CN108421038A - 一种治疗恶性胸膜间皮瘤的基于microRNA的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种治疗恶性胸膜间皮瘤的基于microRNA的方法，中药原料组成的质量配比为：包括结合神经节苷脂GM2的抗体或其片段作为活性成分和microRNA模拟物，所述microRNA模拟物包含成熟序列和随从链，所述抗体是重组抗体，所述重组抗体是选自嵌合抗体、人源化抗体和人类抗体中的一种，所述治疗恶性胸膜间皮瘤的基于microRNA的方法的同时可以与放射疗法、热疗和光动力学相结合，本发明通过以结合神经节苷脂GM2的抗体或其片段作为活性成分和基于microRNA的microRNA模拟物为主要治疗手段，外加外科治疗、化学治疗、放射治疗、生物治疗、热疗和光动力学治疗为辅助治疗手段，两者相结合治疗，效果显著。

Description

一种治疗恶性胸膜间皮瘤的基于microRNA的方法
技术领域
本发明明属于分子生物学和癌症领域，具体涉及一种治疗恶性胸膜间皮瘤的基于microRNA的方法。
背景技术
恶性胸膜间皮瘤几乎始终是致命癌症，对其可用的治疗极少。迫切地需要新型疗法，并且失调microRNA表达提供了新型治疗靶的来源。而microRNAs(miRNAs)是近年来发现的一类长度为18-24个核苷酸的非编码小分子RNA。它主要通过与靶标基因3’UTR的完全或不完全配对，降解靶标基因mRNA或抑制其翻译，从而参与调控个体发育、细胞凋亡、增殖及分化等生命活动。实验证据表明，miRNA可以担任抑癌基因或者癌基因，与肿瘤的形成有着密切的联系，其中所述成熟microRNA链通过碱基对互补性而与其靶mRNA缔合。在相对少见的其中microRNA碱基与mRNA靶完美配对的情况下，所述microRNA链促进mRNA降解。
另外，虽然较为容易在体外使用，但是在体内功效方面，microRNA模拟物通常效果不佳，原因在于两个问题：一、活性差(包括低RISC结合和脱靶效应)，二、非有效递送(与稳定性以及对作用部位的特异性/选择性分布相关)。如所提及，多个研究已概括了mPM中的基因表达。这是为了理解疾病过程以及识别潜在靶。这些研究已表征了代谢和细胞循环基因在mPM中的一般上调，以及细胞凋亡基因的额外变化，所述额外变化伴有与耐化学疗法性有关的改变的细胞凋亡响应。目前为止，由于认为microRNA是基因表达的全局调节剂，所以microRNA表达的下调表示对基因家族的上调的潜在解释(即，microRNA表达的损失导致靶基因上调)。
发明内容
针对以上问题，本发明提供了一种治疗恶性胸膜间皮瘤的基于microRNA的方法，，可以有效解决背景技术中的问题。
为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：一种治疗恶性胸膜间皮瘤的基于microRNA的方法，包括结合神经节苷脂GM2的抗体或其片段作为活性成分和microRNA模拟物，所述microRNA模拟物包含成熟序列和随从链，所述成熟序列包含选自由SEQIDNOS：11-14组成的组的序列，所述随从链包含选自由SEQIDNOS：15-18组成的组的序列，且所述随从链通过化学改性而钝化，所述抗体是重组抗体，且其中所述抗体是包含分别具有SEQIDNO：1至3的氨基酸序列的重链互补决定区1至3和分别具有SEQIDNO：4至6的氨基酸序列的轻链CDR1至3的抗体，所述抗体是选自下列中的一种：包含具有SEQIDNO：7的氨基酸序列的H-链可变区和具有SEQIDNO：8的氨基酸序列的L-链可变区的抗体；包含具有SEQIDNO：7的氨基酸序列的VH和具有SEQIDNO：9的氨基酸序列的VL的抗体；包含具有SEQIDNO：10的氨基酸序列的VH和具有SEQIDNO：8的氨基酸序列的VL的抗体；和包含具有SEQIDNO：10的氨基酸序列的VH和具有SEQIDNO：11的氨基酸序列的VL的抗体。
根据上述技术方案，所述microRNA模拟物包括同时或连续地共施用助剂抗癌疗法。
根据上述技术方案，所述成熟序列在5’端的位置2-7或1-6处含有AGCAGC。
根据上述技术方案，所述重组抗体是选自嵌合抗体、人源化抗体和人类抗体中的一种。
根据上述技术方案，所述助剂包含至少一种合用药。
根据上述技术方案，所述合用药是选自化疗药剂和蛋白质药物中的至少一种。
根据上述技术方案，所述治疗恶性胸膜间皮瘤的基于microRNA的方法的同时可以与放射疗法、热疗和光动力学相结合。
根据上述技术方案，所述放射疗法是通过电离辐射来杀死肿瘤细胞，达到治疗肿瘤的目的，放射治疗在肿瘤治疗过程中发挥着重要重要，据统计大约有70％以上的恶性肿瘤需要使用放疗，目前放疗使用的放射源主要有三类：一、放射性核素产生的α、β、γ射线；二、X线治疗机和各类加速器产生的不同能量的X射线；三、各类加速器产生的电子束、质子束、中子束等离子射线，上述各种射线都具有不同程度的组织穿透能力，当射线穿过人体组织细胞时，细胞内部发生电离，破坏细胞结构，从而抑制或杀灭肿瘤以达到治疗肿瘤的目的，根据放疗方法不同，可分为体外照射、体内照射、内用核素照射，通常我们说的放疗是指外照射放疗，依据病情需要，放疗又分为根治性放疗、姑息性放疗、术前放疗、术后放疗等等，随着放射治疗机的更新换代、计算机技术的发展，放射治疗技术越来越先进，新的技术层出不穷，放疗技术正在由常规放疗向精确放疗过渡，放疗患者的疗效逐渐提高，放疗副作用明显减轻，生存质量明显提高，新的放疗技术主要包括“X刀”、三维适形放疗、调强放射治疗等，这些放疗技术的先进性以及广泛被医生和病人接受主要体现在其治疗的精确性，保证治疗效果，减少放疗副作用。
根据上述技术方案，所述热疗是通过加温的方法，改变肿瘤细胞所处环境，使肿瘤细胞变性、坏死，达到治疗目的，热疗可分为全身热疗和局部热疗两类，全身热疗可通过血液体外循环加热或将人体置于热环境中加温，局部热疗的种类繁多，如通过微波、超声波、红外线等使肿瘤局部高温，肿瘤细胞变性坏死，一些晚期或局部晚期的肿瘤患者通过热疗可以减轻症状，改善生存质量，起到较好的姑息治疗作用。
根据上述技术方案，所述光动力学治疗是利用肿瘤细胞选择性吸收光敏剂，然后利用特定波长的非热激光照射病变部位，使肿瘤组织中的光敏剂发生剧烈的光化学反应，从而选择性消灭肿瘤细胞，光动力学治疗主要应用于不适合手术、放化疗的肿瘤患者。
本发明的有益效果：
本发明通过以结合神经节苷脂GM2的抗体或其片段作为活性成分和基于microRNA的microRNA模拟物为主要治疗手段，外加外科治疗、化学治疗、放射治疗、生物治疗、热疗和光动力学治疗为辅助治疗手段，两者相结合治疗，效果显著。
附图说明
图1为抗体浓度与细胞毒性的关系图；
图2为基于microRNA治疗恶性间皮瘤的关系图；
图3为恶性间皮瘤与其他肺及胸膜疾病患者SMPP水平增高的频率表；
图4为治疗天数与注入到REN细胞中助剂的关系表。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
实施例1：
一种治疗恶性胸膜间皮瘤的基于microRNA的方法，包括结合神经节苷脂GM2的抗体或其片段作为活性成分和microRNA模拟物，所述microRNA模拟物包含成熟序列和随从链，所述成熟序列包含选自由SEQIDNOS：11-14组成的组的序列，所述随从链包含选自由SEQIDNOS：15-18组成的组的序列，且所述随从链通过化学改性而钝化，所述抗体是重组抗体，且其中所述抗体是包含分别具有SEQIDNO：1至3的氨基酸序列的重链互补决定区1至3和分别具有SEQIDNO：4至6的氨基酸序列的轻链CDR1至3的抗体，所述抗体是选自下列中的一种：包含具有SEQIDNO：7的氨基酸序列的H-链可变区和具有SEQIDNO：8的氨基酸序列的L-链可变区的抗体；包含具有SEQIDNO：7的氨基酸序列的VH和具有SEQIDNO：9的氨基酸序列的VL的抗体；包含具有SEQIDNO：10的氨基酸序列的VH和具有SEQIDNO：8的氨基酸序列的VL的抗体；和包含具有SEQIDNO：10的氨基酸序列的VH和具有SEQIDNO：11的氨基酸序列的VL的抗体。
所述成熟序列在5’端的位置2-7或1-6处含有AGCAGC，重组抗体是选自嵌合抗体、人源化抗体和人类抗体中的一种，所述合用药是选自化疗药剂和蛋白质药物中的至少一种，所述治疗恶性胸膜间皮瘤的基于microRNA的方法的同时可以与放射疗法、热疗和光动力学相结合
所述放射疗法是通过电离辐射来杀死肿瘤细胞，达到治疗肿瘤的目的，放射治疗在肿瘤治疗过程中发挥着重要重要，据统计大约有70％以上的恶性肿瘤需要使用放疗，目前放疗使用的放射源主要有三类：一、放射性核素产生的α、β、γ射线；二、X线治疗机和各类加速器产生的不同能量的X射线；三、各类加速器产生的电子束、质子束、中子束等离子射线，上述各种射线都具有不同程度的组织穿透能力，当射线穿过人体组织细胞时，细胞内部发生电离，破坏细胞结构，从而抑制或杀灭肿瘤以达到治疗肿瘤的目的，根据放疗方法不同，可分为体外照射、体内照射、内用核素照射，通常我们说的放疗是指外照射放疗，依据病情需要，放疗又分为根治性放疗、姑息性放疗、术前放疗、术后放疗等等，随着放射治疗机的更新换代、计算机技术的发展，放射治疗技术越来越先进，新的技术层出不穷，放疗技术正在由常规放疗向精确放疗过渡，放疗患者的疗效逐渐提高，放疗副作用明显减轻，生存质量明显提高，新的放疗技术主要包括“X刀”、三维适形放疗、调强放射治疗等，这些放疗技术的先进性以及广泛被医生和病人接受主要体现在其治疗的精确性，保证治疗效果，减少放疗副作用。
所述热疗是通过加温的方法，改变肿瘤细胞所处环境，使肿瘤细胞变性、坏死，达到治疗目的，热疗可分为全身热疗和局部热疗两类，全身热疗可通过血液体外循环加热或将人体置于热环境中加温，局部热疗的种类繁多，如通过微波、超声波、红外线等使肿瘤局部高温，肿瘤细胞变性坏死，一些晚期或局部晚期的肿瘤患者通过热疗可以减轻症状，改善生存质量，起到较好的姑息治疗作用。
所述光动力学治疗是利用肿瘤细胞选择性吸收光敏剂，然后利用特定波长的非热激光照射病变部位，使肿瘤组织中的光敏剂发生剧烈的光化学反应，从而选择性消灭肿瘤细胞，光动力学治疗主要应用于不适合手术、放化疗的肿瘤患者。
实施例2：
一种治疗恶性胸膜间皮瘤的基于microRNA的方法，MicroRNA模拟物可通过适用于向受试者的癌细胞递送这些化合物的任何方式来施用给所述受试者，例如，microRNA模拟物可通过合适于受试者的转染细胞的方法，用所述模拟物、或用包含编码这些化合物的序列的核酸来施用，所述microRNA模拟物包括同时或连续地共施用助剂抗癌疗法，所述助剂包含至少一种合用药，所述用助剂为ERβ激动剂和含铂抗癌药物，同时ERβ激动剂和含铂抗癌药物可以与其他适用于治疗间皮瘤的试剂(例如培美曲塞)(如图4所示)组合使用，这种组合的单独组分可以在治疗过程中的不同时间点分别给予，或以分开的或单一的组合物形式同时给予在其中含铂抗癌药物是顺铂的实施方案中，给予其他化疗药物，优选所述其他化疗药物是培美曲塞，例如，可以以在医师案头参考(PDR)中指示的量，或者由本领域普通技术人员以其他方式确定的量给予培美曲塞，例如，在连同顺铂一起的21天周期的第一天，历时10分钟静脉内输注给予500mg/m2培美曲塞，在培美曲塞给药结束后大约30分钟，开始以75mg/m2的剂量历时2小时输注顺铂，随后休息20天，在这段休息时间内不再给予培美曲塞或顺铂，根据MPM的阶段可将所述周期重复一次或数次，这是恶性胸膜间皮瘤的治疗标准。
实施例3：
在基于microRNA治疗恶性胸膜间皮瘤同时可以加以其他的治疗方法进行辅助治疗如：
肿瘤的外科治疗：肿瘤的外科治疗是通过手术的方法将肿瘤病灶清除达到治疗目的，手术切除肿瘤不受生物学特性的限制，对大部分尚未扩散的肿瘤常可通过手术治愈，同时手术可以了解肿瘤的正确部位，得到正确的分期，从而指导进一步的治疗，对于大多数早中期的恶性肿瘤患者来说手术是首选的、有效的治疗方法，但是它也有其自身的缺点，如对患者造成新的创伤；部分正常组织切除可能产生某些功能障碍或后遗症等；当肿瘤浸润范围太大或侵犯重要脏器和大血管时往往不能手术，或实施手术也不能治愈，手术是局部治疗肿瘤的方法，它无法防止癌细胞的远处转移及消灭循环血中的癌细胞，所以并不是所有的恶性肿瘤都适合手术治疗，
肿瘤的化学治疗：肿瘤的化学治疗简称为化疗，即用化学药物治疗恶性肿瘤，多种化学药物作用于细胞生长繁殖的不同环节，抑制或杀灭肿瘤细胞，达到治疗目的，随着化疗药物种类的逐渐增多，用药方法的不断改进，临床经验的不断积累，临床疗效日益提高，化疗已从以前的姑息性治疗向根治性治疗过渡，过去的化疗以全身治疗为主，现在有些肿瘤可用化学药物进行局部治疗，如介入治疗等，减轻或避免化疗药物的全身毒副作用，根据其化学结构和作用机理不同化疗药物可分为多种类型，包括烷化剂类如环磷酰胺、环己亚硝脲等；抗代谢类如氟脲嘧啶、阿糖胞苷等；抗生素类如阿霉素、丝裂霉素等；植物类如长春新碱、紫杉醇等；激素类及其它类药物，各类药物选择性的搭配在一起，形成各种化疗方案，或单药使用治疗各种肿瘤，
肿瘤的生物治疗：生物治疗是指通过生物反应调节剂(BRM)调动宿主的天然防卫机制或给予机体某些物质来取得抗肿瘤的效应，达到治疗肿瘤目的，BRM的概念涉及的范围较广，既包括一大类天然产生的生物物质又包括能改变体内宿主和肿瘤平衡状态的方法和手段，主要有(1)细胞因子：如白细胞介素(IL)、干扰素(IFN)、肿瘤坏死因子(TNF)等；(2)抗肿瘤的体细胞和辅助性的造血干细胞：如LAK细胞、TIL细胞、TAK细胞等；(3)抗体：包括各类抗肿瘤单克隆抗体、抗细胞表面标记抗体等；(4)基因治疗；(5)肿瘤疫苗；(6)抗血管生存剂；(7)细胞分化诱导剂；等等，生物治疗应用于临床的时间较短，其在治疗恶性肿瘤中的地位还比不上手术、放疗和化疗等方法，但是随着现代生物技术的发展，生物治疗在临床运用逐渐增多，并取得令人满意的结果，其地位日趋重要，已经成为治疗肿瘤的第四大手段。
基于上述，本发明的优点在于，本发明通过以结合神经节苷脂GM2的抗体或其片段作为活性成分和基于microRNA的microRNA模拟物为主要治疗手段，外加外科治疗、化学治疗、放射治疗、生物治疗、热疗和光动力学治疗为辅助治疗手段，两者相结合治疗，效果显著。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种治疗恶性胸膜间皮瘤的基于microRNA的方法，其特征在于：包括结合神经节苷脂GM2的抗体或其片段作为活性成分和microRNA模拟物，所述microRNA模拟物包含成熟序列和随从链，所述成熟序列包含选自由SEQIDNOS：11-14组成的组的序列，所述随从链包含选自由SEQIDNOS：15-18组成的组的序列，且所述随从链通过化学改性而钝化，所述抗体是重组抗体，且其中所述抗体是包含分别具有SEQIDNO：1至3的氨基酸序列的重链互补决定区1至3和分别具有SEQIDNO：4至6的氨基酸序列的轻链CDR1至3的抗体，所述抗体是选自下列中的一种：包含具有SEQIDNO：7的氨基酸序列的H-链可变区和具有SEQIDNO：8的氨基酸序列的L-链可变区的抗体；包含具有SEQIDNO：7的氨基酸序列的VH和具有SEQIDNO：9的氨基酸序列的VL的抗体；包含具有SEQIDNO：10的氨基酸序列的VH和具有SEQIDNO：8的氨基酸序列的VL的抗体；和包含具有SEQIDNO：10的氨基酸序列的VH和具有SEQIDNO：11的氨基酸序列的VL的抗体。
2.根据权利要求书1所述的一种治疗恶性胸膜间皮瘤的基于microRNA的方法，其特征在于：所述microRNA模拟物包括同时或连续地共施用助剂抗癌疗法。
3.根据权利要求书1所述的一种治疗恶性胸膜间皮瘤的基于microRNA的方法，其特征在于：所述成熟序列在5’端的位置2-7或1-6处含有AGCAGC。
4.根据权利要求书1所述的一种治疗恶性胸膜间皮瘤的基于microRNA的方法，其特征在于：所述重组抗体是选自嵌合抗体、人源化抗体和人类抗体中的一种。
5.根据权利要求书2所述的一种治疗恶性胸膜间皮瘤的基于microRNA的方法，其特征在于：所述助剂包含至少一种合用药。
6.根据权利要求书5所述的一种治疗恶性胸膜间皮瘤的基于microRNA的方法，其特征在于：所述合用药是选自化疗药剂和蛋白质药物中的至少一种。
7.根据权利要求书1所述的一种治疗恶性胸膜间皮瘤的基于microRNA的方法，其特征在于：所述治疗恶性胸膜间皮瘤的基于microRNA的方法的同时可以与放射疗法、热疗和光动力学相结合。
8.根据权利要求书7所述的一种治疗恶性胸膜间皮瘤的基于microRNA的方法，其特征在于：所述放射疗法是通过电离辐射来杀死肿瘤细胞，达到治疗肿瘤的目的，放射治疗在肿瘤治疗过程中发挥着重要重要，据统计大约有70％以上的恶性肿瘤需要使用放疗，目前放疗使用的放射源主要有三类：一、放射性核素产生的α、β、γ射线；二、X线治疗机和各类加速器产生的不同能量的X射线；三、各类加速器产生的电子束、质子束、中子束等离子射线，上述各种射线都具有不同程度的组织穿透能力，当射线穿过人体组织细胞时，细胞内部发生电离，破坏细胞结构，从而抑制或杀灭肿瘤以达到治疗肿瘤的目的，根据放疗方法不同，可分为体外照射、体内照射、内用核素照射，通常我们说的放疗是指外照射放疗，依据病情需要，放疗又分为根治性放疗、姑息性放疗、术前放疗、术后放疗等等，随着放射治疗机的更新换代、计算机技术的发展，放射治疗技术越来越先进，新的技术层出不穷，放疗技术正在由常规放疗向精确放疗过渡，放疗患者的疗效逐渐提高，放疗副作用明显减轻，生存质量明显提高，新的放疗技术主要包括“X刀”、三维适形放疗、调强放射治疗等，这些放疗技术的先进性以及广泛被医生和病人接受主要体现在其治疗的精确性，保证治疗效果，减少放疗副作用。
9.根据权利要求书7所述的一种治疗恶性胸膜间皮瘤的基于microRNA的方法，其特征在于：所述热疗是通过加温的方法，改变肿瘤细胞所处环境，使肿瘤细胞变性、坏死，达到治疗目的，热疗可分为全身热疗和局部热疗两类，全身热疗可通过血液体外循环加热或将人体置于热环境中加温，局部热疗的种类繁多，如通过微波、超声波、红外线等使肿瘤局部高温，肿瘤细胞变性坏死，一些晚期或局部晚期的肿瘤患者通过热疗可以减轻症状，改善生存质量，起到较好的姑息治疗作用。
10.根据权利要求书7所述的一种治疗恶性胸膜间皮瘤的基于microRNA的方法，其特征在于：所述光动力学治疗是利用肿瘤细胞选择性吸收光敏剂，然后利用特定波长的非热激光照射病变部位，使肿瘤组织中的光敏剂发生剧烈的光化学反应，从而选择性消灭肿瘤细胞，光动力学治疗主要应用于不适合手术、放化疗的肿瘤患者。
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