CN108780080A - 对由药液施予引起的疼痛进行评价的方法及药液施予的选定方法 - Google Patents

对由药液施予引起的疼痛进行评价的方法及药液施予的选定方法 Download PDF

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Abstract

对由药液施予引起的疼痛进行评价的方法，其中，准备大鼠(12)，通过吸入麻醉而将大鼠(12)麻醉，将测定电极(24)留置于被麻醉的大鼠(12)的半腱肌(12b)，在用测定电极(24)测定半腱肌(12b)的肌电位的同时向被麻醉的大鼠(12)的足底皮下(12a)穿刺注射针(18)，在由注射针(18)的穿刺引起的肌电反应消失之后，经由注射针(18)向被麻醉的大鼠(12)施予药液，进行下述测定中的至少一项：由药液施予引起的肌电反应的持续时间(T)的测定、及对由药液施予引起的肌电反应产生起直至消失为止的肌电位的绝对值进行积分而得到的EMG强度的测定。

Description

对由药液施予引起的疼痛进行评价的方法及药液施予的选定 方法
技术领域
本发明涉及对由药液施予引起的疼痛进行评价的方法及药液施予的选定方法。
背景技术
注射是最常用的药液施予方法，但由注射引起的疼痛对于患者来说是不适的。因此，希望减轻由注射引起的疼痛。在由注射引起的疼痛中，存在由注射针的穿刺引起的疼痛和由药液(药液的注入)引起的疼痛。因此，为减轻由注射引起的疼痛，需要能够分别对由穿刺引起的疼痛和由药液施予引起的疼痛进行评价(定量化)。
对此，文献1中提出了利用被麻醉的大鼠的脊髓反射评价由针的穿刺引起的疼痛的方法。
文献1：冈本(Okamoto，K)、网(Ami，N)、大岛(Oshima，H)，“麻醉大鼠中的屈肌反射反应和针插入的疼痛的评价(Assessment of needle insertion pain with flexorreflex responses in anesthetized rats)”，Pain Research，日本疼痛学会，2012年，第27卷，第24期，第215-225页。
另外，文献2中提出了根据肌电图(EMG)对血管的疼痛进行评价的方法。
文献2：Masumi.S、Senba.E，“麻醉大鼠中的由脂肪乳剂诱发的血管疼痛中的一氧化氮的参与(Nitric oxide involvement in lipid emulsion-induced vascular painin anesthetized rats)”，Eur J Pharmacol，Elsevier，2008年，第594期，第64-69页。
发明内容
然而，一直以来，都未曾提出对由药液施予引起的疼痛进行评价(定量化)的有效方法。
本发明是考虑到这样的课题而作出的，目的在于提供对由药液施予引起的疼痛进行评价的方法及药液施予的选定方法。
为达成上述目的，本发明所涉及的对由药液施予引起的疼痛进行评价的方法的特征在于，其中准备具有身体的规定部位、及在对上述规定部位施以刺激时由于脊髓反射而发生弯曲的骨骼肌的哺乳类实验动物，通过吸入麻醉而将上述实验动物麻醉，向被麻醉的上述实验动物的上述骨骼肌中插入测定电极，在用上述测定电极测定上述骨骼肌的肌电位的同时、向被麻醉的上述实验动物的上述规定部位穿刺注射针，在由上述注射针的穿刺引起的肌电反应消失之后，经由上述注射针向被麻醉的上述实验动物施予药液，进行下述测定中的至少一项：对由上述药液施予引起的肌电反应的持续时间的测定、及对由上述药液施予引起的上述肌电反应产生起直至消失为止的肌电位的绝对值进行积分而得到的EMG强度的测定。
通过上述本发明的方法，在由注射针的穿刺引起的肌电反应消失之后对实验动物施予药液，并测定由药液施予引起的肌电反应，因此，由穿刺引起的肌电反应和由药液施予引起的肌电反应在肌电图(EMG)上不会重合。由此，能够与由穿刺引起的疼痛相区分，而对由药液施予引起的疼痛进行评价(定量化)。另外，由于人感受到的疼痛与使用实验动物获得的肌电反应结果显示出同样的趋势，因此，能够通过本发明的方法对向人注射时由药液施予引起的疼痛进行评价。因此，通过本发明的方法，能够有助于进一步减轻了疼痛的人用药液注射的开发。
在上述对由药液施予引起的疼痛进行评价的方法中，可以在上述实验动物的上述规定部位的多个施予位置，将组成不同的多种上述药液以相同的施予条件进行施予，或者将组成相同的上述药液以不同的施予条件进行施予。
由此，通过对相同实验动物的多个位置进行施予，可比较由于药液组成或施予条件引起的疼痛差异，从而能选定疼痛更少的药液或施予条件。
在上述对由药液施予引起的疼痛进行评价的方法中，上述实验动物可为大鼠。
在上述对由药液施予引起的疼痛进行评价的方法中，上述规定部位可为足底皮下，上述骨骼肌可为半腱肌。
在上述对由药液施予引起的疼痛进行评价的方法中，上述多个施予位置中的每一个位置的施予量可为10～100μL。
在上述对由药液施予引起的疼痛进行评价的方法中，可将相邻的上述施予位置彼此的间隔留设为2mm以上。
由此，在获得由药液施予引起的肌电反应的过程中避免了因相邻施予位置造成的影响，能以高精度进行测定。
在上述对由药液施予引起的疼痛进行评价的方法中，上述多个施予位置的总施予量可为200μL以下。
在上述对由药液施予引起的疼痛进行评价的方法中，上述药液的施予速度可为5～100μL/秒。
在上述对由药液施予引起的疼痛进行评价的方法中，可在由穿刺引起的上述肌电反应消失起经过1秒以上之后，开始施予上述药液。
由此，能够与由穿刺引起的肌电反应相区分，而更有效地测定由药液施予引起的肌电反应。
在上述对由药液施予引起的疼痛进行评价的方法中，可以仅在产生了由穿刺引起的上述肌电反应的情况下施予上述药液。
由此，能够避免药液施予的浪费。
在上述对由药液施予引起的疼痛进行评价的方法中，可以使用双性电极作为上述测定电极，在上述实验动物的胸部皮肤上贴附标准电极。
由此，能够获得低噪声的肌电位波形，可使测定精度提高。
另外，本发明所涉及的药液施予的选定方法的特征在于，其包括下述步骤：准备步骤，准备具有身体的规定部位、及在对上述规定部位施以刺激时由于脊髓反射而发生弯曲的骨骼肌的哺乳类实验动物；麻醉步骤，通过吸入麻醉而将上述实验动物麻醉；测定电极留置步骤，将测定电极留置于被麻醉的上述实验动物的上述骨骼肌中；穿刺步骤，在用上述测定电极测定上述骨骼肌的肌电位的同时，向被麻醉的上述实验动物的上述规定部位穿刺注射针；施予步骤，在由上述注射针的穿刺引起的肌电反应消失之后，经由上述注射针向被麻醉的上述实验动物施予药液；及测定步骤，进行下述测定中的至少一项：对由上述药液的施予引起的肌电反应产生起直至消失为止的上述肌电位的绝对值进行积分而得到的EMG强度的测定、及由上述药液的施予引起的上述肌电反应的持续时间的测定，上述选定方法中，对于组成不同的多种药液中的每一种、或者对于多种施予条件中的每一种，分别进行上述穿刺步骤、上述施予步骤及上述测定步骤，上述选定方法还包括确定步骤，上述确定步骤中，确定组成不同的上述多种药液中的、上述持续时间最短或上述EMG强度最小的药液组成，或者确定上述多种施予条件中的、上述持续时间最短或上述EMG强度最小的施予条件。
通过上述方法，能够选定疼痛轻的药液组成或施予条件。
通过本发明的对由药液施予引起的疼痛进行评价的方法，能够与由穿刺引起的疼痛相区分，而对由药液施予引起的疼痛进行评价(定量化)。另外，通过本发明的药液施予的选定方法，能够选定疼痛少的药液组成或施予条件。
附图说明
[图1]为本发明的方法中使用的一个构成例所涉及的测定系统的概略图。
[图2]为通过本发明的方法得到的肌电位波形的一个例子。
[图3]图3A为示出向大鼠注射组成不同的多种药液的情况下由各药液的施予引起的肌电反应的持续时间的图表，图3B为示出向大鼠注射组成不同的多种药液的情况下从由各药液的施予引起的肌电反应得到的EMG强度的图表。
[图4]图4A为示出以多种不同的注射量向人注射生理盐水的情况下引起的疼痛程度(VAS)的图表，图4B为示出以多种不同的施予量向大鼠注射生理盐水的情况下从由注射液引起的肌电反应得到的EMG强度的图表。
[图5]图5A为示出以多种不同的pH值向人注射的情况下引起的疼痛程度(VAS)的图表，图5B为示出以多种不同的pH值向大鼠注射的情况下从由注射液引起的肌电反应得到的EMG强度的图表。
[图6]图6A是示出向人注射5％NaCl的情况下引起的疼痛程度(VAS)随时间变化的图表，图6B是示出以多种不同的浓度向大鼠注射NaCl的情况下从由注射液引起的肌电反应得到的EMG强度的图表。
[图7]图7A是示出以多种不同的摩尔浓度向人注射谷氨酸的情况下的疼痛程度(VAS)的图表，图7B是示出以多种不同的摩尔浓度向大鼠注射谷氨酸的情况下从由注射液引起的肌电反应得到的EMG强度的图表。
[图8]图8A是示出将聚乙二醇·生理盐水混合液以多种不同粘度向大鼠注射的情况下由注射液引起的肌电反应的持续时间的图表，图8B是示出将聚乙二醇·生理盐水混合液以多种不同粘度向大鼠注射的情况下从由注射液引起的肌电反应得到的EMG强度的图表。
[图9]图9A是示出以多种不同的施予速度向大鼠注射磷酸缓冲生理盐水(pH5)的情况下从由注射液引起的肌电反应得到的EMG强度的图表，图9B是示出以多种不同的施予速度向大鼠注射10％NaCl的情况下从由注射液引起的肌电反应得到的EMG强度的图表。
[图10]是示出本发明实施例的图表，其为示出向大鼠注射不同pH的多种药液(用于治疗炎症性自身免疫疾病的注射用水性制剂)的情况下从由药液施予引起的肌电反应得到的EMG强度的图表。
具体实施方式
以下，针对本发明所涉及的对由药液施予引起的疼痛进行评价的方法及药液施予的选定方法列举优选的实施方式，参照随附的附图加以说明。
图1是本发明的方法中使用的一个构成例所涉及的测定系统10的概略图。图1所示的本实施方式中，为了评价由药液施予引起的疼痛而使用的受试体(实验动物)为大鼠12。作为可使用的大鼠12的条件，例如为7～10周龄、体重为200～400g、品系为SD(其他品系亦可)。优选将大鼠12的适应·检疫期间设定为5日以上。给大鼠12戴上麻醉用面罩13，实施吸入麻醉。
需要说明的是，可使用的实验动物只要是具有身体的规定部位、及在对规定部位施以刺激时由于脊髓反射而发生弯曲的骨骼肌的哺乳类动物即可。在大鼠12的情况下，对足底皮下12a给予刺激时因脊髓反射而引起半腱肌12b发生弯曲。作为除大鼠12以外可使用的哺乳类实验动物，例如可举出小鼠、豚鼠、沙鼠、仓鼠、雪貂(ferret)、狗、小型猪等。
将药液填充入注射器14中。注射器14的容量例如为1～10mL。注射器14介由树脂制的软管16与注射针18相连。可适用的注射针18的尺寸例如为34G～22G。注射针18被穿刺至大鼠12的足底皮下12a。
将注射器14安装于注射器泵20。注射器泵20具备推压所安装的注射器14的柱塞(plunger)14a的滑块22。注射器泵20中，根据所设定的送液量和注射器14的种类(容量)来确定用滑块22推入柱塞14a的速度。由此，可任意设定向大鼠12施予药液的施予速度。药液的施予速度例如为5～100μL/秒。
为测定由药液施予引起的疼痛，记录大鼠12大腿部的半腱肌12b的肌电位。在肌电位的记录中，将针状的测定电极24(例如双极钩针电极)穿刺至半腱肌12b中并将其留置，同时将标准电极26贴附在胸部皮肤12c上。从测定电极24及标准电极26发出的电位信号通过高灵敏度生物电放大器28而被放大，发送至数据收集装置30。
在数据收集装置30中，以规定的取样间隔(例如0.1ms)记录数据(电位信号)，生成肌电位波形。在个人电脑32中，将由数据收集装置30生成的肌电位波形显示于监测画面32a。
另外，在该测定系统10中，作为测定因注射引起的肌电反应的前期准备，使用夹式刺激电极34进行电刺激，以调节至能够测定肌电反应(肌肉收缩)的麻醉深度。夹式刺激电极34与未图示的电刺激装置相连。
在使用如上所述地构成的测定系统10的情况下，对由药液施予引起的疼痛进行评价的方法及药液施予的选定方法可例如按以下方式实施。
在想要研究多种不同的药液组成中哪一种组成引起的疼痛最少的情况下，准备组成不同的多种药液。药液组成因例如药液成分(例如有效成分的化学结构、缓冲剂、稳定剂、抗氧化剂等)的种类、pH值、粘度等而异。或者，在想要研究多种不同的施予条件中哪一种施予条件引起的疼痛最少的情况下，对组成相同的药液作出多种不同施予条件的计划。作为施予条件的参数，可举出药液的施予速度(注入速度)、施予量。
准备作为受试体的大鼠12(准备步骤)，对大鼠12进行吸入麻醉(麻醉步骤)。作为可适用的吸入麻醉药，可举出例如异氟烷。关于相对于空气而言的麻醉浓度，在麻醉导入时例如为3～4％/空气(Air)，在记录时例如为1～2％/空气。另外，为得到稳定的数据，在麻醉中优选通过保温垫对大鼠12加温，保持恒定的体温。
接着，在被麻醉的大鼠12的半腱肌12b中留置测定电极24(测定电极留置步骤)。具体地，使用夹式刺激电极34夹住大鼠12后肢的外侧和内侧，使用未图示的电刺激装置介由夹式刺激电极34对痛觉的C纤维给予电刺激(例如40Hz、10mA、2ms)。将此时观察到收缩的位置的大腿部皮肤切开约1cm左右，使半腱肌12b露出后，插入测定电极24。
留置测定电极24后，使用未图示的电刺激装置介由夹式刺激电极34再次给予电刺激(例如40Hz、5mA、2ms)，参照肌电反应强度而对大鼠12的麻醉深度作出微调。然后，保持麻醉深度恒定。
另外，将大鼠12胸部脱毛，使胸部皮肤12c露出之后，将标准电极26贴附在胸部皮肤12c上。需要说明的是，标准电极26的贴附可以在测定电极24的留置之前或之后进行，或者也可以同时进行。使用双性电极作为测定电极24、并且将标准电极26贴附在大鼠12的胸部皮肤12c上时，可取得低噪声的肌电位波形，能够使测定精度提高。需要说明的是，在贴附标准电极26的情况下，测定电极24也可以是单极电极。
完成以上准备之后，使用同一只大鼠12，对于组成不同的多种药液中的每一种、或者对于多种施予条件中的每一种，分别进行以下说明的穿刺步骤、施予步骤及测定步骤。即，以某种药液组成或某种施予条件进行穿刺步骤、施予步骤及测定步骤之后，使用同一只大鼠12以另一种药液组成或另一种施予条件而重复进行穿刺步骤、施予步骤及测定步骤。
在穿刺步骤中，在被麻醉的大鼠12的足底皮下12a处穿刺注射针18。在此情况下，将注射针18尖端部分设置的刃面整体刺入足底皮下12a即为穿刺完成。如上所述地将注射针18穿刺至大鼠12中时，产生由穿刺引起的肌电反应。
在穿刺步骤之后继续进行的施予步骤中，在由注射针18的穿刺引起的肌电反应消失之后，经由注射针18向被麻醉的大鼠12施予药液。在此情况下，注射器泵20以预先设定的施予速度及施予量为基准而将注射器14的柱塞14a推入，由此，以所设定的施予速度及施予量向大鼠12的足底皮下12a中注入药液。
需要说明的是，在各施予步骤中，在每一个位置的施予量为100μL以下的情况下，相邻的施予位置(穿刺位置)彼此之间的间隔优选留设为2mm以上。由此，在获得由药液施予引起的肌电反应的过程中，避免了由于相邻的施予位置造成的影响，能以高精度进行测定。
在对组成不同的多种药液进行试验的情况下，使各施予步骤中的药液施予速度及施予量相同。另外，对组成相同的药液进行多种施予条件下的试验的情况下，在各施予步骤中改变药液施予速度和施予量中的一者或两者，进行药液的施予。
考虑到大鼠12的足底尺寸，多个施予位置中的每一个位置的施予量优选为10～100μL。另外，对大鼠12的多个施予位置的总施予量优选为200μL以下。例如，对于施予量和施予位置数的组合而言，可举出：20μL×8个位置(＝160μL)、50μL×4个位置(＝200μL)、100μL×2个位置(200μL)等。另外，药液的施予速度例如为5～100μL/秒。
需要说明的是，若仅在穿刺步骤中产生了由穿刺引起的肌电反应的情况下施予药液，则能够避免药液施予的浪费。即，在尽管进行了穿刺也未观察到肌电反应的情况下，可以改在其他位置进行穿刺，由此事先防止对不产生肌电反应的位置施予药液。
利用测定电极24检测伴随注射(穿刺及药液施予)而在大鼠12的半腱肌12b处产生的肌电位，通过高灵敏度生物电放大器28进行放大后，发送至数据收集装置30。通过数据收集装置30而由肌电位数据生成肌电位波形。所生成的肌电位波形显示于个人电脑32的监测画面32a中。
图2示出得到的肌电位波形的一个例子。在图2中，T1为穿刺注射针18的时间点，可观察到由穿刺引起的肌电反应(R1)。另外，T2为开始向大鼠12施予药液的时间点，可观察到由药液施予引起的肌电反应(R2)。
如前文所述，本发明中，由于在由注射针18的穿刺引起的肌电反应消失之后，经由注射针18向被麻醉的大鼠12施予药液，因此，由穿刺引起的肌电反应和由药液施予引起的肌电反应在时间上不会重合。即，能够将由药液施予引起的肌电反应与由穿刺引起的肌电反应相区分地进行测定。
得到这样的肌电位波形后，为了对由药液施予引起的疼痛进行评价(定量化)，进行测定步骤。在测定步骤中进行下述测定中的至少一项：由药液施予引起的肌电反应的持续时间T的测定；及对由药液施予引起的肌电反应产生起直至消失为止的肌电位的绝对值进行积分而得到的积分值S、即EMG强度(μV.s)的测定。积分值S是对肌电反应的持续时间T的期间内的肌电位进行整流、积分而得到的肌电位波形的面积。由药液施予引起的肌电反应的持续时间T和积分值S可以通过个人电脑32进行计算，也可以在监测画面32a中显示由数据收集装置30计算得到的值。
如上文所述，根据本发明的方法，在由注射针18的穿刺引起的肌电反应消失之后向大鼠12施予药液、并测定由药液施予引起的肌电反应，因此，由穿刺引起的肌电反应和由药液施予引起的肌电反应在肌电图(EMG)上不会重合。由此，能够与由穿刺引起的疼痛相区分，而对由药液施予引起的疼痛进行评价(定量化)。在此情况下，若在由穿刺引起的肌电反应消失起经过1秒以上(更优选10秒以上)之后开始药液的施予，则能够与由穿刺引起的肌电反应相区分，而更有效地测定由药液施予引起的肌电反应。
如上文所述，对于组成不同的多种药液中的每一种、或者对于多种施予条件中的每一种进行穿刺步骤、施予步骤及测定步骤，接下来，确定组成不同的多种药液中的、持续时间T最短或积分值S最小的药液组成，或者确定多种施予条件中的、持续时间T最短或积分值S最小的施予条件(确定步骤)。由此能够选定疼痛轻的药液组成或施予条件。
这里，图3A是示出向大鼠注射组成不同的多种药液的情况下由各药液的施予引起的肌电反应的持续时间的图表。图3B是示出向大鼠注射组成不同的多种药液的情况下从由各药液的施予引起的肌电反应得到的EMG强度的图表。从图3A及图3B可知，在大鼠中，根据药液组成的不同，肌电反应的持续时间及EMG强度是不同的，即由药液施予引起的疼痛存在差别。
图4A是示出以多种不同的施予量向人注射生理盐水的情况下引起的疼痛程度(VAS：视觉模拟量表(Visual Analog Scale))的图表(下部示出文献来源)。VAS是表示将最大值设定为10时当前的疼痛为何种程度的评价量表。图4B为示出以多种不同的施予量向大鼠注射生理盐水的情况下从由注射液引起的肌电反应得到的EMG强度的图表。由图4A及图4B可知，随着施予量的增加，对于人和大鼠而言均同样存在疼痛加重的趋势。
图5A是示出以多种不同的pH值向人注射的情况下引起的疼痛程度(VAS)的图表(下部示出文献来源)。图5B是示出以多种不同的pH值向大鼠注射的情况下从由注射液引起的肌电反应得到的EMG强度的图表。由图5A及图5B可知，随着pH值的降低，对于人和大鼠而言均同样存在疼痛加重的趋势。
图6A是示出向人注射5％NaCl的情况下引起的疼痛程度(VAS)随时间变化的图表(下部示出文献来源)。由图6A可知，若向人注射5％NaCl，则会产生严重的疼痛。另一方面，图6B是示出以多种不同的浓度向大鼠注射NaCl的情况下从由注射液引起的肌电反应得到的EMG强度的图表。由图6B可知，在大鼠中，NaCl浓度为5％以上时疼痛显著加重。因此，由图6A及图6B可知，关于由NaCl浓度引起的疼痛，人和大鼠显示出了同样的趋势。
图7A为示出以多种不同的摩尔浓度向人注射谷氨酸的情况下引起的疼痛程度(VAS)的图表。需要说明的是，图7A是基于该图下部所示的文献来源中的图表而作成的图表。图7B是示出以多种不同的摩尔浓度向大鼠注射谷氨酸的情况下从由注射液引起的肌电反应得到的EMG强度的图表。由图7A及图7B可知，随着谷氨酸的摩尔浓度的增高，对于人和大鼠而言均同样存在疼痛加重的趋势。
由上述内容可知，人感受到的疼痛程度与使用大鼠进行肌电反应的测定结果显示出了同样的趋势。另外，认为在大鼠以外的哺乳类的情况下也显示出与大鼠同样的趋势。因此，本发明的方法能够适用于人用药液及施予方法的开发。
图8A是示出将聚乙二醇·生理盐水混合液以多种不同粘度向大鼠注射的情况下由注射液引起的肌电反应的持续时间的图表。图8B是示出将聚乙二醇·生理盐水混合液以多种不同粘度向大鼠注射的情况下从由注射液引起的肌电反应得到的EMG强度的图表。由图8A及图8B可知，注射液粘度的不同会使疼痛程度发生变化。
图9A是示出以多种不同的施予速度向大鼠注射磷酸缓冲生理盐水(pH5)的情况下从由注射液引起的肌电反应得到的EMG强度的图表。图9B是示出以多种不同的施予速度向大鼠注射10％NaCl的情况下从由注射液引起的肌电反应得到的EMG强度的图表。由图9A及图9B可知，根据注射液的组成，注射液施予速度的不同会使疼痛程度发生变化。
接下来，针对使用大鼠12进行的对由药液施予引起的疼痛的评价，说明具体的实施例。本实施例中，如下文所述，制备组成不同的样品1～3的药液(用于治疗炎症性自身免疫疾病的注射用水性制剂)。
(样品1)
将0.71g磷酸氢二钠(无水)溶解于50mL注射用水中。将0.60g磷酸二氢钠(无水)溶解于50mL注射用水中。以磷酸氢二钠溶液：磷酸二氢钠溶液＝87∶13的容量比进行混合，用注射用水将该混合液稀释10倍，制成10mM磷酸缓冲液。将125mg甲氨蝶呤、27mg氯化钠溶解于5mL的10mM磷酸缓冲液中，用适量的氢氧化钠将pH调节至7.5左右，得到浓度为25mg/mL的甲氨蝶呤水溶液。用孔径为0.2μm的膜过滤器对该水溶液进行过滤，制备用于治疗炎症性自身免疫疾病的注射用水性制剂。
(样品2)
除了改变样品1中氢氧化钠的添加量之外，按与样品1同样的操作而制备pH为8.0的含有甲氨蝶呤的注射用水性制剂。
(样品3)
除了改变样品1中氢氧化钠的添加量之外，按与样品1同样的操作而制备pH为8.5的含有甲氨蝶呤的注射用水性制剂。
使用图1所示的测定系统10，测定向大鼠12施予样品1～3的含有甲氨蝶呤的注射用水性制剂时的肌电图(EMG)。
具体而言，用浓度为3％/空气的异氟烷将大鼠12麻醉，露出半腱肌12b。将麻醉降低至1.5％/空气左右，在脚趾尖端安装夹式刺激电极34。实施电刺激(40Hz、10mA、2ms)，在观察到收缩的位置中插入测定电极24。将电刺激强度降低至5mA，降低麻醉浓度(1～1.4％/空气)，直至得到100μV左右的反应为止。自变更麻醉浓度起使之稳定30分钟以上，向大鼠12施予药液。
在向大鼠12施予药液的过程中，将1mL注射器14安装于注射器泵20，在足底皮下12a处穿刺29G注射针18，以10μL/秒的施予速度施予20μL。在相同施予条件下向大鼠12依次施予样品1～3。EMG强度的测定结果如图10所示。
由图10可知，在不同组成的样品1～3中，样品1的由药液施予产生的EMG强度最小。即，可知样品1的由药液施予引起的疼痛是最轻的。因此，本实施例中，作为疼痛轻的用于治疗炎症性自身免疫疾病的注射用水性制剂，选定了样品1的药液组成。
上文中，针对本发明而列举说明了优选的实施方式，但本发明不限于上述实施方式，在不脱离本发明的主旨的范围内，当然可进行各种改变。

Claims (12)

1.对由药液施予引起的疼痛进行评价的方法，其特征在于，
准备具有身体的规定部位、及在对所述规定部位施以刺激时由于脊髓反射而发生弯曲的骨骼肌的哺乳类实验动物；
通过吸入麻醉而将所述实验动物麻醉；
向被麻醉的所述实验动物的所述骨骼肌中插入测定电极(24)；
在用所述测定电极(24)测定所述骨骼肌的肌电位的同时，向被麻醉的所述实验动物的所述规定部位穿刺注射针(18)；
在由所述注射针(18)的穿刺引起的肌电反应消失之后，经由所述注射针(18)向被麻醉的所述实验动物施予药液；
进行下述测定中的至少一项：由所述药液的施予引起的肌电反应的持续时间的测定、及对由所述药液的施予引起的所述肌电反应产生起直至消失为止的所述肌电位的绝对值进行积分而得到的EMG强度的测定。
2.如权利要求1所述的对由药液施予引起的疼痛进行评价的方法，其特征在于，
在所述实验动物的所述规定部位的多个施予位置，将组成不同的多种所述药液以相同的施予条件进行施予，或者将组成相同的所述药液以不同的施予条件进行施予。
3.如权利要求2所述的对由药液施予引起的疼痛进行评价的方法，其特征在于，
所述实验动物为大鼠(12)。
4.如权利要求3所述的对由药液施予引起的疼痛进行评价的方法，其特征在于，
所述规定部位为足底皮下(12a)，所述骨骼肌为半腱肌(12b)。
5.如权利要求3或4所述的对由药液施予引起的疼痛进行评价的方法，其特征在于，
所述多个施予位置中的每一个位置的施予量为10～100μL。
6.如权利要求5所述的对由药液施予引起的疼痛进行评价的方法，其特征在于，
将相邻的所述施予位置彼此的间隔留设为2mm以上。
7.如权利要求3～6中任一项所述的对由药液施予引起的疼痛进行评价的方法，其特征在于，
所述多个施予位置的总施予量为200μL以下。
8.如权利要求3～7中任一项所述的对由药液施予引起的疼痛进行评价的方法，其特征在于，
所述药液的施予速度为5～100μL/秒。
9.如权利要求1～8中任一项所述的对由药液施予引起的疼痛进行评价的方法，其特征在于，
在由所述穿刺引起的所述肌电反应消失起经过1秒以上之后，开始施予所述药液。
10.如权利要求1～9中任一项所述的对由药液施予引起的疼痛进行评价的方法，其特征在于，
仅在产生了由所述穿刺引起的所述肌电反应的情况下施予所述药液。
11.如权利要求1～10中任一项所述的对由药液施予引起的疼痛进行评价的方法，其特征在于，
使用双性电极作为所述测定电极(24)，在所述实验动物的胸部皮肤(12c)上贴附标准电极(26)。
12.药液施予的选定方法，其特征在于，包括下述步骤：
准备步骤，准备具有身体的规定部位、及在对所述规定部位施以刺激时由于脊髓反射而发生弯曲的骨骼肌的哺乳类实验动物；
麻醉步骤，通过吸入麻醉而将所述实验动物麻醉；
测定电极留置步骤，将测定电极(24)留置于被麻醉的所述实验动物的所述骨骼肌中；
穿刺步骤，在用所述测定电极(24)测定所述骨骼肌的肌电位的同时，向被麻醉的所述实验动物的所述规定部位穿刺注射针(18)；
施予步骤，在由所述注射针(18)的穿刺引起的肌电反应消失之后，经由所述注射针(18)向被麻醉的所述实验动物施予药液；及
测定步骤，进行下述测定中的至少一项：对由所述药液的施予引起的肌电反应产生起直至消失为止的所述肌电位的绝对值进行积分而得到的EMG强度的测定、及由所述药液的施予引起的所述肌电反应的持续时间的测定，
所述选定方法中，对于组成不同的多种药液中的每一种、或者对于多种施予条件中的每一种，分别进行所述穿刺步骤、所述施予步骤及所述测定步骤，
所述选定方法还包括确定步骤，所述确定步骤中，确定组成不同的所述多种药液中的、所述持续时间最短或所述EMG强度最小的药液组成，或者确定所述多种施予条件中的、所述持续时间最短或所述EMG强度最小的施予条件。
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