CN109486681A - 细菌裂解液和耐辐射奇球菌提取物的制备方法及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于抗辐射制剂技术领域，具体涉及细菌裂解液和耐辐射奇球菌提取物的制备方法及其应用。本发明所提供的细菌裂解液包括：尿素6～10mol/L，碘乙酰胺40～60mmol/L，NH4HCO340～60mmol/L。与现有技术相比，本发明细菌裂解液的成分组成简单，由该裂解液裂解得到的耐辐射奇球菌提取物的总蛋白质得率和SOD活性均较高。本发明还提供了耐辐射奇球菌提取物的制备方法，在4℃以下，将耐辐射奇球菌菌体、细菌裂解液和蛋白酶抑制剂混合，得到混合液；然后，将所述混合液进行超声裂解，收集上清液，得到耐辐射奇球菌提取物；细菌裂解液包括：尿素6～10mol/L，碘乙酰胺40～60mmol/L，NH4HCO340～60mmol/L。本发明还提供了上述制备方法得到的耐辐射奇球菌提取物在制备具有抗辐射功效的化妆品、食品或药物中的应用。
Description
技术领域
本发明属于抗辐射制剂技术领域，具体涉及细菌裂解液和耐辐射奇球菌提取物的制备方法及其应用。
背景技术
辐射指的是由场源出的电磁能量中一部分脱离场源向远处传播，而后再返回场源的现象，能量以电磁波或粒子(如α粒子、β粒子等)的形式向外扩散。辐射一般可依其能量的高低及电离物质的能力分类为电离辐射或非电离辐射。非电离辐射的能量较弱，不会电离物质而会改变分子或原子之旋转，振动或价层电子轨态，不同的非电离辐射可产生不同之生物学作用。电离辐射是一种使物质发生直接或间接电离的粒子辐射。它可以从原子、分子或其他束缚状态释放出短波长、高频率、高能量的α粒子、β粒子、质子或中子、X射线和γ射线。
常见的辐射包括太阳辐射、电磁辐射、热辐射等，其中电磁辐射可以按照频率分类，从低频率到高频率，包括无线电波、微波、红外线、可见光、紫外线、X射线和γ射线等。紫外线是波长为200～400nm的电磁波，其中波长为200～290nm的紫外线称为短波紫外线(UVC)，波长为290～320nm的紫外线称为中波紫外线(UVB)，波长为320～400nm的紫外线称为长波紫外线(UVA)。UVC对人类皮肤的损害作用最大，但由于太阳辐射到地球表面的UVC大部分被大气层吸收，而达不到地球表面，所以一般情况下UVC对人类皮肤的作用可被忽视。日光中同时含有UVA和UVB，紫外线引起的皮肤损伤主要与UVA及UVB有关，其中UVB是造成皮肤损伤的主要原因。
外太空的辐射源主要有两种，一种是银河宇宙射线(Galactic Cosmic Rays,GCR)，另一种是太阳粒子(solar energetic particle,SEP)。其中，85％的空间辐射的高能电荷粒子来自于高能质子，14.4％来自于α粒子，1.3％来自于其他重核成分(C、O、Mg、Si、Fe)，其中重离子是属于高能质子的一种。虽然地球球体通过低层大气的折射，在宇宙射线到达空间站之前已经拦截掉了其中最具危险的三分之一粒子，还有三分之一则被地球磁场给反射掉了，但仍有很少部分的宇宙射线打到了航天员的身上。据《自然》杂志官方网站2017年2月报道，美国宇航局NASA对一对双胞胎宇航员进行了长达一年的身体研究(2015年3月27号开始，一共342天)，结果表明，太空旅行会导致人类基因表达发生异常变化，染色体端粒将会变长。所以，做好太空辐射防护对保障航天员的身体健康至关重要。
为了预防外界辐射对人体皮肤造成辐射损伤，人们常常通过在各类护肤制品中添加各种紫外线吸收剂，然而这些一般仅能防止穿透力较弱的紫外辐射，对外太空辐射的抵抗能力基本为零。
与普通紫外线吸收剂相比，天然来源的紫外防护剂不仅有防护紫外线的能力，并且安全性能好，无毒无刺激，越来越受到人们的青睐。
耐辐射奇球菌(Deinococcus radiodurans)是目前已知物种中最耐电离辐射的生物之一，其对电离辐射、紫外线、干燥、强氧化剂和一些化学诱变剂等各种DNA损伤介质的致死和突变效应显示惊人的抗性。据研究报道，耐辐射奇球菌能经受5000Gy的γ射线急性电离辐射而不致死，15,000Gy的照射剂量仍能存活37％。耐辐射奇球菌抗辐射的机制复杂，或许与其细胞膜内含有大量的类胡萝卜素有关，或许因其基因组内编码多种清除活性氧的蛋白相关。耐辐射奇球菌的基因组内编码多种清除活性氧的蛋白，至少包括超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和过氧化物酶(POD)，有利于防治因电离辐射、UV、强氧化剂等造成的活性氧损伤细胞。耐辐射奇球菌的SOD、CAT和POD等保护酶的高含量成了其辐射抗性极强的一个原因。电离辐射的间接作用能在细胞内产生大量的自由基，SOD、CAT和POD能有效清除细胞内超氧阴电离自由基(O-)、羟基自由基(·OH)和过氧化氢(H2O2)等对细胞毒害作用极强的活性氧自由基。
目前，人们主要通过采用裂解液裂解耐辐射奇球菌菌体的方法制备耐辐射奇球菌提取物，包括Triton X 100法、尿素法和TRIzol法等，或采用商品裂解液RIPA(主要成分为50mM Tris(pH 7.4)，150mM NaCl，1％Triton X-100，1％sodium deoxycholate，0.1％SDS，以及sodium orthovanadate，sodium fluoride，EDTA，leupeptin等多种抑制剂)。然而，上述方法采用的裂解试剂成分复杂，操作繁琐，对耐辐射奇球菌活性成分的无损提取干扰较大，由之获得的提取物活性成分含量较低，活性较不稳定。
发明内容
本发明的主要目的在于提供一种裂解液，用于制备耐辐射奇球菌提取物，旨在解决现有耐辐射奇球菌提取物制备过程中所采用的裂解试剂成分复杂，制备过程操作繁琐，对耐辐射奇球菌活性成分的无损提取干扰较大等技术问题。
为了解决上述技术问题，一方面，本发明提供了一种细菌裂解液，包括：尿素6～10mol/L，碘乙酰胺40～60mmol/L，NH4HCO3 40～60mmol/L。
与现有技术相比，本发明所提供的细菌裂解液包括尿素、碘乙酰胺和NH4HCO3，成分组成简单，可充分地裂解提取耐辐射奇球菌的活性成分。尿素作为变性剂，使得耐辐射奇球菌菌体中的大部分蛋白质变性并溶解于水溶液中，并能保持耐辐射奇球菌菌体内的SOD稳定；碘乙酰胺为半胱氨酸和组氨酸的烷基化试剂，由于耐辐射奇球菌SOD活性中心的两个Cys之间形成了二硫键，不受碘乙酰胺的影响，实现在保证蛋白质样品完全变性并保持还原状态防止蛋白质进一步被裂解的同时，保证耐辐射奇球菌菌体内的SOD酶活不受影响；碳酸氢铵起缓冲作用，提供合适的pH，使得溶液环境维持在pH7.6～7.8之间，进而保持耐辐射奇球菌SOD酶活的稳定。因而，本发明裂解液联用尿素、碘乙酰胺和碳酸氢铵，既可保证耐辐射奇球菌的SOD酶活不受影响，又能从根本上使其他蛋白质(酶)变性或被抑制。
另一方面，本发明还提供了一种耐辐射奇球菌提取物的制备方法，在4℃以下，将耐辐射奇球菌菌体、细菌裂解液和蛋白酶抑制剂混合，得到混合液；然后，将混合液进行超声裂解，收集上清液，得到耐辐射奇球菌提取物；
细菌裂解液包括：尿素6～10mol/L，碘乙酰胺40～60mmol/L，NH4HCO3 40～60mmol/L。
与现有技术相比，本发明的制备方法步骤简便，所采用的裂解液成分组成简单，可最大程度提取耐辐射奇球菌菌体中的活性成分，由该由此得到的耐辐射奇球菌提取物的总蛋白质得率和SOD活性均较高，具有优异的防辐射性能。
又一方面，本发明还提供了上述制备方法得到的耐辐射奇球菌提取物在制备具有抗辐射功效的化妆品、食品或药物中的应用。
通过上述制备方法得到的耐辐射奇球菌提取物具有优异的强防辐射性能，可应用于制备具有抗辐射功效的化妆品、食品或药物。
又一方面，本发明还提供了一种防辐射护肤制剂，包括：耐辐射奇球菌提取物。
附图说明
图1为测试例3中添加实施例2的防辐射润体霜的实验组的枯草芽孢杆菌经紫外线照射处理后的结果；
图2为测试例3中不加耐辐射奇球菌提取物的对照组的枯草芽孢杆菌经紫外线照射处理后的结果。
具体实施方式
为了解决现有耐辐射奇球菌提取物制备过程中所采用的裂解试剂成分复杂，制备过程操作繁琐，对耐辐射奇球菌活性成分的无损提取干扰较大等技术问题。本发明实施例提供了一种裂解液，采用该裂解液裂解制备得到的耐辐射奇球菌提取物活性成分含量较高，活性稳定。
本发明实施例所提供的裂解液，包括：尿素6～10mol/L，碘乙酰胺40～60mmol/L，NH4HCO3 40～60mmol/L。
在上述技术方案中，尿素作为变性剂，使得耐辐射奇球菌菌体中的大部分蛋白质变性并溶解于水溶液中，并能保持耐辐射奇球菌菌体内SOD的稳定性；碘乙酰胺为半胱氨酸和组氨酸的烷基化试剂，由于耐辐射奇球菌SOD活性中心的两个Cys之间形成了二硫键，不受碘乙酰胺的影响，实现在保证蛋白质样品完全变性并保持还原状态防止蛋白质进一步被裂解的同时，保证耐辐射奇球菌菌体内的SOD酶活不受影响；碳酸氢铵起缓冲作用，提供合适的pH，使得溶液环境维持在pH7.6～7.8之间，进而保持耐辐射奇球菌SOD酶活的稳定。因而，本发明裂解液联用尿素、碘乙酰胺和碳酸氢铵，既可保证耐辐射奇球菌的SOD酶活不受影响，又能从根本上使其他蛋白质(酶)变性或被抑制。
本发明实施例采用SOD活性检测试剂盒(NBT法)考察了尿素、碘乙酰胺和NH4HCO3及其组合对耐辐射奇球菌菌体裂解物的总SOD酶活的影响，发现当裂解液为尿素、碘乙酰胺和NH4HCO3的组合时，由其裂解得到的耐辐射奇球菌菌体裂解物的总SOD酶活最高，说明尿素、碘乙酰胺和NH4HCO3在耐辐射奇球菌菌体的裂解提取过程中是协同作用的。
本发明还提供了一种耐辐射奇球菌提取物的制备方法，在4℃以下，将耐辐射奇球菌菌体、裂解液和蛋白酶抑制剂混合，得到混合液；然后，将所述混合液进行超声裂解，收集上清液，得到耐辐射奇球菌提取物；
裂解液包括：尿素6～10mol/L，碘乙酰胺40～60mmol/L，NH4HCO3 40～60mmol/L。
本发明实施例同时采用酶裂解法和超声裂解法对耐辐射奇球菌菌体进行活性成分的提取，酶裂解法条件温和，可减少蛋白质的裂解，最大限度的保证了耐辐射奇球菌提取物的活度；超声裂解具有更高的裂解效率，可更为全面地裂解耐辐射奇球菌菌体，在4℃以下的环境条件下进行，可保证耐辐射奇球菌提取物的活度，提高了耐辐射奇球菌菌体的提取效率。在本发明实施例耐辐射奇球菌提取物的制备方法中，酶裂解法和超声裂解法相辅相成，共同提高了耐辐射奇球菌提取物的总SOD酶活度和总活性成分的提取效率。
在本发明耐辐射奇球菌提取物的制备过程中，将耐辐射奇球菌菌体、裂解液和蛋白酶抑制剂混合，这一步骤可参考本领域常规方法，最终使得耐辐射奇球菌菌体、裂解液和蛋白酶抑制剂能充分混合均匀即可。
在本发明实施例中，耐辐射奇球菌提取物的制备过程保持在4℃以下，主要目的在于防止菌体变质，并保证耐辐射奇球菌提取物的活性。
作为本发明的一个优选实施方式，耐辐射奇球菌菌体、裂解液和蛋白酶抑制剂的混合和/或超声裂解在冰浴条件下进行。
冰浴条件的设置可参考本领域常规方法。例如，在盛装样本容器的外容器中装入冰，温度可设置为0℃以下。冰浴起冷却、散热作用，保证制备环境保持在0～4℃，可防止菌体变质，同时也可及时带走超声裂解时产生的热量，保证耐辐射奇球菌提取物的活性。
在其中一个优选实施例中，耐辐射奇球菌菌体、裂解液和蛋白酶抑制剂的混合步骤，以及超声裂解的步骤均在冰浴条件下进行。
在另一个优选实施例中，超声裂解的步骤在冰浴条件下进行，耐辐射奇球菌菌体、裂解液和蛋白酶抑制剂的混合步骤在低温实验室内进行。
值得注意的是，除了冰浴条件和低温实验室，其他能保持操作的环境在0～4℃以下的技术手段亦在本发明实施例的保护范围之内。
在本发明实施例中，耐辐射奇球菌菌体、裂解液和蛋白酶抑制剂的添加手段及其添加顺序不作严格限定，例如，蛋白酶抑制剂与裂解液一起加入，也可以在菌体与裂解液混合之后再加入。
作为优选，按每克菌体与4～8mL裂解液的比例，将耐辐射奇球菌菌体与裂解液混合。当每克菌体加入的细菌裂解液少于4mL时，菌液粘稠，采用离心等方法去除细胞碎片时活性物质损失比例偏高；当每克菌体加入的细菌裂解液大于8mL时，菌液过稀，所得提取物中活性物质浓度低于使用要求。
作为优选，按每克菌体与0.05～0.2mL蛋白酶抑制剂的比例，将耐辐射奇球菌菌体与蛋白酶抑制剂混合。每克菌体中添加适量的蛋白酶抑制剂(如0.05～0.2mL)可以防止菌体内源蛋白酶对蛋白类活性成分如SOD、POD等的降解，保证提取物的活性；每克菌体中添加的蛋白酶抑制剂大于0.2mL会导致不必要的浪费和成本的增加。
进一步的，本发明实施例的蛋白酶抑制剂优选为苯甲基磺酰氯(PMSF)、Aprotinin抑肽酶、重组大豆胰蛋白酶抑制剂和Cocktail蛋白酶抑制剂中的一种或多种。
经实验测定，本发明实施例采用PMSF、Aprotinin抑肽酶、重组大豆胰蛋白酶抑制剂和Cocktail蛋白酶抑制剂中任一种蛋白酶抑制剂得到的耐辐射奇球菌提取物的总蛋白质得率和SOD活性均较高，每克湿菌体的总蛋白质得率在39.17±4.22mg以上，提取物总SOD酶活在27389±1341.3以上。
作为优选，超声裂解为间歇超声裂解，且所述间歇超声裂解的工作方法为：
在300～400w的裂解功率下，每次工作2～5s后间歇4～10s，总工作时间为6～10min。当功率低于300w时达不到破壁效果，功率高于400w时破碎时产热太高，不宜控制温度，影响提取物SOD酶活。当每次循环工作时间太短、间歇时间大于10s时，导致菌体破壁周期太长；当每次循环工作时间大于5s、间歇小于4s时，则导致产热偏高且散热不好，从而导致样品温度太高。
本发明还提供了制备方法得到的耐辐射奇球菌提取物在制备具有抗辐射功效的化妆品、食品或药物中的应用。
通过上述制备方法得到的耐辐射奇球菌提取物具有优异的强防辐射性能，可应用于制备具有抗辐射功效的化妆品、食品或药物。
本发明还提供了一种防辐射护肤制剂，包括上述制备方法得到的耐辐射奇球菌提取物。本防辐射护肤制剂具有良好的防辐射效果，主要应用于航空工作者使用，也可用于医院、研究等电离辐射类职业从业人员、孕妇等的辐射防护。
本发明实施例对防辐射护肤制剂的剂型不作具体限定，防辐射护肤制剂可为霜剂、乳剂、片剂、喷雾剂和露剂中的一种。
进一步的，本发明实施例的防辐射护肤制剂还包括第二活性成分，第二活性成分与耐辐射奇球菌提取物复配，可协同增强制剂的防辐射效果。
在本发明实施例中，第二活性成分的具体成分不作具体限定，具有抗氧化、清除自由基等功效的物质成分均可应用于本发明防辐射护肤制剂中。
作为优选，第二活性成分选自槲皮素、辅酶Q10和还原型谷胱甘肽中的一种或多种。
作为一种优选实施方式，本发明实施例的防辐射护肤制剂，包括以下重量份组分：
作为优选的，本发明实施例的防辐射护肤制剂，包括：
在本发明实施例的防辐射护肤制剂中，硬脂酸主要作为一种乳化剂，增强乳化效果；十八醇和凡士林作为保湿剂，用来防止皮肤表面水分的蒸发，提高化妆品的保湿效果；棕榈酸异丙酯作为皮肤柔润剂，可使肌肤柔软嫩滑，无油腻感，同时具有良好的增溶作用，可促进第二活性成分对皮肤的渗透性；羊毛脂通过延迟水分透过表皮层来维持皮肤通常的含水量，可以让皮肤光滑柔嫩；吐温-60是稳定剂和乳化剂；尼泊金甲酯具有良好的抗菌活性，在本制剂中用作防腐剂；三乙醇胺具有乳化、保湿、增湿、增稠、和平衡pH作用；甘油具有保湿作用；span-80主要作用是乳化剂；EDTA能够调节本品的酸碱度，使皮肤免收强刺激；氮酮是渗透剂，促进各活性成分对皮肤的渗透。
在本发明实施例中，对上述防辐射护肤制剂的制备工艺不作具体限定，可根据该防辐射护肤制剂的具体剂型的特定进行改进。
作为一种优选实施方式，本发明实施例防辐射护肤制剂的制备方法，包括：
a)将硬脂酸、十八醇、凡士林、棕榈酸异丙酯、羊毛脂、吐温-60和尼泊金甲酯混合，加热至熔融，得到油相；
b)将三乙醇胺、甘油、span-80、EDTA和氮酮溶解于水中，得到水相；
c)将油相加入水相中，高速搅拌；待温度下降至60℃以下时加入耐辐射奇球菌提取物，继续搅拌直至溶液完全乳化，冷凝；
其中，高速搅拌的转速在1500rpm以上。
为了使本发明要解决的技术问题、技术方案及有益效果更加清楚明白，以下结合具体实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
以下实施例所采用的PMSF、Aprotinin抑肽酶、重组大豆胰蛋白酶抑制剂和Cocktail蛋白酶抑制剂均购自Roche公司。
实施例1
本实施例提供了一种耐辐射奇球菌提取物的制备方法，其制备过程为：
1、耐辐射奇球菌的培养
取耐辐射奇异球菌(Deinococcus radiodurans)CGMCC1.3828，接种Corynebacterium培养基斜面，并置于30℃培养箱活化培养2天，进行活化。
取活化的菌种转接Corynebacterium液体培养基，于30℃、200rpm下振荡培养32h，离心，收集湿菌体(3.2g)。
其中，Corynebacterium培养基的成分组成为：胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，葡萄糖5g，NaCl 5g，1L ddH2O，琼脂粉15g。
2、裂解液的配制
1)配方：尿素8mol/L，碘乙酰胺50mmol/L，NH4HCO3 50mmol/L，ddH2O。
2)配制
称取0.6g尿素于1.5mL离心管中，加400μL ddH2O溶解，加500mmol/LIAA(碘乙酰胺)50μL，500mmol/L NH4HCO3 50μL，吹吸混匀，然后补加ddH2O至1mL，避光保存，待用。
称取0.6g尿素于1.5mL离心管中，加400μL ddH2O溶解，加500mmol/LIAA(碘乙酰胺)50μL，500mmol/L NH4HCO3 50μL，吹吸混匀，然后补加ddH2O至1mL，至尿素终浓度为8mol/L，IAA终浓度为50mmol/L，NH4HCO3终浓度为50mmol/L，避光放置备用。
3、耐辐射奇球菌提取物的制备
取2.0g湿菌体，加入10.0mL裂解液，补加50×的蛋白酶抑制剂PSMF 0.1mL将菌体混匀，置于超声波细胞破碎仪中进行超声裂解，超声破碎条件为：在冰浴上进行，功率300w，每次工作2s间歇4s，总工作时间为8min。
超声结束后，于13300g、4℃离心10min，收集上清，即得耐辐射奇异球菌提取物，-80℃保存备用。
实施例2
本实施例与实施例1的区别在于：在步骤3的耐辐射奇球菌提取物的制备过程中，蛋白酶抑制剂选为Aprotinin蛋白酶抑制剂。
其余地方与实施例1的基本相同，此处不再一一赘述。
实施例3
本实施例与实施例1的区别在于：在步骤3的耐辐射奇球菌提取物的制备过程中，蛋白酶抑制剂选为重组大豆胰蛋白酶抑制剂。
其余地方与实施例1的基本相同，此处不再一一赘述。
实施例4
本实施例与实施例1的区别在于：在步骤3的耐辐射奇球菌提取物的制备过程中，蛋白酶抑制剂选为Cocktail蛋白酶抑制剂。
其余地方与实施例1的基本相同，此处不再一一赘述
实施例5
取实施例1制备的耐辐射奇球菌提取物，制备一种防辐射润体霜，其配方和制备过程如下：
1、配方组成
2、制备方法
a)将硬脂酸、十八醇、凡士林、棕榈酸异丙酯、羊毛脂、吐温-60和尼泊金甲酯混合，加热至80℃，熔融，得到油相；
b)将三乙醇胺、甘油、span-80、EDTA、氮酮和水混合，加热至80℃，溶解，得到水相；
c)将所述油相加入所述水相中，以1500rpm进行高速搅拌；待温度下降至60℃时加入耐辐射奇球菌提取物，以1200rpm继续搅拌直至溶液完全乳化，冷却至25℃，形成膏体。
对比例1
本对比例与实施例1的区别在于：裂解液的配方为尿素7mol/L和ddH2O。
其余地方与实施例1基本相同，此处不再一一赘述。
对比例2
本对比例与实施例1的区别在于：裂解液的配方为碘乙酰胺40mmol/L和ddH2O。
其余地方与实施例1基本相同，此处不再一一赘述。
对比例3
本对比例与实施例1的区别在于：裂解液的配方为NH4HCO3 50mmol/L和ddH2O。
其余地方与实施例1基本相同，此处不再一一赘述。
测试例1
取实施例1和对比例1～3得到的耐辐射奇球菌提取物，采用SOD活性检测试剂盒(NBT法)测定提取物的总SOD酶活，检测结果如表1。如结果所示，本发明裂解液中，尿素、碘乙酰胺和碳酸氢铵之间协同作用，可大大提高耐辐射奇球菌提取物的总SOD酶活度。
表1
测试例2
取实施例1～4得到的耐辐射奇球菌提取物，测定提取物的总SOD酶活和总蛋白质得率，检测结果如表2，说明本发明实施例采用PMSF、Aprotinin抑肽酶、重组大豆胰蛋白酶抑制剂和Cocktail蛋白酶抑制剂中任一种蛋白酶抑制剂得到的耐辐射奇球菌提取物的总蛋白质得率和SOD活性均较高。
表2
测试例3
在LB液体培养基中，按0.5％(v/v)的添加量添加实施例5的防辐射润体霜，加入新鲜活化培养的枯草芽孢杆菌(E.coli)菌体至终浓度2.0×108cfu/mL，然后取5mL菌悬液于无菌平皿，15W紫外灯距离20cm照射3min。以不加耐辐射奇球菌提取物的相同处理为对照，同样紫外照射，然后进行平板计数。
图1为添加实施例2的防辐射润体霜的实验组的枯草芽孢杆菌经紫外线照射处理后的结果；图2为不添加耐辐射奇球菌提取物的对照组的枯草芽孢杆菌经紫外线照射处理后的结果。如图1结果显示，添加实施例2的防辐射润体霜的实验组枯草芽孢杆菌致死率为17％，然而，图2中不加耐辐射奇球菌提取物的对照组枯草芽孢杆菌致死率高达82％，说明通过本发明实施例制备方法得到的防辐射润体霜的抗辐射效果显著。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种细菌裂解液，其特征在于，包括：尿素6～10mol/L，碘乙酰胺40～60mmol/L，NH4HCO3 40～60mmol/L。
2.一种耐辐射奇球菌提取物的制备方法，其特征在于，在4℃以下，将耐辐射奇球菌菌体、细菌裂解液和蛋白酶抑制剂混合，得到混合液；然后，将所述混合液进行超声裂解，收集上清液，得到耐辐射奇球菌提取物；
所述细菌裂解液包括：尿素6～10mol/L，碘乙酰胺40～60mmol/L，NH4HCO3 40～60mmol/L。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述蛋白酶抑制剂为苯甲基磺酰氯、Aprotinin抑肽酶、重组大豆胰蛋白酶抑制剂和Cocktail蛋白酶抑制剂中的一种或多种。
4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，按每克菌体与4～8mL所述裂解液的比例，将所述耐辐射奇球菌菌体与所述裂解液混合；和/或
按每克菌体与0.05～0.2mL所述蛋白酶抑制剂的比例，将所述耐辐射奇球菌菌体与所述蛋白酶抑制剂混合。
5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述超声裂解为间歇超声裂解，且所述间歇超声裂解的工作方法为：
在300～400w的裂解功率下，每次工作2～5s后间歇4～10s，总工作时间为6～10min。
6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述耐辐射奇球菌菌体、裂解液和蛋白酶抑制剂的混合和/或所述超声裂解在冰浴条件下进行。
7.权利要求2至6任一项所述的制备方法得到的耐辐射奇球菌提取物在制备具有抗辐射功效的化妆品、食品或药物中的应用。
8.一种防辐射护肤制剂，其特征在于，包括：权利要求2至6任一项所述的制备方法得到的耐辐射奇球菌提取物。
9.根据权利要求8所述的防辐射护肤制剂，其特征在于，包括以下重量份组分：
10.根据权利要求1所述的防辐射护肤制剂，其特征在于，所述第二活性成分选自槲皮素、辅酶Q10和还原型谷胱甘肽中的一种或多种。
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