CN108991044A - 一种植物源抗病促生酶及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种植物源抗病促生酶及其制备方法，其中所述植物源抗病促生酶由以下原料配比制成：(1)棕榈叶30～50％、银杏叶20～49％、肉桂5～10％、苦参5～10％、丁香6～12％、万寿菊5～10％、苍耳5～8％、芦荟6～12％、山苍子3～5％、橘皮3～5％；(2)牛蒡寡糖‑铜络合物1～3％；(3)载体成分2～10％和蒸馏水。通过本发明制备的植物源抗病促生酶主要通过从植物中提取活性物质和营养成分，它既可刺激植物自身产生抗病菌活性物质和机能，又可以提高和改进植物营养生长条件而提高抗病能力，既安全又高效，不仅能够有效控制病毒，而且不会造成环境污染，对预防和减轻植物癌症造成农作物减产具有重要的意义。

Description

一种植物源抗病促生酶及其制备方法

技术领域

本发明属于植物抗逆促生技术领域，尤其涉及一种植物源抗病促生酶及其制备方法与应用。

背景技术

农业是国民经济的基础，农药在农业现代化进程中具有十分重要的作用。发展高效农业如果没有现代化的植物保护措施，农作物的保收增产将无法实现。化学农药在使农业生产受益的同时，也呈现出种种弊端，最为关注的是农药残留、害虫对农药的抗性和害虫再猖獗以及农药对人类的致癌、致畸和致突变问题。而植物源农药是一类利用从植物中提取的活性成分而制成的杀虫剂，具有高效、低毒或无毒、无污染、选择性高、不易使害虫产生抗药性等优点，符合农药从传统的有机化学物质向环境和谐农药或生物合理性农药转化的趋势。目前，对植物源农药的研究和开发是当前新型农药创新的热点。

另外植物受到损伤后，伤口由于细菌、病毒等微生物的侵袭，其细胞组织发生癌变，出现各种恶性肿瘤，造成生物畸形，最终导致死亡。为了有效地控制植物病毒病，人们采用了各种措施，包括轮作、种子脱毒、病毒间的弱毒株系交叉保护、抗病品种的选用、传毒介体的控制及化学农药的使用等，近年来转基因植物抗病研究也有了新的进展。但这些措施还不能有效克服病毒的危害，且化学农药的使用对环境造成了很大危害，在当前大力提倡绿色食品和环境保护的前提下，加强植物病害的综合防治和减少化学农药的使用已成为植保工作者工作的重点内容之一。

因此，寻找一种安全、高效、绿色环保型的植物源抗病促生酶，开发出有效控制病毒且不会造成环境污染的产品，对预防和减轻植物癌症造成农作物减产具有重要的意义。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种植物源抗病促生酶及其制备方法。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种植物源抗病促生酶，按质量份数计，由以下原料配比制成：

(1)棕榈叶30～50％、银杏叶20～49％、肉桂5～10％、苦参5～10％、丁香6～12％、万寿菊5～10％、苍耳5～8％、芦荟6～12％、山苍子3～5％、橘皮3～5％；

(2)牛蒡寡糖-铜络合物1～3％；

(3)载体成分2～10％和蒸馏水。

需要说明的是，为了扩大植物源抗病促生酶的使用效果，将作用效果相近或互补的植物源农药进行合理复配。如果两种植物提取物的主要杀虫活性物质在作用机理上不矛盾，混合后的确能扩大防治对象，且有明显增效作用，则可进行混剂开发，并进行深入的室内生测及大田试验，还要考虑两种植物提取物各组分之间在贮存期间的相互作用等。

另外，需要提高植物源农药的稳定性。由于天然产物不稳定，在紫外光、阳光和高温下极易分解。因此，除了避免强光、高温、强酸碱和酶外，在配制制剂过程中，可加入一种或多种环氧化植物油稳定剂和对氨基苯甲酸抗光剂，来抑制天然物的热分解与光降解。还可以通过选择适宜乳化剂来提高乳化稳定性。

通过采用上述技术方案得到的植物源抗病促生酶的技术原理如下：

植物源抗病促生酶主要通过从植物中提取活性物质和营养成分，它既可刺激植物自身产生抗病菌活性物质和机能，又可以提高和改进植物营养生长条件而提高抗病能力。

其中所述植物源抗病促生酶的杀菌机理主要体现在两个方面：一方面，植物提取液直接作用于病原菌，包括抑制菌丝的生长、抑制游动孢子及侵入丝的产生、干扰细胞膜的渗透性和蛋白质的合成，或者是影响病菌的能量代谢和呼吸作用；另一方面植物源抗病促生酶不仅可以对病原菌产生直接作用，还可以通过提高含有杀菌酶物质的植物自身的免疫能力来抑制病菌。

优选的，所述载体成分为满足具体的产品及其剂型要求的载体成分，且所述载体成分包括甘油硬脂酸酯、鲸蜡硬脂醇和硬脂酰乳酸钠的混合物0.1～9.9％、黄原胶0.1～1.9％

优选的，所述产品为药品或消毒剂；所述剂型为乳液。

优选的，所述牛蒡寡糖-铜络合物是由牛蒡寡糖和硫酸铜络合而成，按以下步骤制备：将牛蒡寡糖溶于蒸馏水中，将硫酸铜溶液加入到牛蒡寡糖溶液中，将pH控制在5.5～6.5之间，于50℃水浴中搅拌回流1～2小时，浓缩，加入丙酮析出沉淀，经过滤、洗涤、干燥、重结晶、真空干燥，得到牛蒡寡糖-铜络合物。

本发明的另一个目的在于提供一种植物源抗病促生酶的制备方法。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

步骤一：制备牛蒡寡糖-铜络合物，备用；

步骤二：制备A相

取适量的蒸馏水加热至75℃，加入适量的黄原胶，保温在70～75℃之间，搅拌均匀得到透明乳液；然后加入适量的甘油硬脂酸酯、鲸蜡硬脂醇和硬脂酰乳酸钠的混合物，保温在70～75℃之间，搅拌至完全溶解成乳液状，即得A相；

步骤三：制备B相

(1)按重量份数计，取棕榈叶、肉桂、苦参、丁香、万寿菊、苍耳和山苍子洗净、晾干、切细，加入2～5倍体积的水，煎煮提取，每次煎煮35～60min，分别煎煮三次，合并三次过滤所得滤液进行煎熬，浓缩滤液浓度至0.8～1.1g/mL，得中草药提取物，备用；

(2)按重量份数计，取银杏叶、芦荟和橘皮洗净、晾干、切碎，加入3～5倍体积的蒸馏水，在90～96℃下搅拌提取6～8h，提取完毕用纱布过滤，取滤液进行浓缩煎熬至滤液浓度为0.8～1.1g/mL，得植物提取物，备用；

(3)将第(1)步得到的中草药提取物倒入第(2)步得到的植物提取物中，搅拌混匀即得B相；

步骤四：混合成型

混合制备好的A相与B相，搅拌均匀；检测pH值，若需要调节pH值，加入适量的柠檬酸并搅拌均匀；检测合格后，依次加入牛蒡寡糖-铜络合物、滑石粉，并放入混合机中搅拌均匀，干燥处理后即得本发明的植物源抗病促生酶。

本发明采用纯天然植物萃取液作为原料，并通过制备牛蒡寡糖-铜络合物，以微生物活性有机物质为主体，科学巧妙地将它制作成植物源抗病促生酶，不仅具有使用简易、无毒、安全、绿色环保等优点，还可提高农作物的产量和提高农作物品质，并且符合国家相关政策，具有广阔的应用前景。

本发明还有一个目的在于提供一种植物源抗病促生酶在治理植物病毒病中的应用。

所述植物病毒病包括柑橘黄龙病、香蕉黑心病和香蕉死皮病等病症。

优选的，柑橘专用抗病促生酶由以下原料配比制成：棕榈叶35％、银杏叶25％、肉桂6％、苦参5％、丁香8％、万寿菊6％、苍耳7％、芦荟8％、山苍子4％、橘皮3％、牛蒡寡糖-铜络合物2％、载体成分5％和蒸馏水。

优选的，香蕉专用抗病促生酶由以下原料配比制成：棕榈叶40％、银杏叶30％、肉桂7％、苦参6％、丁香8％、万寿菊5％、苍耳6％、芦荟8％、山苍子3％、橘皮4％、牛蒡寡糖-铜络合物2％、载体成分4％和蒸馏水。

优选的，橡胶专用抗病促生酶由以下原料配比制成：棕榈叶45％、银杏叶25％、肉桂7％、苦参6％、丁香8％、万寿菊6％、苍耳7％、芦荟8％、山苍子3％、橘皮5％、牛蒡寡糖-铜络合物3％、载体成分6％和蒸馏水。

另外，常见抑菌植物中的有效成分，如下表所示：

经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本发明公开提供了一种植物源抗病促生酶及其制备方法，与现有技术相比，本发明具有如下优点:

1、绿色农业的大力发展可向社会提供优质美味、营养丰富的安全食品，满足人们高品质生活的需要。

2、减少环境污染，提高土地综合生产力；土壤改良，修复有毒土壤，让健康的土壤持续保持健康；解决农药残留、重金属超标等问题。

3、可产生良好的社会效益、经济效益，对提高农业综合效益，提高农业综合实力，增加农民就业和收入，促进社会和谐发展，提高国际竞争力，缓解人口增长与资源短缺，将起到良好的效果。

4、由于农药的过度使用，种植产品对人体健康的危害已超出世界卫生组织规定的最高标准的数倍，植物源抗病促生酶在植物癌症治理对保护生态环境，提高农产品质量，促进食品工业发展，增进人体健康，增加农产品出口创汇都具有深远影响。

具体实施方式

下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

本发明实施例公开了一种植物源抗病促生酶及其制备方法，通过本发明制备的植物源抗病促生酶安全、高效，不仅能够有效控制病毒，而且不会造成环境污染，对预防和减轻植物癌症造成农作物减产具有重要的意义。

为更好地理解本发明，下面通过以下实施例对本发明作进一步具体的阐述，但不可理解为对本发明的限定，对于本领域的技术人员根据上述发明内容所作的一些非本质的改进与调整，也视为落在本发明的保护范围内。

本发明公开了一种植物源抗病促生酶，按质量份数计，由以下原料配比制成：

(1)棕榈叶30～50％、银杏叶20～49％、肉桂5～10％、苦参5～10％、丁香6～12％、万寿菊5～10％、苍耳5～8％、芦荟6～12％、山苍子3～5％、橘皮3～5％；

(2)牛蒡寡糖-铜络合物1～3％；

(3)载体成分2～10％和蒸馏水。

为了进一步优化上述技术方案，载体成分为满足具体的产品及其剂型要求的载体成分，且所述载体成分包括甘油硬脂酸酯、鲸蜡硬脂醇和硬脂酰乳酸钠的混合物0.1～9.9％、黄原胶0.1～1.9％。

为了进一步优化上述技术方案，产品为药品或消毒剂；剂型为乳液。

为了进一步优化上述技术方案，牛蒡寡糖-铜络合物是由牛蒡寡糖和硫酸铜络合而成，按以下步骤制备：将牛蒡寡糖溶于蒸馏水中，将硫酸铜溶液加入到牛蒡寡糖溶液中，将pH控制在5.5～6.5之间，于50℃水浴中搅拌回流1～2小时，浓缩，加入丙酮析出沉淀，经过滤、洗涤、干燥、重结晶、真空干燥，得到牛蒡寡糖-铜络合物。

本发明还公开了一种植物源抗病促生酶的制备方法，包括如下步骤：

步骤一：制备牛蒡寡糖-铜络合物，备用；

步骤二：制备A相

取适量的蒸馏水加热至75℃，加入适量的黄原胶，保温在70～75℃之间，搅拌均匀得到透明乳液；然后加入适量的甘油硬脂酸酯、鲸蜡硬脂醇和硬脂酰乳酸钠的混合物，保温在70～75℃之间，搅拌至完全溶解成乳液状，即得A相；

步骤三：制备B相

(1)按重量份数计，取棕榈叶、肉桂、苦参、丁香、万寿菊、苍耳和山苍子洗净、晾干、切细，加入2～5倍体积的水，煎煮提取，每次煎煮35～60min，分别煎煮三次，合并三次过滤所得滤液进行煎熬，浓缩滤液浓度至0.8～1.1g/mL，得中草药提取物，备用；

(2)按重量份数计，取银杏叶、芦荟和橘皮洗净、晾干、切碎，加入3～5倍体积的蒸馏水，在90～96℃下搅拌提取6～8h，提取完毕用纱布过滤，取滤液进行浓缩煎熬至滤液浓度为0.8～1.1g/mL，得植物提取物，备用；

(3)将第(1)步得到的中草药提取物倒入第(2)步得到的植物提取物中，搅拌混匀即得B相；

步骤四：混合成型

混合制备好的A相与B相，搅拌均匀；检测pH值，若需要调节pH值，加入适量的柠檬酸并搅拌均匀；检测合格后，依次加入牛蒡寡糖-铜络合物、滑石粉，并放入混合机中搅拌均匀，干燥处理后即得本发明的植物源抗病促生酶。

下面将结合具体实施例，对本发明的技术方案进行进一步的说明。

实施例1

一种植物源抗病促生酶，由以下原料配比制成：

棕榈叶35％、银杏叶25％、肉桂6％、苦参5％、丁香8％、万寿菊6％、苍耳7％、芦荟8％、山苍子4％、橘皮3％、牛蒡寡糖-铜络合物2％、载体成分5％和蒸馏水。该配方特别适用于柑橘。

制备方法，步骤如下：

(1)将蒸馏水加热至75℃，加入黄原胶，在72℃保温，搅拌均匀得到透明乳液；然后加入甘油硬脂酸酯、鲸蜡硬脂醇和硬脂酰乳酸钠的混合物，在75℃保温，搅拌至完全溶解成乳液状，即得A相；

(2)取棕榈叶、肉桂、苦参、丁香、万寿菊、苍耳和山苍子洗净、晾干、切细，加入3倍体积的水，煎煮提取，每次煎煮40min，分别煎煮三次，合并三次过滤所得滤液进行煎熬，浓缩滤液浓度至1.0g/mL，得中草药提取物，备用；

(3)取银杏叶、芦荟和橘皮洗净、晾干、切碎，加入3倍体积的蒸馏水，在95℃下搅拌提取6h，提取完毕用纱布过滤，取滤液进行浓缩煎熬至滤液浓度为1.0g/mL，得植物提取物，备用；

(4)将第(2)步得到的中草药提取物与第(3)步得到的植物提取物混合，并按比例输入到反应釜中，加水稀释20倍；然后加入第(1)步制得的A相，搅拌均匀，加热65℃，再加入柠檬酸钠调pH值至5.5；

(5)冷却反应釜的温度至25～30℃，并向反应釜中依次加入牛蒡寡糖-铜络合物和滑石粉，溶解、搅拌均匀，干燥处理后即得柑橘专用植物源抗病促生酶产品。

实施例2

一种植物源抗病促生酶，由以下原料配比制成：

棕榈叶40％、银杏叶30％、肉桂7％、苦参6％、丁香8％、万寿菊5％、苍耳6％、芦荟8％、山苍子3％、橘皮4％、牛蒡寡糖-铜络合物2％、载体成分4％和蒸馏水。该配方特别适用于香蕉。

制备方法同实施例1。

实施例3

一种植物源抗病促生酶，由以下原料配比制成：

棕榈叶45％、银杏叶25％、肉桂7％、苦参6％、丁香8％、万寿菊6％、苍耳7％、芦荟8％、山苍子3％、橘皮5％、牛蒡寡糖-铜络合物3％、载体成分6％和蒸馏水。该配方特别适用于橡胶。

制备方法同实施例1。

应用效果实验

案例一

得了有“癌症”著称的干皮、死皮病的橡胶树，经过实施例3制备的植物源抗病促生酶8个月的修复后重新存活并开始产胶，且产量明显增加，胶的质量也大大得到了提升。以及不产胶的“公胶树”在使用实施例3制备的植物源抗病促生酶几个月后，也开始产胶，出胶量和质量都不错。

案例二

有柑橘癌症之称的柑橘黄龙病，而柑橘黄龙病或青果病是一种极具破坏性的柑橘病害，严重威胁着全球的柑橘产业。

该病害被认为是由一种专生于植物韧皮部组织的细菌引起。目前在柑橘中已发现了其三种菌株类型，即亚洲韧皮部杆菌、非洲韧皮部杆菌和美洲韧皮部杆菌。其传播途径包括嫁接和柑橘木虱(包括亚洲柑橘木虱和非洲木虱)传播。

现阶段，柑橘生长状况：

1.由于引起黄龙病的三种韧皮部杆菌至今还未能获得纯化培养，针对黄龙病的管理策略绝大多数地方主要局限于利用杀虫剂控制木虱、挖除感病植株和培育无菌苗，尚缺乏有效的调控措施。

2.2013年中南农业科技开发研究所果树黄龙病科研室的专家对赣南地区实地调研，发现果园的土质养分结构失衡严重、土壤中化肥农药残留较高导致果树生长环境恶化，造成果园大面积出现腐根现象，这也是造成赣州地区脐橙黄龙病(黄化病)暴发的重要因素。

3.专家表示，实践证明凡是有黄龙病的柑橘病株，几乎都伴有腐根烂根的现象，因为化肥和农药残留与土壤中的元素产生化学反应，生成的一种类似“脲醛树脂”胶质体，在果树根部长期吸取养份时，胶体随根部输送至树枝杆，胶体在树体营养输送的筛管堆积慢慢造成堵塞，阻碍树体的营养循环，同时根部的周围也积累了大量的胶体形成一层膜把根包住了，缺养又缺氧，造成腐根烂根，树体流胶，叶片黄化，抽梢也枝小叶小，果实不成熟，病树生长逐渐衰弱，直至枯死。

果实特点：春季提前开花，花小畸形，结果少，果实畸形，果小似乒乓球，着色不均，果蒂附近着色，俗称“红鼻子果”，果实味酸、品质极差，是识别黄龙病的最主要典型症状。

根部症状根部症状主要表现为根的腐烂，其严重程度与地上枝梢相对称。枝叶发病初期，根多不腐烂，叶片黄化脱落时，须根及支根开始腐烂，后期蔓延到侧根和主根，皮层破碎，与木质部分离。

而得了黄龙病的柑橘在使用由本发明制备的植物源抗病促生酶后，完全成活。不仅叶片由黄变绿，而且所结果实个大味美。

综上所述，植物源抗病促生酶是利用环保的生物技术提取出植物干细胞复配成有益产品以取代化学农药，不仅可以在有效防治植物病害的同时提高农作物品质和产量，而且可以提高健康的食品，增加农作物产量30％以上，还可以加强植物的新陈代谢，使农作物提前10天到15天成熟。植物源抗病促生酶作为环保、绿色的肥料，可以取代化学杀虫剂和农药，是国家今后重点推广的方向。

本说明书中各个实施例采用递进的方式描述，每个实施例重点说明的都是与其他实施例的不同之处，各个实施例之间相同相似部分互相参见即可。对于实施例公开的装置而言，由于其与实施例公开的方法相对应，所以描述的比较简单，相关之处参见方法部分说明即可。

对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。

Claims (9)

1.一种植物源抗病促生酶，其特征在于，按质量份数计，由以下原料配比制成：

(1)棕榈叶30～50％、银杏叶20～49％、肉桂5～10％、苦参5～10％、丁香6～12％、万寿菊5～10％、苍耳5～8％、芦荟6～12％、山苍子3～5％、橘皮3～5％；

(2)牛蒡寡糖-铜络合物1～3％；

(3)载体成分2～10％和蒸馏水。

2.根据权利要求1所述的一种植物源抗病促生酶，其特征在于，所述载体成分为满足具体的产品及其剂型要求的载体成分，且所述载体成分包括甘油硬脂酸酯、鲸蜡硬脂醇和硬脂酰乳酸钠的混合物0.1～9.9％、黄原胶0.1～1.9％。

3.根据权利要求2所述的一种植物源抗病促生酶，其特征在于，所述产品为药品或消毒剂；所述剂型为乳液。

4.根据权利要求1所述的一种植物源抗病促生酶，其特征在于，所述牛蒡寡糖-铜络合物是由牛蒡寡糖和硫酸铜络合而成，按以下步骤制备：将牛蒡寡糖溶于蒸馏水中，将硫酸铜溶液加入到牛蒡寡糖溶液中，将pH控制在5.5～6.5之间，于50℃水浴中搅拌回流1～2小时，浓缩，加入丙酮析出沉淀，经过滤、洗涤、干燥、重结晶、真空干燥，得到牛蒡寡糖-铜络合物。

5.一种植物源抗病促生酶的制备方法，其特征在于，具体包括如下步骤：

步骤一：制备牛蒡寡糖-铜络合物，备用；

步骤二：制备A相

取适量的蒸馏水加热至75℃，加入适量的黄原胶，保温在70～75℃之间，搅拌均匀得到透明乳液；然后加入适量的甘油硬脂酸酯、鲸蜡硬脂醇和硬脂酰乳酸钠的混合物，保温在70～75℃之间，搅拌至完全溶解成乳液状，即得A相；

步骤三：制备B相

(1)按重量份数计，取棕榈叶、肉桂、苦参、丁香、万寿菊、苍耳和山苍子洗净、晾干、切细，加入2～5倍体积的水，煎煮提取，每次煎煮35～60min，分别煎煮三次，合并三次过滤所得滤液进行煎熬，浓缩滤液浓度至0.8～1.1g/mL，得中草药提取物，备用；

(2)按重量份数计，取银杏叶、芦荟和橘皮洗净、晾干、切碎，加入3～5倍体积的蒸馏水，在90～96℃下搅拌提取6～8h，提取完毕用纱布过滤，取滤液进行浓缩煎熬至滤液浓度为0.8～1.1g/mL，得植物提取物，备用；

(3)将第(1)步得到的中草药提取物倒入第(2)步得到的植物提取物中，搅拌混匀即得B相；

步骤四：混合成型

混合制备好的A相与B相，搅拌均匀；检测pH值，若需要调节pH值，加入适量的柠檬酸钠并搅拌均匀；检测合格后，依次加入牛蒡寡糖-铜络合物、滑石粉，并放入混合机中搅拌均匀，干燥处理后即得本发明的植物源抗病促生酶。

6.根据权利要求5制备的植物源抗病促生酶在治理植物病毒病中的应用，其中包括治理柑橘黄龙病、香蕉黑心病和香蕉死皮病等病症。

7.根据权利要求6所述的一种植物源抗病促生酶的应用，其特征在于，由以下原料配比制成：

棕榈叶35％、银杏叶25％、肉桂6％、苦参5％、丁香8％、万寿菊6％、苍耳7％、芦荟8％、山苍子4％、橘皮3％、牛蒡寡糖-铜络合物2％、载体成分5％和蒸馏水；

该配方为柑橘专用抗病促生酶。

8.根据权利要求6所述的一种植物源抗病促生酶的应用，其特征在于，由以下原料配比制成：

棕榈叶40％、银杏叶30％、肉桂7％、苦参6％、丁香8％、万寿菊5％、苍耳6％、芦荟8％、山苍子3％、橘皮4％、牛蒡寡糖-铜络合物2％、载体成分4％和蒸馏水；

该配方为香蕉专用抗病促生酶。

9.根据权利要求6所述的一种植物源抗病促生酶的应用，其特征在于，由以下原料配比制成：

棕榈叶45％、银杏叶25％、肉桂7％、苦参6％、丁香8％、万寿菊6％、苍耳7％、芦荟8％、山苍子3％、橘皮5％、牛蒡寡糖-铜络合物3％、载体成分6％和蒸馏水；

该配方为橡胶专用抗病促生酶。