CN109387574A - 一种分离分析磷丙泊酚钠有关物质的hplc方法 - Google Patents
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Abstract
本方法公开了一种分离分析磷丙泊酚钠有关物质的HPLC方法，采用高效液相色谱法，以苯基柱为色谱柱，离子对溶液（pH值1～5）与有机溶剂以一定比例组成流动相，该方法可以快速有效准确的分离分析磷丙泊酚钠的有关物质。
Description
技术领域
本发明涉及一种高效液相分析方法，具体的说是一种磷丙泊酚钠有关物质分离分析测定。
背景技术
丙泊酚(Propofol)是一速效镇静剂，特别适用于外科小手术和门诊活体检查，也用于心脏和神经系统大手术和特护重症病人的长期镇静治疗，但丙泊酚其微溶于水的特性使丙泊酚只能制成脂质制剂，且该制剂类型常常会引起注射部位疼痛、高血脂及因污染所致细菌感染等副作用；制剂中的脂质成份会加重丙泊酚引起的低血压和瞬时呼吸暂停，为了克服这些不良反应和极低的水溶性，对丙泊酚的结构进行修饰从而得到水溶性较好的前药磷丙泊酚钠，而这种修饰方法早已成功用于改善其他药物的溶解度，如抗癫痛药苯妥英(phenytoin)经修饰得到fos- phenytoin。
磷丙泊酚钠可以在一定程度上克服脂肪乳剂型丙泊酚在适度镇静时所显现的一些缺点，如为取得适当程度的镇静，即使是只需要短时程的镇静作用，使用脂肪乳剂型的丙泊酚时仍需要持续输注。但是，磷丙泊酚钠的较长时间的药效动力学分布和较慢的丙泊酚(f)消除速度，可能会让单次给药达到所需短时程的镇静作用成为可能。关于磷丙泊酚钠在支气管镜检查中的使用情况的研究证实，在按6.5mg/kg单次静脉注射磷丙泊酚钠后，在镜检全程中56%的患者不需要再额外给药。
相对于丙泊酚出现的可致注射部位疼痛的不良反应，磷丙泊酚钠尚未出现此不良反应，但磷丙泊酚钠则无此虑。当长时程手术和ICU病人须限制脂肪摄入时，磷丙泊酚钠不受限制。
我们在开发磷丙泊酚钠的过程中发现该化合物没有现成分离有关物质的方法，而且在公开发表的文献中也没有发现该化合物有关物质的分析分离方法。而药品中的有关物质含量多少可以直接反应到本品的不良反应，所以建立一个快速、准确度高的有关物质的分析方法对本品至关重要。
磷丙泊酚钠及其中间体及杂质的结构式如下：
磷丙泊酚钠
丙泊酚（杂质A）
2-异丙基苯酚（杂质B）
2，5-二异丙基苯酚(杂质C)
2，2’，6，6’-四异丙基-4，4’-二联苯酚(杂质D)
间异丙基苯酚(杂质E)
对异丙基苯酚（杂质F）
1，3-二苯醚（杂质G）
O-氯甲基2,6-二异丙基苯酚(杂质H)
2-异丙基苯氧甲基磷酸二钠(杂质I)
以上各杂质从结构上考察，部分杂质与磷丙泊酚钠结构非常相似，从极性角度考虑，又有部分杂质与丙泊酚存在极大的极性差异；所以在同一色谱条件下将上述各杂质完全有效分离是非常困难的，这使得寻找一种既要求相似结构杂质能有效分离又要兼顾弱极性杂质能够有效检出的色谱条件成为必要。
发明内容
本发明的目的就是针对现有技术的缺陷，提供一种磷丙泊酚钠有关物质的分离分析方法。
根据需要，我们在开发磷丙泊酚钠有关物质过程中，重点研究了的高效液相色谱分离方法。
本方法所说的用高效液相色谱法分析分离磷丙泊酚钠有关物质的方法，是以苯基键合硅胶为填充剂，离子对溶液（pH值1～5）与有机溶剂以一定配比组合为流动相；流速为0.5～5.0ml/min；柱温为0～50℃；进样体积为0.1～100μl；检测器为紫外检测器和二极管阵列检测器；检测波长为200～400nm；使用梯度进行洗脱分离。
本发明所述的填充剂选自下列键合硅胶：苯基硅烷键合硅胶。
本发明所述的有机溶剂选自下列溶剂：乙腈、甲醇、异丙醇。
本发明所述的离子对溶液的pH值为1.0～5.0，所述的离子对溶液的pH值优选为1.0～3.0；最优选为1.5～2.5。
本发明所述的离子对溶液的浓度为0.001mmol/L～0.1mmol/L。
本发明所述的离子对溶液包括如下离子对试剂：庚烷磺酸钠、辛烷磺酸钠、戊烷磺酸钠、四丁基硫酸氢铵。
本发明所述的检测波长为200～400nm；优选210～230nm；最优选210～220nm。
本发明所述的流速为0.5～5.0ml/min；优选0.8～2.0ml/min；最优选1.0～1.5ml/min。
本发明所述的柱温为0～50℃；优选20～40℃；
本发明所述的梯度条件为0～15分钟时，混合后流动相中的有机相比例为20%～40%，在5～60分钟时，逐渐增加有机相比例至40%～70%，保持0～100分钟，然后在5分钟内将有机相比例降回20%～40%。
本发明所述的有关物质的分离分析方法，可按照以下方法实现：
（1）取磷丙泊酚钠适量，采用适宜介质溶解稀释配制成供试品溶液。
（2）取上述杂质适量，采用适宜介质溶解稀释配制成杂质溶液。
（3）流动相：A相：取庚烷磺酸钠0.606g加入到1000ml水中，搅拌溶解，用磷酸调节pH至2.00；B相：乙腈。
（4）梯度条件
（5）流速为1.0ml/min；检测波长220nm；柱温25℃；苯基柱。
（6）取（1）的供试品溶液和（2）的杂质溶液10μl注入高效液相色谱仪，记录色谱图，具体如实施例1所示。
附图说明
附图1：实施例1样品检测色谱图
具体实施方式：
以下结合实施例对本发明作进一步说明，但这些实施例不得用于解释本发明保护范围的限制。
实施例1
实验仪器及条件
高效液相色谱仪：Thermo高效液相色谱仪 Ultimate 3000；
色谱柱：苯基柱 250×4.6mm 5μm；
流动相：A相：离子对溶液（取庚烷磺酸钠0.606g加入到1000ml水中，搅拌溶解，用磷酸调节pH至2.00）；B相：乙腈。
流速1.0ml/min；
检测波长：220nm；
柱温25℃；
进样体积10μl。
梯度条件
| 时间（min） | A相（%） | B相（%） |
| 0 | 60 | 40 |
| 10 | 60 | 40 |
| 30 | 40 | 60 |
| 95 | 40 | 60 |
| 100 | 60 | 40 |
| 105 | 60 | 40 |
取磷丙泊酚钠及上述杂质，用40%乙腈溶液溶解稀释制成供试品溶液和杂质溶液，取供
试品溶液及杂质溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，结果如下：
| 样品 | 保留时间（min） | 分离度 |
| 磷丙泊酚钠 | 6.848 | 20.83 |
| 杂质F | 12.800 | 5.54 |
| 杂质C | 14.862 | 28.22 |
| 杂质D | 25.172 | 1.81 |
| 杂质A | 26.502 | 3.35 |
| 杂质B | 27.647 | 13.94 |
| 杂质G | 32.388 | 12.88 |
| 杂质H | 37.207 | 3.47 |
| 杂质E | 38.762 | 19.23 |
| 杂质I | 50.085 | —— |
该色谱条件，上述所有杂质均能有效检出和有效分离，满足有关物质测定要求。
实施例2
实验仪器及条件
高效液相色谱仪：Thermo高效液相色谱仪 Ultimate 3000；
色谱柱：苯基柱 150×4.6mm 5μm；
流动相：A相：缓冲液（取庚烷磺酸钠0.606g到1000ml水中，搅拌溶解，用磷酸调节pH至
2.50）；B相：甲醇；梯度条件如下：
| 时间（min） | A相（%） | B相（%） |
| 0 | 55 | 45 |
| 10 | 55 | 45 |
| 30 | 30 | 70 |
| 95 | 30 | 70 |
| 100 | 55 | 45 |
| 105 | 55 | 45 |
流速0.8ml/min；
检测波长：230nm；
柱温30℃；
进样体积10μl。
取磷丙泊酚钠及上述杂质，用40%乙腈溶液溶解稀释制成供试品溶液和杂质溶液，取供试品溶液及杂质溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，结果上述所有杂质均能有效检出和有效分离，满足有关物质测定要求。
实施例3
实验仪器及条件
高效液相色谱仪：Thermo高效液相色谱仪Ultimate 3000；
色谱柱：苯基柱 250×4.6mm 5μm；
流动相：A相：缓冲液（取辛烷磺酸钠1.21g加入到1000ml水中，搅拌溶解，用磷酸调节pH
至3.00）；B相：异丙醇；梯度条件如下：
| 时间（min） | A相（%） | B相（%） |
| 0 | 60 | 40 |
| 10 | 60 | 40 |
| 30 | 40 | 60 |
| 95 | 40 | 60 |
| 100 | 60 | 40 |
| 105 | 60 | 40 |
流速1.2ml/min；
检测波长：220nm；
柱温25℃；
进样体积10μl。
取磷丙泊酚钠及上述杂质，用40%乙腈溶液溶解稀释制成供试品溶液和杂质溶液，取供试品溶液及杂质溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，结果上述所有杂质均能有效检出和有效分离，满足有关物质测定要求。
Claims (9)
1.一种分离分析磷丙泊酚钠有关物质的HPLC方法，其特征在于以苯基硅烷键合硅胶为填充剂；离子对溶液与有机溶剂以一定配比组合为流动相；流速为0.5～5.0ml/min；柱温为0～50℃；进样体积为0.1～100μl；检测器为紫外检测器和二极管阵列检测器；检测波长为200～400nm；使用梯度进行洗脱分离。
2.根据权利要求1所述的分离分析磷丙泊酚钠有关物质的HPLC方法，其特征在于所述的离子对溶液包括如下离子对试剂：庚烷磺酸钠、辛烷磺酸钠、戊烷磺酸钠、四丁基硫酸氢铵。
3.根据权利要求1所述的分离分析磷丙泊酚钠有关物质的HPLC方法，其特征在于所述的离子对溶液的pH值为1.0～5.0，所述的离子对溶液的pH值优选为1.0～3.0；最优选为1.5～2.5。
4.根据权利要求1所述的分离分析磷丙泊酚钠有关物质的HPLC方法，其特征在于所述的有机溶剂选自下列溶剂：乙腈、甲醇、异丙醇。
5.根据权利要求1所述的分离分析磷丙泊酚钠有关物质的HPLC方法，其特征在于所述的检测波长为200～400nm；优选210～230nm；最优选210～220nm。
6.根据权利要求1所述的分离分析磷丙泊酚钠有关物质的HPLC方法，所述的流速为0.5～5.0ml/min；优选0.8～2.0ml/min；最优选1.0～1.5ml/min。
7.根据权利要求1所述的分离分析磷丙泊酚钠有关物质的HPLC方法，所述的柱温为0～50℃；优选20～40℃。
8.根据权利要求1所述的分离分析磷丙泊酚钠有关物质的HPLC方法，所述的离子对溶液的浓度为0.001mmol/L～0.1mmol/L。
9.根据权利要求1所述的分离分析磷丙泊酚钠有关物质的HPLC方法，所述的梯度条件为0～15分钟时，混合后流动相中的有机相比例为20%～40%，在5～60分钟时，逐渐增加有机相比例至40%～70%，保持0～100分钟，然后在5分钟内将有机相比例降回20%～40%。
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| CN112067728A (zh) * | 2020-07-31 | 2020-12-11 | 温州医科大学附属第二医院、温州医科大学附属育英儿童医院 | 血浆中丙泊酚的快速固相萃取检测方法 |
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| CN112067728B (zh) * | 2020-07-31 | 2022-07-05 | 温州医科大学附属第二医院、温州医科大学附属育英儿童医院 | 血浆中丙泊酚的快速固相萃取检测方法 |
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