CN108623680A - 复合抗体提取物及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种复合抗体提取物及其制备方法和应用。该复合抗体提取物的制备过程包括如下步骤:制备面部致病菌的复合抗原,对鸡进行强化免疫并获取免疫鸡蛋,从免疫鸡蛋的蛋黄中分离纯化获取粗提物干粉,继续分离纯化得到含抗面部致病菌的复合抗体提取物。本发明制备的复合抗体提取物具有高稳定性能、抗体专一性强,同时安全性好,能够有效抵抗面部致病菌的侵扰,能够有效抗菌祛痘,减少痘痘复发。
Description
技术领域
本发明涉及化妆品领域,特别是涉及一种复合抗体提取物及其制备方法和应用。
背景技术
目前市场上名目繁多的化妆品品牌层出不穷,且各种不同功效的产品琳琅满目。其采用的原料绝大部分是化学物质,其严重的毒副作用和过敏反应造成化妆品的市场应用局限。
痘痘在医学术语中称为“痤疮”,是一种毛囊和皮脂腺的慢性炎症性皮肤病,加之面肤不洁,用手挤摸抠捏,细菌在皮肤深层攻窜肆虐,导致痘痘此起彼伏,面肤出现硬结、囊肿、窦道、红斑、疤痕等损害。目前,祛痘的产品大多采用抗生素类或激素类药物,长期使用容易造成依赖性、细菌耐药性、皮肤色素容易沉着、皮肤易萎缩等问题。
另外,人们生活的环境污染越来越严重,颜面部皮肤更易受各种致病菌的影响。寻求一种天然的、安全的、能很好达到清除致病菌同时不杀害有益菌的祛痘洁面效果的化妆品原料,无疑是广大爱美者的福音。
发明内容
基于此,有必要提供一种安全性高、特异性抗菌、痘痘复发率低的复合抗体提取物及其制备方法和应用。
一种复合抗体提取物的制备方法,包括如下步骤:
(1)制备含面部致病菌的复合抗原,所述面部致病菌包括痤疮丙酸杆菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、溶血性链球菌和白色念珠菌;
(2)采用所述复合抗原对鸡进行强化免疫,得到免疫鸡的免疫鸡蛋;
(3)对所述免疫鸡蛋的蛋黄分离纯化,获取粗提物干粉;
(4)将所述粗提物干粉依次通过离子交换柱层析和凝胶过滤层析分离纯化,获得含抗痤疮丙酸杆菌、抗金黄色葡萄球菌、抗绿脓杆菌、抗溶血性链球菌和抗白色念珠菌的复合抗体提取物。
在其中一个实施例中,在步骤(1)中,所述制备含面部致病菌的复合抗原包括如下步骤:分别将痤疮丙酸杆菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、溶血性链球菌和白色念珠菌在37℃条件下恒温培养,将培养得到的各面部致病菌灭活;将已灭活的痤疮丙酸杆菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、溶血性链球菌和白色念珠菌按照质量比20-35:15-20:10-15:20-25:10-15在pH6.0-7.0的0.1M PBS溶液中混合均匀,制得浓度为1.0-2.2mg/mL的菌体混合体溶液,按等体积比例加入弗氏佐剂至所述菌体混合溶液中,高速均质,即得所述复合抗原。
在其中一个实施例中,在步骤(1)中,所述面部致病菌还包括大肠杆菌;所述痤疮丙酸杆菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、溶血性链球菌、白色念珠菌和大肠杆菌按照质量比为20-35:15-20:10-15:20-25:10-15:10-20的比例混合;
对应地,在步骤(4)中,将所述粗提物干粉依次通过离子交换柱层析和凝胶过滤层析分离纯化,获得含抗痤疮丙酸杆菌、抗金黄色葡萄球菌、抗绿脓杆菌、抗溶血性链球菌、抗白色念珠菌和抗大肠杆菌的复合抗体提取物。
在其中一个实施例中,在步骤(3)中,所述获取粗提物干粉包括如下步骤:取所述免疫鸡蛋的蛋黄,按蛋黄总体积的3-8倍加入蒸馏水稀释,混匀,调节pH值为5.0-6.0,冷却至4℃,静置10-12h;高速离心15-25min,取上清液超滤并浓缩8-12倍,将质量浓度为12%-16%硫酸钠溶液加入浓缩液中,混匀,再高速离心,取上清液超滤膜过滤除菌,滤液冷冻干燥,即得粗提物干粉。
在其中一个实施例中,在步骤(4)中,所述离子交换柱层析分离纯化的条件为:采用弱碱性阴离子交换层析柱,采用的洗脱液为pH6.5-7.0的0.01M PBS缓冲液上样平衡,pH6.5-7.0的0.1M PBS缓冲液洗脱分离纯化;
所述凝胶过滤柱层析分离纯化的条件为:采用Sephadex G200层析柱,采用的洗脱液为pH6.5-7.0的0.1M PBS缓冲液。
上述复合抗体提取物的制备方法制备获得的复合抗体提取物。
上述复合抗体提取物在制备具有抗菌祛痘功效的护肤品中的应用。
一种抗菌爽肤水,所述爽肤水由以下质量百分比的原料组成:上述复合抗体提取物0.15%-0.3%、生育酚乙酸酯0.2%-1%、甘油2%-8%、三乙醇胺0.3%-2.5%、透明质酸0.02%-0.2%、海藻糖2%-5%、卵磷脂1%-5%、PEG-40氢化蓖麻油0.1%-0.25%、苯氧乙醇0.5%-1.0%、羟苯甲酯0.02%-0.2%、香精0.02%-1%及余量水。
一种抗菌凝胶睡眠面膜,所述凝胶睡眠面膜的面膜液由以下质量百分比的原料组成:上述复合抗体提取物0.15%-0.3%、生育酚乙酸酯0.2%-1%、甘油2%-8%、三乙醇胺0.3%-2.5%、透明质酸0.02%-0.2%、海藻糖2%-5%、胶原蛋白2%-8%、烟酰胺1.5%-2.5%、卡波姆1%-2%、PEG-40氢化蓖麻油0.1%-0.25%、苯氧乙醇0.5%-1.0%、羟苯甲酯0.02%-0.2%、香精0.02%-1%及余量水。
一种抗菌面膜泥,所述面膜泥由以下质量百分比的原料组成:上述复合抗体提取物0.15%-0.3%、生育酚乙酸酯0.2%-1%、甘油2%-8%、三乙醇胺0.3%-2.5%、透明质酸0.02%-0.2%、海藻糖2%-5%、高岭土2%-10%、聚乙烯醇0.25%-3%、棕榈酸乙基己酯1%-4%、鲸蜡硬脂醇1%-8%、甘油硬脂酸酯2%-5%、PEG-100硬脂酸酯2%-6%、丙二醇2%-4%、苯氧乙醇0.5%-1.0%、羟苯甲酯0.02%-0.2%、香精0.02%-1%及余量的水。
本发明的有益效果如下:
本发明提供的复合抗体提取物创造性地将痤疮丙酸杆菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、溶血性链球菌和白色念珠菌等至少五种面部致病菌以特定比例复配制成复合抗原,并对鸡进行免疫,从免疫鸡鸡蛋的蛋黄中提取分离得到至少含抗五种面部致病菌的抗体,并进一步经过离子交换层析和凝胶过滤层析分离纯化,纯度高。通过该制备方法制得的本发明的复合抗体提取物具有高稳定性能、抗体专一性强,同时不影响微生态环境的平衡,安全性好,能够有效抵抗面部致病菌的侵扰,减少痘痘复发。
本发明的复合抗体提取物来源于免疫母鸡的免疫鸡蛋,易于饲养,费用不高,鸡蛋收集方便,对鸡体无损伤,而且不受时间、地域和季节的限制,制备工艺简单可靠。
将本发明的含抗面部致病菌的复合抗体提取物与生育酚乙酸酯、甘油和三乙醇胺等复配制成的护肤品,通过协同配合作用,能够有效抵抗面部常见致病菌的干扰,同时具有祛痘清洁、无刺激、保湿及淡化痘印的效果。
附图说明
图1为实施例5制备的爽肤水的杀菌效果图;
图2为实施例6制备的爽肤水的杀菌效果图;
图3为实施例13制备的爽肤水的杀菌效果图;
图4为实施例14制备的爽肤水的杀菌效果图。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明作进一步详细地说明。
本发明所用的菌株是发明人从市面上购买的,所述菌种的保藏信息具体见下表1。
表1所用菌株的保藏信息
实施例1
本实施例提供一种抗五种面部致病菌的复合抗体提取物的制备方法,包括如下步骤:
(1)分别将痤疮丙酸杆菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、溶血性链球菌和白色念珠菌接种于培养基中,在37℃恒温下培养24h,将得到的培养菌种灭活。将已灭活的痤疮丙酸杆菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、溶血性链球菌和白色念珠菌,按质量比35:20:10:25:10的混合均匀制得菌株混合体,并溶解在pH值6.8的0.1M PBS溶液中,制得浓度为2mg/mL的菌株混合体溶液。
按等体积比例加弗氏佐剂至菌株混合体溶液中,搅拌均匀,然后高速均质,制得含抗五种面部致病菌的复合抗原。
(2)将上述复合抗原注射在20周大的鸡的胸肌和大腿处,每处分别注射0.25mL,并每隔10天强化免疫注射1次,共注射4次。首次注射所用的弗氏佐剂为弗氏不完全佐剂,第二次至第四次所采用的弗氏佐剂为完全弗氏佐剂。收集经过强化免疫的母鸡所产的鸡蛋。
(3)将获得的免疫鸡蛋打碎,取蛋黄并搅拌均匀,按蛋黄总体积的5倍加入蒸馏水稀释,再次搅拌均匀,调节pH值为5.0-6.0,冷却至4℃,静置12h。高速离心20min,取上清液超滤并浓缩10倍,将质量浓度为14%硫酸钠溶液加入浓缩液中充分搅拌混匀,再高速离心,取上清液超滤膜过滤除菌,滤液冷冻干燥,即得粗提物干粉。
(4)将上述获得的粗提物干粉通过DEAE-Sephadex A-50弱碱性阴离子交换层析柱层析,上样平衡液为pH6.5-7.0的0.01M PBS缓冲液,洗脱液为pH6.5-7.0的0.1M PBS缓冲液洗脱,收集洗脱获得的样品。再将收集的样品经Sephadex G200凝胶过滤柱,pH6.5-7.0的0.1M PBS缓冲液洗脱,即得包含抗五种面部致病菌的复合抗体提取物。
经ELISA酶联免疫吸附法测定效价,本实施例制备获得的复合抗体提取物中上述抗五种面部致病菌的抗体的效价均大于或等于1:128。
实施例2
本实施例提供一种抗六种面部致病菌的复合抗体提取物的制备方法,本实施例选取的抗六种面部致病菌为痤疮丙酸杆菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、溶血性链球菌、白色念珠菌和大肠杆菌,并且将痤疮丙酸杆菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、溶血性链球菌、白色念珠菌和大肠杆菌按质量比30:15:10:20:15:10的比例混合均匀,并制得浓度2mg/mL为菌株混合体溶液。其余制备过程与实施例1的制备方法相同,即得包含抗六种面部致病菌的复合抗体提取物,其中复合抗体提取物中抗上述六种面部致病菌的抗体的效价均大于或等于1:128。
实施例3
本实施例提供一种抗菌爽肤水,其主要成分由以下质量百分比的原料制成:实施例1获得的含抗五种面部致病菌的复合抗体提取物0.20%、卵磷脂2%、透明质酸0.2%(分子量120-150万)、海藻糖2%、生育酚乙酸酯0.8%、甘油8%、PEG-40氢化蓖麻油0.15%、三乙醇胺1.0%、苯氧乙醇0.5%、羟苯甲酯0.05%、香精0.05%与余量水,总量为1000g。
其制备过程如下:
(1)根据上述处方量,将透明质酸置于200mL去离子水中搅拌分散,溶胀均匀,得第一溶液。
(2)将生育酚乙酸酯、卵磷脂依次加入甘油和PEG-40氢化蓖麻油混合液中,并搅拌均匀,再加入200mL去离子水,混合均匀,再加入实施例1制得的抗五种面部致病菌的复合抗体提取物,均匀混合,得第二溶液。
(3)将羟苯甲酯用250mL去离子水加热至95℃,溶解,待冷却至35℃后,依次加入苯氧乙醇、海藻糖并混匀,将得到混合液200目过滤,得第三溶液。
(4)将第一溶液和第二溶液分别加入到第三溶液中,混匀,再加入三乙醇胺调节pH值至6.5-7.0,混匀,加入香精,用去离子水补足至1000g,混匀,即得爽肤水。
实施例4
本实施例提供一种抗菌爽肤水,其主要成分的质量百分比如下:实施例2获得的含抗六种面部致病菌的复合抗体提取物0.25%、卵磷脂3%、透明质酸0.1%、海藻糖3%、生育酚乙酸酯1%、甘油6%、PEG-40氢化蓖麻油0.2%、三乙醇胺1.2%、苯氧乙醇1.0%、羟苯甲酯0.1%、香精0.2%与余量水,总量为1000g。
其制备方法参见实施例3。
实施例5
本实施例提供一种抗菌爽肤水,其主要成分由以下质量百分比的原料制成:实施例1获得的含抗五种面部致病菌的复合抗体提取物0.3%、卵磷脂3%、透明质酸0.05%、海藻糖5%、生育酚乙酸酯0.8%、甘油5%、PEG-40氢化蓖麻油0.15%、三乙醇胺1.5%、苯氧乙醇0.8%、羟苯甲酯0.2%、香精0.5%与余量水,总量为1000g。
其制备方法参见实施例3。
实施例6
本实施例提供一种抗菌爽肤水,其主要成分由以下质量百分比的原料制成:实施例2获得的含抗六种面部致病菌的复合抗体提取物0.3%、卵磷脂3%、透明质酸0.1%、海藻糖4%、生育酚乙酸酯0.8%、甘油5%、PEG-40氢化蓖麻油0.15%、三乙醇胺1.5%、苯氧乙醇0.5%、羟苯甲酯0.05%、香精0.5%与余量水,总量为1000g。
其制备方法参见实施例3。
实施例7
本实施例提供一种抗菌凝胶睡眠面膜,其主要成分由以下质量百分比的原料制成:实施例2获得的抗六种面部致病菌的复合抗体提取物0.25%、胶原蛋白8%、透明质酸0.1%、甘油4%、烟酰胺1.5%、海藻糖2%、卡波姆2%、生育酚乙酸酯0.5%、PEG-40氢化蓖麻油0.1%、三乙醇胺1.2%、苯氧乙醇0.5%、羟苯甲酯0.1%、香精0.2%及余量的水,总量为1000g。
其制备过程如下:
(1)根据上述处方量,将透明质酸置于100mL去离子水中搅拌分散,溶胀均匀,得第一溶液。
(2)将卡波姆缓缓加入200mL去离子水中同时搅拌,并于50℃水浴中加热溶胀均匀,得第二溶液。
(3)将生育酚乙酸酯加入到甘油和PEG-40氢化蓖麻油混合液中,混匀;再加入200mL去离子水中,混合均匀,再依次加入烟酰胺、胶原蛋白、含抗六种面部致病菌的复合抗体提取物,搅拌使均匀混合,得第三溶液。
(4)将羟苯甲酯置于250mL去离子水中,加热至95℃,搅拌使溶解均匀,待冷却至35℃后,依次加入苯氧乙醇和海藻糖,搅拌混匀,再加入三乙醇胺和香精,混匀,200目过滤,得第四溶液。
(5)将第一溶液、第二溶液、第三溶液加入到第四溶液中,搅拌使混合均匀,用去离子水补足至1000g,搅拌均匀,即得凝胶睡眠面膜。
实施例8
本实施例提供一种抗菌凝胶睡眠面膜,其主要成分由以下质量百分比的原料制成下:实施例1获得的含抗五种面部致病菌的复合抗体提取物0.2%、胶原蛋白6%、透明质酸0.2%、甘油6%、烟酰胺2%、海藻糖3%、卡波姆1.5%、生育酚乙酸酯0.8%、PEG-40氢化蓖麻油0.2%、三乙醇胺1.0%、苯氧乙醇0.5%、羟苯甲酯0.1%、香精0.02%及余量的水,总量为1000g。
其制备过程参见实施例7。
实施例9
本实施例提供一种抗菌凝胶睡眠面膜,其主要成分由以下质量百分比的原料制成:实施例2获得的含抗六种面部致病菌的复合抗体提取物0.2%、胶原蛋白6%、透明质酸0.2%、甘油6%、烟酰胺2%、海藻糖3%、卡波姆1.5%、生育酚乙酸酯0.8%、PEG-40氢化蓖麻油0.2%、三乙醇胺1.0%、苯氧乙醇0.5%、羟苯甲酯0.1%、香精0.02%及余量的水,总量为1000g。
其制备方法参见实施例7。
实施例10
本实施例提供一种抗菌凝胶睡眠面膜,其主要成分由以下质量百分比的原料制成:实施例2获得的含抗六种面部致病菌的复合抗体提取物0.15%、胶原蛋白8%、透明质酸0.2%、甘油8%、烟酰胺2%、海藻糖3%、卡波姆1.5%、生育酚乙酸酯0.5%、PEG-40氢化蓖麻油0.5%、三乙醇胺0.8%、苯氧乙醇0.5%、羟苯甲酯0.1%、香精0.02%及余量的水,总量为1000g。
其制备方法参见实施例7。
实施例11
本实施例提供一种抗菌面膜泥,其主要成分由以下质量百分比的原料制成:实施例1制得的含抗五种面部致病菌的复合抗体提取物0.2%、高岭土8%、透明质酸0.1%、生育酚乙酸酯0.5%、聚乙烯醇1%、棕榈酸乙基己酯2%、鲸蜡硬脂醇5%、甘油硬脂酸酯4%、PEG-100硬脂酸酯4%、甘油5%、丙二醇3%、海藻糖2%、三乙醇胺1.5%、苯氧乙醇0.5%、羟苯甲酯0.05%、香精0.1%及余量的水,总量为1000g。
其制备过程如下:
(1)根据上述处方量,将透明质酸置于100mL去离子水中搅拌分散,溶胀均匀,得第一溶液。
(2)将棕榈酸乙基己酯、鲸蜡硬脂醇、甘油硬脂酸酯和PEG-100硬脂酸酯混合加热至60℃熔融,趁热200目过滤,并降温至50℃,得第二混合液。
(3)将生育酚乙酸酯加入甘油和丙二醇混合液中并搅拌均匀,再加入100mL去离子水,搅拌混匀,加入将实施例1的抗五种面部致病菌复合抗体提取物,搅拌均匀,得第三混合液。
(4)将聚乙烯醇加入100mL的去离子水,加热至80℃,溶胀溶解均匀,冷却至35℃,得第四溶液。
(5)将羟苯甲酯置于250mL去离子水中,加热95℃,搅拌溶解,待冷却至35℃后,依次加入苯氧乙醇和海藻糖,搅拌混匀,再加入三乙醇胺和香精,混合均匀,200目过滤,得第五溶液。
(6)将第一溶液、第三混合液、第二混合液、第四溶液依次加入至第五溶液中,搅拌使混合均匀,再加入高岭土并充分搅拌均匀,用去离子水补足至1000g,再次搅拌均匀,即得面膜泥。
实施例12
本实施例提供一种抗菌面膜泥,其主要成分由以下质量百分比的原料制成:实施例2制得的含抗六种面部致病菌的复合抗体提取物0.25%、高岭土6%、透明质酸0.2%、生育酚乙酸酯0.5%、聚乙烯醇1.5%、棕榈酸乙基己酯3%、鲸蜡硬脂醇4%、甘油硬脂酸酯3%、PEG-100硬脂酸酯5%、甘油5%、丙二醇3%、海藻糖2%、三乙醇胺2.0%、苯氧乙醇0.5%、羟苯甲酯0.05%、香精0.5%及余量的水,总量为1000g。
其制备方法参见实施例11。
实施例13
本实施例提供一种抗菌爽肤水,其主要成分由以下质量百分比的原料制成:实施例2获得的含抗六种面部致病菌的复合抗体提取物0.3%、卵磷脂3%、透明质酸0.2%、海藻糖4%、生育酚乙酸酯1%、甘油5%、PEG-40氢化蓖麻油0.2%、三乙醇胺1.5%、苯氧乙醇0.8%、羟苯甲酯0.15%、香精0.8%与余量水,总量为1000g。
其制备方法参见实施例3。
实施例14
本实施例提供一种复合抗体提取物和包含该复合抗体提取物的抗菌爽肤水。
本实施例提供的复合抗体提取物选取包含痤疮丙酸杆菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌的面部致病菌菌种。其他制备条件与实施例1的制备条件相同。
包含上述制备获得的复合抗体提取物的抗菌爽肤水,其主要成分的质量百分比如下:抗三种致病菌的复合抗体提取物0.3%、卵磷脂4%、透明质酸0.1%、海藻糖4%、生育酚乙酸酯1%、甘油8%、PEG-40氢化蓖麻油0.2%、三乙醇胺1.5%、苯氧乙醇0.5%、羟苯甲酯0.1%、香精0.5%与余量水,总量为1000g。
其制备过程参见实施例3。
实施例15面部常见致病菌的杀菌效果测试
参照2015年版《化妆品安全技术规范》第五章微生物检验方法检验本发明系列产品的微生物,结果均显示细菌菌落总数≤1000cfu/g,霉菌和酵母菌总数≤100cfu/g,没检出大肠菌群、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌。同时参照《一次性使用卫生用品卫生标准》GB15979-2002附录C3中“杀菌试验”进行试验,选取含有上述面部致病菌的菌落包括1786×103cfu痤疮丙酸杆菌、2011×103cfu金黄色葡萄球菌、2367×103cfu绿脓杆菌、1213×103cfu溶血性链球菌和965×103cfu白色念珠菌、1879×103cfu大肠杆菌,对实施例5、实施例6、实施例13和实施例14进行杀菌效果测试,作活菌菌落计数,重复三次,统计结果见表1和图1至图4。评价标准:杀菌率≥90%,有杀菌作用。统计公式如下:
X=(A-B)/A×100%
其中,X为杀菌率,%;
A为对照样品平均菌落数;
B为被试样品平均菌落数。
表1实施例5的爽肤水的杀菌效果随时间变化统计表
由表1和图1可以看出,实施例5对五种面部致病菌均有显著的杀菌作用,作用15min已能较好起到杀菌作用。由图1和图2可以看出,抗六种面部致病菌的复合抗体提取物制备的爽肤水的杀菌总效果优于抗五种面部致病菌的复合抗体提取物制备的爽肤水。由图2和图3可以看出,实施例6与实施例13提供的爽肤水的配方,杀菌效果无明显差异。由图3和图4可以看出,抗六种面部致病菌的复合抗体提取物制备的爽肤水的杀菌效果优于抗三种致病菌的复合抗体提取物制备的爽肤水的杀菌效果。
实施例16刺激性试验
依据《化妆品安全技术规范》(2015年版)的毒理学试验方法对实施例5、实施7、实施例10、实施例11和实施例13的产品对白色家兔进行急性眼刺激性试验。
分别涂抹上述实施例制备的爽肤水、睡眠面膜、面膜泥,家兔的其中一只眼睛使用上述实施例的产品后,用生理盐水冲洗,另一只眼作为对照,分别在1h、24h、48h、72h观察试验家兔眼睛是否产生红肿、黏膜是够充血等状况。结果显示,所有白色家兔均无不良反应。
依据《化妆品安全技术规范》(2015年版)的毒理学试验方法对实施例5、实施7、实施例10、实施例11和实施例13的产品对白色家兔进行多次皮肤刺激性试验。
将成年、健康、皮肤无损伤的家兔背部剪出两块均为3×3cm2的脱毛区皮肤,每只白色家兔的其中一块脱毛区涂抹上述实施例的产品,另一块作为对照,每天涂抹1次,连续涂抹14d。每天观察家兔的皮肤是否产生红斑和水肿。结果显示,所有家兔均没有出现不良反应。
实施例17保湿功效试验
本次试验参照中华人民共和国轻工行业标准QB/T 4256-2011化妆品保湿功效评价指南,采用德国CK皮肤水分测试仪Corneometer CM825测试皮肤水分含量,该仪器测试原理是基于水的介电常数和其它物质的介电常数之间的变化相当大,按照水量的不同,适当形状的测量用电容器会随着皮肤的电容量的变化而变化,而皮肤的电容量又是在测量的范围内,这样就可以测量出皮肤的水份含量。具体步骤如下:
1、试验对象
随机选取300名18-45岁的志愿受试者,分成12组,每组25人,所有受试者无严重系统疾病、无免疫缺陷或自身免疫性疾病者,受试部位(颜面部)没有接受过皮肤治疗、美容以及其他可能影响结果的测试,测试前2天-3天不能使用任何化妆品或外用药品。
2、试验方法
先记录受试者在使用上述实施例的产品前的皮肤含水量。然后再使受试者的脸部连续使用上述实施例的产品,受试部位为脸部6×6cm2的皮肤,各选取两处皮肤,固定一处位置每天晚上使用该产品,另一处不使用任何护肤品。
受试者连续使用2周后,分别测试使用面积内的皮肤含水量。每次测试前3h时内不接触水,每次测试试验过程的室内温度控制在20℃-22℃,湿度控制在45%-60%。与受试前作对比,评价每组受试者的皮肤含水量提升的有效率,公式如下。统计结果见表2。
皮肤含水量提升的有效率=(试验后皮肤含水量%-试验前皮肤含水量%)/试验前皮肤含水量%×100%
由表2可以看出,相对于不使用任何护肤品,使用实施例3至实施例14的产品后,均有效提高皮肤含水量,并且实施例7至实施例10的抗菌凝胶睡眠面膜的保湿功效最好,抗菌爽肤水的保湿功效其次。
表2皮肤含水量提升的有效率统计表
实施例 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 | 对照组 |
有效率/% | 74.8 | 75.1 | 73.3 | 75.3 | 79.7 | 78.8 | 80.5 | 80.1 | 62.5 | 66.8 | 76.8 | 75.0 | -1.2 |
实施例18祛痘效果测试
选择210名18-45岁符合要求的志愿者作为受试对象,分成7组,每组30人,使用实施例3、6、8、10、11、12和14制备的产品。具体性别构成和年龄构成随机确定,每人每两天使用一次,使用时间为每晚20时至22时之间,每次使用20min,试验次数共15次,受试痤疮人群试用2周、4周后填写调查问卷,最后统计4周后的结果,见表3。人群试用调查结果如下。
表3祛痘保湿效果测试统计表
由表3可以看出,上述实施例的护肤品的配方体系,总体上都具有祛痘、保湿的功效。而且,使用上述实施例的护肤品中,受试者的痘痘复发率低,且对痘痕痘印有明显淡化作用。在复合抗体提取物含量相同且抗致病菌菌种相同的情况下,各类护肤品的祛痘保湿功效比较:复合抗体提取物凝胶睡眠面膜>复合抗体提取物爽肤水>复合抗体提取物面膜泥。综合考虑,实施例6的配方体系的总体祛痘效果最好,而且,受试者的皮肤无刺激感、无出油及不干燥,痘痘无复发,方便携带使用,且痘印淡化效果好。
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合,为使描述简洁,未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述,然而,只要这些技术特征的组合不存在矛盾,都应当认为是本说明书记载的范围。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式,其描述较为具体和详细,但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是,对于本领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明构思的前提下,还可以做出若干变形和改进,这些都属于本发明的保护范围。因此,本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
Claims (10)
1.一种复合抗体提取物的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:
(1)制备含面部致病菌的复合抗原,所述面部致病菌包括痤疮丙酸杆菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、溶血性链球菌和白色念珠菌;
(2)采用所述复合抗原对鸡进行强化免疫,得到免疫鸡的免疫鸡蛋;
(3)对所述免疫鸡蛋的蛋黄分离纯化,获取粗提物干粉;
(4)将所述粗提物干粉依次通过离子交换柱层析和凝胶过滤层析分离纯化,获得含抗痤疮丙酸杆菌、抗金黄色葡萄球菌、抗绿脓杆菌、抗溶血性链球菌和抗白色念珠菌的复合抗体提取物。
2.根据权利要求1所述的复合抗体提取物的制备方法,其特征在于,在步骤(1)中,所述制备含面部致病菌的复合抗原包括如下步骤:分别将痤疮丙酸杆菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、溶血性链球菌和白色念珠菌在37℃条件下恒温培养,将培养得到的各面部致病菌灭活;将已灭活的痤疮丙酸杆菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、溶血性链球菌和白色念珠菌按照质量比20-35:15-20:10-15:20-25:10-15在pH6.0-7.0的0.1M PBS溶液中混合均匀,制得浓度为1.0-2.2mg/mL的菌体混合体溶液,按等体积比例加入弗氏佐剂至所述菌体混合溶液中,高速均质,即得所述复合抗原。
3.根据权利要求2所述的复合抗体提取物的制备方法,其特征在于,在步骤(1)中,所述面部致病菌还包括大肠杆菌;所述痤疮丙酸杆菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、溶血性链球菌、白色念珠菌和大肠杆菌按照质量比为20-35:15-20:10-15:20-25:10-15:10-20的比例混合;
对应地,在步骤(4)中,将所述粗提物干粉依次通过离子交换柱层析和凝胶过滤层析分离纯化,获得含抗痤疮丙酸杆菌、抗金黄色葡萄球菌、抗绿脓杆菌、抗溶血性链球菌、抗白色念珠菌和抗大肠杆菌的复合抗体提取物。
4.根据权利要求1至3任一项所述的复合抗体提取物的制备方法,其特征在于,在步骤(3)中,所述获取粗提物干粉包括如下步骤:取所述免疫鸡蛋的蛋黄,按蛋黄总体积的3-8倍加入蒸馏水稀释,混匀,调节pH值为5.0-6.0,冷却至4℃,静置10-12h;高速离心15-25min,取上清液超滤并浓缩8-12倍,将质量浓度为12%-16%硫酸钠溶液加入浓缩液中,混匀,再高速离心,取上清液超滤膜过滤除菌,滤液冷冻干燥,即得粗提物干粉。
5.根据权利要求1至3任一项所述的复合抗体提取物的制备方法,其特征在于,在步骤(4)中,所述离子交换柱层析分离纯化的条件为:采用弱碱性阴离子交换层析柱,采用pH6.5-7.0的0.01M PBS缓冲液上样平衡,pH6.5-7.0的0.1M PBS缓冲液洗脱分离纯化;
所述凝胶过滤柱层析分离纯化的条件为:采用Sephadex G200层析柱,采用的洗脱液为pH6.5-7.0的0.1M PBS缓冲液。
6.由权利要求1至5中任一项所述的复合抗体提取物的制备方法制备获得的复合抗体提取物。
7.权利要求6所述的复合抗体提取物在制备具有抗菌祛痘功效的护肤品中的应用。
8.一种抗菌爽肤水,其特征在于,所述爽肤水由以下质量百分比的原料组成:权利要求6所述的复合抗体提取物0.15%-0.3%、生育酚乙酸酯0.2%-1%、甘油2%-8%、三乙醇胺0.3%-2.5%、透明质酸0.02%-0.2%、海藻糖2%-5%、卵磷脂1%-5%、PEG-40氢化蓖麻油0.1%-0.25%、苯氧乙醇0.5%-1.0%、羟苯甲酯0.02%-0.2%、香精0.02%-1%及余量水。
9.一种抗菌凝胶睡眠面膜,其特征在于,所述凝胶睡眠面膜的面膜液由以下质量百分比的原料组成:权利要求6所述的复合抗体提取物0.15%-0.3%、生育酚乙酸酯0.2%-1%、甘油2%-8%、三乙醇胺0.3%-2.5%、透明质酸0.02%-0.2%、海藻糖2%-5%、胶原蛋白2%-8%、烟酰胺1.5%-2.5%、卡波姆1%-2%、PEG-40氢化蓖麻油0.1%-0.25%、苯氧乙醇0.5%-1.0%、羟苯甲酯0.02%-0.2%、香精0.02%-1%及余量水。
10.一种抗菌面膜泥,其特征在于,所述面膜泥由以下质量百分比的原料组成:权利要求6所述的复合抗体提取物0.15%-0.3%、生育酚乙酸酯0.2%-1%、甘油2%-8%、三乙醇胺0.3%-2.5%、透明质酸0.02%-0.2%、海藻糖2%-5%、高岭土2%-10%、聚乙烯醇0.25%-3%、棕榈酸乙基己酯1%-4%、鲸蜡硬脂醇1%-8%、甘油硬脂酸酯2%-5%、PEG-100硬脂酸酯2%-6%、丙二醇2%-4%、苯氧乙醇0.5%-1.0%、羟苯甲酯0.02%-0.2%、香精0.02%-1%及余量的水。
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