CN108845090A - 一种探究水库消落带典型植被根际微域汞活化效应的方法 - Google Patents

一种探究水库消落带典型植被根际微域汞活化效应的方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种探究水库消落带典型植被根际微域汞活化效应的方法，包括以下步骤：S1、通过野外实验监测水库消落带典型植物的汞分布及变化情况、分析该植物的根际分泌物成分并测定该植物的根际微域土壤的土壤指标；S2、通过根箱及水培实验测试与步骤S1中同类植物的的汞分布情况、分析该植物的根际分泌物成分、测定该植物的根际微域土壤的土壤指标；S3、通过步骤S1和S2的实验结果探明水库消落带典型植物汞的分布特征、植物根际汞的赋存形态以及植物根际微域对汞活性的影响；通过本发明的方法一方面能够确立植物根际微域对汞活化的作用机制及影响因素；另外还能评估消落带植物对汞释放特征、释放量及环境风险。

Description

一种探究水库消落带典型植被根际微域汞活化效应的方法
技术领域
本发明涉及水库汞污染研究领域，特别涉及一种探究水库消落带典型植被根际微域汞活化效应的方法。
背景技术
汞及其化合物具有很强的生物毒性，不同价态的无机汞在进入环境后，在自然条件下通过微生物活动或光化学作用，会转化为毒性更强的甲基汞，并通过各种途径进入食物链，构成对人类的危害。汞的致毒浓度较低，即使环境中少量汞的存在也能够引起污染。因此，汞作为全球污染物及其产生的环境问题，是目前乃至今后较长一段时间人类都必须面对的热点问题。
三峡水库是目前我国最大，也是举世瞩目的特大型水库，同时它又是一个典型的“汞敏感生态系统”。按照三峡水库“蓄清排浊”的调度方式，水库正常蓄水位为175m，防洪限制水位为145m，这种水库调度方式使得水库周边形成垂直高度为30m、面积超过400km2的水库消落带。由于消落带是库区径流的汇集地带，自然也成为环境汞等污染物的汇集区；另一方面，消落带土壤作为水库的最后一道缓冲带，它所汇集的汞等污染物最终又会影响到水体质量。因此，对水库而言，消落带既是汞的汇，又是汞的源。
国内外已有很多学者对汞在水库中迁移、转化以及汞在水生食物链的富集放大过程进行了较为广泛的研究(Gray,et al.,2009；Mailman,et al.,2006；Hall,et al.,1998；Jockson,et al.,1991；姚珩等,2010；张军方等,2009；郭艳娜等,2008)。大量研究显示，新建水库鱼体甲基汞富集是面临的最重要问题，而被淹没土壤和植被是水库鱼体甲基汞增高的重要来源。科学家们已公认，水库和各类蓄水大坝修建后，都会引起鱼体汞含量的增高。因此，水库引起的环境汞污染问题已经成为相关学科研究的热点问题。通过前期的调查我们得知，消落带在每年3-9月的出露期，由于气候适宜，雨水充沛，消落带大片区域会生长出茂密的草本植被，而根际微域环境会影响重金属在根际环境中的分布、积累和生物有效性。由于植物的生长，一方面其根系分泌物和微生物等因素的作用下，势必会改变消落带土壤根际微域汞的赋存形态，影响到消落带中汞的环境化学行为；另一方面，植物一般都具有较强的汞富集能力，植物根际微域对汞赋存形态的影响也一定程度会影响到植物对汞的吸收积累，到蓄水期，消落带植物被淹没并分解，它所吸收的汞将会被释放到水体中，在有机质丰富的厌氧环境，被释放的汞更易转化为甲基汞，产生更大的环境风险。目前针对于三峡库区消落带典型植物根际微域汞活性变化没有相关研究和报道，对消落带每年出露期间生长的植被其根际微域环境可能增加汞环境风险认识不清。
根际是土壤中受植物根系及其生长活动影响的微域环境，具有与土体不一样的物理、化学和生物性质。这个微域一般是指离根轴表面数毫米之内的范围，具有与土体明显不一样的物理、化学和生物性质。根际环境受植物根系分泌物、根际微生物及根系自身的生长活动的影响，其独特的物理、化学和生物学性质能使重金属形态发生变化，改变其迁移性和生物有效性，从而影响植物对它们的吸收。大量研究表明，根际环境特别是重金属污染胁迫下的根际环境与一般土体存在显著的差别。这主要就是因为：一方面，植物根及其根系分泌作用的存在，改变了土体中pH、Eh、CEC、养分状况、微生物组成及酶活性等物理、化学及生物学的特性，并由此直接影响了重金属在土壤植物系统中的形态和有效性以及迁移和转化行为；另一方面，植物根系不仅仅是植物吸收矿质营养和水分的重要器官，在土壤受到重金属等非生物逆境胁迫时，植物根系首当其冲，在第一时刻感受到逆境胁迫，并通过改变自身根系形态分布以及释放分泌物等根系活动来适应环境逆境胁迫。因此，研究根际土壤重金属，特别是汞这种特殊的重金属的形态及其变化，对了解三峡库区消落带土壤-植物系统中汞的环境行为有重要意义。
三峡库区消落带每年落干期(3-9月)都会长出大量的植物，植物作为陆地生态系统的第一生产者，也是食物链的最底层，对汞在大气、土壤、湿地和湖泊的迁移转化中起着重要的作用。植物是生态系统中汞的重要输入输出途径，对汞有较强的生物富集效应，极易通过生物累积进入到生态系统中。由于植物的吸收，土壤的酸碱性，氧化还原作用，胶体的含量和组成及气候、水文、生物等条件的影响，使土壤中Hg产生空间位置的迁移及存在形态的转化。而植物的根际是植物与外界进行物质、能量交换的重要场所，有机物、重金属等污染物的降解主要集中在植物根区。研究发现，湿地植物在长期的浸水条件下产生了一系列适应水生环境的特征，许多湿地植物有发达的通气组织促使氧气向植物的根部运输，使得根际微域环境处于相对氧化的状态，从而微域中的还原性Fe、Mn被氧化，在根表形成红棕色的铁锰氧化膜，因而减少了植物对还原性物质的吸收。由于根际微域特殊的物理、化学及生物性质，直接影响到铁锰元素、一些重金属元素及营养元素的存在形式和植物有效性。植物也可以通过根部从土壤和土壤溶液中吸收和富集离子态、原子态和甲基汞根部吸收汞受到许多条件的影响，如土壤中汞的形态和含量、土壤中有机质的含量、土壤中碳的交换容量、氧化还原电位等。某些植物在吸收汞后会在体内或通过向环境中分泌一些酶来促使其转化，从而使汞的形态发生改变。Sierra(Sierra，2012)通过野外试验研究阿尔马登汞矿开采区薰衣草根际土对汞吸收的影响，其研究发现薰衣草的根际土与非根际土之间总汞、有效态汞、电导率、有机质及阳离子交换量等有明显区别，且有机质及Mn2+会限制植物对汞的吸收，根际土有效态汞浓度越大则被吸收的汞越多，但植物地上部分的汞浓度低于地下部分。MP De Souza(MP De Souza，1999)研究两种湿地植物盐沼芦苇和长忙棒头草根际细菌对Se和Hg积累的影响发现，根基细菌的存在显著促进了该两种植物对Se和Hg的吸收。Darío Achá(Darío Achá，2005)通过研究发现蓼属植物根际就具有较多的硫酸盐还原菌亚组，其甲基化能力则较高高。侯明(侯明，2008)等研究也发现非根际土和根际土土壤汞形态分布有差异。Shuman(Shuman，1997)在研究根际土壤铜和锌形态变化与植物有效性时发现根际土壤溶液铜和锌含量远高于非根际土壤，而McGrath和Knight(McGrath，1997；Knight，1997)研究锌超富集植物吸收过程时也报道了类似结果。林琦等(林琦，1998)指出根际可能存在交换态、碳酸盐结合态向铁锰氧化物结合态转化的机制,因为根际铁锰氧化物结合态为非根际的2倍。这些研究表明，植物在生长过程中，其根系一方面从环境中摄取水分和养分，另一方面会向生长环境中分泌包含大量低分子量有机酸在内的根系分泌物，这些分泌物可通过降低土壤pH、络合、还原、提高微生物活性等机制，来增加某些元素的溶解性和移动性。目前，国内对于湿地植物的微域汞活性的研究较少，而土壤中的重金属有向根际土壤迁移的趋势，且根际土壤中重金属的有效态含量高于土体，主要是由于根系生理活动引起根际微域环境变化而引起的。
因此，分析消落带典型植物根际微域对汞的活化效应，从而对水环境的危害具有非常重要的意义，可以为消落带汞污染治理修复提供参考。
发明内容
有鉴于此，本发明提供一种探究水库消落带典型植被根际微域汞活化效应的方法，该方法采用现场定位试验和室内模拟研究相结合的方法，选取多种消落带典型草本植物，研究其根际微域汞的赋存形态及活性变化，探明消落带典型植物对汞的富集特征，摸清消落带典型植物根际土壤中汞形态转化的影响及其机制，为深入了解水库(如三峡库区)汞的生物地球化学循环特征和库区生态环境保护提供研究基础。
本发明的一种探究水库消落带典型植被根际微域汞活化效应的方法，包括以下步骤：S1、通过野外实验监测水库消落带典型植物的汞分布及变化情况、分析该植物的根际分泌物成分并测定该植物的根际微域土壤的土壤指标；S2、通过根箱及水培实验测试与步骤S1中同类植物的的汞分布情况、分析该植物的根际分泌物成分、测定该植物的根际微域土壤的土壤指标；S3、通过步骤S1和S2的实验结果探明水库消落带典型植物汞的分布特征、植物根际汞的赋存形态以及植物根际微域对汞活性的影响；
进一步的，步骤S1中，在水库退水初期，选择多个土壤类型相同、汞含量相似的地块作为野外实验地点，定期采集植物根际土及非根际土样品，分析该样品的总汞、甲基汞、汞赋存形态、微生物活性、PH、有机质、DOM；同时采集植物并测试其根、茎、叶汞及甲基汞的分布情况，并采集相应植物的根系分泌物的成分；
进一步的，在步骤S2中，将从野外实验地点采回大小均匀的同类植物进行根箱及水培培养；添加不同浓度的汞观察植物的生长情况，测试根际土及非根际土总汞、甲基汞、汞赋存形态、微生物活性、pH、有机质、DOM，并测定植物根、茎、叶总汞及甲基汞含量；
进一步的，在步骤S2中，所述根箱及水培实验中，通过设置缺铁和供铁两个水平进行植物汞分布情况以及根际分泌物成分的分析；
进一步，所述步骤S2中，采用多隔层三室根箱进行根箱实验；所述多隔层三室根箱包括箱体、相互平行设置于所述箱体内的两个插片组；两所述插片组将所述箱体内部分隔形成位于中部的植物根系生长室和位于所述植物根系生长室两侧的左近根区和右近根区；所述插片组包括滑动连接于所述箱体的前侧壁和后侧壁上的两个竖直设置的滑条和位于两滑条之间的多个插片；所述插片包括矩形边框和固定于所述边框内的尼龙丝网；所述滑条上设有多个用于插入插片的插槽；所述滑条固定有滑块，所述箱体的内侧壁设有与所述滑块滑动配合的滑槽；所述滑槽底部均匀分布有定位凹槽，所述滑块朝向滑槽底部的表面设有定位孔；所述定位孔内设有钢球和用于将所述钢球推向定位凹槽的弹簧；
进一步的，在所述根箱实验中，设置以下三种不同汞浓度的土壤进行实验：100、500、1000ug/kg；
进一步的，步骤S2中，进行所述水培实验的步骤包括：S21.将野外试验地采集植株移植至装有全营养液的硼硅玻璃瓶中；S22.将移植了植株的硼硅玻璃瓶置于恒温培养箱中，并用树脂塑料板均匀分隔各穴；S23.在硼硅玻璃瓶中直接加入无菌去离子水，培养12h，然后加入浓度为50mg/L的FeSO4溶液，在对照组中不添加FeSO4溶液；S24.在设定天数之后参重复步骤S23；S25.换用超纯水培养，并在每个硼硅玻璃瓶中中添加浓度为0、50、100、150ng/L的含汞溶液；26.培养至设定时间后，再添加一次浓度为50mg/L的FeSO4溶液，以保证新长的白色根被铁膜附着；S27.培养期间，FeSO4溶液均通过0.45um的微孔滤膜进行过滤；最后放入-4℃冰箱完全冰冻备用；
进一步的，步骤S3中，将所采集的植物、土壤样品均放置于冷藏箱运输；植物样品先用自来水冲洗掉泥沙，再用纯水冲洗干净，烘箱45℃烘干，玛瑙碾砵磨细，冰箱冷藏待分析；土壤样品用冷冻干燥机冷冻干燥，玛瑙碾砵磨细，冰箱冷藏待分析。
本发明的有益效果：本发明的探究水库消落带典型植被根际微域汞活化效应的方法，其考虑到植物生长其根际对汞可能会有“活化作用”即提高土壤汞的有效性，本发明选择举世瞩目的三峡水库消落带为对象，研究三峡水库消落带出露期生长的典型植物根际微域对汞环境行为的影响及其生态效应；另外，本发明的方法在现场研究的基础上，构建模拟试验研究和验证汞的释放特征，研究方法与思路具有特色；通过本发明的方法一方面能够确立植物根际微域对汞活化的作用机制及影响因素；另外还能评估消落带植物对汞释放特征、释放量及环境风险。
附图说明
下面结合附图和实施例对本发明作进一步描述。
图1为本实施例中选取的野外实验地点示意图；
图2为本实施例中采用的多根箱实验的示意图；
图3为本实施例中滑块和滑槽的配合示意图；
图4为本实施例中采用的水培实验的示意图。
具体实施方式
本实施例的探究水库消落带典型植被根际微域汞活化效应的方法，包括以下步骤：
S1、通过野外实验监测水库消落带典型植物的汞分布及变化情况、分析该植物的根际分泌物成分并测定该植物的根际微域土壤的土壤指标；
选择消落带分布面积较大，并位于三峡水库代表性地段的涪陵、忠县、开县、奉节、秭归等地为调查研究地点(图1)，于2016年消落带落干期，在各个研究点调查消落带生长的植物类型、分布特征；分别在每个地块随机设置样方，用于实地研究不同类型植物根际微域汞态及活性的变化。用环刀取出带土植物后，用液氮迅速将土冻结，再用刀切片，取植物根际土及非根际土，测量微域土壤总汞、甲基汞、汞形态、电导率、pH、有机质、微生物等指标，同时取相应植物根、茎、叶测试总汞及甲基汞的含量。
S2、通过根箱及水培实验测试与步骤S1中同类植物的的汞分布情况、分析该植物的根际分泌物成分、测定该植物的根际微域土壤的土壤指标；
根箱实验：
试验釆用多隔层三室根箱法开展盆栽试验。根箱设计如下，如图2。该根箱装置釆用PVC板制成，规格为150×140×230(长×宽×高，mm),可装载土壤5kg。该多隔层三室根箱包括包括箱体1、相互平行设置于所述箱体1内的两个插片组2；两所述插片组2将所述箱体1内部分隔形成位于中部的植物根系生长室4和位于所述植物根系生长室4两侧的左近根区5和右近根区3；所述插片组2包括滑动连接于所述箱体1的前侧壁和后侧壁上的两个竖直设置的滑条8和位于两滑条8之间的个插片6；所述插片6包括矩形边框和固定于所述边框内的尼龙丝网；所述滑条8上设有多个用于插入插片6的插槽7；本实施例中，每个滑条8上的插槽7均为6个，插片6也相应设置6个，并一一对应插入到个插槽7内，相邻插片6之间的间距为1mm，实验人员能够从植物根系生长室4内获得根室土，从相邻插片6之间获得1、2、3、4、5mm的近根际土，以及从左近根区5和右近根区3中获得大于5mm远根际土；另外，由于插片6的阻隔，避免了根系组织生长进入到左、右近根区3、实现各土层之间彼此物理分离的同时，又保证了土壤微生物和植物根系分泌物等物质层间迁移活动的进行。另外，由于安装插片6的滑条8能够沿箱体1的前、后侧壁滑动，因此，在使用时，可以根据植物根系的大小适应性的调整植物根系生长室4的大小，然后再向本实验装置的植物根系生长室4、左近根区5和右近根区3内添加土壤，当然，为避免插片组2在添加土壤过程中滑动，应用手固定住插片组2并向三个区域内同时进行添土。另外，所述滑条8固定有滑块，所述箱体1的前、后侧壁的内侧设有与所述滑块滑动配合的滑槽9；两滑槽9相互平行并沿水平方向设置，所述滑槽9底部沿滑槽9的长度方向均匀分布有多个定位凹槽，所述滑块朝向滑槽9底部的表面设有定位孔；所述定位孔内设有钢球10和用于将所述钢球10推向定位凹槽的弹簧11，定位凹槽为球面型凹坑，其半径与钢球10的半径一致，定位凹槽的深度小于钢球10的半径；实验人员在调节滑条8的位置时，当定位孔与定位凹槽对准时，钢球10在弹簧11的推动下将嵌入到定位凹槽内，从而锁定滑条8的位置，避免在填土的过程中滑条8发生滑动，当然，需要调节滑条8的位置时，可以人力推动滑条8，钢球10将退出定位凹槽。
根箱的箱体1内部分为植物根系生长室4(宽20mm)、左右近根区3(各60mm宽)三个试验区，并于紧贴植物根系生长室4的近根区内插入6张由尼龙丝网制成的插片，每层尼龙丝网之间间隔1mm。此设计将植物根系限制于中室内生长，并可以同时实现根室土、1、2、3、4、5mm近根际土及>5mm远根际土的分别采集。另外，此根箱在充分避免根系组织生长进入相邻近根区、实现各土层间彼此物理分离的同时，又保证了土壤微生物和植物根系分泌物等物质层间迁移活动的进行。至采样期，可观察到根系在与中室相邻的两侧尼龙网上生长形成根垫，而左右近根际并无根系组织穿过。根箱培养实验Hg污染胁迫设置三个不同汞浓度土壤：100、500、1000ug/kg；植物三种，并设置无植物种植对照处理；每种浓度设置6个平行。
水培实验：
在野外试验样地选取长势良好、株高均一的植株，分别移植至装有全营养液的硼硅玻璃瓶中，每桶3穴，每穴2-3株，并将移植了植物的硼硅玻璃瓶(图3)置于恒温培养箱中，并用树脂塑料板均匀分隔各穴，每个植物做12个平行。硼硅玻璃瓶直接加入无菌去离子水培养12h，而后在每个植物品种的6个处理中加入浓度为50mg/L的FeSO4溶液，其余6个处理不添加FeSO4溶液。3天之后参照前一步骤重新添加一次浓度为50mg/L的FeSO4溶液，用以巩固铁膜附着效果。随后，换用超纯水培养，并在每个处理中添加浓度为0、50、100、150ng/L的含汞溶液，每个处理重复二次。培养至一周时，再添加一次浓度为50mg/L的FeSO4溶液，以保证新长的白色根被铁膜附着，最后再培养3天至收获。
期间，每个处理的溶液均通过0.45um的微孔滤膜过滤，最后放入-4℃冰箱完全冷冻后备用。同时，分别采集水稻植株根部以及地上部分组织，烘箱烘干称量后研磨待测。
S3、通过步骤S1和S2的实验结果探明水库消落带典型植物汞的分布特征、植物根际汞的赋存形态以及植物根际微域对汞活性的影响。
(1)样品保存与预处理方法：所采集的植物、土壤样品均放置与冷藏箱运回实验室。植物样品先用自来水冲洗掉泥沙，再用纯水冲洗干净，烘箱45℃烘干，玛瑙碾砵磨细，冰箱冷藏待分析；土壤样品用冷冻干燥机冷冻干燥，玛瑙碾砵磨细，冰箱冷藏待分析。
(2)样品主要指标分析方法：
植物、土壤样品总汞分析参照美国EPA 1630标准方法进行。用DMA-80固体进样汞分析仪直接测定。
土壤(底泥)甲基汞分析方法:先称取适量样品，加入1.5mL 1mol/L的CuSO4溶液和7.5mL 3mol/L的HNO3，再加入10mL CH2Cl2，振荡30min进行萃取，之后以3000rpm转速离心20min，分层后去除水相，转移CH2Cl2相并加入超纯水进行反萃取，再以45-50℃水浴使多余的CH2Cl2挥发完毕，再用NaB(C2H5)4进行乙基化，之后用Tenax富集，最后用Brooks甲基汞分析系统测定。
土壤汞赋存状态的分析采用改进的Tessier连续化学浸提法进行，区分出汞赋存状态。
微生物活性用酶活性法和定量PCR法判定，微生物类群美国AOAC认证的菌种鉴定标准方法——Sherlock全自动脂肪酸分析菌种鉴定系统甄别。
DOM分析，先称取适量样品，按1:10加入超纯水振荡浸提，上清液过0.45μm滤膜，用TOC分析仪进行测定。
有机质分析，称取适量样品，Multi C/N2000碳氮自动分析仪直接测定。
植物根系分泌物分析，取适量样品，用气相色谱-质谱联用仪(HP6890n-HP5973，GC-MS,美国惠普)测定。
最后说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的宗旨和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。

Claims (8)

1.一种探究水库消落带典型植被根际微域汞活化效应的方法，其特征在于：包括以下步骤：
S1、通过野外实验监测水库消落带典型植物的汞分布及变化情况、分析该植物的根际分泌物成分并测定该植物的根际微域土壤的土壤指标；
S2、通过根箱及水培实验测试与步骤S1中同类植物的的汞分布情况、分析该植物的根际分泌物成分、测定该植物的根际微域土壤的土壤指标；
S3、通过步骤S1和S2的实验结果探明水库消落带典型植物汞的分布特征、植物根际汞的赋存形态以及植物根际微域对汞活性的影响。
2.根据权利要求1所述的探究水库消落带典型植被根际微域汞活化效应的方法，其特征在于：步骤S1中，在水库退水初期，选择多个土壤类型相同、汞含量相似的地块作为野外实验地点；定期采集植物根际土及非根际土样品，分析该样品的总汞、甲基汞、汞赋存形态、微生物活性、PH、有机质、DOM；同时采集植物并测试其根、茎、叶汞及甲基汞的分布情况，并采集相应植物的根系分泌物的成分。
3.根据权利要求2所述的探究水库消落带典型植被根际微域汞活化效应的方法，其特征在于：在步骤S2中，将从野外实验地点采回大小均匀的同类植物进行根箱及水培培养；添加不同浓度的汞观察植物的生长情况，测试根际土及非根际土总汞、甲基汞、汞赋存形态、微生物活性、pH、有机质、DOM，并测定植物根、茎、叶总汞及甲基汞含量。
4.根据权利要求3所述的探究水库消落带典型植被根际微域汞活化效应的方法，其特征在于：在步骤S2中，所述根箱及水培实验中通过设置缺铁和供铁两个水平进行植物汞分布情况以及根际分泌物成分的分析。
5.根据权利要求4所述的探究水库消落带典型植被根际微域汞活化效应的方法，其特征在于：所述步骤S2中，采用多隔层三室根箱进行根箱实验；所述多隔层三室根箱包括箱体、相互平行设置于所述箱体内的两个插片组；两所述插片组将所述箱体内部分隔形成位于中部的植物根系生长室和位于所述植物根系生长室两侧的左近根区和右近根区；所述插片组包括滑动连接于所述箱体的前侧壁和后侧壁上的两个竖直设置的滑条和位于两滑条之间的多个插片；所述插片包括矩形边框和固定于所述边框内的尼龙丝网；所述滑条上设有多个用于插入插片的插槽；所述滑条固定有滑块，所述箱体的内侧壁设有与所述滑块滑动配合的滑槽；所述滑槽底部均匀分布有定位凹槽，所述滑块朝向滑槽底部的表面设有定位孔；所述定位孔内设有钢球和用于将所述钢球推向定位凹槽的弹簧。
6.根据权利要求5所述的探究水库消落带典型植被根际微域汞活化效应的方法，其特征在于：在所述根箱实验中，设置以下三种不同汞浓度的土壤：100、500、1000ug/kg。
7.根据权利要求6所述的探究水库消落带典型植被根际微域汞活化效应的方法，其特征在于：步骤S2中，进行所述水培实验的步骤包括：
S21.将野外试验地采集植株移植至装有全营养液的硼硅玻璃瓶中；
S22.将移植了植株的硼硅玻璃瓶置于恒温培养箱中，并用树脂塑料板均匀分隔各穴；
S23.在硼硅玻璃瓶中直接加入无菌去离子水，培养12h，然后加入浓度为50mg/L的FeSO4溶液，在对照组中不添加FeSO4溶液；
S24.在设定天数之后参重复步骤S23；
S25.换用超纯水培养，并在每个硼硅玻璃瓶中中添加浓度为0、50、100、150ng/L的含汞溶液；
S26.培养至设定时间后，再添加一次浓度为50mg/L的FeSO4溶液，以保证新长的白色根被铁膜附着；
S27.培养期间，FeSO4溶液均通过0.45um的微孔滤膜进行过滤；最后放入-4℃冰箱完全冰冻备用。
8.根据权利要求7所述的探究水库消落带典型植被根际微域汞活化效应的方法，其特征在于：步骤S3中，将所采集的植物、土壤样品均放置于冷藏箱运输；植物样品先用自来水冲洗掉泥沙，再用纯水冲洗干净，烘箱45℃烘干，玛瑙碾砵磨细，冰箱冷藏待分析；土壤样品用冷冻干燥机冷冻干燥，玛瑙碾砵磨细，冰箱冷藏待分析。
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