CN108546684A - 一种杂交瘤细胞培养基及其制备方法 - Google Patents

一种杂交瘤细胞培养基及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种杂交瘤细胞培养基及其制备方法，其中所述制备方法包括：取无抗体血清，并将所述无抗体血清、所述无血清培养基和所述水解物溶液进行混合，得到杂交瘤细胞培养基。本发明所提供的制备方法实现了杂交瘤细胞培养基在培养杂交瘤细胞时免驯化流程，提高了细胞培养效率，大大减少了由于添加高比例血清对于工艺稳定性的影响，避免了外源抗体的干扰，培养方法简单、有效，细胞培养效果好，抗体表达量高，为细胞培养的研发人员带来了极大的方便。

Description

一种杂交瘤细胞培养基及其制备方法
技术领域
本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种杂交瘤细胞培养基及其制备方法。
背景技术
单克隆抗体具有广泛的应用，可用于疾病的诊断和治疗等。目前用于诊断的单克隆抗体主要来源于腹水法或细胞培养方法，所用细胞主要为杂交瘤细胞。由于腹水法获得的产品批间差异较大，并且涉及到动物伦理，将会逐渐被细胞培养的方法所取代。
杂交瘤细胞由B细胞和骨髓瘤细胞融合所得，既具有瘤细胞易于在体外无限增殖的特性，又具有抗体形成细胞的合成和分泌特异性抗体的特点。在体外培养杂交瘤细胞即可获得单克隆抗体。该技术在诊断试剂开发、新药开发中具有重要作用。
由于杂交瘤细胞来源广泛，并且非常难于进行无血清培养，从而导致目前针对杂交瘤细胞培养的无血清培养基培养效果较差，工艺难以稳定，从而可能会导致抗体批间差异较大。商业化培养基主要分为完全培养基和不完全培养基，完全培养基自身价格昂贵，且往往需要较长时间的驯化才能培养杂交瘤细胞，且培养效果也比较差，不完全培养基如果不加入血清的话将无法培养杂交瘤细胞，但如果在培养基中加入血清又会引入外源抗体的干扰，影响产品的品质。所以具有能够稳定、快速、高效的培养杂交瘤细胞的培养基显得至关重要。
总之，现有的杂交瘤细胞培养的无血清培养基在培养杂交瘤细胞前需要长时间的驯化，并且获得的抗体表达量比较低。对于一些特殊杂交瘤细胞，比如羊杂交瘤细胞，即使驯化也不能对其进行有效培养表达。如果使用不完全培养基培养杂交瘤细胞，需要加较高的血清，高比例的血清会对工艺的稳定性造成不良影响，并且会带来外源抗体的干扰，影响产品的品质。
发明内容
本发明提供一种杂交瘤细胞培养基及其制备方法，以解决现有的技术中的不足。
为解决上述问题，本发明提供一种杂交瘤细胞培养基的制备方法，包括：
取实验血清，去除牛IgG抗体后得到无抗体血清；
配制无血清培养基和水解物溶液；
将所述无抗体血清、所述无血清培养基和所述水解物溶液进行混合，得到杂交瘤细胞培养基。
优选地，所述“取实验血清，去除牛IgG抗体后得到无抗体血清”，包括：
将实验血清通过亲和层析柱去除血清中的牛IgG抗体，并收集流穿液；
将所述流穿液进行经0.1-0.45μm滤膜过滤，得到无抗体血清。
优选地，所述“将实验血清通过亲和层析去除血清中的牛IgG抗体，并收集流穿液”之前，还包括：
将实验血清在25-37℃条件下进行解冻，解冻后经过0.1-0.45μm滤膜过滤，得到过滤血清；
将所述过滤血清在2-8℃条件下冷却30-60分钟。
优选地，
所述亲和层析柱包括Protein A和Protein G中的一种；
所述实验血清包括胎牛血清和新生牛血清中的一种。
5.如权利要求1所述杂交瘤细胞培养基的制备方法，其特征在于，
所述无血清培养基包括完全培养基和不完全培养基中的一种或两种；
所述“配制无血清培养基和水解物溶液”包括：
将所述完全培养基和所述不完全培养基中的一种或两种配制成为培养基溶液；并且，
将所述水解物配制成浓度为100g/L的水解物。
优选地，
所述“取实验血清，去除牛IgG抗体后得到无抗体血清”之后，还包括：
通过SDS-PAGE方法或HPLC方法确定所述无抗体血清中不含有所述牛IgG抗体。
优选地，
所述“将所述无抗体血清、所述无血清培养基和所述水解物溶液进行混合，得到杂交瘤细胞培养基”之后，还包括：
将杂交瘤细胞按10-1000万/mL的接种密度接种至所述杂交瘤细胞培养基并进行培养。
此外，为解决上述问题，本发明还提供一种杂交瘤细胞培养基，包括无抗体血清、无血清培养基，以及包含或不包含水解物。
优选地，
所述无血清培养基包括完全培养基和不完全培养基中的一种或两种；
所述不完全培养基包括RPMI 1640、DMEM培养基中的一种；
所述完全培养基包括Hybridoma SFM、CD Hybridoma AGTTM中的一种；
所述水解物包括水解乳蛋白、酵母水解物、大豆水解物中的一种或多种。
优选地，
所述杂交瘤细胞培养基中，所述无抗体血清的体积比例为1-10％；
所述水解物的浓度为0-5g/L。
本发明提供一种杂交瘤细胞培养基及其制备方法。其中，所述杂交瘤细胞培养基的制备方法通过去除实验血清的抗体得到无抗体血清，进而将制备得到的无血清培养基和水解物与无抗体血清混合，从而得到杂交瘤细胞培养基，实现了杂交瘤细胞培养基在培养杂交瘤细胞时免驯化流程，提高了细胞培养效率，大大减少了由于添加高比例血清对于工艺稳定性的影响，避免了外源抗体的干扰，培养方法简单、有效，细胞培养效果好，抗体表达量高，为细胞培养的研发人员带来了极大的方便。
附图说明
图1为实施例1中各组的活细胞密度情况图；
图2为实施例1中各组的细胞活率情况图；
图3为实施例1中各组的抗体表达情况图；
图4为实施例2中各组的活细胞密度情况图；
图5为实施例2中各组的细胞活率情况图；
图6为实施例2中各组的抗体表达情况图；
图7为实施例3中各组的活细胞密度情况图；
图8为实施例3中各组的细胞活率情况图；
图9为实施例3中各组的抗体表达情况图；
图10为实施例1中H组样品、C组样品和腹水样品SEC-HPLC色谱图。
本发明目的的实现、功能特点及优点将结合实施例，参照附图做进一步说明。
具体实施方式
下面结合具体实施例的方式对本发明的技术方案做进一步的详细说明，但并不构成对本发明的任何限制，任何人在本发明权利要求范围内所做的有限次的修改，仍在本发明的权利要求范围之内。
本发明提供一种杂交瘤细胞培养基的制备方法，包括：
取实验血清，去除牛IgG抗体后得到无抗体血清；
配制无血清培养基和水解物溶液；
将所述无抗体血清、所述无血清培养基和所述水解物溶液进行混合，得到杂交瘤细胞培养基。
上述，需要说明的是，IgG抗体为哺乳类动物抗体(又称免疫球蛋白，immunoglobulin，简称Ig)的种型之一。抵抗病原入侵的抗体相关免疫力，主要由该种型下的四种类型所提供，也是唯一一种可以穿过胎盘为胎儿提供被动免疫力的种型。
上述，需要说明的是，基础培养基添加血清、抗生素等物质后，叫完全培养基，也叫(血清)细胞培养基。基础培养基只能维持细胞生存，要想使细胞生长和繁殖，还需添加天然培养基，常用的是牛血清，因为牛血清中含有促细胞增殖的各种生长因子和其他多种有利于细胞生存的物质。此外为防止污染，培养液中尚需加一定量的抗生素。完全培养基根据添加血清量的多少，可分为细胞生长培养基和细胞维持培养基，用于不同细胞和不同研究。在本实施例中，所述完全无血清培养基可为Hybridoma SFM、CD Hybridoma AGTTM。
上述，需要说明的是，不完全培养基可以包括但不限于DMEM、RPMI1640等等培养基。
上述，实验血清可以为国产胎牛血清、进口胎牛血清、新生牛血清等，例如gibco南美胎牛血清10270106，gibco澳洲胎牛血清10099-141、索莱宝无支原体特级新生牛血清等。
上述，在本实施例中，所述水解物可为水解乳蛋白、酵母水解物、大豆水解物。
需要说明的是，本实施例所用完全无血清培养基：Hybridoma SFM、CD HybridomaAGTTM和不完全培养基：RPMI 1640、DMEM均购自赛默飞世尔。本实施例所用大豆水解物购自美国BD公司；水解乳蛋白购自Hyclone；酵母水解物购买自sigma；本实施例所用Protein A和G均购自GE Healthcare；本实施例所用胎牛血清、新生牛血清均购自杭州四季清生物工程材料有限公司；本实施例所用滤膜均购自millipore。
上述，按照各自的说明书将完全培养基、不完全培养基配制成液体。将水解物配制成实验需要的浓度，在本发明中可以配置为100g/L。在本发明所提供的杂交瘤细胞培养基中，无抗体血清为培养基中的重要组成部分，此外，还可以包括完全培养基和不完全培养基中的一种或两种，水解物可按照实验需要进行配置为不同浓度进行添加，例如0-5g/L，或者100g/L。
上述，在本实施例中所提供的杂交瘤细胞培养基中，无抗体血清的所占的体积比可以为1-10％；完全培养基可占的比例为0-99％；不完全培养基可占的体积比可以为0-95％。
上述，在本实施例中，所使用的培养容器可以为方瓶、摇瓶或生物反应器等。
本发明提供一种杂交瘤细胞培养基的制备方法，通过去除实验血清的抗体得到无抗体血清，进而将制备得到的完全培养基、不完全培养基和水解物与无抗体血清混合，从而得到杂交瘤细胞培养基，实现了杂交瘤细胞培养基在培养杂交瘤细胞时免驯化流程，提高了细胞培养效率，大大减少了由于添加高比例血清对于工艺稳定性的影响，避免了外源抗体的干扰，培养方法简单、有效，细胞培养效果好，抗体表达量高，为细胞培养的研发人员带来了极大的方便。
优选地，所述“取实验血清，去除牛IgG抗体后得到无抗体血清”，包括：
将实验血清通过亲和层析柱去除血清中的牛IgG抗体，并收集流穿液；
将所述流穿液进行经0.1-0.45μm滤膜过滤，得到无抗体血清。
上述，需要说明的是，亲和层析是利用生物大分子与某些相对应的专一分子特异识别和可逆结合的特性而建立起来的一种分离生物大分子的层析方法。亲和层析是分离蛋白质的一种及有效的方法，常只需一步处理即可得到纯度较高的某种蛋白质。它是根据不同蛋白质对特定配体的特异而非共价结合的能力不同进行蛋白质分离的。
将具有特殊结构的亲和分子制成固相吸附剂放置在层析柱中，当要被分离的蛋白混合液通过层析柱时，与吸附剂具有亲和能力的蛋白质就会被吸附而滞留在层析柱中。那些没有亲和力的蛋白质由于不被吸附，直接流出，从而与被分离的蛋白质分开，然后选用适当的洗脱液，改变结合条件将被结合的蛋白质洗脱下来，这种分离纯化蛋白质的方法称为亲和层析。
上述，流穿液即为通过亲和层析柱进行洗脱下来的洗脱液、或洗涤液。
上述，在本实施例中，将亲和层析流穿液经0.22um滤膜过滤到无菌试剂瓶中，即可获得处理后的血清。
优选地，所述“将实验血清通过亲和层析去除血清中的牛IgG抗体，并收集流穿液”之前，还包括：
将实验血清在25-37℃条件下进行解冻，解冻后经过0.1-0.45μm滤膜过滤，得到过滤血清；
将所述过滤血清在2-8℃条件下冷却30-60分钟。
上述，血清的保存方式一般包括：
1、4摄氏度低温保存。用此法可以存放3个月到半年。效价高时一年之内不影响使用；将抗血清除菌后用液体状态保存于普通冰箱。
2、冷冻保存。放在-20，五年之内效价不会有明显降低。切勿反复冻融。
3、冰冻干燥。制品内水分不高于0.2，一般在冰箱中保存5-10年，效价不会明显降低。
在本实施例中，实验血清保存于低温(-20℃)冰箱中。
上述，实验血清取出后，需进行快速解冻，解冻条件为25-37℃，一般为水浴解冻。进而再进行过滤除杂后，经过降温即可使用。
接种密度可以为10-1000万/mL，优选地，接种密度为10-100万/mL。
所述亲和层析柱包括Protein A和Protein G中的一种；
所述实验血清包括胎牛血清和新生牛血清中的一种。
优选地，所述无血清培养基包括完全培养基和不完全培养基中的一种或两种；
所述“配置无血清培养基和水解物”包括：
将所述完全培养基和所述不完全培养基中的一种或两种配置成为培养基溶液；并且，
将所述水解物配置成浓度为100g/L的水解物。
优选地，所述“取实验血清，去除牛IgG抗体后得到无抗体血清”之后，还包括：
通过SDS-PAGE方法或HPLC方法确定所述无抗体血清中不含有所述牛IgG抗体。
上述，需要说明的是，SDS-PAGE为聚丙烯酰胺凝胶电泳(英语：polyacrylamidegel electrophoresis，简称PAGE)，是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术，用于分离蛋白质和寡核苷酸。
SDS是一种阴离子去污剂，它能破坏蛋白质分子之间以及其它物质分子之间的非共价键。在强还原剂如巯基乙醇或二硫苏糖醇的存在下，蛋白质分子内的二硫键被打开并解聚成多肽链。解聚后的蛋白质分子与SDS充分结合形成带负电荷的蛋白质-SDS复合物，复合物所带的负电荷大大超过了蛋白质分子原有的电荷量，这就消除了不同蛋白质分子之间原有的电荷差异，蛋白质-SDS复合物在溶液中的形状像一个长椭圆棒。椭圆棒的短轴对不同的蛋白质亚基-SDS复合物基本上是相同的(约18μm)，但长轴的长度则与蛋白质分子量的大小成正比，因此这种复合物在SDS-PAGE系统中的电泳迁移率不再受蛋白质原有电荷的影响，而主要取决于椭圆棒的长轴长度即蛋白质及其亚基分子量的大小。当蛋白质的分子量在15-200kD之间时，电泳迁移率与分子量的对数呈线性关系。由此可见，SDS-PAGE不仅可以分离鉴定蛋白质，而且可以根据迁移率大小测定蛋白质亚基的分子量。
上述，HPLC为高效液相色谱仪。此外，也可通过超高效液相、液相-质谱联用仪、气相-质谱联用色谱等设备进行检测分析。
在本实施例中，将获得的处理后血清经SDS-PAGE或HPLC方法检测，以确定其中的牛IgG被去除干净或仅微量残留。
上述，通过HPLC方法检测抗体的含量，其中，检测方法和条件为：
取25μL样品加缓冲液1mL进行稀释，每针进样量10μL，流速1mL/min，保留时间为7.9min，等度洗脱，100％A相，检测波长为280nm。
在本实施例中，色谱柱为TSKgel G3000SWXL,7.8×300mm,5μm。
流动相A为50mM磷酸盐，300mM氯化钠，pH7.0。
优选地，所述“将所述无抗体血清、所述无血清培养基和所述水解物溶液进行混合，得到杂交瘤细胞培养基”之后，还包括：
将杂交瘤细胞按10-1000万/mL的接种密度接种至所述杂交瘤细胞培养基并进行培养。
上述，在本实施例中，将新培养基加入培养容器中，将杂交瘤细胞按一定接种密度接种到新培养基中培养。
上述，所述杂交瘤可为鼠B细胞与鼠骨髓瘤细胞的融合、羊B细胞与鼠骨髓瘤细胞的融合。
此外，本发明还提供一种杂交瘤细胞培养基，包括无抗体血清、无血清培养基，以及包含或不包含水解物。
优选地，所述不完全培养基包括RPMI 1640、DMEM培养基中的一种；
所述完全培养基包括Hybridoma SFM、CD Hybridoma AGTTM中的一种。
优选地，所述水解物包括水解乳蛋白、酵母水解物、大豆水解物中的一种或多种。
优选地，所述杂交瘤细胞培养基中，所述无抗体血清的体积比例为1-10％；
所述水解物的浓度为0-5g/L。
为了便于理解本发明，下面结合实施例来进一步说明本发明的技术方案。申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的详细工艺设备和工艺流程，但本发明并不局限于上述详细工艺设备和工艺流程，即不意味着本发明必须依赖上述详细工艺设备和工艺流程才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。
实施例1：
在本实施例中，利用本发明所提供的杂交瘤细胞培养基制备方法进行对于杂交瘤细胞培养基的制备，具体步骤如下：
S1、血清处理：将100mL胎牛血清放在25℃水浴锅中解冻60min；待血清全部解冻之后经0.45um滤膜过滤到无菌试剂瓶中。将盛有血清的试剂瓶放在2～8℃冰箱中45min，使血清冷却。将过滤之后的血清过protein G柱，经亲和层析方法去除血清中的牛IgG抗体，收集流穿液。将流穿液经0.22um滤膜过滤到无菌试剂瓶中。即可获得处理后的血清。将获得的处理后血清经SDS-PAGE和HPLC方法同时检测，确定没有检测到牛IgG残留；
S2、新培养基配制：按说明书要求分别配制1000mL Hybridoma SFM、1000mL RPMI1640、50mL的100g/L水解乳蛋白、50mL的100g/L酵母水解物、50mL的100g/L大豆水解物；
S3、在500mL的摇瓶中将处理后的血清、Hybridoma SFM、RPMI 1640三者先按比例混合成100mL。之后添加水解物进行混合，混合情况如表1所示。
表1、实施例1杂交瘤细胞培养基各组分混合情况表
分组 血清 Hybridoma SFM RPMI 1640 水解乳蛋白 酵母水解物 大豆水解物
A 5％ 70％ 25％ 0 0 0
B 5％ 70％ 25％ 3g/L 0 0
C 5％ 70％ 25％ 5g/L 0 0
D 5％ 70％ 25％ 0 3g/L 0
E 5％ 70％ 25％ 0 5g/L 0
F 5％ 70％ 25％ 0 0 3g/L
G 5％ 70％ 25％ 0 0 5g/L
H 0％ 100％ 0％ 0 0 0
S4，将小鼠与小鼠杂交瘤细胞以10万/mL的密度接种到上述8种混合培养基中进行批次培养。培养条件为：37℃，8％CO2，摇床转速120rpm，整幅50mm。培养最长时间为9天。每天检测活细胞密度、活力，收样后检测抗体浓度、纯度以及与抗原的亲和力。
实施例2：
在本实施例中，利用本发明所提供的杂交瘤细胞培养基制备方法进行对于杂交瘤细胞培养基的制备，具体步骤如下：
S1，血清处理：将100mL胎牛血清放在25℃水浴锅中解冻60min；待血清全部解冻之后经0.45um滤膜过滤到无菌试剂瓶中。将盛有血清的试剂瓶放在2～8℃冰箱中45min，使血清冷却。将过滤之后的血清过protein G柱，经亲和层析方法去除血清中的牛IgG抗体，收集流穿液。将流穿液经0.22um滤膜过滤到无菌试剂瓶中。即可获得处理后的血清。将获得的处理后血清经SDS-PAGE和HPLC方法同时检测，确定没有检测到牛IgG残留；
S2，新培养基配制：按说明书要求分别配制1000mL Hybridoma SFM、1000mL RPMI1640、50mL的100g/L水解乳蛋白；
S3，在500mL的摇瓶中将处理后的血清、Hybridoma SFM、RPMI 1640三者先按比例混合成100mL。之后添加水解物乳蛋白3g/L，混合情况如表2所示。
表2、实施例2杂交瘤细胞培养基各组分混合情况表
分组 血清 Hybridoma SFM RPMI 1640 水解乳蛋白
A 1％ 99％ 0 3g/L
B 5％ 95％ 0 3g/L
C 10％ 90％ 0 3g/L
D 5％ 0％ 95％ 3g/L
E 5％ 50％ 45％ 3g/L
F 5％ 70％ 25％ 3g/L
G 0％ 100％ 0％ 0
S4，将小鼠与小鼠杂交瘤细胞以10万/mL的密度接种到上述7种混合培养基中进行批次培养。培养条件为：37℃，8％CO2，摇床转速120rpm，整幅50mm。培养最长时间为9天。每天检测活细胞密度、活力，收样后检测抗体浓度。
实施例3：
在本实施例中，利用本发明所提供的杂交瘤细胞培养基制备方法进行对于杂交瘤细胞培养基的制备，具体步骤如下：
S1，血清处理：将100mL胎牛血清和100mL新生牛血清分别经0.45um滤膜过滤到无菌试剂瓶中。将盛有血清的试剂瓶放在2～8℃冰箱中45min，使血清冷却。将过滤之后的血清过protein G柱，经亲和层析方法去除血清中的牛IgG抗体，收集流穿液。将流穿液经0.22um滤膜过滤到无菌试剂瓶中。即可分别获得处理后的胎牛血清和新生牛血清。将获得的处理后血清经SDS-PAGE和HPLC方法同时检测，确定没有检测到牛IgG残留。
S2，新培养基配制：按说明书要求分别配制1000mL Hybridoma SFM、1000mL CDHybridoma AGTTM、1000mL RPMI 1640、1000mL DMEM、50mL的100g/L水解乳蛋白。
S3，在500mL的摇瓶中将处理后的血清、完全培养基、不完全培养基三者先按比例混合成100mL。之后添加水解物乳蛋白3g/L，混合情况如表3所示；
表3、实施例3杂交瘤细胞培养基各组分混合情况表
S4，将小鼠与小鼠杂交瘤细胞或羊B细胞与鼠骨髓瘤融合而得的杂交瘤细胞以10万/mL的密度按表(3)所述接种到7种混合培养基中进行批次培养。培养条件为：37℃，8％CO2，摇床转速120rpm，整幅50mm。培养最长时间为9天。每天检测活细胞密度、活力，收样后检测抗体浓度。
分析方法：
1、SEC-HPLC方法抗体多聚体检测方法：
取25μL样品加缓冲液1mL进行稀释，每针进样量10μL，流速1mL/min，保留时间为7.9min，等度洗脱，100％A相，检测波长为280nm。色谱柱为TSKgel G3000SWXL,7.8×300mm,5μm。流动相A为50mM磷酸盐，300mM氯化钠，pH7.0。
2、HPLC方法抗体检测方法：
用0.1mol/L磷酸缓冲液以2mL/min流速平衡HPLC系统15min至基线平稳，于系统程序中设置标准曲线法程序。进样25μl于进样器，以2mL/min流速洗脱，保留时间为2.7min，梯度洗脱。检测波长为280nm，记录有关数据，并进行处理。色谱柱为POROS A 20um ColumnStainless Steel,2.1×30mm,0.1mL。
3、活细胞密度、活力检测方法：
台盼蓝染色后用活细胞计数仪自动读取。
4、抗体活性检测方法：
待检抗体的抗原标记在板上，待检测抗体标记HRP，一步法检测。酶标仪读取OD450吸光值。
实验结果：
通过上述杂交瘤细胞培养及的制备方法，分别得到实施例1-3中的每个实施例所对应的的A-H组的培养基，并对上述每个实施例中的A-H组进行了活细胞密度检测、细胞活率检测和抗体表达量检测，参考图1-9；并对实施例1中的C组样品、H组样品和腹水来源样品分别进行了SEC-HPLC检测、抗体活性检测，见表4-5和图10(图10中，从上到下依次是：H、C、腹水样品)。其中，C样品(含处理后胎牛血清)和H样品(无血清)质量接近，碎片含量低于腹水来源。并且抗体标记活性相似，均优于腹水抗体。说明，添加处理后胎牛血清对抗体品质不会造成不良影响,并且抗体质量优于腹水来源抗体。
表4、SEC-HPLC结果
样品 聚体(％) 单体(％) 碎片(％)
腹水来源 4.7 93.3 2.0
C样品 2.8 96.8 0.4
H样品 1.9 97.8 0.3
表5、抗体活性检测表

Claims (10)

1.一种杂交瘤细胞培养基的制备方法，其特征在于，包括：
取实验血清，去除牛IgG抗体后得到无抗体血清；
配制无血清培养基和水解物溶液；
将所述无抗体血清、所述无血清培养基和所述水解物溶液进行混合，得到杂交瘤细胞培养基。
2.如权利要求1所述杂交瘤细胞培养基的制备方法，其特征在于，所述“取实验血清，去除牛IgG抗体后得到无抗体血清”，包括：
将实验血清通过亲和层析柱去除血清中的牛IgG抗体，并收集流穿液；
将所述流穿液进行经0.1-0.45μm滤膜过滤，得到无抗体血清。
3.如权利要求2所述杂交瘤细胞培养基的制备方法，其特征在于，所述“将实验血清通过亲和层析去除血清中的牛IgG抗体，并收集流穿液”之前，还包括：
将实验血清在25-37℃条件下进行解冻，解冻后经过0.1-0.45μm滤膜过滤，得到过滤血清；
将所述过滤血清在2-8℃条件下冷却30-60分钟。
4.如权利要求2所述杂交瘤细胞培养基的制备方法，其特征在于，
所述亲和层析柱包括Protein A和Protein G中的一种；
所述实验血清包括胎牛血清和新生牛血清中的一种。
5.如权利要求1所述杂交瘤细胞培养基的制备方法，其特征在于，
所述无血清培养基包括完全培养基和不完全培养基中的一种或两种；
所述“配制无血清培养基和水解物溶液”包括：
将所述完全培养基和所述不完全培养基中的一种或两种配制成为培养基溶液；并且，
将所述水解物配制成浓度为100g/L的水解物。
6.如权利要求1所述杂交瘤细胞培养基的制备方法，其特征在于，所述“取实验血清，去除牛IgG抗体后得到无抗体血清”之后，还包括：
通过SDS-PAGE方法或HPLC方法确定所述无抗体血清中不含有所述牛IgG抗体。
7.如权利要求1所述杂交瘤细胞培养基的制备方法，其特征在于，所述“将所述无抗体血清、所述无血清培养基和所述水解物溶液进行混合，得到杂交瘤细胞培养基”之后，还包括：
将杂交瘤细胞按10-1000万/mL的接种密度接种至所述杂交瘤细胞培养基并进行培养。
8.一种杂交瘤细胞培养基，其特征在于，包括无抗体血清、无血清培养基，以及包含或不包含水解物。
9.如权利要求8所述杂交瘤细胞培养基，其特征在于，
所述无血清培养基包括完全培养基和不完全培养基中的一种或两种；
所述不完全培养基包括RPMI 1640、DMEM培养基中的一种；
所述完全培养基包括Hybridoma SFM、CD Hybridoma AGTTM中的一种；
所述水解物包括水解乳蛋白、酵母水解物、大豆水解物中的一种或多种。
10.如权利要求8所述杂交瘤细胞培养基，其特征在于，所述杂交瘤细胞培养基中，所述无抗体血清的体积比例为1-10％；
所述水解物的浓度为0-5g/L。
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