CN108812703A - 一种防治黄芪白粉病组合物及其制备方法 - Google Patents

一种防治黄芪白粉病组合物及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种用于防治黄芪白粉病的组合物及其制备方法，通过红曲霉菌在特定培养液中培养后，对其部分菌体进行酶解，得其酶解液，再用其酶解液和上述的特定培养液对剩余部分的菌体进一步刺激，得到优化的红曲霉菌菌种；其次通过对优化的红曲霉菌菌种进行发酵，加入中药提取物以及色素杆菌进行进一步培养，得到具有较强活性的组合物；本发明主要通过刺激微生物代谢和培养出具有较强活性的物质，其制备方法简单可控，且不加入有毒物质，得到的组合物不污染土壤，具有很强的经济效应和社会效应。

Description

一种防治黄芪白粉病组合物及其制备方法
技术领域
本发明涉及一种防治植物白粉病组合物及其制备方法，具体涉及一种用于防治黄芪白粉病组合物的制备方法，属于植保剂领域。
背景技术
黄芪为豆科多年生草本植物，以根入药。黄芪具有补气固表、利尿、托毒排脓、生肌等疗效，主治气短、虚脱、心悸、自汗、体虚浮肿、慢性肾炎、脱水、久泻、气虚、气血不足、中气下陷，有抗菌消炎、降压利尿、解毒利胆等功效，是一种常用中草药。国内市场对黄芪的需求极大，其中约50%用于生产黄芪饮片，约50%用于中成药和提取物及制剂，但目前黄芪野生资源几近枯竭，商品黄芪多以栽培为主。
黄芪在种植和生长过程中,常受到真菌、细菌、病毒等病原生物的侵染而引起病害，其中以白粉病为主，从苗期到成株均可发病。植株叶片受害时,初期出现圆形白色绒状霉斑,后扩大成片,叶面出现白霉层；后期霉层中出现小黑点，子囊壳破裂后再浸染。此病在温暖干燥季节或施氮肥过多,植株生长茂密,株间不通风不透光时发生严重。
目前对于黄芪白粉病主要以预防为主，收获后清洁田园，集中烧毁，忌连作，实行轮作倒茬，黄芪地的前作物不选豆类植物，也不宜选择收根茎类的农作物，宜选禾本科植物；合理密植，提高抗病能力，同时还会用25%粉锈宁1500倍液,50%甲基托布津1000倍液，进行治疗。
虽然上述手段能够在某种程度上对黄芪白粉病具有一定的治疗效果，但是难以根治，同时预防过程中需要严格控制种植地的环境以及作物之间搭配，资源得不到合理运用，采用试剂进行去除白粉病，易造成药害，影响黄芪生长。
发明内容
为解决上述现有技术存在的问题，本发明提供一种用于防治黄芪白粉病组合物及其制备方法，本发明所得的组合物对黄芪的白粉病极为敏感，防治效果显著，且不影响黄芪的生长和质量，同时本发明组合物的制备方法简单，可控，适于产业化和规模化。
为了实现上述发明，实施方案如下：
一种防治黄芪白粉病组合物的制备方法，由以下几个步骤组成：
（一）将优化红曲霉菌菌种液接种至发酵液中，控制温度为20-30℃，密闭10-20天。
优选的，所述优化红曲霉菌菌种液接种量为发酵液质量的2%-6%，优选4%。
优选的，所述优化红曲霉菌菌种制备方法如下：
1、取活性红曲霉菌，加入培养液中，恒温振摇2-4天，保持温度为20-30℃，得初始培养液。
优选的，所述的培养液由蛋白胨、硝酸钾、牛肉汁、硫酸二乙酯、亚硫酸铁以及水组成，组成质量比例依次为：1:0.1:5:0.05:100。所述的牛肉汁为1kg牛肉加入5kg水后，搅碎，过100目筛得到的肉汁。
进一步的，所述的培养液制备方法如下：
将蛋白胨、硝酸钾、牛肉汁、硫酸二乙酯、亚硫酸铁依次加入水中，搅拌混合，加热至80℃，保温2-4小时，冷却后装瓶，在121℃下，灭火30min，即可。
2、取一半的初始培养液，加入2-4倍量的水，加入磷酸二氢钾，调节pH值为7-8，加入蛋白酶，控制温度为40-60℃，酶解2-4小时，离心过滤，得滤液。
3、将上述剩余的初始培养液接入菌种培养罐中，菌种培养罐中的培养液与初始培养液质量比为1:0.01-0.03，加入上述第二步所得滤液，恒温20-30℃，密闭培养10-20天，即可。
（二）发酵罐中加入中药材提取液，搅拌均匀，控制温度为20-30℃，加入色素杆菌菌种，密闭10-20天。
优选的，所述中药材提取液由大蒜、连翘、鱼腥草三种药材提取得到，三种药材的质量比为1:1-5:1-5。
进一步的，所述中药材提取液制备方法如下：
取适量大蒜、连翘、鱼腥草，加入相当于大蒜、连翘、鱼腥草总质量的2-4倍量的乙醇溶液，加热回流提取1-3次，每次2-4小时，乙醇浓度为60%-80%，合并滤液，浓缩至无乙醇味，即可。
（三）将上述发酵液离心过滤，得滤液即可。
优选的，所述离心过滤采用三足离心机过滤，转速在4000-10000r/min，筛网小于200目。
本发明的特点在于通过加入特定比例的培养液，采用硫酸二乙酯刺激红曲霉菌，使其对醇酯敏感性下降，再通过以红曲霉菌的发酵液的酶解液作为底物，进一步刺激红曲霉菌的生长，得到优化的红曲霉菌菌种，进行发酵，再通过加入的中药提取物，作为底物，刺激色素杆菌的培养，最后离心得到具有较强活性的组合物。
本发明的有益效果在于：
1.本发明的制备方法简易可控，是与产业化和工业化，为社会带来较强的经济效益。
2.本发明采用微生物发酵的方式，得到具有很强抗白粉病的组合物，该组合物为绿色组合物，不会差生药害。
3.本发明所得的组合物对黄芪的白粉病具有很强的抗性，其活性和耐用性具有显著的提高。
具体实施方式
为了更好的理解本发明要点，现通过具体实施例对上述发明进一步详述，但是下述实施例不能理解为对本发明的进一步限制。
实施例1
一种防治黄芪白粉病组合物的制备方法，由以下步骤组成：
1、取活性红曲霉菌，加入至培养液中，恒温振摇3天，保持温度为25℃，得初始培养液；取一半的初始培养液，加入3倍量的水，加入磷酸二氢钾，调节pH值为7.5，加入蛋白酶，控制温度为50℃，酶解3小时，离心过滤，得滤液（1）。将上述剩余的初始培养液接入菌种培养罐中，菌种培养罐中的培养液与初始培养液质量比为1:0.02，加入上述所得滤液（1），恒温25℃，密闭培养15天，即可，得到优化红曲霉菌菌种。
2、将优化红曲霉菌菌种液接种至发酵液中，控制温度为25℃，密闭15天。
3、发酵罐中加入中药材提取液，中药材提取液由大蒜、连翘、鱼腥草三种药材提取得到，三种药材的质量比为1:3:3，搅拌均匀，控制温度为25℃，加入色素杆菌菌种，密闭15天。
4、将上述发酵液离心过滤，得滤液即可。
实施例2
一种防治黄芪白粉病组合物的制备方法，由以下步骤组成：
1、取活性红曲霉菌，加入至培养液中，恒温振摇2天，保持温度为20℃，得初始培养液；取一半的初始培养液，加入2倍量的水，加入磷酸二氢钾，调节pH值为7，加入蛋白酶，控制温度为40℃，酶解2小时，离心过滤，得滤液（1）。将上述剩余的初始培养液接入菌种培养罐中，菌种培养罐中的培养液与初始培养液质量比为1:0.01，加入上述所得滤液（1），恒温20℃，密闭培养10天，即可，得到优化红曲霉菌菌种。
2、将优化红曲霉菌菌种液接种至发酵液中，控制温度为20℃，密闭10天。
3、发酵罐中加入中药材提取液，中药材提取液由大蒜、连翘、鱼腥草三种药材提取得到，三种药材的质量比为1:1:1，搅拌均匀，控制温度为20℃，加入色素杆菌菌种，密闭10天。
4、将上述发酵液离心过滤，得滤液即可。
实施例3
一种防治黄芪白粉病组合物的制备方法，由以下步骤组成：
1、取活性红曲霉菌，加入至培养液中，恒温振摇4天，保持温度为30℃，得初始培养液；取一半的初始培养液，加入4倍量的水，加入磷酸二氢钾，调节pH值为8，加入蛋白酶，控制温度为60℃，酶解4小时，离心过滤，得滤液（1）。将上述剩余的初始培养液接入菌种培养罐中，菌种培养罐中的培养液与初始培养液质量比为1:0.03，加入上述所得滤液（1），恒温30℃，密闭培养20天，即可，得到优化红曲霉菌菌种。
2、将优化红曲霉菌菌种液接种至发酵液中，控制温度为30℃，密闭20天。
3、发酵罐中加入中药材提取液，中药材提取液由大蒜、连翘、鱼腥草三种药材提取得到，三种药材的质量比为1:5:5，搅拌均匀，控制温度为0℃，加入色素杆菌菌种，密闭20天。
4、将上述发酵液离心过滤，得滤液即可。
实施例4
一种防治黄芪白粉病组合物的制备方法，由以下步骤组成：
1、取活性红曲霉菌，加入至培养液中，恒温振摇4天，保持温度为30℃，得初始培养液；取一半的初始培养液，加入2倍量的水，加入磷酸二氢钾，调节pH值为8，加入蛋白酶，控制温度为60℃，酶解4小时，离心过滤，得滤液（1）。将上述剩余的初始培养液接入菌种培养罐中，菌种培养罐中的培养液与初始培养液质量比为1:0.01，加入上述所得滤液（1），恒温20℃，密闭培养20天，即可，得到优化红曲霉菌菌种。
2、将优化红曲霉菌菌种液接种至发酵液中，控制温度为30℃，密闭10天。
3、发酵罐中加入中药材提取液，中药材提取液由大蒜、连翘、鱼腥草三种药材提取得到，三种药材的质量比为1:5:1，搅拌均匀，控制温度为20℃，加入色素杆菌菌种，密闭20天。
4、将上述发酵液离心过滤，得滤液即可。
对比实施例1
一种防治黄芪白粉病组合物的制备方法，由以下步骤组成：
1、将红曲霉菌菌种液接种至发酵液中，控制温度为20-30℃，密闭10-20天。
2、发酵罐中加入中药材提取液，中药材提取液由大蒜、连翘、鱼腥草三种药材提取得到，三种药材的质量比为1:1-5:1-5，搅拌均匀，控制温度为20-30℃，加入色素杆菌菌种，密闭10-20天。
3、将上述发酵液离心过滤，得滤液即可。
对比实施例2
一种防治黄芪白粉病组合物的制备方法，由以下步骤组成：
1、取活性红曲霉菌，加入至培养液中，恒温振摇2-4天，保持温度为20-30℃，得初始培养液；取一半的初始培养液，加入2-4倍量的水，加入磷酸二氢钾，调节pH值为7-8，加入蛋白酶，控制温度为40-60℃，酶解2-4小时，离心过滤，得滤液（1）。将上述剩余的初始培养液接入菌种培养罐中，菌种培养罐中的培养液与初始培养液质量比为1:0.01-0.03，加入上述所得滤液（1），恒温20-30℃，密闭培养10-20天，即可，得到优化红曲霉菌菌种。
2、将优化红曲霉菌菌种液接种至发酵液中，控制温度为20-30℃，密闭10-20天。
3、发酵罐中加入中药材提取液，中药材提取液由大蒜、连翘、鱼腥草三种药材提取得到，三种药材的质量比为1:1-5:1-5，搅拌均匀，控制温度为20-30℃，密闭10-20天。
4、将上述发酵液离心过滤，得滤液即可。
对比实施例3
一种防治黄芪白粉病组合物的制备方法，由以下步骤组成：
1、将红曲霉菌菌种液接种至发酵液中，控制温度为20-30℃，密闭10-20天。
3、发酵罐中加入中药材提取液，中药材提取液由大蒜、连翘、鱼腥草三种药材提取得到，三种药材的质量比为1:1-5:1-5，搅拌均匀，控制温度为20-30℃，密闭10-20天。
4、将上述发酵液离心过滤，得滤液即可。
白粉病防治考察
选取350株大小相似的黄芪幼苗，幼苗叶在7-10张之间，分成7组，每组50株，等间距栽培，统一施肥管理，且每组之间用1m米高挡板隔开，在7月后，每隔半月喷洒一次上述组合物，喷洒量相同。喷洒信息如下表：
组号 1 2 3 4 5 6 7
喷洒组合物 实施例1 实施例2 实施例3 对比实施例1 对比实施例2 对比实施例3 25%粉锈宁1500倍液,50%甲基托布津1000倍液
喷洒量 10ml/株 10ml/株 10ml/株 10ml/株 10ml/株 10ml/株 10ml/株
每隔半月观察一次各黄芪白粉病诱发情况，记录诱发白粉病的黄芪株数，结果如下（第一次为7月15日）：
组号 1 2 3 4 5 6 7
第一次（株） 0 0 0 9 8 10 0
第二次（株） 0 1 0 13 16 11 2
第三次（株） 1 0 0 15 24 22 4
第四次（株） 1 0 1 32 40 37 8
从上述结果分析，本发明所得组合物在防治黄芪的白粉病方面，具有显著效果。

Claims (7)

1.一种防治黄芪白粉病组合物的制备方法，其特征在于包括以下几个步骤：
（1）将优化红曲霉菌菌种液接种至发酵液中，控制温度为20-30℃，密闭10-20天；
（2）发酵罐中加入中药材提取液，搅拌均匀，控制温度为20-30℃，加入色素杆菌菌种，密闭10-20天；
（3）将上述发酵液离心过滤，得滤液即可。
2.根据权利要求1所述的防治黄芪白粉病组合物制备方法，其特征在于：所述优化红曲霉菌菌种液接种量为发酵液质量的2%-6%。
3.根据权利要求2所述的防治黄芪白粉病组合物制备方法，其特征在于：所述优化红曲霉菌菌种制备方法如下：
（1）取活性红曲霉菌，加入至培养液中，恒温振摇2-4天，保持温度为20-30℃，得初始培养液；
（2）取一半的初始培养液，加入2-4倍量的水，加入磷酸二氢钾，调节pH值为7-8，加入蛋白酶，控制温度为40-60℃，酶解2-4小时，离心过滤，得滤液；
（3）将上述剩余的初始培养液接入菌种培养罐中，菌种培养罐中的培养液与初始培养液质量比为1:0.01-0.03，加入上述第二步所得滤液，恒温20-30℃，密闭培养10-20天，即可。
4.根据权利要求3所述的防治黄芪白粉病组合物制备方法，其特征在于：所述培养液由蛋白胨、硝酸钾、牛肉汁、硫酸二乙酯、亚硫酸铁以及水组成，组成质量比例依次为：1:0.1:5:0.05:100。
5.根据权利要求4所述的防治黄芪白粉病组合物制备方法，其特征在于：所述培养液制备方法如下：将蛋白胨、硝酸钾、牛肉汁、硫酸二乙酯、亚硫酸铁依次加入水中，搅拌混合，加热至80℃，保温2-4小时，冷却后装瓶，在121℃下，灭火30min，即可。
6.根据权利要求5所述的防治黄芪白粉病组合物制备方法，其特征在于：所述中药材提取液由大蒜、连翘、鱼腥草三种药材提取得到，三种药材的质量比为1:1-5:1-5。
7.根据权利要求6所述的防治黄芪白粉病组合物制备方法，其特征在于：所述中药材提取液制备方法如下：取适量大蒜、连翘、鱼腥草，加入相当于大蒜、连翘、鱼腥草总质量的2-4倍量的乙醇溶液，加热回流提取1-3次，每次2-4小时，乙醇浓度为60%-80%，合并滤液，浓缩至无乙醇味，即可。
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