CN108715794B - 一种细胞精确操控微流控器件 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种细胞精确操控微流控器件,包括依次连接的入口端、微流控器件主体和出口端,所述微流控器件主体包括异型截面空间螺旋流道,异型截面空间螺旋流道两端分别连通入口端和出口端。所述异型截面空间螺旋流道的横截面为等腰三角形或半圆形,异型截面空间螺旋流道为从上到下的螺旋结构,螺旋结构的曲率半径相同。所述入口端包括依次连接的样品入口、第一储液池、样品引入流道和连接流道,连接流道连通到异型截面空间螺旋流道。
Description
技术领域
本发明涉及微流控装置领域,特别是一种细胞精确操控微流控器件。
背景技术
因具有综合成本低、检测装置微型化和诊断结果即时化等独特优势,现场即时检测(Point-of-Care Testing,POCT)在完善资源匮乏地区医疗建设、应对突发事故灾害和推动家庭护理诊断等领域具有广阔的应用前景。研制便携式的POCT仪器,已经成为生命科学领域和技术科学领域的一个新兴交叉研究热点。依托于先进的微结构加工工艺,微流控技术(Microfluidics)将生命科学研究中所涉及的进样、预处理和分析表征等实验过程集成在一块几平方厘米的芯片上,是开发新一代POCT仪器的主流技术。要突破微流控芯片、单分子检测等关键技术开发体外诊断产品。
作为核心功能单元,样品预处理的效率将直接影响整个POCT仪器的功能实现和性能指标。因此,开发一种能够实现样品中检测对象(微纳米生物粒子)高效操控的微流控技术,已经成为一项极为关键的基础研究课题。惯性微流控技术(Inertial Microfluidics)作为一种新近出现的微纳米生物粒子操控方法,巧妙利用微尺度流体的惯性效应(惯性迁移和截面Dean流)实现粒子运动状态和平衡位置的精确控制,具有所需流道结构简单、无需借助外场及处理通量高等显著优势,是微纳米生物粒子聚焦、分选及混合等操控功能实现的一项重要使能技术。
然而,综合分析最具商业应用价值的螺旋流道惯性微流控技术最新研究进展发现,受限于当前研究在流道结构和加工工艺等方面存在的缺陷,现阶段对生物细胞惯性操控机理的理解和应用仍不全面。具体而言,在流道结构设计方面,现有螺旋流道为具有矩形或梯形截面的平面结构,存在设计简单、加工方便等优点。例如,申请号为CN201310410606.8的中国发明专利申请公开了一种稀有细胞多级分选微流控器件,提出一种横截面为矩形或梯形(外侧高、内侧低)的平面螺旋流道。然而,在矩形或梯形截面螺旋流道中,截面Dean涡流在流道上下两侧对称分布,造成粒子在垂直方向上存在多个平衡位置,无法形成真正的单列聚焦排列。另外,沿阿基米德螺旋线的平面延伸形式造成螺旋流道具有变曲率特性,这使得流体中粒子所受惯性升力和Dean曳力的变化极其复杂,不利于粒子惯性迁移行为的预测和调控。
发明内容
发明目的:本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足,提供一种细胞精确操控微流控器件。
为了解决上述技术问题,本发明提供了一种细胞精确操控微流控器件,包括依次连接的入口端、微流控器件主体和出口端,所述微流控器件主体包括异型截面空间螺旋流道,异型截面空间螺旋流道两端分别连通入口端和出口端。
本发明中,所述入口端包括依次连接的样品入口、第一储液池、样品引入流道和连接流道,连接流道连通到异型截面空间螺旋流道。
本发明中,所述出口端包括样品内出口和样品外出口,所述样品内出口底部依次设有连通的第二储液池和内出口流道,所述样品外出口底部依次设有连通的第三储液池和外出口流道,所述内出口流道和外出口流道共同连通样品引出流道,异型截面空间螺旋流道与样品引出流道连通。本发明中,所述异型截面空间螺旋流道为从上到下的螺旋结构,螺旋结构的曲率半径相同。
本发明中,所述异型截面空间螺旋流道的横截面为等腰三角形或半圆形或半椭圆。本发明中,所述样品引入流道、样品引出流道、内出口流道和外出口流道设置在同一平面。
本发明中,所述样品入口上设有入口鲁尔接头,所述样品内出口上设有内出口鲁尔接头,所述样品外出口上设有外出口鲁尔接头。
本发明中,所述入口鲁尔接头、微流控器件主体、内出口鲁尔接头和外出口鲁尔接头的材质均为透明光敏树脂或聚二甲基硅氧烷。
突破矩形截面平面流道的常规设计,提出一种具有异型截面的空间螺旋微流道。采用三角形或半圆形等异型截面形状,在弯流道的截面上引入非对称Dean涡流作用。弯流道以相同曲率沿垂直方向盘旋延伸形成空间螺旋结构,保证了稳定的Dean耦合惯性流作用从而有效简化细胞惯性聚焦行为的分析与调控过程。有限雷诺数情况下,细胞在异型截面空间螺旋流道内沿主流动方向运动时,将受到横向惯性升力和Dean曳力的共同作用而形成单一平衡位置的聚焦。由于细胞所受惯性升力和Dean曳力的大小均与细胞直径密切相关,因此不同尺寸的细胞在流经异型截面空间螺旋流道后将聚焦在各自的平衡位置上,通过设置合理的分叉流道即可实现不同种类细胞的连续、高效分选。
有益效果:提出的异型截面空间螺旋流道微流控器件具有紧凑的空间布局和新型的Dean耦合惯性流效用,能够在无需鞘液流作用的情况下,实现细胞的单一平衡位置聚焦,具有操作简单、高精度和高通量等优点,可广泛用于生物细胞的聚焦、分选和富集等预处理功能应用。
附图说明
下面结合附图和具体实施方式对本发明做更进一步的具体说明,本发明的上述或其他方面的优点将会变得更加清楚。
图1为本发明微流控器件的组成和结构示意图;
图2为本发明空间微流道的组成和结构示意图;
图3为本发明三角形截面空间螺旋流道内细胞惯性聚焦的原理示意图;
图4为本发明半圆形截面空间螺旋流道内细胞惯性聚焦的原理示意图;
图5为本发明微流道入口处和出口处的细胞分布示意图;
具体实施方式
下面将结合附图对本发明作详细说明。
图1-图5中:11、入口鲁尔接头,12、微流控器件主体,13、空间微流道,14、内出口鲁尔接头,15、外出口鲁尔接头,211、样品入口,212、样品内出口,213、样品外出口,22a、第一储液池,22b、第二储液池,22c、第三储液池,23、样品引入流道,24、连接流道,25、异型截面空间螺旋流道,26、样品引出流道,27、内出口流道,28、外出口流道,31、直流道,32、细胞,331、壁面诱导惯性升力,332、剪切诱导惯性升力,333、Dean曳力,34、弯流道,35、弯流道内壁面,36、弯流道外壁面,37、不对称Dean流,38、不稳定细胞,51、癌细胞,52、白细胞。
一种细胞精确操控微流控器件,如图1所示,包括入口鲁尔接头11、微流控器件主体12、空间微流道13、内出口鲁尔接头14和外出口鲁尔接头15。其中,入口鲁尔接头11通过微管与注射器等样品进样装置连接,内出口鲁尔接头14和外出口鲁尔接头15通过微管与样品收集装置连接。设置内出口鲁尔接头14和外出口鲁尔接头15的目的是为了进行细胞分选应用。采用标准鲁尔接头的设计,保障了微流控器件与样品进样装置、样品收集装置的可靠连接,使微流控器件具有良好的扩展性。在空间微流道13周围包裹薄层透明光敏树脂或聚二甲基硅氧烷形成微流控器件主体12,即空间微流道13位于微流控器件主体12内部,有效降低了成型材料耗损以及便于对空间螺旋微流道内细胞运动行为进行观测表征。
如图2所示,空间微流道13的结构示意图,空间微流道13包括样品入口211、样品内出口212、样品外出口213、第一储液池22a、第二储液池22b、第三储液池22c、样品引入流道23、连接流道24、异型截面空间螺旋流道25、样品引出流道26、内出口流道27和外出口流道28。样品引入流道23一端通过第一储液池22a与样品入口211连接,另一端与连接流道24连接。异型截面空间螺旋流道25一端与连接流道24连接,另一端与样品引出流道26连接。内出口流道27一端与样品引出流道26连接,另一端通过第二储液池22b与样品内出口212连接。外出口流道28一端与样品引出流道26连接,另一端通过第三储液池22c与样品外出口213连接。考虑整个微流控器件的结构稳定性以及便于进行加工成型,将样品引入流道23、样品引出流道26、内出口流道27和外出口流道28设置在同一平面,即微流控器件的底部。通过引入一个竖直的连接流道24将样品入口流道23与异型截面空间螺旋流道25的顶层入口连接,即细胞样品沿螺旋流道从上向下盘旋前行。
所述异型截面空间螺旋流道25的横截面为等腰三角形或半圆形,样品引入流道23、连接流道24、样品引出流道26、内出口流道27和外出口流道28的截面为矩形或等腰三角形或半圆形。
本装置中,能够引进不对称的Dean流的半椭圆横截面也可以。
所述异型截面空间螺旋流道25沿垂直方向延伸,具有相同的曲率半径,保证了Dean涡流作用的持续性和稳定性。
所述异型截面空间螺旋流道25的横截面尺寸与细胞的尺寸关系为:ap/Lc≥0.07,其中,ap为细胞的直径,Lc为异型截面空间螺旋流道25的特征尺寸。
所述入口鲁尔接头11、微流控器件主体12、内出口鲁尔接头14和外出口鲁尔接头15的材质相同,均为透明光敏树脂或聚二甲基硅氧烷。
如图3所示,下面以具有三角形截面的空间螺旋流道为例来阐述细胞精确操控微流控器件的工作原理。
在有限雷诺数的牛顿流体中,细胞32在异型截面空间螺旋流道25内的侧向聚焦是直流道31内惯性迁移效应和弯流道34内Dean流作用的耦合结果。当流体在微尺度直流道31中呈层流流动时(即泊肃叶流),抛物线型流速分布的剪切力梯度将在细胞32上诱导产生一个指向流道壁面的力,称为剪切诱导惯性升力332。当细胞32横向迁移运动至流道壁面附近时,细胞32自旋产生的对称尾迹将受到流道壁的影响而在细胞32上诱导产生一个指向流道轴心的力,称为壁面诱导惯性升力331。在具有三角形截面的直流道31中,细胞32稳定聚焦在三角形每条边的中心附近,壁面诱导惯性升力331和剪切诱导惯性升力332两者大小相等、方向相反。而当呈抛物线型流动的流体进入弯流道34时,流道中心处的流体因速度最高而受到最强的离心力作用,离心力的不平衡导致流道中心附近的流体横向向外流动。为满足封闭流道内的质量守恒定理,靠近弯流道外壁面36的流体将从流道上下两侧回流,在垂直主流动方向的截面上产生两个方向相反的不对称Dean流37。弯流道34中不对称Dean流37的引入,对流体中的细胞32施加一个额外的横向Dean曳力333,使不稳定细胞38最终稳定在靠近弯流道内壁面35附近的单一平衡位置上。
如图4所示,具有半圆形截面的空间螺旋流道内细胞惯性聚焦原理与具有三角形截面的空间螺旋流道相似。有限雷诺数的牛顿流体中,细胞32在具有半圆形截面的直流道31内运动时,将受到壁面诱导惯性升力331和剪切诱导惯性升力332的共同作用而稳定聚焦在流道底边中心附近和流道中心附近。而在具有半圆形截面的弯流道34内,细胞32将受到额外的不对称Dean流37作用,使不稳定细胞38最终稳定在靠近弯流道内壁面35附近的单一平衡位置上。
在常规的矩形截面平面螺旋流道中,细胞所受的惯性升力和Dean曳力具有严格的上下对称性,因此细胞在垂直方向上存在多个平衡位置,无法实现真正的单列聚焦排列。另外,沿阿基米德螺旋线的平面延伸形式造成平面螺旋流道具有变曲率特性,这使得流体中细胞所受惯性升力和Dean曳力的变化极其复杂,不利于细胞惯性迁移行为的预测和调控。
进一步,以人体白细胞和人体乳腺癌细胞MCF-7的分离为例来阐述细胞精确操控微流控器件在细胞分选方面的应用。将人体全血样品进行红细胞裂解后配制白细胞PBS悬浮液,对培养的MCF-7细胞依次进行消化、离心和重悬等操作后配制癌细胞PBS悬浮液。将上述两种悬浮液按一定比例进行混合,用于模拟全血中循环肿瘤细胞体系。
如图5所示,当以特定流速将混合细胞悬浮液注入微流控器件的样品入口211时,癌细胞51和白细胞52在样品引入流道23中随机分布。当细胞流经连接流道24进入异型截面空间螺旋流道25内运动时,将受到稳定的横向惯性升力,即壁面诱导惯性升力331和剪切诱导惯性升力332和Dean曳力333的共同作用而最终稳定在靠近弯流道内壁面35附近的单一平衡位置上。Dean曳力333的大小与细胞直径成正比,而惯性升力的大小则与细胞直径的4次方成正比,因此较小尺寸的白细胞52的平衡位置更易受到Dean流的影响而向弯流道内壁面35处偏移,而较大尺寸的癌细胞51的平衡位置则相对稳定在靠近流道的中心附近。当聚焦在各自平衡位置上的癌细胞51和白细胞52离开异型截面空间螺旋流道25进入样品引出流道26时,癌细胞51和白细胞52将分别流经外出口流道27和内出口流道28进入样品收集装置,从而有效实现了不同尺寸细胞的连续、高通量分离。
与常规的矩形截面平面螺旋流道相比,本发明采用的微流道具有三角形等异型截面形状,并沿垂直方向盘旋延伸形成空间螺旋结构,具有紧凑的空间布局和全新的Dean耦合惯性流作用模式,在未采用鞘液夹流的情况下实现细胞的单一平衡位置精确聚焦,极大丰富了细胞惯性操控的有效手段和方法,有望在微流式细胞仪和稀有细胞分选提取等领域得到广泛使用。
本发明提供了一种细胞精确操控微流控器件,具体实现该技术方案的方法和途径很多,以上所述仅是本发明的优选实施方式,应当指出,对于本技术领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明原理的前提下,还可以做出若干改进和润饰,这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。本实施例中未明确的各组成部分均可用现有技术加以实现。
Claims (1)
1.一种细胞精确操控微流控器件,其特征在于,包括依次连接的入口端、微流控器件主体和出口端,所述微流控器件主体包括异型截面空间螺旋流道,异型截面空间螺旋流道两端分别连通入口端和出口端;
所述入口端包括依次连接的样品入口(211)、第一储液池(22a)、样品引入流道(23)和连接流道(24),连接流道(24)连通到异型截面空间螺旋流道(25);
所述出口端包括样品内出口(212)和样品外出口(213),所述样品内出口(212)底部依次设有连通的第二储液池(22b)和内出口流道(27),所述样品外出口(213)底部依次设有连通的第三储液池(22c)和外出口流道(28),所述内出口流道和外出口流道共同连通样品引出流道(26),异型截面空间螺旋流道与样品引出流道(26)连通;
所述异型截面空间螺旋流道(25)为从上到下的螺旋结构,螺旋结构的曲率半径相同;
所述异型截面空间螺旋流道(25)的横截面为等腰三角形或半圆形或半椭圆;
所述样品引入流道(23)、样品引出流道(26)、内出口流道(27)和外出口流道(28)设置在同一平面;
所述样品入口(211)上设有入口鲁尔接头(11),所述样品内出口(212)上设有内出口鲁尔接头(14),所述样品外出口(213)上设有外出口鲁尔接头(15);
所述入口鲁尔接头(11)、微流控器件主体(12)、内出口鲁尔接头(14)和外出口鲁尔接头(15)的材质均为透明光敏树脂或聚二甲基硅氧烷。
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