CN109355277A - 一种交联固定化脂肪酶-高分子材料复合物的制备方法及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于生物技术领域，具体公开了一种交联固定化脂肪酶‑高分子材料复合物的制备方法及其应用。与传统的酶固定化方法比，该方法首先采用高分子材料对脂肪酶进行修饰作用，然后在室温条件下对修饰后的脂肪酶进行交联固定化制备得固定化脂肪酶‑高分子材料复合物。与现有技术相比，本发明固定化脂肪酶‑高分子材料复合物具有良好的热稳定性、热稳定性，且经过多次重复使用后仍保留较高的催化活力。另外，制备方法简单，能耗低，降低了生产成本，因此，可批量化生产，将本发明固定化脂肪酶‑高分子材料复合物用于制备去污剂、分解油脂、制备生物柴油、拆分手性异构体、合成高聚物、去除纸浆中的树脂或皮革脱脂。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种交联固定化脂肪酶-高分子材料复合物的制备方法及其应用。
背景技术
相比于化学催化剂，作为生物催化剂的酶蛋白在催化活力、选择性与专一性等方面都有着优越的功能特性，可以在温和的反应环境中催化许多复杂的化学过程，因此在许多工业领域中有着广泛的应用，例如：医药中间体合成、分析检测、食品加工过程以及精细化工品制备等。其中，脂肪酶具有较为广泛的底物谱，除了可以催化水解甘油三酯，还可以催化酯化、酯交换、手性拆分等反应，因此被普遍用于去污剂制备、油脂分解、生物柴油制备等领域。但是，在实际工业使用过程中，使用游离的脂肪酶通常会出现催化不稳定、容易失活、与产物较难分离以及不能重复使用等缺点，严重限制了脂肪酶的进一步应用。通过筛选合适的固定化载体与方法，将脂肪酶进行固定化，可以有效解决上述问题。
酶固定化的方法通常分为四种：物理吸附、共价键合、包埋以及交联。使用载体固定化酶时，酶的负载量较低，通常会降低酶催化剂的生产能力。除此之外，为了为各类的催化环境挑选合适的酶固定化载体，会进行大量的筛选优化载体的实验，不仅耗费大量的时间与精力，还会造成固定化成本的增加。交联酶聚集体是一种非载体固定化酶技术，由于其单位体积的催化活性较高且不需要使用昂贵的固定化载体，因此在固定化脂肪酶领域受到了广泛关注。
专利CN103320420A（201310253376.9）公开了一种磁性交联脂肪酶聚集体及其制备方法与应用。该方法将表面带树枝状多胺基的功能基化磁性纳米颗粒与脂肪酶分散在缓冲液中，在低温条件下加入沉淀剂使其沉淀，再使用交联剂对其交联，反应后通过固液分离、洗涤以及冷冻干燥得到磁性交联脂肪酶聚集体。
专利CN107012136A（201710438404.2）公开了一种固定化疏绵状嗜热丝孢菌脂肪酶的方法。该方法在低温环境中，将酶液加入有机溶剂中静置沉淀，取沉淀加入交联剂与大孔吸附树脂振荡进行交联固定化，反应完全后将反应液真空干燥制备固定化疏绵状嗜热丝孢菌脂肪酶。
上述专利都利用戊二醛交联酶蛋白制备固定化脂肪酶，都是先在低温条件下对脂肪酶进行沉淀后，并且使用了磁性纳米颗粒与大孔吸附树脂，造成了脂肪酶固定化成本的增加。而且，酶的催化活力与稳定性在固定化过程中也受到了一定程度的影响，难以在各类催化环境中都保持较高的催化活力，且难以重复使用多次后仍能保持较高的酶活。
申请号201110106886.4公开了一种脂肪酶纳米高分子生物催化颗粒及其制备方法。该方法的核心是采用疏水性试剂甲基丙烯酸缩水甘油酯对脂肪酶表面进行化学修饰，引入碳碳双键基团，然后无需中间产物分离步骤，直接加入含有碳碳双键的乙烯基单体为原料，引发自由基聚合得到目标产物。该方法生产条件温和，制备过程简单，可以有效避免中间修饰步骤的酶活损失，实现高酶活收率，同时显著提高脂肪酶纳米高分子生物催化颗粒的热稳定性，并且新方法简化了中间产物分离步骤，降低生产成本，便于实现大规模工业制备。但是，通过此方法制备的固定化脂肪酶难以在各类反应介质中均保持良好的分散性能，在催化过程中容易出现团聚的现象，使得固定化脂肪酶的催化效率有所降低。
发明内容
为了解决脂肪酶固定化现有技术所存在的问题，本发明提供了一种交联固定化脂肪酶-高分子材料复合物的制备方法及其应用。该方法采用高分子材料修饰脂肪酶，并用戊二醛对其与牛血清白蛋白进行交联，制备得固定化脂肪酶-高分子材料复合物。在保持脂肪酶催化活力的基础上，有效降低了脂肪酶的固定化成本，并且使其在稳定性与重复利用率方面都具有优异的性能，进一步拓宽了固定化脂肪酶的应用领域。
为解决现有技术问题，本发明采取的技术方案为：
一种交联固定化脂肪酶-高分子材料复合物的制备方法，包括以下步骤：
步骤1，高分子材料醛基化
向有机试剂A中加入高分子材料，待溶解完全后加入氧化剂，醛基化反应4-48h后，浓缩反应液至原体积的10%，再向浓缩后的反应液中加入有机试剂B，过滤并洗涤烘干沉淀物，即得醛基化高分子材料；
步骤2，醛基化高分子材料修饰脂肪酶
向缓冲液中加入脂肪酶和醛基化高分子材料，室温下搅拌反应0.5-8h，再加入还原剂，继续反应10-40h，得含有脂肪酶-高分子材料复合物的溶液；
步骤3，交联固定化脂肪酶-高分子材料复合物
向含有脂肪酶-高分子材料复合物的溶液中加入有机试剂C，室温搅拌后，加入牛血清白蛋白，继续搅拌5 -240min后，再加入戊二醛溶液进行交联，持续搅拌30 min-48 h，加入赖氨酸溶液，继续搅拌30 min-48 h，离心后，用蒸馏水清洗沉淀物，干燥即得固定化脂肪酶-高分子材料复合物。
进一步改进的是，步骤1中有机试剂A为二甲基亚砜、N,N-二甲基甲酰胺、二氯甲烷或三氯甲烷中一种或多种混合而成；有机试剂B为石油醚、乙醚或正己烷中一种或多种混合而成；高分子材料为Pluronic®F-127、Pluronic®F-68、Pluronic®P-123、Pluronic®L-81、Pluronic®L-31或含有羟基的高分子化合物中的一种或多种混合而成；氧化剂为戴斯-马丁氧化剂、二氧化锰、氯铬酸吡啶、重铬酸吡啶鎓或三氧化铬中一种或多种混合而成。
进一步改进的是，步骤2中脂肪酶为南极假丝酵母脂肪酶B、褶皱假丝酵母脂肪酶、猪胰脂肪酶、米曲霉脂肪酶、假单胞菌属脂肪酶、嗜热栖热菌脂肪酶、米根霉脂肪酶或黑曲霉脂肪酶；缓冲液为磷酸缓冲液，浓度为10-200 mmol/L；pH值为6-9；还原剂为硼氢化钠或氰基硼氢化钠。
进一步改进的是，步骤3中有机溶剂C为异丙醇、甲醇、乙醇、丙酮、N,N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜或乙腈中一种或多种混合而成；戊二醛的体积分数为50%，添加量为20 μL-200 mL；赖氨酸的摩尔浓度为1 mol/L，添加量为20 μL-200 mL；离心的转速为4000-15000rpm，离心时间为3-60 min；干燥为冷冻干燥、真空干燥、喷雾干燥或自然风干。
上述固定化脂肪酶-高分子材料复合物在制备去污剂、分解油脂、制备生物柴油、拆分手性异构体、合成高聚物、去除纸浆中的树脂或皮革脱脂中的应用。
有益效果
与现有技术相比，本发明的优势在于：
1、本发明所述的交联固定化脂肪酶-高分子材料复合物的方法在室温条件下进行，减少了脂肪酶固定化的能耗。且没有引入其它固定化载体，使得固定化后的脂肪酶更容易与底物相结合，降低了固定化的成本。
2、本发明所述的交联固定化脂肪酶-高分子材料复合物的方法使用高分子材料修饰脂肪酶，没有造成脂肪酶的催化活力的下降，增强了脂肪酶在水相与有机相中的分散性能。
3、本发明所述的固定化脂肪酶-高分子材料复合物具有良好的热稳定性及重复使用性。
4、本发明所述的固定化脂肪酶-高分子材料复合物可以批量快速便捷制备，在去污剂制备、油脂分解、生物柴油制备等领域有着广泛的应用前景。
附图说明
图1为实施例1所制备的脂肪酶-醛基化Pluronic®F-127复合物与游离脂肪酶的热稳定性图；
图2为实施例1所制备的脂肪酶-醛基化Pluronic®F-127复合物的重复利用率图。
具体实施方式
下面结合具体实例对本发明的发明方法进行详细描述和说明。其内容是对本发明的解释而非限定本发明的保护范围。
实施例1
脂肪酶-醛基化Pluronic®F-127交联聚集体制备
步骤1，将Pluronic®F-127加入200 mL的二氯甲烷（有机试剂A）中，溶解后加入420 mg戴斯马丁氧化剂，室温搅拌进行醛基化反应24 h。反应结束后，通过旋蒸除去二氯甲烷对反应液进行浓缩，并用冷乙醚（有机试剂B）对其沉淀并且洗涤，真空干燥后得到醛基化Pluronic®F-127。
步骤2，将醛基化Pluronic®F-127与南极假丝酵母脂肪酶B加入10 mM的磷酸缓冲液中（pH 7.0）,室温搅拌2 h后，加入氰基硼氢化钠继续反应18 h，制备含有脂肪酶-醛基化Pluronic®F-127复合物的溶液。
步骤3，取50 μL脂肪酶-醛基化Pluronic®F-127复合物溶液加入950 μL的异丙醇中，搅拌15 min。然后加入50 μL的牛血清白蛋白溶液，继续搅拌5 min。然后向溶液中加入120 μL戊二醛对脂肪酶-醛基化Pluronic®F-127复合物进行交联。搅拌1 h后，加入60 μL赖氨酸溶液(1 mol/L)，继续搅拌30 min。将反应后的混合液离心分离，并且用蒸馏水清洗3次。将离心后的固体沉淀冷冻干燥后得固定化脂肪酶-醛基化Pluronic®F-127复合物。
采用滴定法测量脂肪酶酶活：在锥形瓶中加入50 mL的去离子水、2 g丁酸甘油酯和10 mL 50 mM的磷酸缓冲液（pH 7.0），强力搅拌10 min后使其成为乳浊液。利用pH仪测定乳浊液pH值，记录为初始pH值。然后加入20 mg的固定化脂肪酶-醛基化Pluronic®F-127复合物，40℃下搅拌30 min后立即离心分离去除固定化脂肪酶-醛基化Pluronic®F-127复合物，取出上清液。测定上清液的pH值记录为终了值，然后用0.02 mol/L的氢氧化钠溶液缓慢将溶液终了值滴定回归为pH初始值，记录消耗的氢氧化钠量。酶活力单位1U定义为在环境温度为40℃时，每分钟催化丁酸甘油酯释放1 μmol乙酸所需要的酶量。
经测定固定化脂肪酶-醛基化Pluronic®F-127复合物的酶活为671 U/g。
实施例2
脂肪酶-醛基化Pluronic®F-127交联聚集体制备
步骤1，将Pluronic®F-127加入250 mL的三氯甲烷中，溶解后加入1 g二氧化锰，室温搅拌36 h。反应结束后，通过旋蒸除去三氯甲烷对反应液进行浓缩，并用冷乙醚对其沉淀并且洗涤，真空干燥后得到醛基化Pluronic®F-127。
步骤2，将醛基化Pluronic®F-127与褶皱假丝酵母脂肪酶加入10 mM的磷酸缓冲液中（pH 7.0）,室温搅拌2 h后，加入氰基硼氢化钠继续反应24 h，制备含有脂肪酶-醛基化Pluronic®F-127复合物的溶液。
步骤3，取50 μL脂肪酶-醛基化Pluronic®F-127复合物溶液加入950 μL的异丙醇中，搅拌15 min。然后加入50 μL的牛血清白蛋白溶液，继续搅拌5 min。然后向溶液中加入200 μL戊二醛对脂肪酶-醛基化Pluronic®F-127复合物进行交联。搅拌1 h后，加入100 μL赖氨酸溶液(1 mol/L)，继续搅拌30 min。将反应后的混合液离心分离，并且用蒸馏水清洗3次。将离心后的固体沉淀冷冻干燥后得到固定化脂肪酶-醛基化Pluronic®F-127复合物。
酶活测定方法如实施例1, 经测定固定化脂肪酶-醛基化Pluronic®F-127复合物的酶活为583 U/g。
实施例3
脂肪酶-醛基化Pluronic®F-127交联聚集体的批量制备
步骤1，将Pluronic®F-127加入5 L的二氯甲烷中，溶解后加入10 g戴斯马丁氧化剂，室温搅拌48 h。反应结束后，通过旋蒸除去二氯甲烷对反应液进行浓缩，并用冷乙醚对其沉淀并且洗涤，真空干燥后得到醛基化Pluronic®F-127。
步骤2，将醛基化Pluronic®F-127与南极假丝酵母脂肪酶B加入10 mM的磷酸缓冲液中（pH 7.0）,室温搅拌2 h后，加入氰基硼氢化钠继续反应36 h,制备含有脂肪酶-醛基化Pluronic®F-127复合物的溶液。
步骤3，取50 mL脂肪酶-醛基化Pluronic®F-127复合物溶液加入950 mL的异丙醇中，搅拌30 min。然后加入50 mL的牛血清白蛋白溶液，继续搅拌5 min。然后向溶液中加入120 mL戊二醛对脂肪酶-醛基化Pluronic®F-127复合物进行交联。搅拌2 h后，加入60 mL赖氨酸溶液(1 mol/L)，继续搅拌1 h。将反应后的混合液离心分离，并且用蒸馏水清洗4次。将离心后的固体沉淀真空干燥后得到固定化脂肪酶-醛基化Pluronic®F-127复合物。
酶活测定方法如实施例1，经测定固定化脂肪酶-醛基化Pluronic®F-127复合物的酶活为634 U/g。
实施例1-3选用同一种高分子材料，改变有机试剂A、B或有机溶剂C等含量来比较所得固定化酶的酶活。很容易出现公开不充分。我补充的实施例4-7仅仅是作为模板，区别在于高分子材料的改变。如果说，这几种高分子材料属于一大类 ，或者说能用实施例1类推出差不多的酶活，那么可以删除实施例4-7，改用简单总结性的话语来代替，即可。如果不是，建议多添加几个实施例，并附上测试结果，以便后续不好补充。
实施例4
除将高分子材料更换为Pluronic®F-68外，其余同实施例1。
酶活测定方法如实施例1，经测定固定化脂肪酶-醛基化Pluronic®F-127复合物的酶活为437 U/g。
实施例5
除将高分子材料更换为Pluronic®P-123外，其余同实施例1。
酶活测定方法如实施例1，经测定固定化脂肪酶-醛基化Pluronic®F-127复合物的酶活为478 U/g。
实施例6
除将高分子材料更换为Pluronic®L-81外，其余同实施例1。
酶活测定方法如实施例1，经测定固定化脂肪酶-醛基化Pluronic®F-127复合物的酶活为368 U/g。
实施例7
除将高分子材料更换为Pluronic®L-31外，其余同实施例1。
酶活测定方法如实施例1，经测定固定化脂肪酶-醛基化Pluronic®F-127复合物的酶活为334 U/g。
实施例8
用实施例1制备的固定化脂肪酶-醛基化Pluronic®F-127复合物催化水解硝基苯丁酸酯
将硝基苯丁酸酯溶解于1 mL的二甲基亚砜中，并缓慢滴加到含有Triton-100的19 mL的磷酸缓冲液中（50 mM, pH 7.0）配制成0.5 mM的底物溶液。将固定化脂肪酶-醛基化Pluronic®F-127复合物溶于蒸馏水，取50 μL的稀释液加入到950 μL的底物溶液中，混合3s后在348 nm处测定反应液吸光度值的动态变化，测定固定化脂肪酶-醛基化Pluronic®F-127复合物催化水解硝基苯丁酸酯的活力。
实施例9
利用实施例1制备的固定化脂肪酶-醛基化Pluronic®F-127复合物的热稳定性测试
将固定化脂肪酶-醛基化Pluronic®F-127复合物溶于蒸馏水中，分装于7只离心管中，并于50 ℃的水浴锅中加热，每隔15 min取出一只离心管测定其酶活，并与初始酶活作为对比。
实施例10
利用实施例1制备的固定化脂肪酶-醛基化Pluronic®F-127复合物的重复使用情况
在锥形瓶中加入50 mL的去离子水、2 g丁酸甘油酯和10 mL 50 mM的磷酸缓冲液（pH7.0），强力搅拌10 min后使其成为乳浊液。利用pH仪测定乳浊液pH值，记录为初始pH值。然后加入一定量的固定化脂肪酶-醛基化Pluronic®F-127复合物，40℃下搅拌30 min后立即离心分离固定化脂肪酶-醛基化Pluronic®F-127复合物，取出上清液。测定上清液的pH值记录为终了值，然后用0.02 mol/L的氢氧化钠溶液缓慢将溶液终了值滴定回归为pH初始值，记录消耗的氢氧化钠量,计算出其酶活。然后将离心分离的固定化脂肪酶-醛基化Pluronic®F-127复合物重新催化水解丁酸甘油酯，步骤如上所述，并测定其酶活。重复催化15次后，计算出固定化脂肪酶-醛基化Pluronic®F-127复合物的重复利用率为91.48%。
尽管上面对本发明说明性的具体实施方案进行了相关的描述，以便于相关技术领域的研究者和科技人员理解本发明，但是本发明不限于具体实施方式的范围。以上所述的实施例仅为本发明的较佳实施例，凡是依照本发明专利范围所作的均等变化与修饰，皆应属于本发明的涵盖范围。
Claims (5)
1.一种交联固定化脂肪酶-高分子材料复合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1，高分子材料醛基化
向有机试剂A中加入高分子材料，待溶解完全后加入氧化剂，醛基化反应4-48h后，浓缩反应液至原体积的10%，再向浓缩后的反应液中加入有机试剂B，过滤并洗涤烘干沉淀物，即得醛基化高分子材料；
步骤2，步骤2，醛基化高分子材料修饰脂肪酶
向缓冲液中加入脂肪酶和醛基化高分子材料，室温下搅拌反应0.5-8h，再加入还原剂，继续反应10-40h，得含有脂肪酶-高分子材料复合物的溶液；
步骤3，交联固定化脂肪酶-高分子材料复合物
向含有脂肪酶-高分子材料复合物的溶液中加入有机试剂C，室温搅拌后，加入牛血清白蛋白，继续搅拌5 -240min后，再加入戊二醛溶液进行交联，持续搅拌30 min-48 h，加入赖氨酸溶液，继续搅拌30 min-48 h，离心后，用蒸馏水清洗沉淀物，干燥即得固定化脂肪酶-高分子材料复合物。
2.根据权利要求1所述的一种交联固定化脂肪酶-高分子材料复合物的制备方法，其特征在于，步骤1中有机试剂A为二甲基亚砜、N,N-二甲基甲酰胺、二氯甲烷或三氯甲烷中一种或多种混合而成；有机试剂B为石油醚、乙醚或正己烷中一种或多种混合而成；高分子材料为Pluronic®F-127、Pluronic®F-68、Pluronic®P-123、Pluronic®L-81、Pluronic®L-31或含有羟基的高分子化合物中的一种或多种混合而成；氧化剂为戴斯-马丁氧化剂、二氧化锰、氯铬酸吡啶、重铬酸吡啶鎓或三氧化铬中一种或多种混合而成。
3.根据权利要求1所述的一种交联固定化脂肪酶-高分子材料复合物的制备方法，其特征在于，步骤2中脂肪酶为南极假丝酵母脂肪酶B、褶皱假丝酵母脂肪酶、猪胰脂肪酶、米曲霉脂肪酶、假单胞菌属脂肪酶、嗜热栖热菌脂肪酶、米根霉脂肪酶或黑曲霉脂肪酶；缓冲液为磷酸缓冲液，浓度为10-200 mmol/L；pH值为6-9；还原剂为硼氢化钠或氰基硼氢化钠。
4.根据权利要求1所述的一种交联固定化脂肪酶-高分子材料复合物的制备方法，其特征在于，步骤3中有机溶剂C为异丙醇、甲醇、乙醇、丙酮、N,N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜或乙腈中一种或多种混合而成；戊二醛的体积分数为50%，添加量为20 μL-200 mL；赖氨酸的摩尔浓度为1 mol/L，添加量为20 μL-200 mL；离心的转速为4000-15000 rpm，离心时间为3-60 min；干燥为冷冻干燥、真空干燥、喷雾干燥或自然风干。
5.基于权利要求1所述的固定化脂肪酶-高分子材料复合物在制备去污剂、分解油脂、制备生物柴油、拆分手性异构体、合成高聚物、去除纸浆中的树脂或皮革脱脂中的应用。
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Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110862981A (zh) * | 2019-11-26 | 2020-03-06 | 南京工业大学 | 一种纳米材料固定化脂肪酶的方法 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101058820A (zh) * | 2007-05-15 | 2007-10-24 | 吉林大学 | 固定化脂肪酶催化合成α－亚麻酸单甘油酯的方法 |
| CN101874061A (zh) * | 2007-10-29 | 2010-10-27 | Csir公司 | 由乳液得到的颗粒 |
| CN103451174A (zh) * | 2013-09-22 | 2013-12-18 | 清华大学 | 一种酶-高分子结合物及其制备方法与应用 |
-
2018
- 2018-11-12 CN CN201811336768.0A patent/CN109355277A/zh not_active Withdrawn
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101058820A (zh) * | 2007-05-15 | 2007-10-24 | 吉林大学 | 固定化脂肪酶催化合成α－亚麻酸单甘油酯的方法 |
| CN101874061A (zh) * | 2007-10-29 | 2010-10-27 | Csir公司 | 由乳液得到的颗粒 |
| CN103451174A (zh) * | 2013-09-22 | 2013-12-18 | 清华大学 | 一种酶-高分子结合物及其制备方法与应用 |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| CHENG HUAN等: "《Cross-linked enzyme-polymer conjugates with excellent stability and detergent-enhanced activity for efficient organophosphate degradation》", 《BIORESOURCES AND BIOPROCESSING》 * |
| 刘容麟: "《脂肪酶的无载体固定化及其性质的研究》", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库 基础科学辑》 * |
| 卢佳伟等: "《聚乙烯亚胺改性聚丙烯腈中空膜固定脂肪酶》", 《分子催化》 * |
| 崔建东等: "《牛血清白蛋白对牛胰脂肪酶交联酶聚体制备及催化性能的影响》", 《食品与发酵工业》 * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110862981A (zh) * | 2019-11-26 | 2020-03-06 | 南京工业大学 | 一种纳米材料固定化脂肪酶的方法 |
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