CN109313017B - 组织学染色剂的光谱区分 - Google Patents
组织学染色剂的光谱区分 Download PDFInfo
- Publication number
- CN109313017B CN109313017B CN201680079559.5A CN201680079559A CN109313017B CN 109313017 B CN109313017 B CN 109313017B CN 201680079559 A CN201680079559 A CN 201680079559A CN 109313017 B CN109313017 B CN 109313017B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- stain
- histological
- absorbance
- peak
- library
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 title claims description 203
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 title description 3
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 108
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 claims description 232
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 139
- 238000000862 absorption spectrum Methods 0.000 claims description 61
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 claims description 55
- 238000012545 processing Methods 0.000 claims description 48
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 claims description 42
- 238000005259 measurement Methods 0.000 claims description 42
- 238000010790 dilution Methods 0.000 claims description 32
- 239000012895 dilution Substances 0.000 claims description 32
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 32
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims description 27
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 claims description 14
- NALREUIWICQLPS-UHFFFAOYSA-N 7-imino-n,n-dimethylphenothiazin-3-amine;hydrochloride Chemical compound [Cl-].C1=C(N)C=C2SC3=CC(=[N+](C)C)C=CC3=NC2=C1 NALREUIWICQLPS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 claims description 3
- 238000004847 absorption spectroscopy Methods 0.000 claims 3
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 abstract description 12
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 109
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 49
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 44
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 42
- CXKWCBBOMKCUKX-UHFFFAOYSA-M methylene blue Chemical compound [Cl-].C1=CC(N(C)C)=CC2=[S+]C3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 CXKWCBBOMKCUKX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 21
- 229960000907 methylthioninium chloride Drugs 0.000 description 21
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 20
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 15
- 238000011481 absorbance measurement Methods 0.000 description 11
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 11
- 230000015654 memory Effects 0.000 description 11
- YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N eosin Chemical compound [Na+].OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C(O)=C(Br)C=C21 YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 10
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 9
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 9
- 230000006870 function Effects 0.000 description 9
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- -1 azure Chemical compound 0.000 description 8
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 230000002380 cytological effect Effects 0.000 description 7
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 7
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- SEACYXSIPDVVMV-UHFFFAOYSA-L eosin Y Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C([O-])=C(Br)C=C21 SEACYXSIPDVVMV-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 6
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 6
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 5
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 5
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 5
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 5
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 5
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000003484 anatomy Anatomy 0.000 description 4
- KFZNPGQYVZZSNV-UHFFFAOYSA-M azure B Chemical compound [Cl-].C1=CC(N(C)C)=CC2=[S+]C3=CC(NC)=CC=C3N=C21 KFZNPGQYVZZSNV-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- ALJHHTHBYJROOG-UHFFFAOYSA-N 7-(dimethylamino)phenothiazin-3-one Chemical compound C1=CC(=O)C=C2SC3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 ALJHHTHBYJROOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 238000013500 data storage Methods 0.000 description 3
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 3
- 238000007431 microscopic evaluation Methods 0.000 description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 3
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 3
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 238000001303 quality assessment method Methods 0.000 description 3
- 239000013074 reference sample Substances 0.000 description 3
- HNONEKILPDHFOL-UHFFFAOYSA-M tolonium chloride Chemical compound [Cl-].C1=C(C)C(N)=CC2=[S+]C3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 HNONEKILPDHFOL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 3
- PVPBBTJXIKFICP-UHFFFAOYSA-N (7-aminophenothiazin-3-ylidene)azanium;chloride Chemical compound [Cl-].C1=CC(=[NH2+])C=C2SC3=CC(N)=CC=C3N=C21 PVPBBTJXIKFICP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 239000000980 acid dye Substances 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 239000005441 aurora Substances 0.000 description 2
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000009534 blood test Methods 0.000 description 2
- 239000001045 blue dye Substances 0.000 description 2
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 2
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 2
- 235000012730 carminic acid Nutrition 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- RTIXKCRFFJGDFG-UHFFFAOYSA-N chrysin Chemical compound C=1C(O)=CC(O)=C(C(C=2)=O)C=1OC=2C1=CC=CC=C1 RTIXKCRFFJGDFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZPUCINDJVBIVPJ-LJISPDSOSA-N cocaine Chemical compound O([C@H]1C[C@@H]2CC[C@@H](N2C)[C@H]1C(=O)OC)C(=O)C1=CC=CC=C1 ZPUCINDJVBIVPJ-LJISPDSOSA-N 0.000 description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 2
- IQFVPQOLBLOTPF-HKXUKFGYSA-L congo red Chemical compound [Na+].[Na+].C1=CC=CC2=C(N)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3)C3=CC=C(C=C3)/N=N/C3=C(C4=CC=CC=C4C(=C3)S([O-])(=O)=O)N)=CC(S([O-])(=O)=O)=C21 IQFVPQOLBLOTPF-HKXUKFGYSA-L 0.000 description 2
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 2
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 2
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 2
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 239000012470 diluted sample Substances 0.000 description 2
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 2
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 2
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 description 2
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 2
- IINNWAYUJNWZRM-UHFFFAOYSA-L erythrosin B Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(I)C(=O)C(I)=C2OC2=C(I)C([O-])=C(I)C=C21 IINNWAYUJNWZRM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 2
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 2
- 238000010606 normalization Methods 0.000 description 2
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 2
- 230000000737 periodic effect Effects 0.000 description 2
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- INCIMLINXXICKS-UHFFFAOYSA-M pyronin Y Chemical compound [Cl-].C1=CC(=[N+](C)C)C=C2OC3=CC(N(C)C)=CC=C3C=C21 INCIMLINXXICKS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- OARRHUQTFTUEOS-UHFFFAOYSA-N safranin Chemical compound [Cl-].C=12C=C(N)C(C)=CC2=NC2=CC(C)=C(N)C=C2[N+]=1C1=CC=CC=C1 OARRHUQTFTUEOS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 229950003937 tolonium Drugs 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- 238000002834 transmittance Methods 0.000 description 2
- 238000011179 visual inspection Methods 0.000 description 2
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 2
- OCKKUZVCJCWWHM-UHFFFAOYSA-L (7-amino-8-methylphenoxazin-3-ylidene)-diethylazanium;dichlorozinc;dichloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Cl-].[Cl-].[Zn+2].CC1=C(N)C=C2OC3=CC(=[N+](CC)CC)C=CC3=NC2=C1.CC1=C(N)C=C2OC3=CC(=[N+](CC)CC)C=CC3=NC2=C1 OCKKUZVCJCWWHM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- FWLHAQYOFMQTHQ-UHFFFAOYSA-N 2-N-[8-[[8-(4-aminoanilino)-10-phenylphenazin-10-ium-2-yl]amino]-10-phenylphenazin-10-ium-2-yl]-8-N,10-diphenylphenazin-10-ium-2,8-diamine hydroxy-oxido-dioxochromium Chemical compound O[Cr]([O-])(=O)=O.O[Cr]([O-])(=O)=O.O[Cr]([O-])(=O)=O.Nc1ccc(Nc2ccc3nc4ccc(Nc5ccc6nc7ccc(Nc8ccc9nc%10ccc(Nc%11ccccc%11)cc%10[n+](-c%10ccccc%10)c9c8)cc7[n+](-c7ccccc7)c6c5)cc4[n+](-c4ccccc4)c3c2)cc1 FWLHAQYOFMQTHQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HZLHRDBTVSZCBS-UVJJDBRNSA-N 4-[(e)-(4-aminophenyl)-(4-imino-3-methylcyclohexa-2,5-dien-1-ylidene)methyl]-2-methylaniline;hydrochloride Chemical compound Cl.C1=CC(=N)C(C)=C\C1=C(C=1C=C(C)C(N)=CC=1)/C1=CC=C(N)C=C1 HZLHRDBTVSZCBS-UVJJDBRNSA-N 0.000 description 1
- CSYADFXDZYPANK-UHFFFAOYSA-N 4-[4-[[4-(4-aminooxysulfonylanilino)phenyl]-[4-(4-aminooxysulfonylphenyl)iminocyclohexa-2,5-dien-1-ylidene]methyl]anilino]benzenesulfonic acid Chemical compound C1=CC(S(=O)(=O)ON)=CC=C1NC1=CC=C(C(=C2C=CC(C=C2)=NC=2C=CC(=CC=2)S(=O)(=O)ON)C=2C=CC(NC=3C=CC(=CC=3)S(O)(=O)=O)=CC=2)C=C1 CSYADFXDZYPANK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OFNXOACBUMGOPC-HZYVHMACSA-N 5'-hydroxystreptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O OFNXOACBUMGOPC-HZYVHMACSA-N 0.000 description 1
- NYCXYKOXLNBYID-UHFFFAOYSA-N 5,7-Dihydroxychromone Natural products O1C=CC(=O)C=2C1=CC(O)=CC=2O NYCXYKOXLNBYID-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DDGMDTGNGDOUPX-UHFFFAOYSA-N 7-methyliminophenothiazin-3-amine;hydrochloride Chemical compound [Cl-].C1=C(N)C=C2SC3=CC(=[NH+]C)C=CC3=NC2=C1 DDGMDTGNGDOUPX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N Acetaminophen Chemical compound CC(=O)NC1=CC=C(O)C=C1 RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PLXMOAALOJOTIY-FPTXNFDTSA-N Aesculin Natural products OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1Oc2cc3C=CC(=O)Oc3cc2O PLXMOAALOJOTIY-FPTXNFDTSA-N 0.000 description 1
- MCZVRBLCRZWFJH-UHFFFAOYSA-N Bismark brown Y Chemical compound Cl.Cl.NC1=CC(N)=CC=C1N=NC1=CC=CC(N=NC=2C(=CC(N)=CC=2)N)=C1 MCZVRBLCRZWFJH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JUQPZRLQQYSMEQ-UHFFFAOYSA-N CI Basic red 9 Chemical compound [Cl-].C1=CC(N)=CC=C1C(C=1C=CC(N)=CC=1)=C1C=CC(=[NH2+])C=C1 JUQPZRLQQYSMEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101100392078 Caenorhabditis elegans cat-4 gene Proteins 0.000 description 1
- VYZAMTAEIAYCRO-UHFFFAOYSA-N Chromium Chemical compound [Cr] VYZAMTAEIAYCRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001077262 Conga Species 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 239000004214 Fast Green FCF Substances 0.000 description 1
- RZSYLLSAWYUBPE-UHFFFAOYSA-L Fast green FCF Chemical compound [Na+].[Na+].C=1C=C(C(=C2C=CC(C=C2)=[N+](CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=2C(=CC(O)=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=CC=1N(CC)CC1=CC=CC(S([O-])(=O)=O)=C1 RZSYLLSAWYUBPE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000001637 Ganoderma lucidum Nutrition 0.000 description 1
- 240000008397 Ganoderma lucidum Species 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- XXACTDWGHQXLGW-UHFFFAOYSA-M Janus Green B chloride Chemical compound [Cl-].C12=CC(N(CC)CC)=CC=C2N=C2C=CC(\N=N\C=3C=CC(=CC=3)N(C)C)=CC2=[N+]1C1=CC=CC=C1 XXACTDWGHQXLGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000222722 Leishmania <genus> Species 0.000 description 1
- 241001490312 Lithops pseudotruncatella Species 0.000 description 1
- 108060003100 Magainin Proteins 0.000 description 1
- JEYCTXHKTXCGPB-UHFFFAOYSA-N Methaqualone Chemical compound CC1=CC=CC=C1N1C(=O)C2=CC=CC=C2N=C1C JEYCTXHKTXCGPB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WWKGVZASJYXZKN-UHFFFAOYSA-N Methyl violet 2B Chemical compound [Cl-].C1=CC(N(C)C)=CC=C1C(C=1C=CC(N)=CC=1)=C1C=CC(=[N+](C)C)C=C1 WWKGVZASJYXZKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710089395 Oleosin Proteins 0.000 description 1
- 241000282376 Panthera tigris Species 0.000 description 1
- 101100208039 Rattus norvegicus Trpv5 gene Proteins 0.000 description 1
- 108010081750 Reticulin Proteins 0.000 description 1
- 241001481789 Rupicapra Species 0.000 description 1
- BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N Silver Chemical compound [Ag] BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FHNINJWBTRXEBC-UHFFFAOYSA-N Sudan III Chemical compound OC1=CC=C2C=CC=CC2=C1N=NC(C=C1)=CC=C1N=NC1=CC=CC=C1 FHNINJWBTRXEBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YCUVUDODLRLVIC-UHFFFAOYSA-N Sudan black B Chemical compound C1=CC(=C23)NC(C)(C)NC2=CC=CC3=C1N=NC(C1=CC=CC=C11)=CC=C1N=NC1=CC=CC=C1 YCUVUDODLRLVIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005842 Thiophanate-methyl Substances 0.000 description 1
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 1
- RZUBARUFLYGOGC-MTHOTQAESA-L acid fuchsin Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S(=O)(=O)C1=C(N)C(C)=CC(C(=C\2C=C(C(=[NH2+])C=C/2)S([O-])(=O)=O)\C=2C=C(C(N)=CC=2)S([O-])(=O)=O)=C1 RZUBARUFLYGOGC-MTHOTQAESA-L 0.000 description 1
- DGOBMKYRQHEFGQ-UHFFFAOYSA-L acid green 5 Chemical compound [Na+].[Na+].C=1C=C(C(=C2C=CC(C=C2)=[N+](CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=2C=CC(=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=CC=1N(CC)CC1=CC=CC(S([O-])(=O)=O)=C1 DGOBMKYRQHEFGQ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- KDXHLJMVLXJXCW-UHFFFAOYSA-J alcian blue stain Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Cl-].[Cl-].[Cu+2].[N-]1C(N=C2C3=CC(CSC(N(C)C)=[N+](C)C)=CC=C3C(N=C3C4=CC=C(CSC(N(C)C)=[N+](C)C)C=C4C(=N4)[N-]3)=N2)=C(C=C(CSC(N(C)C)=[N+](C)C)C=C2)C2=C1N=C1C2=CC(CSC(N(C)C)=[N+](C)C)=CC=C2C4=N1 KDXHLJMVLXJXCW-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- RGCKGOZRHPZPFP-UHFFFAOYSA-N alizarin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C3=C(O)C(O)=CC=C3C(=O)C2=C1 RGCKGOZRHPZPFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012670 alkaline solution Substances 0.000 description 1
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 239000003125 aqueous solvent Substances 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- KSCQDDRPFHTIRL-UHFFFAOYSA-N auramine O Chemical compound [H+].[Cl-].C1=CC(N(C)C)=CC=C1C(=N)C1=CC=C(N(C)C)C=C1 KSCQDDRPFHTIRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IRERQBUNZFJFGC-UHFFFAOYSA-L azure blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[Al+3].[Al+3].[Al+3].[Al+3].[Al+3].[Al+3].[S-]S[S-].[O-][Si]([O-])([O-])[O-].[O-][Si]([O-])([O-])[O-].[O-][Si]([O-])([O-])[O-].[O-][Si]([O-])([O-])[O-].[O-][Si]([O-])([O-])[O-].[O-][Si]([O-])([O-])[O-] IRERQBUNZFJFGC-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000000981 basic dye Substances 0.000 description 1
- 229940052223 basic fuchsin Drugs 0.000 description 1
- 210000003651 basophil Anatomy 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 238000004820 blood count Methods 0.000 description 1
- 210000001772 blood platelet Anatomy 0.000 description 1
- UWHUTZOCTZJUKC-JKSUJKDBSA-N brazilin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2C[C@]2(O)[C@H]1C1=CC=C(O)C=C1OC2 UWHUTZOCTZJUKC-JKSUJKDBSA-N 0.000 description 1
- UWHUTZOCTZJUKC-CVEARBPZSA-N brazilin Natural products C12=CC(O)=C(O)C=C2C[C@@]2(O)[C@@H]1C1=CC=C(O)C=C1OC2 UWHUTZOCTZJUKC-CVEARBPZSA-N 0.000 description 1
- 229960001506 brilliant green Drugs 0.000 description 1
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 239000004106 carminic acid Substances 0.000 description 1
- 229940114118 carminic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 1
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 1
- 239000004568 cement Substances 0.000 description 1
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- JBTHDAVBDKKSRW-UHFFFAOYSA-N chembl1552233 Chemical compound CC1=CC(C)=CC=C1N=NC1=C(O)C=CC2=CC=CC=C12 JBTHDAVBDKKSRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OIDPCXKPHYRNKH-UHFFFAOYSA-J chrome alum Chemical compound [K]OS(=O)(=O)O[Cr]1OS(=O)(=O)O1 OIDPCXKPHYRNKH-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 1
- 229940043370 chrysin Drugs 0.000 description 1
- 235000015838 chrysin Nutrition 0.000 description 1
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 1
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 1
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- 125000000118 dimethyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 230000005670 electromagnetic radiation Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- ZBQZBWKNGDEDOA-UHFFFAOYSA-N eosin B Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC([N+]([O-])=O)=C(O)C(Br)=C1OC1=C2C=C([N+]([O-])=O)C(O)=C1Br ZBQZBWKNGDEDOA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003979 eosinophil Anatomy 0.000 description 1
- UKZQEOHHLOYJLY-UHFFFAOYSA-M ethyl eosin Chemical compound [K+].CCOC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C([O-])=C(Br)C=C21 UKZQEOHHLOYJLY-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 238000013401 experimental design Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 210000003722 extracellular fluid Anatomy 0.000 description 1
- 235000019240 fast green FCF Nutrition 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 238000010304 firing Methods 0.000 description 1
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005484 gravity Effects 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 230000001744 histochemical effect Effects 0.000 description 1
- 230000002962 histologic effect Effects 0.000 description 1
- OFNXOACBUMGOPC-UHFFFAOYSA-N hydroxystreptomycin Natural products CNC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(C=O)(O)C(CO)OC1OC1C(N=C(N)N)C(O)C(N=C(N)N)C(O)C1O OFNXOACBUMGOPC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KHLVKKOJDHCJMG-QDBORUFSSA-L indigo carmine Chemical compound [Na+].[Na+].N/1C2=CC=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C(=O)C\1=C1/NC2=CC=C(S(=O)(=O)[O-])C=C2C1=O KHLVKKOJDHCJMG-QDBORUFSSA-L 0.000 description 1
- 229960003988 indigo carmine Drugs 0.000 description 1
- 235000012738 indigotine Nutrition 0.000 description 1
- 239000004179 indigotine Substances 0.000 description 1
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 1
- OKPOKMCPHKVCPP-UHFFFAOYSA-N isoorientaline Natural products C1=C(O)C(OC)=CC(CC2C3=CC(OC)=C(O)C=C3CCN2C)=C1 OKPOKMCPHKVCPP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229940107698 malachite green Drugs 0.000 description 1
- FDZZZRQASAIRJF-UHFFFAOYSA-M malachite green Chemical compound [Cl-].C1=CC(N(C)C)=CC=C1C(C=1C=CC=CC=1)=C1C=CC(=[N+](C)C)C=C1 FDZZZRQASAIRJF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229940002712 malachite green oxalate Drugs 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- VHGXRGXCDVQIKS-KRWDZBQOSA-N methyl (2s)-3-(4-methylphenyl)sulfonyloxy-2-(phenylmethoxycarbonylamino)propanoate Chemical compound C([C@@H](C(=O)OC)NC(=O)OCC=1C=CC=CC=1)OS(=O)(=O)C1=CC=C(C)C=C1 VHGXRGXCDVQIKS-KRWDZBQOSA-N 0.000 description 1
- MCPLVIGCWWTHFH-UHFFFAOYSA-L methyl blue Chemical compound [Na+].[Na+].C1=CC(S(=O)(=O)[O-])=CC=C1NC1=CC=C(C(=C2C=CC(C=C2)=[NH+]C=2C=CC(=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=2C=CC(NC=3C=CC(=CC=3)S([O-])(=O)=O)=CC=2)C=C1 MCPLVIGCWWTHFH-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- STZCRXQWRGQSJD-GEEYTBSJSA-M methyl orange Chemical compound [Na+].C1=CC(N(C)C)=CC=C1\N=N\C1=CC=C(S([O-])(=O)=O)C=C1 STZCRXQWRGQSJD-GEEYTBSJSA-M 0.000 description 1
- 229940012189 methyl orange Drugs 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- SHXOKQKTZJXHHR-UHFFFAOYSA-N n,n-diethyl-5-iminobenzo[a]phenoxazin-9-amine;hydrochloride Chemical compound [Cl-].C1=CC=C2C3=NC4=CC=C(N(CC)CC)C=C4OC3=CC(=[NH2+])C2=C1 SHXOKQKTZJXHHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006855 networking Effects 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- PGSADBUBUOPOJS-UHFFFAOYSA-N neutral red Chemical compound Cl.C1=C(C)C(N)=CC2=NC3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 PGSADBUBUOPOJS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003448 neutrophilic effect Effects 0.000 description 1
- HSXUHWZMNJHFRV-QIKYXUGXSA-L orange G Chemical compound [Na+].[Na+].OC1=CC=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C=C(S([O-])(=O)=O)C2=C1\N=N\C1=CC=CC=C1 HSXUHWZMNJHFRV-QIKYXUGXSA-L 0.000 description 1
- 229910052762 osmium Inorganic materials 0.000 description 1
- SYQBFIAQOQZEGI-UHFFFAOYSA-N osmium atom Chemical compound [Os] SYQBFIAQOQZEGI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000489 osmium tetroxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012285 osmium tetroxide Substances 0.000 description 1
- 230000017693 oxidative demethylation Effects 0.000 description 1
- 238000007067 oxidative demethylation reaction Methods 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 239000013500 performance material Substances 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- IYDGMDWEHDFVQI-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;trioxotungsten Chemical compound O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.OP(O)(O)=O IYDGMDWEHDFVQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000767 polyaniline Polymers 0.000 description 1
- 238000011176 pooling Methods 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 230000005588 protonation Effects 0.000 description 1
- 238000005086 pumping Methods 0.000 description 1
- CXZRDVVUVDYSCQ-UHFFFAOYSA-M pyronin B Chemical compound [Cl-].C1=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC3=CC(N(CC)CC)=CC=C3C=C21 CXZRDVVUVDYSCQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000010453 quartz Substances 0.000 description 1
- JTQHYPFKHZLTSH-UHFFFAOYSA-N reticulin Natural products COC1CC(OC2C(CO)OC(OC3C(O)CC(OC4C(C)OC(CC4OC)OC5CCC6(C)C7CCC8(C)C(CCC8(O)C7CC=C6C5)C(C)O)OC3C)C(O)C2OC)OC(C)C1O JTQHYPFKHZLTSH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000001995 reticulocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000005070 ripening Effects 0.000 description 1
- 229940109850 royal jelly Drugs 0.000 description 1
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N silicon dioxide Inorganic materials O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052709 silver Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004332 silver Substances 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 1
- 238000010183 spectrum analysis Methods 0.000 description 1
- 238000007447 staining method Methods 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- YCUVUDODLRLVIC-VPHDGDOJSA-N sudan black b Chemical compound C1=CC(=C23)NC(C)(C)NC2=CC=CC3=C1\N=N\C(C1=CC=CC=C11)=CC=C1\N=N\C1=CC=CC=C1 YCUVUDODLRLVIC-VPHDGDOJSA-N 0.000 description 1
- 229940073450 sudan red Drugs 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 210000001179 synovial fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000001016 thiazine dye Substances 0.000 description 1
- OWXBIRAFHWASMS-UHFFFAOYSA-M thionine acetate Chemical compound CC([O-])=O.C1=CC(N)=CC2=[S+]C3=CC(N)=CC=C3N=C21 OWXBIRAFHWASMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- YFNCATAIYKQPOO-UHFFFAOYSA-N thiophanate Chemical compound CCOC(=O)NC(=S)NC1=CC=CC=C1NC(=S)NC(=O)OCC YFNCATAIYKQPOO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QGHREAKMXXNCOA-UHFFFAOYSA-N thiophanate-methyl Chemical group COC(=O)NC(=S)NC1=CC=CC=C1NC(=S)NC(=O)OC QGHREAKMXXNCOA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001960 triggered effect Effects 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003656 tris buffered saline Substances 0.000 description 1
- 229960000281 trometamol Drugs 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 238000010200 validation analysis Methods 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- XOSXWYQMOYSSKB-LDKJGXKFSA-L water blue Chemical compound CC1=CC(/C(\C(C=C2)=CC=C2NC(C=C2)=CC=C2S([O-])(=O)=O)=C(\C=C2)/C=C/C\2=N\C(C=C2)=CC=C2S([O-])(=O)=O)=CC(S(O)(=O)=O)=C1N.[Na+].[Na+] XOSXWYQMOYSSKB-LDKJGXKFSA-L 0.000 description 1
- 239000003021 water soluble solvent Substances 0.000 description 1
- DFWNDZXBHVLQRA-UHFFFAOYSA-J zinc;[4-[[4-(dimethylamino)phenyl]-(4-dimethylazaniumylidenecyclohexa-2,5-dien-1-ylidene)methyl]phenyl]-trimethylazanium;tetrachloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Cl-].[Cl-].[Zn+2].C1=CC(N(C)C)=CC=C1C(C=1C=CC(=CC=1)[N+](C)(C)C)=C1C=CC(=[N+](C)C)C=C1 DFWNDZXBHVLQRA-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/17—Systems in which incident light is modified in accordance with the properties of the material investigated
- G01N21/25—Colour; Spectral properties, i.e. comparison of effect of material on the light at two or more different wavelengths or wavelength bands
- G01N21/31—Investigating relative effect of material at wavelengths characteristic of specific elements or molecules, e.g. atomic absorption spectrometry
- G01N21/314—Investigating relative effect of material at wavelengths characteristic of specific elements or molecules, e.g. atomic absorption spectrometry with comparison of measurements at specific and non-specific wavelengths
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/17—Systems in which incident light is modified in accordance with the properties of the material investigated
- G01N21/25—Colour; Spectral properties, i.e. comparison of effect of material on the light at two or more different wavelengths or wavelength bands
- G01N21/31—Investigating relative effect of material at wavelengths characteristic of specific elements or molecules, e.g. atomic absorption spectrometry
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01J—MEASUREMENT OF INTENSITY, VELOCITY, SPECTRAL CONTENT, POLARISATION, PHASE OR PULSE CHARACTERISTICS OF INFRARED, VISIBLE OR ULTRAVIOLET LIGHT; COLORIMETRY; RADIATION PYROMETRY
- G01J1/00—Photometry, e.g. photographic exposure meter
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/30—Staining; Impregnating ; Fixation; Dehydration; Multistep processes for preparing samples of tissue, cell or nucleic acid material and the like for analysis
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/483—Physical analysis of biological material
- G01N33/4833—Physical analysis of biological material of solid biological material, e.g. tissue samples, cell cultures
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01J—MEASUREMENT OF INTENSITY, VELOCITY, SPECTRAL CONTENT, POLARISATION, PHASE OR PULSE CHARACTERISTICS OF INFRARED, VISIBLE OR ULTRAVIOLET LIGHT; COLORIMETRY; RADIATION PYROMETRY
- G01J3/00—Spectrometry; Spectrophotometry; Monochromators; Measuring colours
- G01J3/02—Details
- G01J3/10—Arrangements of light sources specially adapted for spectrometry or colorimetry
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/17—Systems in which incident light is modified in accordance with the properties of the material investigated
- G01N21/25—Colour; Spectral properties, i.e. comparison of effect of material on the light at two or more different wavelengths or wavelength bands
- G01N21/31—Investigating relative effect of material at wavelengths characteristic of specific elements or molecules, e.g. atomic absorption spectrometry
- G01N2021/3196—Correlating located peaks in spectrum with reference data, e.g. fingerprint data
Abstract
本公开提供用于评估在组织学分析仪中使用的组织学染色剂的分光光度方法。这些方法应用于各种评估中，包括组织学染色剂的标识的确定、组织学染色剂的质量的确定等。还包括用于实践所描述方法的设备和系统。本公开还提供计算机可读介质，其包含在评估组织学分析仪中使用的组织学染色剂时有用的组织学染色剂的参考分光光度特性的库。还提供包含指令的计算机可读介质，所述指令使计算设备执行用于进行组织学染色剂的评估的步骤。
Description
交叉引用
本申请要求在2015年12月18日递交的美国临时专利申请No.62/269,204的权益，该美国临时专利申请的全部内容通过引用并入在本文中。
背景技术
在组织学中利用许多不同染色剂及其变型。例如，在血液学中，组织学罗曼诺夫斯基染色剂的多个不同变型用于在载玻片上涂抹的血膜中的血细胞类型的区分。特别地，使用两种不同类型的染色剂，其被称为瑞氏-吉姆萨(WG)和迈格林华(MG)。而且，迈格林华混合物经常结合吉姆萨染色剂一起使用，产生迈格林华吉姆萨(MGG)制剂。使用各种方法从两种主要染料(曙红Y和亚甲蓝)制备所有类型的罗曼诺夫斯基染色制剂，每一种方法形成独特的染色制剂。
瑞氏染色剂为多色亚甲蓝的曙红(曙红Y染料)的混合物。迈格林华染色剂为詹纳尔染色剂的德国等效物，其为亚甲蓝曙红，该亚甲蓝曙红类似于瑞氏染色剂、但区别在于不使用多色亚甲蓝。多色亚甲蓝为亚甲蓝的碱性溶液，其经历利用熟化(催熟)的渐进式氧化脱甲基，以产生所有的三甲基中间物、二甲基中间物、单甲基中间物和无甲基中间物的形式，形成亚甲蓝、天青、硫堇和亚甲紫的混合物。
当应用于染色外周血膜时，任何类型的罗曼诺夫斯基染色剂通常将产生相似类型的细胞着色。然而，染色制剂的小的但重要的区别将允许区分血细胞中的具体情况，诸如例如中性粒细胞中的毒性颗粒。如果染色制剂不是最佳的(例如，缺少与其衍生物成比例的、足够分数的纯亚甲蓝)，则正常的嗜中性颗粒趋向于过度染色且看起来像毒性颗粒。最佳染色剂组成物也增强细胞核和多染性RBC(网状细胞)的染色。因此，重要的是保持且紧密控制如在最佳过程中所获得的任何给定染色制剂的具体组合物。
由于罗曼诺夫斯基类型染色剂的组合物是非常类似的，因此难以(如果并非不可能)通过目视检查或通过使用常规实验室仪器(诸如染色剂pH的测量)在任何(WG、MG或MGG)密切相关的染色剂和/或同一染色剂的变型之间进行辨别。
在例如由自动组织学或血液学载片制备设备所执行的自动组织学中，可以根据待执行的特定试验或用户偏好使用各种染色剂。无论特定设备使用单一染色剂还是多种染色剂，自动载片制备设备需要人类用户载入一种或多种染色剂。因此，染色剂可以无意被认错且可能将错误的染色剂载入设备中。另外，染色剂对于设备用户来说可以为认错的、未知的，例如由于偶然错误标记或不当制备。在不足条件下的开架贮存可以影响染色剂组合物，通过目测是注意不到的。
染色协议高度取决于合适染色剂的使用。因此，当使用认错或错误制备的染色剂时，该过程将可能产生非预期结果，例如次佳着色。尽管染色剂标识可以通过用于确定染色剂组合物的复杂分析方法(例如高效液相色谱法(High Performance LiquidChromatography，HPLC))决定性地确定，但是这些方法是费力的，耗费大量时间和资源。HPLC还需要一组参考分析物在色谱图上标识峰值(波段)，这可能难以获得复杂混合物，诸如多色亚甲蓝。
亚甲蓝为阳离子染料(即，它产生带正电荷的离子或阳离子)，在水溶液中，该阳离子染料在其纯形式下呈现处于293nm(π-π*跃迁)和664nm(n-π*跃迁)两个主要吸收带，其中，664nm(产生蓝色)带具有处于对应于0-1电子振动跃迁的610nm的肩部。吸收的细节取决于多个因素，包括质子化作用、吸收到其它材料、以及二聚物和更高阶聚合物根据浓度和其它交互的异染色-形成。进而，曙红Y为酸性染料(在溶液中离子化以产生带负电荷的离子或阴离子)，其呈现处于524nm的主要吸收带(产生红色)。
因此，染料分子的光学吸收对于该染料分子在染色剂制备的过程中可经历的修改是敏感的。
发明内容
本公开的方面包括一种评估在组织学分析仪中使用的组织学染色剂的方法，所述方法包括：在分光光度计上在预定义范围内测量所述组织学染色剂的吸收光谱；从所测量的光谱识别一个或多个峰值吸光度波长；将所识别的一个或多个峰值吸光度波长与包括用于多种组织学染色剂的参考峰值吸光度波长的库进行比较；以及基于所述比较评估所述组织学染色剂
其它方面包括评估在组织学分析仪中使用的组织学染色剂，以确定组织学染色剂的标识、确定组织学染色剂的质量。在一些方面中，所述方法包括生成所述评估的报告，其中，所述报告包括染色剂特定信息，包括例如，所述组织学染色剂的标识、所述组织学染色剂的质量、一个或多个峰值吸光度波长、在所述预定义范围或其一部分内的一个或多个吸光度测量、或其组合。
在本公开的某些方面中，在其内测量吸收光谱的预定义范围为200nm到800nm或在200nm到800nm内、为500nm到700nm或在500nm到700nm内、为600nm到700nm或在600nm到700nm内、为640nm到670nm或在640nm到670nm内、为500nm到550nm或在500nm到550nm内、或为200nm到400nm或在200nm到400nm内。
在一些方面中，所述方法包括：在分光光度计上在两个或更多个预定义范围内测量所述组织学染色剂的吸收光谱，包括例如，其中，所述两个或更多个预定义范围包括第一预定义范围和第二预定义范围，所述第一预定义范围为500nm到700nm或在500nm到700nm内，所述第二预定义范围为200nm到400nm或在200nm到400nm内。
其它方面包括：在测量所述吸收光谱之前利用溶剂稀释所述组织学染色剂，其中，具体稀释物和在稀释染色剂时使用的具体溶剂具体对应于与所测量的波长相比较的参考峰值吸光度波长，例如，参考峰值吸光度波长从利用与被测量的组织学染色剂相同的溶剂稀释成相同稀释物的参考样品获得。在一些方面中，用水将染色剂稀释为1:200。
在其它方面中，评估组织学染色剂的方法可以包括：制备所述组织学染色剂的多种稀释物，以及针对所述组织学染色剂的所述多种稀释物中的每种稀释物执行方法步骤。在其它方面中，评估组织学染色剂的方法可以包括：制备第一稀释物和第二稀释物，其中，所述第二稀释物为所述第一稀释物的浓度的一半。
在其它方面中，评估组织学染色剂的方法可以包括：从测量的光谱识别光谱偏移值。在一些方面中，参考峰值吸光度波长的库还包括用于多种组织学染色剂的多个参考光谱偏移值，以及所述比较还包括将测量的光谱偏移值与所述库进行比较。
在其它方面中，评估组织学染色剂的方法可以包括：从测量的光谱识别半最大吸光度处峰宽值。在其它方面中，参考峰值吸光度波长的库还包括用于多种组织学染色剂的多个半最大吸光度处峰宽值，以及所述比较还包括将所述半最大吸光度处峰宽值与所述库进行比较。
本公开的方面包括评估多种组织学染色剂，其中，所述多种组织学染色剂包括罗曼诺夫斯基染色剂，其包括例如瑞氏-吉姆萨、迈格林华、和迈格林华-吉姆萨。
在其它方面中，评估组织学染色剂的方法可以包括：在分光光度计上测量所述组织学染色剂的吸收光谱，其中，以至少1nm的分辨率测量所述吸收光谱。
在其它方面中，参考峰值吸光度波长的库可以包括：针对迈格林华的在基本656nm处的参考波长吸光度峰值；针对多种迈格林华染色剂组合物的多个光谱偏移值，其中，从针对迈格林华的656nm的所述参考波长吸光度峰值测量所述光谱偏移值；和/或针对多种迈格林华染色剂组合物的多个半最大吸光度处峰宽值。
在其它方面中，参考峰值吸光度波长的库可以包括：针对瑞氏-吉姆萨的在基本659nm处的参考波长吸光度峰值；针对多种瑞氏-吉姆萨染色剂组合物的多个光谱偏移值，其中，从针对瑞氏-吉姆萨的659nm的所述参考波长吸光度峰值测量所述光谱偏移值；和/或针对多种瑞氏-吉姆萨染色剂组合物的多个半最大吸光度处峰宽值。
在其它方面中，参考峰值吸光度波长的库可以包括：针对迈格林华-吉姆萨的参考波长吸光度峰值；针对多种迈格林华-吉姆萨染色剂组合物的多个光谱偏移值，其中，从针对迈格林华-吉姆萨的参考波长吸光度峰值测量所述光谱偏移值；和/或针对多种迈格林华-吉姆萨染色剂组合物的多个半最大吸光度处峰宽值。
在其它方面中，所述方法包括：随时间进行所述组织学染色剂的多次评估，从而监控染色剂质量。
在其它方面中，所述方法包括：在所述测量之前将所述组织学染色剂的等分试样从存储容器传送到分析容器中，例如，所述分析容器为吸收池、毛细管或多孔板。
本公开的方面包括：其中，在所述组织学分析仪内进行所述方法的测量或在所述组织学分析仪之外进行所述测量。在一些方面中，在所述组织学分析仪之外执行所述测量之后，将所述组织学染色剂的所述吸收光谱、从其导出的一个或多个峰值吸光度波长或其组合传送到所述组织学分析仪。在某些方面中，通过将所述分光光度计连接到所述组织学分析仪的有线数据连接传送所述组织学染色剂的所述吸收光谱、从其导出的一个或多个峰值吸光度波长或其组合。在某些方面中，使用计算机可读存储介质传送所述组织学染色剂的所述吸收光谱、从其导出的一个或多个峰值吸光度波长或其组合。
本公开的方面还包括一种用于评估在组织学分析仪中使用的组织学染色剂的设备，所述设备包括：分光光度计，所述分光光度计配置成在预定义范围内测量所述组织学染色剂的吸收光谱；用于多种组织学染色剂的参考峰值吸光度波长的库；光谱处理电路，所述光谱处理电路配置成：i)从所测量的光谱识别一个或多个峰值吸光度波长；ii)将所述一个或多个峰值吸光度波长与所述库进行比较以进行所述组织学染色剂的评估；以及信号系统，所述信号系统配置成报告所述评估的结果。
在其它方面中，所述设备的报告包括染色剂特定信息，其包括例如所述组织学染色剂的标识、所述组织学染色剂的质量、一个或多个峰值吸光度波长、在所述预定义范围或其一部分内的一个或多个吸光度测量、或其组合。在一些方面中，所述报告包括对组织学染色剂的标识的确定和/或对组织学染色剂的质量的确定。
在其它方面中，所述设备包括：用户界面，所述用户界面配置成用于用户输入所述组织学染色剂的假定标识；以及光谱处理电路，所述光谱处理电路配置成将所述组织学染色剂的所述假定标识与所述组织学染色剂的评估标识进行比较，以及输出关于所述组织学染色剂的所述假定标识与所述评估标识是否匹配的结果。
在其它方面中，所述设备包括信号系统，所述信号系统配置成在所述组织学染色剂的所述假定标识与所述评估标识不匹配时警告所述用户、配置成在所述组织学染色剂的质量低于预定阈值时警告所述用户、和/或配置成在所述组织学染色剂的质量低于用户指定的阈值时警告所述用户。
在其它方面中，由所述设备在其内测量组织学染色剂的吸收光谱的范围包括例如，预定义范围为200nm到800nm或在200nm到800nm内、为500nm到700nm或在500nm到700nm内、为600nm到700nm或在600nm到700nm内、为640nm到670nm或在640nm到670nm内、为500nm到550nm或在500nm到550nm内、或为200nm到400nm或在200nm到400nm内。在一些方面中，所述预定义范围包括两个或更多个预定义子范围，其包括例如，为500nm到700nm或在500nm到700nm内的第一预定义子范围、和为200nm到400nm或在200nm到400nm内的第二预定义子范围。
在其它方面中，所述设备包括样品制备模块，所述样品制备模块配置成提取所述组织学染色剂的样品，包括例如，该模块配置成将所述样品分散到与所述分光光度计兼容的分析容器中。在一些方面中，所述分析容器为吸收池、毛细管或多孔板。在一些方面中，所述样品制备模块配置成从所述组织学染色剂的样品制备一种或多种稀释物。
在其它方面中，所述设备包括分光光度计，所述分光光度计配置成以至少1nm或至少0.5nm的分辨率测量所述吸收光谱。
在其它方面中，所述设备的库包括针对迈格林华的在基本656nm处的参考波长吸光度峰值、针对瑞氏-吉姆萨的在基本659nm处的参考波长吸光度峰值。
在其它方面中，所述设备包括光谱处理电路，所述光谱处理电路配置成根据预定时间计划触发所述设备以测量所述组织学染色剂的所述吸收光谱，所述预定时间计划包括例如至少每月一次、至少两月一次、至少每周一次、至少两周一次、至少每两天一次、至少每日一次。
在其它方面中，所述设备包括用于存储所述组织学染色剂或其等分试样的容器。
在其它方面中，所述设备被容纳在所述组织学分析仪内。
本公开的方面包括一种用于评估在组织学分析仪中使用的组织学染色剂的系统，所述系统包括：吸光度分析仪，所述吸光度分析仪包括：i)分光光度计，所述分光光度计配置成在预定义范围内测量所述组织学染色剂的吸收光谱；ii)用于多种组织学染色剂的参考峰值吸光度波长的库；iii)光谱处理电路，所述光谱处理电路配置成：1)从所测量的光谱识别一个或多个峰值吸光度波长；以及2)将所述一个或多个峰值吸光度波长与所述库进行比较以进行所述组织学染色剂的评估；以及iv)可移动的计算机可读存储介质，所述可移动的计算机可读存储介质配置成存储所述评估的结果；以及组织学分析仪，所述组织学分析仪包括：i)端口，所述端口配置成接收所述可移动的计算机可读存储介质；和ii)信号系统，所述信号系统配置成报告所述评估的结果。
在其它方面中，所述系统的报告包括染色剂特定信息，其包括：所述组织学染色剂的标识、所述组织学染色剂的质量、一个或多个峰值吸光度波长、在所述预定义范围或其一部分内的一个或多个吸光度测量、或其组合。在一些方面中，所述报告包括对组织学染色剂的标识的确定或对组织学染色剂的质量的确定。
在其它方面中，所述系统包括吸光度分析仪或组织学分析仪或二者，其包括用户界面，所述用户界面配置成用于用户输入所述组织学染色剂的假定标识。在一些方面中，所述系统的光谱处理电路还配置成将所述组织学染色剂的所述假定标识与所述组织学染色剂的评估标识相比较，以及输出关于所述组织学染色剂的所述假定标识与所述评估标识是否匹配的结果。在一些方面中，所述信号系统配置成在所述组织学染色剂的所述假定标识与所述评估标识不匹配时、在所述组织学染色剂的质量低于预定阈值时、或在所述组织学染色剂的质量低于用户指定的阈值时警告所述用户。
在其它方面中，所述系统的在其内测量组织学染色剂的吸收光谱的预定义范围为200nm到800nm或在200nm到800nm内、为500nm到700nm或在500nm到700nm内、为600nm到700nm或在600nm到700nm内、为640nm到670nm或在640nm到670nm内、为500nm到550nm或在500nm到550nm内、或为200nm到400nm或在200nm到400nm内。在一些方面中，所述预定义范围包括两个或更多个预定义子范围，其包括例如，为500nm到700nm或在500nm到700nm内的第一预定义子范围、和为200nm到400nm或在200nm到400nm内的第二预定义子范围。
在其它方面中，所述系统的分光光度计配置成以至少1nm或至少0.5nm的分辨率测量所述吸收光谱。
在其它方面中，所述系统的库包括针对迈格林华的在基本656nm处的参考波长吸光度峰值、或针对瑞氏-吉姆萨的在基本659nm处的参考波长吸光度峰值。
本公开的方面包括一种用于评估在组织学分析仪中使用的组织学染色剂的系统，所述系统包括：吸光度分析仪，所述吸光度分析仪包括：i)分光光度计，所述分光光度计配置成在预定义范围内测量所述组织学染色剂的吸收光谱；和ii)可移动的计算机可读存储介质，所述可移动的计算机可读存储介质配置成存储所测量的光谱；和组织学分析仪，所述组织学分析仪包括：i)用于多种组织学染色剂的参考峰值吸光度波长的库；ii)端口，所述端口配置成接收所述可移动的计算机可读存储介质且上传所测量的光谱；iii)光谱处理电路，所述光谱处理电路配置成：1)从所测量的光谱识别一个或多个峰值吸光度波长；以及2)将所述一个或多个峰值吸光度波长与所述库进行比较以进行所述组织学染色剂的评估；以及iv)信号系统，所述信号系统配置成报告所述评估的结果。
在其它方面中，所述系统的报告包括染色剂特定信息，其包括：所述组织学染色剂的标识、所述组织学染色剂的质量、一个或多个峰值吸光度波长、在所述预定义范围或其一部分内的一个或多个吸光度测量、或其组合。在一些方面中，所述报告包括对组织学染色剂的标识的确定或对组织学染色剂的质量的确定。
在其它方面中，所述系统的吸光度分析仪或组织学分析仪或二者包括用户界面，所述用户界面配置成用于用户输入所述组织学染色剂的假定标识。在一些方面中，所述光谱处理电路配置成将所述组织学染色剂的所述假定标识与所述组织学染色剂的评估标识相比较，以及输出关于所述组织学染色剂的所述假定标识与所述评估标识是否匹配的结果。
在其它方面中，所述系统包括信号系统，所述信号系统配置成在所述组织学染色剂的所述假定标识与所述评估标识不匹配时、在所述组织学染色剂的质量低于预定阈值时、或在所述组织学染色剂的质量低于用户指定的阈值时警告所述用户。
在其它方面中，所述系统的在其内测量吸收光谱的预定义范围为200nm到800nm或在200nm到800nm内、为500nm到700nm或在500nm到700nm内、为600nm到700nm或在600nm到700nm内、为640nm到670nm或在640nm到670nm内、为500nm到550nm或在500nm到550nm内、或为200nm到400nm或在200nm到400nm内。在一些方面中，所述预定义范围包括两个或更多个预定义子范围，其包括例如，为500nm到700nm或在500nm到700nm内的第一预定义子范围、和为200nm到400nm或在200nm到400nm内的第二预定义子范围。
在其它方面中，所述系统的分光光度计配置成以至少1nm或至少0.5nm的分辨率测量所述吸收光谱。
在其它方面中，所述系统的库包括针对迈格林华的在基本656nm处的参考波长吸光度峰值、针对瑞氏-吉姆萨的在基本659nm处的参考波长吸光度峰值。
本公开的方面包括一种非暂时性计算机可读介质，所述非暂时性计算机可读介质存储用于多种组织学染色剂的参考峰值吸光度波长的库。在一些方面中，所述库包括用于多种组织学染色剂的多个光谱偏移值、和/或用于多种组织学染色剂的多个半最大吸光度处峰宽值。在一些方面中，所述库的组织学染色剂包括罗曼诺夫斯基染色剂，其包括例如瑞氏-吉姆萨、迈格林华、和/或迈格林华-吉姆萨。
本公开的方面包括一种存储指令的非暂时性计算机可读介质，所述指令在被计算设备执行时使所述计算设备执行如下步骤：a)将一个或多个输入的峰值吸光度波长与用于多种组织学染色剂的参考峰值吸光度波长的库相比较；以及b)基于所述比较确定所述多种组织学染色剂中的哪种组织学染色剂匹配所述一个或多个输入的峰值吸光度波长。在一些方面中，所述非暂时性计算机可读介质还包括所述库。
在其它方面中，所述非暂时性计算机可读介质的库包括用于多种组织学染色剂的多个参考光谱偏移值，以及由所述指令引起的比较包括将一个或多个输入光谱偏移值与所述库进行比较。
在其它方面中，所述非暂时性计算机可读介质的库包括用于多种组织学染色剂的多个参考的半最大吸光度处峰宽值，以及由所述指令引起的比较包括将一个或多个输入的半最大吸光度处峰宽值与所述库进行比较。
在其它方面中，所述非暂时性计算机可读介质的库的组织学染色剂包括罗曼诺夫斯基染色剂，其包括例如瑞氏-吉姆萨、迈格林华、和/或迈格林华-吉姆萨。
附图说明
图1提供用于在如本文中所描述的瑞氏-吉姆萨(WG)和迈格林华(MG)染色剂的规格制剂内和不在所述规格制剂内的各种稀释物的处于～655nm的吸光度峰值。
图2提供在WG的规格制剂内和不在WG的规格制剂内所染色的细胞的比较示例图像。
图3提供在MG的规格制剂内和不在MG的规格制剂内所染色的细胞的比较示例图像。
图4A和图4B示出具有各种制剂和浓度的WG染色剂和MG染色剂的吸收光谱。
图5A和图5B示出在其目标制剂的不同浓度下所制备的WG染色剂和MG染色剂的吸收光谱。
图6A和图6B示出在其目标制剂的不同浓度下所制备的WG染色剂和MG染色剂的吸收光谱之间的比较。
图7A和图7B示出对于来自不同供应方的WG染色剂和MG染色剂的光谱，其示出了由于略微不同的制剂所导致的吸收峰值的区别光谱位置。
图8示出对于MG、迈格林华-吉姆萨(MGG)和WG的跨越200nm到800nm的不同光谱，其展示了三种染色剂之间的特殊光谱特性。
定义
如在本文中所使用的术语“分光光度法”和“分光光度”通常指的是涉及使用分光光度计的方法。通过“分光光度计”通常指的是使用光度计测量一个或多个指定的光谱波长的光量的仪器，其中，该一个或多个波长可以为离散波长或颜色(例如，按纳米(nm)测量的单一尺寸的波长)或一系列波长或颜色(包括例如，在光谱的定义范围上测量的多个离散波长)。在分光光度计上测量的光量通常涉及穿过介质的光，其中，该介质可以为感兴趣的物质，针对该物质确定分光光度。穿过介质的光的定量测量通常用吸光度来表达或被称为吸光度。然而，在一些实例中，分光光度测量也可以被称为反射率、透射率等或用反射率、透射率等来表达。从分光光度计获得的定量测量可以为原始或全部或绝对测量(例如绝对吸光度)或该测量可以为相对测量，例如百分比或比率，包括例如参考值或控制测量的百分比(例如，百分比吸光度、百分比透射率等)。
如在本文中所使用的术语“多个光谱”和“光谱”通常指的是在可见范围和相邻范围内的电磁辐射的波长或颜色的集合或波段，上述范围包括但不限于例如紫外可见(UV-vis)范围、可见范围(紫外线范围、近紫外线范围、紫光范围、蓝光范围、绿光范围、黄光范围、橙光范围、红光范围、红外线范围、近红外线范围、中红外线范围、远红外线范围等)。在一些实例中，光谱可以指的是测量光所横跨的整个波长范围。在一些实例中，光谱可以指的是测量光所横跨的波长范围的一部分。例如，从分光光度计获得的光谱可以反映整个测量的波长范围或测量波长的一部分。
术语“评估”包括任何形式的测量且包括确定元素是否存在。术语“确定”、“测量”、“评价”、“评估”和“鉴定”可互换使用且包括定量与定性确定。评估可以是相对的或绝对的。“评估...的标识”包括确定特定的化合物或制剂或物质的最可能的标识和/或确定预测的化合物或制剂或物质是否存在。“评估...的质量”包括对质量进行定量与定性评估，例如通过确定值与质量已知的参考或标准的比较。
如在本文中所使用的术语“组织学”或“组织学的”通常指的是从多细胞生物体(包括但不限于植物和动物)获得的细胞的细胞解剖学和/或形态学的显微镜分析。因此，“组织学染色剂”指的是在细胞解剖学和/或形态学的分析中所使用的染色剂，以及“组织学分析仪”指的是分析从多细胞动物获得的细胞的解剖学和/或形态学的器具。如在本文中所使用，组织学分析仪将通常指的是使用一种或多种组织学染色剂来进行组织学评估的器具。
如在本文中所使用的术语“细胞学”或“细胞学的”通常指的是组织学的子类，其包括单独细胞、分裂细胞、松散细胞、细胞集群等的显微镜分析。细胞学样品的细胞可以为在一种或多种体液中或从一种或多种体液获得的细胞。因此，“细胞学染色剂”指的是在单独细胞、分裂细胞、松散细胞、细胞集群等的分析中所使用的染色剂，以及“细胞学分析仪”指的是分析单独细胞、分裂细胞、松散细胞、细胞集群等的解剖学和/或形态学的器具。如在本文中所使用，细胞学分析仪将通常指的是使用一种或多种细胞学染色剂来进行细胞学评估的器具。
如在本文中所使用的术语“体液”通常指的是源自于“生物样品”的流体，该“生物样品”包括从个体或个体群获得的各种各样的样品类型且可以被用在诊断、监测或筛选实验中。该定义涵盖生物起源的血液和其它液体样品。该定义也包括在获得之后以任何方式操纵的样品，诸如通过各个样品的混合或合并、利用试剂的治疗、溶解、或对于特定成分(诸如有核细胞、无核细胞、病原体等)的浓缩。
术语“生物样品”涵盖临床样品，且也包括培养的细胞、细胞上清液、细胞溶解产物、血清、血浆、生物流体、和组织样品。术语“生物样品”包括尿液、唾液、脑脊髓液、间质液、眼内液、滑膜液、血液部分(诸如血浆和血清)等。
如在本文中所使用的术语“输入”用于指将信息输入计算机的任何方式，诸如例如通过使用用户界面。例如，在特定情况下，输入可以涉及选择在计算机系统上已存在的参考光谱或光谱特性或其库。在其它情况下，输入可以涉及将光谱或光谱特性添加到计算机系统，例如通过在能够与计算机交互的设备上测量样品的光谱。输入也可以使用用户界面来完成。
如在本文中所使用，术语“执行”用于指用户启动程序所采取的行动。
术语“控制”、“控制试样”、“控制样品”等指的是采样、试验、或实验或诊断过程或实验设计的其它部分，对此所预期的结果是高确定性已知的，例如，为了指示从相关联的实验样品获得的结果是否为可靠的、指示相关联的实验结果指示真实结果的可信度、和/或允许实验结果的校正。例如，在一些实例中，控制可以为“负控制”试样，从而排除该试样的主要成分，使得实验员可以高度确定该负控制试样将不会产生阳性结果。在一些实例中，控制可以为“正控制”，从而特定试样的所有成分被表征且已知，当组合时，在被执行的该试样中产生特定结果，使得实验员可以高度确定该正控制试样将不会产生阳性结果。控制也可以包括“空白”样品、“标准”样品(例如“黄金标准”样品)、经验证的样品等。
具体实施方式
本公开提供用于评估在组织学分析仪中使用的组织学染色剂的分光光度方法。这些方法应用于各种评估中，包括组织学染色剂的标识的确定、组织学染色剂的质量的确定等。还包括用于实践所描述方法的设备和系统。本公开还提供计算机可读介质，其包含在评估在组织学分析仪中使用的组织学染色剂时有用的组织学染色剂的参考分光光度特性的库。还提供包括指令的计算机可读介质，所述指令使计算设备执行用于进行组织学染色剂的评估的步骤。
在更详细地描述本发明之前，应当理解，本发明不限于所描述的特定实施方式，因此当然可以改变。也应当理解，本文中所使用的术语仅为了描述特定实施方式，且不意图进行限制，因为本发明的范围将仅受限于所附权利要求。
在提供一系列值的情况下，要理解，在该范围的上限与下限之间的每个居中值(到下限单位的十分之一，除非上下文另有明确指示)以及在该规定范围中的任何其它规定值或居中值被包含在本发明内。这些较小范围的上限与下限可以独立地被包括在所述较小范围中以及也被包含在本发明中，受制于在规定范围中的任何明确排除的界限。在规定范围包括所述界限中的一者或两者的情况下，排除那些被包括界限中的任一者或两者的范围也被包括在本发明中。
特定范围在本文中呈现有前面带有术语“大约”的数值。术语“大约”在本文中用于提供对于其后面的准确数字以及靠近或接近该术语后面的数字的数的字面支持。在确定一个数是否靠近或接近明确所列数字时，该靠近或接近的非所列数字可以为在其呈现的上下文中提供明确所列数字的基本等效物的数字。
除非另有限定，否则，本文中所使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域中的普通技术人员所常规理解的含义相同的含义。尽管类似于或等效于本文中所描述的方法和材料的任何方法和材料也可以被用在本发明的实践和测试中，但是现在描述有代表性的说明性方法和材料。
在本说明书中所引用的所有公开物和专利通过引用并入在本文中，犹如每个个体公开物或专利都具体地且单独地被指示为通过引用并入且通过引用并入在本文中以结合所述公开物所陈述的内容来公开和描述方法和/或材料。任何公开物的引用对于其公开而言都在递交日之前且不应当被视为承认本发明无权通过在先发明而先于这类公开物。另外，所提供的公开物的日期可以不同于可能需要独立确认的实际公开日期。
要注意，如在本文中和在所附权利要求中所使用，单数形式“一”、“一个”和“该”包括复数个指示物，除非上下文另有明确指示。还要注意，权利要求可以被起草成排除任何可选元素。因此，该声明意图用作诸如连接权利要求元素的列举的“单独地”、“仅仅”等的排外性术语的使用或“负面”限制的使用的先行基础。
如本领域的技术人员在阅读本公开之后将清楚，本文中所描述且所示出的各个实施方式中的每一者具有分立部件和特征，这些分立部件和特征可以很容易与其它多个实施方式中的任一者的特征分离或组合，而不脱离本发明的范围或精神。任何所列方法可以按所列事件的顺序或按逻辑上可行的任何其它顺序来进行。
方法
本公开包括用于评估在组织学分析仪中使用的组织学染色剂的分光光度方法。本公开的方面包括出于各种目的而使用分光光度计测量主题组织学染色剂的分光光度特性，以识别针对于特定染色剂和/或染色制剂的一个或多个特性。
分光光度特性
感兴趣的分光光度特性包括但不限于一个或多个峰值的位置、一个或多个峰值的宽度、和一个或多个峰值的峰值吸光度。在一些实例中，感兴趣的分光光度特性包括但不限于两个或更多个不同峰值之间的相对峰值特性，包括但不限于光谱的两个或更多个峰值之间的相对位置、光谱的两个或更多个峰值之间的相对峰值吸光度、光谱的两个或更多个峰值之间的相对宽度等。
在不受理论约束的情况下，本公开的方面基于如下发现，特定染色制剂的光谱特性取决于染色剂的单独组分的交互且取决于单独染色剂组分的相对量。例如，染色剂的组分X和组分Y的相对量可以造成在制剂1中相比于制剂2不同的光谱特性，其中，制剂1和制剂2在组分X对组分Y的相对量及其制备模式上不同。因此，即使那些仅具有略微不同的染色剂组分的比率的染色剂，也将在其光谱特性上不同。相应地，每种组织学染色剂制剂具有可测量且用于各种评估的特殊光谱特性。
在一些实例中，特定组织学染色剂或染色制剂的特殊光谱特性可以为通过在分光光度计上测量组织学染色剂的吸收光谱所获得的吸光度峰值的位置。吸光度峰值的位置可以通过各种方法来确定。例如，在本文中所描述的多个实施方式中，吸光度峰值的位置基于峰值的峰值吸光度来确定，其中，如在本文中所使用的术语“峰值吸光度”(也被称为最大吸光度的波长(即λmax))指的是峰值达到其最高的吸光度最大值所处的波长。在其它实例中，峰值位置可以通过除了峰值吸光度以外的手段来确定，包括但不限于例如峰宽的平均值所对应的波长、半最大吸光度处峰宽的平均值所对应的波长、峰宽的中值所对应的波长、半最大吸光度处峰宽的中值所对应的波长等。
在一些实例中，可以考虑到在主峰值的光谱带内存在的任何次峰值或“肩部”而确定峰值位置。在一些实例中，可以在不考虑在主峰值的光谱带内存在的任何次峰值或“肩部”的情况下确定峰值位置。
峰值位置可以用绝对项(包括例如根据峰值波长)来表达。吸光度峰值的绝对位置将根据特定染色制剂改变且范围可以从大约200nm或更少到大约800nm或更多，其包括但不限于例如200nm到800nm、200nm到700nm、200nm到600nm、200nm到500nm、200nm到400nm、300nm到800nm、300nm到700nm、300nm到600nm、300nm到500nm、300nm到400nm、400nm到800nm、400nm到700nm、400nm到600nm、400nm到500nm、500nm到800nm、500nm到700nm、500nm到600nm、500nm到550nm、600nm到800nm、600nm到700nm、600nm到670nm、640nm到700nm、640nm到670nm等。
在一些实例中，吸光度峰值的绝对位置可以为200nm、201nm、202nm、203nm、204nm、205nm、206nm、207nm、208nm、209nm、210nm、211nm、212nm、213nm、214nm、215nm、216nm、217nm、218nm、219nm、220nm、221nm、222nm、223nm、224nm、225nm、226nm、227nm、228nm、229nm、230nm、231nm、232nm、233nm、234nm、235nm、236nm、237nm、238nm、239nm、240nm、241nm、242nm、243nm、244nm、245nm、246nm、247nm、248nm、249nm、250nm、251nm、252nm、253nm、254nm、255nm、256nm、257nm、258nm、259nm、260nm、261nm、262nm、263nm、264nm、265nm、266nm、267nm、268nm、269nm、270nm、271nm、272nm、273nm、274nm、275nm、276nm、277nm、278nm、279nm、280nm、281nm、282nm、283nm、284nm、285nm、286nm、287nm、288nm、289nm、290nm、291nm、292nm、293nm、294nm、295nm、296nm、297nm、298nm、299nm、300nm、301nm、302nm、303nm、304nm、305nm、306nm、307nm、308nm、309nm、310nm、311nm、312nm、313nm、314nm、315nm、316nm、317nm、318nm、319nm、320nm、321nm、322nm、323nm、324nm、325nm、326nm、327nm、328nm、329nm、330nm、331nm、332nm、333nm、334nm、335nm、336nm、337nm、338nm、339nm、340nm、341nm、342nm、343nm、344nm、345nm、346nm、347nm、348nm、349nm、350nm、351nm、352nm、353nm、354nm、355nm、356nm、357nm、358nm、359nm、360nm、361nm、362nm、363nm、364nm、365nm、366nm、367nm、368nm、369nm、370nm、371nm、372nm、373nm、374nm、375nm、376nm、377nm、378nm、379nm、380nm、381nm、382nm、383nm、384nm、385nm、386nm、387nm、388nm、389nm、390nm、391nm、392nm、393nm、394nm、395nm、396nm、397nm、398nm、399nm、400nm、401nm、402nm、403nm、404nm、405nm、406nm、407nm、408nm、409nm、410nm、411nm、412nm、413nm、414nm、415nm、416nm、417nm、418nm、419nm、420nm、421nm、422nm、423nm、424nm、425nm、426nm、427nm、428nm、429nm、430nm、431nm、432nm、433nm、434nm、435nm、436nm、437nm、438nm、439nm、440nm、441nm、442nm、443nm、444nm、445nm、446nm、447nm、448nm、449nm、450nm、451nm、452nm、453nm、454nm、455nm、456nm、457nm、458nm、459nm、460nm、461nm、462nm、463nm、464nm、465nm、466nm、467nm、468nm、469nm、470nm、471nm、472nm、473nm、474nm、475nm、476nm、477nm、478nm、479nm、480nm、481nm、482nm、483nm、484nm、485nm、486nm、487nm、488nm、489nm、490nm、491nm、492nm、493nm、494nm、495nm、496nm、497nm、498nm、499nm、500nm、501nm、502nm、503nm、504nm、505nm、506nm、507nm、508nm、509nm、510nm、511nm、512nm、513nm、514nm、515nm、516nm、517nm、518nm、519nm、520nm、521nm、522nm、523nm、524nm、525nm、526nm、527nm、528nm、529nm、530nm、531nm、532nm、533nm、534nm、535nm、536nm、537nm、538nm、539nm、540nm、541nm、542nm、543nm、544nm、545nm、546nm、547nm、548nm、549nm、550nm、551nm、552nm、553nm、554nm、555nm、556nm、557nm、558nm、559nm、560nm、561nm、562nm、563nm、564nm、565nm、566nm、567nm、568nm、569nm、570nm、571nm、572nm、573nm、574nm、575nm、576nm、577nm、578nm、579nm、580nm、581nm、582nm、583nm、584nm、585nm、586nm、587nm、588nm、589nm、590nm、591nm、592nm、593nm、594nm、595nm、596nm、597nm、598nm、599nm、600nm、601nm、602nm、603nm、604nm、605nm、606nm、607nm、608nm、609nm、610nm、611nm、612nm、613nm、614nm、615nm、616nm、617nm、618nm、619nm、620nm、621nm、622nm、623nm、624nm、625nm、626nm、627nm、628nm、629nm、630nm、631nm、632nm、633nm、634nm、635nm、636nm、637nm、638nm、639nm、640nm、641nm、642nm、643nm、644nm、645nm、646nm、647nm、648nm、649nm、650nm、651nm、652nm、653nm、654nm、655nm、656nm、657nm、658nm、659nm、660nm、661nm、662nm、663nm、664nm、665nm、666nm、667nm、668nm、669nm、670nm、671nm、672nm、673nm、674nm、675nm、676nm、677nm、678nm、679nm、680nm、681nm、682nm、683nm、684nm、685nm、686nm、687nm、688nm、689nm、690nm、691nm、692nm、693nm、694nm、695nm、696nm、697nm、698nm、699nm、700nm、701nm、702nm、703nm、704nm、705nm、706nm、707nm、708nm、709nm、710nm、711nm、712nm、713nm、714nm、715nm、716nm、717nm、718nm、719nm、720nm、721nm、722nm、723nm、724nm、725nm、726nm、727nm、728nm、729nm、730nm、731nm、732nm、733nm、734nm、735nm、736nm、737nm、738nm、739nm、740nm、741nm、742nm、743nm、744nm、745nm、746nm、747nm、748nm、749nm、750nm、751nm、752nm、753nm、754nm、755nm、756nm、757nm、758nm、759nm、760nm、761nm、762nm、763nm、764nm、765nm、766nm、767nm、768nm、769nm、770nm、771nm、772nm、773nm、774nm、775nm、776nm、777nm、778nm、779nm、780nm、781nm、782nm、783nm、784nm、785nm、786nm、787nm、788nm、789nm、790nm、791nm、792nm、793nm、794nm、795nm、796nm、797nm、798nm、799nm或800nm。
在一些实例中，峰值位置可以用相对项来表达，该相对项包括例如峰值相对于参考峰值的位置，例如在不同染色剂、染色制剂或染色剂组分中。例如，峰值位置可以相对于标准染色制剂来表达，该标准染色制剂包括但不限于例如染色的验证制剂、染色的目标制剂、染色的参考制剂、染色的规格下限制剂、染色的规格上限制剂等。在一些实例中，与测量峰值相比较的参考峰值为同一染色剂或同一染色制剂的更早测量，包括例如，随着时间访问峰值的稳定性和/或不稳定性(例如降级)。
在某些实例中，可以鉴于移位或光谱移位来描述峰值的相对位置。如在本文中所使用，术语“移位”或“光谱移位”在涉及吸光度峰值时指的是测量的光谱峰值位置相比于参考峰值位置的差异。在一些实例中，光谱移位也可以指的是在峰值的峰值吸光度位置改变或不改变的情况下向更大或更小吸光度的移位。因此，在所描述的术语内涵盖的光谱移位包括但不限于例如正移位(向更长波长的移位)、负移位(向更短波长的移位)及其组合。在一些实例中，可以关于光的波长的颜色描述移位，观察朝向该光的移位，包括例如远红光移位、红光移位、橙光移位、黄光移位、绿光移位、蓝光移位、紫光移位、紫外线移位等。
光谱移位可以表示相比于参考波长的波长的增大(即，正移位、向更长波长的移位等)或减小(负移位t、向更短波长的移位等)。光谱移位的量将取决于具体组织学染色剂的制剂和与其相比较的参考峰值。因此，被测峰值的光谱移位的范围可以从小于-10nm到10nm或更多，包括但不限于例如-10nm到10nm、-10nm到9nm、-10nm到8nm、-10nm到7nm、-10nm到6nm、-10nm到5nm、-10nm到4nm、-10nm到3nm、-10nm到2nm、-10nm到1nm、-9nm到10nm、-8nm到10nm、-7nm到10nm、-6nm到10nm、-5nm到10nm、-4nm到10nm、-3nm到10nm、-2nm到10nm、-1nm到10nm、-9nm到9nm、-8nm到8nm、-7nm到7nm、-6nm到6nm、-5nm到5nm、-4nm到4nm、-3nm到3nm、-2nm到2nm、-1nm到1nm、0nm到1nm、-1nm到0nm等。光谱移位通常将具有±20nm或更少的上限，包括但不限于例如±19nm或更少、±18nm或更少、±17nm或更少、±16nm或更少、±15nm或更少、±14nm或更少、±13nm或更少、±12nm或更少、±11nm或更少、或±10nm或更少。光谱移位通常将具有±1或更多的下限。
在一些实例中，被测峰值的光谱移位可以为-10nm、-9nm、-8nm、-7nm、-6nm、-5nm、-4nm、-3nm、-2nm、-1nm、1nm、2nm、3nm、4nm、5nm、6nm、7nm、8nm、9nm或10nm。
在一些实例中，峰值位置可以相对于染色剂组分的吸光度峰值(例如被测或预期吸光度峰值)来表达，或光谱移位可以使用染色剂组分的吸光度峰值(例如被测或预期吸光度峰值)来计算。例如，具有两个或更多个染色剂组分的染色制剂可以具有相对于染色剂的一个组分表达的吸光度峰值。如上所述，染色剂的单独组分影响染色剂的整体光谱特性，从而染色制剂的吸光度峰值可以不同于染色剂的单独组分的吸光度峰值。例如，染色制剂的峰值可以不同于染色剂组分的预期或被测峰值达1纳米(nm)或更多、高达且包括20nm，其包括但不限于例如，多于1nm不同、多于2nm不同、多于3nm不同、多于4nm不同、多于5nm不同、多于6nm不同、多于7nm不同、多于8nm不同、多于9nm不同、多于10nm不同等。
在一些实例中，染色制剂的峰值可以具有从染色剂组分的预期或被测峰值的光谱移位，其范围从-10nm到10nm，包括但不限于例如-10nm到9nm、-10nm到8nm、-10nm到7nm、-10nm到6nm、-10nm到5nm、-10nm到4nm、-10nm到3nm、-10nm到2nm、-10nm到1nm、-9nm到10nm、-8nm到10nm、-7nm到10nm、-6nm到10nm、-5nm到10nm、-4nm到10nm、-3nm到10nm、-2nm到10nm、-1nm到10nm、-9nm到9nm、-8nm到8nm、-7nm到7nm、-6nm到6nm、-5nm到5nm、-4nm到4nm、-3nm到3nm、-2nm到2nm、-1nm到1nm、0nm到1nm、-1nm到0nm等。
在一些实例中，染色制剂的峰值可以具有从染色剂组分的预期或被测峰值的光谱移位，其为-10nm、-9nm、-8nm、-7nm、-6nm、-5nm、-4nm、-3nm、-2nm、-1nm、1nm、2nm、3nm、4nm、5nm、6nm、7nm、8nm、9nm或10nm。
在一些实例中，特定组织学染色剂或染色制剂的特殊光谱特性可以为通过在分光光度计上测量组织学染色剂的吸收光谱所获得的一个或多个峰值的宽度。任何便利的峰宽测量可以用作特定组织学染色剂或染色制剂的特殊光谱特性，假定宽度测量足以区别组织学染色剂或染色制剂。例如，在任何便利的吸光度值下测量峰宽，假定在所选吸光度值下的峰宽将该组织学染色剂或染色制剂区别于其它组织学染色剂或染色制剂。
峰宽测量可以为绝对的或相对的，这取决于执行的测量、获取的光谱、待进行的比较等。例如，绝对峰宽测量可以鉴于按纳米(nm)测量的波长来表达且可以在特定吸光度等级下基于处于峰值的第一边缘的波长与处于峰值的第二边缘的波长之间的差来计算。例如，可以通过在吸光度值Y下确定处于峰值的第一边缘的波长与处于峰值的第二边缘的波长之间的差而在针对第一峰值的吸光度Y下计算峰宽Xnm。可以在各种吸光度值下针对光谱的任何峰值或峰值组合来执行类似计算。在一些实例中，通过覆盖不同染色剂和/或不同染色制剂的各种光谱来推动峰宽的确定，例如，如图7A所示。普通技术人员将很容易理解，可以针对来自一个或多个光谱的两个或更多个峰值计算且比较峰宽，不管光谱是否被覆盖。
由于光谱内的单独峰值的形状将随着不同染色剂、不同制剂、不同试验条件等而改变，因此计算峰宽所处的最佳吸光度也将改变。在一些实例中，吸光度可以基于峰值的实际测量的吸光度，例如，由分光光度计返回的原始吸光度值。在其它实例中，吸光度可以基于峰值的相对吸光度，例如，表达为峰值的最大吸光度的比例，包括但不限于例如10％最大吸光度、20％最大吸光度、25％最大吸光度、30％最大吸光度、40％最大吸光度、50％最大吸光度(即最大吸光度的一半)、60％最大吸光度、70％最大吸光度、75％最大吸光度、80％最大吸光度、90％最大吸光度等。普通技术人员将很容易理解，在针对具有不同最大吸光度值的两个峰值进行峰宽测量之间的比较的情况下，可以根据测量的特定背景使用所述峰值的相对吸光度或者所述峰值的实际或相对吸光度的某种归一化。
在一些实例中，特定组织学染色剂或染色制剂的特殊光谱特性可以为通过在分光光度计上测量组织学染色剂的吸收光谱所获得的峰值吸光度值。在一些实例中，峰值吸光度值可以基于峰值的实际测量的吸光度，例如，在各种波长下由分光光度计返回的原始吸光度值。在其它实例中，峰值吸光度值可以基于峰值的相对吸光度，例如，表达为相比于参考样品的比例吸光度，包括例如，参考样品(例如，“空白”样品、“已知”样品、“参考标准”、验证染色剂的吸光度等)的最大吸光度。例如，相对峰值吸光度值可以被表达为测量或存储的参考值的比例，包括但不限于例如10％参考吸光度、20％参考吸光度、25％参考吸光度、30％参考吸光度、40％参考吸光度、50％参考吸光度、60％参考吸光度、70％参考吸光度、75％参考吸光度、80％参考吸光度、90％参考吸光度等。普通技术人员将很容易理解，在针对具有不同最大吸光度峰值位置的两个峰值进行峰值吸光度值之间的比较的情况下，可以根据测量的特定背景使用所述峰值的相对峰值吸光度值或所述峰值的实际或相对峰值吸光度值的某种归一化。相应地，在一些实例中，在如本文中所描述的评估中可以使用针对来自两种不同染色剂、两种不同染色制剂、或在不同时刻获取的同一染色剂的对应峰值的两个峰值吸光度值之间的测量差。
将通常在定义的光谱范围内测量特殊光谱特性。在一些实例中，定义的光谱范围可以包括从分光光度计获得的全部波长测量(即整个光谱)。在其它实例中，定义的光谱范围可以包括从分光光度计获得的波长测量的一部分(即局部光谱)。光谱范围可以例如基于预期辨别光谱特性的已知光谱范围来预定义、或可以在待比较的两种或更多种染色剂的整体光谱扫描之后来确定。在一些实例中，可以将预定义范围用于初始测量，以及可以在初始测量之后使用一个或多个后续范围，例如，初始测量触发一个或多个后续范围的使用。
有用的光谱范围将根据待区别的具体染色剂和/或染色制剂以及在光谱内辨别的光谱特性的一个或多个位置而改变。因此，根据如本文中所描述的方法测量吸光度所在的光谱范围可以从大约200nm或更少变化到大约800nm或更多，其包括但不限于例如200nm到800nm、200nm到700nm、200nm到600nm、200nm到500nm、200nm到400nm、300nm到800nm、300nm到700nm、300nm到600nm、300nm到500nm、300nm到400nm、400nm到800nm、400nm到700nm、400nm到600nm、400nm到500nm、500nm到800nm、500nm到700nm、500nm到600nm、500nm到550nm、600nm到800nm、600nm到700nm、600nm到670nm、640nm到700nm、640nm到670nm等。
将如普通技术人员所理解，被测光谱的分辨率将为足以辨别两种或更多种染色剂和/或两种或更多种染色制剂的光谱特性的分辨率。相应地，所需的光谱分辨率将取决于待进行的评估和待测量的一个或多个光谱特性。例如，在待辨别的两种染色剂或两种染色制剂之间的光谱特性在波长上不同(例如，2nm或更少)的一些实例中，光谱分辨率将至少为1nm或更少。相应地，可以采用任何合适的光谱分辨率，假定该分辨率足以进行预期的分辨。因此，合适的光谱分辨率可以包括但不限于例如至少10nm、至少9nm、至少8nm、至少7nm、至少6nm、至少5nm、至少4nm、至少3nm、至少2nm、至少1.0nm等。
在一些实例中，在具体波长下获得光谱特性而不使用光谱范围。例如，可以使用预定的具体波长(例如基于预期辨别光谱特性的已知波长)来获得在进行如本文中所描述的评估时有用的吸光度数据。
分光光度计
任何便利的分光光度计可以应用于根据如本文中所描述的方法进行分光光度测量，假定该分光光度计适合于在光谱范围内测量吸光度，在该光谱范围内存在主题染色剂的有辨识力的分光光度特性。在最低限度上，适合于用在所描述方法中的分光光度计将包括：光源，该光源能够产生适合于分光光度测量的光；样品分析区，该样品分析区配置成将样品定位在由光源产生的光的通路中；以及检测器(例如光电二极管)，该检测器适合于检测由光源产生的、穿过样品的光。另外，合适的分光光度计也可以包括附加光学部件，所述附加光学组件用于光的操纵，例如，在穿过样品之前的所产生光的操纵(例如，过滤器、准直仪、偏光器、镜子(例如分色镜)、棱镜、透镜等)或透射穿过样品的光的操纵(例如，镜子、放大器等)。在分光光度计内对信号的检测通常涉及将光信号(例如透射穿过样品的光)转换为电信号，从而测量结果可以被显示(例如在数字显示器上)、被存储在电子存储器中、或以其它方式被提供给用户(例如，打印为纸件报告)或被传送到其它下游部件。
在一些实例中，该方法可以包括使用外部分光光度计来测量组织学染色剂的吸光光谱。通过“外部”指的是不在组织学分析仪内的分光光度计。
在某些实施方式中，外部分光光度计可以为单机分光光度计。任何便利的单机分光光度计可以应用于如本文中所描述的方法，假定该单机分光光度计能够在合适的一个或多个光谱范围上进行吸光度测量。例如，在一些实例中，合适的单机分光光度计将包括但不限于例如那些在商业上从如下供应方可购得的单机分光光度计：ABB(www(dot)abb(dot)com)、Agilent(www(dot)agilent(dot)com)、Analytik Jena(www(dot)analytik-jena(dot)com)、Aurora Biomed(www(dot)aurorabiomed(dot)com)、B&W Tek(www(dot)bwtek(dot)com)、BaySpec(www(dot)bayspec(dot)com)、Beckman Coulter(www(dot)beckmancoulter(dot)com)、Biochrom(www(dot)biochrom(dot)co(dot)uk)、BioTek(www(dot)biotek(dot)com)、Bruker(www(dot)bruker(dot)com)、Buck Scientific(www(dot)bucksci(dot)com)、BWB Technologies(www(dot)bwbtech(dot)com)、Cecil Instruments(www(dot)cecilinstruments(dot)com)、CRAIC(www(dot)microspectra(dot)com)、Eppendorf(www(dot)eppendorfna(dot)com)、GBC Scientific(www(dot)gbcscientific(dot)com)、GE Healthcare(www(dot)gelifesciences(dot)com)、Hach(www(dot)hach(dot)com)、Hamamatsu Photonics(www(dot)hamamatsu(dot)com)、Hitachi HighTechnologies(www(dot)hitachi-hta(dot)com)、HORIBA Scientific(www(dot)horiba(dot)com/scientific)、JASCO(www(dot)jascoinc(dot)com)、Malvern Instruments(www(dot)malvern(dot)com)、Newport(www(dot)newport(dot)com)、Ocean Optics(www(dot)oceanoptics(dot)com)、PerkinElmer(www(dot)perkinelmer(dot)com)、Renishaw(www(dot)renishaw(dot)com)、Rigaku Raman(www(dot)rigakuraman(dot)com)、SciAps(http(colon)//sciaps(dot)com)、S.I.Photonics(www(dot)si-photonics(dot)com)、Shimadzu(www(dot)shimadzu(dot)com)、Tec5USA(www(dot)tec5usa(dot)com)、Thermo FisherScientific(www(dot)thermoscientific(dot)com)等。
在一些实例中，该方法可以包括使用内部分光光度计来测量组织学染色剂的吸光光谱。通过“内部”指的是在组织学分析仪内的分光光度计。在这类实例中，内部分光光度计可以共享组织学分析仪的一个或多个部件，意味着组织学分析仪和分光光度计均在一个或多个过程中使用公共部件同时执行其正常功能。在内部分光光度计与封装该内部分光光度计的组织学分析仪之间的共享部件可以改变且在一些实例中可以包括但不限于例如试剂、液体或样品处理部件，电源部件、试剂存储部件、数据传送部件、数据存储部件、数据处理部件、数据输出部件、显示部件、用户界面部件等。在一些实例中，内部分光光度计可以由在商业上可购得的部件来组装，假定组装的分光光度计能够在合适的一个或多个光谱范围上进行吸光度测量。
有用的外部分光光度计或其部件(例如，用在内部分光光度计中)可以包括那些在商业上从例如如下公司购得的分光光度计：Hitachi(包括例如型号U-0080D、U-1900、U-2900/2910、U-3900/3900H等或其部件)、Analytik Jena AG(包括例如型号SPECORD 200/250/50/40/S 600/S 300UV VIS、SPEK 2000、SPEKOL 1300等或其部件)、PerkinElmer(包括例如型号LAMBDA 1050、950、850、750、650、25、35、45、XLS、XLS+等或其部件)、Varian(包括例如型号Cary 4000、Cary 100、Cary 5000、Cary 6000i等或其部件)、BioTek Instruments(包括例如型号时代微型板块分光光度计、PowerWaveXS、PowerWaveHT等或其部件)、CecilInstruments(包括例如型号系列1000UV/可见、Super Aurius、Aurius UV/可见、BioQuest、GeneQuest、DietQuest、ReflectaScan Reflectance、Aquarius、AquaQuest等或其部件)、Shimadzu(包括例如型号UVmini-1240、UV-2550、UV-1800、UV-3600等或其部件)、Jasco(包括例如型号V-660、V650、V630、V-670等或其部件)、Thermo Scientific(包括例如型号NanoDrop 2000c、2000、8000等或其部件)、S.I.Photonics(包括例如型号420、440等或其部件)、Hach(包括例如型号DR 5000或其部件)、Beckman Coulter(包括例如型号DU800、DU720/730等或其部件)、Agilent(包括例如型号8453UV-Vis分光光度计或其部件)、Jenway(包括例如型号6800、6705、6715等或其部件)、Aurora(包括例如型号UV-VIS 230或其部件)等。
在一些实例中，外部分光光度计(包括其部件)和/或内部分光光度计或其部件可以部分地或总体地包括在美国专利No.8,638,433、No.8,502,969、No.8,189,199、No.8,115,922、No.8,049,884、No.7,932,095、No.7,787,120、No.7,359,049、No.7,262,844、No.6,643,016、No.5,162,868中所描述的那些分光光度计及相关部件，上述美国专利的全部公开内容通过引用并入在本文中。
在分光光度计上测量组织学染色剂的光谱之前，可以制备组织学染色剂或其样品以供分析。用于染色剂或其样品的分析的制备可以包括将该染色剂的等分试样传送到与分光光度计兼容的分析容器。兼容性分析容器将根据采用的特定分光光度计和待测试的样品的体积而改变。在一些实例中，合适的分析容器包括但不限于例如吸收池、毛细管和多孔板。相应地，将等分试样传送到分析容器可以通过任何合适方法来执行，包括但不限于例如，将样品用移液管移到容器中，将样品泵送到容器中或穿过容器(例如通过正压力)、通过毛细管作用传送样品、通过负压力传送样品、通过重力传送样品等。
在一些实例中，可以在传送到分析容器之前、期间或之后稀释样品。例如，在一些实例中，可以在传送到分析容器之前将合适的稀释物添加到样品，包括但不限于例如在稀释容器或混合容器中。在一些实例中，可以在传送到分析容器期间将合适的稀释物添加到样品，包括但不限于例如，合适的稀释物在添加样品之前存在于分析容器中以及在分析容器中与稀释物混合时稀释样品。在一些实例中，可以在传送到分析容器之后将合适的稀释物添加到样品，包括但不限于例如，将样品添加到空的分析容器以及在样品存在后将合适的稀释物添加到分析容器。
合适的稀释物将根据待执行的光谱学测量的性质和待分析的具体组织学染色剂而改变。例如，在一些实例中，合适的稀释物可以为水溶性溶剂，包括但不限于例如水、磷酸盐缓冲盐水(Phosphate Buffered Saline，PBS)、用缓血酸胺缓冲液(Tris-BufferedSaline，TBS)等。在一些实例中，合适的稀释物可以为有机溶剂，包括但不限于例如乙醇、甲醇、异丙醇、三氯甲烷等。在一些实例中，合适的稀释物可以为待分析的染色剂的主要溶剂。
任何便利的稀释可应用于如本文中所描述的方法，假定稀释允许在分光光度计上测量稀释染色剂时区分光谱特性的分光光度检测。合适的稀释将根据染色剂的初始浓度、待分析的等分试样的体积、待使用的特定分光光度计等而改变。在一些实例中，合适的稀释可以包括但不限于例如大约1:1、大约1:2、大约1:4、大约1:5、大约1:10、大约1:15、大约1:20、大约1:25、大约1:30、大约1:40、大约1:50、大约1:60、大约1:70、大约1:75、大约1:80、大约1:90、大约1:100、大约1:150、大约1:200、大约1:250、大约1:300、大约1:400、大约1:500、大约1:600、大约1:700、大约1:750、大约1:800、大约1:900、大约1:1000、大约1:1500、大约1:2000等。
在一些实例中，该方法可以包括：在分光光度计上的吸光度测量之前制备两种或更多种稀释或稀释系列，以在两种或更多种稀释下产生用于组织学染色剂的多个吸收光谱。
组织学染色剂
本公开包括通过在分光光度计上测量在组织学分析仪中使用的组织学染色剂的吸光光谱而评估该组织学染色剂的方法。如在本文中所使用，组织学染色剂指的是在从多细胞生物体获得的细胞的细胞解剖学和/或形态学的显微镜分析中所使用的那些染色剂。组织学染色剂通常包括将一种或多种细胞类型和/或一种或多种细胞类型的组分染色成对比色的至少一种染料。组织学染色剂也可以包括将多个细胞的其余部分或该细胞的其余部分染色成不同颜色的至少一种反染料。组织学技术、染料和染色方法是熟知的且包括但不限于在科尔曼(Kierman)中所描述的那些组织学技术、染料和染色方法。组织学方法和组织化学方法：理论与实践(Histological and histochemical methods:Theory andpractice)。牛津：Butterworth/Heinemann，1999以及Bancroft和Stevens。组织学技术的理论与实践(Theory and practice of histological techniques)。纽约(N.Y.)：ChurchillLivingstone，1996；其全部公开内容通过引用并入在本文中。
组织学染色技术可以为明确的，以明确的方式对一个或多个特定细胞进行染色，或非明确的，以相同或相似的方式对基本全部细胞或大多数细胞进行染色。组织学染色剂包括但不限于例如阿尔新蓝染色剂、苯胺蓝染色剂、偶氮卡红染色剂、比布列希猩红-酸性品红染色剂、石炭酸品红染色剂、铬明矾/苏木素染色剂、刚果红染色剂、结晶紫染色剂、闪电红染色剂、苏木紫和曙红(H&E)染色剂、铁矾苏木精染色剂、依思明蓝/曙红染色剂、詹纳尔染色剂、马洛里的磷钨酸苏木精(Phosphotungstic Acid Hematoxylin，PTAH)染色剂、马洛里的三色染色剂、马森染色剂、孔雀绿染色剂、吡罗红(Methyl Green-Pyronin，MGP)染色剂、焦油紫和亚甲蓝染色剂、焦油紫染色剂、油红O染色剂、地衣红染色剂、锇酸染色剂、四氧化锇染色剂、帕氏染色剂、过碘酸-希夫(Periodic Acid-Schiff，PAS)染色剂、网硬素染色剂、罗曼诺夫斯基染色剂、番红O染色剂、银染色剂、苏丹黑和锇染色剂、甲苯胺-蓝染色剂、三色AB、三色LG、锥虫蓝染色剂、范基林染色剂、费尔霍夫染色剂、威格特的间苯二酚-品红染色剂等。
在组织学染色剂中包括的染料将根据染色制剂和预期的染色结果而改变。在一些实例中，在组织学染色剂中使用的染料可以包括但不限于例如洋红酸钙盐、酸性品红、阿尔新蓝、茜素红、苯胺蓝、苯胺蓝二铵盐、金胺O染料、天青、天青A氯化物、天青B、碱性品红、俾斯麦棕Y、亮甲酚蓝、亮绿、胭脂红、刚果红、甲酚紫乙酸盐、结晶紫、达罗红、曙红、曙红B、曙红Y、曙红Y二钠盐、赤藓红B、新品酸性红、乙基曙红、固绿FCF、苏木精、靛蓝胭脂红、詹纳斯绿B、浅绿SF淡黄、孔雀石绿草酸盐、甲基蓝、甲基绿、甲基绿氯化锌、甲基橙、甲基紫2B、亚甲蓝、亚甲紫(亚甲基青莲)、中性红、苯胺黑、尼罗蓝A、油红O、橙黄G、金黄粉、苔红素、荧光桃红B染料、派洛宁B、派洛宁G、派洛宁Y、刃天青钠、虎红钠盐、番红O、苏丹黑B、苏丹红III、苏丹红IV、硫堇醋酸盐、甲苯胺、甲苯胺蓝O等。
在一些实例中，在主题方法中评估的组织学染色剂包括罗曼诺夫斯基染色剂。罗曼诺夫斯基染色剂通常为由各种组分组成的中性染料，各种组分包括但不限于亚甲蓝(例如天青B)和曙红(例如曙红Y)染料。天青为凝固酸核且形成蓝紫色的基本染料。曙红为附着到产生红着色的碱性细胞质的酸性染料。罗曼诺夫斯基染色剂改变且包括各种制剂，其包括含有各种天青和曙红衍生物的那些制剂。罗曼诺夫斯基染色剂及其染色机制是熟知的且在例如Horobin和Walter的Histochemistry(1987)86:331-336；Marshall等人的J ClinPathol(1978)31(3):280-2；Marshall等人的J Clin Pathol.(1975)28(11):920-3；J ClinPathol(1975)28(8):680-5中被描述，其公开内容通过引用并入在本文中。
罗曼诺夫斯基染色剂包括但不限于吉姆萨染色剂、瑞氏染色剂、瑞氏-吉姆萨染色剂、詹纳尔染色剂、詹纳尔-吉姆萨染色剂、利什曼染色剂、迈格林华染色剂、迈格林华-吉姆萨染色剂等。每种罗曼诺夫斯基染色剂可以存在于各种制剂中，要么来源于各种不同的处方、要么由各种供应方提供。罗曼诺夫斯基染色制剂可以包括各种染色剂组分，包括但不限于例如亚甲蓝、天青A、天青B、天青C、甲苯胺蓝、硫堇、亚甲紫、亚甲基青莲、甲基托布津、托布津、曙红、曙红Y、三溴荧光素、荧光素、噻嗪染料等。罗曼诺夫斯基染色制剂可以包括用于溶解染色剂组分的各种溶剂，包括水性溶剂和有机溶剂，包括但不限于例如水和醇，包括但不限于例如甲醇、乙醇、异丙醇等。
在不受理论约束的情况下，罗曼诺夫斯基染色剂的组分(包括染料组分、溶剂等)的特定比以及组织学染色剂通常被视为影响染色剂组分的交互以产生利用每种染色剂制备的细胞的特定着色。源自于染色制剂的颜色为这些交互的结果且因此比单独组分的简单叠加结果更为复杂。本公开描述了如何发现这些复杂交互导致染色剂的单独组分的吸光度峰值中的移位，形成针对于每种染色制剂的峰值轮廓。相应地，可以基于所描述的光谱学方法来区分甚至非常类似的染色剂，包括例如，无法用人眼区分的那些染色剂和类型相同但来自不同厂家的那些染色剂。
在一些实例中，待评估或区分的组织学染色剂包括罗曼诺夫斯基染色剂，包括但不限于例如瑞氏-吉姆萨、迈格林华、和迈格林华-吉姆萨。评估的组织学染色剂包括血液染色剂、细胞染色剂等。本公开的组织学染色剂包括在组织学分析仪中使用的那些染色剂，该组织学分析仪包括例如自动组织学分析仪、自动细胞学分析仪、自动血液学分析仪等。本公开的组织学分析仪包括但不限于例如在商业上从Abbott Laboratories和/或AbbottDiagnostics(包括例如CELL-DYN系统等)、从Sysmex(包括例如Sysmex DI60系统、CellaVision DM1200系统、和CellaVision DM9600系统等)、从MEDICA(包括例如EasyCell系统等)、从Horiba(包括例如Pentra系统和Micros系统等)、从Siemens(包括例如ADVIA系统和Kematek系统等)、从Beckman Coulter(包括例如UniCel系统等)等可购得的那些组织学分析仪。
组织学染色剂及其组分包括在商业上从这类供应方可购得的那些组织学染色剂及其组分，所述供应方包括但不限于例如Sigma Aldrich公司、Thermo Fisher Scientific公司、Avantor Proformance Materials公司、VWR International公司、Polysciences公司等。
库
本公开包括通过如下方式测量组织学染色剂的方法：测量组织学染色剂的吸收光谱、以及将组织学染色剂的一个或多个光谱特性与用于多种组织学染色剂和/或组织学染色剂制剂的光谱特性的库相比较。本文中所描述的库可以包括用于任何或全部组织学染色剂的任何或全部光谱特性。在一些实例中，本文中所描述的库将包括但不限于用于本文中所描述的任何或全部组织学染色剂或其制剂的本文中所描述的任何或全部光谱特性。
在最低限度上，用于评估组织学染色剂的库将包括两种或更多种组织学染色剂或染色制剂以及所述两种或更多种组织学染色剂或染色制剂的一个或多个对应光谱特性。在库中所表示的组织学染色剂的数量将根据例如库的预期使用和/或特定组织学分析仪而改变，以及范围可以从1到大约50，包括但不限于例如1到50、1到40、1到30、1到29、1到28、1到27、1到26、1到25、1到24、1到23、1到22、1到21、1到20、1到19、1到18、1到17、1到16、1到15、1到14、1到13、1到12、1到11、1到10、1到9、1到8、1到7、1到6、1到5、1到4、1到3等。
在库中所表示的用于每种组织学染色剂的组织学染色剂制剂的数量将根据例如预期染色剂和/或特定组织学分析仪而改变，以及范围可以从1到大约20，包括但不限于例如1到20、1到19、1到18、1到17、1到16、1到15、1到14、1到13、1到12、1到11、1到10、1到9、1到8、1到7、1到6、1到5、1到4、1到3等。
在库中所表示的用于每种组织学染色剂或每种染色制剂的不同光谱特性的数量将根据例如预期染色剂、预期制剂和/或特定组织学分析仪而改变，以及范围可以从1到大约10，包括但不限于例如1到10、1到9、1到8、1到7、1到6、1到5、1到4、1到3等。在一些实例中，在库中所表示的用于每种组织学染色剂或每种染色制剂的不同光谱特性的数量将为10或更少，包括但不限于9或更少、8或更少、7或更少、6或更少、5或更少、4或更少、3或更少、2或更少、或可以为1。在一些实例中，在库中所表示的用于每种组织学染色剂或每种染色制剂的不同光谱特性的数量将为1或更多，包括但不限于2或更多、3或更多、4或更多、5或更多、6或更多、7或更多、8或更多、9或更多、10或更多等。根据峰值的数量以及针对每个峰值所采取的不同测量的数量，各种不同的光谱特性可以由各种单独值表示。
在一些实例中，库将包括多种组织学染色剂或其制剂的一个或多个峰值的位置所对应的值。在一些实例中，库将包括多种组织学染色剂或其制剂的一个或多个峰值的宽度(包括例如，半最大吸光度处峰宽)所对应的值。在一些实例中，库将包括多种组织学染色剂或其制剂的一个或多个峰值的峰值吸光度所对应的值。在一些实例中，库将包括多种组织学染色剂或其制剂的相对峰值特性所对应的值。在一些实例中，库将包括多种组织学染色剂或其制剂的光谱移位所对应的值。在一些实例中，库将包括多个值的组合，包括但不限于例如一个或多个峰值的位置所对应的值、一个或多个峰值的宽度所对应的值、一个或多个峰值的峰值吸光度所对应的值、相对峰值特性所对应的值、光谱移位所对应的值的组合或其子组合。
在一些实例中，用于多种组织学染色剂或其制剂的库值将为总光谱值，意味着这些值受限于光谱范围且包括跨越整个可测量光谱的值。在其它实例中，用于多种组织学染色剂或其制剂的库值将为光谱范围值，意味着这些值受限于特定光谱范围，包括从大约200nm或更少到大约800nm或更多，其包括但不限于例如200nm到800nm、200nm到700nm、200nm到600nm、200nm到500nm、200nm到400nm、300nm到800nm、300nm到700nm、300nm到600nm、300nm到500nm、300nm到400nm、400nm到800nm、400nm到700nm、400nm到600nm、400nm到500nm、500nm到800nm、500nm到700nm、500nm到600nm、500nm到550nm、600nm到800nm、600nm到700nm、600nm到670nm、640nm到700nm、640nm到670nm等。
在一些实例中，库为罗曼诺夫斯基染色剂光谱特性的库且包括用于多个罗曼诺夫斯基染色剂的一个或多个光谱特性，包括但不限于例如瑞氏-吉姆萨、迈格林华、和迈格林华-吉姆萨。
在一些实例中，库将包括用于瑞氏-吉姆萨的一个或多个参考光谱特性，包括但不限于例如一个或多种瑞氏-吉姆萨峰值的位置所对应的参考值、一个或多种瑞氏-吉姆萨峰值的宽度所对应的参考值、一个或多种瑞氏-吉姆萨峰值的峰值吸光度所对应的参考值、瑞氏-吉姆萨峰值光谱移位所对应的参考值等。在一些实例中，库将包括针对瑞氏-吉姆萨的在基本659nm处的参考波长吸光度峰值和/或瑞氏-吉姆萨染色剂的一个或多个单独组分的参考波长峰值值。
在一些实例中，库将包括用于迈格林华的一个或多个参考光谱特性，包括但不限于例如一个或多种迈格林华峰值的位置所对应的参考值、一个或多种迈格林华峰值的宽度所对应的参考值、一个或多种迈格林华峰值的峰值吸光度所对应的参考值、迈格林华峰值光谱移位所对应的参考值等。在一些实例中，库将包括针对迈格林华的在基本656nm处的参考波长吸光度峰值和/或迈格林华染色剂的一个或多个单独组分的参考波长峰值值。
在一些实例中，库将包括用于迈格林华-吉姆萨的一个或多个参考光谱特性，包括但不限于例如一个或多种迈格林华-吉姆萨峰值的位置所对应的参考值、一个或多种迈格林华-吉姆萨峰值的宽度所对应的参考值、一个或多种迈格林华-吉姆萨峰值的峰值吸光度所对应的参考值、迈格林华-吉姆萨峰值光谱移位所对应的参考值等。
在一些实例中，库将包括用于瑞氏-吉姆萨、迈格林华和迈格林华-吉姆萨的参考光谱特性，包括但不限于例如对于这三种染色剂中每一者的一个或多个峰值的位置所对应的参考值、对于这三种染色剂中每一者的一个或多个峰值的宽度所对应的参考值、对于这三种染色剂中每一者的一个或多个峰值的峰值吸光度所对应的参考值、对于这三种染色剂中每一者的峰值光谱移位所对应的参考值等。
在一些实例中，库将包括错误的染色制剂所对应的参考值。例如，在一些实例中，库可以包括发现执行规格以外的制剂或发现产生非预期结果的制剂。在一些实例中，对于错误的染色制剂的这类参考值可以用于提供用于特定评估(包括但不限于例如染色剂质量评估)的边界或阈值。
在一些实例中，库将包括“失效的”染色剂所对应的参考值。如在本文中所使用的通过“失效的”意图指的是在制剂之后的一点在规格内执行的染色，但是在使用时，该染色不再在规格内执行。染色可以通过时间通道和/或通过存储在不足以维持染色性能的环境中或暴露于该环境而失效。例如，在一些实例中，库可以包括已被定制且允许通过足够时间的通道或通过染色的不适当存储或染色的其它暴露于足以改变染色的特性且负面影响染色性能的条件(包括环境条件)而失效的染色。在一些实例中，对于失效的染色制剂的这类参考值可以用于提供用于特定评估(包括但不限于例如染色剂质量评估)的边界或阈值。
如在本文中更详细描述，可以在为了执行组织学染色剂评估而对测量值进行的比较中利用本公开的库。库可以数字地存储在非暂时性计算机可读介质上或可以被电路和/或计算设备访问以执行如本文中所描述的方法。
评估
本公开包括使用分光光度方法进行的在组织学分析仪中使用的组织学染色剂的评估。本文中所描述的评估通常基于来自主题组织学染色剂的测量吸收光谱的一个或多个光谱特性与在用于多种组织学染色剂和/或染色制剂的这类特性的库中包含的参考光谱特性的比较。
在一些实例中，评估用于确定主题组织学染色剂的标识。例如，可以获得标识未知或假定的主题组织学染色剂，以及可以通过在分光光度计上测量染色剂来确定染色剂的吸收光谱。从测量光谱，可以确定染色剂的一个或多个光谱特性并将其与参考值相比较以确定染色剂的标识和/或确认染色剂的标识。
在一些实例中，该比较包括查找与一个或多个光谱特性的准确匹配，以及当发现准确匹配时，返回染色剂标识或确认假定的染色剂标识。在其它示例中，该比较包括查找与一个或多个光谱特性的至少近似匹配，以及当发现至少近似匹配时，返回染色剂标识或确认假定的染色剂标识。通过“近似匹配”指的是，测量特性与参考值的匹配在预定范围内，包括但不限于例如在参考值的预定百分比(例如，±10％、±9％、±8％、±7％、±6％、±5％、±4％、±3％、±2％、±1％、±0.9％、±0.8％、±0.7％、±0.6％、±0.5％、±0.4％、±0.3％、±0.2％、±0.1％等)内、在参考值的标准差或其倍数或分数内(例如，在两个标准差内、在一个标准差内、在0.5个标准差内等)、在平均值的标准误差内、在置信区间内(例如，在99％置信区间(CI)内、在98％CI内、在97％CI内、在96％CI内、在95％CI内、在94％CI内、在93％CI内、在92％CI内、在91％CI内、在90％CI内、在85％CI内、在80％CI内、在75％CI内等)、在从参考值指定的多个单位内(例如，在参考波长的±1nm内、在参考波长的±2nm内、在参考波长的±3nm内、在参考波长的±4nm内、在参考波长的±5nm内等)等。
在一些实例中，评估可以包括两个或更多个光谱特性的比较，以及匹配可以基于不同光谱特性中的至少两者，该匹配为与对应参考值的精确匹配。在一些实例中，评估可以包括两个或更多个光谱特性的比较，以及匹配可以基于不同光谱特性中的至少两者，该匹配为与对应参考值的至少近似匹配。
在一些实例中，评估用于确定罗曼诺夫斯基染色剂的标识。例如，可以获得标识未知或假定的主题罗曼诺夫斯基染色剂，以及可以通过在分光光度计上测量染色剂来确定染色剂的吸收光谱。从测量光谱，可以确定染色剂的一个或多个光谱特性并将其与参考值相比较以确定罗曼诺夫斯基染色剂的标识和/或确认罗曼诺夫斯基染色剂的标识。在一些实例中，评估确定该染色剂是否为瑞氏-吉姆萨。在一些实例中，评估确定该染色剂是否为迈格林华。在一些实例中，评估确定该染色剂是否为迈格林华-吉姆萨。
在一些实例中，主题组织学染色剂的标识的评估包括识别组织学染色剂的特定制剂。如在本文中所使用的术语“组合物”和“制剂”指的是可互换使用的组织学染色剂组合物和制剂，以及通过指的是特定组织学染色剂的组成组分及其彼此相关的具体量。例如，同一类型的两种染色剂(例如两种罗曼诺夫斯基染色剂或两种吉姆萨染色剂)尽管为同一类型，但可具有不同的组合物或制剂。可以有目的地制备不同制剂，例如从不同配方或通过添加剂的包括/排除，或可以意外地制备不同制剂，例如通过用量不当的特定组分的无意包括或不适当染色剂或其它试剂的无意包括/排除。不同制剂可以由于各种因素，包括但不限于例如由不同厂家制备的不同制剂、由单一厂家制备的不同制剂、在规格以外的制剂制备、在定制过程期间的不当处理(包括例如不当稀释、不当过滤、不当加热等)等。
在一些实例中，不当制剂有时候可以为适当制剂且可能通过其它手段(包括但不限于例如污染、蒸发等)“失效”而变为不当制剂。因此，在一些实例中，确定染色剂是否被不当定制的评估也可以评估该染色剂是否已失效或已变为不当制剂或预期在规格以外执行的制剂。
在一些实例中，如本文中所描述的评估可以被执行以确定染色剂的质量。例如，在一些实例中，可以评估标识已知或标识假设的染色剂以确定该染色剂是否具有足够或预期的质量。在一些实例中，可以获得标识已知或标识假设的染色剂，以及可以通过在分光光度计上测量染色剂来确定染色剂的吸收光谱。从测量光谱，可以确定染色剂的一个或多个光谱特性并将其与参考值相比较以确定染色剂的质量和/或确认染色剂的质量。
在一些实例中，确定染色剂的质量包括将染色剂与特定光谱特性的一个或多个参考质量阈值或范围相比较。可以通过任何便利方法来确定光谱特性的参考质量阈值和范围。例如，在一些实例中，参考质量阈值或范围通过如下方式来确定：比较多个不同的染色制剂并针对预期或非预期特性测试制剂、识别哪些制剂具有预期或非预期特性、针对制剂确定光谱特性、以及将预期或非预期特性的存在与否与制剂的光谱特性相关联。
这类预期或非预期特性将改变且可以包括但不限于在组织试验中的制剂的性能特性。可以在自动或手动的组织试验中确定制剂的性能特性。在一些实例中，组织试验为血液试验，包括但不限于例如已知样本的血球计数、血液筛查等。在一些实例中，组织或血液试验的预期性能特性包括但不限于例如预期细胞着色、正确/错误细胞识别、正确/错误细胞分类、专业染色剂评估、专业染色剂评分等。在一些实例中，针对样品的全部细胞类型评估性能特性。在一些实例中，针对样品的特定细胞类型评估性能特性，该特定细胞类型包括但不限于例如白血球、嗜碱性粒细胞、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞、中性粒细胞、血小板、红血细胞等。在一些实例中，在需要人类专家来评估性能特性的组织试验中评估制剂的性能特性。在一些实例中，在例如使用执行基于计算机的分析的组织学分析仪所执行的组织试验中评估制剂的性能特性。在一些实例中，不需要人类专家的试验可以被视为评估制剂的性能特性的公正试验。
可以通过各种手段将测量的光谱特性与一个或多个参考质量阈值或范围相比较，包括：将测量特性与阈值或范围相比较，以及如果测量特性按需高于或低于该阈值或在该范围内，则染色剂质量被返回为足够的。在一些实例中，质量范围可以被确定为高于或低于目标值(例如，从目标染色制剂的光谱分析所确定的目标值)的值。例如，质量范围可以在目标值的预定百分比(例如，±10％、±9％、±8％、±7％、±6％、±5％、±4％、±3％、±2％、±1％、±0.9％、±0.8％、±0.7％、±0.6％、±0.5％、±0.4％、±0.3％、±0.2％、±0.1％等)内、在目标值的标准差或其倍数或分数内(例如，在两个标准差内、在一个标准差内、在0.5个标准差内等)、在平均值的标准误差内、在置信区间内(例如，在99％置信区间(CI)内、在98％CI内、在97％CI内、在96％CI内、在95％CI内、在94％CI内、在93％CI内、在92％CI内、在91％CI内、在90％CI内、在85％CI内、在80％CI内、在75％CI内等)、在从目标值指定的多个单位内(例如，在目标波长的±1nm内、在目标波长的±2nm内、在目标波长的±3nm内、在目标波长的±4nm内、在目标波长的±5nm内等)等。
因此，在一些实例中，基于主题染色剂与参考染色剂的差异来评估染色剂质量，以及在主题染色剂在参考范围之外的情况下，该主题染色剂被视为具有足够质量。可以基于如上所述的预期或非预期特性和/或测量的性能特性的存在与否来评估染色制剂的足够质量。
在一些实例中，质量阈值可以被确定为处于或高于目标值的值，其中，通过针对多种染色剂或染色制剂评估性能和光谱特性来确定该目标值，以及具有足够质量的那些制剂为处于或高于目标光谱值测量的那些制剂。
在一些实例中，质量阈值可以被确定为处于或低于目标值的值，其中，通过针对多种染色剂或染色制剂评估性能和光谱特性来确定该目标值，以及具有足够质量的那些制剂为处于或低于目标光谱值测量的那些制剂。
在一些实例中，可以根据预定时间计划来评估组织学染色剂的质量，例如以识别染色剂何时失效、预测染色剂将何时充分执行、预测染色剂可以何时在规格之外执行、预测染色剂可以何时产生一个或多个非预期的性能特性等。用于评估染色剂质量的最佳频率将改变且将取决于特定染色剂和/或制剂、染色剂的存储条件等。在一些实例中，至少每年一次(包括但不限于例如至少每季度一次、至少每半月一次、至少每月一次、至少两个月一次、至少每周一次、至少两周一次、至少每两天一次、至少每天一次等)评估染色剂的质量。
在一些实例中，按需求(例如，如由用户指定)执行评估，包括标识、质量或其它评估。在其它实例中，在使用组织学分析仪(在其内使用染色剂)之前，包括但不限于例如，在组织学分析仪启动时、在组织学分析仪上运行样品之前、在组织学分析仪上运行预定数量的样品之后(包括但不限于例如，在运行5个样品之后、在运行10个样品之后、在运行20个样品之后、在运行50个样品之后、在运行100个样品之后、在运行500个样品之后、在运行1000个样品之后等)，执行评估。
设备和系统
本公开包括用于执行评估在组织学分析仪中使用的组织学染色剂的方法的分光光度设备和系统。所述设备和系统的方面包括：使用分光光度计测量主题组织学染色剂的分光光度特性，该分光光度计配置成识别针对于特定染色剂和/或染色制剂的一个或多个特性。
配置成执行本文中所描述的方法的设备和系统通常将包括至少一个分光光度计、用于各种组织学染色剂或其制剂的参考光谱特性的库、以及光谱处理电路。这些部件可以被组装在单一设备中或可以被组装为在两个或更多个设备之间分离的部件的系统。在一些实例中，设备、系统或其部件可以为外部的但靠近(即，附接到同一工作表面的或之上的外部壳体或在同一房间或建筑物内等)使用被评估的染色剂的组织学分析仪。在其它实例中，设备、系统或其部件可以被放在使用被评估的染色剂的组织学分析仪内部。
如上所述，任何便利的分光光度计可以应用在用于根据如本文中所描述的方法进行分光光度测量的设备和/或系统中，假定该分光光度计适合于在光谱范围内测量吸光度，在该光谱范围内存在主题染色剂的有辨识力的分光光度特性。这类分光光度计及其组件是熟知的。合适的分光光度计及其部件包括但不限于例如本文中所描述的那些分光光度计及其部件。
在一些实例中，本公开的系统可以包括吸光度分析仪或共同地，吸光度分析仪和组织学分析仪，其中，吸光度分析仪至少包括分光光度计和用于存储由分光光度计产生的被测光谱的装置。在一些实例中，吸光度分析仪也可以包括用于多种组织学染色剂和/或染色制剂的参考光谱特性的库。在一些实例中，吸光度分析仪也可以包括光谱处理电路，该光谱处理电路用于执行如下步骤中的一个或多个步骤：从被测光谱识别光谱特性和/或将测量的光谱特性与参考光谱特性相比较。在一些实例中，吸光度分析仪也可以包括一个或多个可移动的计算机可读存储介质，其用于存储被测光谱、光谱特性、和/或任何分析和/或比较的结果。
在一些实例中，本公开的设备和/或系统包括用于评估组织学染色剂的库，如上所述，包括例如至少两个或更多个组织学染色剂或染色制剂、以及所述两种或更多种组织学染色剂或染色制剂的一个或多个对应光谱特性。在许多实例中，库将包括用于各种组织学染色剂和/或染色制剂的多个参考光谱特性。该库可以被存储在设备或系统中，例如电子地存储在非暂时性计算机可读介质或其它计算机存储器上。在一些实例中，库可以为可移除的和/或能够上传的，从而可以通过更换库和/或更新库来添加用于新染色剂或制剂的光谱特性。
在一些实例中，如在本文中所描述的系统的部件可以通过有线数据连接来连接。任何合适且适当的有线数据连接可以发现在连接组织学染色剂评估系统的部件时的使用，例如，如在本文中所描述，包括但不限于例如商业上可购得的电缆，诸如USB电缆、同轴电缆、串行电缆、C2G或Cat2电缆、Cat5/Cat5e/Cat6/Cat6a电缆、令牌环网电缆(Cat4)、VGA电缆、HDMI电缆、RCA电缆、光纤电缆等。在一些实例中，例如，在数据安全不太令人担忧的情况下，可以采用无线数据连接，包括但不限于例如射频连接(例如，PAN/LAN/MAN/WAN无线联网、UHF无线电连接等)、红外数据传输连接、无线光学数据连接等。
在一些实例中，本公开的设备和/或系统包括光谱处理电路。这类光谱处理电路可以被编程为执行涉及处理从分光光度计接收的所测量光谱的一个或多个任务、和/或包含执行涉及处理从分光光度计接收的所测量光谱的的一个或多个任务的指令。例如，在一些实例中，光谱处理电路被编程为由从分光光度计接收的所测量光谱识别上述一个或多个光谱特性。在一些实例中，光谱处理电路被编程为在测量的光谱特性与参考光谱特性(例如，如存储在库中)之间进行比较，以根据本文中所描述的方法进行评估。
在一些实例中，光谱处理电路可以被编程为在比较之后进一步确定主题组织学染色剂的标识或质量。在评估染色剂标识的实例中，这类确定要求光谱处理电路将比较结果与用于各种染色剂和/或染色制剂的光谱特性的库相关联，以便识别匹配(例如，准确匹配、接近匹配、最佳匹配等)。在评估染色剂质量的实例中，这类确定要求光谱处理电路将比较结果与用于假定或已知的染色剂标识的光谱特性的一个或多个质量阈值或范围相关联，以便确定主题染色剂是否在质量范围内或者在质量阈值之上或之下。
在一些实例中，光谱处理电路可以被编程为将用户提供的标准并入比较或评估中。例如，在一些实例中，用户输入可以提供主题染色剂的假定标识或主题染色剂的假定质量，以及光谱处理电路可以编程为评估用户提供的数据是否与评估结果匹配或相关。在一些实例中，光谱处理电路配置或编程为将组织学染色剂的假定标识与组织学染色剂的评估标识相比较，以及输出关于组织学染色剂的假定标识与评估标识是否匹配的结果。在一些实例中，光谱处理电路配置或编程为将组织学染色剂的假定质量与组织学染色剂的评估质量相比较，以及输出关于组织学染色剂的质量是否足以用在组织试验中的结果。在一些实例中，自动地假定染色剂具有足以执行组织试验的质量，除非来自光谱处理电路的结果另有指示。
在一些实例中，光谱处理电路能够触发设备或系统的其它功能。例如，在一些实例中，由光谱处理电路处理的评估的结果导致信令系统的触发，例如，以指示用户该评估的结果(例如，指示染色剂的标识、指示染色剂的质量等)。这类指示可以被显示在用户界面上或可以被信令系统上报，包括但不限于例如警报、指示灯等。在其它方面中，由光谱处理电路处理的评估的结果导致样品的附加光谱测量的触发。在一些实例中，由光谱处理电路处理的评估的结果导致主题染色剂的射出的触发或所请求的使用主题染色剂的组织试验的终止，例如，该主题染色剂被确定为不具有假定标识或足够质量。
在一些实例中，如本文中所描述的设备和系统还包括信号系统，其中，该信号系统可以配置成上报评估的结果。这类信号系统将根据设备和/或系统的特定配置而改变，且可以包括但不限于例如警报器、指示灯、显示器(例如，计算机监控器、图形用户界面(Graphical User Interface，GUI)等)、配置成例如打印到有形介质(包括例如纸张或磁带)上的打印机等。在一些实例中，当组织学染色剂的假定标识与评估标识不匹配时，信号系统向用户指示(例如，发声、照亮、或以其它方式显示)。在一些实例中，当组织学染色剂的质量高于或低于质量阈值或者在质量范围之内或之外时，信号系统向用户指示(例如，发声、照亮、或以其它方式显示)。
在一些实例中，光谱处理电路能够触发设备或系统的不依赖于评估结果的其它功能。例如，在一些实例中，光谱处理电路配置成根据预定时间计划触发设备或系统执行组织学染色剂的评估。在一些实例中，根据预定时间计划触发的评估为定期的染色剂质量评估。
光谱处理电路具体地配置成或编程为根据如本文中所描述的方法执行功能，包括光谱测量功能和分析任务，以及可以包括用于执行数据相关功能的至少一个数据处理单元。
如在本文中所使用的通过“数据处理单元”指的是将执行所需功能的任何硬件和/或软件组合。例如，本文中的任何数据处理单元可以为可编程数字微处理器，诸如以电子控制器、大型机、服务器或个人计算机(台式或便携式)的形式可用的。在数据处理单元可编程的情况下，可以将合适的编程从远程位置传送到数据处理单元、或将合适的编程预先保存在计算机程序产品(诸如便携式或固定式计算机可读存储介质，无论基于磁性设备、光学设备、还是固态设备)中。
基本上任何电路可以配置为用于执行本文中所描述的方法的设备和系统内的功能布置。这类电路的硬件架构(包括例如特殊配置的计算机)是本领域技术人员所熟知的，以及可以包括硬件部件，其包括一个或多个处理器(CPU)、随机存取存储器(Random-AccessMemory，RAM)、只读存储器(Read-Only Memory，ROM)、内部或外部数据存储介质(例如，硬盘驱动)。这类电路也可以包括用于处理图形信息并将其输出给显示装置的一个或多个绘图板。上述部件可以借助电路内(例如专用计算机内部)的总线来适当地互连。该电路还可以包括适合于与通用外部部件(诸如监控器、键盘、鼠标、网络等)通信的接口。在一些实施方式中，该电路可以有并行处理的能力或可以为网络的一部分，该网络被配置用于针对本方法和程序的并行或分布式计算以增大处理功率。在一些实施方式中，从存储介质读出的程序代码可以被写入插入在电路中的扩展板或连接到电路的扩展单元内提供的存储器中，以及在扩展板或扩展单元中提供的CPU等实际上可以执行根据编程指令的操作的一部分或全部，从而完成所描述的功能。
本公开的设备和系统还可以包括能够存储信息的“存储器”，从而该信息后续可被计算机访问和检索。可以基于用于访问所存储信息的手段，来选择任何便利的数据存储结构。在某些方面中，该信息可以被存储在“永久性存储器”(即，不被去往计算机或处理器的电能的终止而擦除的存储器)或“非永久性存储器”中。计算机硬驱动、CD-ROM、软盘、便携式闪盘驱动和DVD全都为永久性存储器的示例。随机存取存储器(RAM)为非永久性存储器的示例。在永久性存储器中的文件可以为可编辑的且可重写的。
除了本公开的设备和系统的部件外，例如，如上所述，本公开的系统还可以包括多个附加部件，诸如数据输出设备(例如监控器和/或扬声器)、数据输入设备(例如界面端口、键盘等)、流体处理部件、电源等。
计算机可读介质
本公开包括计算机可读介质，包括非暂时性计算机可读介质，其存储用于评估在组织学分析仪中使用的组织学染色剂的分光光度方法的指令。本公开的方面包括存储指令的非暂时性计算机可读介质，所述指令在被计算设备执行时引起所述计算设备使用分光光度计测量主题组织学染色剂的分光光度特性，以识别针对于特定染色剂和/或染色制剂的一个或多个特性以及进行染色剂或制剂的评估。
在一些实例中，本公开的计算机可读介质存储指令，所述指令引起计算设备根据如本文中所描述的方法执行评估主题组织学染色剂的步骤中的一个或多个步骤。例如，在一些实例中，本公开的计算机可读介质存储指令，所述指令引起计算设备进行测量的光谱特性与存储在库中的光谱特性的比较。在一些实例中，本公开的计算机可读介质存储指令，所述指令引起计算设备基于测量的光谱特性与存储在库中的光谱特性的比较进行例如染色剂标识或染色剂质量的确定。
在一些实例中，本公开的计算机可读介质存储各种组织学染色剂和/或组织学染色剂的各种制剂的参考光谱特性的库(例如，如本文中所描述)，用以执行如本文中所描述的方法。这类计算机可读介质可以为或可以不为更大设备或系统的部件，例如，如本文中所描述。这类计算机可读介质可以为或可以不为可从更大设备或系统移除的，例如，如本文中所描述。在一些实例中，库可以针对于特定种类的组织学染色剂，例如，计算机可读介质可以存储针对于罗曼诺夫斯基染色剂的参考光谱特性的库，该参考光谱特性包括例如用于罗曼诺夫斯基染色剂的本文中所描述的参考光谱特性中的任何或全部参考光谱特性。在一些实例中，本公开的计算机可读介质存储参考光谱特性的库，该参考光谱特性包括但不限于例如用于迈格林华、瑞氏-吉姆萨、或迈格林华-吉姆萨或其组合的参考光谱特性。
在一些实例中，本公开的计算机可读介质存储指令和参考光谱特性的库二者，所述指令引起计算设备根据如本文中所描述的方法执行评估主题组织学染色剂的步骤中的一个或多个步骤。在一些实例中，存储引起计算设备根据如本文中所描述的方法执行评估主题组织学染色剂的步骤中的一个或多个步骤的指令和参考光谱特性的库二者的计算机可读介质针对于罗曼诺夫斯基染色剂且包括用于迈格林华、瑞氏-吉姆萨、或迈格林华-吉姆萨或其组合的参考光谱特性。
在某些实施方式中，根据本文中所描述的方法的指令可以以“编程”的形式被编码到计算机可读介质上，其中，如本文中所使用的术语“计算机可读介质”指的是参与将指令和/或数据提供给计算机以供执行和/或处理的任何存储器或传输介质。存储介质的示例包括软盘、硬盘、光盘、磁光盘、CD-ROM、CD-R、磁带、非暂时性存储卡、ROM、DVD-ROM、蓝光盘、固态盘、和附网存储器(Network Attached Storage，NAS)，无论这类设备是在计算机的内部还是外部。包含信息的文件可以被“存储”在计算机可读介质上，其中，“存储”指的是记录信息，使得该信息后续可被计算机访问和检索。
本文中所描述的计算机实现方法可以使用编程来执行，该编程可以用任何数量的计算机编程语言中的一者或多者来编写。这类语言包括例如Java(加利福尼亚州圣克拉拉的太阳微系统公司)、可视化Basic语言(华盛顿州雷德蒙德的微软公司)和C++(新泽西州贝德明斯特的AT&T公司)以及任何许多其它语言。
通过说明性方式而非限制性方式提供如下示例。
示例
示例1：染色剂样品制备
罗曼诺夫斯基染色剂(包括瑞氏-吉姆萨(WG)染色剂和迈格林华(MG)染色剂)被制备为包括染色剂组合物，这些染色剂组合物在规格内和有意地在规格以外。具体地，制备的染色剂低于规格、在规格内但低于目标、在目标处、在规格内但高于目标、以及高于规格。在表1(图1)中提供了用于在去离子水(DI)中按1:200稀释所制备的目标染色剂和脱离目标的染色剂的处于大约655nm的峰值吸光度测量。
示例2：吸光度下限的确定
分别在655nm和517nm处确定以及在图2和图3中提供不同制备的WG染色剂和MG染色剂的初始吸光度。
表2
| WG样品 | 655nm | 517nm |
| 50％低规格 | 0.481 | 0.330 |
| 67％低规格 | 0.656 | 0.490 |
| 83％低规格 | 0.798 | 0.620 |
| 100％低规格 | 0.951* | 0.765* |
| 目标 | 1.052 | 0.880 |
| 100％高规格 | 1.128 | 0.978 |
| 110％高规格 | 1.249 | 1.104 |
表3
| MG样品 | 655nm | 517nm |
| 50％低规格 | 0.298 | 0.257 |
| 67％低规格 | 0.398 | 0.362 |
| 83％低规格 | 0.499 | 0.481 |
| 100％低规格 | 0.600 | 0.597 |
| 目标 | 0.682 | 0.713 |
| 100％高规格 | 0.779 | 0.840 |
| 110％高规格 | 0.888 | 0.997 |
使用每种染色剂在DI水中的1:200稀释、根据如下过程执行染色剂的吸光度测量：
1.使用移液器，将染色剂样品的250μL的等分试样放在50mL的容量瓶中。
2.使用DI水将容量瓶填充到50mL标记以达到1:200染色剂稀释。
3.将容量瓶加上盖并通过将容量瓶倒转3次-4次进行混合。
4.将步骤1至步骤3再重复两次，以总共针对各种染色剂样品产生3个独立的稀释样品复制品。
5.根据如下过程对全部制备的1:200稀释执行OD扫描(200nm-800nm)：
5.1.将吸光度基线记录在使用填充有3mL的DI水(溶剂)的吸收池(石英)的仪器上。
5.2.对染色剂等分试样运行OD扫描，并针对2个最高峰值(通常～650nm和～525nm)记录最大吸光度。
5.3.针对两个另外的独立稀释样品复制品重复步骤5.1和步骤5.2。
5.4.将来自分光光度计的吸光度文件存储在计算机文件中。
对于具有不同吸光度值和不同染料浓度的不同WG染色样品之间的细胞着色的比较，提供了示例性图像(图2)。对于具有不同吸光度值和不同染料浓度的不同MG染色剂样品之间的细胞着色的比较，也提供了示例性图像(图3)。示例3：不同罗曼诺夫斯基染色剂的光谱分辨
使用光谱吸光度测量分辨瑞氏-吉姆萨染色剂和迈格林华染色剂。在200nm-800nm的光谱范围中利用1.0nm步长针对染色剂测量吸收光谱。利用±1.0nm的准确度识别在650nm-665nm的光谱范围中的峰值的准确位置。对于在本示例中使用的特定染色制剂和吸光度测量，当吸光度峰值位置位于λ＝659nm±1nm时，该染色剂被识别为瑞氏-吉姆萨，然而当峰值位置位于λ＝655nm±1nm时，该染色剂被识别为迈格林华(参看图4A至图4B)。
为了提高测量的精度和结论的可靠性，可以针对原始样本的多种浓度重复吸收光谱的测量，以随着吸光度值增大或减小而监控峰值的光谱位置。如观察，峰值识别波长保持恒定(参看图5A至图5B和图6A至图6B)。
WG染色剂和MG染色剂均为类似初始化合物的混合物，尽管如此，由于那些化合物的略微不同的制剂，这些混合物在吸收光谱上具有小的但可测量的差异。瑞氏-吉姆萨染色剂通常为天青、曙红和亚甲蓝染料的混合物，而迈格林华染色剂由曙红和亚甲蓝染料组成。不同类型的天青的吸光度峰值在λ～647nm-659nm的范围内变化，而曙红吸光度峰值位于区域λ～515nm-530nm中。在血液学和自动血液学仪器中使用的有用的瑞氏-吉姆萨制剂具有分别位于517nm±1nm和659nm±1nm的两个吸光度峰值，而在血液学和自动血液学仪器中使用的有用的迈格林华制剂具有分别位于517nm±1nm和655nm±1nm的两个吸光度峰值。因此，红色峰值的光谱移位Δλ＝3nm提供了分辨这两种类型的染色剂的手段。
图4A至图4B：具有目标制剂和浓度的瑞氏-吉姆萨染色剂和迈格林华染色剂的吸收光谱(图4A)，其示出了在两种染色剂之间的红色峰值的区分光谱移位Δλ＝3nm(图4B)。以其目标制剂的各种浓度制备的这些染色剂的吸收光谱展示了峰值的减小的吸光度值，而红色峰值的光谱移位Δλ＝3nm保持恒定。
图5A至图5B：以其目标制剂的不同浓度制备的瑞氏-吉姆萨染色剂(图5A)和迈格林华染色剂(图5B)的吸收光谱展示了吸光度峰值在读区域中的位置对于每种类型的染色剂来说是唯一的且不依赖于浓度。
图6A至图6B：以其目标制剂的不同浓度制备的瑞氏-吉姆萨染色剂和迈格林华染色剂的吸收光谱之间的比较(图6A至图6B)。这些染色剂的吸收光谱展示了峰值的各种吸光度值，而红色峰值的光谱移位Δλ＝3nm跨越各种染色剂浓度而保持恒定(图6B)。
以略微不同的制剂制备来自不同厂家(即供应方)的瑞氏-吉姆萨染色剂和迈格林华染色剂的吸收光谱。这些不同的制剂具有吸光度峰值的不同光谱位置。例如，如图7A和图7B所示，在红色光谱区域中的吸光度峰值的光谱位置可以用于区分来自两个不同厂家(即“供应方A”和“供应方B”)的染色剂。来自不同供应方的染色剂的峰值之间的红色峰值的光谱移位(Δλ)可以用于积极地识别具体染色剂(剂λ＝655nm±Δλ)。
图8：覆盖200nm-800nm的扩展光谱还展示了单独染色剂的特殊吸光度轮廓。在UV范围中的特殊峰值可以用于将一种染色剂区别于另一种染色剂。
在光谱范围200nm-800nm中用于MG、MGG和WG的吸收光谱(图8)展示了染色制剂的位于～293nm(亚甲蓝)、～520nm(曙红)、～664nm(亚甲蓝)的三个主要吸收带，以及处于～610nm(亚甲蓝)特性的肩部。峰值位置相对于纯染料的主要吸收带的光谱移位以及峰值的广度及其对应比是具体染色制剂的特殊特性。
尽管出于理解清晰的目的而通过图示和示例的方式详细地描述了前述发明，但是本领域的普通技术人员按照本发明的教导很容易清楚，可以对本发明进行特定改变和修改而不脱离所附权利要求的精神或范围。
相应地，前文仅说明了本发明的原理。将领会到，本领域的技术人员将能够设想各种布置方式，尽管本文中没有明确地描述或示出这些布置方式，但是它们体现了本发明的原理且被包括在本发明的精神和范围内。此外，本文中所列的所有示例和有条件的语言主要意图辅助阅读者理解本发明的原理和由发明人贡献于促进本领域的概念，且不应当被视为对这类具体所列的示例和条件的限制。此外，本文中列出本发明的原理、方面和实施方式的所有陈述及其具体示例意图涵盖其结构性等效物和功能性等效物。另外，意图使这类等效物包括当前已知的等效物和在未来开发的等效物，即，开发的执行相同功能的任何元件，不管结构如何。因此，本发明的范围不意图受限于本文中所示出和描述的示例性实施方式。而是，本发明的范围和精神由所附权利要求体现。
Claims (110)
1.一种评估在组织学分析仪中使用的组织学染色剂的方法，所述方法包括：
a)在分光光度计上在预定义范围内测量所述组织学染色剂的吸收光谱；
b)从所测量的光谱识别：
一个或多个峰值吸光度波长，以及
半最大吸光度处峰宽值；
c)将所识别的一个或多个峰值吸光度波长与库中针对多种组织学染色剂的参考峰值吸光度波长进行比较；
d)将所识别的半最大吸光度处峰宽值与所述库中针对多种组织学染色剂的半最大吸光度处峰宽值进行比较；以及
e)基于所述比较评估所述组织学染色剂。
2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述评估包括确定所述组织学染色剂的标识。
3.根据权利要求1所述的方法，其中，所述评估包括确定所述组织学染色剂的质量。
4.根据权利要求1所述的方法，其中，所述方法还包括生成所述评估的报告。
5.根据权利要求4所述的方法，其中，所述报告包括所述组织学染色剂的标识。
6.根据权利要求1所述的方法，其中，所述预定义范围为200nm到800nm或在200nm到800nm内。
7.根据权利要求1所述的方法，其中，所述预定义范围为500nm到700nm或在500nm到700nm内。
8.根据权利要求1所述的方法，其中，所述预定义范围为600nm到700nm或在600nm到700nm内。
9.根据权利要求1所述的方法，其中，所述预定义范围为640nm到670nm或在640nm到670nm内。
10.根据权利要求1所述的方法，其中，所述预定义范围为500nm到550nm或在500nm到550nm内。
11.根据权利要求6所述的方法，其中，所述预定义范围为200nm到400nm或在200nm到400nm内。
12.根据权利要求1所述的方法，其中，方法包括：在分光光度计上在两个或更多个预定义范围内测量所述组织学染色剂的所述吸收光谱。
13.根据权利要求12所述的方法，其中，所述两个或更多个预定义范围包括第一预定义范围和第二预定义范围，所述第一预定义范围为500nm到700nm或在500nm到700nm内，所述第二预定义范围为200nm到400nm或在200nm到400nm内。
14.根据权利要求1所述的方法，其中，所述方法还包括：制备所述组织学染色剂的多种稀释物，以及针对所述组织学染色剂的所述多种稀释物中的每种稀释物执行步骤(a)至步骤(e)。
15.根据权利要求14所述的方法，其中，所述方法包括：制备第一稀释物和第二稀释物，其中，所述第二稀释物为所述第一稀释物的浓度的一半。
16.根据权利要求1所述的方法，其中，所述识别还包括从所测量的光谱识别光谱偏移值，所述库还包括针对多种组织学染色剂的多个光谱偏移值，并且所述比较还包括将所述识别的光谱偏移值与所述库的光谱偏移值进行比较。
17.根据权利要求1所述的方法，其中，所述多种组织学染色剂包括罗曼诺夫斯基染色剂。
18.根据权利要求17所述的方法，其中，所述罗曼诺夫斯基染色剂选自由以下组成的群组：瑞氏-吉姆萨、迈格林华以及迈格林华-吉姆萨。
19.根据权利要求1所述的方法，其中，以至少1nm的分辨率测量所述吸收光谱。
20.根据权利要求16所述的方法，其中，所述库包括针对迈格林华的在基本656nm处的参考波长吸光度峰值。
21.根据权利要求20所述的方法，其中，所述库包括针对多种迈格林华染色剂组合物的多个光谱偏移值，其中，从针对迈格林华的656nm的所述参考波长吸光度峰值测量所述光谱偏移值。
22.根据权利要求1所述的方法，其中，所述库包括针对多种迈格林华染色剂组合物的多个半最大吸光度处峰宽值。
23.根据权利要求16所述的方法，其中，所述库包括针对瑞氏-吉姆萨的在基本659nm处的参考波长吸光度峰值。
24.根据权利要求23所述的方法，其中，所述库包括针对多种瑞氏-吉姆萨染色剂组合物的多个光谱偏移值，其中，从针对瑞氏-吉姆萨的659nm处的所述参考波长吸光度峰值测量所述光谱偏移值。
25.根据权利要求1所述的方法，其中，所述库包括针对多种瑞氏-吉姆萨染色剂组合物的多个半最大吸光度处峰宽值。
26.根据权利要求16所述的方法，其中，所述库包括针对迈格林华-吉姆萨的参考波长吸光度峰值。
27.根据权利要求26所述的方法，其中，所述库包括针对多种迈格林华-吉姆萨染色剂组合物的多个光谱偏移值，其中，从针对迈格林华-吉姆萨的参考波长吸光度峰值测量所述光谱偏移值。
28.根据权利要求1所述的方法，其中，所述库包括针对多种迈格林华-吉姆萨染色剂组合物的多个半最大吸光度处峰宽值。
29.根据权利要求1所述的方法，其中，所述方法包括：随时间进行所述组织学染色剂的多次评估，从而监控染色剂质量。
30.根据权利要求1所述的方法，其中，所述方法包括：在所述吸收光谱测量之前将所述组织学染色剂的等分试样从存储容器传送到分析容器中。
31.根据权利要求30所述的方法，其中，所述分析容器选自由以下组成的群组：吸收池、毛细管和多孔板。
32.根据权利要求1所述的方法，其中，在所述组织学分析仪内进行所述吸收光谱测量。
33.根据权利要求1所述的方法，其中，在所述组织学分析仪之外进行所述吸收光谱测量。
34.根据权利要求33所述的方法，其中，在所述组织学分析仪之外执行所述吸收光谱测量之后，将所述组织学染色剂的所述吸收光谱、从其导出的一个或多个峰值吸光度波长或其组合传送到所述组织学分析仪。
35.根据权利要求34所述的方法，其中，通过将所述分光光度计连接到所述组织学分析仪的有线数据连接传送所述组织学染色剂的所述吸收光谱、从其导出的一个或多个峰值吸光度波长或其组合。
36.根据权利要求34所述的方法，其中，使用计算机可读存储介质传送所述组织学染色剂的所述吸收光谱、从其导出的一个或多个峰值吸光度波长或其组合。
37.一种用于评估在组织学分析仪中使用的组织学染色剂的设备，所述设备包括：
a)分光光度计，所述分光光度计配置成在预定义范围内测量所述组织学染色剂的吸收光谱；
b)针对多种组织学染色剂的参考峰值吸光度波长的库；
c)光谱处理电路，所述光谱处理电路配置成：
i)从所测量的光谱识别一个或多个峰值吸光度波长；
ii)将所述一个或多个峰值吸光度波长与所述库中针对多种组织学染色剂的参考峰值吸光度波长进行比较以进行所述组织学染色剂的评估；
iii)将从所测量的光谱识别的半最大吸光度处峰宽值与所述库中针对所述组织学染色剂的参考半最大吸光度处峰宽值进行比较；以及
d)信号系统，所述信号系统配置成报告所述评估的结果。
38.根据权利要求37所述的设备，其中，所述报告包括对所述组织学染色剂的标识的确定。
39.根据权利要求37所述的设备，其中，所述设备还包括用户界面，所述用户界面配置成用于用户输入所述组织学染色剂的假定标识。
40.根据权利要求39所述的设备，其中，所述光谱处理电路还配置成将所述组织学染色剂的所述假定标识与所述组织学染色剂的评估标识进行比较以及输出关于所述组织学染色剂的所述假定标识与所述评估标识是否匹配的结果。
41.根据权利要求40所述的设备，其中，所述设备包括信号系统，所述信号系统配置成在所述组织学染色剂的所述假定标识与所述评估标识不匹配时警告所述用户。
42.根据权利要求37所述的设备，其中，所述设备包括信号系统，所述信号系统配置成在所述组织学染色剂的质量低于预定阈值时警告用户。
43.根据权利要求37所述的设备，其中，所述设备包括信号系统，所述信号系统配置成在所述组织学染色剂的质量低于用户指定的阈值时警告用户。
44.根据权利要求37所述的设备，其中，所述预定义范围为200nm到800nm或在200nm到800nm内。
45.根据权利要求44所述的设备，其中，所述预定义范围为500nm到700nm或在500nm到700nm内。
46.根据权利要求45所述的设备，其中，所述预定义范围为600nm到700nm或在600nm到700nm内。
47.根据权利要求46所述的设备，其中，所述预定义范围为640nm到670nm或在640nm到670nm内。
48.根据权利要求45所述的设备，其中，所述预定义范围为500nm到550nm或在500nm到550nm内。
49.根据权利要求44所述的设备，其中，所述预定义范围为200nm到400nm或在200nm到400nm内。
50.根据权利要求37所述的设备，其中，所述预定义范围包括两个或更多个预定义子范围。
51.根据权利要求50所述的设备，其中，所述两个或更多个预定义子范围包括第一预定义子范围和第二预定义子范围，所述第一预定义子范围为500nm到700nm或在500nm到700nm内，所述第二预定义子范围为200nm到400nm或在200nm到400nm内。
52.根据权利要求37所述的设备，其中，所述设备还包括样品制备模块，所述样品制备模块配置成提取所述组织学染色剂的样品。
53.根据权利要求52所述的设备，其中，所述样品制备模块还配置成将所述样品分散到与所述分光光度计兼容的分析容器中。
54.根据权利要求53所述的设备，其中，所述分析容器选自由以下组成的群组：吸收池、毛细管以及多孔板。
55.根据权利要求37所述的设备，其中，所述设备还包括样品制备模块，所述样品制备模块配置成从所述组织学染色剂的样品制备一种或多种稀释物。
56.根据权利要求37所述的设备，其中，所述分光光度计配置成以至少1nm的分辨率测量所述吸收光谱。
57.根据权利要求56所述的设备，其中，所述分光光度计配置成以至少0.5nm的分辨率测量所述吸收光谱。
58.根据权利要求37所述的设备，其中，所述库包括针对迈格林华的在基本656nm处的参考波长吸光度峰值。
59.根据权利要求37所述的设备，其中，所述库包括针对瑞氏-吉姆萨的在基本659nm处的参考波长吸光度峰值。
60.根据权利要求37所述的设备，其中，所述光谱处理电路还配置成根据预定时间计划触发所述设备以测量所述组织学染色剂的所述吸收光谱。
61.根据权利要求60所述的设备，其中，所述预定时间计划为至少一个月一次。
62.根据权利要求61所述的设备，其中，所述预定时间计划为至少一个月两次。
63.根据权利要求62所述的设备，其中，所述预定时间计划为至少一周一次。
64.根据权利要求63所述的设备，其中，所述预定时间计划为至少一周两次。
65.根据权利要求64所述的设备，其中，所述预定时间计划为至少每两天一次。
66.根据权利要求65所述的设备，其中，所述预定时间计划为至少一日一次。
67.根据权利要求37所述的设备，其中，所述设备还包括用于存储所述组织学染色剂或其等分试样的容器。
68.根据权利要求37所述的设备，其中，所述设备被容纳在所述组织学分析仪内。
69.一种用于评估在组织学分析仪中使用的组织学染色剂的系统，所述系统包括：
a)吸光度分析仪，所述吸光度分析仪包括：
i)分光光度计，所述分光光度计配置成在预定义范围内测量所述组织学染色剂的吸收光谱；
ii)针对多种组织学染色剂的参考峰值吸光度波长的库；
iii)光谱处理电路，所述光谱处理电路配置成：
1)从所测量的光谱识别一个或多个峰值吸光度波长；以及
2)将所述一个或多个峰值吸光度波长与所述库中针对多种组织学染色剂的参考峰值吸光度波长进行比较以进行所述组织学染色剂的评估；
3)将从所测量的光谱识别的半最大吸光度处峰宽值与所述库中针对所述组织学染色剂的参考半最大吸光度处峰宽值进行比较；以及
iv)可移动的计算机可读存储介质，所述可移动的计算机可读存储介质配置成存储所述评估的结果；以及
b)组织学分析仪，所述组织学分析仪包括：
i)端口，所述端口配置成接收所述可移动的计算机可读存储介质；和
ii)信号系统，所述信号系统配置成报告所述评估的结果。
70.根据权利要求69所述的系统，其中，所述报告包括对所述组织学染色剂的标识的确定。
71.根据权利要求69所述的系统，其中，所述吸光度分析仪或所述组织学分析仪或二者还包括用户界面，所述用户界面配置成用于用户输入所述组织学染色剂的假定标识。
72.根据权利要求71所述的系统，其中，所述光谱处理电路还配置成将所述组织学染色剂的所述假定标识与所述组织学染色剂的评估标识进行比较以及输出关于所述组织学染色剂的所述假定标识与所述评估标识是否匹配的结果。
73.根据权利要求72所述的系统，其中，所述信号系统配置成在所述组织学染色剂的所述假定标识与所述评估标识不匹配时警告用户。
74.根据权利要求69所述的系统，其中，所述信号系统配置成在所述组织学染色剂的质量低于预定阈值时警告用户。
75.根据权利要求69所述的系统，其中，所述信号系统配置成在所述组织学染色剂的质量低于用户指定的阈值时警告用户。
76.根据权利要求69所述的系统，其中，所述预定义范围为200nm到800nm或在200nm到800nm内。
77.根据权利要求76所述的系统，其中，所述预定义范围为500nm到700nm或在500nm到700nm内。
78.根据权利要求77所述的系统，其中，所述预定义范围为600nm到700nm或在600nm到700nm内。
79.根据权利要求78所述的系统，其中，所述预定义范围为640nm到670nm或在640nm到670nm内。
80.根据权利要求77所述的系统，其中，所述预定义范围为500nm到550nm或在500nm到550nm内。
81.根据权利要求76所述的系统，其中，所述预定义范围为200nm到400nm或在200nm到400nm内。
82.根据权利要求69所述的系统，其中，所述预定义范围包括两个或更多个预定义子范围。
83.根据权利要求82所述的系统，其中，所述两个或更多个预定义子范围包括第一预定义子范围和第二预定义子范围，所述第一预定义子范围为500nm到700nm或在500nm到700nm内，所述第二预定义子范围为200nm到400nm或在200nm到400nm内。
84.根据权利要求69所述的系统，其中，所述分光光度计配置成以至少1nm的分辨率测量所述吸收光谱。
85.根据权利要求84所述的系统，其中，所述分光光度计配置成以至少0.5nm的分辨率测量所述吸收光谱。
86.根据权利要求69所述的系统，其中，所述库包括针对迈格林华的在基本656nm处的参考波长吸光度峰值。
87.根据权利要求69所述的系统，其中，所述库包括针对瑞氏-吉姆萨的在基本659nm处的参考波长吸光度峰值。
88.一种用于评估在组织学分析仪中使用的组织学染色剂的系统，所述系统包括：
a)吸光度分析仪，所述吸光度分析仪包括：
i)分光光度计，所述分光光度计配置成在预定义范围内测量所述组织学染色剂的吸收光谱；和
ii)可移动的计算机可读存储介质，所述可移动的计算机可读存储介质配置成存储所测量的光谱；和
b)组织学分析仪，所述组织学分析仪包括：
i)针对多种组织学染色剂的参考峰值吸光度波长的库；
ii)端口，所述端口配置成接收所述可移动的计算机可读存储介质且上传所测量的光谱；
iii)光谱处理电路，所述光谱处理电路配置成：
1)从所测量的光谱识别一个或多个峰值吸光度波长；以及
2)将所述一个或多个峰值吸光度波长与所述库中针对多种组织学染色剂的参考峰值吸光度波长进行比较以进行所述组织学染色剂的评估；
3)将从所测量的光谱识别的半最大吸光度处峰宽值与所述库中针对所述组织学染色剂的参考半最大吸光度处峰宽值进行比较；以及
iv)信号系统，所述信号系统配置成报告所述评估的结果。
89.根据权利要求88所述的系统，其中，所述报告包括对所述组织学染色剂的标识的确定。
90.根据权利要求88所述的系统，其中，所述吸光度分析仪或所述组织学分析仪或二者还包括用户界面，所述用户界面配置成用于用户输入所述组织学染色剂的假定标识。
91.根据权利要求90所述的系统，其中，所述光谱处理电路还配置成将所述组织学染色剂的所述假定标识与所述组织学染色剂的评估标识进行比较以及输出关于所述组织学染色剂的所述假定标识与所述评估标识是否匹配的结果。
92.根据权利要求91所述的系统，其中，所述信号系统配置成在所述组织学染色剂的所述假定标识与所述评估标识不匹配时警告用户。
93.根据权利要求88所述的系统，其中，所述信号系统配置成在所述组织学染色剂的质量低于预定阈值时警告用户。
94.根据权利要求88所述的系统，其中，所述信号系统配置成在所述组织学染色剂的质量低于用户指定的阈值时警告用户。
95.根据权利要求88所述的系统，其中，所述预定义范围为200nm到800nm或在200nm到800nm内。
96.根据权利要求95所述的系统，其中，所述预定义范围为500nm到700nm或在500nm到700nm内。
97.根据权利要求96所述的系统，其中，所述预定义范围为600nm到700nm或在600nm到700nm内。
98.根据权利要求97所述的系统，其中，所述预定义范围为640nm到670nm或在640nm到670nm内。
99.根据权利要求96所述的系统，其中，所述预定义范围为500nm到550nm或在500nm到550nm内。
100.根据权利要求95所述的系统，其中，所述预定义范围为200nm到400nm或在200nm到400nm内。
101.根据权利要求88所述的系统，其中，所述预定义范围包括两个或更多个预定义子范围。
102.根据权利要求101所述的系统，其中，所述两个或更多个预定义子范围包括第一预定义子范围和第二预定义子范围，所述第一预定义子范围为500nm到700nm或在500nm到700nm内，所述第二预定义子范围为200nm到400nm或在200nm到400nm内。
103.根据权利要求88所述的系统，其中，所述分光光度计配置成以至少1nm的分辨率测量所述吸收光谱。
104.根据权利要求103所述的系统，其中，所述分光光度计配置成以至少0.5nm的分辨率测量所述吸收光谱。
105.根据权利要求88所述的系统，其中，所述库包括针对迈格林华的在基本656nm处的参考波长吸光度峰值。
106.根据权利要求88所述的系统，其中，所述库包括针对瑞氏-吉姆萨的在基本659nm处的参考波长吸光度峰值。
107.一种存储指令的非暂时性计算机可读介质，所述指令在被计算设备执行时使所述计算设备执行如下步骤：
a)将一个或多个输入的峰值吸光度波长与库中针对多种组织学染色剂的参考峰值吸光度波长进行比较；
b)基于所述比较确定所述多种组织学染色剂中的哪种组织学染色剂匹配所述一个或多个输入的峰值吸光度波长；以及
c)将一个或多个输入半最大吸光度处峰宽值与所述库中针对所述组织学染色剂的参考半最大吸光度处峰宽值进行比较。
108.根据权利要求107所述的非暂时性计算机可读介质，其中，所述库还包括针对多种组织学染色剂的多个参考光谱偏移值，并且所述比较还包括将一个或多个输入光谱偏移值与库的光谱偏移值进行比较。
109.根据权利要求107所述的非暂时性计算机可读介质，其中，所述多种组织学染色剂包括罗曼诺夫斯基染色剂。
110.根据权利要求109所述的非暂时性计算机可读介质，其中，所述罗曼诺夫斯基染色剂选自由以下组成的群组：瑞氏-吉姆萨、迈格林华以及迈格林华-吉姆萨。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201562269204P | 2015-12-18 | 2015-12-18 | |
| US62/269,204 | 2015-12-18 | ||
| PCT/US2016/066651 WO2017106342A1 (en) | 2015-12-18 | 2016-12-14 | Spectral differentiation of histological stains |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN109313017A CN109313017A (zh) | 2019-02-05 |
| CN109313017B true CN109313017B (zh) | 2020-11-13 |
Family
ID=59057790
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201680079559.5A Active CN109313017B (zh) | 2015-12-18 | 2016-12-14 | 组织学染色剂的光谱区分 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US10288557B2 (zh) |
| EP (1) | EP3390963B1 (zh) |
| CN (1) | CN109313017B (zh) |
| ES (1) | ES2871049T3 (zh) |
| WO (1) | WO2017106342A1 (zh) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112763435A (zh) * | 2021-04-01 | 2021-05-07 | 爱沐风优(西安)生物科技有限公司 | 一种肺炎链球菌致死性定量评估方法 |
| CN114067315B (zh) * | 2021-10-23 | 2022-11-29 | 广州市艾贝泰生物科技有限公司 | 细胞计数方法、装置、计算机设备和存储介质 |
Citations (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6160617A (en) * | 1995-11-22 | 2000-12-12 | Kairos Scientific, Inc. | High resolution imaging microscope (HIRIM) and uses thereof |
| US6294331B1 (en) * | 1997-08-08 | 2001-09-25 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Methods for assessing genetic and phenotypic markers by simultaneous multicolor visualization of chromogenic dyes using brightfield microscopy and spectral imaging |
| US20020197600A1 (en) * | 2001-05-15 | 2002-12-26 | Maione Theodore E. | Method for determining the presence of infection in an individual |
| CN1725974A (zh) * | 2002-12-12 | 2006-01-25 | 奥林巴斯株式会社 | 成像装置 |
| US20080070324A1 (en) * | 2002-07-15 | 2008-03-20 | Floyd Alton D | Quantity control device for microscope slide staining assays |
| US8199999B2 (en) * | 2008-06-17 | 2012-06-12 | Cambridge Research & Instrumentation, Inc. | Image classifier training |
| US20140038206A1 (en) * | 2012-07-25 | 2014-02-06 | Theranos, Inc. | Image analysis and measurement of biological samples |
| WO2014089478A1 (en) * | 2012-12-07 | 2014-06-12 | University Of Tennessee Research Foundation | Methods of numerical analysis for platelet disorders and computer-readable media and systems for performing the same |
| US20140267672A1 (en) * | 2013-03-12 | 2014-09-18 | Ventana Medical Systems, Inc. | Digitally enhanced microscopy for multiplexed histology |
| CN104198458A (zh) * | 2014-09-26 | 2014-12-10 | 哈尔滨工业大学 | 一种飞秒激光双光子荧光生物显微成像系统及其成像方法 |
| CN105102945A (zh) * | 2013-01-10 | 2015-11-25 | 加利珀生命科学股份有限公司 | 多光谱成像系统和方法 |
Family Cites Families (19)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2932529B2 (ja) | 1989-09-30 | 1999-08-09 | 株式会社島津製作所 | 分光光度計 |
| US6165734A (en) | 1995-12-12 | 2000-12-26 | Applied Spectral Imaging Ltd. | In-situ method of analyzing cells |
| WO2002001198A1 (en) | 2000-06-27 | 2002-01-03 | Alberta Research Council Inc. | Multiple pathlength spectrophotometer |
| US7932095B2 (en) | 2000-10-18 | 2011-04-26 | Herpst Robert D | Sample holding substrate for use with an infrared spectrophotometer or filtometer and methods of manufacture and use thereof |
| US7468161B2 (en) * | 2002-04-15 | 2008-12-23 | Ventana Medical Systems, Inc. | Automated high volume slide processing system |
| US8185317B2 (en) * | 2003-06-12 | 2012-05-22 | Cytyc Corporation | Method and system of determining the stain quality of slides using scatter plot distribution |
| WO2005030999A1 (en) * | 2003-09-25 | 2005-04-07 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc | Methods to detect lineage-specific cells |
| JP4269997B2 (ja) | 2004-03-26 | 2009-05-27 | 株式会社島津製作所 | 分光光度計 |
| US7262844B2 (en) | 2005-01-13 | 2007-08-28 | The Curators Of The University Of Missouri | Ultrasensitive spectrophotometer |
| US9133506B2 (en) * | 2006-01-10 | 2015-09-15 | Applied Spectral Imaging Ltd. | Methods and systems for analyzing biological samples |
| EP2071317B1 (en) | 2006-10-06 | 2020-05-20 | Shimadzu Corporation | Spectrophotometer |
| US7799570B2 (en) * | 2007-03-29 | 2010-09-21 | Uchicago Argonne, Llc | Methods for validating the presence of and characterizing proteins deposited onto an array |
| JP4536754B2 (ja) | 2007-06-28 | 2010-09-01 | 株式会社日立ハイテクノロジーズ | 分光光度計及び液体クロマトグラフィ |
| US8115922B2 (en) | 2008-02-29 | 2012-02-14 | Starna Cells, Inc. | Apparatus and method for adapting conventional cuvettes for use in a vertical light beam spectrophotometer |
| CN102232181B (zh) | 2008-10-03 | 2014-09-17 | 纳诺多普科技有限责任公司 | 双采样模式的分光光度计 |
| US8502969B2 (en) | 2009-12-16 | 2013-08-06 | Boule Medical Ab | Miniature flow-through cuvette and spectrophotometer containing the same |
| US8638433B1 (en) | 2011-09-15 | 2014-01-28 | John R. Amend | Visual spectrophotometer |
| EP2972208B1 (en) * | 2013-03-15 | 2018-06-13 | Iris International, Inc. | Method and composition for staining and sample processing |
| US9526480B2 (en) * | 2013-11-27 | 2016-12-27 | Elwha Llc | Devices and methods for profiling microbiota of skin |
-
2016
- 2016-12-14 US US15/379,119 patent/US10288557B2/en active Active
- 2016-12-14 WO PCT/US2016/066651 patent/WO2017106342A1/en active Application Filing
- 2016-12-14 ES ES16876587T patent/ES2871049T3/es active Active
- 2016-12-14 EP EP16876587.3A patent/EP3390963B1/en active Active
- 2016-12-14 CN CN201680079559.5A patent/CN109313017B/zh active Active
-
2019
- 2019-03-18 US US16/356,654 patent/US11105736B2/en active Active
Patent Citations (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6160617A (en) * | 1995-11-22 | 2000-12-12 | Kairos Scientific, Inc. | High resolution imaging microscope (HIRIM) and uses thereof |
| US6294331B1 (en) * | 1997-08-08 | 2001-09-25 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Methods for assessing genetic and phenotypic markers by simultaneous multicolor visualization of chromogenic dyes using brightfield microscopy and spectral imaging |
| US20020197600A1 (en) * | 2001-05-15 | 2002-12-26 | Maione Theodore E. | Method for determining the presence of infection in an individual |
| US20080070324A1 (en) * | 2002-07-15 | 2008-03-20 | Floyd Alton D | Quantity control device for microscope slide staining assays |
| CN1725974A (zh) * | 2002-12-12 | 2006-01-25 | 奥林巴斯株式会社 | 成像装置 |
| US8199999B2 (en) * | 2008-06-17 | 2012-06-12 | Cambridge Research & Instrumentation, Inc. | Image classifier training |
| US20140038206A1 (en) * | 2012-07-25 | 2014-02-06 | Theranos, Inc. | Image analysis and measurement of biological samples |
| WO2014089478A1 (en) * | 2012-12-07 | 2014-06-12 | University Of Tennessee Research Foundation | Methods of numerical analysis for platelet disorders and computer-readable media and systems for performing the same |
| CN105102945A (zh) * | 2013-01-10 | 2015-11-25 | 加利珀生命科学股份有限公司 | 多光谱成像系统和方法 |
| US20140267672A1 (en) * | 2013-03-12 | 2014-09-18 | Ventana Medical Systems, Inc. | Digitally enhanced microscopy for multiplexed histology |
| CN104198458A (zh) * | 2014-09-26 | 2014-12-10 | 哈尔滨工业大学 | 一种飞秒激光双光子荧光生物显微成像系统及其成像方法 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| Blue-green phosphorescent imidazole-based iridium(III) complex with a broad full width at half maximum for solution-processed organic light-emitting diodes;Jae-HoJang等;《Synthetic Metals》;20150531;第203卷;第180-186页 * |
| Er3+/Yb3+共掺硅酸盐玻璃样品的多波段光谱特性;周松强等;《光子学报》;20081231(第4期);第813-817页 * |
| 深度光学/近红外巡天中恒星－星系自动识别的研究进展;阮志锋等;《天文学进展》;20150831;第33卷(第3期);第376-397页 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US10288557B2 (en) | 2019-05-14 |
| EP3390963A4 (en) | 2019-08-14 |
| US20200080934A1 (en) | 2020-03-12 |
| US20170176325A1 (en) | 2017-06-22 |
| EP3390963A1 (en) | 2018-10-24 |
| CN109313017A (zh) | 2019-02-05 |
| EP3390963B1 (en) | 2021-02-17 |
| ES2871049T3 (es) | 2021-10-28 |
| WO2017106342A1 (en) | 2017-06-22 |
| US11105736B2 (en) | 2021-08-31 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US11158049B2 (en) | Methods and systems for assessing histological stains | |
| US3916205A (en) | Differential counting of leukocytes and other cells | |
| JP4982386B2 (ja) | 表面張力に保持された蛍光ナノドロップからの信号を測定する装置及び測定方法 | |
| CN109313017B (zh) | 组织学染色剂的光谱区分 | |
| BRPI1008091B1 (pt) | Métodos para medir a fluorescência de um composto marcador fluorescente, e para identificar um material a granel, e, aparelho | |
| US10871426B2 (en) | Assessment and control of reagents in automated slide preparation | |
| US11150131B2 (en) | Mobile biosensing instrument capable of multiple detection modalities | |
| Woodburn et al. | Analysis of paper-based colorimetric assays with a smartphone spectrometer | |
| Lerwill et al. | Micro-fading spectrometry: investigating the wavelength specificity of fading | |
| Watson et al. | Spectral measurements of large particles by flow cytometry | |
| Zucker | Quality assessment of confocal microscopy slide‐based systems: Instability | |
| Zucker et al. | Reliability of confocal microscopy spectral imaging systems: use of multispectral beads | |
| US20150090343A1 (en) | Innovation to assay mixing | |
| JP2014502361A (ja) | 試料中の核酸の定量 | |
| Abe et al. | Color correction of pathological images for different staining-condition slides | |
| US10788424B2 (en) | Optical detection of fluorescence | |
| Macdonald et al. | Brightness experiments | |
| US20240094112A1 (en) | Determining time response value of an analyte in a liquid | |
| US20240044790A1 (en) | Determining time response value of an analyte in a liquid | |
| Neuhoff et al. | Cytofluorometry | |
| CN107449715B (zh) | 活细胞胞内代谢分析仪及其分析方法 | |
| Slavík | Assays of Intracellular pH Using Chemical Probes: Absorption Spectroscopy | |
| Swatland | Interference colorimetry of starch granules | |
| KELLY et al. | Photographic cytophotometry with a dual-microscope. II. Microscope assembly and film-dye extractions | |
| BR102018067972A2 (pt) | Método e sistema de medição de características de transmitância de objetos translúcidos |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |