CN109045046A - 6-重氮-5-氧代-l-正亮氨酸在制备预防或治疗肝癌药物中的应用 - Google Patents

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庹琳
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Abstract

本发明涉及6‑重氮‑5‑氧代‑L‑正亮氨酸在制备预防或治疗肝癌药物中的应用，通过实验发现，DON能够抑制肝癌细胞系的增殖从而抑制肝细胞肝癌的生长，并能够抑制其迁移和侵袭能力，进一步减少肝细胞肝癌转移的可能性。因此可用于治疗或/和预防肝细胞癌及其某些转移性肿瘤，对肝细胞肝癌的恶性增殖及转移性具有良好的抑制作用。

Description

6-重氮-5-氧代-L-正亮氨酸在制备预防或治疗肝癌药物中的 应用
技术领域
本发明属于医药技术领域，特别涉及6-重氮-5-氧代-L-正亮氨酸在制备预防或治疗肝癌药物中的应用。
背景技术
6-重氮-5-氧代-L-正亮氨酸(简称DON)属于谷氨酰胺拮抗剂，由于其与谷氨酰胺的相似性，它可以进入其催化中心并通过共价结合或烷基化来抑制其活性(参见文献：Yoshioka K., Takehara H.,Okada A.,Komi N.Glutamine antagonist with dietdeficient in glutamine and aspartate reduce tumor growth.TokushimaJ.Exp.Med.1992；39:69–76.Cervantes-Madrid D, Romero Y,A.Reviving Lonidamine and 6-Diazo-5-oxo-L-norleucine to Be Used inCombination for Metabolic Cancer Therapy.BioMed Research International 2015；2015:1–13.) 随着研究的不断深入，发现DON可能同时具有抑制肿瘤生长的作用，其抗肿瘤作用越来越受到重视(参见文献：Cervantes-Madrid D,Dominguez-Gomez G,Gonzalez-Fierro A, Perez-Cardenas E,Taja-Chayeb L,Trejo-Becerril C et al.Feasibilityand antitumor efficacy in vivo, of simultaneously targeting glycolysis,glutaminolysis and fatty acid synthesis using lonidamine, 6-diazo-5-oxo-L-norleucine and orlistat in colon cancer.Oncology Letters 2017；13:1905–1910.)。但是目前尚未有文献报道DON在肝细胞癌中的治疗作用，以及通过体内和体外实验研究结果表明DON能够抑制肝细胞癌细胞系的生长，并能增强化疗药物的抗肿瘤效应。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的之一在于提供6-重氮-5-氧代-L-正亮氨酸在制备预防或治疗肝癌药物中的应用。
为实现上述发明目的，本发明提供如下技术方案：
6-重氮-5-氧代-L-正亮氨酸在制备预防或治疗肝癌药物中的应用。
优选的，所述6-重氮-5-氧代-L-正亮氨酸在制备抑制肝癌细胞侵袭能力的药物中的应用。
优选的，所述6-重氮-5-氧代-L-正亮氨酸在制备抑制肝癌细胞迁移能力的药物中的应用。
优选的，所述6-重氮-5-氧代-L-正亮氨酸在制备抑制肝癌细胞增殖能力的药物中的应用。
本发明的有益效果在于：本发明公开了提供了6-重氮-5-氧代-L-正亮氨酸的新用途，通过体外实验发现，DON能够抑制肝癌细胞系的增殖从而抑制肝细胞肝癌的生长，并能够抑制其迁移和侵袭能力，进一步减少肝细胞肝癌转移的可能性。通过细胞增殖实验发现，在人肝癌细胞系中加入DON后能够显著抑制肝癌细胞的增殖能力；在人肝癌细胞系中加入DON后，通过Transwell实验以及划痕愈合实验，发现DON能够显著抑制肝癌细胞的侵袭及迁移能力。因此，DON可以用于治疗或/和预防肝细胞癌及其某些转移性肿瘤的方法，该方法包含给予肝癌细胞系一定剂量的DON，对肝细胞肝癌的恶性增殖及转移性具有良好的抑制作用。
附图说明
为了使本发明的目的、技术方案和有益效果更加清楚，本发明提供如下附图进行说明：
图1为DON对人肝癌细胞系PLC/PRF/5体外侵袭能力的抑制作用(A：PLC/PRF/5；B：PLC/PRF/5+DON)。
图2为DON对人肝癌细胞系PLC/PRF/5体外迁移能力的抑制作用。
图3为DON对人肝癌细胞系PLC/PRF/5体外增殖能力的抑制作用。
具体实施方式
下面将结合附图，对本发明的优选实施例进行详细的描述。
实施例1、DON对人肝癌细胞体外侵袭能力的抑制作用
将处于对数生长期的人肝癌细胞系PLC/PRF/5细胞以70％密度铺6cm培养皿。24h后去培养基，加入500μl胰酶消化细胞，置于37℃孵箱消化1分钟；待细胞漂浮后，加入1ml培养基终止消化；细胞消化液移入15ml离心管中，18～25℃室温，700rpm/min，离心3分钟；去上清液，加入2ml无血清10mM葡萄糖培养基重悬，取10μl重悬液与10μl台酚蓝混匀，加入计数板中计数；取两个Transwell小室，每室加入4×104个细胞，分PLC/PRF/5和 PLC/PRF/5+DON组，无血清10mM葡萄糖培养基补齐到200μl；并且PLC/PRF/5+DON组加入20μM DON，置于24孔板中，小室外加入含血清10mM葡萄糖培养基800μl，并且同样 PLC/PRF/5，DON组加入20μM DON；置于37℃孵箱培养48h；取出小室，去除培养基，PBS 清洗2遍；4％多聚甲醛固定20分钟，PBS清洗2遍；结晶紫染色5分钟，PBS清洗2遍，用棉球擦去小室内壁细胞，通风处自然吹干，拍小室外壁细胞图片，结果如图1所示。结果显示，PLC/PRF/5+DON组小室外壁的细胞数量更少，表明DON抑制了人肝癌细胞侵袭能力。
实施例2、DON对人肝癌细胞体外迁移能力的抑制作用
将处于对数生长期的人肝癌细胞系PLC/PRF/5细胞以70％密度铺于6cm培养皿。24h后去培养基，加入500μl胰酶消化细胞，置于37℃孵箱消化1分钟；待细胞漂浮后，加入1ml 培养基终止消化；细胞消化液移入15ml离心管中，18～25℃室温，700rpm/min离心3分钟；去除上清液后加入2ml无血清10mM葡萄糖培养基重悬，取10μl重悬液与10μl台酚蓝混匀，加入计数板中计数；取LmageLock 96孔板，每孔加入2×104个细胞，10mM葡萄糖培养基补齐到100μl；分PLC/PRF/5和PLC/PRF/5+DON组，并且PLC/PRF/5+DON组加入20μM DON；细胞长满后，使用ESSEN BIOSCIENCE公司划痕器划痕，然后换液，并且处理同前，将96 孔板放入Incucyte ZOOM仪器中拍照作为0h，48h后再次拍照，观察划痕愈合情况，结果如图2所示。结果显示，PLC/PRF/5+DON组划痕愈合更少，表明DON抑制了人肝癌细胞迁移能力。
实施例3、DON对人肝癌细胞体外增殖能力的抑制作用
将处于对数生长期的人肝癌细胞系PLC/PRF/5细胞以70％密度铺于6cm培养皿。24h后去培养基，加入500μl胰酶消化细胞，置于37℃孵箱消化1分钟；待细胞漂浮后，加入1ml 培养基终止消化；细胞消化液移入15ml离心管中，室温(18～25℃)，700rpm/min离心3分钟；去除上清液后加入2ml无血清10mM葡萄糖培养基重悬，取10μl重悬液与10μl台酚蓝混匀，加入计数板中计数。取LmageLock 96孔板，每孔加入1×103个细胞，10mM葡萄糖培养基补齐到100μl；将细胞分为PLC/PRF/5和PLC/PRF/5+DON组，并且PLC/PRF/5+DON组加入20μMDON；将96孔板放入Incucyte ZOOM活细胞成像系统，连续培养5天，每3天更换培养基并处理同前；扫描平板并每24小时实时获取相差图像，并通过IncuCyte ZOOM 软件生成量化的生长曲线，结果如图3所示。结果显示，PLC/PRF/5+DON组的细胞生长速度变慢，表明DON能够抑制肝癌细胞系的增殖。
最后说明的是，以上优选实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管通过上述优选实施例已经对本发明进行了详细的描述，但本领域技术人员应当理解，可以在形式上和细节上对其作出各种各样的改变，而不偏离本发明权利要求书所限定的范围。

Claims (4)

1.6-重氮-5-氧代-L-正亮氨酸在制备预防或治疗肝癌药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述6-重氮-5-氧代-L-正亮氨酸在制备抑制肝癌细胞侵袭能力的药物中的应用。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述6-重氮-5-氧代-L-正亮氨酸在制备抑制肝癌细胞迁移能力的药物中的应用。
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述6-重氮-5-氧代-L-正亮氨酸在制备抑制肝癌细胞增殖能力的药物中的应用。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108348492A (zh) * 2015-07-31 2018-07-31 约翰霍普金斯大学 使用包括don在内的谷氨酰胺类似物的用于癌症和免疫疗法的方法

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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108348492A (zh) * 2015-07-31 2018-07-31 约翰霍普金斯大学 使用包括don在内的谷氨酰胺类似物的用于癌症和免疫疗法的方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
SHIMIZU T等: "Effect of local hyperthermia and chemotherapy on MC29 virus-induced liver tumor transplanted into subcutis of chickens", 《COMPARATIVE BIOCHEMISTRY AND PHYSIOLOGY, PART C: PHARMACOLOGY, TOXICOLOGY & ENDOCRINOLOGY》 *

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