CN109136155A - 一种防治果树根腐病的微生物菌剂的制备方法 - Google Patents

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马文虎
李保珍
郭朝阳
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C05—FERTILISERS; MANUFACTURE THEREOF
    • C05F—ORGANIC FERTILISERS NOT COVERED BY SUBCLASSES C05B, C05C, e.g. FERTILISERS FROM WASTE OR REFUSE
    • C05F11/00—Other organic fertilisers
    • C05F11/08—Organic fertilisers containing added bacterial cultures, mycelia or the like

Abstract

本发明涉及一种防治果树根腐病的微生物菌剂的制备方法，包括选取菌种、一级培养基的配置及灭菌处理、一级发酵培养、二级发酵培养、三级发酵培养和四级发酵培养，最后发酵形成光合细菌菌数达到≥20亿/ml的微生物菌剂。本发明的微生物菌剂肥料施入土壤后迅速大量繁殖，通过以菌治菌的原理，光合细菌可有效消灭根腐菌等有害病菌，降解农药化肥残留，消除重金属污染，改良修复土壤，为果树根系生长提供良好的土壤生态环境，从而恢复树体健康，达到防治根腐病的效果。

Description

一种防治果树根腐病的微生物菌剂的制备方法
技术领域
本发明属于肥料领域，具体涉及一种微生物菌剂的制备方法，尤其涉及一种防治果树根腐病的微生物菌剂的制备方法。
背景技术
由于长期大量使用化肥农药造成果树种植土壤严重板结酸化，造成果树根腐病病菌大量繁殖。根腐病现象普遍发生，严重影响果树种植产业的健康持续发展，给果农造成了巨大的经济损失。土施杀菌剂和挖根晾晒等措施是多年以来治疗果树根腐病的传统办法，不仅费工费力而且投入较大、效果甚微。因此，果树根腐病如“癌症”一样困扰着果农，严重威胁果业的健康发展。截至目前，能在当年治愈根腐病并恢复树势的技术措施很少，因此，探索一种省工省力低成本高效的防治果树根腐病的肥料非常迫切和必要。
发明内容
鉴于此，本发明的目的在于，提供一种防治果树根腐病的微生物菌剂的制备方法，旨在克服目前根腐病无法彻底治愈的缺陷。
为了达到上述发明目的，进而采取的技术方案如下：
一种防治果树根腐病的微生物菌剂的制备方法，包括以下步骤：
S1：选取菌种：选取合格且优良的沼泽红假单胞菌和球形红细菌组成光合细菌纯菌种，其中沼泽红假单胞菌60-80份、球形红细菌10-30份；
S2：一级培养基的配置及灭菌处理：将酵母膏40-60g、硫酸铵100-300g、葡萄糖100-300g、磷酸二氢钾50-150g、磷酸氢二钾10-80g、硫酸镁1-15g、氯化钙5-20g添加到100kg的水中，调节混合水溶液的pH值为6.8-7.2，然后在100-130℃的高温条件下灭菌20-35分钟后冷却至30-40℃的条件下待用；
S3：一级发酵培养：在30-40℃的无菌条件下，选取500ml步骤S1制备的光合细菌纯菌种，将其接种至步骤S2配置的一级培养基中然后置于发酵罐内,在温度为28-30℃、1000Lx的光照条件下扩繁培养至5000ml，待培养3-5天后发酵形成一级发酵产物；
S4：二级发酵培养：在30-40℃的无菌条件下，将步骤S3发酵制备的一级发酵产物接种至二级培养基中然后置于发酵罐内,在温度为28-30℃、1000Lx的光照条件下扩繁培养至50kg，待培养3-5天后发酵形成二级发酵产物；其中，所述二级培养基的配置是按照步骤S2所述的一级培养基的10倍进行配置且二级培养基配置后采用与步骤S2相同的灭菌处理；
S5：三级发酵培养：在30-40℃的无菌条件下，将步骤S4发酵制备的二级发酵产物接种至三级培养基中然后置于发酵罐内,在温度为28-30℃、1000Lx的光照条件下扩繁培养至500kg，待培养3-5天后发酵形成三级发酵产物；其中，所述三级培养基的配置是按照步骤S2所述的一级培养基的100倍进行配置且三级培养基配置后采用与步骤S2相同的灭菌处理；
S6：四级发酵培养：在30-40℃的无菌条件下，将步骤S5发酵制备的三级发酵产物接种至四级培养基中然后置于发酵罐内,在温度为28-30℃、1000Lx的光照条件下扩繁培养至3000kg，待培养3-5天后发酵形成光合细菌菌数达到≥20亿/ml的微生物菌剂；其中，所述四级培养基的配置是按照步骤S2所述的一级培养基的600倍进行配置且四级培养基配置后采用与步骤S2相同的灭菌处理。
本发明的有益效果：本发明采用特殊的培养基配方，光合细菌菌种快速发酵，菌液浓度达到20亿/ml以上，该微生物肥料施入土壤后迅速大量繁殖，通过以菌治菌的原理，光合细菌可有效消灭根腐菌等有害病菌，降解农药化肥残留，消除重金属污染，改良修复土壤，为果树根系生长提供良好的土壤生态环境，从而恢复树体健康，达到防治根腐病的效果。该微生物菌种适应能力强，在土壤中存活时间长，具有固氮解磷解钾功效，富含多种营养元素和维生素、有益微量元素、生长调节物质、细胞修复因子，富含生物硒等多种调节植物新陈代谢活性物质，可大幅提高土壤肥力，减少化肥使用量，从而为果树生长提供优良的生态环境条件和营养，果树种植形成良性循环，降低种植成本。光合细菌微生物菌剂能够解除化肥农药重金属污染，保障土壤安全，确保农产品安全，实现了优质高产高效目标。
具体实施方式
本发明主要解决治疗果树根腐病的现有肥料存在着费工费力且投入大没效果的问题，从而研究开发出了一种能有效解决果树根腐病的微生物肥料及其制备方法，不仅能有效防治果树根腐病，降解化肥农药残留，而且能修复改良土壤，恢复树势健壮。
下面将结合具体的实施方式对本发明的技术方案做进一步的详细说明。
实施例1
一种防治果树根腐病的微生物菌剂的制备方法，包括以下步骤：
S1：选取菌种：选取合格且优良的沼泽红假单胞菌和球形红细菌组成光合细菌纯菌种，其中沼泽红假单胞菌60份、球形红细菌10份；
S2：一级培养基的配置及灭菌处理：将酵母膏40g、硫酸铵100g、葡萄糖100-、磷酸二氢钾50g、磷酸氢二钾10g、硫酸镁1g、氯化钙5g添加到100kg的水中，调节混合水溶液的pH值为6.8，然后在100℃的高温条件下灭菌20分钟后冷却至30℃的条件下待用；
S3：一级发酵培养：在30℃的无菌条件下，选取500ml步骤S1制备的光合细菌纯菌种，将其接种至步骤S2配置的一级培养基中然后置于发酵罐内,在温度为28℃、1000Lx的光照条件下扩繁培养至5000ml，待培养3天后发酵形成一级发酵产物；
S4：二级发酵培养：在30℃的无菌条件下，将步骤S3发酵制备的一级发酵产物接种至二级培养基中然后置于发酵罐内,在温度为28℃、1000Lx的光照条件下扩繁培养至50kg，待培养3天后发酵形成二级发酵产物；其中，所述二级培养基的配置是按照步骤S2所述的一级培养基的10倍进行配置且二级培养基配置后采用与步骤S2相同的灭菌处理；
S5：三级发酵培养：在30℃的无菌条件下，将步骤d)发酵制备的二级发酵产物接种至三级培养基中然后置于发酵罐内,在温度为28℃、1000Lx的光照条件下扩繁培养至500kg，待培养3天后发酵形成三级发酵产物；其中，所述三级培养基的配置是按照步骤S2所述的一级培养基的100倍进行配置且三级培养基配置后采用与步骤S2相同的灭菌处理；
S6：四级发酵培养：在30℃的无菌条件下，将步骤e)发酵制备的三级发酵产物接种至四级培养基中然后置于发酵罐内,在温度为28℃、1000Lx的光照条件下扩繁培养至3000kg，待培养3天后发酵形成光合细菌菌数达到≥20亿/ml的微生物菌剂；其中，所述四级培养基的配置是按照步骤S2所述的一级培养基的600倍进行配置且四级培养基配置后采用与步骤S2相同的灭菌处理。
实施例2
一种防治果树根腐病的微生物菌剂的制备方法，包括以下步骤：
S1：选取菌种：选取合格且优良的沼泽红假单胞菌和球形红细菌组成光合细菌纯菌种，其中沼泽红假单胞菌80份、球形红细菌20份；
S2：一级培养基的配置及灭菌处理：将酵母膏50g，硫酸铵300g,葡萄糖300g，磷酸二氢钾100g，磷酸氢二钾50g，硫酸镁10g,氯化钙10g添加到100kg的水中，调节混合水溶液的pH值为7，然后在121℃的高温条件下灭菌30分钟后冷却至35℃的条件下待用；
S3：一级发酵培养：在35℃的无菌条件下，选取500ml步骤S1制备的光合细菌纯菌种，将其接种至步骤S2配置的一级培养基中然后置于发酵罐内,在温度为30℃、1000Lx的光照条件下扩繁培养至5000ml，待培养4天后发酵形成一级发酵产物；
S4：二级发酵培养：在35℃的无菌条件下，将步骤S3发酵制备的一级发酵产物接种至二级培养基中然后置于发酵罐内,在温度为30℃、1000Lx的光照条件下扩繁培养至50kg，待培养4天后发酵形成二级发酵产物；其中，所述二级培养基的配置是按照步骤S2所述的一级培养基的10倍进行配置且二级培养基配置后采用与步骤S2相同的灭菌处理；
S5：三级发酵培养：在35℃的无菌条件下，将步骤S4发酵制备的二级发酵产物接种至三级培养基中然后置于发酵罐内,在温度为30℃、1000Lx的光照条件下扩繁培养至500kg，待培养4天后发酵形成三级发酵产物；其中，所述三级培养基的配置是按照步骤S2所述的一级培养基的100倍进行配置且三级培养基配置后采用与步骤S2相同的灭菌处理；
S6：四级发酵培养：在35℃的无菌条件下，将步骤S5发酵制备的三级发酵产物接种至四级培养基中然后置于发酵罐内,在温度为30℃、1000Lx的光照条件下扩繁培养至3000kg，待培养4天后发酵形成光合细菌菌数达到≥20亿/ml的微生物菌剂；其中，所述四级培养基的配置是按照步骤S2所述的一级培养基的600倍进行配置且四级培养基配置后采用与步骤S2相同的灭菌处理。
实施例3
一种防治果树根腐病的微生物菌剂的制备方法，包括以下步骤：
S1：选取菌种：选取合格且优良的沼泽红假单胞菌和球形红细菌组成光合细菌纯菌种，其中沼泽红假单胞菌70份、球形红细菌30份；
S2：一级培养基的配置及灭菌处理：将酵母膏60g、硫酸铵300g、葡萄糖300g、磷酸二氢钾150g、磷酸氢二钾80g、硫酸镁15g、氯化钙20g添加到100kg的水中，调节混合水溶液的pH值为7.2，然后在130℃的高温条件下灭菌35分钟后冷却至40℃的条件下待用；
S3：一级发酵培养：在40℃的无菌条件下，选取500ml步骤S制备的光合细菌纯菌种，将其接种至步骤S2配置的一级培养基中然后置于发酵罐内,在温度为30℃、1000Lx的光照条件下扩繁培养至5000ml，待培养5天后发酵形成一级发酵产物；
S4：二级发酵培养：在40℃的无菌条件下，将步骤S3发酵制备的一级发酵产物接种至二级培养基中然后置于发酵罐内,在温度为30℃、1000Lx的光照条件下扩繁培养至50kg，待培养5天后发酵形成二级发酵产物；其中，所述二级培养基的配置是按照步骤S2所述的一级培养基的10倍进行配置且二级培养基配置后采用与步骤S2相同的灭菌处理；
S5：三级发酵培养：在30℃的无菌条件下，将步骤S4发酵制备的二级发酵产物接种至三级培养基中然后置于发酵罐内,在温度为30℃、1000Lx的光照条件下扩繁培养至500kg，待培养5天后发酵形成三级发酵产物；其中，所述三级培养基的配置是按照步骤S2所述的一级培养基的100倍进行配置且三级培养基配置后采用与步骤S2相同的灭菌处理；
S6：四级发酵培养：在40℃的无菌条件下，将步骤S5发酵制备的三级发酵产物接种至四级培养基中然后置于发酵罐内,在温度为30℃、1000Lx的光照条件下扩繁培养至3000kg，待培养5天后发酵形成光合细菌菌数达到≥20亿/ml的微生物菌剂；其中，所述四级培养基的配置是按照步骤S2所述的一级培养基的600倍进行配置且四级培养基配置后采用与步骤S2相同的灭菌处理。
上述实施例1-3中涉及的光合细菌纯菌种是选用经山西大学培养、筛选出的优良光合细菌纯菌种，经四级发酵培养，使光合细菌生长并无限繁殖，最终生产出一种防治果树根腐病的微生物菌剂。
为了进一步证明本发明的微生物菌剂在治愈果树根腐病上的效果，进一步做了实施对照试验，试验方案如下：
利用实施例1-3所制备的微生物菌剂，通过灌根方式进行果树根腐病的防治。选取山西翼城县隆化镇高家洼村的70亩苹果树作为试验田一、山西襄汾县赵康镇大赵村的60亩海棠树作为试验田二，山西吉县东城镇社提村的25亩苹果树作为试验田三。
序号 试验土地性质 土地PH值 土地有机质含量 树龄 前茬作物
试验田一 中壤土 5.5 1.0 9年 苹果
试验田二 蒙潮土 4.6 0.9 8年 小麦
试验田三 壤土 5.2 1.2 20年 小麦
此次试验共设3个处理，3次重复，共计9个小区。3个处理分别是：微生物菌剂、杀菌剂、清水对照。试验田一采用的是实施例1制备的微生物菌剂，试验田二采用的是实施例2制备的微生物菌剂，试验田三采用的是实施例3制备的微生物菌剂。处理中使用的杀菌剂现有防治果树根腐病的常用杀菌剂。
微生物菌剂的处理面积分别为68亩、58亩、23亩，杀菌剂处理面积1亩、清水处理面积1亩。
表1为三块试验田药效根腐病试验结果统计表
试验结果表明：施用微生物菌剂与杀菌剂、清水对照相比，能大幅度降低苹果树根腐病病株率，防治率达96％，由此可见：本发明的微生物菌剂防治果树根腐病明显优于其他方面产品。

Claims (1)

1.一种防治果树根腐病的微生物菌剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1：选取菌种：选取合格且优良的沼泽红假单胞菌和球形红细菌组成光合细菌纯菌种，其中沼泽红假单胞菌60-80份、球形红细菌10-30份；
S2：一级培养基的配置及灭菌处理：将酵母膏40-60g、硫酸铵100-300g、葡萄糖100-300g、磷酸二氢钾50-150g、磷酸氢二钾10-80g、硫酸镁1-15g、氯化钙5-20g添加到100kg的水中，调节混合水溶液的pH值为6.8-7.2，然后在100-130℃的高温条件下灭菌20-35分钟后冷却至30-40℃的条件下待用；
S3：一级发酵培养：在30-40℃的无菌条件下，选取500ml步骤S1制备的光合细菌纯菌种，将其接种至步骤S2配置的一级培养基中然后置于发酵罐内,在温度为28-30℃、1000Lx的光照条件下扩繁培养至5000ml，待培养3-5天后发酵形成一级发酵产物；
S4：二级发酵培养：在30-40℃的无菌条件下，将步骤S3发酵制备的一级发酵产物接种至二级培养基中然后置于发酵罐内,在温度为28-30℃、1000Lx的光照条件下扩繁培养至50kg，待培养3-5天后发酵形成二级发酵产物；其中，所述二级培养基的配置是按照步骤S2所述的一级培养基的10倍进行配置且二级培养基配置后采用与步骤S2相同的灭菌处理；
S5：三级发酵培养：在30-40℃的无菌条件下，将步骤S4发酵制备的二级发酵产物接种至三级培养基中然后置于发酵罐内,在温度为28-30℃、1000Lx的光照条件下扩繁培养至500kg，待培养3-5天后发酵形成三级发酵产物；其中，所述三级培养基的配置是按照步骤S2所述的一级培养基的100倍进行配置且三级培养基配置后采用与步骤S2相同的灭菌处理；
S6：四级发酵培养：在30-40℃的无菌条件下，将步骤S5发酵制备的三级发酵产物接种至四级培养基中然后置于发酵罐内,在温度为28-30℃、1000Lx的光照条件下扩繁培养至3000kg，待培养3-5天后发酵形成光合细菌菌数达到≥20亿/ml的微生物菌剂；其中，所述四级培养基的配置是按照步骤S2所述的一级培养基的600倍进行配置且四级培养基配置后采用与步骤S2相同的灭菌处理。
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