CN108375530A - 一种基于激光诱导荧光的生物气溶胶实时检测方法及装置 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种基于激光诱导荧光的生物气溶胶实时检测方法及装置,其主要部件包括光路、与光路相交的气路、与光路连接的信号处理系统。光路包括激光发射光路、散射光接收光路和荧光接收光路;气路用于采样被测粒子;信号处理系统用于分析和处理信号,包括散射光处理系统和荧光处理系统。本发明基于激光诱导荧光的原理,可同时实现对空气中微生物颗粒物以及非生物颗粒物的粒径、浓度的实时监测。通过单个粒子在激光照射下产生的散射光和荧光信号判断被检测颗粒的粒径大小和生物属性,并对采样气流中的粒子进行计数,实现空气微生物浓度的自动化检测,操作简便,监测实时性强、灵敏度高、准确度高。
Description
技术领域
本发明属于空气微生物和颗粒物监测领域,具体涉及一种生物气溶胶实时监测方法及其装置,可监测空气中细菌、真菌等微生物颗粒物的浓度、数量、粒径等。
背景技术
空气中可以存活的微生物主要有:(一)细菌和病毒。室内主要的细菌和病毒有溶血性链球菌、绿色链球菌、肺炎双球菌、流感病毒、脑膜炎球菌、结核杆菌、麻疹病毒等。这些细菌和病毒可依附在空气中的尘埃上进行传播。人们通过说话、咳嗽、打喷嚏等活动,可以将口腔、咽喉、气管、肺部的病原微生物通过飞沫喷入空气,传播给别人。室内空气中,特别在通风不良、人员拥挤的环境中可有较多的致病微生物存在。(二)军团菌。军团菌属于革兰氏阴性杆菌,又称作军团杆菌,是水及潮湿空气中常见的一群微生物,其存在的环境是天然淡水源。它的最适宜生存温度为35℃,pH值为6.9~7.0军团杆菌广泛存在于土壤和水体中,抵抗力较强,在自然环境中(例如自来水中)至少可以存活1年以上,在蒸馏水中也能存活100天左右。军团杆菌病的爆发时间一般是在仲夏和初秋,且易发生在封闭式中央空调房间内。除空气中原有的一些微生物外,也存在来自由人体、动物、土壤和植物碎屑携带的细菌和病毒的某些病原微生物。许多病毒如流感、非典型性肺炎等病毒可以通过空气、唾液传播。(三)真菌。室内空气中的含毒素真菌包括葡萄穗霉、曲霉菌、灰黄青霉和镰刀菌类;致病真菌包括烟曲霉菌、组织胞浆菌和隐球酵母菌。真菌需要养分、水分和真菌孢子,方可大量繁殖,通过空气传播。真菌是自然界分布最广的一类生物体,在亚洲、非洲的温、湿度较高的地区,适合真菌生长。人们受真菌的感染,易患脚气、皮炎、皮癣、湿疹等症。有些真菌能通过其毒性代谢物霉菌毒素致癌。(四)尘螨。尘螨普遍存在于人类居住和工作的环境中,适宜在空气流通情况差,温度、湿度适合,且密闭的环境中生存,对环境的抵抗力很弱。尘螨是一种极强的变应原,能引起呼吸道过敏和皮肤过敏,主要症状是哮喘、过敏性皮炎、过敏性鼻炎、荨麻疹等。微生物能产生各种休眠体,可在空气中长时间存活,并借助空气介质扩散和传输,从而导致各种传染病的爆发与蔓延,造成严重危害。
微生物颗粒物在空气中主要以气溶胶的形式存在,其含有多种有机分子,其中主要的荧光物质为色氨酸、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)、核黄素等。生物体的这些代谢物在紫外光或蓝紫光照射下会发出本征荧光,其中,烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)发射谱范围主要在480~600nm之间,其中490~530nm是最强信号;核黄素发射光谱范围主要在500~620nm之间,其中530~560nm是最强信号。不同的微生物颗粒物所含的成分往往不同,如细菌、真菌、孢子中往往含有上述各种有机分子,而病毒、毒素中一般仅含有氨基酸成分。所以,不同的微生物颗粒物呈现不同的光吸收与发光特性。
生物气溶胶的监测适用于对如医药工业洁净室、医院洁净手术室等需要高洁净度的环境空气质量的的空间的评价以及对人流密集场所、流感高发区诸如列车车厢、车站候车大厅、商场、养殖场等地的环境空气质量的评价和预警。
现有的微生物检测方法主要是浮游菌采样培养法:通过浮游菌采样器收集悬浮在空气中的活性微生物颗粒物于培养皿的培养基上,在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数,以培养皿中的菌落数来判定洁净环境内的活微生物数,并以此来评定洁净室(或洁净区)的微生物颗粒物洁净度。
上述现有方法存在如下缺点:(一)由于待测样品不易完全分散成单个细胞,故所形成的菌落并非都是单菌落,有一部分是由两个以上的细胞长成的,因此平板菌落计数的检测结果会比实际菌落数偏低。(二)有些细菌是无法培养检测的,或培养基只能选择培养部分菌种,因此限制了此类方法的应用范围。(三)此种方法检测周期长、空间分离培养的自动化操作较难实现。
此外近年来微生物颗粒物实时监测装置亦有所发展,如中国无锡迈通科学仪器有限公司的气溶胶实时监测仪(专利申请号:201610084385.3)、南京先进激光技术研究院的微生物颗粒物光学检测系统(专利申请号:201510968715.0)、中国科学院上海光学精密机械研究所的微生物颗粒物激光监测预警与鉴别装置及方法(专利申请号:201610381982.2)。本专利提出的一种基于激光诱导荧光的实时生物气溶胶检测装置可同时实现对微生物颗粒物以及非微生物颗粒物的识别以及浓度计算,本装置内部构造有所不同,具有设备制造难度较小、准度较高等优点。
发明内容
发明目的:本发明提供了一种实时生物气溶胶的检测方法及检测装置,能同时监测空气中微生物颗粒物以及非微生物颗粒物的浓度,通过对微生物颗粒物以及非微生物颗粒物的识别区分,实现了实时监测空气中微生物颗粒物的浓度、数量并提高了监测准确率。
技术方案:一种实时生物气溶胶检测装置,包括光路,与光路相交的气路,与光路连接的信号处理系统:
光路,包括用于照射被测粒子的激光发射光路、接收散射光信号的散射光收集光路和接收荧光信号的荧光收集光路。
气路,用于采样被测粒子,最小探测分辨率为一个微生物颗粒物。
光信号处理系统,用于分析和处理信号,包括散射光前置放大器31和荧光前置放大器35。
所述激光发射光路包括激光发射器101、平凸柱面镜102、光阱104,半导体激光器101发出的激光束被平凸柱面镜102一维聚焦成细长光斑,用于照射被测粒子。平凸柱面镜102的焦点处形成的光照射区域与采样气流的相交区域称为光敏感区,激光发射光路的光轴与平凸柱面镜102焦线的交点即为光敏感区的中心103。采样气流的中心轴线经过光敏感区的中心。
所述散射光收集光路包括沿收集方向上依次设置的平凸透镜109、长波截止滤光片108、平凸透镜107、散射光光阑106和散射光探测器105。平凸透镜109与光敏感区中心103的距离为其焦距,散射光光阑106位于平凸透镜107的焦点处,散射光探测器105与散射光前置放大器31相连。
所述荧光收集光路包括沿收集方向上依次设置的平凸透镜110、短波截止滤光片111、平凸透镜112、荧光光阑113和荧光探测器114。平凸透镜110与光敏感区中心103的距离为其焦距,荧光光阑113位于平凸透镜112的焦点处,荧光探测器114与荧光前置放大器35相连。
所述气路为采样气路,包括进气口、出气口及真空气泵。进气口与出气口分别位于激光发射光路与收集光路构成的平面的两侧。在真空气泵的驱动下,被采样气体从进气口进入,气体中的粒子以一定的速度逐个通过光敏感区,之后从出气口排出。
信号处理系统还包括滤波器32、A/D转换器33、上位机34。滤波器32的输入端分别与散射光前置放大器31和荧光前置放大器35相连,滤波器的输出端与A/D转换器33相连。首先对荧光信号和散射光进行光电转换,通过光电探测器将光功率转换为光电流,之后经过前置放大器将光电流转化为电压并放大,变成可检测信号。经光电器件输出的电信号中混杂着诸多高频噪声,所以将放大后的信号送至滤波器滤除信号中的高频噪声,再经A/D转换器33将信号变为数字信号,由通讯接口送至上位机34进行分析、显示等处理,最终计算出各个粒径段内的粒子的数量以及微生物颗粒物的数量。
所述激光发射器的波长为405nm的半导体激光器,可有效探测生物活性物质NADH、核黄素等,诱导其激发荧光。
工作原理:半导体激光器101发出405nm激光,在平凸柱面镜102的作用下,平行光截面从圆形变为矩形(垂直方向上的光被聚焦),焦线与气路管道中轴线相交,形成光敏感区,穿过光敏感区的激光进入光阱104被吸收。待测离子在气泵的作用下,通过进气口进入光敏感区,发出散射光。若是微生物颗粒物,还会发出本征荧光。在垂直于激光发射光路的左侧是散射光信号接收系统,混合光经过平凸透镜109变为平行光,在长波截止滤光片108的作用下得到散射光,再经平凸透镜107汇聚后被散射光探测器105(光电二极管)吸收,进入散射光信号处理系统。在垂直于激光发射光路的右侧是荧光信号接收系统,混合光经过平凸透镜110变为平行光,在短波截止滤光片111的作用下得到荧光,再经平凸透镜112汇聚后被荧光探测器114(光电二极管)吸收,进入荧光信号处理系统。若不是微生物颗粒物,则不会接收到荧光信号。散射光信号经过散射光探测器(光电二极管)105后转化为电流信号,该电流信号极其微弱,经过散射光前置放大器31后光电流转化为电压并放大,变成可检测信号。经光电器件输出的电信号中混杂着诸多高频噪声,所以将放大后的信号送至滤波器32滤除信号中的高频噪声,再经A/D转换器33将信号变为数字信号,由通讯接口送至上位机进行分析、显示等处理,可计算出各个粒子的粒径大小,最终得到各个粒径段内的粒子的数量。荧光信号经过荧光探测器114(光电二极管)后转化为电流信号,该电流信号极其微弱,经过荧光前置放大器35后光电流转化为电压并放大,变成可检测信号。经光电器件输出的电信号中混杂着诸多高频噪声,所以将放大后的信号送至滤波器32滤除信号中的高频噪声,再经A/D转换器33将信号变为数字信号,由通讯接口送至上位机34进行分析、显示等处理,可得到该微生物颗粒所发出的荧光强度信息,从而可对微生物颗粒进行简单的分类和统计。
与现有技术相比,本发明技术方案的有益效果如下:
(1)可实现对空气微生物浓度的自动化监测,操作简便。打开仪器开关即可对环境空气微生物浓度进行监测,得到实时数据,无需培养等复杂操作,对操作人员的技能要求低。
(2)检测灵敏度高,实时性强。传统培养法耗时长,往往需要几天以后才能测出当时的微生物浓度。本发明针对单个粒子进行散射光和荧光分析,因此当空气微生物浓度较低时照样能检测到微生物的存在,因此灵敏度较高。
(3)检测精确度较高。传统培养法只能检测到可培养的微生物数量,本发明能够对大多数的微生物进行检测。
附图说明
图1为本发明中散射光收集光路、荧光收集光路和激光发射光路示意图;
图2为气路和激光发射光路的示意图;
图3为信号处理系统的示意图。
图4为本发明的三维模型图。
具体实施方式
以下结合附图通过实施例对本发明做进一步说明,以便更好地理解本发明。
如图1所示,激光发射光路包括半导体激光器101、平凸柱面镜102、光阱104。半导体激光器发出的激光经过平凸柱面镜102被一维聚焦成细长光斑。柱面镜102的焦线与气路管道的中轴线相交,形成光敏感区,相交点即为光敏感区的中心103。
散射光收集光路包括沿垂直于激光照射方向向左的平凸透镜109、长波截止滤光片108、平凸透镜107、散射光光阑106、散射光探测器105。混合光经过平凸透镜109变为平行光,在长波截止滤光片108的作用下得到散射光,再经平凸透镜107汇聚后被散射光探测器105(光电二极管)吸收,进入散射光信号处理系统。光阑106用于消除杂散光。
荧光收集光路包括沿垂直于激光照射方向向右的平凸透镜110、短波截止滤光片111、平凸透镜112、荧光光阑113、荧光探测器114。混合光经过平凸透镜110变为平行光,在短波截止滤光片111的作用下得到荧光,再经平凸透镜112汇聚后被荧光探测器114(光电二极管)吸收,进入荧光信号处理系统。光阑113用于消除杂散光。
散射光信号经过散射光探测器105(光电二极管)后转化为电流信号,该电流信号极其微弱,经过前置放大器31后光电流转化为电压并放大,变成可检测信号,经过上述步骤检测到一次电流信号即为检测到一个颗粒物。经光电器件输出的电信号中混杂着诸多高频噪声,所以将放大后的信号送至滤波器32滤除信号中的高频噪声,再经A/D转换器33将信号变为数字信号,由通讯接口送至上位机34进行分析、显示等处理,可计算出各个粒子的粒径大小,最终得到各个粒径段内的粒子的数量。
荧光信号经过荧光探测器114(光电二极管)后转化为电流信号,该电流信号极其微弱,经过前置放大器35后光电流转化为电压并放大,变成可检测信号,经过上述步骤检测到一次电流信号即为检测到一个微生物颗粒物。经光电器件输出的电信号中混杂着诸多高频噪声,所以将放大后的信号送至滤波器32滤除信号中的高频噪声,再经A/D转换器33将信号变为数字信号,由通讯接口送至上位机34进行分析、显示等处理,可得到该微生物颗粒所发出的荧光强度信息,从而可对微生物颗粒进行简单的分类和统计。
本发明的半导体激光器101采用波长为405nm的半导体激光器,功率为200mW。可有效激发微生物颗粒中的核黄素、NADH发出本征荧光。平凸透镜102的焦距为47.4mm。进气口和出气口的直径均为6mm,中间气路管道的直径为2mm,空气采样流量为流量1L/min,管内气流雷诺数为400~2500。光阱104由吸收玻璃和内壁具有消光纹的光陷阱座组成。吸收玻璃的外形为具有45°斜面的圆柱体,材料采用中性灰色玻璃,45°斜面抛光后镀405nm高透膜。平凸透镜107、平凸透镜109、平凸透镜110、平凸透镜112均为非球面透镜且焦距均为55mm。平凸透镜109和平凸透镜110与光敏感区中心103所张的平面角为48.88°,立体角为0.1792π。长波截止滤光片108的截止波长为420nm,短波截止滤光片111的截止波长为420nm。光阑106和光阑113的通光孔径均为2.0mm,材质为铜。光电二极管105和光电二极管114均采用硅光电二极管,感光面积5.8×5.8mm2,光响应范围均为320~730nm。
Claims (10)
1.一种基于激光诱导荧光的生物气溶胶实时检测方法及装置,其特征在于:包括光路,与光路相交的气路,与光路连接的信号处理系统。
2.如权利要求1所述的一种基于激光诱导荧光的生物气溶胶实时检测方法及装置,其特征在于:所述激光发射光路包括激光发射器101、平凸柱面镜102、光阱104,所述光敏感区位于激光激发光路与气路的相交区域,柱面镜的焦点位于所述光路和气路交汇形成的光敏感区。
3.如权利要求1所述的一种基于激光诱导荧光的生物气溶胶实时检测方法及装置,其特征在于:所述散射光收集光路包括沿收集方向上依次设置的平凸透镜109、长波截止滤光片108、平凸透镜107、散射光光阑106和散射光探测器105,散射光光阑106位于平凸透镜107的焦点处,散射光探测器105与散射光前置放大器相连31。
4.如权利要求1所述的一种基于激光诱导荧光的生物气溶胶实时检测方法及装置,其特征在于:所述荧光收集光路包括沿收集方向上依次设置的平凸透镜110、短波截止滤光片111、平凸透镜112、荧光光阑113和荧光探测器114,荧光光阑113位于平凸透镜112的焦点处,荧光探测器114与荧光前置放大器35相连。
5.如权利要求1所述的一种基于激光诱导荧光的生物气溶胶实时检测方法及装置,其特征在于:所述散射光收集光路采用420nm长波截止滤光片,可最大程度接收散射光信号同时过滤荧光信号。
6.如权利要求1所述的一种基于激光诱导荧光的生物气溶胶实时检测方法及装置,其特征在于:所述荧光收集光路采用420nm短波截止滤光片,可最大程度接收生物颗粒发出的荧光信号同时过滤散射光信号。
7.如权利要求1所述的一种基于激光诱导荧光的生物气溶胶实时检测方法及装置,其特征在于:所述荧光收集光路和散射光收集光路均与激光发射光路垂直。
8.如权利要求1所述的一种基于激光诱导荧光的生物气溶胶实时检测方法及装置,其特征在于:中间通气管道气体流动雷诺数为400~2500。
9.如权利要求1所述的一种基于激光诱导荧光的生物气溶胶实时检测方法及装置,其特征在于:信号处理系统包括荧光探测器114、散射光探测器105、荧光前置放大器35、散射光前置放大器31、滤波器32、A/D转换器33、上位机34。
10.如权利要求1所述的一种基于激光诱导荧光的生物气溶胶实时检测方法及装置,其特征在于:在垂直于激光发射光路的左侧是散射光信号接收系统,右侧是荧光信号接收系统。
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