CN109207499A

CN109207499A - 甘薯绿原酸合成途径中关键酶基因IbPAL1及应用

Info

Publication number: CN109207499A
Application number: CN201811146211.0A
Authority: CN
Inventors: 禹阳; 边小峰; 谢芝; 谢一芝; 贾赵东; 马佩勇; 郭小丁
Original assignee: Jiangsu Academy of Agricultural Sciences
Current assignee: Jiangsu Academy of Agricultural Sciences
Priority date: 2018-09-28
Filing date: 2018-09-28
Publication date: 2019-01-15

Abstract

本发明公开了一种甘薯绿原酸合成途径中关键酶基因IbPAL1及应用。所述关键酶基因IbPAL1的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。IbPAL1基因编码的蛋白质是SEQ ID No.2所示的氨基酸序列。本发明从甘薯中分离出编码转录因子IbPAL1的完整cDNA，连接到植物表达载体上，利用农杆菌侵染法转化植物，获得转基因植株，且提高了转基因植物的绿原酸含量。此基因可以应用于植物营养品质的遗传改良。

Description

甘薯绿原酸合成途径中关键酶基因IbPAL1及应用

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种甘薯绿原酸合成途径中关键酶基因IbPAL1、该基因编码的蛋白质以及含有该基因的重组载体及其应用。

背景技术

甘薯[Ipomoea botatas(Lam.)L]属一年生或多年生蔓生草本植物，又名红薯、地瓜、番薯、甜薯等，是世界上重要的粮食、饲料和工业原料作物。甘薯原产于南美洲的热带地区，约在400多年前传入我国。由于它稳定高产、抗灾能力强、适应性广等特性，在我国很快得到普及，占世界甘薯总产量的85.9％，成为仅次于水稻、小麦、玉米之后的粮食作物。甘薯不仅是重要的食物来源，同时也具有重要的药用价值。据《本草纲目》等文献记载，甘薯具有补虚乏、益气力、健脾胃、强肾阳等功效，可以补中和血、益气生津、宽肠胃、通便秘，主治脾虚水肿，肠燥便秘。因此，研究甘薯中的有效活性成分及其营养保健作用，为开发利用甘薯资源提供理论依据具有着重要意义。

近年来，随着对甘薯营养成分的深入研究，发现甘薯中含有丰富的营养物质和一些功能性成分，与常见主粮作物及蔬菜相比营养成分齐全，许多有益成分含量甚至都高于它们。除含量丰富的蛋白质、糖类、维生素和矿物质外，甘薯中还含有大量绿原酸。绿原酸(Chlorogenic acid)，又名咖啡单宁酸，化学名为3-O-咖啡酰奎宁酸(3-O-caffeoylquinicacid)，分子式C₁₆O₁₈H₉，是由咖啡酸(caffe acid)与奎宁酸(quinic acid)组成的缩酚酸，属于植物体内有氧呼吸过程中经莽草酸途径产生的一种苯丙素类次生代谢产物。近年已发现绿原酸具抗氧化、抗高血压、抗菌、抗肿瘤、抗辐射、降血糖、降血脂、抗炎、补肾、保肝等多种药理作用，是许多药材的有效成分。除了药用外，绿原酸还可用于食品工业作食品和果品的保鲜剂。绿原酸广泛存在于高等双子叶植物和蕨类植物中，在忍冬科忍冬属(Lonicera)、菊科蒿属(Artemisia)植物中含量较高，如杜仲、金银花。因此，目前绿原酸的提取及研究主要以金银花和杜仲为原料。甘薯中绿原酸含量虽然低于金银花和杜仲，但其种植范围广，生物量大且价格低廉，因而从甘薯中获取绿原酸具有较好的应用前景。

苯基丙氨酸解氨酶基因PAL位于绿原酸合成途径上游，是绿原酸生物合成途径中的关键基因之一。通过运用分子生物学手段对甘薯中IbPAL1基因进行正向调节以控制碳素流向绿原酸合成途径，将明显有助于提高甘薯绿原酸合成及其营养价值，进一步促进植物绿原酸次生代谢工程的应用。

发明内容

本发明的目的在于之一是提供一种甘薯绿原酸合成途径关键酶基因IbPAL1。

本发明的第二个目的是提供一种该基因编码的蛋白质。

本发明的第三个目的是提供一种含有该基因的表达载体。

本发明的第四个目的是提供一种含有该表达载体的宿主细胞。

本发明的最后一个目的在于提供该基因的用途。

本发明的技术方案概述如下：

一种甘薯绿原酸合成途径关键酶基因IbPAL1，核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，由2130个碱基组成。

上述基因编码的蛋白质，氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，由709个氨基酸残基组成。

一种含有上述基因的表达载体pCAMBIA1305-IbPAL1，它含有SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列。

一种含有上述表达载体农杆菌宿主细胞EHA105：pCAMBIA1305-2×35s-IbPAL1。

上述基因在转化植物获得转基因植株中的应用，尤其是在制备转基因甘薯中的应用。

本发明的优点：

本发明从甘薯中分离出甘薯绿原酸合成途径关键酶基因IbPAL1的完整cDNA，连接到植物表达载体上，利用农杆菌侵染法转化植物，获得转基因植株并对其绿原酸含量进行分析，结果表明IbPAL1基因能够提高甘薯绿原酸合成能力。此基因可以应用于植物营养品质的遗传改良。

附图说明

图1.IbPAL1氨基酸序列的系统进化树分析结果

图2.IbPAL1基因组织中的表达

图3.pCAMBIA1305-2×35s-IbPAL1载体示意图

图4.未转化的甘薯株系和转IbPAL1基因植株绿原酸含量比较

具体实施方式

下面将通过具体实施例来对本发明进行进一步的解释，然而应当理解，可以以各种形式实现本发明而不应被这里阐述的实施例所限制。相反，提供这些实施例是为了能够更透彻地理解本发明，并且能够将本发明的范围完整的传达给本领域的技术人员。

如在通篇说明书及权利要求当中所提及的“包含”或“包括”为一开放式用语，故应解释成“包含但不限定于”。说明书后续描述为实施本发明的较佳实施方式，然所述描述乃以说明书的一般原则为目的，并非用以限定本发明的范围。本发明的保护范围当视所附权利要求所界定者为准。

实施例1

甘薯绿原酸合成途径关键酶基因IbPAL1序列获得，具体如下：

利用OMEGA RNA试剂盒，从100mg的新鲜的甘薯叶片中提取总RNA，利用反转录试剂盒(Bioteke)合成cDNA。

具体反应体系如下：

在PCR仪上按以下条件进行反转录反应：1、50℃，45min；2、70℃，10min；之后冰上冷却。

将提取的总RNA送华大基因(Beijing Genomic Institute，BGI)，通过高通量测序获得甘薯转录组数据库，并通过De novo拼接获得甘薯Unigene数据库，其中C41375.Contig1_A11与NCBI数据库比对后发现该基因可能参与绿原酸合成。将C41375.Contig1_A11通过OFR FINDER(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/projects/gorf/)在线软件预测基因完成的ORF，并利用Primer Premier 5设计扩增完整ORF引物：

IbPAL1(F)：5′TGTTCTTCGGATCACCTC 3′

IbPAL1(R)：5′CCATCCCACAAACATTACA 3′

利用TAKARA公司KOD FX聚合酶进行扩增，具体步骤如下：

反应条件如下：94℃，2min；98℃，10sec；58℃，30sec；68℃，1.5min；68℃，10min；34个循环。使用OMEGA DNA纯化试剂盒将PCR产物纯化，纯化后的PCR产物与pEASY-Blunt载体连接(本过程使用TransGEN的pEASY-Blunt Vector Cloning Kit试剂盒)，反应体系如下：IbPAL1基因的cDNA片段4u1，pEASY-Blunt载体1μL。反应条件：25℃，20min。连接产物转化E-Coli.DH5α感受态，涂布在含有40ul 25mg/ml的X-Ga1、16ul 50mg/ml的IPTG、100mg/mLAmp的LB琼脂平板培养基上培养，形成单菌落。挑选白色菌落，使用菌落PCR法确认pEASY-Blunt载体中插入片段的长度大小，与预期一致。送南京金斯瑞生物科技公司测序获得基因序列SEQ ID NO.1。

实施例2

IbPAL1蛋白序列同源分析，具体如下：

测序获得cDNA全长1235bp，ORF为2130bp，编码709个氨基酸SEQ ID NO.2，将翻译获得蛋白序列与NCBI蛋白数据进行比对(http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi)，获得了与IbPAL1蛋白序列相似的植物种属同源基因。在多重比较分析的基础上，建立了各同源植物种属基因的系统进化树，详见图1。包括圆叶牵牛(Ipomoea purpurea，Accession：AHJ60264.1)，牵牛(Ipomoea nil，Accession：AAG49585.1)，烟草(Nicotiana tabacum，Accession：NP_001312352.1)，辣椒(Capsicum baccatum，Accession：PHT36452.1)，黄灯笼辣椒(Capsicum chinense，Accession：PHU04928.1)，番茄(Solanum lycopersicum，Accession：NP_001307538.1)，芝麻(Sesamum indicum，Accession：XP_011094662.1)，中粒种咖啡(Coffea canephora，Accession：AEO92028.1)，茄子(Solanum melongena，Accession：AMK01802.1)，粘毛黄芩(Scutellaria viscidula，Accession：ACR56688.1)，茉莉(Jasminum sambac，Accession：AIY26016.1)，黄花蒿(Artemisia annua，Accession：AKP55356.1)。利用MEGA5.1软件进行系统进化树的构建，得到IbPAL1亲缘关系与圆叶牵牛亲缘关系较近(如图1)。

实施例3

IbPAL1在甘薯中组织中的表达(如图2所示)，具体如下：

以苏薯16号为材料，选取3个单株，对其相同部位的茎(Stem，S)、叶(Leaf，L)，储藏根(Storage root，SR)、纤维根(Fibrous root，FR)和色素根(Pigment root，PR)进行取样，液氮速冻后存于-80℃冰箱。提取RNA并反转成cDNA，方法如实施例1所述。采用是TOYOBO公司的荧光定量试剂盒。反应在定量PCR仪(Applied Biosystems stepone plus)上进行，按照相对定量的方法检测基因的表达量，反应程序按照TOYOBO提供的操作手册进行，甘薯Tubulin基因作为反应中的内参，Tubulin引物序列：F，CAACTACCAGCCACCAACTGT，R，CAAGATCCTCACGAGCTTCAC；IbPAL1定量引物：F，GGGAGCAAGATCAGCCATTG，R，TTCTCTCCGGTCAGCATCTC。

实施例4

双元植物表达载体pCAMBIA1305-IbPAL1的构建，具体如下：

pCAMBIA1305-2×35s-IbPAL1载体示意图如图3所示，首先以pEASY-Blunt-IbPAL1质粒为模板，采用引物

IbPAL1-inf(F)：5′

CGGAGCTAGCTCTAGTGTTCTTCGGATCACCTC 3′

IbPAL1-inf(R)：5′ccGGATCC TTAAACCCTAATTCCATGAT 3′

在IbPAL1前后引入酶切位点XbaI，其反应体系和条件如实施例1中所述。然后PCR产物和pCAMBIA1305空载体质粒用XbaI单酶切，将二者的酶切产物连接，连接体系如下：

连接产物转化E-Coli.DH5α，涂布于含100mg/ml浓度卡纳霉素抗性的LB平板上。37℃培养，12h后挑取单菌落进行菌落PCR验证，将菌落PCR验证阳性的菌，摇菌提取质粒，酶切鉴定得到目的条带，最后送金斯瑞测序公司测序，结果表明载体pCAMBIA1305-2×35s-IbPAL1构建正确。

实施例5

用于植物转基因的农杆菌菌种EHA105：pCAMBIA1305-2×35s-IbPAL1的构建，具体如下：

本发明使用的农杆菌菌株为EHA105。采用的是液氮冻融法将构建好的表达载体转入农杆菌。具体过程为：1)冰浴融化EHA105感受态细胞，加入至少100ng回收纯化的表达载体质粒，轻轻混匀，冰浴20～30min；2)液氮速冻5min，37℃热击5min，迅速置于冰上5min；3)加入800μL无抗生素的LB培养基，28℃，200rpm复苏3.5h；4)4000rpm离心3min，吸掉培养基；5)混匀剩余菌液，涂抹于添加100mg/ml卡纳霉素和100mg/ml利福平的固体LB培基上；6)28℃倒置培养30～48h；7)PCR检测阳性克隆，4℃保存备用。

实施例6

IbPAL1转化甘薯徐薯29号(品种名)，具体如下：

将实施例5中阳性克隆接种到50ml YEP(含100μg/ml Rif、100μg/ml Kan)液体培养基中，28℃ 180rpm继续培养至OD600至0.6～0.8。4000rpm离心10min，弃培养基，收集菌体。用MS1D液体培养基(含0.1％As)将菌体稀释至OD600 0.3～0.5，制备成甘薯转化侵染液。将甘薯愈伤浸入其中20min，期间遮光置于摇床缓慢摇晃。超声波超声10sec后，倒掉侵染液，用消毒滤纸吸干愈伤表面水分，将干燥的已侵染愈伤转入MS1D(含0.1％As)培养基上共培2～3d(黑暗)。用无菌水洗净愈伤表面农杆菌，将愈伤转移至筛选培养基上(MS1D+10mg/l潮霉素+400mg/l cefotaxime)，暗培4-6周后转移至再生培养基。将潮霉素筛选后的愈伤转移至再生培养基MSCH(4.4g/l MS+10mg/l潮霉素+200mg/l cefotaxime)，待分化成苗后将苗转移至生根培养基SBMC(4.4g/l MS+200mg/l cefotaxime+0.3mg/lVB₁)。

将分化成苗的转基因苗移栽至盆钵，成活后(约7～14d)提取叶片DNA进行PCR鉴定，引物及PCR程序同实施例1中的IbPAL1基因中间片断的克隆，1％琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物。对经PCR检测为阳性的转基因植株进一步取样，提取RNA进行Real-time PCR定量分析，以验证IbPAL1过表达效应。

然后，对IbPAL1基因甘薯过表达植株绿原酸含量进行测定

测定方法如下：

绿原酸标准曲线绘制：准确称取5.0mg绿原酸标准品，用50％甲醇溶液在超声条件下使其完全溶解，并定容至25mL，得到浓度为0.2mg/mL的标准品溶液。分别取0.5、1.0、1.5、2.0和2.5mL标准品溶液置于25mL棕色容量瓶中，用50％甲醇溶液定容。在吸收光波长为327nm的紫外分光光度计中测定吸光度，以浓度为x坐标，吸光度为y坐标绘制。

以未转化的徐薯29号为对照(X29)，取IbPAL1过表达转基因植株(OV1、OV3、OV4、OV5)和对照植株(X29)相同部位叶片进行绿原酸含量测定，每植株设3次重复，具体操作步骤如下：准确称取烘干后的甘薯叶0.2g于100mL具塞锥形瓶中，加50％甲醇20mL浸泡24h，超声0.5h后过滤、洗涤。重复操作2次，合并滤液，用50％甲醇定容于50mL容量瓶中，稀释10倍后待测。测定结果如图4所示，OV1、OV3、OV4、OV5均比对照X29的绿原酸含量高。

虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施例对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

序列表

<110> 江苏省农业科学院

<120> 甘薯绿原酸合成途径中关键酶基因IbPAL1及应用

<130> 2018

<160> 2

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 2130

<212> DNA

<213> Ipomoea batatas

<400> 1

atggagggcg caattgcaaa cggccacacc aatgatttct gcatgaaagt tgatccgctg 60

aactgggaaa tggcggctga ctcattgaag ggcagccact tggatgaagt gaagcgcatg 120

gtggcggagt tcaggaaccc cgccgtgaag atcggaggcc agaccctcac cgtcgctcag 180

gtcgccgcca tcgccgcccg tgataatgcc gtcaaagtgg agctctccga ggctgcccgc 240

cccggcgtga aagccagcag tgactgggtt atgaacagca tgaacaatgg caccgatagc 300

tacggtgtca ccaccggctt cggcgccacc tctcaccgga gaaccaaaaa cggccatgct 360

cttcagcagg agctcatcag gttcttgaat gctggaattt ttgggactgg aacaggggca 420

agccacacac tacctcactc agctacaagg gcagctatgc ttgtgaggat caacactctt 480

cttcaaggat actccgggat cagatttgag atcttggaag ccattactaa attgctcaac 540

cataacatca ctccatgcct gcctctccgt ggcacaatca ccgcctccgg tgaccttgtg 600

cctttatcct acatcgccgg tttgctcacc ggccgcccta attccaaggc ggttggaccc 660

aacggtgagg ccctcaccgc ggaggaggcg ttcaaactcg ccggagttca gggtgggttc 720

ttcgagttgc agcctaagga agggcttgca cttgtgaatg gcactgctgt gggttctggc 780

atggcgtcta tggtcctctt tgaagctaat gttcttgcgg tgttgtctga ggttttgtct 840

gcaattttcg ctgaggtgat gaatgggaag cctgagttta ccgaccattt gactcataag 900

ttgaagcatc atcctggtca aattgaggct gcggctatta tggaacatat tttggatgga 960

agctattaca tgaaggctgc acagaagctg cacgaaatgg atccattgca gaaacccaaa 1020

caagatcgtt atgctctgag aacatctccc cagtggctcg gccctcagat tgaagtcata 1080

agacaagcaa ccaaaatgat tgagagggaa atcaactctg tcaacgacaa ccctttgatc 1140

gacgtttcta gaaacaaggc cttgcacggc ggcaatttcc aaggtacccc cattggtgtg 1200

tccatggaca attctagatt agcccttgcc tccatcggaa aactcatctt cgcccaattc 1260

tctgagcttg ttaacgacta ttacaacaac ggattgccgt ccaatctcac cgccgggagg 1320

aacccaagtc tggattatgg attcaagggc gctgaaatcg ccatggcttc atactgttcc 1380

gagcttcaat tcttggctaa tcccgtcacc aatcacgtcc agagcgcgga gcagcacaac 1440

caagatgtta actccctggg tttgatctct gcaagaaaga cagctgaagc tgttgatgtg 1500

ttgaaactca tgtcctccac ttatctagtg gcgctctgcc aggcaattga tctgaggcac 1560

ctggaggaga atttgaagaa cgcggtgaag aacacggtca gccaggtggc caagaggact 1620

ctcacaatgg gcgtcaatgg agaactccac ccatcaagat tctgcgaaaa agacttgctc 1680

agagtagtgg accgcgaata cgttttcgcc tacgctgacg atccctgcag cgcaaactac 1740

ccattgtttc aaaagctcag gcaagtcctt gtagatcacg ccctgcagaa cggcgagcac 1800

gagaagaatg tgagcacatc aatcttccaa aagattgcag ctttcgaaga cgaactcaag 1860

gcagtcctgc ccaaagaagt ggagggagca agatcagcca ttgaaaacgg aaaccctgca 1920

attcccaaca gaatcaccga gtgcaggtct tatcctctgt acaagtttgt ccgcgaagaa 1980

ctcgagacgg agatgctgac cggagagaag gtgaagtcgc cgggagaagt gtgtgataag 2040

gtgttcacag cggtgtgcga tggagggatc attgatccat tgttggaatg cctcaagagc 2100

tgggatgggg ctcctcttcc tatctgttaa 2130

<210> 2

<211> 709

<212> PRT

<213> Ipomoea batatas

<400> 2

Met Glu Gly Ala Ile Ala Asn Gly His Thr Asn Asp Phe Cys Met Lys

1 5 10 15

Val Asp Pro Leu Asn Trp Glu Met Ala Ala Asp Ser Leu Lys Gly Ser

20 25 30

His Leu Asp Glu Val Lys Arg Met Val Ala Glu Phe Arg Asn Pro Ala

35 40 45

Val Lys Ile Gly Gly Gln Thr Leu Thr Val Ala Gln Val Ala Ala Ile

50 55 60

Ala Ala Arg Asp Asn Ala Val Lys Val Glu Leu Ser Glu Ala Ala Arg

65 70 75 80

Pro Gly Val Lys Ala Ser Ser Asp Trp Val Met Asn Ser Met Asn Asn

85 90 95

Gly Thr Asp Ser Tyr Gly Val Thr Thr Gly Phe Gly Ala Thr Ser His

100 105 110

Arg Arg Thr Lys Asn Gly His Ala Leu Gln Gln Glu Leu Ile Arg Phe

115 120 125

Leu Asn Ala Gly Ile Phe Gly Thr Gly Thr Gly Ala Ser His Thr Leu

130 135 140

Pro His Ser Ala Thr Arg Ala Ala Met Leu Val Arg Ile Asn Thr Leu

145 150 155 160

Leu Gln Gly Tyr Ser Gly Ile Arg Phe Glu Ile Leu Glu Ala Ile Thr

165 170 175

Lys Leu Leu Asn His Asn Ile Thr Pro Cys Leu Pro Leu Arg Gly Thr

180 185 190

Ile Thr Ala Ser Gly Asp Leu Val Pro Leu Ser Tyr Ile Ala Gly Leu

195 200 205

Leu Thr Gly Arg Pro Asn Ser Lys Ala Val Gly Pro Asn Gly Glu Ala

210 215 220

Leu Thr Ala Glu Glu Ala Phe Lys Leu Ala Gly Val Gln Gly Gly Phe

225 230 235 240

Phe Glu Leu Gln Pro Lys Glu Gly Leu Ala Leu Val Asn Gly Thr Ala

245 250 255

Val Gly Ser Gly Met Ala Ser Met Val Leu Phe Glu Ala Asn Val Leu

260 265 270

Ala Val Leu Ser Glu Val Leu Ser Ala Ile Phe Ala Glu Val Met Asn

275 280 285

Gly Lys Pro Glu Phe Thr Asp His Leu Thr His Lys Leu Lys His His

290 295 300

Pro Gly Gln Ile Glu Ala Ala Ala Ile Met Glu His Ile Leu Asp Gly

305 310 315 320

Ser Tyr Tyr Met Lys Ala Ala Gln Lys Leu His Glu Met Asp Pro Leu

325 330 335

Gln Lys Pro Lys Gln Asp Arg Tyr Ala Leu Arg Thr Ser Pro Gln Trp

340 345 350

Leu Gly Pro Gln Ile Glu Val Ile Arg Gln Ala Thr Lys Met Ile Glu

355 360 365

Arg Glu Ile Asn Ser Val Asn Asp Asn Pro Leu Ile Asp Val Ser Arg

370 375 380

Asn Lys Ala Leu His Gly Gly Asn Phe Gln Gly Thr Pro Ile Gly Val

385 390 395 400

Ser Met Asp Asn Ser Arg Leu Ala Leu Ala Ser Ile Gly Lys Leu Ile

405 410 415

Phe Ala Gln Phe Ser Glu Leu Val Asn Asp Tyr Tyr Asn Asn Gly Leu

420 425 430

Pro Ser Asn Leu Thr Ala Gly Arg Asn Pro Ser Leu Asp Tyr Gly Phe

435 440 445

Lys Gly Ala Glu Ile Ala Met Ala Ser Tyr Cys Ser Glu Leu Gln Phe

450 455 460

Leu Ala Asn Pro Val Thr Asn His Val Gln Ser Ala Glu Gln His Asn

465 470 475 480

Gln Asp Val Asn Ser Leu Gly Leu Ile Ser Ala Arg Lys Thr Ala Glu

485 490 495

Ala Val Asp Val Leu Lys Leu Met Ser Ser Thr Tyr Leu Val Ala Leu

500 505 510

Cys Gln Ala Ile Asp Leu Arg His Leu Glu Glu Asn Leu Lys Asn Ala

515 520 525

Val Lys Asn Thr Val Ser Gln Val Ala Lys Arg Thr Leu Thr Met Gly

530 535 540

Val Asn Gly Glu Leu His Pro Ser Arg Phe Cys Glu Lys Asp Leu Leu

545 550 555 560

Arg Val Val Asp Arg Glu Tyr Val Phe Ala Tyr Ala Asp Asp Pro Cys

565 570 575

Ser Ala Asn Tyr Pro Leu Phe Gln Lys Leu Arg Gln Val Leu Val Asp

580 585 590

His Ala Leu Gln Asn Gly Glu His Glu Lys Asn Val Ser Thr Ser Ile

595 600 605

Phe Gln Lys Ile Ala Ala Phe Glu Asp Glu Leu Lys Ala Val Leu Pro

610 615 620

Lys Glu Val Glu Gly Ala Arg Ser Ala Ile Glu Asn Gly Asn Pro Ala

625 630 635 640

Ile Pro Asn Arg Ile Thr Glu Cys Arg Ser Tyr Pro Leu Tyr Lys Phe

645 650 655

Val Arg Glu Glu Leu Glu Thr Glu Met Leu Thr Gly Glu Lys Val Lys

660 665 670

Ser Pro Gly Glu Val Cys Asp Lys Val Phe Thr Ala Val Cys Asp Gly

675 680 685

Gly Ile Ile Asp Pro Leu Leu Glu Cys Leu Lys Ser Trp Asp Gly Ala

690 695 700

Pro Leu Pro Ile Cys

705

Claims

1.一种甘薯绿原酸合成途径中关键酶基因IbPAL1，其特征在于，所述关键酶基因IbPAL1是SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列，该基因能够促进甘薯绿原酸合成。

2.权利要求1所述关键酶基因IbPAL1编码的蛋白质，其特征在于，所述蛋白质是SEQ IDNo.2所示的氨基酸序列。

3.一种含有权利要求1所述关键酶基因IbPAL1的表达载体pCAMBIA1305-2×35s-IbPAL1。

4.一种含有权利要求3所述表达载体的农杆菌宿主细胞EHA105：pCAMBIA1305-2×35s-IbPAL1。

5.权利要求3或4所述的表达载体在转化植物获得转基因植株中的应用。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述的植物为甘薯。