CN109463381B - 一种季铵盐-纳米银型磁性纳米抗菌复合粒子及其制备方法和应用 - Google Patents

一种季铵盐-纳米银型磁性纳米抗菌复合粒子及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明属于医用生物材料领域，一种季铵盐‑纳米银型磁性纳米抗菌复合粒子及其制备方法和应用。其工艺为：共沉淀法制备Fe3O4纳米粒子；聚甲基丙烯酸修饰磁性Fe3O4纳米粒子合成Fe3O4‑PAA；分别以2‑羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖为阳离子组装液和柠檬酸钠为阴离子组装液组装到Fe3O4纳米粒子上，得到Fe3O4‑PAA‑(CS‑CA)n；Fe3O4‑PAA‑(CS‑CA)n与AgNO3共同煮沸，在纳米粒子表面的组装层上原位生成纳米银颗粒。有益效果：本发明所得抗菌纳米粒子具备接触型和释放型抗菌剂双重功效，抗菌效果优异，且多次循环仍能表现出较好的抗菌效果，可作添加剂应用在医用复合材料中。

Description

一种季铵盐-纳米银型磁性纳米抗菌复合粒子及其制备方法 和应用
技术领域
本发明涉及一种季铵盐-纳米银型磁性纳米抗菌复合粒子及其制备方法和应用，属于医用生物材料领域。
背景技术
Fe3O4磁性纳米粒子是指尺寸处于1-100nm的一种纳米磁性材料，因其兼具特殊的磁性以及纳米材料特有的宏观量子隧道效应、量子尺寸效应、表面效应、小尺寸效应等特性，已被广泛应用于医疗、催化和生物等领域，近年来的研究表明，它在抗菌领域也具有良好的应用前景。
CN103044611B号专利文献通过聚合反应生成丙烯酸和苯乙烯混聚物纳米粒子，在磁性纳米粒子表面包裹反应生成的聚合物获得丙烯酸和苯乙烯混聚物磁性纳米粒子，然后通过和胺反应生成含有卤胺前置体官能团的聚合物抗菌磁性纳米粒子，最后通过卤化反应生成含有卤胺官能团的磁性抗菌纳米粒子。这些抗菌纳米粒子具有快速、高效、广谱的杀菌功效，其抗菌卤胺官能团在消耗完后能够通过简单的卤化反应来获得再生，能广泛应用于各种水体和空气的灭菌消毒处理、有害难闻气体的控制等。CN107812188A号专利文献报道了在Fe3O4表面修饰一层光热效果明显的聚多巴胺PDA，最后利用聚多巴胺表面上大量的氨基作为起始点，利用丙烯酸甲酯与乙二胺交替反应制备出以四氧化三铁为核，中间为聚多巴胺，最外层为树枝状聚酰胺-胺Fe3O4@PDA@PAMAM，然后负载一氧化氮，得到具有一氧化氮/光热协同抗菌作用的磁性材料。该材料利用近红外光照射产热杀菌并促使NO快速释放，实现光热与NO协同杀菌，再利用磁性氧化铁将细菌快速分离从而进一步提高杀菌净化效果。
以上的研究表明，Fe3O4在抗菌材料的快速分离和回收循环方面具有重要的应用价值。然而，这类抗菌纳米材料的制备大多操作繁琐，条件苛刻，需要涉及到冗长的化学合成和大量有毒试剂的使用。同时，就抗菌机理而言，这类抗菌纳米材料往往只具备接触杀菌或者释放杀菌单一机理的抗菌行为，无法充分发挥多重抗菌机理的协同杀菌作用，限制了它们在多重抗菌场景下的进一步应用。
发明内容
为解决现有抗菌纳米材料往往只具备接触杀菌或者释放杀菌单一机理的缺陷，本发明的目在于提供一种季铵盐-纳米银型磁性纳米抗菌复合粒子及其制备方法，并赋予材料接触和释放双重抗菌机理的应用。
实现本发明目的的技术方案是：一种季铵盐-纳米银型磁性纳米抗菌复合粒子及其制备方法，其特征在于具有以下步骤：
(1)Fe3O4磁性纳米粒子的制备；
(2)聚甲基丙烯酸修饰步骤(1)所制备的磁性纳米粒子，得到Fe3O4-PAA磁性纳米粒子；
(3)分别以2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖为阳离子组装液和柠檬酸钠为阴离子组装液组装到步骤(2)所制备的Fe3O4-PAA磁性纳米粒子表面，得到Fe3O4-PAA-(CS-CA)n纳米粒子，其中，n的范围为1～8，且n为正整数；
(4)将纳米银颗粒镶嵌到步骤(3)所制备的Fe3O4-PAA-(CS-CA)n纳米粒子表面，得到Fe3O4-PAA-(CS-CA)n-Ag纳米粒子。
具体地，步骤(1)为，采用共沉淀法，将FeCl3·6H2O和FeCl2·4H2O加入去离子水中，N2保护下搅拌，室温下快速加入NH3·H2O，加热搅拌，所得Fe3O4磁性纳米粒子经外磁场分离，去离子水洗涤，真空干燥，其中，FeCl3·6H2O和FeCl2·4H2O的摩尔配比为1～3:1。
优选地，所述Fe3O4磁性纳米粒子的平均粒径20-30nm，所述加热温度至80℃，搅拌时间为1h。
具体地，步骤(2)为，将步骤(1)所制备的Fe3O4磁性纳米粒子超声分散在去离子水中，向分散液中滴加碳二亚胺和聚甲基丙烯酸，在冰浴下超声搅拌，磁性纳米粒子经外磁场分离，并用去离子水洗涤分散在去离子水中，碳二亚胺和聚甲基丙烯酸的摩尔配比为1:1～6。
具体地，步骤(3)为，将步骤(2)所制备的Fe3O4-PAA磁性纳米粒子分散在去离子水中，形成分散液，并逐滴加入2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖阳离子组装液中，超声剧烈搅拌，组装结束后纳米粒子经外磁场分离，水洗，重新分散在去离子水中；然后将上述分散液逐滴加入柠檬酸钠阴离子组装液中，继续超声剧烈搅拌，组装结束后经外磁场分离，水洗，重新分散在去离子水中，重复上述过程n次，去离子水洗涤，60℃真空干燥，得到Fe3O4-PAA-(CS-CA)n纳米粒子。
优选地，所述组装在pH＝4-5条件下进行组装，组装液和洗涤用去离子水pH必须保持一致。
优选地，所述的2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖阳离子组装液和柠檬酸钠阴离子组装液质量浓度比为1/1，所述的n优选为5。
具体地，步骤(4)为，将步骤(3)所制备的Fe3O4-PAA-(CS-CA)n分散在去离子水中，与AgNO3水溶液混合并煮沸，保持溶液沸腾0.5-1h，磁吸、洗涤、冷冻干燥。
有益效果：
1.本发明技术工艺简单，原料易得，实验过程基本不涉及有毒试剂，废液处理简单，有利于推广应用。
2.在纳米银的还原中，无需外加还原剂即可原位生成纳米银颗粒。
3.Fe3O4尺寸小、比表面积大的特点可以提供更多的与细菌接触的靶点，能大大提高高分子抗菌剂的抗菌能力，增加抗菌效率。
4.本发明将季铵盐和纳米银两种抗菌剂同时结合在Fe3O4载体上，赋予材料接触和释放双重抗菌机理，抗菌效果优异，且多次循环仍能表现出较好的抗菌效果。
附图说明
下面结合附图和实施例对本发明进一步说明。
图1为本发明实施例1中a:Fe3O4-PAA，b:Fe3O4-PAA-(CS-CA)5红外谱图。
图2为本发明实施例1中a:Fe3O4-PAA-(CS-CA)5-Ag,b:Fe3O4-PAA-(CS-CA)5热重曲线图。
图3为本发明实施例1中Fe3O4-PAA-(CS-CA)5组装过程zeta电位变化曲线图。
图4为本发明实施例1中a:Fe3O4-PAA-(CS-CA)5,b:Fe3O4-PAA-(CS-CA)5-Ag的XRD图。
图5为本发明实施例1中a:Fe3O4-PAA-(CS-CA)5,b:Fe3O4-PAA-(CS-CA)5-Ag的TEM图。
图6为本发明实施例1中a:Fe3O4,b:Fe3O4-PAA-(CS-CA)5,c:Fe3O4-PAA-(CS-CA)5-Ag的VSM磁滞回线图。
图7为本发明实施例1中a:未改性Fe3O4,b:Fe3O4-PAA-(CS-CA)5,c:Fe3O4-PAA-(CS-CA)5-Ag对(A):S.aureus和(B):E.coli抑菌圈照片。
图8为本发明实施例1中不同抗菌纳米粒子对(A):S.aureus和(B):E.coli的抗菌动力学曲线图。
图9为本发明实施例1中Fe3O4-PAA-(CS-CA)5-Ag的循环抗菌测试图。
具体实施方式
下面结合实例详细说明本发明一种季铵盐-纳米银型磁性纳米抗菌复合粒子及其制备方法和应用。这些实施例仅用于说明本发明而不限制于本发明的范围。
实施例1
本发明所提供的一种季铵盐-纳米银型磁性纳米抗菌复合粒子的制备方法，主要分为以下几个步骤：
步骤(1):在250mL三口烧瓶中加入0.7g FeCl3·6H2O和0.36g FeCl4·4H2O，随后加入200mL去离子水，N2保护下强力机械搅拌，室温下一次性快速加入10mL(25wt.％)NH3·H2O，溶液颜色立刻由橙黄色变成黑色，之后水浴加热升温到80℃，反应1h。反应结束后将反应液冷却至室温，Fe3O4磁性纳米颗粒子外磁场分离，用去离子水洗涤三次，真空干燥24h。
步骤(2):将100mg Fe3O4超声分散在100mL去离子水中，向分散液中滴加0.5mL碳二亚胺溶液(0.025g/mL)，超声搅拌10min，然后向反应液中快速加入2.5mL PAA溶液(40mg/mL)，继续超声搅拌30min，整个反应过程在冰浴环境下进行。反应结束后，表面修饰PAA的磁性纳米粒子经外磁场分离，并用去离子水洗涤三次，继续分散在50mL去离子水中，待用。
步骤(3):分别称取100mg 2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖和100mg柠檬酸钠溶解在200mL去离子水中，制备成0.5mg/mL的2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖阳离子组装液(CS)和0.5mg/mL柠檬酸钠阴离子组装液(CA)，并调节至合适的pH。将50mL表面修饰PAA的磁性纳米粒子分散液逐滴加入50mL的2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖阳离子组装液中，超声剧烈搅拌20min，组装结束后纳米粒子经外磁场分离，用去离子水(与组装液pH一致)洗涤三次，重新分散在50mL去离子水中。然后将50mL上述分散液逐滴加入50mL的柠檬酸钠阴离子组装液中，继续超声剧烈搅拌20min，组装结束后经外磁场分离，用去离子水(与组装液pH一致)洗涤三次，重新分散在50mL去离子水中。重复上述过程5次，得到Fe3O4-PAA-(CS-CA)5磁性纳米粒子。
步骤(4):将5层膜的Fe3O4磁性纳米粒子浸泡在1mg/mL的AgNO3溶液中24h，然后经外磁场分离，用去离子水洗涤三次，重新分散在100mL去离子水中。将分散液加入到250mL三口烧瓶中，氮气保护下，将溶液煮沸30min，反应液冷却至室温，磁性纳米颗粒经外磁场分离，用去离子水洗涤三次，冷冻干燥24h。
得到的产品通过红外、热重、Zeta电位、XRD、TEM、VSM进行表征并与制备过程中不同阶段的纳米粒子进行对比，如图1、图2、图3、图4、图5、图6。
(1)红外谱图分析
图1a是Fe3O4-PAA纳米粒子的红外谱图，从图中可以看出1704cm-1处是PAA的二缔合体C＝O的伸缩振动峰，2919cm-1处的宽峰是羧酸二缔合体中-OH的伸缩振动峰，以上红外峰说明PAA已成功修饰在四氧化三铁表面。
图1b是Fe3O4-PAA-(CS-CA)5纳米粒子的红外谱图，1702cm-1处是PAA的二缔合体C＝O的伸缩振动峰，1627cm-1是羧酸盐中-COO-的反对称伸缩振动峰，1309cm1和1250cm-1分别对应于壳聚糖上-NH2的剪切振动，但峰形较弱，1066cm-1对应于壳聚糖骨架链上C-O-C的伸缩振动峰，1403cm-1是壳聚糖上的C-N伸缩振动峰，3191cm-1处的宽峰是N-H的伸缩振动峰，N-H的存在说明壳聚糖季铵化不完全，以上红外峰说明柠檬酸钠和壳聚糖已成功组装到Fe3O4纳米粒子上。
(2)热重分析
如图2b所示，其热失重率约为32％，即Fe3O4纳米颗粒表面多层膜的含量约为32％，这进一步说明多层膜组装成功。图2a是Fe3O4-PAA-(CS-CA)5-Ag的热失重曲线，其热失重率由32％降低至27％，这是因为在测试温度范围内银纳米颗粒几乎没有质量损失，损失的只是多层膜的质量。由于柠檬酸钠中的羟基被用于还原银离子，导致多层膜间的氢键作用减弱，所以前期失重较多。经计算，Fe3O4-PAA-(CS-CA)5-Ag纳米颗粒中多层膜质量含量约占27％，纳米银质量含量约占15％，Fe3O4质量含量约占58％。
(3)Zeta电位图分析
以Fe3O4-PAA为起始0层，测试了每组装单层后的纳米粒子的zeta电位值。从图3可以看出，每层的zeta电位值基本都在-10～20mV之间，这是因为我们在粒径50nm以下的Fe3O4磁性纳米颗粒表面进行组装，Fe3O4磁性纳米颗粒具有比表面积大，表面能高等特点，颗粒之间容易相互作用。这就需要我们在组装过程中控制Fe3O4磁性纳米颗粒表面的电荷强度，避免颗粒之间相互作用而引发颗粒聚集，从而导致组装的失败。由于-10～20mV之间的颗粒分散体系不是一个稳定的体系，所以组装前期需要在超声中进行，以确保颗粒的分散。
(4)XRD谱图分析
从图4可以看出，Fe3O4-PAA-(CS-CA)5(图4a)和Fe3O4-PAA-(CS-CA)5-Ag(图4b)的XRD谱图中都保留了Fe3O4的6个特征峰，只是强度依次有所减弱，已用圆形标记标出；而且两图中出现的13°-33°的宽峰都是由组装有机物层产生的。图4b中2θ＝38.22°，44.22°，64.58°，77.57°的衍射峰分别对应于纯银的(111)，(200)，(220)，(311)晶面，这说明Ag纳米粒子成功装载到了Fe3O4-PAA-(CS-CA)5上。由于多层膜中的柠檬酸钠具有还原性，所以未加入其它还原剂，直接原位还原Ag+即可得到纳米银颗粒。
(5)TEM图分析
图5a是Fe3O4-PAA-(CS-CA)5的透射电镜图，从图中可以看出纳米粒子呈不规则球形，粒径约为20-30nm，因为粒子表面最外层是壳聚糖，亲水性比较差，所以颗粒聚集比较严重。
图5b是Fe3O4-PAA-(CS-CA)5-Ag的透射电镜图，从图中可以看出，纳米银颗粒的粒径在30-50nm之间，分散较均匀。因为柠檬酸钠是一种弱还原剂，在还原前期生成的银核较少，所以后期生长的纳米银颗粒比较大，并在纳米银颗粒周围聚集了大量的Fe3O4-PAA-(CS-CA)5纳米粒子。
(6)VSM磁滞回线图分析
图6是样品的室温磁滞回线图，所有样品都显现出铁磁性。Fe3O4(图6a)、Fe3O4-PAA-(CS-CA)5(图6b)和Fe3O4-PAA-(CS-CA)5-Ag(图6c)的饱和磁化强度分别是72.1、48.2和30.8emu/g，抗菌纳米粒子饱和磁化强度急剧减少的原因可归结为磁性纳米颗粒表面的多层膜和银纳米颗粒具有一定的抗磁性，且复合物中铁磁性物质的质量分数减小，这与纳米颗粒的Ag损失量基本相符。
抗菌性能试验：
为研究该磁性抗菌复合纳米粒子对革兰氏阴性细菌—大肠杆菌(E.coli)以及革兰氏阳性细菌—金黄色葡萄球菌(S.aureus)抗菌性能及循环抗菌能力，本发明分别进行了抑菌圈、抗菌动力学和循环抗菌实验。具体步骤如下：
实验前准备
(1)LB液体培养基配制
分别称取5g酵母提取物、10g胰蛋白胨、10g氯化钠加入到1000mL烧杯中，再加入950mL去离子水超声搅拌10min使其完全溶解。然后用5mol/L的NaOH溶液将其pH调节至7.4，转移溶液至1L容量瓶中，放入高压灭菌锅中进行灭菌，121℃高压蒸汽灭菌30min。
(2)LB固体培养基配制
分别称取5g酵母提取物、10g胰蛋白胨、10g氯化钠、15g琼脂加入到1000mL烧杯中，再加入950mL去离子水并加热其完全溶解。然后用5mol/L的NaOH溶液将其pH调节至7.4，转移溶液至1L容量瓶中，放入高压灭菌锅中进行灭菌，121℃高压蒸汽灭菌30min。
(3)PBS缓冲液的配制
分别称取0.27g磷酸二氢钾、1.42g磷酸氢二钠、8g氯化钠、0.2g氯化钾加入到1000mL烧杯中，再加入800mL离子水超声搅拌10min使其充分溶解，然后滴加浓盐酸调节溶液pH至7.4，转移溶液至1L容量瓶中，放入高压灭菌锅中进行灭菌，121℃高压蒸汽灭菌30min。
(4)平板培养基的制备
将LB固体培养基加热融化成液态，向每个无菌培养皿中快速加入约10mL左右LB培养基，水平放置在无菌工作台上，室温下冷却固化，制成固态LB平板培养基。
(5)细菌悬浮液的制备
将接种环放在酒精灯火焰上烧灼，对其进行灭菌处理，用接种环从已培养了细菌的平板上挑取单菌落，加入有100mL LB液体培养基的锥形瓶中，在37℃，160rpm条件的摇床中培养24h。
实验操作
(1)抑菌圈测试
将裁剪成直径为10mm的定性滤纸圆片经高压蒸汽灭菌后，将其浸泡在1mg/mL抗菌磁性纳米粒子的分散液中1h，取出烘干。在有LB固体培养基的培养皿中加入100μL菌液(106-107CFU/mL)，用灭菌后的玻璃涂布器涂布培养皿，使菌液分散均匀；用无菌镊子将待测试的圆片贴在已涂布菌液的培养基上，然后将培养皿倒置在细菌培养箱中，37℃恒温下培养24h，取出进行观察。将固定有未改性Fe3O4磁性纳米粒子的滤纸片作为空白对照组，进行上述同样操作处理。如图7所示，Fe3O4-PAA-(CS-CA)5-Ag磁性纳米粒子的抑菌效果最明显，对S.aureus和E.coli的抑菌圈半径分别为3.5mm和4.8mm。
(2)抗菌动力学测试
将1.0mg待测改性后的磁性/抗菌纳米颗粒样品加入至含1mL新鲜菌液(106-107CFU/mL)的无菌小试管中。加入样品的时间设为初始时间，初始时间记为0min，在设定的时间间隔后(每当时间为30min、60min、90min、120min、150min时)，每次从小试管中抽取100μL待测菌液于无菌小试管中，再加入900μL无菌水与待测菌液混合稀释，以此类推，十倍递增稀释菌液。选择合适的稀释菌液从中取出100μL，转移至LB固体培养基的平板培养皿中，用灭菌后的玻璃涂布器涂布培养皿，使菌液均匀分布，封盖并做好标记，然后将培养皿倒置在细菌培养箱中，37℃恒温下培养24h，取出进行菌落计数。
(3)循环抗菌测试
将Fe3O4-PAA-(CS-CA)5-Ag纳米颗粒(1.0mg)加至含1mL细菌悬液(106-107CFU/mL)的10mL的无菌小试管中，在37℃恒温条件下进行培养。150min后，在室温条件下将小试管放置在磁场环境中10分钟，磁力作用的存在使得纳米颗粒被吸引到管壁上。将上清液从管中倒出，取100μL的上清液进行适当稀释，转移至LB固体培养基的平板培养皿中，用灭菌后的玻璃涂布器涂布培养皿，使菌液均匀分布，封盖并做好标记，然后将培养皿倒置在细菌培养箱中，37℃恒温下培养24h，取出进行菌落计数。
将抗菌后的纳米颗粒进行回收，用去离子水冲洗三次，重复上述抗菌过程。以确定改性修饰的磁性纳米颗粒循环抗菌过程的抗菌活性。
抗菌结果分析：
如图8所示，在抗菌性能方面，Fe3O4-PAA-(CS-CA)5-Ag具有季铵盐和纳米银双重抗菌作用机理，和细菌接触60min的时间内，即可杀死99.74％以上的E.coli和99.04％以上的S.aureus，抗菌效果明显优于单一抗菌机理的Fe3O4-PAA-(CS-CA)5和AgNO3。如图9所示，循环抗菌实验表明Fe3O4-PAA-(CS-CA)5-Ag抗菌功能具有可重复性，且多次循环仍能表现出较好的抗菌效果，可望运用于医用生物材料领域。

Claims (8)

1.一种季铵盐-纳米银型磁性纳米抗菌复合粒子的制备方法，其包括以下几个步骤：
(1)Fe3O4磁性纳米粒子的制备；
(2)聚甲基丙烯酸修饰步骤(1)所制备的Fe3O4磁性纳米粒子，得到Fe3O4-PMAA磁性纳米粒子；
(3)分别以2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖为阳离子组装液和柠檬酸钠为阴离子组装液组装到步骤(2)所制备的Fe3O4-PMAA磁性纳米粒子表面，得到Fe3O4-PMAA-(CS-CA)n纳米粒子，其中，n的范围为1～8，且n为正整数；
(4)将纳米银颗粒镶嵌到步骤(3)所制备的Fe3O4-PMAA-(CS-CA)n纳米粒子表面，得到Fe3O4-PMAA-(CS-CA)n-Ag纳米粒子；
所述Fe3O4磁性纳米粒子的平均粒径20-30nm；
步骤(3)具体为，将步骤(2)所制备的Fe3O4-PMAA磁性纳米粒子分散在去离子水中，形成分散液，并逐滴加入2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖阳离子组装液中，超声剧烈搅拌，组装结束后纳米粒子经外磁场分离，水洗，重新分散在去离子水中；然后将上述分散液逐滴加入柠檬酸钠阴离子组装液中，继续超声剧烈搅拌，组装结束后经外磁场分离，水洗，重新分散在去离子水中，重复上述过程n次，去离子水洗涤，60℃真空干燥，得到Fe3O4-PMAA-(CS-CA)n纳米粒子；
所述组装在pH＝4-5条件下进行组装，洗涤用去离子水pH需用稀盐酸调成与组装液pH一致。
2.根据权利要求1所述的一种季铵盐-纳米银型磁性纳米抗菌复合粒子的制备方法，其特征在于：步骤(1)具体为，采用共沉淀法，将FeCl3·6H2O和FeCl2·4H2O加入去离子水中，N2保护下搅拌，室温下快速加入NH3·H2O，加热搅拌，所得Fe3O4磁性纳米粒子经外磁场分离，去离子水洗涤，真空干燥，其中FeCl3·6H2O和FeCl2·4H2O的摩尔配比为1～3:1。
3.根据权利要求2所述的一种季铵盐-纳米银型磁性纳米抗菌复合粒子的制备方法，其特征在于：所述加热温度为80℃，搅拌时间为1h。
4.根据权利要求1所述的一种季铵盐-纳米银型磁性纳米抗菌复合粒子的制备方法，其特征在于：步骤(2)具体为，将步骤(1)所制备的Fe3O4磁性纳米粒子超声分散在去离子水中，向分散液中滴加碳二亚胺和聚甲基丙烯酸，在冰浴下超声搅拌，磁性纳米粒子经外磁场分离，并用去离子水洗涤，分散在去离子水中，其中，碳二亚胺和聚甲基丙烯酸的摩尔配比为1:1～6。
5.根据权利要求1所述的一种季铵盐-纳米银型磁性纳米抗菌复合粒子的制备方法，其特征在于：所述的2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖阳离子组装液和柠檬酸钠阴离子组装液质量浓度比为1/1，所述的n＝5。
6.根据权利要求1所述的一种季铵盐-纳米银型磁性纳米抗菌复合粒子的制备方法，其特征在于：步骤(4)具体为，将步骤(3)所制备的Fe3O4-PMAA-(CS-CA)n分散在去离子水中，与AgNO3水溶液混合并煮沸，保持溶液沸腾0.5-1h，磁吸、洗涤、冷冻干燥。
7.根据权利要求1-6任一项所述制备方法得到的Fe3O4为载体的复合抗菌纳米粒子。
8.根据权利要求7所述的抗菌纳米粒子作为医用生物材料的应用。
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