h，分别溶于25mL无水DMSO溶液中。α-环糊精DMSO溶液用注射器缓缓地加入到CDI溶液中，继续于室温条件下搅拌12h，用混合溶剂(200mL THF:400mL Et2O)将反应液进行沉淀、离心，将沉淀再用300mL THF洗涤多次，离心沉淀，得到黄色粘稠液，于90℃条件下真空干燥12h，得到白色粘稠物CDI-环糊精。
(2)PAMAM G2的纯化
精确称取24.8g PAMAM G2溶于100mL甲醇溶液中，用混合溶剂(200mL THF:400mLEt2O)进行沉淀，离心，用400mLEt2O洗涤多次沉淀、离心、沉淀，得到黄色粘稠物，将其于60℃真空干燥6h。
(3)CDG2的制备
将(1)和(2)中制备得到的CDI-环糊精和纯化过的PAMAM G2分别溶于25mL和100mL无水DMSO溶液中。在氮气保护和磁力搅拌下，把CDI-环糊精溶液用注射器缓缓加入到PAMAMG2溶液中，继续于室温条件下搅拌12h，用混合溶剂(200mL THF:400mL Et2O)将反应液进行沉淀、离心，除掉上清液，将沉淀用300mL THF洗涤多次，离心沉淀，得到黄色粘稠液，将黄色粘稠液溶于20mL去离子水透析三天，冷冻干燥得CDG2。
实施例1
本实施例的增效5-ALA治疗黑色素瘤的纳米药物传递系统CAH的制备流程如图1所示，纳米药物传递系统CAH的-NH2与-COOH(M-NH2/M-COOH)摩尔比为3：1，其制备方法包括以下步骤：
(1)CDG2/5-ALA复合物的制备方法
称取120mg经透析纯化过的CDG2的冻干样品，溶解于5mL的超纯水。待其完全溶解后，缓慢加入160mg的5-ALA的水溶液，其中5-ALA的羧基与CDG2氨基的摩尔比为2：1，室温避光条件下，在磁力搅拌器上搅拌24h。将所得的反应液，于12000rpm条件下，超滤离心20min，冷冻干燥得CDG2/5-ALA复合物，通过紫外检测上清液中未结合到CDG2/5-ALA游离的5-ALA的含量。
(2)CAH的制备
将上述制备的CDG2/5-ALA复合物溶解于5mL超纯水中，待其完全溶解后，将77.8mgHA溶解于15mL超纯水中，室温避光条件中，在磁力搅拌下缓慢地加入到CDG2/5-ALA中继续搅拌12h，将所得的反应液于12000rpm条件下，超滤20min，所得的沉淀样品冷冻干燥，使用紫外检测上清液中游离的5-ALA含量。
实施例2
本实施例的一种增效5-ALA治疗黑色素瘤的纳米药物传递系统(CAH)，CAH(M-NH2/M-COOH)摩尔比为2：1，其制备方法包括以下步骤：
(1)CDG2/5-ALA复合物的制备方法
称取120mg经透析纯化过的CDG2的冻干样品，溶解于5mL的超纯水。待其完全溶解后，缓慢加入160mg的5-ALA的水溶液，其中5-ALA的羧基与CDG2氨基的摩尔比为2：1，室温避光条件下，在磁力搅拌器上搅拌24h。将所得的反应液，于12000rpm条件下，超滤离心20min，冷冻干燥得CDG2/5-ALA复合物，通过紫外检测上清液中未结合到CDG2/5-ALA游离的5-ALA的含量。
(2)CAH的制备
将上述制备的CDG2/5-ALA复合物溶解于5mL超纯水中，待其完全溶解后，将112.5mg HA溶解于15mL超纯水中，室温避光条件中，在磁力搅拌下缓慢地加入到CDG2/5-ALA中继续搅拌12h,将所得的反应液于12000rpm条件下，超滤20min，所得的沉淀样品冷冻干燥，使用紫外检测上清液中游离的5-ALA含量。
实施例3
本实施例的一种增效5-ALA治疗黑色素瘤的纳米药物传递系统(CAH)，CAH(M-NH2/M-COOH)摩尔比为1：1，其制备方法包括以下步骤：
(1)CDG2/5-ALA复合物的制备方法
称取120mg经透析纯化过的CDG2的冻干样品，溶解于5mL的超纯水。待其完全溶解后，缓慢加入160mg的5-ALA的水溶液，其中5-ALA的羧基与CDG2氨基的摩尔比为2：1，室温避光条件下，在磁力搅拌器上搅拌24h。将所得的反应液，于12000rpm条件下，超滤离心20min，冷冻干燥得CDG2/5-ALA复合物，通过紫外检测上清液中未结合到CDG2/5-ALA游离的5-ALA的含量。
(2)CAH的制备
将上述制备的CDG2/5-ALA复合物溶解于5mL超纯水中，待其完全溶解后，将233.5mg HA溶解于15mL超纯水中，室温避光条件中，在磁力搅拌下缓慢地加入到CDG2/5-ALA中继续搅拌12h,将所得的反应液于12000rpm条件下，超滤20min，所得的沉淀样品冷冻干燥，使用紫外检测上清液中游离的5-ALA含量。
实施例4
本实施例的一种增效5-ALA治疗黑色素瘤的纳米药物传递系统(CAH)，CAH(M-NH2/M-COOH)摩尔比为1：2，其制备方法包括以下步骤：
(1)CDG2/5-ALA复合物的制备方法
称取120mg经透析纯化过的CDG2的冻干样品，溶解于5mL的超纯水。待其完全溶解后，缓慢加入160mg的5-ALA的水溶液，其中5-ALA的羧基与CDG2氨基的摩尔比为2：1，在磁力搅拌器上搅拌24h。将所得的反应液，于12000rpm条件下，超滤离心20min，冷冻干燥得CDG2/5-ALA复合物，通过紫外检测上清液中未结合到CDG2/5-ALA游离的5-ALA的含量。
(2)CAH的制备
将上述制备的CDG2/5-ALA复合物溶解于5mL超纯水中，待其完全溶解后，将466.9mg HA溶解于15mL超纯水中，室温避光条件中，在磁力搅拌下缓慢地加入到CDG2/5-ALA中继续搅拌12h,将所得的反应液于12000rpm条件下，超滤20min，所得的沉淀样品冷冻干燥，使用紫外检测上清液中游离的5-ALA含量。
实施例5
本实施例的一种增效5-ALA治疗黑色素瘤的纳米药物传递系统(CAH)，CAH(M-NH2/M-COOH)摩尔比为1：3，其制备方法包括以下步骤：
(1)CDG2/5-ALA复合物的制备方法
称取120mg经透析纯化过的CDG2的冻干样品，溶解于5mL的超纯水。待其完全溶解后，缓慢加入160mg的5-ALA的水溶液，其中5-ALA的羧基与CDG2氨基的摩尔比为2：1，在磁力搅拌器上搅拌24h。将所得的反应液，于12000rpm条件下，超滤离心20min，冷冻干燥得CDG2/5-ALA复合物，通过紫外检测上清液中未结合到CDG2/5-ALA游离的5-ALA的含量。
(2)CAH的制备
将上述制备的CDG2/5-ALA复合物溶解于5mL超纯水中，待其完全溶解后，将700.5mg HA溶解于15mL超纯水中，室温避光条件中，在磁力搅拌下缓慢地加入到CDG2/5-ALA中继续搅拌12h,将所得的反应液于12000rpm条件下，超滤20min，所得的沉淀样品冷冻干燥，使用紫外检测上清液中游离的5-ALA含量。
试验例1
采用紫外测试仪实施例1～5所得的上清液中游离未负载的5-ALA的吸光度进行测试，检测波长为267nm，根据绘制的标准曲线计算出游离的5-ALA含量，从而计算出纳米药物传递系统CAH的包封率和载药量，重复检测三次样品。结果见表1。
表1
实施例 Sample 游离5-ALA的含量(mg) 包封率EE％ 载药量LE％
1 CAH(3:1) 40 75.30％ 24.42％
2 CAH(2:1) 52.35 67.28％ 19.78％
3 CAH(1:1) 69.76 56.40％ 13.60％
4 CAH(1:2) 74.88 50.32％ 7.38％
5 CAH(1:3) 112.56 29.65％ 3.29％
从表1结果可知，实施例中的增效5-ALA治疗黑色素瘤的纳米药物传递系统(CAH)，在不同处方比例中，随着HA的加入量增加，包封率和载药量有逐渐减小的趋势，证明有部分的5-ALA游离出来，有可能是HA的羧基的活性比较强，把部分已经接枝上5-ALA从CDG2表面给竞争出来。
试验例2
采用Zetasizer Nano ZS90纳米粒度仪对实施例1～5所得的一种增效5-ALA治疗黑色素瘤的纳米药物传递系统进行粒径，电位及PDI(聚合物分散系数)测试，结果见表2：
表2
实施例 Sample Z-average(d.nm) Zeta potential(mV) PDI
1 CAH(3:1) 275.66±7.78 25.83±1.00 0.29±0.05
2 CAH(2:1) 171.00±2.85 23.03±0.40 0.18±0.07
3 CAH(1:1) 161.20±5.98 18.27±0.40 0.14±0.06
4 CAH(1:2) 164.96±1.23 0.33±0.15 0.16±0.10
5 CAH(1:3) 121.80±2.85 -30.33±0.72 0.14±0.12
从表2结果可知，实施例中的增效5-ALA治疗黑色素瘤的纳米药物传递系统CAH的粒径、电位及PDI随着HA的加入量逐渐增加，有逐渐减小的趋势。在CAH(2:1)时粒径和PDI趋于饱和的趋势，再增加HA的量时，变化不明显，但是电位却逐渐降低。
试验例3
采用透射电镜对实施例2所得的增效5-ALA治疗黑色素瘤的纳米药物传递系统CAH(2:1)进行观察。结果如图2，该粒子分散性良好，粒径约100～200nm。
试验例4
采用黑色素瘤细胞A375细胞和B16细胞，对本发明所述的增效5-ALA治疗黑色素瘤的纳米药物传递系统(CAH)进行体外摄取效果试验，步骤如下：
(1)细胞培养：将黑色素瘤细胞：A375细胞和B16细胞分别在含有10％FBS的DMEM和RPMI 1640培养基中培养至状态良好。以密度为8×103个/孔接种于96孔板中，在37℃、5％CO2的条件下培养过夜。
(2)加药：当细胞长至汇合度约80％时，将5-ALA、CAH(M-NH2/M-COOH＝3:1、2:1、1:1、1:2、1:3)的药物溶解于无血清的培养基中，将各处方的药液分别加入各孔中，每个处方分别设6个复孔。
(3)处理细胞：弃去培养基，每孔使用100μL冰冷的PBS将细胞洗涤三遍,然后每孔加入100μLDMSO用于提取细胞内的PPIX，于摇床上震荡10min，在酶标仪上检测PpIX的荧光强度,所使用的激发波长为405nm，发射波长为635nm。结果见图3。
由图3可知，本发明的增效5-ALA治疗黑色素瘤的纳米药物传递系统(CAH)在体外两种黑色素瘤细胞系B16和A375细胞摄取实验中，在各个处方中细胞内产生的PpIX的量，在相同条件下，CAH(M-NH2/M-COOH＝2:1)生成的PpIX量是最多的，与单独游离的5-ALA相比，显著增多。结合粒径，电位，以及PDI的结果分析，我们最终选取CAH组成为M-NH2/M-COOH＝2:1作为最优的处方。
试验例5
(1)种板：取对数生长期的小鼠黑色素瘤B16细胞悬液，以1.8×105个/孔的密度接种至12孔板中，于37℃、5％CO2的条件下培养24h。
(2)给药：待细胞完全贴壁并且汇合度约为80％时，弃掉旧的培养液，将药物溶解于无血清培养基，本实验分为6组，各组别为：5-ALA(+)、5-ALA(-)、CAH(+)、CAH(-)、Control(+)、Control(-)。根据实验需要考察的因素按照分组加入相应的供试品或进行相应的处理。5-ALA(+)、5-ALA(-)组加1mL含8μg/mL5-ALA无血清培养基，CAH(+)、CAH(-)组加入1mLCAH无血清培养基(等量于8μg/mL 5-ALA)，Control(+)、Control(-)组加入无血清培养基作为对照，每组各设3个复孔，继续培养12h。
表3
Figure BDA0001913901260000111
(3)给药后12h，分别给予25mW/cm2的635nm激光光照5min或者不光照处理。
(4)弃去培养基，加入新鲜含10％FBS的RPMI 1640培养基继续培养24h。
(5)弃去旧的培养基，用冰冷的PBS将细胞洗涤两次，洗涤液也一起收集。往各孔中加入0.5mL不含EDTA的胰酶，于37℃、5％CO2的条件下消化3min至细胞开始脱落即可终止消化。小心吹打下来，收集细胞悬液。
(6)将收集的细胞悬液于1500rpm，4℃条件下离心5min，小心去掉上清液，将所得的细胞沉淀用冰冷的PBS洗涤两遍，离心。
(7)按照凋亡试剂盒阐述的方法，分别使用400μL的1×Binding Buffer将细胞悬浮，分别加入5μLAnnexin V-FITC小心将其混合均匀，在避光的条件下冰上孵育15min。分别加入10 LPI轻轻将其混合均匀，在避光条件下继续孵育5min。所有样品于冰上均在短时间内使用流式细胞仪检测。结果如图4-图5：图4为B16细胞的测试结果，图5为A375细胞的测试结果。
由图4-图5可知，本发明的增效5-ALA治疗黑色素瘤的纳米药物传递系统CAH在不光照条件下，即为CAH(-)，诱导黑色素瘤细胞的凋亡率很低，在B16细胞和A375细胞中凋亡率都低于10％。在光照的条件下，如图4所示，B16细胞CAH(+)组凋亡率为93.78％，显著高于5-ALA(+)阳性对照组(16.79％)和Control(+)阴性对照组(3.80％)。如图5所示，A375细胞CAH(+)组凋亡率为62.50％，也显著高于5-ALA(+)阳性对照组(25.05％)和Control(+)阴性组(1.54％)。
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对以上实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (10)

1.一种纳米药物传递系统，其特征在于，由CDG2、5-氨基酮戊酸和透明质酸通过静电作用复合而成，所述CDG2是通过在α-环糊精的外部接枝第二代树枝状大分子-聚酰胺胺状聚合物得到；
所述纳米药物传递系统中-NH2与-COOH的摩尔比为(1:3)～(3:1)；
所述纳米药物传递系统中CDG2、5-氨基酮戊酸和透明质酸的摩尔比为1:(2～6):(1～3)；
所述纳米药物传递系统的制备方法包括以下步骤：
(1)取CDG2溶解于水中，缓慢加入5-氨基酮戊酸的水溶液，所述CDG2与所述5-氨基酮戊酸的摩尔比为1:(2～3)，搅拌22～28h，超滤得CDG2/5-氨基酮戊酸复合物；
(2)向所述CDG2/5-氨基酮戊酸复合物的水溶液中缓慢加入透明质酸的水溶液，搅拌11～13h，超滤，即得。
2.根据权利要求1所述的纳米药物传递系统，其特征在于，所述纳米药物传递系统中-NH2与-COOH的摩尔比为(1:1)～(3:1)。
3.根据权利要求2所述的纳米药物传递系统，其特征在于，所述纳米药物传递系统中-NH2与-COOH的摩尔比为2:1。
4.如权利要求1～3任一项所述的纳米药物传递系统的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)取CDG2溶解于水中，缓慢加入5-氨基酮戊酸的水溶液，所述CDG2与所述5-氨基酮戊酸的摩尔比为1:(2～3)，搅拌22～28h，超滤得CDG2/5-氨基酮戊酸复合物；
(2)向所述CDG2/5-氨基酮戊酸复合物的水溶液中缓慢加入透明质酸的水溶液，搅拌11～13h，超滤，即得。
5.根据权利要求4所述的纳米药物传递系统的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)称取110～130mg的CDG2，溶解于水中，缓慢加入150～170mg的5-氨基酮戊酸的水溶液，搅拌22～28h，超滤、冷冻干燥得CDG2/5-氨基酮戊酸复合物；
(2)向CDG2/5-氨基酮戊酸复合物的水溶液中缓慢加入110～120mg的透明质酸的水溶液，搅拌11～13h，超滤、冷冻干燥，即得。
6.根据权利要求5所述的纳米药物传递系统的制备方法，其特征在于，所述超滤为：于10000～14000rpm条件下，离心18～22min。
7.根据权利要求4～6任一项所述的纳米药物传递系统的制备方法，其特征在于，所述CDG2的制备方法包括如下步骤：
用α-环糊精取代偶联剂N,N'-羰基二咪唑上的其中一个咪唑基，制备得到N,N-羰基二咪唑-环糊精；将第二代树枝状大分子-聚酰胺胺状聚合物与N,N-羰基二咪唑-环糊精连接，即得；所述第二代树枝状大分子-聚酰胺胺状聚合物与N,N-羰基二咪唑-环糊精连接为：第二代树枝状大分子-聚酰胺胺状聚合物的氨基与α-环糊精外部的羟基在偶联剂N,N-羰基二咪唑的作用下通过化学键和而成。
8.根据权利要求7所述的纳米药物传递系统的制备方法，其特征在于，所述α-环糊精、N,N'-羰基二咪唑和第二代树枝状大分子-聚酰胺胺状聚合物的质量比为1：(2～3)：(6～7)。
9.根据权利要求8所述的纳米药物传递系统的制备方法，其特征在于，所述α-环糊精、N,N'-羰基二咪唑和第二代树枝状大分子-聚酰胺胺状聚合物的质量比为1：2.5：6.5。
10.如权利要求1～3任一项所述的纳米药物传递系统在制备抗黑色素瘤的药物中的应用。
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