CN108645820A - 一种纸基测定血液中血红蛋白浓度的方法 - Google Patents

一种纸基测定血液中血红蛋白浓度的方法 Download PDF

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Abstract

一种纸基测定血液中血红蛋白浓度的方法，其方法是：1、材料，纸基Hb检测膜，文齐氏液标准试剂，试剂管，纸基Hb检测卡；2、检验原理，可通过反射光光度法测定纸基表面颜色的反射强度，计算出Hb浓度；3、纸基血红蛋白检测卡；4、检测过程，（1）取500μL 20倍蒸馏水稀释的文齐氏液；（2）取全血10.0μL，加入到含文齐氏液的试剂管（3）中，反应5分钟；（3）取试剂管显色液体30.0μL，滴加到纸基Hb检测膜（1）上，通过反射光光度法测定纸基Hb检测卡（2）上纸基Hb检测膜（1）表面颜色的反射强度；计算出Hb浓度。有益效果是：具有标本用量少，响应速率快、操作简便、系统体积小、易于携带的特点。为基层医疗单位提供简单，低成本的Hb测定方法。

Description

一种纸基测定血液中血红蛋白浓度的方法
技术领域
本发明属于医学、食品、生化检测技术领域。
背景技术
血红蛋白(Hemoglobin，Hb)是红细胞内含有的运输氧的蛋白质，在人体内的血液循环系统中几乎所有的氧均是通过Hb进行运输的，Hb浓度是血液携氧能力的指标。正常成年人血液中的Hb浓度女性110-150克/升，男性为120-160克/升。急、慢性失血、红细胞生成减少或红细胞异常破坏(溶血)导致血液中血红蛋白浓度下降而引起贫血。溶血性贫血可能与遗传性血液疾病(如镰状细胞病)有关，但也可能是由于接触某些药物，毒素，感染或输入不匹配的血液制品而引起的自身免疫性疾病。其他常见的贫血包括肝硬化和肾脏疾病,饮食摄入不足，缺乏铁、叶酸和维生素等原因。贫血降低了血液的携氧能力，导致心肺系统乏氧，心肺系统通过增加心率和每搏输出量来保持氧气输送，这可能会导致严重的并发症，如心绞痛，充血性心力衰竭，心脏病发作和中风。真性红细胞增多症、先天性心脏病、严重慢性阻塞性肺病、或严重脱水等疾病可导致血液粘度增加，通过减少毛细血管灌注而引起血氧分压减低，有血栓性和出血性并发症的风险。此外，Hb浓度还与妊娠期间胎儿死亡、机体免疫功能等密切相关。
由于Hb浓度在临床上的重要性，因此，将其作为临床诊断的常规检测项目。目前，临床实验室大多使用自动血液分析仪或分光光度计、血气分析仪和血氧分析仪来测量Hb浓度。由于临床对Hb进行快速和准确测量的需求推动了即时检验(point of care testing,POCT)Hb测试平台的开发和实施目前可用的POCT设备可在患者身边操作进行测定，并提供相对准确的结果(实验室分析仪±10g/L)，具有用血量少，可供未经培训的人员使用，完成测量时间短，可在手术室或特殊条件下完成Hb测定的功能。
目前可用的POCT设备有明显的优点，但对于我国大多基层医疗单位和特殊环境地区(山区、海岛、边境、舰船、军队小独立单位等)及其他低收入发展中国家、地区而言，使用传统的POCT设备每次测定Hb成本和分析仪的成本相对较高。包括世界卫生组织血红蛋白色度测试(WHO hemoglobin color scale，HbCS)项目在内的低成本替代方法存在一些现场使用的缺点，HbCS测定对环境照明条件要求较高，对操作偏差以及偏离推荐读数时间非常敏感，影响Hb测定的准确性。
发明内容
本发明的目的是：提供一种纸基测定血液中血红蛋白浓度的方法，它利用Hb与文齐氏液反应形成颜色的原理，通过将显色溶液转移到专用纸表面，形成纸基Hb显色膜，并制作成纸基Hb检测卡。当加入的液体中含有Hb时，可在白色纸面形成颜色溶液，颜色的深浅与Hb成正比。通过检测纸基Hb检测卡上反射光强度，计算出Hb浓度。
本发明的技术方案是：
纸基Hb检测方法
1、材料
纸基Hb检测膜：由厚度1.0mm白色滤纸构成；
文齐氏液标准试剂；
试剂管：由1.0ml离心管构成；
纸基Hb检测卡：由上、下两层组成。
2、检验原理
文齐氏液是国际卫生组织(WTO)推荐的测定Hb试剂，当血液与文齐氏液混合时，试剂将Hb两价铁氧化为三价铁，再与氰化物结合形成稳定的棕红色氰化高铁血红蛋白，溶液在540nm波长有最大吸收峰，颜色与Hb浓度成比例关系，可通过反射光光度法测定纸基表面颜色的反射强度，计算出Hb浓度。
3、纸基血红蛋白检测卡
纸基Hb检测膜(1)(图1)是由纸基Hb检测卡(2)(图2)固定的；纸基Hb检测卡(2)为正方形，由上、下两层组成，上层(2-1)中心有一圆形口(2-1-1)，是观察纸基Hb检测膜(1)颜色变化的部位；下层(2-2)是纸基Hb检测膜(1)的固定部分。
将纸基Hb检测膜(1)剪切成8×8mm的方型片，置于纸基Hb检测卡下层(2-2)，使白色纸面(1)暴露于上层圆形口(2-1-1)；膜片检测卡上、下两层紧密结合后，完成纸基Hb检测卡(2)的制作(图3)。
4、检测过程
(1)取500μL 20倍蒸馏水稀释的文齐氏液，加入到试剂管(3)(图4)中；
(2)取全血10.0μL，加入到含文齐氏液的试剂管(3)(图5)中，反应5分钟；
(3)取试剂管显色液体(图5)30.0μL，滴加到纸基Hb检测膜(1)上，通过纸纤维的毛细扩散原理，样本均匀地分布到纸基Hb检测膜(1)中。样本中的Hb与文齐氏液反应在纸基Hb检测膜(1)上形成红色液体。通过反射光光度法测定纸基Hb检测卡(2)上纸基Hb检测膜(1)表面颜色的反射强度(图6)。计算出Hb浓度。
本发明的有益效果是：具有标本用量少(10μL血液)，响应速率快、操作简便、系统体积小、易于携带的特点。为基层医疗单位和特殊环境地区人群提供简单，低成本的Hb测定方法。
附图说明
图1是本专利纸基Hb检测膜示意图；
图2是本专利纸基Hb检测卡拆分结构示意图；
图3是本专利纸基Hb检测卡整体示意图；
图4是本专利含有文齐氏液试剂管示意图；
图5是本专利加入血液后文齐氏液试剂管示意图；
图6-1是本专利纸基Hb检测膜空白卡颜色示意图；
图6-2是本专利纸基Hb检测膜加样后反应颜色示意图；
图7是本专利两方法测定不同浓度Hb的相关性与线性图；其中X轴是纸基方法，Y轴是全自动血细胞分析仪方法。
具体实施方式
实施例1
下面结合附图对本发明做进一步描述：
如图所示，1是纸基Hb检测膜、2是测定纸基Hb检测卡、2-1是测定纸基Hb检测卡上层、2-1-1是测定纸基Hb检测卡上层圆形口、2-2是测定纸基Hb检测卡下层、3是试剂管。
1、样本
该研究方案经解放军208医院医学伦理委员会审查批准，获得书面知情同意书，在常规抽血期间(2017年5月至9月期间)，从解放军208医院门诊和住院患者常规採血中收集全血样品到1.0ml离心管中，4℃保存一周内使用。
2、参考标准
Hb测定采用WTO推荐的参考方法，使用迈瑞5600全自动血细胞分析仪及配套检测试剂。参考范围：成人男性120-160克/升；成年女性110-150克/升。
3、Hb测定
分别取40例浓度不同Hb的样本10μL，加入到含有500μL 20倍蒸馏水稀释的文齐氏液试剂管中，5分钟后，取试剂管显色液体30.0μL，滴加到纸基Hb检测卡的纸基Hb检测膜上，然后在BT-18A型反射光分析仪上测定纸基Hb检测膜上反射光强度，与在迈瑞5600全自动血细胞分析仪及配套检测试剂同样测定的结果进行比较，计算出纸基Hb检测膜测定中的Hb浓度。
4、统计分析
采用SPSS 19.0统计软件计算纸基Hb检测法和全自动血细胞分析仪测定法相关系数和直线回归，计量资料以表示，组间计量资料分析使用配对t检验，P<0.05表示差异有统计学意义。
5、两种测定方法比较
40例不同浓度Hb样本通过纸基Hb检测法与全自动血细胞分析仪检测法比较(图7)。使用纸基测定法和全自动血细胞分析仪法测得的Hb浓度值高度相关(R2＝0.9864)；两次测量之间的差的标准偏差为6.8g/L。同时也显示出良好的反应线性。配对t检验，P＞0.05，表明两方法测定结果差异不显著。

Claims (1)

1.一种纸基测定血液中血红蛋白浓度的方法，其方法是：
1、材料
纸基Hb检测膜，由厚度1.0mm白色滤纸构成；
文齐氏液标准试剂；
试剂管，由1.0ml离心管构成；
纸基Hb检测卡，由上、下两层组成；
2、检验原理
文齐氏液是国际卫生组织推荐的测定Hb试剂，当血液与文齐氏液混合时，试剂将Hb两价铁氧化为三价铁，再与氰化物结合形成稳定的棕红色氰化高铁血红蛋白，溶液在540nm波长有最大吸收峰，颜色与Hb浓度成比例关系，可通过反射光光度法测定纸基表面颜色的反射强度，计算出Hb浓度；
3、纸基血红蛋白检测卡
纸基Hb检测膜(1)是由纸基Hb检测卡(2)固定的；纸基Hb检测卡(2)为正方形，由上、下两层组成，上层(2-1)中心有一圆形口(2-1-1)，是观察纸基Hb检测膜(1)颜色变化的部位；下层(2-2)是纸基Hb检测膜(1)的固定部分；
将纸基Hb检测膜(1)剪切成8×8mm的方型片，置于纸基Hb检测卡下层(2-2)，使白色纸面(1)暴露于上层圆形口(2-1-1)；膜片检测卡上、下两层紧密结合后，完成纸基Hb检测卡(2)的制作；
4、检测过程
(1)取500μL 20倍蒸馏水稀释的文齐氏液，加入到试剂管(3)中；
(2)取全血10.0μL，加入到含文齐氏液的试剂管(3)中，反应5分钟；
(3)取试剂管显色液体30.0μL，滴加到纸基Hb检测膜(1)上，通过纸纤维的毛细扩散原理，样本均匀地分布到纸基Hb检测膜(1)中；样本中的Hb与文齐氏液反应在纸基Hb检测膜(1)上形成红色液体；通过反射光光度法测定纸基Hb检测卡(2)上纸基Hb检测膜(1)表面颜色的反射强度；计算出Hb浓度。
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