CN109055231B - 一种真菌发酵液及其应用 - Google Patents

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    • A01N63/30—Microbial fungi; Substances produced thereby or obtained therefrom

Abstract

一种真菌发酵液及其应用，属于应用微生物学领域。本发明使用的真菌菌株是层叠韧革菌（Stereum complicatum）YMF1.5060，菌株已于2018年3月23日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所；保藏号：CGMCC No.15370。该发酵液作为生防菌制剂在防治南方根结线虫（Meloidogyne incognita）中的应用。本发明的优点在于：层叠韧革菌（S.complicatum）YMF1.5060使用马铃薯葡萄糖培养基和综合马铃薯葡萄糖培养基培养所得发酵液活性好，48小时对南方根结线虫（M.incognita）的校正致死率分别为94.7%、95.1%，能够作为生防菌制剂在防治南方根结线虫（M.incognita）中应用。

Description

一种真菌发酵液及其应用
技术领域
本发明涉及一种真菌层叠韧革菌（Stereum complicatum）YMF1.5060 发酵液及其应用，属于应用微生物学领域。
背景技术
植物线虫引起的病害已成为农业生产中的第二大类病害，每年给全世界造 成严重的经济损失。其防治以化学农药为主，随着长期使用各种化学农药所带来 的环境污染问题的日趋严重，部分化学杀线虫剂被禁用，因此利用线虫天敌对线 虫进行生物防治越来越受到重视。微生物由于易培养，生长周期短，因此利用微 生物及其代谢产物防治线虫受到人们的关注。南方根结线虫（Meloidogyne incognita）是危害最为严重的植物病原线虫之一，所引起的病害是一种极难防治 的土传性病害。真菌层叠韧革菌（S. complicatum）是担子菌门，伞菌纲，红菇目，韧革菌科，韧革菌属真菌。目前没有该种真菌杀线虫活性的报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种真菌层叠韧革菌（S. complicatum）YMF1.5060 发酵液及其应用。
本发明是这样实现的：
1.本发明使用的真菌菌株是层叠韧革菌（S. complicatum）YMF1.5060，该菌株已于 2018 年 3 月 23 日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路 1 号院 3 号中国科学院微生物研究所；保藏号：CGMCCNo. 15370。
2.层叠韧革菌（S. complicatum）YMF1.5060发酵液的制备
培养基：马铃薯葡萄糖培养基、综合马铃薯葡萄糖培养基。培养基的组成和配制方法如下:
马铃薯葡萄糖培养基：马铃薯 200 g 切成小块加水煮沸半小时后，过滤取滤 液用自来水定容至 1 L，加入葡萄糖 20 g ，pH自然，121 ℃灭菌 20 分钟。
综合马铃薯葡萄糖培养基：马铃薯 200 g 切成小块加水煮沸半小时后，过滤取滤液用自来水定容至 1 L，加入葡萄糖 20 g 、KH2PO4 3.0 g 、MgSO4 1.5 、柠檬酸 0.1 g 、维生素 B1 10 mg, pH 自然，121 ℃ 灭菌 20 分钟。
用马铃薯葡萄糖培养基、综合马铃薯葡萄糖培养基，对层叠韧革菌（S. complicatum）YMF1.5060 进行液体摇床 150 rpm-180 rpm，25-28℃培养 14 天后，取部分发酵液，将其过滤，除去其中的绝大部分菌丝，然后用 2 mL 的离心管（8000 rpm，10 min）离心除去剩余菌丝或颗粒杂质，用移液枪吸取上清，将上清液收集于无菌小瓶中，4 ℃保存备用。
3. 真菌发酵液杀线虫活性测定方法
a. 用移液枪吸取上述已处理好的发酵液，加入到直径为 3 cm 培养皿中，每 个培养皿中加入 1.5 mL，作为实验组；对照组为加入等体积（1.5 mL）已灭菌的 同种培养基液体。最后向每个平板中加入约 150 条测试线虫，实验组和对照组各 做三个平行。
b. 观察真菌发酵液的活性测试：不同时间段对活性测试结果进行观察，在显 微镜下进行计数，记录线虫死亡数和线虫总数。
c. 致死率和校正致死率的计算方法：
致死率=（实验组线虫死亡数/实验组线虫总数）%；
校正致死率=致死率-（对照组线虫死亡数/对照组线虫总数）%。
本发明的优点在于：层叠韧革菌（S. complicatum）YMF1.5060 使用马铃薯葡萄糖培养基和综合马铃薯葡萄糖培养基培养所得发酵液活性好，48 小时对南方根结线虫（M. incognita）的校正致死率分别为 94.7 %、95.1 %，能够作为生防菌制剂在防 治南方根结线虫（M. incognita）中应用。
具体实施方式：
以下是本发明的实施例，但本发明的内容并不局限于此。
实施例的层叠韧革菌（S. complicatum）YMF1.5060使用马铃薯葡萄糖培养基和综合马铃薯葡萄糖培养基分别培养的发酵液，杀线虫活性测定方法同发明内容部分的描述。
实施例1 ：用马铃薯葡萄糖培养基，在 28 ℃对层叠韧革菌（S. complicatum）YMF1.5060进行液体摇床 150 rpm 培养 14 天后，将部分发酵液过滤，除去其中的绝大部分菌丝，然后用 2 mL 的离心管（8000 rpm，10 min）除去剩余菌丝或颗粒杂质，用移液枪吸取上清，将上清液收集于 20 mL 无菌小瓶中。
按照上文所述的发 酵 液杀线虫活性测定方 法进行层叠韧革菌（S. complicatum）YMF1.5060 发酵液的毒杀南方根结线虫（M. incognita）的活性实验，结果用百分率表示。
表 1 马铃薯葡萄糖培养基发酵液的毒杀线虫活性
6 h 18 h 24 h 36 h 48 h
对照 2.7 3.1 3.3 3.3 4.1
发酵液 36.9 61.7 75.3 81.1 98.8
结果表明：真菌层叠韧革菌（S. complicatum）YMF1.5060于马铃薯葡萄糖培养基，28℃，150 rpm 条件下培养 14 天的发酵液对南方根结线虫（M. incognita）有强的毒杀作用，发酵液在 48 小时对南方根结线虫（M. incognita）的校正致死率达到 94.7％。
实施例 2 ：用综合马铃薯葡萄糖培养基，在 25 ℃对层叠韧革菌（S. complicatum）YMF1.5060进行液体摇床 180 rpm 培养 14 天后，将部分发酵液过滤，除去其中的绝大部分菌丝，然后用 2 mL 的离心管（8000 rpm，10 min）除去剩余菌丝或颗粒杂质，用移液枪吸取上清，将上清液收集于 20 mL 无菌小瓶中。
按照同实施例 1 所用的发酵液杀线虫活性测定方法进行层叠韧革菌（S. complicatum）YMF1.5060发酵液的毒杀南方根结线虫（M. incognita）的活性实验，结果用百分率表示。
表 2 综合马铃薯葡萄糖培养基发酵液的毒杀线虫活性
6 h 18 h 24 h 36 h 48 h
对照 1.7 2.2 2.2 2.7 3.3
发酵液 47.7 69.4 72.6 95.6 98.4
结果表明：真菌层叠韧革菌（S. complicatum）YMF1.5060 于综合马铃薯葡萄糖培养基，25℃，180 rpm 条件下培养 14 天的发酵液对南方根结线虫（M. incognita） 有强的毒杀作用，发酵原液在 48 小时对南方根结线虫（M. incognita）的校正致死率达到95.1％。

Claims (2)

1.一种真菌发酵液，其特征在于该发酵液中使用的真菌菌株是层叠韧革菌（Stereum complicatum）YMF1.5060，保藏号：CGMCC No. 15370。
2.权利要求 1 所述的真菌发酵液作为生防菌制剂在防治南方根结线虫（Meloidogyne incognita）中的应用。
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