CN108901836B - 一种离体快速筛选柑橘果实品质调控物的方法 - Google Patents
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Abstract
一种离体快速筛选柑橘果实品质调控物的方法，该方法是将柑橘愈伤组织分别等量接种在对照组和处理组的培养基中进行暗培养，并于处理组培养基中添加待判断的果实品质调控物；然后取培养相同天数的对照组和处理组的柑橘愈伤组织制成样品，分析样品中处理组与对照组的糖、酸和VC含量品质指标，并进行比较，若处理组的糖含量、酸含量或VC含量三个品质指标中的任一个品质指标与对照组有显著性变化，则判断待判断的果实品质调控物为柑橘果实品质调控物。本筛选方法试验周期短，可实现短周期评估果实品质调控物的调控效果，且不受季节限制全年开展试验，可实现同时大规模筛选果实品质调控物。
Description
技术领域
本发明涉及柑橘果实品质调控物的筛选，具体涉及一种离体快速筛选柑橘果实品质调控物的方法。
背景技术
柑橘是重要的经济作物，与人们的日常生活密切相关。当前，我国柑橘生产的总体产量巨大，但总体品质不佳，市场上经常出现品质一般的水果卖不掉而品质上乘水果供不应求的情况。糖酸是柑橘基本的风味组成物质，直接影响果实口感和消费者的认可度，在柑橘栽培过程中通过品种选择、栽培措施、调控物质来改善果实糖酸积累进而提升果实品质均是可行的做法。
果实发育过程中使用品质调控物质是促进品质提升的重要方法，也是研究果实品质形成与调控研究领域重要的研究课题。但由于柑橘是多年生木本植物，且多数柑橘品种一年仅一次开花结果，造成果实品质形成调控物质筛选和研究困难，如：1)树体高大、操作不便，喷施的调控物质多数作用在树体和叶片上，仅少量直接作用于果实；2)多数柑橘品种一年一次开花结果，全年只能开展一次试验，严重限制了调控物质的筛选试验效率；3)同一棵树上的不同果实因着生部位、光照程度等均不相同，造成果实发育的程度、生长速度参差不齐，而不同发育程度的果实对调控物的反应不同，用品质调控物处理不同发育背景的果实给处理效果评估造成了较大误差。因此，亟需一个试验周期较短、不受柑橘开花结果限制、材料生长发育和生长环境可控的果实品质调控物的筛选和研究体系。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是，针对上述现有技术的不足，提供一种离体快速筛选柑橘果实品质调控物的方法，以通过体外模拟快速筛选果实品质调控物。
为解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是：一种离体快速筛选柑橘果实品质调控物的方法，该方法步骤如下：
(1)准备柑橘愈伤组织；
柑橘愈伤组织的准备为现有技术，按现有常规公开方法进行准备。
(2)将柑橘愈伤组织分别等量接种在对照组和处理组的培养基中，然后于23-25℃暗培养2-3周；其中，对照组培养基为MT培养基，处理组培养基为添加有待判断的果实品质调控物的MT培养基，待判断的果实品质调控物的添加量为每升MT培养基加1-500mg待判断的果实品质调控物。
(3)取培养相同天数的对照组和处理组的柑橘愈伤组织各2-3g，分别充分研磨匀浆后加入蒸馏水稀释，分别得到处理组和对照组样品；
(4)分析处理组样品和对照组样品的糖、酸和VC含量品质指标，并将分析后的处理组样品的糖、酸和VC含量品质指标分别与对照组样品进行比较，若处理组的糖含量、酸含量或VC含量三个品质指标中的任一个品质指标与对照组有显著性变化，则判断待判断的果实品质调控物对柑橘果实品质有调控作用，为柑橘果实品质调控物。
上述提及的暗培养是指在组培室或培养箱中进行。
上述步骤(3)的稀释是指按1g柑橘愈伤组织浆汁加8-12ml蒸馏水的比例于柑橘愈伤组织浆汁中加入蒸馏水稀释。
上述品质指标的测定方法参见李玲，李娘辉等.植物生理学模块实验指导[M].北京科学出版社.2009，其中糖含量快速测定参照可溶性固形物方法(P57)，酸含量测定参照有机酸含量的测定(P58)，VC含量参照维生素C含量的测定(P50)。
上述提及的处理组的品质指标与对照组有显著性变化中，品质指标数据采用SAS或SPSS统计分析软件进行分析，看是否存在显著性变化，为现有常规分析方法。
本发明的筛选方法一次试验仅需3周，可实现短周期评估果实品质调控物的调控效果，且不受季节限制全年开展试验；本方法可实现同时大规模筛选果实品质调控物；本方法可在试验背景和材料发育情况一致的情况下比较不同果实品质调控物的调控效果，有利于客观、有效地评估果实品质调控物的调控效果。
具体实施方式
准备柑橘树的愈伤组织及愈伤组织培养基(MT培养基)；将柑橘愈伤组织分别接种等量在对照组的培养基(MT培养基)和处理组的培养基(MT培养基中添加有待判断的果实品质调控物，每升MT培养基添加1-500mg待判断的果实品质调控物)中，然后将对照组和处理组置于培养箱中，于23-25℃暗培养3周；取培养后的对照组和处理组的愈伤组织各3g，充分研磨匀浆后分别加入30ml蒸馏水稀释，得对照组和处理组样品；分析样品中对照组和处理组的品质指标，品质指标为糖、酸和VC含量。
待判断的果实品质调控物为KH2PO4、MgSO4·7H2O和MnSO4·7H2O。KH2PO4的添加量为170mg/L，MgSO4·7H2O的添加量为370mg/L，MnSO4·7H2O的添加量为25mg/L，处理后各处理组的糖、酸和VC含量结果(采用SAS或SPSS统计分析软件分析)见下表1。
表1各处理组的品质指标分析结果表
| 对照组 | KH<sub>2</sub>PO<sub>4</sub>处理组 | MgSO<sub>4</sub>·7H<sub>2</sub>O处理组 | MnSO<sub>4</sub>·7H<sub>2</sub>O处理组 | |
| 糖(Brix) | 1.44±0.11ab | 1.50±0.07a | 1.36±0.05bc | 1.28±0.08c |
| 酸(％) | 2.25±0.00a | 2.11±0.00a | 1.53±0.00c | 1.81±0.00b |
| VC(mg/100g) | 7.60±0.27a | 7.90±0.29a | 8.01±0.34a | 7.53±0.49a |
注：上表中同一行的不同字母表示不同处理间在p<0.05水平有显著性差异。
由上表可知，对照组糖含量为1.44±0.11Brix，酸含量为2.25％，VC含量为7.60±0.27mg/100g。而各处理组中：
KH2PO4处理组(添加KH2PO4的处理组)：糖含量为1.50±0.07Brix，与对照组相比，无显著性差异；酸含量为2.11％，与对照组相比，无显著性差异；VC含量为7.90±0.29mg/100g，与对照组相比，无显著性差异。结果显示，KH2PO4处理后愈伤组织的糖、酸和VC含量较对照均无显著性变化，判断KH2PO4对柑橘果实品质无调控作用，不是柑橘果实品质调控物。
MgSO4·7H2O处理组(添加MgSO4·7H2O的处理组)：糖含量为1.36±0.05Brix，与对照组相比无显著性差异；酸含量为1.53％，与对照组相比，处理组显著低于对照；VC含量为8.01±0.34mg/100g，与对照组相比无显著性差异。即MgSO4·7H2O处理后愈伤组织的酸含量显著低于对照，故判断MgSO4·7H2O对柑橘果实品质有调控效果，为柑橘果实品质调控物。
MnSO4·7H2O处理组(添加MnSO4·7H2O的处理组)：糖含量为1.28±0.08Brix，处理组显著低于对照；酸含量为1.81％，处理组显著低于对照；VC含量为7.53±0.49mg/100g，与对照组相比，两者无显著性差异。依据上述对照组和处理组数据，MnSO4·7H2O处理后愈伤组织的糖和酸含量均显著低于对照，故判断MnSO4·7H2O对柑橘果实品质有调控效果，为柑橘果实品质调控物。
Claims (2)
1.一种离体快速筛选柑橘果实品质调控物的方法，其特征在于，该方法步骤如下：
(1)准备柑橘愈伤组织；
(2)将柑橘愈伤组织分别等量接种在对照组和处理组的培养基中，然后于23-25℃暗培养2-3周；其中，对照组培养基为MT培养基，处理组培养基为添加有待判断的果实品质调控物的MT培养基；待判断的果实品质调控物的添加量为每升MT培养基加1-500mg；
(3)取培养相同天数的对照组和处理组的柑橘愈伤组织各2-3g，分别充分研磨匀浆后加入蒸馏水稀释，得处理组和对照组样品；
(4)分析处理组样品和对照组样品的糖、酸和VC含量品质指标，并将分析后的处理组样品的糖、酸和VC含量品质指标分别与对照组样品进行比较，若处理组的糖含量、酸含量或VC含量三个品质指标中的任一个品质指标与对照组有显著性变化，则判断待判断的果实品质调控物为柑橘果实品质调控物。
2.如权利要求1所述的一种离体快速筛选柑橘果实品质调控物的方法，其特征在于，所述步骤(3)的稀释是指按1g柑橘愈伤组织浆汁加8-12ml蒸馏水的比例于柑橘愈伤组织浆汁中加入蒸馏水进行稀释。
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