CN109503623A - Guanacastane类化合物及其制备方法和在制备抗菌药物中的应用 - Google Patents

Guanacastane类化合物及其制备方法和在制备抗菌药物中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了Guanacastane类化合物及其制备方法和在制备抗菌药物中的应用。本发明从巴戟天内生真菌拟康宁木霉(Trichoderma koningiopsis)A729发酵液中分离出2个Guanacastane类新化合物koninginol A和koninginol B。本发明通过抗菌活性测试发现，化合物koninginol A对枯草芽孢杆菌具有显著的抗菌活性，化合物koninginol B对金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌具有显著的抗菌活性，可用于制备抗菌药物，具有良好的应用开发前景。因此，本发明为研究与开发新的抗菌药物提供了候选化合物，为开发利用植物内生真菌资源提供科学依据。

Description

Guanacastane类化合物及其制备方法和在制备抗菌药物中的 应用
技术领域：
本发明属于生物和医药领域，具体涉及Guanacastane类化合物及其制备方法和在制备抗菌药物中的应用。
背景技术：
植物内生真菌(endophytic fungi)是指生活史的一定阶段或全部阶段生活在健康植物组织内，但不对植物组织引起明显病害症状的真菌(Tan RX and Zou WX,2001)。内生真菌具有丰富的物种多样性和遗传多样性，迄今已从植物内生真菌中发现了不少新的或稀有的真菌物种，已成为国内外的研究热点。植物内生真菌生长于植物内部的特殊环境中，其产生活性化合物远远超出其植物代谢产物的范围，能够产生各种结构类型独特、具有潜在应用前景的活性物质，已成为发现新的天然活性物质的重要资源。
巴戟天(Morinda officinalis)为茜草科多年生木质藤本植物，是我国的四大南药之一，含有蒽醌类、有机酸类、甾醇类、环烯醚萜苷萜、糖类(林美珍等，2010)等，有强筋骨、祛风湿的作用。研究药理表明：巴戟天具有抗菌、抗肿瘤、抗氧化、消炎镇痛等药理作用。因此，从巴戟天内生真菌中发现具有抗菌作用的新化合物，可为新药研发提供化学实体。
发明内容：
本发明的第一个目的是提供一类具有抗菌活性的Guanacastane类新化合物。
本发明的Guanacastane类新化合物，结构如式(I)所示：
1为化合物koninginol A、2为化合物koninginol B。
本发明的第二个目的是提供Guanacastane类化合物koninginol A和koninginolB的制备方法，所述的化合物koninginol A和koninginol B是从拟康宁木霉(Trichodermakoningiopsis)A729的发酵培养物中制备得到。
优选，具体步骤如下：
制备拟康宁木霉(Trichoderma koningiopsis)A729的发酵培养物，将发酵培养物的发酵液和菌丝体分离，发酵液经大孔树脂柱用乙醇洗脱得到乙醇提取物，乙醇提取物经浓缩后得到浸膏；
浸膏过硅胶柱，先用石油醚-乙酸乙酯从5:1,1:1v/v梯度洗脱，再用二氯甲烷:甲醇从5:1,2:1v/v梯度洗脱，最后用二氯甲烷:甲醇＝1:1v/v洗脱，收集二氯甲烷:甲醇＝5:1v/v洗脱下来的馏分，以此馏分进行TLC薄层层析，以二氯甲烷：甲醇＝10:1v:v作为展开剂，收集Rf值是1.8/3.5的馏分E；
馏分E以二氯甲烷:甲醇＝1:1v/v洗脱过Sephadex LH-20，然后过正相硅胶柱层析，以体积比正己烷：乙酸乙酯10:1,5:1,2:1,1:1,1:2,1:5梯度洗脱，再用纯乙酸乙酯洗脱，最后用纯甲醇洗脱，分别收集正己烷：乙酸乙酯＝1:2,1:5v/v洗脱下来的馏分E9和E10，以馏分E9进行TLC薄层层析，以正己烷：乙酸乙酯＝1:2v:v作为展开剂，收集Rf值是1.2/3.5的馏分E9-1，以馏分E10进行TLC薄层层析，以正己烷：乙酸乙酯＝1:5v:v作为展开剂，收集Rf值是1.4/3.5的馏分E10-1；
馏分E9-1以体积比为70％的甲醇/水洗脱过半制备型HPLC，流速3mL/min，收集保留时间为11.4min的组分，然后以体积比为65％的乙腈/水洗脱过半制备型HPLC，流速3mL/min，收集保留时间为7.2min的组分，得到化合物koninginol A；
馏分E10-1以体积比为70％的甲醇/水洗脱过半制备型HPLC，流速3mL/min，收集保留时间为21.2min的组分，得到化合物koninginol B。
所述的制备拟康宁木霉(Trichoderma koningiopsis)A729的发酵培养物是将活化的拟康宁木霉(Trichoderma koningiopsis)A729接入马铃薯葡萄糖液体培养基中，28℃，200rpm，培养5d制得种子液，将种子液以体积比10％的接种量接入到马铃薯葡萄糖液体培养基中，28℃，200rpm，振荡培养7d，而制得发酵培养物。
本发明的第三个目的是提供拟康宁木霉(Trichoderma koningiopsis)A729在制备所述的化合物koninginol A或koninginol B中的应用。
本发明通过抗菌活性测试发现，在100μg/mL浓度作用下，化合物koninginol A对枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的抑制率为97.49％，化合物koninginol B对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)和枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的抑制率分别为96.56％、99.14％；选择80μg/mL、40μg/mL、20μg/mL、10μg/mL、5μg/mL、2μg/mL、1μg/mL 7个作用浓度下对金黄色葡萄球菌或枯草芽孢杆菌进行最低抑制浓度测定，确定koninginol A对枯草芽孢杆菌的最低抑制浓度为40μg/mL，化合物koninginol B对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的抑最低抑制浓度分别为10μg/mL、2μg/mL。结果表明：本发明的化合物koninginol A、koninginol B具有显著的抗菌活性，能用于制备抗菌药物。
本发明的第四个目的是提供所述的化合物koninginol A或koninginol B在制备抗菌药物中的应用。
优选，所述的化合物koninginol A在制备抗枯草芽孢杆菌药物中的应用；所述的化合物koninginol B在制备抗金黄色葡萄球菌或枯草芽孢杆菌药物中的应用。
本发明的第五个目的是提供一种抗菌药物，含有所述的化合物koninginol A或koninginol B作为有效成分。
当有效成分为化合物koninginol A时，所述的抗菌药物优选为抗枯草芽孢杆菌的药物；当有效成分为化合物koninginol B时，所述的抗菌药物优选为抗金黄色葡萄球菌或枯草芽孢杆菌的药物。
与现有技术相比，本发明的优势在于：
本发明通过拟康宁木霉(Trichoderma koningiopsis)A729的发酵培养、发酵产物的分离纯化和结构鉴定，获得了2个具有抗菌活性的Guanacastane类新化合物，命名为koninginol A、koninginol B。化合物koninginol A对枯草芽孢杆菌具有良好的抑制活性，化合物koninginol B对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌具有良好的抑制活性，因此，本发明为抗细菌新药研发提供候选化合物，为开发利用植物内生真菌资源提供科学依据。
所述的拟康宁木霉(Trichoderma koningiopsis)A729是从药用植物巴戟天(Morinda officinalis)根中分离得到。
本发明的拟康宁木霉(Trichoderma koningiopsis)A729于2018年11月23日保藏于广东省微生物菌种保藏中心(GDMCC)，地址：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，保藏编号为：GDMCC No：3.651(该菌种为公开保藏的，公开获取)。
附图说明：
图1是化合物1的1H-NMR谱；
图2是化合物1的13C-NMR谱；
图3是化合物1的质谱；
图4是化合物2的1H-NMR谱；
图5是化合物2的13C-NMR谱；
图6是化合物2的质谱。
具体实施方式：
以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。
实施例1：
将活化的拟康宁木霉(Trichoderma koningiopsis)A729接入马铃薯葡萄糖液体培养基中，28℃，200rpm，培养5d制得种子液，将种子液以体积比10％的接种量接入到马铃薯葡萄糖液体培养基中，28℃，200rpm，振荡培养7d，而制得发酵培养物。将该发酵培养物的发酵液经大孔树脂柱用乙醇洗脱得到乙醇提取物，乙醇提取物经浓缩后得到浸膏；浸膏过硅胶柱，先用石油醚-乙酸乙酯从5:1,1:1v/v梯度洗脱，再用二氯甲烷:甲醇从5:1,2:1v/v梯度洗脱，最后用二氯甲烷:甲醇＝1:1v/v洗脱，收集二氯甲烷:甲醇＝5:1v/v洗脱下来的馏分，以此馏分进行TLC薄层层析，以二氯甲烷：甲醇＝10:1v:v作为展开剂，收集Rf值是1.8/3.5的馏分E。
馏分E以二氯甲烷:甲醇＝1:1v/v洗脱过Sephadex LH-20，然后过正相硅胶柱层析，以体积比正己烷：乙酸乙酯10:1,5:1,2:1,1:1,1:2,1:5梯度洗脱，再用纯乙酸乙酯洗脱，最后用纯甲醇洗脱。分别收集正己烷：乙酸乙酯＝1:2,1:5v/v梯度洗脱下来的馏分E9和E10，以馏分E9进行TLC薄层层析，以正己烷：乙酸乙酯＝1:2v:v作为展开剂，收集Rf值是1.2/3.5的馏分E9-1，以馏分E10进行TLC薄层层析，以正己烷：乙酸乙酯＝1:5v:v作为展开剂，收集Rf值是1.4/3.5的馏分E10-1。
馏分E9-1以体积比为70％的甲醇/水洗脱过半制备型HPLC(型号：YMC-TriartC18，尺寸：250x10.0mm.l.D.S-5μm,12nm)，流速3mL/min，收集保留时间为11.4min的组分，然后以体积比为65％的乙腈/水洗脱过半制备型HPLC(型号：YMC-Triart C18，尺寸：250x10.0mm.l.D.S-5μm,12nm)，流速3mL/min，收集保留时间为7.2min的组分，得到化合物1(2.3mg)。
化合物1经质谱和核磁共振波谱分析(如图1、2、3所示)，其结构鉴定如下：
化合物1具有以下理化和波谱特性：黄色粉末；[α]D–55.7(c 0.1,MeOH).UV(MeCN)λmax(logε):286.4(3.26),340.4(3.31)427.4(3.40)nm.IRνmax:3361,2926,1699,1668,1645,1456,1396,1142,1121,1011cm-1.1H(500MHz)和13C(125MHz)NMR；HRESIMS m/z386.1963[M+H]+(计算值为C22H28NO5,386.1962).1H-NMR(600MHz,CDCl3)δ:2.73(1H,ddd,J＝19.5,14.0,5.5,H-6ɑ),2.65(1H,ddd,J＝18.4,5.5,2.0,H-6β),1.73(1H,ddd,J＝14.7,5.7,2.2,H-7ɑ),2.23(1H,m,H-7β),1.94(1H,ddd,J＝13.8,5.5,2.0,H-9ɑ),2.27(1H,dd,J＝13.8,5.5,H-9β),2.01(1H,m,H-10ɑ),2.14(1H,ddd,J＝14.4,5.5,2.0,H-10β),4.01(1H,ddd,J＝14.4,8.0,4.2,H-16a),4.06(1H,dt,J＝14.4,4.2,H-16b),3.87(1H,ddd,J＝11.8,8.0,4.1,H-17a),3.93(1H,dt,J＝11.8,4.1,H-17b),1.33(3H,s,H-18),1.36(3H,s,H-19),2.48(1H,m,H-20),1.32(3H,d,J＝7.0,H-21),1.30(3H,d,J＝7.0,H-22).13C NMR(150MHz,CDCl3)δ:129.3(C-1),143.7(C-2),168.7(C-3),125.6(C-4),192.5(C-5),35.0(C-6),35.2(C-7),37.8(C-8),37.9(C-9),29.9(C-10),47.5(C-11),152.4(C-12),149.8(C-13),186.3(C-14),168.8(C-15),47.4(C-16),61.1(C-17),26.0(C-18),27.2(C-19),26.2(C-20),20.5(C-21),20.5(C-22).经文献检索，该化合物为新化合物，命名为koninginol A。
馏分E10-1以体积比为70％的甲醇/水洗脱过半制备型HPLC(型号：YMC-TriartC18，尺寸：250x10.0mm.l.D.S-5μm,12nm)，流速3mL/min，收集保留时间为21.2min的组分，得到化合物2(4.9mg)。
化合物2经质谱和核磁共振波谱分析(如图4、5、6所示)，其结构鉴定如下：
化合物2具有以下理化和波谱特性：黄色粉末；[α]D–53.0(c 0.1,MeOH).UV(MeOH)λmax(logε):207.4(3.17),238.8(2.95),360.2(3.08)nm.IRνmax:3460,2926,1691,1557,1456,1375,1029cm-1.1H(500MHz)和13C(125MHz)NMR；HRESIMS m/z 388.2123[M+H]+(计算值为C23H34NO4,388.2118).1H-NMR(600MHz,CDCl3)δ:2.71(1H,ddd,J＝19.5,13.7,5.9,H-6ɑ),2.58(1H,m,H-6β),1.85(1H,ddd,J＝13.7,5.9,1.8,H-7ɑ),2.05(1H,overlapped,H-7β),1.48(1H,ddd,J＝14.6,6.5,1.7,H-9ɑ),2.14,(1H,overlapped,H-9β),2.14,(2H,overlapped,H-10),1.54(1H,dd,J＝10.2,4.5,H-12),4.17(1H,d,J＝4.5,H-13),2.61(2H,s,H-15),3.48(1H,m,H-16a),4.31(1H,dd,J＝14.9,6.1,H-16b),3.95(1H,ddd,J＝12.7,6.1,1.4,H-17a),4.04(1H,J＝12.7,8.4,H-17b),1.35(3H,s,H-18),1.40(3H,s,H-19),2.14,(1H,overlapped,H-20),1.12(3H,d,J＝6.6,H-21),1.08(3H,d,J＝6.6,H-22),3.27(3H,s,OMe).13C NMR(150MHz,CDCl3)δ:148.6(C-1),135.6(C-2),168.0(C-3),124.5(C-4),193.3(C-5),35.0(C-6),37.7(C-7),37.7(C-8),35.2(C-9),34.5(C-10),50.0(C-11),56.0(C-12),73.2(C-13),108.2(C-14),41.1(C-15),44.1(C-16),63.0(C-17),27.6(C-18),27.2(C-19),25.0(C-20),23.4(C-21),23.7(C-22),50.0(OMe).经文献检索，该化合物为新化合物，命名为koninginol B。
本发明所述的Guanacastane类化合物：化合物koninginol A和koninginol B的具体结构式如下式(I)所示：
1为化合物koninginol A、2为化合物koninginol B。
实施例2：
化合物koninginol A和koninginol B的抗菌活性测定
采用刃天青染色法测试化合物koninginol A和koninginol B的抗菌活性。
将化合物koninginol A和koninginol B分别用二甲基亚砜(DMSO)溶解并稀释至浓度为200μg/mL。取对数生长期的金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)菌液，用新鲜LB培养基调整菌液浓度为2×106cfu/mL，接种于96孔板，每孔加入180μL的菌液，并设空白孔调零，每孔分别加入上述浓度20μL的所述化合物溶液，阴性对照加20μL LB培养基。置37℃培养箱中培养24h后，每孔加入浓度为0.2mg/mL的刃天青染色剂溶液20μL，每个处理做3次重复。37℃恒温箱中培养4h后，分别测量OD570、OD600值，按下列计算公式细菌生长抑制率％(抑菌率％)。
细菌生长抑制率(％)＝[1-(OD570-OD600)样品组/(OD570-OD600)阴性对照组]×100％
实验结果如表1所示：
表1：化合物koninginol A和koninginol B对细菌的抑制作用
实施例3：
化合物koninginol A和koninginol B的最低抑制浓度测定
将化合物koninginol A和koninginol B用DMSO分别稀释至800μg/mL、400μg/mL、200μg/mL、100μg/mL、50μg/mL、20μg/mL、10μg/mL浓度。按实施例2的实验方法步聚操作，每个处理做3次重复，观察刃天青染色剂的颜色变化，以呈紫红色样品的最低浓度为最低抑制浓度(MIC值)。
实验结果如表2所示：
表2：化合物koninginol A和koninginol B对细菌的最低抑制浓度(MIC值)
注：“-”表示未做测试
从表1、表2实验结果可以看出：化合物koninginol A和koninginol B具有显著的抗菌活性，可用于制备抗菌药物，具有良好的应用开发前景。因此，本发明为研究与开发新的抗菌药物提供了候选化合物，为开发利用植物内生真菌资源提供科学依据。

Claims (9)

1.如式(I)所示任一Guanacastane类化合物：
1为化合物koninginol A、2为化合物koninginol B。
2.一种Guanacastane类化合物koninginol A和koninginol B的制备方法，其特征在于，所述的化合物koninginol A和koninginol B是从拟康宁木霉(Trichodermakoningiopsis)A729的发酵培养物中制备得到。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：
制备拟康宁木霉(Trichoderma koningiopsis)A729的发酵培养物，将发酵培养物的发酵液和菌丝体分离，发酵液经大孔树脂柱用乙醇洗脱得到乙醇提取物，乙醇提取物经浓缩后得到浸膏；
浸膏过硅胶柱，先用石油醚-乙酸乙酯从5:1,1:1v/v梯度洗脱，再用二氯甲烷:甲醇从5:1,2:1v/v梯度洗脱，最后用二氯甲烷:甲醇＝1:1v/v洗脱，收集二氯甲烷:甲醇＝5:1v/v洗脱下来的馏分，以此馏分进行TLC薄层层析，以二氯甲烷：甲醇＝10:1v:v作为展开剂，收集Rf值是1.8/3.5的馏分E；
馏分E以二氯甲烷:甲醇＝1:1v/v洗脱过Sephadex LH-20，然后过正相硅胶柱层析，以体积比正己烷：乙酸乙酯10:1,5:1,2:1,1:1,1:2,1:5梯度洗脱，再用纯乙酸乙酯洗脱，最后用纯甲醇洗脱，分别收集正己烷：乙酸乙酯＝1:2,1:5v/v洗脱下来的馏分E9和E10，以馏分E9进行TLC薄层层析，以正己烷：乙酸乙酯＝1:2v:v作为展开剂，收集Rf值是1.2/3.5的馏分E9-1，以馏分E10进行TLC薄层层析，以正己烷：乙酸乙酯＝1:5v:v作为展开剂，收集Rf值是1.4/3.5的馏分E10-1；
馏分E9-1以体积比为70％的甲醇/水洗脱过半制备型HPLC，流速3mL/min，收集保留时间为11.4min的组分，然后以体积比为65％的乙腈/水洗脱过半制备型HPLC，流速3mL/min，收集保留时间为7.2min的组分，得到化合物koninginol A；
馏分E10-1以体积比为70％的甲醇/水洗脱过半制备型HPLC，流速3mL/min，收集保留时间为21.2min的组分，得到化合物koninginol B。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述的制备拟康宁木霉(Trichodermakoningiopsis)A729的发酵培养物是将活化的拟康宁木霉(Trichoderma koningiopsis)A729接入马铃薯葡萄糖液体培养基中，28℃，200rpm，培养5d制得种子液，将种子液以体积比10％的接种量接入到马铃薯葡萄糖液体培养基中，28℃，200rpm，振荡培养7d，而制得发酵培养物。
5.拟康宁木霉(Trichoderma koningiopsis)A729在制备权利要求1所述的化合物koninginol A或koninginol B中的应用。
6.权利要求1所述的化合物koninginol A或koninginol B在制备抗菌药物中的应用。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述的化合物koninginol A在制备抗枯草芽孢杆菌药物中的应用；所述的化合物koninginol B在制备抗金黄色葡萄球菌或枯草芽孢杆菌药物中的应用。
8.一种抗菌药物，其特征在于，含有权利要求1所述的化合物koninginol A或koninginol B作为有效成分。
9.根据权利要求8所述的抗菌药物，其特征在于，当有效成分为化合物koninginol A时，所述的抗菌药物为抗枯草芽孢杆菌的药物；当有效成分为化合物koninginol B时，所述的抗菌药物为抗金黄色葡萄球菌或枯草芽孢杆菌的药物。
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Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2017049352A1 (en) * 2015-09-24 2017-03-30 Agriculture Victoria Services Pty Ltd Brachiaria endophytes and related methods
CN108892658A (zh) * 2018-08-24 2018-11-27 广东省微生物研究所（广东省微生物分析检测中心） 化合物lithocarpinol B及其制备方法和在制备抗真菌药物中的应用

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2017049352A1 (en) * 2015-09-24 2017-03-30 Agriculture Victoria Services Pty Ltd Brachiaria endophytes and related methods
CN108892658A (zh) * 2018-08-24 2018-11-27 广东省微生物研究所（广东省微生物分析检测中心） 化合物lithocarpinol B及其制备方法和在制备抗真菌药物中的应用

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CHRISTIAN M. GAMPE ET AL.: ""Cyclohexyne Cycloinsertion in the Divergent Synthesis of Guanacastepenes"", 《CHEM. EUR. J.》 *
HONGSHENG YU ET AL.: ""Recent developments and future prospects of antimicrobial metabolites produced by endophytes"", 《MICROBIOLOGICAL RESEARCH》 *
王营: ""巴戟天内生真菌的分离鉴定_活性筛选及次级代谢产物研究"", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库》 *
黄敬瑜 等: ""植物内生菌生物抗菌活性物质研究进展"", 《生物工程学报》 *

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