CN109010089A - 一种用于龋齿预防和浅龋治疗的纳米材料的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种用于龋齿预防和浅龋治疗的纳米材料的制备方法,涉及纳米生物技术和口腔护理技术领域。本发明制备方法包括将聚多巴胺颗粒均匀分散在水溶液体系中,磁力搅拌条件下加入含银离子的水溶液,反应一段时间后高速离心弃上清液并用去离子水清洗;然后将具有牙釉质识别能力的分子的水溶液缓慢加入高速搅拌的催化体系溶液中,反应一段时间后,将制得的固定有抗菌组份的核芯水溶液缓慢递加到高速搅拌的该溶液体系,反应一段时间后高速离心弃上清液并用去离子水清洗,既得。通过本发明制备方法制备的纳米材料由内部的具有诱导矿化的纳米颗粒核芯、外部的具有广谱抗菌组份和牙釉质识别分子所构成。
Description
技术领域
本发明属于纳米生物技术和口腔护理技术领域,特别是涉及一种用于龋齿预防和浅龋治疗的纳米材料的制备方法。
背景技术
龋病是人类的一种常见病和多发病,发生率一直居高不下。第三次全国口腔健康流行病学调查结果显示5岁儿童乳牙的患龋率高达66%,12岁儿童恒牙的患病率为28.9%,35岁以上的人群龋病的患病率甚至高于88%,并随着年龄增长患病率逐渐增高。这种疾病不但直接影响着广大儿童和青少年的健康成长,而且影响成年人的生活质量,所以寻找更有效、简单的龋病预防和治疗方法迫在眉睫。
龋病是一种以细菌为主的多种因素影响下牙体硬组织发生慢性、进行性破坏的一种疾病。其主要过程是变形链球菌、乳杆菌和放线菌等细菌在口腔中遇到糖等碳水化合物,使其发酵产生酸,酸腐蚀导致牙釉质脱矿,破坏牙体硬组织结构,形成龋齿。釉质作为牙齿的最外层组织,保护其不受细菌及代谢产物侵蚀,是预防龋齿发生的关键因素;另外釉质是一种非活性组织, 95%以上是排列紧密的羟磷灰石晶体,一旦损坏将无法自愈。由此,阻止龋齿的发生需要抑制细菌在牙体表面粘附及增殖,对于已经发生脱矿形成浅龋的牙体部位,除需要抑菌外,还需促进脱矿的牙体再矿化。
长期以来,抑菌方式主要采用抗生素类药物,但存在以下问题1)抗菌药物的滥用,加速了细菌的进化产生耐药性,成为危害公众用药安全的突出问题;2)抗生素多不具有广谱抗菌能力,对部分细菌抑制效果不佳;3)抗生素无法结合在牙体表面,导致治疗效果短,且随唾液流进肠胃部位后,易被吸收进入体循环,富集到其它脏器产生毒副作用。这迫使科学家又重新将眼光转向基本上不产生耐药性、具有广谱抗菌能力的银,但存在以下问题亟待解决:1)如何将银连接到牙体表面,防止对其它脏器造成毒副作用?2)如何避免银离子变黑导致牙体染色?3)如何促进脱矿部位(浅龋部位)再矿化,修复牙体缺损,基于此提出本发明。
HOOC-PEG-ALN为羧基封端聚乙二醇修饰的阿仑膦酸盐;NH2-PEG-ALN为氨基封端聚乙二醇修饰的阿仑膦酸盐。
发明内容
本发明的目的在于提供一种用于龋齿预防和浅龋治疗的纳米材料的制备方法,通过本发明制备方法制得的纳米材料具有靶向连接牙体、减少在其它脏器富集;纳米银颗粒可以长期保留抗菌能力,且避免银离子变黑对牙体染色;能诱导牙体表面矿化,修复脱矿所导致的浅龋。
为解决上述技术问题,本发明是通过以下技术方案实现的:
本发明为一种用于龋齿预防和浅龋治疗的纳米材料的制备方法,包括如下步骤:
步骤1、在核芯颗粒表面固定抗菌组份;
步骤2、在固定有抗菌组份的核芯表面固定具有牙釉质识别能力的分子。
进一步地,所述核芯颗粒成分为聚多巴胺、所述聚多巴胺粒径在 50-400nm之间。
3、根据权利要求1所述的一种用于龋齿预防和浅龋治疗的纳米材料的制备方法,其特征在于,所述步骤1在核芯颗粒表面固定抗菌组份具体包括如下子步骤:
1)、将核芯颗粒均匀分散在水溶液体系中;
2)、磁力搅拌条件下加入含银离子的水溶液,银离子与核芯颗粒用量的质量比为1:0.1-10;
3)、反应0.5-36小时后,高速离心弃上清液并用去离子水清洗。
进一步地,所述含银离子的水溶液为银的化合物溶于水所制得。
进一步地,所述具有牙釉质识别能力的分子包括阿仑膦酸盐(ALN)或氨基封端聚乙二醇修饰的阿仑膦酸盐(NH2-PEG-ALN)或羧基封端聚乙二醇修饰的阿仑膦酸盐(HOOC-PEG-ALN)。
进一步地,所述步骤2在固定有抗菌组份的核芯表面固定具有牙釉质识别能力的分子具体包括如下子步骤:
a)、催化体系溶液配制;
b)、具有牙釉质识别能力的分子水溶液配制;
c)、将步骤b配制的具有牙釉质识别能力的分子水溶液在高速搅拌条件下缓慢加入到步骤a配制的催化体系溶液中;
d)、反应5min-10h后,将得到的固定有抗菌组份的核芯水溶液缓慢加入步骤c的混合溶液体系中,反应1h-24h,高速离心弃上清液并用去离子水清洗。
进一步地,所述步骤a中催化体系溶液配制具体包括使用戊二醛加水配制形成或是使用EDC和NHS加水配制配制形成.
进一步地,所述步骤b中具有牙釉质识别能力的分子水溶液配制包括使用阿仑膦酸盐(ALN)或氨基封端聚乙二醇修饰的阿仑膦酸盐(NH2-PEG-ALN)或羧基封端聚乙二醇修饰的阿仑膦酸盐(HOOC-PEG-ALN)加水配制形成水溶液。
进一步地,所述步骤c中的阿仑膦酸盐(ALN)或氨基封端聚乙二醇修饰的阿仑膦酸盐(NH2-PEG-ALN)与戊二醛的用量摩尔比为1:0.8-1.2;所述c中的羧基封端聚乙二醇修饰的阿仑膦酸盐(HOOC-PEG-ALN)与EDC和NHS三者的用量摩尔比为1:0.05-1:0.05-1。
进一步地,所述步骤d中具有牙釉质识别能力的分子与固定有抗菌组份的核芯的用量质量比为1:0.005-1。
本发明具有以下有益效果:
1、本发明通过聚多巴胺纳米核芯上酚羟基的还原能力,可以将溶液中的银离子还原为纳米尺度的单质银且结合在核芯表面,赋予纳米材料的优秀的广谱抗菌能力,抑制牙体表面细菌的粘附和增殖,预防龋齿的发生,且纳米银可以避免银离子变黑所导致的牙齿染色。
2、本发明通过聚多巴胺纳米核芯上氨基的共价连接能力,核芯表面可以继续共价连接釉质识别分子,使得最终构建的纳米材料具有与牙釉质的高亲和性,能靶向结合到釉质表面,减少纳米材料与牙体结合所需时间,降低治疗所需时间,且降低纳米材料在其它部位富集可能导致的毒副作用。
3、本发明核芯的组成成分为多巴胺,可以诱导唾液中的钙离子和磷酸根离子结合形成钙磷复合物,其类似于牙釉质结构,所以,纳米材料靶向连接到牙釉质表面可以促进脱矿的牙釉质再矿化,实现浅龋的治疗,且在牙体表面形成钙磷复合物也有助于保护牙体表面结构,防止龋齿的发生。
4、本发明制备过程在溶液中进行,反应条件温和,无需复杂仪器,制备简单,易于工业化生产。
5、本发明制备的纳米材料具有良好的水分散性,可以作为填充成分添加到牙膏、漱口水中使用,也可以作为水溶液单独使用,使用方法简单,且相比目前临床治疗方法,对牙体没有损伤,大大降低患者的治疗痛苦和治疗成本。
6、本发明所制备的纳米材料由内部的具有诱导矿化的纳米颗粒核芯、外部的具有广谱抗菌组份和牙釉质识别分子所构成。
当然,实施本发明的任一产品并不一定需要同时达到以上所述的所有优点。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案,下面将对实施例描述所需要使用的附图作简单地介绍,显而易见地,下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例,对于本领域普通技术人员来讲,在不付出创造性劳动的前提下,还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本发明实施例1制得的纳米材料仪器检测分析图;
图2为本发明实施例10中牙片颜色变化图;
图3为本发明实施例11中DA@Ag-ALN在矿化前后的电子显微镜扫描图;
图4为本发明实施例11中DA@Ag-ALN在矿化前后的透射电子显微镜图;
图5为本发明实施例11中DA@Ag-ALN在矿化前后的EDX分析结果;
图6为本发明实施例12中牙片抗菌实验附图。
具体实施方式
实施例1
一种用于龋齿预防和浅龋治疗的纳米材料的制备方法,包括以下步骤:
A、将粒径50nm的聚多巴胺颗粒均匀分散在水溶液体系中,磁力搅拌条件下加入含银离子的水溶液,聚多巴胺与银离子的质量比为1:0.1,反应时间 0.5h,高速离心弃上清液并用去离子水清洗。
B、然后将阿仑膦酸盐(ALN)的水溶液缓慢加入高速搅拌的戊二醛溶液中,阿仑膦酸盐(ALN)与戊二醛的摩尔比为1:0.8,反应5min后,将A步所得物质的水溶液缓慢递加到高速搅拌的该溶液体系,A步所得物质与阿仑膦酸盐(ALN) 的质量比为1:0.005,反应1h,高速离心弃上清液并用去离子水清洗,既得。
图1中A是制备各步骤获得纳米材料的红外光谱,结果显示在核芯(聚多巴胺球,简写为DANP)表面修饰纳米银后(简写为DA@Ag),DANP上的-OH、-NH、 -C-O、-C=O基团被消耗,在釉质识别分子连接后(简写为DA@Ag-ALN),出现P-O和P=O,这些结果证明纳米银和ALN成功连接在核芯上;
图1中B和C是DA@Ag-ALN的SEM和TEM图片,结果显示球表面粘附了大量的纳米银颗粒,证明纳米银颗粒被复合在多巴胺球表面;
图1中D是最终构建纳米材料(DA@Ag-ALN)的能量色散x射线光谱结果(简称EDX),Ag和P元素的出现证明纳米复合材料制备成功。
实施例2
一种用于龋齿预防和浅龋治疗的纳米材料的制备方法,包括以下步骤:
A、将粒径400nm的聚多巴胺颗粒均匀分散在水溶液体系中,磁力搅拌条件下加入含银离子的水溶液,聚多巴胺与银离子的质量比为1:10,反应时间 36h,高速离心弃上清液并用去离子水清洗。
B、然后将阿仑膦酸盐(ALN)的水溶液缓慢加入高速搅拌的戊二醛溶液中,阿仑膦酸盐(ALN)与戊二醛的摩尔比为1:1.2,反应10h后,将A步所得物质的水溶液缓慢递加到高速搅拌的该溶液体系,A步所得物质与阿仑膦酸盐(ALN) 的质量比为1:1,反应24h,高速离心弃上清液并用去离子水清洗,既得。
实施例3
一种用于龋齿预防和浅龋治疗的纳米材料的制备方法,包括以下步骤:
A、将粒径200nm的聚多巴胺颗粒均匀分散在水溶液体系中,磁力搅拌条件下加入含银离子的水溶液,聚多巴胺与银离子的质量比为1:5,反应时间 12h,高速离心弃上清液并用去离子水清洗。
B、然后将阿仑膦酸盐(ALN)的水溶液缓慢加入高速搅拌的戊二醛溶液中,阿仑膦酸盐(ALN)与戊二醛的摩尔比为1:1,反应5h后,将A步所得物质的水溶液缓慢递加到高速搅拌的该溶液体系,A步所得物质与阿仑膦酸盐(ALN)的质量比为1:0.5,反应12h,高速离心弃上清液并用去离子水清洗,既得。
实施例4
一种用于龋齿预防和浅龋治疗的纳米材料的制备方法,包括以下步骤:
A、将粒径50nm的聚多巴胺颗粒均匀分散在水溶液体系中,磁力搅拌条件下加入含银离子的水溶液,聚多巴胺与银离子的质量比为1:0.1,反应时间 0.5h,高速离心弃上清液并用去离子水清洗。
B、然后将NH2-PEG-ALN的水溶液缓慢加入高速搅拌的戊二醛溶液中, NH2-PEG-ALN与戊二醛的摩尔比为1:0.8,反应5min后,将A步所得物质的水溶液缓慢递加到高速搅拌的该溶液体系,A步所得物质与NH2-PEG-ALN的质量比为1:0.005,反应1h,高速离心弃上清液并用去离子水清洗,既得。
实施例5
一种用于龋齿预防和浅龋治疗的纳米材料的制备方法,包括以下步骤:
A、将粒径400nm的聚多巴胺颗粒均匀分散在水溶液体系中,磁力搅拌条件下加入含银离子的水溶液,聚多巴胺与银离子的质量比为1:10,反应时间 36h,高速离心弃上清液并用去离子水清洗。
B、然后将NH2-PEG-ALN的水溶液缓慢加入高速搅拌的戊二醛溶液中, NH2-PEG-ALN与戊二醛的摩尔比为1:1.2,反应10h后,将A步所得物质的水溶液缓慢递加到高速搅拌的该溶液体系,A步所得物质与NH2-PEG-ALN的质量比为1:1,反应24h,高速离心弃上清液并用去离子水清洗,既得。
实施例6
一种用于龋齿预防和浅龋治疗的纳米材料的制备方法,包括以下步骤:
A、将粒径150nm的聚多巴胺颗粒均匀分散在水溶液体系中,磁力搅拌条件下加入含银离子的水溶液,聚多巴胺与银离子的质量比为1:4,反应时间 20h,高速离心弃上清液并用去离子水清洗。
B、然后将NH2-PEG-ALN的水溶液缓慢加入高速搅拌的戊二醛溶液中, NH2-PEG-ALN与戊二醛的摩尔比为1:1,反应1h后,将A步所得物质的水溶液缓慢递加到高速搅拌的该溶液体系,A步所得物质与NH2-PEG-ALN的质量比为 1:0.5,反应10h,高速离心弃上清液并用去离子水清洗,既得。
实施例7
一种用于龋齿预防和浅龋治疗的纳米材料的制备方法,包括以下步骤:
A、将粒径50nm的聚多巴胺颗粒均匀分散在水溶液体系中,磁力搅拌条件下加入含银离子的水溶液,聚多巴胺与银离子的质量比为1:0.1,反应时间 0.5h,高速离心弃上清液并用去离子水清洗。
B、然后在水中加入EDC和NHS形成催化体系,高速搅拌条件下,再在催化体系中缓慢加入HOOC-PEG-ALN的水溶液,各物质摩尔比为HOOC-PEG-ALN:EDC: NHS=1:0.05:0.05,反应5min后,将A步所得物质的水溶液缓慢递加到该溶液体系,A步所得物质与HOOC-PEG-ALN的质量比为1:0.01,反应1h,高速离心弃上清液并用去离子水清洗,既得。
实施例8
一种用于龋齿预防和浅龋治疗的纳米材料的制备方法,包括以下步骤:
A、将粒径400nm的聚多巴胺颗粒均匀分散在水溶液体系中,磁力搅拌条件下加入含银离子的水溶液,聚多巴胺与银离子的质量比为1:10,反应时间 36h,高速离心弃上清液并用去离子水清洗。
B、然后在水中加入EDC和NHS形成催化体系,高速搅拌条件下,再在催化体系中缓慢加入HOOC-PEG-ALN的水溶液,各物质摩尔比为HOOC-PEG-ALN:EDC: NHS=1:1:1,反应30min后,将A步所得物质的水溶液缓慢递加到该溶液体系, A步所得物质与HOOC-PEG-ALN的质量比为1:1.5,反应24h,高速离心弃上清液并用去离子水清洗,既得。
实施例9
一种用于龋齿预防和浅龋治疗的纳米材料的制备方法,包括以下步骤:
A、将粒径250nm的聚多巴胺颗粒均匀分散在水溶液体系中,磁力搅拌条件下加入含银离子的水溶液,聚多巴胺与银离子的质量比为1:6,反应时间 18h,高速离心弃上清液并用去离子水清洗。
B、然后在水中加入EDC和NHS形成催化体系,高速搅拌条件下,再在催化体系中缓慢加入HOOC-PEG-ALN的水溶液,各物质摩尔比为HOOC-PEG-ALN:EDC:NHS=1:0.1:0.1,反应20min后,将A步所得物质的水溶液缓慢递加到该溶液体系,A步所得物质与HOOC-PEG-ALN的质量比为1:1,反应10h,高速离心弃上清液并用去离子水清洗,既得。
实施例10
在牙片上滴加含AgNO3溶液和含DA@Ag-ALN溶液之后,在37℃潮湿环境中放置2周后,牙片表面颜色的变化情况
如图2所示,Control为对应牙片递加溶液之前的照片,结果显示 DA@Ag-ALN并没有显著影响牙片的颜色,而银离子(Ag+)导致牙片变黑。
实施例11
获得实施例10中的DA@Ag-ALN在矿化前后的扫描电子显微镜(SEM)、透射电子显微镜(TEM)和EDX分析结果;
如图3所示,SEM结果显示矿化后纳米材料表面的纳米银被包裹(图中箭头为正在被包裹的纳米银颗粒);
如图4所示,TEM结果同样显示纳米银被矿化物包裹(图中画圈位置为明显矿化部位);
如图5所示,EDX结果表明矿化产物为Ca-P复合物(图中箭头位置),证明纳米复合材料具有诱导快速矿化的能力。
实施例12
用含DA@Ag和DA@Ag-ALN的溶液孵育后的牙片做抑菌环实验:
如图6所示,DA@Ag-ALN处理的牙片周围(图中虚线所围区域)没有细菌增殖、具有良好抗菌能力,证明其最终构建的纳米材料可以靶向快速连接到牙片上并发挥抗菌能力。
在本说明书的描述中,参考术语“一个实施例”、“示例”、“具体示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中,对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且,描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。
以上公开的本发明优选实施例只是用于帮助阐述本发明。优选实施例并没有详尽叙述所有的细节,也不限制该发明仅为所述的具体实施方式。显然,根据本说明书的内容,可作很多的修改和变化。本说明书选取并具体描述这些实施例,是为了更好地解释本发明的原理和实际应用,从而使所属技术领域技术人员能很好地理解和利用本发明。本发明仅受权利要求书及其全部范围和等效物的限制。
Claims (10)
1.一种用于龋齿预防和浅龋治疗的纳米材料的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:
步骤1、在核芯颗粒表面固定抗菌组份;
步骤2、在固定有抗菌组份的核芯表面固定具有牙釉质识别能力的分子。
2.根据权利要求1所述的一种用于龋齿预防和浅龋治疗的纳米材料的制备方法,其特征在于,所述核芯颗粒成分为聚多巴胺、所述聚多巴胺粒径在50-400nm之间。
3.根据权利要求1所述的一种用于龋齿预防和浅龋治疗的纳米材料的制备方法,其特征在于,所述步骤1在核芯颗粒表面固定抗菌组份具体包括如下子步骤:
1)、将核芯颗粒均匀分散在水溶液体系中;
2)、磁力搅拌条件下加入含银离子的水溶液,银离子与核芯颗粒用量的质量比为1:0.1-10;
3)、反应0.5-36小时后,高速离心弃上清液并用去离子水清洗。
4.根据权利要求3所述的一种用于龋齿预防和浅龋治疗的纳米材料的制备方法,其特征在于,所述含银离子的水溶液为银的化合物溶于水所制得。
5.根据权利要求1所述的一种用于龋齿预防和浅龋治疗的纳米材料的制备方法,其特征在于,所述具有牙釉质识别能力的分子包括阿仑膦酸盐(ALN)或氨基封端聚乙二醇修饰的阿仑膦酸盐(NH2-PEG-ALN)或羧基封端聚乙二醇修饰的阿仑膦酸盐(HOOC-PEG-ALN)。
6.根据权利要求1所述的一种用于龋齿预防和浅龋治疗的纳米材料的制备方法,其特征在于,所述步骤2在固定有抗菌组份的核芯表面固定具有牙釉质识别能力的分子具体包括如下子步骤:
a)、催化体系溶液配制;
b)、具有牙釉质识别能力的分子水溶液配制;
c)、将步骤b配制的具有牙釉质识别能力的分子水溶液在高速搅拌条件下缓慢加入到步骤a配制的催化体系溶液中;
d)、反应5min-10h后,将得到的固定有抗菌组份的核芯水溶液缓慢加入步骤c的混合溶液体系中,反应1h-24h,高速离心弃上清液并用去离子水清洗。
7.根据权利要求6所述的一种用于龋齿预防和浅龋治疗的纳米材料的制备方法,其特征在于,所述步骤a中催化体系溶液配制具体包括使用戊二醛加水配制配制形成或是使用EDC和NHS加水配制配制形成。
8.根据权利要求6所述的一种用于龋齿预防和浅龋治疗的纳米材料的制备方法,其特征在于,所述步骤b中具有牙釉质识别能力的分子水溶液配制包括使用阿仑膦酸盐(ALN)或氨基封端聚乙二醇修饰的阿仑膦酸盐(NH2-PEG-ALN)或羧基封端聚乙二醇修饰的阿仑膦酸盐(HOOC-PEG-ALN)加水配制形成水溶液。
9.根据权利要求6所述的一种用于龋齿预防和浅龋治疗的纳米材料的制备方法,其特征在于,所述步骤c中的阿仑膦酸盐(ALN)或氨基封端聚乙二醇修饰的阿仑膦酸盐(NH2-PEG-ALN)与戊二醛的用量摩尔比为1:0.8-1.2;所述c中的羧基封端聚乙二醇修饰的阿仑膦酸盐(HOOC-PEG-ALN)与EDC和NHS三者的用量摩尔比为1:0.05-1:0.05-1。
10.根据权利要求6所述的一种用于龋齿预防和浅龋治疗的纳米材料的制备方法,其特征在于,所述步骤d中具有牙釉质识别能力的分子与固定有抗菌组份的核芯的用量质量比为1:0.005-1。
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