CN109406685A - 一种分离卡非佐米和其异构体的高效液相色谱方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种分离卡非佐米和其异构体的高效液相色谱方法,色谱参数如下:色谱柱:Agilent ZORBAX Extend‑C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm);流动相A相:体积比为75:20:5的水‑乙腈‑四氢呋喃溶液,其中含有20mM(2S,4S)‑1‑Boc‑4‑氨基吡咯烷‑2‑甲酸甲酯;流动相B相:乙腈;梯度洗脱程序:0~8min,0%B;8~35min,0%~100%B;35~40min,100%~0%B;流速:1.0mL/min;柱温:35℃。本发明通过添加手性试剂(2S,4S)‑1‑Boc‑4‑氨基吡咯烷‑2‑甲酸甲酯使用常规的C18色谱柱即可有效分离卡非佐米、对映异构体、非对映异构体Ⅰ和非对映异构体Ⅱ,分离效果优异,分离检测成本低廉。
Description
技术领域
本发明属于分析检测领域,具体涉及一种分离卡非佐米和其异构体的高效液相色谱方法。
背景技术
卡非佐米(carfilzomib)是经静脉给药的第二代蛋白酶体抑制药,具有良好的抗肿瘤活性,用于治疗预先接受过至少2种药物治疗(包括第一代蛋白酶体抑制药和一种免疫调节药),并有证据显示在完成末次治疗后60d内疾病恶化的难治性多发性骨髓瘤,于2012年7月20日由FDA批准上市。
卡非佐米生产过程中可能会产生对映异构体、非对映异构体Ⅰ和非对映异构体Ⅱ杂质(化学结构参见文献:李海霞等,一种HPLC法同时测定卡非佐米中3种手性异构体含量,中国药师2016年第19卷第6期),根据杂质研究要求,需要对这些异构体杂质进行控制。
李海霞等提供了一种HPLC法同时测定卡非佐米中3种手性异构体(文献:李海霞等,一种HPLC法同时测定卡非佐米中3种手性异构体含量,中国药师2016年第19卷第6期),但是该方法必须依赖于昂贵且寿命短的手性色谱柱,分离检测成本较高。
发明内容
本发明的目的在于提供一种分离卡非佐米和其异构体的高效液相色谱方法。
实现本发明上述目的技术方案如下:
一种分离卡非佐米和其对映异构体、非对映异构体Ⅰ、非对映异构体Ⅱ的高效液相色谱方法,色谱参数如下:
色谱柱:AgilentZORBAX Extend-C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm);
流动相A相:体积比为75:20:5的水-乙腈-四氢呋喃溶液,其中含有20mM(2S,4S)-1-Boc-4-氨基吡咯烷-2-甲酸甲酯;
流动相B相:乙腈;
梯度洗脱程序:0~8min,0%B;8~35min,0%~100%B;35~40min,100%~0%B;
流速:1.0mL/min;
柱温:35℃。
优选地,检测波长为220nm。
优选地,进样量为10μL。
本发明的突出优点:
本发明通过添加手性试剂(2S,4S)-1-Boc-4-氨基吡咯烷-2-甲酸甲酯使用常规的C18色谱柱即可有效分离卡非佐米、对映异构体、非对映异构体Ⅰ和非对映异构体Ⅱ,分离效果优异,分离检测成本低廉。
附图说明
图1为流动相含有手性试剂(2S,4S)-1-Boc-4-氨基吡咯烷-2-甲酸甲酯的HPLC色谱图;
图2为流动相不含有手性试剂(2S,4S)-1-Boc-4-氨基吡咯烷-2-甲酸甲酯的HPLC色谱图。
具体实施方式
下面就结合实施例具体介绍本发明的实质性内容,由于篇幅原因,实验过程的描述无法做到非常详细,凡是实验中未详细描述的部分均为本领域技术人员熟知的常规操作。
一、实验材料
Shimadzu LC-20AT高效液相色谱仪(配备LC-20AT泵、SIL-20A自动进样器和SPD-M20A二极管阵列检测器,日本Shimadzu公司)。
Agilent ZORBAX Extend-C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm)为Agilent公司产品。
卡非佐米、对映异构体、非对映异构体Ⅰ和非对映异构体Ⅱ的标准品购买或自制,纯度不低于95%。手性试剂(2S,4S)-1-Boc-4-氨基吡咯烷-2-甲酸甲酯购买,纯度不低于95%。
乙腈、四氢呋喃均为色谱纯,水为杭州娃哈哈集团有限公司生产的纯净水。
二、实验方法和实验结果
1、溶液配制
流动相A相配制:体积比为75:20:5的水-乙腈-四氢呋喃溶液,其中含有20mM(2S,4S)-1-Boc-4-氨基吡咯烷-2-甲酸甲酯,具体配制方法为:将水、乙腈、四氢呋喃按体积比75:20:5混合,添加(2S,4S)-1-Boc-4-氨基吡咯烷-2-甲酸甲酯至20mM,溶解,抽滤、超声备用。
流动相B相配制:乙腈抽滤、超声备用。
卡非佐米对照溶液:将卡非佐米用流动相A相溶解,配制成浓度为0.1mg/mL的溶液,过0.45μm滤膜,4℃保存备用。
对映异构体对照溶液:将对映异构体用流动相A相溶解,配制成浓度为0.1mg/mL的溶液,过0.45μm滤膜,4℃保存备用。
非对映异构体Ⅰ对照溶液:将非对映异构体Ⅰ用流动相A相溶解,配制成浓度为0.1mg/mL的溶液,过0.45μm滤膜,4℃保存备用。
非对映异构体Ⅱ对照溶液:将非对映异构体Ⅱ用流动相A相溶解,配制成浓度为0.1mg/mL的溶液,过0.45μm滤膜,4℃保存备用。
混合对照品溶液:将卡非佐米、对映异构体、非对映异构体Ⅰ和非对映异构体Ⅱ用流动相A相溶解,配制成浓度分别为0.5mg/mL的混合溶液,过0.45μm滤膜,4℃保存备用。
2、色谱条件
色谱柱:Agilent ZORBAX Extend-C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm);
流动相A相:体积比为75:20:5的水-乙腈-四氢呋喃溶液,其中含有20mM(2S,4S)-1-Boc-4-氨基吡咯烷-2-甲酸甲酯;
流动相B相:乙腈;
梯度洗脱程序:0~8min,0%B;8~35min,0%~100%B;35~40min,100%~0%B;
流速:1.0mL/min;
检测波长:220nm;
柱温:35℃;
进样量:10μL。
3、进样检测及分离效果
分别精密量取卡非佐米对照溶液、对映异构体对照溶液、非对映异构体Ⅰ对照溶液、非对映异构体Ⅱ对照溶液、混合对照品溶液10μL注入液相色谱仪,记录色谱图,色谱图如图1所示,可见混合对照品溶液中卡非佐米、对映异构体、非对映异构体Ⅰ和非对映异构体Ⅱ可以达到基线分离,分离效果优异。如果A相中不添加(2S,4S)-1-Boc-4-氨基吡咯烷-2-甲酸甲酯,其他色谱条件不变,分离色谱图如图2所示,卡非佐米、对映异构体无法分离。
上述实施例是对本发明实质性内容的体现,用于更好地解释本发明,但本领域技术人员应当知晓,不应将本发明的保护范围局限于上述具体的实施例。
Claims (3)
1.一种分离卡非佐米和其对映异构体、非对映异构体Ⅰ、非对映异构体Ⅱ的高效液相色谱方法,其特征在于,色谱参数如下:
色谱柱:Agilent ZORBAX Extend-C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm);
流动相A相:体积比为75:20:5的水-乙腈-四氢呋喃溶液,其中含有20mM(2S,4S)-1-Boc-4-氨基吡咯烷-2-甲酸甲酯;
流动相B相:乙腈;
梯度洗脱程序:0~8min,0%B;8~35min,0%~100%B;35~40min,100%~0%B;
流速:1.0mL/min;
柱温:35℃。
2.根据权利要求1所述的高效液相色谱方法,其特征在于:检测波长为220nm。
3.根据权利要求1所述的高效液相色谱方法,其特征在于:进样量为10μL。
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