CN109402255B - 一种ahnak2基因在作为结直肠癌干细胞标记物中的应用及试剂盒 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种AHNAK2基因在作为结直肠癌干细胞标记物中的应用及试剂盒，所述试剂盒包括用于检测结直肠癌干细胞标记物的探针，其中探针由序列为SEQ ID No.1或SEQ ID No.2的核苷酸片段制备得到。本发明中肠癌干细胞特异性突变基因AHNAK2在Chr14:105410531和Chr14：105410533的异常与肠癌的发生密切相关，因此两个突变位点可以应用于结直肠癌干细胞标记物，用于辅助诊断结直肠癌，对于直肠癌的诊断具有非常重要的意义，而且本发明中尤其Chr14：105410533A>T突变对应的S3753P位点所在的新生抗原亲和力高，HLA‑I覆盖度高，且AHNAK2在细胞表面表达。
Description
技术领域
本发明属于医疗技术领域，具体涉及一种AHNAK2基因在作为结直肠癌干细胞标记物中的应用及试剂盒。
背景技术
结直肠癌是最常见的恶性肿瘤之一，全球每年新发病人约八百万，占所有恶性肿瘤的10％～15％，其发病率和死亡率居恶性肿瘤的第三位。
结直肠癌目前，主要采用外科手术和放射的综合治疗，含有5-Fu的联合化疗，以及与传统放化疗结合的免疫治疗等。但是总体治疗效果差，复发转移率高且肿瘤治疗副作用大、精准性差。其中结直肠癌的发生与饮食、环境、遗传等密切相关，是多因素协同作用的结果。结直肠癌的防治研究引起人们的高度重视，生物标志物的发现与检测，对预测结肠癌的发生、发展、治疗效果及顸后判断有一定的临床指导意义。
结直肠癌干细胞(colorectal cancer stem cells,CRCSCs)是癌组织中一小部分增殖缓慢、具有自我更新和多向分化能力的干细胞样肿瘤细胞；是肠癌发生、转移复发和治疗抵抗等恶性生物学行为的根源。探明CRCSCs的特异性突变基因，将其作为进一步的准确的分子标志物，有利于更好的识别和控制肠癌干细胞，有利于精准治疗，从而可以制定合理的治疗方案，采取有针对性的干预措施，提高生存率等方面都至关重要。
发明内容
为了解决上述问题，本发明提供了一种AHNAK2基因在作为结直肠癌干细胞标记物中的应用，用于辅助诊断结直肠癌。
本发明的技术方案为：一种AHNAK2基因在作为结直肠癌干细胞标记物中的应用。
本发明发现在结直肠癌患者的癌细胞表面蛋白AHNAK2基因两个突变位点(Chr14:105410531A>G和Chr14：105410533A>T)中至少一个的突变，而在普通肿瘤细胞中未发现AHANK2基因在相同位点处突变。而且本发明发现AHNAK2基因的这两个突变位点位于第7个外显子区域，对应氨基酸为V3752D和S3753P，属于第4个TamB和第5个TamB连接的中间区域。
由上述可知，本发明可以将上述AHNAK2基因可以应用于作为结直肠癌干细胞标记物，可以应用于辅助诊断结直肠癌。
本发明还提供了一种用于制备检测结直肠癌干细胞标记物的探针的核苷酸片段，所述核苷酸片段为SEQ ID No.1或SEQ ID No.2。
本发明中的探针用于检测AHNAK2(Chr14:105410531和Chr14:105410533)的位点。本发明可以选取AHNAK2基因“Chr14:105404389-105421146”和“Chr14:105404367-105421167”的序列通过设计网站设计得到探针，例如本发明可以于Agilent在线panel设计网站(https://earray.chem.agilent.com/suredesign/index.htm？sessiontimeout＝true)设计探针。AHNAK2基因“Chr14:105404389-105421146”和“Chr14:105404367-105421167”的序列设计得到的探针均可用于检测Chr14:105410531和Chr14:105410533的位点。
本发明还提供了一种用于检测结直肠癌干细胞标记物的基因芯片，包括上述的探针。
本发明还提供了上述的探针在制备用于检测结直肠癌干细胞的试剂盒中的应用。
本发明还提供了上述的基因芯片在制备用于检测结直肠癌干细胞的试剂盒中的应用。
本发明还提供了一种用于检测结直肠癌干细胞的试剂盒，包括上述的探针。
本发明还提供了一种用于检测结直肠癌干细胞的试剂盒，包括上述的基因芯片。
本发明还提供了AHNAK2蛋白在作为结直肠癌干细胞标记物中的应用。
与现有技术相比，本发明的有益效果体现在：
本发明中肠癌干细胞特异性突变基因AHNAK2在Chr14:105410531和Chr14：105410533的异常与肠癌的发生密切相关，因此两个突变位点可以应用于结直肠癌干细胞标记物，用于辅助诊断结直肠癌，对于及直肠癌的诊断具有非常重要的意义，而且本发明中尤其Chr14：105410533A>T突变对应的S3753P位点所在的新生抗原亲和力高，HLA-I覆盖度高，且AHNAK2在细胞表面表达。
附图说明
图1为本发明中AHNAK2基因在结直肠癌干细胞中特有的两个突变位点(Chr14:105410531A>G和Chr14：105410533A>T)。
图2为本发明中AHNAK2(Chr14：105410533A>T)突变位点所对应氨基酸S3753P位点的HLA-I覆盖度及预测的新生抗原序列。
具体实施方式
实施例1
1例结直肠癌干细胞全外显子组测序数据结合20例结直肠癌干细胞靶标测序数据分析发现AHNAK2基因两个癌干细胞特异性的体细胞突变。
具体来说研究的实验方法主要包括以下几个部分：本发明实施例中未作特殊说明的操作方法均按照仪器说明书进行操作。
1.样本和数据来源
结直肠癌样本均来自于杭州市肿瘤医院，按照伦理审查委员会规定的制度，每个病人在取样前均签署了知情同意书。病人均没有采取放疗或者化疗，手术是第一个治疗方案。
1例单细胞测序样本和数据来源：
a.样本获取：在病人知情同意的情况下，首先获取1个肠癌病人手术切除的部分癌组织并采集其外周血作正常对照。经病理切片确定组织类型无误后，利用IV型胶原酶将肠癌组织消化成单细胞悬液；分离外周血中的白膜层细胞并去除红细胞后同样制备成单细胞悬液。直接利用显微操作系统获取白膜层单细胞悬液中的单细胞并-80℃冻存。肠癌组织的单细胞悬液则利用BD Aira III流式平台进行分选。分别获取三组CRCSCs细胞群(EpCAM+CD133+CD44-,EpCAM+CD133-CD44+以及EpCAM+CD133+CD44+)以及一组普通肿瘤细胞群(EpCAM+CD133-CD44-)。然后再利用显微操作系统挑取各组单细胞并-80℃冻存。
b.单细胞基因组扩增：获取的单细胞样本利用MDA技术进行单细胞基因组扩增。
c.单细胞外显子组捕获：利用Agilent外显子组捕获芯片获取扩增后的单细胞外显子组。
d.二代测序：利用Illumina的Hiseq高通量测序仪进行测序，测序方案为PE150，200X。获得原始文件为faseq格式的文件。
e.生信分析：通过生信分析获取单细胞层面的突变特征、体细胞突变、肠癌干细胞特异性突变位点及突变基因，驱动基因、克隆进化等。
20例靶标测序样本和数据来源：
a.样本获取：在病人知情同意的情况下，获取20个肠癌病人手术切除的部分癌组织以及癌旁同时切除的部分正常组织(作对照)。经病理切片确定组织类型无误后，正常组织直接-80℃冻存备用。肠癌组织的消化及流式分选与上述“1中的a”的方法相同。最终共获取96个样本，然后-80℃冻存。
b.微量细胞基因组扩增：通过流式细胞术获取的微量细胞群(因为干细胞含量少)利用MDA技术进行基因组扩增。
c.靶标基因外显子捕获：利用Agilent在线panel设计网站(https://earray.chem.agilent.com/suredesign/index.htm？sessiontimeout＝true)设计单细胞测序所得的体细胞突变基因(258个基因)的panel探针；在Agilent公司合成相应panel基因的外显子芯片，利用此芯片获取扩增后基因组中的靶标基因外显子。其中，针对AHNAK2基因探针的序列为SEQ ID No.1或SEQ ID No.2(“Chr14:105404389-105421146”和“Chr14:105404367-105421167”的序列)，SEQ ID No.1或SEQ ID No.2的探针均可用于检测Chr14:105410531和Chr14:105410533的两个位点。
d.二代测序：利用Illumina的Hiseq高通量测序仪进行测序，测序方案为PE150，1000X。同样获取原始文件为faseq格式的文件。
e.生信分析：通过生信分析重点获取肠癌干细胞特异性突变位点及突变基因，并与单细胞层面所得的突变位点及突变基因比较，最终获取单细胞测序以及靶标测序共有的肠癌干细胞特异性突变位点：AHNAK2(Chr14:105410531A>G和Chr14：105410533A>T)。
2.实验材料
Collagenase IV(Sigma)
CD133/1(AC133)-PE(130-080-801)(Miltenyi)
BD Pharmingen APC mouse anti-human CD44(559942)(BD Biotech.)
BD Pharmingen BV421mouse anti-human CD326(557196)(BD Biotech.)
7-AAD (559925) (BD Biotech.)
BD FACSAria III sorter
QIAamp DNA mini kit(Qiagen)
Nanodrop 2000(Thermo)
Qubit 3.0(Life Technologies)
REPLI-g Single cell Kit(Qiagen)
REPLI-g UltraFast Mini Kit(Qiagen)
Bioanalyser(Agilent Technologies)
96rxn
Exome Research Panel v1.0(IDT)
KAPA Hyper Prep Kits(96Rxn)(KAPA Biosystem)
Covaris E-210(Covaris)
ABI 7300real time PCR system
Illumina Hiseq SBS Kit 300cycles(Illumina)
Hiseq 4000(Illuminia)
3.实验方法
(1)流式分选结直肠癌干细胞
获取的部分肠癌组织经病理切片确定组织类型无误后，利用IV型胶原酶将其消化成单细胞悬液；肠癌组织的单细胞悬液利用流式抗体CD133/1(AC133)-PE(130-080-801)(Miltenyi)，BD Pharmingen APC mouse anti-human CD44(559942)(BD Biotech.)、BDPharmingen BV421 mouse anti-human CD326(557196)(BD Biotech.)以及7-AAD(559925)(BD Biotech.)的染色。同时有部分细胞分出用于阴性对照，以及同型染色。然后利用BDAira III流式平台进行分选。分别获取三组CRCSCs细胞群(EpCAM+CD133+CD44-,EpCAM+CD133-CD44+以及EpCAM+CD133+CD44+)以及一组普通肿瘤细胞(EpCAM+CD133-CD44-)。然后再利用显微操作系统挑取各组单细胞并-80℃冻存。
(2)单细胞外显子组测序和群体样本靶标基因外显子组测序
单细胞外显子组测序：采用MDA法试剂盒(REPLI-g)Single cell kit扩增肿瘤组织以及癌旁组织(外周血)DNA，经质控后，质控合格的基因组采用外显子捕获试剂盒96rxn
Exome Research Panel v1.0完成外显子组序列的富集。采用Covaris E-210将DNA序列碎片化，全外显子约200-300bp，构建DNA文库。采用HiSeq4000平台，测序长度150，采用双端测序策略。
群体样本靶标基因外显子组测序：采用MDA法试剂盒(REPLI-g)Ultrafast minikit扩增肿瘤组织以及癌旁组织(外周血)DNA，经质控后，质控合格的基因组采用Agilent公司合成单细胞测序所得的体细胞突变基因(258个基因)的外显子芯片，利用此芯片获取扩增后基因组中的靶标基因外显子。采用Covaris E-210将DNA序列碎片化，全外显子约200-300bp，构建DNA文库。采用HiSeq4000平台，测序长度150，采用双端测序策略。
(a)数据质量评估采用FastQC软件，该软件可以统计测序片段的每个碱基测序质量分布，GC含量分布，以及测序接头残留和建库过程中的duplication等。
(b)序列比对和检测：使用Burrows-Wheeler Aligner(BWA)软件进行序列比对，参考基因组选择UCSC网站上下载的hg19版本。通过比对，将质控得到的fq格式文件转化成BAM格式文件，然后用Picard和GATK软件将原始的BAM文件进行排序，局部重比对和去除重复区域，经过这些处理之后得到最终的BAM文件，然后统计这个BAM文件的测序深度和覆盖度。使用GATK软件将肿瘤样本和成对的对照样本分析SNP和INDEL。然后用ANNOVAR软件将结果进行注释，注释的内容包括千人基因组数据库(1000Genomes Project)、dbSNP数据库、ExAC、SIFT、Ployphen等。
(c)体细胞检测：将所有GATK检测得到的VCF文件合并在一起。过滤掉正常对照样本的突变。过滤掉低质量和低比对率的位点。保留CDS区域的位点。SNV之间的最小距离设置为5bp如果有多个位点保留质量值最好的位点。
(d)单细胞分类：MuTect软件检测体细胞突变。Ape软件对组织检测结果和所有单细胞突变结果信息进行聚类。
(e)驱动基因预测和进化树分析：Music-SMG软件进行驱动基因预测分析。将分析得到的四种检测方法进行过滤(Fisher检验、卷积检验、Fisher结合P值检验、LRT检验)。
(f)新抗原预测与分析：Polysolver软件进行HLA分型。然后将分型结果进行比对。NetMHCpan如软件将比对后的结果，与转化的氨基酸变化进行预测新抗原是否发生变化，并打分。根据分数高低过滤符合条件的新抗原。
4.实验结论
通过单细胞外显子组测序结合靶标测序技术发现大约28.57％(6/21)的结直肠癌病人的干细胞携带细胞表面蛋白AHNAK2基因两个突变位点(Chr14:105410531 A>G和Chr14：105410533 A>T)中至少一个的突变，而在普通肿瘤细胞中未发现AHANK2在相同位点处无突变(图1)。发现AHNAK2的这两个位点位于第7个外显子区域，对应氨基酸为V3752D和S3753P；是属于第4个TamB和第5个TamB连接的中间区域，该两个突变位点为肠癌干细胞中首次发现。对以上两个位点进行新生抗原预测分析，结果发现尤其S3753P位点在以亲和力<500做cutoff时，有比较高的HLA-I覆盖度(具体见图2)。
由图2的结果可看出，肠癌干细胞特异性突变基因AHNAK2在Chr14:105410531和Chr14：105410533的异常与肠癌的发生密切相关，且其Chr14：105410533A>T突变对应的S3753P位点所在的新生抗原亲和力高，HLA-I覆盖度高(图2)，且AHNAK2在细胞表面表达。
序列表
<110> 吴式琇
<120> 一种AHNAK2基因在作为结直肠癌干细胞标记物中的应用及试剂盒
<160> 2
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 16758
<212> DNA
<213> 人工合成序列(unkown)
<400> 1
agccatacct ctcagccttc atttggtccc aggcctgacc ctttgctttc atcgtcagct 60
tttctgtcct gctcgggcag gattaactct gttcttgccg cggatgtcac catcactctg 120
gagtccagcc cagtgcccac aggcccgatc agttcaccct cttccttctc ttcaggggag 180
aaactttctc gggcatcaaa aaacgtgatt gtttcttctt gaagtttttg ttcttccagc 240
tctgccccat cttcggtgct tttgcttttc ttggtaggag atgaggagaa ccctaatttg 300
ggaaatcgga accagcctgc cttctcctgt tttttaggca gttctgcctc tggtcgtgcc 360
tcaggctgtg tttgaatggg agcagatctc tggacgtcat ttttggaatc aacacctgtc 420
tcatcaacag aagaggaaaa cccaatgttt ggaagccaaa accagagcag accagatttt 480
ttactttctg gtttgtcttt tggagccctg ccttcatctg ccagtggtgt ggttgcctct 540
tggctatcat cagggggaaa ctcaagaatt tctgctggct cctcatctga acagctgtct 600
gcaagctggt ggccagaagg aacttcaaat gtgagtgttt gctgtcccag tacattgacg 660
ctggaagaga tcatctcaaa tggttctcca gtgtcaggct ggagatctcc agaaatggag 720
tctactcctg gggtggcttg tatgggagcc tcttctgtgc cctcctgagt cctagagtgt 780
tgagtcattg ttgtgtacac tctagcctgc gtgtggggct ctgggatttt cacttttaat 840
aaggaaaatc cgtacgaagg tgtttgaatc tctgacgtgg ggatctctga ttcccgcaca 900
atctgagtgg aaaaagtcct gggtactgag agatctacaa actctggtgt cactatgctg 960
tgtatagtga cctcttgact ttcaacctga gcaccctgaa tatgcactct gacctttgaa 1020
attgggggag cttccaaagg caggttaagg tccacaggct gctccccagg gaccccagca 1080
cctgccttca ggatgctggc tccccagagc cccggacttt ccttacaaag ggctgtatca 1140
atattggcct ctggacactg cacttccctc acagtgggga tgaacacatc atcctctgag 1200
ctgggggcag ggaaggagaa ccttggtacc attaatttgg ggaatttgac agttaggaca 1260
gaatcttccc acagttgatc cacattaacc acagaaatct gggatggcat atcagtactt 1320
gaagctttca atttaagtgg accttcaggc tgggaagacc atttctctgt tttatcctcc 1380
atgctggcaa ggtcatgtcc tggcttggaa agaggagtct catctatttc tcctggaaga 1440
acctgggttt ctggaagcct catgccaggc atctgaaaag ggagaggtcc tttggatgga 1500
tggatcctga cctcagaagt ggaaagctca tccccagtca tcccagcagt ggagaggtgc 1560
agcttcaagc ctgtgctgtc aagatcacac cttagaatat ctgtggatga tttgctctca 1620
gaagctgtca cttctgcatc tgcctctggg agctgtaggg acatagctgc ctccacgttt 1680
gacccagaaa caaggaactc tttgacttta gctgctgctt caccccctgt tgctgccggt 1740
gcctgtgtct gagccacttc cagctttcca gccccgcctc tgtccctgaa agagcgccta 1800
aggctgggca tgcggaactt gggcatttta aaccagcttt cctgcgagta cttggtcatg 1860
gcttcctcct ctgggctttc cactgtgagg acttcagcat ctggttttct acaggatggc 1920
tggaggggat cttcaggtgt gggggctatc ccctccccac aaggctggct cactgggaca 1980
tccccgagcc cacatcctct gctgtcacct tcggtagaca gatcatgttt gggaagaggc 2040
aggtcagctt caggctggct cacctccacc ttggccttgg aggatctgag atcaggtttg 2100
gcaaagccca aactgggaat gtggacctgt ggccggtgga ggttcacacc ctcacttcct 2160
gtggcacttg ctgttgcacc aagtcctccc ctaccaccgt cactgctggc cttttctgtg 2220
tcttgaaagc taccccctgc tgtggcacta gaaagggaag gatccacgtc tctctgtggc 2280
aggctgaccc cactcttaga agccttcatt ttgggaagtg caagttttgg catggcaaag 2340
ccaggctttg tgctcctccc cttctctcca tccctctcag gaggcagatc catgtggatg 2400
gcagactgcg gggccacttc atccttgtct aaaaccaggc tgagttttga gtcctccacg 2460
ctgcattctg ggtccacctt tggccctgtt tccttcttcg gggaccacct aaatgatgga 2520
agcttaatct taggcatttt caagggactc cctttccctt cgtggtcagc atcttcagaa 2580
ggggcttctc caggggccac tactgatgtc tgcaaggagg ccacaagctc ttctgggccc 2640
tgagacacac aggtgcctgg ggatggcagc tgggtgcttg gcaaggggca ctgcactctt 2700
tctccagggc taagaggaga catgactggg gcacccactg ctgcatgtag gtctccctca 2760
ggaactgcca tttgggggac tgaaaacaca aactttggtt tatagaattt aggaaaagat 2820
acctgaccaa gagaaacagg aatcatggaa ttcagtgggc cagagtgact ctcagcttga 2880
gatgttggaa ctccctctgg aggctgcagg tcagtggagc actctgtctt gggaagagga 2940
atatcagcct gagacccaga aggaatttcc agagcaagct caggggccaa ggcagctctg 3000
ggaacagtca cctggtattt tgtaagtgta acatcctcac agggagagag aatagaagat 3060
tcaaagtgag gaccagtgag atcaagccgg gatgatggaa acccagcaaa acccacctta 3120
ggcatctgca tggatggctc tgaacaagcc gaaacctgtt gtaattcaaa acttgagcat 3180
tctgaagatg ataaaggaat cgtggaaaga cctatgctag actttgcacc tgggactaaa 3240
ctatctttag gagttttggt agaagaaaat gaaactttgg gcactttaaa atgcagtttc 3300
ttaaacttcg aatccattcc aacttctcca acagcaagcc ccaagttacc atcgcgagat 3360
ggatcatgaa gatcaccttc atgaacaaca gattccacaa tgggaaatgt ggaagtcttc 3420
tcatggaatg taacatttcc ttcgatttca gaggaagaca tggaaacttt ctttgacgac 3480
cattcaaaac cagacgtgct cagttttggt ccttgaaact tactgtcttt cccagctaca 3540
tcctcgtggg ccagggacag gtccccctca agccgcgcac catccagcat ggatcctggg 3600
gcctggacat ccgtctccac gctgggcaga gacacctcca catcgggggc catcacctct 3660
gcctttgggc ctttcaggtc cagcttgggg cccttgacgt ccacctgggg gcccttgagg 3720
tccactttgg gcatcttgaa actgggcatc tccaccttgg gcaggtgccc tttgaggccg 3780
gctacctcgg gcatgtggcc ttctggaagt ttcaagtcca cctggccagc ctggacctcc 3840
aggtcggcgg aaggggcctg aatgcggagg tcagtggtct tgaggtcccc ctgcatggag 3900
ggaatgctca tgtcggcctc catctttggc gcagacacat ccaccgagac ctcgatggac 3960
ttgcctgggg acaacatccc aaaggatggc atcttgaact tgggcatttt gaacttgctg 4020
tctttggcag tcacgtcctt gtcagccagg gacaggtccc cctccagccg cgtactgtcc 4080
agcttggctc ctggggcttg gatgtccacc tccatgctgg gcagagacac gtccaggttg 4140
ggggacgtca cctccacctt ggggcctttc aggtccagct tggggacatt aacgtctatc 4200
tggggaccct tgaggtccac tttgggtacc ttgaaactgg gcatctgcag cttcggcagg 4260
tgccctttga ggccggctcc ctcatgcaca gggccctctg ggagtttcac atcctcttgg 4320
ccagcctgga cctccagatc agcggaaggg ggctgaatgc tgaggtgagt ggtcttcagg 4380
tccccctgca tggaggggag gctcacgtca gcctccacct tcagcgcaga cacatccaac 4440
gaggcctcga tggacttgcc tggggcagac accccgaacg acggcatctt gaacttgggc 4500
attttgaact tgctgtcttt ggcagtcatg tccttgtcgg ctagggacag gtcaccctcc 4560
agccgcacac tgtccagctt ggctcccggg gcctcgacgt ccacctccat gctgggcaga 4620
gacacctcca cgacgggggt catcacatcc gccttggggc ctttcaggtc cagcttgggg 4680
cccttgacat ccacctgggg gcccttgagg gccactttgg gcatcttcaa acagggcatc 4740
tgcaccttgg ggaggtgccc tttgaggccg gctcccttgg gcagggggcc ctccgggagt 4800
ttcacgtcca cttggccagc ctggacctcc aggtcggcgg aaggggactg aatgctgagg 4860
tcagtggtct tgaggtcccc ctgcatggag gggaggctca cgtcggcttt cgccttcagc 4920
tcagacacat ccacggacgc ctccatggac ttgcctgggg ccgacacccc gaatgatggc 4980
atcttgaact tgggcatttt gaacttgctg tctttggcag tcacatcctt gtcggccagg 5040
gacaggtccc cctccagctg cacaccatcc agctttgctc tcggggcctg gacgtccacc 5100
tccatgctgg acagagacat cttcacatca ggggctgtca cttccgcctt ggggcctttc 5160
aggtccagct tggggccctt aacatctatc tgggggccct tgaggtccac tttgggcatc 5220
ttgaaactgg gcatctgcac cttgggcagg tgccctttga ggctggctcc ctcgggcacg 5280
gggccctctg ggagtttcac gtccacttgg ccagcctgga cctccaggtc agcggaaggg 5340
ggctgaacgc tgaggtcagt ggccttgagg tccccctgca tggaagggag gctcacgtcg 5400
gcctccacct ttggcgcggt cacatccact gatgcctcca tggacttgcc tggggcagac 5460
accccgaacg acggcatctt gaacttgggc attttgaact tgctgtcttt ggccgtcatg 5520
tccttgtcgg ccagggacag gtccccctcc agccgcgcac catccagctt ggctcctggg 5580
gcctcgacgt ccacctccac gctgggcaga gaaacctcca catcaggggc tgtcacttcc 5640
accttggggt cttttaggtc cagcttgggg cccttgatgt ctatttcagg gcccttgagg 5700
tcgactttgg gcatcttgaa actgggcatc tgcaccttgg gcaggtgtcc tttgaggccg 5760
gcttcctcgg gcacgtggcc ctccaggagt ttcatgtcca cctggcgagc ttggaccgtc 5820
aggtcggcag aatggggctg aatgctgagg tcagtggtct tgaggtcccc ctgcatggag 5880
gggagactca catcggcctc caccttgggt gcagacacgt gcaccgaggc ctcaatggac 5940
ttgcctgggg cagacacccc aaatgacggc atcttgaact tgggcatttt gaatttgctg 6000
tctttggcag tcacatcctt gtcggccagg gacaggtccc cctccagctg tgcactatcc 6060
agtttggctc ttggggcctg gacgtccacc tccacgctgg gcagagacac ctccacatca 6120
ggggctgtga cttccgcctt ggagactttt aggtccagct tggggccctt gatgtccacc 6180
tgggggccct tgaggtccac tttgggcatc ttcaaactgg gcatctccac cttgggcagg 6240
tgctctttga ggccggctcc ctcgggcacc tggccctccg ggagcttcac atccatctgg 6300
ccagcctgga ccttcaggtc ggcagaaggg ggctgaatgc tgaggtcagt ggtcttcagg 6360
tccccctgca tggaggggag actcacatcg gcttccacct tgggtgcaga cacatccacc 6420
gaggcctcca tggacttccc tggggccgat accctgaatg acggcatctt gaatttgggc 6480
attttgaact tgctgtcttt ggcagtcacg tccttgtcag ccagggacag gtctccctcc 6540
agccgcccag catccagctt ggccttcggg gcctggacat ccacctccac gctgggcaga 6600
gacacctcga catcggggac tctcacttct gccttggggc ctttcaggtc cagcttgggg 6660
cccttaacat ctatctgggg gcccttgagg tccactttgg gcgtctttaa actgggcatc 6720
tccactttgg gcaggtgccc tttgaggccg gctccctcgg gcacggggcc ctccaggagt 6780
tccacatcca cttggacagc ctggacctcc aggtcagcgg aagggggctg aatgctgagg 6840
tcagtggcct tgaggtcccc ctgcatggag gagaggctca cgtcggcctc caccttcggc 6900
gcagacacat ccagcgaggc ctcgatggac ctgcctgggg ccgacacccc gaaggagggc 6960
atcttgaact tgggcatttt gaacttgctg tctttggcag tcacatcctt ttcagccagg 7020
gacaggtccc cctccagccg cgcaccatcc agcttggctc tcggggcctg gacgtccacc 7080
tccacgctgg gcagagacac ctccacatca gggactgtca cttccgcctt ggggactttt 7140
aggtccagct tggggccctt gatgtccacc tgggggctct tgaggtccac tttgggcatc 7200
ttgaaactgg gcatctccac cttgggcagg tgccctttga ggccagctcc ctcgggcacg 7260
tggccctccg ggagcttcac gtccacctgg ccagcctgga cctccaggtc cacagaaggg 7320
agctgaatgc tgaggtcagt ggtcttgagg tccccctgca tggaggggag gctcacgtcg 7380
gcctccgcct tcggcgcaga cacatccacc gaggcctgga tggacttgcc tggggcagac 7440
gccctgtacg acggcatctt gaatttgggc attttgaact tgctgtcttt ggcagtcaca 7500
tccttgtcgg ccagggacag gtccccctcc agccgtgcac catccaactt ggctcctggg 7560
gcctcgacgt ccacctccat gctgggctga gacacctcca cgtcgggggc cgtcacatcc 7620
atcttcgggc ctttcaggtc cagcttgggg cccttgatgt ctatctgggg gcccttgcga 7680
tctactttgg gcatcttgaa actgggcatc tgcaacttgg gcaggtgccc tttgaggcca 7740
gctccctcga gaacgtggcc ctctgggagc ttcacgtcca cctggccagc ctggacctcc 7800
agttgggcag aggggggctc aatgctgatg tcagtgttct tcaggtcccc ctgcatggag 7860
gggaggctca ggtcggcctc cacctttggc gcagacacat ccaccaagac ctcaatggac 7920
ttgcctgggg cagacacccc gaacgacggc atcttgaact tgggcatttt gaacttgctg 7980
tctttggcag tcacatcctt gtcggccagg gacaggtccc cctccagccg tgcaccatcc 8040
aacttggctc ctggggcctc gacatccacc tccatgccgg gctgagacac ctccacgtcg 8100
ggggccgtca cgtccgtctt cgggcctttc aggtccagct tggggccctt gacatctatc 8160
tggggtccct tgcgatctac tttgggcatc ttgaaactgg gcatctgcaa cttgggcagg 8220
tgccctttga ggccagctcc ctcgggaacg tggccctctg ggagcttcag gtccacctgg 8280
ccagcctgga cctccagttg ggcagagggg ggctcaatgc tgatgtcagt ggtcttcagg 8340
tccccctgca tggaggggag gctcacttcg gcctccacct tcggcgcaga cacatccacc 8400
gagacctcaa tggacttgcc tggggcagac accccgaacg acggcatctt gaacttgggc 8460
attttgaact tgctgtcttt ggcagtcaca tccttgtcgg ccagggacag gtcaccctcc 8520
agccgtgcac catccagctt tgctctcggg gcctcgacgt ccacctccac gctgggcaga 8580
gacacctcca cgtcgggggc cgtcacctcc gccttggggc ctttcaggtc cagcttgggg 8640
cccttgacgt ctatctgggg gcccttgaga tccactttgg gcatcttgaa actgggcatc 8700
tgcaccttgg gcaggtgccc tttgaggccg gctccctcgg gaacgtggcc ctctgggagt 8760
ttcacgtcca cctggccagc ctggacctcc agttgggcgg aggggggctg aatgcggatg 8820
tcagtggtct taagatcccc ttgcatggag gggaagctcc cgtcagcttc caccttcagc 8880
tcagacacat ccaccgaggc ctcgatggac ttgcctgggg ccgacacccc gaatgacggc 8940
atcttgaact tgggcatttt gaacttgctg tctttggctg tcatgccctt gtcggccagg 9000
gacaggtccc cctccagccg cgcaccatcc agctttgctc tcggggcctg gacgtccacc 9060
tccatgctgg acagagacat cttcacatcg ggggctgtca cttccgcctt ggggcctttc 9120
aggtccacgt tggggccctt aacatctatc tgggggccct tgaggtccac ttcaggcatc 9180
ttgaaactgg gcatctgcag cttgggcagg tgccctttga ggccggctcc ctcgggaacg 9240
tggccctctg ggagtttcac atccacctgg ccagcctgga cctccagttg ggcagagggg 9300
ggctgaatgc tgatgtcagt ggtcttaagg tccccttgca tggaggggag gctcatgtcg 9360
gcttccacct tcagctcaga cacatccacc aacgcctcga tggactcgcc tggggccgac 9420
accctgaatg atggcatctt gaacttgggc attttgaact tgctatcttt ggctgtcaca 9480
cccttgtcgg ccagggacag gtccccctcc agccgcgcac catccagctt tgctctcggg 9540
gcctggacgt ccacctccat gctggacaga gacatctcca catcgggggc tgtcacttcc 9600
gccttggggc ctttcaggtc cagcttgggg cccttgacat ctagctgggg gcccttgagg 9660
tccatttcag gcatcttgaa actgggcatc tgcaccttgg gcaggtgccc tttgaggccg 9720
gctccctccg gcacagggcc ctctgggagt ttcacgtcca cttggccagc ctggacctcc 9780
aggtcagcgg aagggggctg aatgctgagg tcagtggcct tgaggtcccc ctgcatggag 9840
gagaggctcc cgtcggcctc caccttcggc gcagacacat ccaccgaggc ctcgatggac 9900
ttgcctgggg cagacacccc gaatgacggc atcttgaact tgggaatttt gaacctgctg 9960
tctttggtag tcacatcctt gtccgccaca gacaggtccc cctccagcca cgcaccatcc 10020
agcttggctc ccggggcctc gacatccacc tccacgctgg gctgagacac ctccacgtcg 10080
ggggccatca cgtccgtctt ggggcctttc aggtccagct tggggccctt gacatctatc 10140
tgggggccct tgagatctac tttgggcatc ttgaaactgg gcatctgcag cttgggcagg 10200
tgccctttga ggccggctcc ctccggcacg gggccctctg ggagtttcac atccacttgg 10260
ccagcctgga cctccaggtc agcggaaggg ggctgaacgc tgaggtcagt ggtcttgagg 10320
tccccctgca tggaggggag gctcacgtcg gcctccacct tcaacgcaga cacatccgct 10380
gaggcctcga tggacttgcc aagggcagac accccaaacg acagcatctt gaacttgggc 10440
attttgaact tgctgtcttt ggcagtcacg tccttgtcgg ccagggacat gtccccctcc 10500
agccgcgcac catccagctt ggctcctggg gccttgacgt ccacctccac gctgggcaga 10560
gacacctcca catcaggggc tgtcacttcc accttggggt cttttaggtc cagcttgggg 10620
cccttgatgt ctatttcggg gcccttgagg tccactttgg gcaccttgaa actgggcatc 10680
tgcagcttgg gcaggtgccc tttgaggccg acttcctcgg gcacagggcc ctccaggagt 10740
ttcacgtcca cctggccagc ctggaccttc acgtcggcgg aaaggggctg aatgctgagg 10800
tcagtggtct tgaggtcccc ctgcatggag gggagactca tgtcggcctc caccttgggt 10860
ggagacacat ccaccgaggc ctcgatggac ttgcctgggg cagacacccc aaacgacggc 10920
atcttgaact tgggcatttt gaacttgctg tctttggtag tcaggtcctt gttggccagg 10980
gtcaggtccc cctgcagatg cgcactatcc agcttggctc ttggggcctg gacgtccacc 11040
tccatgctgg gcagagacac ctcgacatcg gggactctca tttccacctt ggggtctttt 11100
aggtccagtt tggggccctt gatgtccacc tgggggccct tgaggtccac tttgggcatc 11160
ttcaaactgg gcatctccac cttgggcagg tgccctttga ggccagctcc ctcgggcacg 11220
tggccctccg ggagcttcac atccacctgg ccagtctgga ccttcaggtc ggcagaaggg 11280
ggctgaatgc tgaggtcagt ggtcttcagg tccccctgca tggaggggag actcacgtcg 11340
gcctccacct tgggtgcagg cacatccacc gaggcctcga tggacctccc tggggccgat 11400
accccgaacg acggcatctt gaatttgggc attttgaact tgctgtcttt ggcagtcatg 11460
tccttgtcgg ccagggacag gtctccctcc agccgcgcac catccagctt agccttctgg 11520
gcctggacat ccacctccat gctgggcaga gacacctcga catcgggggc tgtcacttcc 11580
gccttggggc ctttcaggtc cagcttggcg cccttaacat ctgtctgggg gcccttgagg 11640
tccactttgg gcatcttgaa actgggcata tccaccttgg gcaagtgccc tttgaggccg 11700
gctccctcgg gcacctggcc ctccgggagc ttcatgtcca cttggccagc ctggaccacc 11760
aggtctgcag aagggagcgg aatgcagagg tccgtggtct tgaggtcccc ctgcatggag 11820
gggaggctca cttcggcctc caccttcggc gcagacacat ccaccgaggc ctcgatggac 11880
ttgcctgggg cagacacccc gaacgacggc atcttgaact tgggcatttt gaacttgctg 11940
tctttggcag tcacatcctt gtcggccagg gacaggtcac cctccagccg cacactgtcc 12000
agcttggctc ctggagcctc gacgtccacc tccacgctgg gcagagacac ctccacgtcg 12060
ggggccatca cctccgcctt ggggcctttc aggtccagct tggggccctt gacgtccatc 12120
tgggggccct tgagggccac tttgggcatc ttcaaactgg gcatctgcac cttggggagg 12180
tgccctttga agccggctcc ctcgggaagg gggccctccg ggagtttcac gttcacttgg 12240
ccagcctgga cctccaggtc ggcggaaggg gactgaatgc tgaggtcagt ggtcttcagg 12300
tccccctgca tggaggggag gctcacatca gcttccacct tcggctcaga cacatccacc 12360
gaggcctcga tggacttgcc tggggccgac accccaaatg atggcatctt gaacttgggc 12420
attttgaact tgctgtcttt ggcagtcacc gccttgtcgg ccagggacag gtccccctcc 12480
agctgcgcac catccagctt tgctctcggg gcctggacgt ccacctccat gctggacaga 12540
gacatcttca catcgggggc tgtcacttcc accttggggc ctttcaggtc cagcttgggg 12600
cccttaacat ctatctgggg ccccttgagg tccactttgg gcatcttgaa actgggcatc 12660
tgcactttgg gcaggtgccc tttgaggccg gctccctcgg acacagggcc ctctgggagt 12720
ttcacgtcca cttggccagc ctggacctcc aggtcagcag aagggggctg tatgctcagg 12780
tcagtggcct tgaggtcccc ctgcatggag gggaggctca cgtcggcctc caccttcggc 12840
gcagacacat ccactgaggc ctcgatggac ttgcctgggg cagacacccc gaacgacggc 12900
atcttgaact tgggcatttt gaacttgctg tctttggtag tcaagtcctt gtcggccagg 12960
gacatgtcct cctccagccg tccaccatcc agcttggctc ctggggcctc gacatccacc 13020
tccacgctgg gcagagaaac ctccacatca ggggctgtca cttccacctt ggggtctttt 13080
aggtccagct tggggccctt gatgtctatt tcagggccct tgaggtccac tttgggcacc 13140
ttgaaactgg gcatctgcag cttgggcagg tgccctttga ggccggctcc ctcgggcacg 13200
gggccctctg ggagtttcac gtccaattgg ccagcctgga gctccaggtc agtggaaggg 13260
ggctgaatgc tgaggtcagt ggtcttgagg tccccctgca tggaggggag gctcatgtcg 13320
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tccttgtcag ccagggacag gtccccgtcc agctgtgcgc catccaactt ggctcccggg 13500
gcctgcatgt ccacctccac actgggcaga gacacagcca cttcgtgggc cgtcacctct 13560
gccttatgac ctttcaggtc cagcttgggg cccctgactt ccacctgggg gcccttgagg 13620
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ttgcctgggg ctgacgcccc gaacgatggc atcttgaact tgggcatttt gaacctgctg 13920
tctttggcag tcacatcctt gtcggccagg gacagttccc cctccagccg cgcactgtcc 13980
agcttggctc ccggggcctc gacgtccacc tccacgctgg gcagagacac ctccacatca 14040
ggggctgtga cttccgcctt ggggcttttc aggtccagct tggggccctt gacgtccacc 14100
tgggggccct tgagggccac tttgggcatc ttgaaactgg gcatctccac cttgggcaag 14160
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tcagcctgga ccttcaggtc agtagaagca ggctgaatgc tgaggtcagt ggtcttcagg 14280
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agccacgcac catccagctt ggccttctgg gcctggacat ccacctccat gctgggcaga 14520
gacacctcgc catcgggggc tgtcacttcc gccttggggc ctttcaggtc cagcttgggg 14580
cccttaacat ctatctgggg gcccttgagg tccactttgg gcatcttgaa actgggcatc 14640
tccactttgg gcaggtgcac tttggggccg gctccctcgg gcacagggcc ctccggaagt 14700
ttcacatcca cttggccagc ctggacctcc aggtcagcgg aagggggctg aatgctgagg 14760
tcagtggcct tgaggtcccc ctgcatggag gagaggctca cgtcggcctc caccttcggc 14820
gcagacacat ccaccgagtc ctccatggac ttgcctgggg ccgacacccc gaatgatggc 14880
atcttgaact tgggcatttt gaacttgctg tctttggcag tcacctcctt gtcggccagg 14940
gacaggtccc cctccagccg cgcaccatcc agctttgctc tcggggcctg gacgtccacc 15000
tccatgctgg acagagacat cttcacatcg ggggctgtca cttccgcctt ggggcctttc 15060
aggtccagct tggggccctt gaggtccact ttgggcatct tcaaactggg cctctgcacc 15120
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gtcttgaggt ccccctgcat ggagaggagg ctcacgtcgg cctccacctt cggcgcagac 15300
acatccaccg aggcctccat ggacttgcct ggggctgacg ccccgaacaa tggcatcttg 15360
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tcctttttta agcgtttttc atcgtgtatt agttgtattt ttgttgtgtt tgtcattgag 15480
tcactgtctt ctttgtcttt taatccttcc tctgtgcgtc tctgttctct tctatcagct 15540
gttgctgtgg cctctccttc ccttccctgc tctgtgtctt ctgtggcttt ttctctgcct 15600
gtctttgtgt gcttgcttgg cgaccatcct aaggagggta tcttgaactt gggcattctt 15660
atctgtcctt ctgtgtcttc cctgcccttg tcctgttcct cagtgatcct tgtcctctgt 15720
agtccttcct ctccatctcc ttcatccccc tgtgcttctg catgtgtggt tggttccctg 15780
cccggcatcc acccggctcc ttccacctcc tcacccttca ggccagtacc cgcttttgag 15840
gacgcatcct gtctcttccc tcgctgtggg gtactaaggc gcctttctct ttctggctct 15900
ttttctgtgg aaaatgcaaa ttttggtgtc tttaaatcgt gtactcgcac cctaatttct 15960
ggtgggccaa tctgtgtgcc tccttcggtt gtgtctctca aggacagtct ggcgatcccg 16020
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gccctgggct tcctctgggc cactgctgtc tcctgtgcct gcccctccag ggtctttcca 16140
tggagcctgg ctgccctgag tcccccttcc tgaggggttc cctcgcaaag tctagggtca 16200
ccgagctctg tgggcaatgg catgctctga gcaggcatca cttctcgatc ctgttctgcc 16260
ctctcctctc tcctgctgcc tgtggcagcc ccagtctcct cgaggctatc accccagggc 16320
cccaactctt ccaggacccc agcacggccc accccactct ggaaccccct gcctggctgt 16380
cctgtcgatg aagggccctg tcccgagcct gtcctgaatc tgaggttgag gaacttccgc 16440
ctcctctggc tgcccggccc tgccttctgc tcttggcgct ccaccgtgag ctgggcctct 16500
gtgtctgtgc ttgtagggga cacgtcatgt gcgtccctag gttcgtaggc ctctgacgag 16560
ctgtgtgacc tctggggtcc cggcccccgc ttgctcttta tggattgaaa ttttggccaa 16620
gagagcctct ccctctggct ctgcctgcct ctccccaccc ttggtttgga gatgagtctc 16680
tcttggtccc catctccttc cagagttttc gtgggggtct ctctgcaccc atcagcaaca 16740
tccgtgtcct gaaacata 16758
<210> 2
<211> 16801
<212> DNA
<213> 人工合成序列(unkown)
<400> 2
ttgcatctct cttgtactga tgagccatac ctctcagcct tcatttggtc ccaggcctga 60
ccctttgctt tcatcgtcag cttttctgtc ctgctcgggc aggattaact ctgttcttgc 120
cgcggatgtc accatcactc tggagtccag cccagtgccc acaggcccga tcagttcacc 180
ctcttccttc tcttcagggg agaaactttc tcgggcatca aaaaacgtga ttgtttcttc 240
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cagttctgcc tctggtcgtg cctcaggctg tgtttgaatg ggagcagatc tctggacgtc 420
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gccctcctga gtcctagagt gttgagtcat tgttgtgtac actctagcct gcgtgtgggg 840
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ttcaccccct gttgctgccg gtgcctgtgt ctgagccact tccagctttc cagccccgcc 1800
tctgtccctg aaagagcgcc taaggctggg catgcggaac ttgggcattt taaaccagct 1860
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atctggtttt ctacaggatg gctggagggg atcttcaggt gtgggggcta tcccctcccc 1980
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cagatcatgt ttgggaagag gcaggtcagc ttcaggctgg ctcacctcca ccttggcctt 2100
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atccaccgag acctcgatgg acttgcctgg ggacaacatc ccaaaggatg gcatcttgaa 4020
cttgggcatt ttgaacttgc tgtctttggc agtcacgtcc ttgtcagcca gggacaggtc 4080
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tgggagtttc acatcctctt ggccagcctg gacctccaga tcagcggaag ggggctgaat 4380
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cttcagcgca gacacatcca acgaggcctc gatggacttg cctggggcag acaccccgaa 4500
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gtccacctcc atgctgggca gagacacctc cacgacgggg gtcatcacat ccgccttggg 4680
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cacgtcggct ttcgccttca gctcagacac atccacggac gcctccatgg acttgcctgg 4980
ggccgacacc ccgaatgatg gcatcttgaa cttgggcatt ttgaacttgc tgtctttggc 5040
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cgggagcttc acatccatct ggccagcctg gaccttcagg tcggcagaag ggggctgaat 6360
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cccctccagc cgtgcaccat ccaacttggc tcctggggcc tcgacatcca cctccatgcc 8100
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cttcggcgca gacacatcca ccgagacctc aatggacttg cctggggcag acaccccgaa 8460
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ggccgacacc ccgaatgacg gcatcttgaa cttgggcatt ttgaacttgc tgtctttggc 9000
tgtcatgccc ttgtcggcca gggacaggtc cccctccagc cgcgcaccat ccagctttgc 9060
tctcggggcc tggacgtcca cctccatgct ggacagagac atcttcacat cgggggctgt 9120
cacttccgcc ttggggcctt tcaggtccac gttggggccc ttaacatcta tctgggggcc 9180
cttgaggtcc acttcaggca tcttgaaact gggcatctgc agcttgggca ggtgcccttt 9240
gaggccggct ccctcgggaa cgtggccctc tgggagtttc acatccacct ggccagcctg 9300
gacctccagt tgggcagagg ggggctgaat gctgatgtca gtggtcttaa ggtccccttg 9360
catggagggg aggctcatgt cggcttccac cttcagctca gacacatcca ccaacgcctc 9420
gatggactcg cctggggccg acaccctgaa tgatggcatc ttgaacttgg gcattttgaa 9480
cttgctatct ttggctgtca cacccttgtc ggccagggac aggtccccct ccagccgcgc 9540
accatccagc tttgctctcg gggcctggac gtccacctcc atgctggaca gagacatctc 9600
cacatcgggg gctgtcactt ccgccttggg gcctttcagg tccagcttgg ggcccttgac 9660
atctagctgg gggcccttga ggtccatttc aggcatcttg aaactgggca tctgcacctt 9720
gggcaggtgc cctttgaggc cggctccctc cggcacaggg ccctctggga gtttcacgtc 9780
cacttggcca gcctggacct ccaggtcagc ggaagggggc tgaatgctga ggtcagtggc 9840
cttgaggtcc ccctgcatgg aggagaggct cccgtcggcc tccaccttcg gcgcagacac 9900
atccaccgag gcctcgatgg acttgcctgg ggcagacacc ccgaatgacg gcatcttgaa 9960
cttgggaatt ttgaacctgc tgtctttggt agtcacatcc ttgtccgcca cagacaggtc 10020
cccctccagc cacgcaccat ccagcttggc tcccggggcc tcgacatcca cctccacgct 10080
gggctgagac acctccacgt cgggggccat cacgtccgtc ttggggcctt tcaggtccag 10140
cttggggccc ttgacatcta tctgggggcc cttgagatct actttgggca tcttgaaact 10200
gggcatctgc agcttgggca ggtgcccttt gaggccggct ccctccggca cggggccctc 10260
tgggagtttc acatccactt ggccagcctg gacctccagg tcagcggaag ggggctgaac 10320
gctgaggtca gtggtcttga ggtccccctg catggagggg aggctcacgt cggcctccac 10380
cttcaacgca gacacatccg ctgaggcctc gatggacttg ccaagggcag acaccccaaa 10440
cgacagcatc ttgaacttgg gcattttgaa cttgctgtct ttggcagtca cgtccttgtc 10500
ggccagggac atgtccccct ccagccgcgc accatccagc ttggctcctg gggccttgac 10560
gtccacctcc acgctgggca gagacacctc cacatcaggg gctgtcactt ccaccttggg 10620
gtcttttagg tccagcttgg ggcccttgat gtctatttcg gggcccttga ggtccacttt 10680
gggcaccttg aaactgggca tctgcagctt gggcaggtgc cctttgaggc cgacttcctc 10740
gggcacaggg ccctccagga gtttcacgtc cacctggcca gcctggacct tcacgtcggc 10800
ggaaaggggc tgaatgctga ggtcagtggt cttgaggtcc ccctgcatgg aggggagact 10860
catgtcggcc tccaccttgg gtggagacac atccaccgag gcctcgatgg acttgcctgg 10920
ggcagacacc ccaaacgacg gcatcttgaa cttgggcatt ttgaacttgc tgtctttggt 10980
agtcaggtcc ttgttggcca gggtcaggtc cccctgcaga tgcgcactat ccagcttggc 11040
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catttccacc ttggggtctt ttaggtccag tttggggccc ttgatgtcca cctgggggcc 11160
cttgaggtcc actttgggca tcttcaaact gggcatctcc accttgggca ggtgcccttt 11220
gaggccagct ccctcgggca cgtggccctc cgggagcttc acatccacct ggccagtctg 11280
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accatccagc ttagccttct gggcctggac atccacctcc atgctgggca gagacacctc 11580
gacatcgggg gctgtcactt ccgccttggg gcctttcagg tccagcttgg cgcccttaac 11640
atctgtctgg gggcccttga ggtccacttt gggcatcttg aaactgggca tatccacctt 11700
gggcaagtgc cctttgaggc cggctccctc gggcacctgg ccctccggga gcttcatgtc 11760
cacttggcca gcctggacca ccaggtctgc agaagggagc ggaatgcaga ggtccgtggt 11820
cttgaggtcc ccctgcatgg aggggaggct cacttcggcc tccaccttcg gcgcagacac 11880
atccaccgag gcctcgatgg acttgcctgg ggcagacacc ccgaacgacg gcatcttgaa 11940
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accctccagc cgcacactgt ccagcttggc tcctggagcc tcgacgtcca cctccacgct 12060
gggcagagac acctccacgt cgggggccat cacctccgcc ttggggcctt tcaggtccag 12120
cttggggccc ttgacgtcca tctgggggcc cttgagggcc actttgggca tcttcaaact 12180
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ggccagggac aggtccccct ccagctgcgc accatccagc tttgctctcg gggcctggac 12540
gtccacctcc atgctggaca gagacatctt cacatcgggg gctgtcactt ccaccttggg 12600
gcctttcagg tccagcttgg ggcccttaac atctatctgg ggccccttga ggtccacttt 12660
gggcatcttg aaactgggca tctgcacttt gggcaggtgc cctttgaggc cggctccctc 12720
ggacacaggg ccctctggga gtttcacgtc cacttggcca gcctggacct ccaggtcagc 12780
agaagggggc tgtatgctca ggtcagtggc cttgaggtcc ccctgcatgg aggggaggct 12840
cacgtcggcc tccaccttcg gcgcagacac atccactgag gcctcgatgg acttgcctgg 12900
ggcagacacc ccgaacgacg gcatcttgaa cttgggcatt ttgaacttgc tgtctttggt 12960
agtcaagtcc ttgtcggcca gggacatgtc ctcctccagc cgtccaccat ccagcttggc 13020
tcctggggcc tcgacatcca cctccacgct gggcagagaa acctccacat caggggctgt 13080
cacttccacc ttggggtctt ttaggtccag cttggggccc ttgatgtcta tttcagggcc 13140
cttgaggtcc actttgggca ccttgaaact gggcatctgc agcttgggca ggtgcccttt 13200
gaggccggct ccctcgggca cggggccctc tgggagtttc acgtccaatt ggccagcctg 13260
gagctccagg tcagtggaag ggggctgaat gctgaggtca gtggtcttga ggtccccctg 13320
catggagggg aggctcatgt cggcctccac cttgggtgca gacaggtcca cggaggcctc 13380
aatggacttg cctggggcag acaccccgaa cgacggcatc ttgaacttgg gcattttgaa 13440
cttgctgtct ttggcagtca cgtccttgtc agccagggac aggtccccgt ccagctgtgc 13500
gccatccaac ttggctcccg gggcctgcat gtccacctcc acactgggca gagacacagc 13560
cacttcgtgg gccgtcacct ctgccttatg acctttcagg tccagcttgg ggcccctgac 13620
ttccacctgg gggcccttga ggtccacttt gggcatcttc aaactaggca tctgcacctt 13680
gggcaggtgc cctttgaagc cggctccctc aggcacgtgg ccctccagga gcttcacgtc 13740
cacctggcca gcgtggacct ccaggtcagc ggaagggggc tgaatgctga ggtcagtggt 13800
cttgaggtcc ccctgcatgg aggggagact cacgtcggcc tccactttgg gtgcagacac 13860
atccaccgag gcctcgatgg acttgcctgg ggctgacgcc ccgaacgatg gcatcttgaa 13920
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cgggagcttc acatccacct ggtcagcctg gaccttcagg tcagtagaag caggctgaat 14280
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cgacggcatc ttgaacttgg gcattttgaa cttgctgtct ttggcagtca cgtccttgtc 14460
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atccacctcc atgctgggca gagacacctc gccatcgggg gctgtcactt ccgccttggg 14580
gcctttcagg tccagcttgg ggcccttaac atctatctgg gggcccttga ggtccacttt 14640
gggcatcttg aaactgggca tctccacttt gggcaggtgc actttggggc cggctccctc 14700
gggcacaggg ccctccggaa gtttcacatc cacttggcca gcctggacct ccaggtcagc 14760
ggaagggggc tgaatgctga ggtcagtggc cttgaggtcc ccctgcatgg aggagaggct 14820
cacgtcggcc tccaccttcg gcgcagacac atccaccgag tcctccatgg acttgcctgg 14880
ggccgacacc ccgaatgatg gcatcttgaa cttgggcatt ttgaacttgc tgtctttggc 14940
agtcacctcc ttgtcggcca gggacaggtc cccctccagc cgcgcaccat ccagctttgc 15000
tctcggggcc tggacgtcca cctccatgct ggacagagac atcttcacat cgggggctgt 15060
cacttccgcc ttggggcctt tcaggtccag cttggggccc ttgaggtcca ctttgggcat 15120
cttcaaactg ggcctctgca ccttgggcag gtgccctttg aggctggctc cctcgggcag 15180
ggggccctcc ggaagtttca catccacttg gccatcctgg acctccaggt cagcggaagg 15240
ggtctggacg ctgaggtcag tggtcttgag gtccccctgc atggagagga ggctcacgtc 15300
ggcctccacc ttcggcgcag acacatccac cgaggcctcc atggacttgc ctggggctga 15360
cgccccgaac aatggcatct tgaacttggg cattttgaac ttgctgtctt tggtggccac 15420
ttccttttct gtcagaattt gttccttttt taagcgtttt tcatcgtgta ttagttgtat 15480
ttttgttgtg tttgtcattg agtcactgtc ttctttgtct tttaatcctt cctctgtgcg 15540
tctctgttct cttctatcag ctgttgctgt ggcctctcct tcccttccct gctctgtgtc 15600
ttctgtggct ttttctctgc ctgtctttgt gtgcttgctt ggcgaccatc ctaaggaggg 15660
tatcttgaac ttgggcattc ttatctgtcc ttctgtgtct tccctgccct tgtcctgttc 15720
ctcagtgatc cttgtcctct gtagtccttc ctctccatct ccttcatccc cctgtgcttc 15780
tgcatgtgtg gttggttccc tgcccggcat ccacccggct ccttccacct cctcaccctt 15840
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gctcattcca ggagttggct gggccctggg cttcctctgg gccactgctg tctcctgtgc 16140
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ctccaccgtg agctgggcct ctgtgtctgt gcttgtaggg gacacgtcat gtgcgtccct 16560
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tatggattga aattttggcc aagagagcct ctccctctgg ctctgcctgc ctctccccac 16680
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ctctctgcac ccatcagcaa catccgtgtc ctgaaacata gggagaggga atctgttggt 16800
g 16801
Claims (4)
1.检测AHNAK2突变的探针用于制备检测结直肠癌干细胞的试剂的用途，其特征在于：所述突变位点为Chr14第105410531位和Chr14第105410533位中至少一个，结直肠癌干细胞在Chr14第105410531位的A突变为G、在Chr14第105410533位的A突变为G。
2.检测AHNAK2突变的核苷酸片段用于制备检测结直肠癌干细胞的试剂的用途，其特征在于：所述突变位点为Chr14第105410531位和Chr14第105410533位中至少一个，结直肠癌干细胞在Chr14第105410531位的A突变为G、在Chr14第105410533位的A突变为G。
3.检测结直肠癌干细胞标记物的试剂用于制备基因芯片的用途，其特征在于：所述标记物为Chr14第105410531位和Chr14第105410533位中至少一个，结直肠癌干细胞在Chr14第105410531位的A突变为G、在Chr14第105410533位的A突变为G，所述基因芯片用于检测结直肠癌干细胞。
4.检测AHNAK2突变的核苷酸片段用于制备检测结直肠癌干细胞的试剂盒的用途，其特征在于：所述突变位点为Chr14第105410531位和Chr14第105410533位中至少一个，结直肠癌干细胞在Chr14第105410531位的A突变为G、在Chr14第105410533位的A突变为G。
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