CN108371961B - 具有显色本底检测功能的微流控芯片及其检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种具有显色本底检测功能的微流控芯片及其检测方法。该微流控芯片包括芯片本体；芯片本体上分别设置有进样模块、微流控流道、反应模块以及废液模块；进样模块的出样端通过微流控流道与反应模块、废液模块顺序连通；所述进样模块的出样端与反应模块之间的微流控流道上设置有显色液本底检测窗口。由此可知：本发明能够在芯片进行显色操作步骤时，显色液进入反应腔中进行显色反应前，预先检测出显色液的本底数值，通过比较该本底数值和反应模块中的显色液数值，从而提高芯片检测结果准确率。

Description

具有显色本底检测功能的微流控芯片及其检测方法

技术领域

本发明涉及一种微流控芯片，尤其是一种具有显色本底检测功能的微流控芯片及其检测方法。

背景技术

免疫侧向层析诊断技术作为一种稳定和实用的技术适合在多样的即时检验(POCT)或者现场使用。

在免疫层析反应系统中，由于系统原因导致CV大，无法达到精确定量。而基于微流控技术的免疫诊断方法，可以有效的避免上述问题。

微流控又分被动式和主动式两种。被动式微流控还是需要毛细血管力来达到液体向前的侧向层析。但是由于不同样本特别是全血样本的粘稠度不同，导致液体流速无法统一。

主动式微流控可以有效避免上述问题，可以给向前的推力，使液体均匀的向前流动，避免因为不同流速导致的测试值差异。

主动式微流控的动力有离心力驱动、电润湿驱动、压力驱动(电解泵、压缩气体泵、化学分解泵、直接气压差驱动)

但是如果要达到随意控制液体速度的目的，不但要有推动力，还要有阀门控制，还要有防回流免得液体，因为压力去除，回流回去。

现有相关技术，芯片的制作以及芯片的应用，请参考以下专利：

1)CN203899622U一种微流控芯片

2)CN106353491A微流控床旁边快速诊断试剂盒

3)CN205941345U用于生物检测的微流控芯片

4)CN2017105313010

其中，专利2)和3)中，未对加入到芯片中的样本液体进行定量，而要实现定量检测，必须实现对加入的样本的定量和预先放置于芯片内的试剂的定量。

专利1)，2)和3)中都未涉及液体在芯片中流动时准确位置的监测，换句话说，上述3项专利的芯片在最后的检测结果之前没有对流体在芯片内通道或腔体的填充行为做监测。

专利4)中的芯片分为上中下三个芯片，并且芯片有出样孔、清洗液孔和显色液孔等复杂的结构。本芯片将出样孔、清洗液孔和显色液孔等多孔合一，使芯片结构简单，利于工业化加工。同时只有上下两层芯片，进一步简化架构。降低加工成本。同时，本专利具有显色液本底检测功能。

在现有的微流控芯片检测时，为防止使用到因光污染而变质的显色液，一般是通过定期更换来实现的。但是，由于显色液保存环境的不同，使用到因光污染而发生质变的显色液进行芯片检测，也是时有发生的现象。因此，如何避免使用到这种变质的显色液，导致待测样本反应后的显色结果失真，影响芯片检测结果的准确性，是提高芯片检测结果准确率的一个重要问题。

另外，如果仅因为显色液本底值高，就将显色液更换，也会造成显色液的浪费。

发明内容

本发明针对现有技术的不足，提供一种具有显色本底检测功能的微流控芯片。其能够在芯片进行显色操作步骤时，显色液进入反应腔中进行显色反应前，预先检测出显色液的本底数值，通过比较该本底数值和反应模块中的显色液数值，从而提高芯片检测结果准确率。

为实现上述的技术目的，本发明采取如下的技术方案：

一种具有显色本底检测功能的微流控芯片，包括芯片本体；芯片本体上分别设置有进样模块、微流控流道、反应模块以及废液模块；进样模块的出样端通过微流控流道与反应模块、废液模块顺序连通；所述进样模块的出样端与反应模块之间的微流控流道上设置有显色液本底检测窗口。

所述进样模块的进样端通过外接流路接口与外接流路连通；所述外接流路包括外接气路、外接清洗液路、外接显色液路；外接气路、外接清洗液路、外接显色液路合并使用同一个外接流路接口；所述进样模块的出样端设置有一个横截面呈圆形设置的出样孔，且出样孔的外围设置有一锥形过渡连接面。

所述反应模块包括定量‐反应腔，该定量‐反应腔具有流体入口、流体出口；定量‐反应腔的流体入口、流体出口均分别与定量‐反应腔在芯片本体上的所在平面相垂直。

定量‐反应腔的流体入口、流体出口均分别通过一坡度斜面过渡连接至定量‐反应腔。

定量‐反应腔的横截面呈圆形设置。

所述芯片本体包括能够上下叠合成一体的上层芯片、下层芯片，且上层芯片的上表面覆盖有一层密封贴纸；所述下层芯片上分别设置有进样模块的出样端、反应模块的反应池、废液模块的废液池；上层芯片在与进样模块的出样端对应的位置处设置进样模块的进样端，在与反应池对应的位置处设置反应池盖板，在与废液池对应的位置处设置废液池盖板，同时在反应池盖板的外侧设置防漏吸水纸置放槽；防漏吸水纸置放槽，在芯片本体的水平面上能够与废液池拼接成一个沿着芯片本体整个外缘一圈设置的槽体，且防漏吸水纸置放槽的槽底设置有透气孔。

所述废液池在紧靠着池壁的位置处、沿着池壁均匀分布有若干废液池定位柱，而废液池盖板则相对于每一个废液池定位柱配置一个废液池定位孔；废液池与废液池盖板通过废液池定位柱、废液池定位孔扣接成一体；置放于废液池中的吸水纸处于各废液池定位柱围成的内圈中。

所述上层芯片上分别设置有第一防回流流道、第二防回流流道、第三防回流流道、第四防回流通道；进样模块的出样孔通过第一防回流流道与本底检测窗口连接；本底检测窗口通过第二防回流流道与反应池连通；反应池通过第三防回流流道与阀门装置连通；而阀门装置则通过第四防回流通道与废液池连通。

本发明的另一技术目的是提供一种基于上述微流控芯片的检测方法，包括以下步骤：

1)试剂芯片本体插入仪器内，读取上面信息；

2)采用移液器将样本加入进样模块的进样孔内；

3)芯片本体进入仪器内部，孵育2分钟；

4)将仪器和芯片接触装置结合；芯片接触装置包括外接流路装置、带有导电橡胶探头的阀门作动头；

5)外接流路装置中的气路装置缓慢充气，推动样本往前移动；

6)样本在气流的推动下，通过第一防回流流道进入本底检测窗口；

7)样本继续向前，经过第二防回流流道，进入反应-定量腔内；

8)样本继续向前，经过第三防回流流道，进入阀门装置内，样本一旦接触阀门内导电橡胶，电容变化会触动阀门开关，关闭阀门；同时关闭气路开关，停止加压；此时反应-定量腔内的流体处于静置状态；

9)仪器和芯片接触装置分离，混匀3-10分钟，进行免疫反应；

10)仪器和芯片接触装置结合，外接流路装置中的气路装置工作，通过气体推动样本在微流控流道中向前移动，吹干进样模块的出样孔和微流控流道中的残留样本，此时导电橡胶探头数据变回原来的值，关闭气路装置；

11)外接流路装置中的清洗液路装置启动，清洗液通过进样模块的出样孔进入微流控流道内；

12)清洗液继续向前进入反应-定量模块的反应-定量腔内；

13)清洗液继续向前，进入阀门装置内，清洗液一旦接触阀门装置内的导电橡胶，电容变化会触动阀门开关，关闭阀门装置，此时在阀门装置后面的第四防回流流道能够避免阀门装置关闭不及时的情况下，吹走液体的问题；同时关闭气路装置，停止加压；

14)混匀1-3分钟，进行清洗；

15)气路装置工作，气体推动清洗液向前移动，吹干出样孔和微流控流道中的液体，此时导电橡胶探头数据变回原来的值，关闭气路装置；

16)重复操作11)到15)步骤3-8次；

17)启动外接流路装置中的显色液液路装置，显色液通过进样模块的出样孔进入微流控流道内；

18)显色液继续向前经过本底检测窗口后，进入反应-定量模块的反应-定量腔内；19)显色液继续向前，进入阀门装置内，显色液一旦接触阀门装置内的导电橡胶，电容变化会触动阀门装置，关闭阀门装置；同时关闭气路装置，停止加压；

20)混匀3-8分钟，进行显色反应；

21)仪器和芯片接触装置分离；

22)仪器读取数据，通过分析、计算本底检测窗口、反应-定量腔的显色数据，得到检测结果；

23)仪器退出芯片，完成检测。

根据上述的技术方案，相对于现在技术，本发明具有如下的有益效果：

1、本发明在芯片本体中集成了本底检测窗口，可以在显色检测过程中，通过比对本底检测窗口检测后的显色液数值和反应-定量腔中的显色液数值，得到最终的检测结果。因此，本发明避免了化学发光显色液因在光污染等情况下，数值会变高的不稳定因素，从而有效防止显色液稳定性引起的影响产品的正常读数值现象的发生。

2、本发明只在芯片本体上设置一个进样孔，使得待测样品、清洗液、标记抗体以及显色液均可以通过该进样孔进入芯片本体的流道中，分别对应地完成芯片本体的加样操作、清洗操作、加标记抗体操作以及显色操作，即将现有技术中的出样孔、加清洗液孔、加标记抗体孔和加显色液孔合四为一，因此，本发明具有结构简单利于工业化加工的优点。另外，通过仪器软硬件的控制，能达到双抗夹心的两步法操作。避免因为一步法引起的钩状效应。

3、本发明所述的定量‐反应腔中，流体入口、流体出口的设置方式(与定量‐反应腔在芯片本体上的所在平面相垂直)，一方面避免液体因毛细血管力，流出定量‐反应腔，具有防回流功能，另一方面，若本发明所述微流控芯片是基于磁珠的芯片，则可以避免定量‐反应腔中内含的磁颗粒丢失问题。同时液体入口和出口与定量‐反应腔之间的斜坡，利于少量丢失的磁颗粒在定量‐反应腔底部强磁吸附下回收利用，进一步避免磁颗粒丢失的发生；缓坡也可以避免液体流动时气泡的产生。

4、本发明只用上下两层芯片结合加贴膜的方式，将复杂的芯片结构，精简化。显著降低成本，包括芯片材料成本、开模具的成本、和加工的成本。

附图说明

图1是本发明微流控芯片的分解结构示意图；

1‐密封贴纸；2‐上层芯片；3‐下层芯片；4‐外接流路接口；5‐外接阀门压杆；6‐导电探头；7‐防漏吸水纸；8‐导电橡胶；9‐吸水纸；

图2是本发明所述微流控芯片中，上层芯片正面的结构示意图；

20‐阀门装置；21‐上层芯片进样部位；22‐第一防回流流道；23‐第二防回流流道；24‐上层芯片反应腔观察部位；25‐第三防回流流道；26‐防漏吸水纸置放框；27‐透气孔；28‐第四防回流通道；

图3是本发明所述上层芯片背面的结构示意图；

27‐透气孔；29‐废液池盖板；29‐1、废液池定位孔；22‐1、第一防回流流道的出液孔；23‐1、第二防回流流道的进液孔；24‐1、反应池盖板；25‐1、第三防回流流道的进液口；20‐1、阀门装置的进液口；20‐2、阀门装置的出液口；28‐1、第四防回流流道的进液口。

图4是本发明所述下层芯片正面的结构示意图；

图5是本发明定量‐反应腔的结构示意图；

图4、图5中：31、进样模块的出样孔；32、本底检测窗口；33、定量‐反应腔；331、流体入口；332、流体出口；333、斜坡；34、废液池；341、定位柱。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。以下对至少一个示例性实施例的描述实际上仅仅是说明性的，决不作为对本发明及其应用或使用的任何限制。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。除非另外具体说明，否则在这些实施例中阐述的部件和步骤的相对布置、表达式和数值不限制本发明的范围。同时，应当明白，为了便于描述，附图中所示出的各个部分的尺寸并不是按照实际的比例关系绘制的。对于相关领域普通技术人员已知的技术、方法和设备可能不作详细讨论，但在适当情况下，所述技术、方法和设备应当被视为授权说明书的一部分。在这里示出和讨论的所有示例中，任何具体值应被解释为仅仅是示例性的，而不是作为限制。因此，示例性实施例的其它示例可以具有不同的值。

为了便于描述，在这里可以使用空间相对术语，如“在……之上”、“在……上方”、“在……上表面”、“上面的”等，用来描述如在图中所示的一个器件或特征与其他器件或特征的空间位置关系。应当理解的是，空间相对术语旨在包含除了器件在图中所描述的方位之外的在使用或操作中的不同方位。例如，如果附图中的器件被倒置，则描述为“在其他器件或构造上方”或“在其他器件或构造之上”的器件之后将被定位为“在其他器件或构造下方”或“在其他器件或构造之下”。因而，示例性术语“在……上方”可以包括“在……上方”和“在……下方”两种方位。该器件也可以其他不同方式定位(旋转90度或处于其他方位)。

如图1至5所示，本发明所述的具有显色本底检测功能的微流控芯片，包括芯片本体；芯片本体上分别设置有进样模块、微流控流道、反应模块以及废液模块；进样模块的出样端通过微流控流道与反应模块、废液模块顺序连通；所述进样模块的出样端与反应模块之间的微流控流道上设置有显色液本底检测窗口。

所述进样模块的进样端通过外接流路接口与外接流路连通；所述外接流路包括外接气路、外接清洗液路、外接显色液路；外接气路、外接清洗液路、外接显色液路合并使用同一个外接流路接口；所述进样模块的出样端设置有一个横截面呈圆形设置的出样孔，且出样孔的外围设置有一锥形过渡连接面。由此可知：本发明将加样孔、加清洗液孔、加标记抗体孔和加显色液孔合四为一，结构简单利于工业化加工。同时，通过仪器软硬件的控制，能达到双抗夹心的两步法操作。避免因为一步法引起的钩状效应。

所述反应模块包括定量‐反应腔，该定量‐反应腔具有流体入口、流体出口；定量‐反应腔的流体入口、流体出口均分别与定量‐反应腔在芯片本体上的所在平面相垂直。

定量‐反应腔的流体入口、流体出口均分别通过一坡度斜面过渡连接至定量‐反应腔。

定量‐反应腔的横截面呈圆形设置。

所述芯片本体包括能够上下叠合成一体的上层芯片、下层芯片，且上层芯片的上表面覆盖有一层密封贴纸；所述下层芯片上分别设置有进样模块的出样端、反应模块的反应池、废液模块的废液池；上层芯片在与进样模块的出样端对应的位置处设置进样模块的进样端，在与反应池对应的位置处设置反应池盖板，在与废液池对应的位置处设置废液池盖板，同时在反应池盖板的外侧设置防漏吸水纸置放槽；防漏吸水纸置放槽，在芯片本体的水平面上能够与废液池拼接成一个沿着芯片本体整个外缘一圈设置的槽体，且防漏吸水纸置放槽的槽底设置有透气孔。本发明将透气孔设置在上层芯片，并在该位置设置有防漏吸水纸置放槽，进一步改善防漏效果。

所述废液池在紧靠着池壁的位置处、沿着池壁均匀分布有若干废液池定位柱，而废液池盖板则相对于每一个废液池定位柱配置一个废液池定位孔；废液池与废液池盖板通过废液池定位柱、废液池定位孔扣接成一体；置放于废液池中的吸水纸处于各废液池定位柱围成的内圈中。吸水纸吸收液体，防止芯片本体漏液；同时吸水纸没有全部填满废液池，预留气体通道，避免吸水纸内液体被吹出去。

所述上层芯片上分别设置有第一防回流流道、第二防回流流道、第三防回流流道、第四防回流通道；进样模块的出样孔通过第一防回流流道与本底检测窗口连接；本底检测窗口通过第二防回流流道与反应池连通；反应池通过第三防回流流道与阀门装置连通；而阀门装置则通过第四防回流通道与废液池连通。

综上所述，可知本发明所述的微流控芯片，具有以下优点：

本发明创造性增加显色液本底检测窗口，可以及时检测显色液具体数值，并在反应槽检测数值后，减除显色液的本底值，及时有效的剔除显色液不稳定而引起的本底干扰值。

本发明将反应-定量腔做成圆形，利于液体混匀。并且创造性的将液体入口和出口做成与反应-定量腔垂直的设计，避免内含的磁颗粒丢失问题。同时液体入口和出口与反应-定量腔之间有斜坡，利于少量丢失的磁颗粒在反应-定量腔底部强磁吸附下回收利用，进一步避免磁颗粒丢失的发生。

本发明只用上下两层芯片结合加贴膜的方式，将复杂的芯片结构，精简化。显著降低成本，包括芯片材料成本、开模具的成本、和加工的成本。

本发明创造性地将包被抗体和标记抗体巧妙的放置在同一反应槽内，简化试剂操作流程，同时互相之间又有空间隔断，有效避免非特异性结合。或者将标记抗体放在芯片外试剂瓶内，反应槽分成上下两部分，分别放置在不同层芯片上，提高反应槽内试剂包被面积，即，上下两层芯片都可以包被抗体，抗体负载量提高一倍，有效提高产品灵敏度。

本发明创造性地设计了阀门装置，防回流装置，并结合气路作为液体向前的推动力，能随意控制流道内液体速度，并可以固定在某一区域内，进行孵育反应。达到真正的微流控目的。

本发明可以通过定量槽达到这种意义上的定量加样，

本发明在废液池内加入吸水材质，起到防止废液外溅的作用，同时巧妙的设计了气体通道，中层芯片吸水纸等装置有效避免了液体漏液。使生产工艺简单实用。

本发明通过有导电橡胶制成的密封圈，和设备电容检测探头一起起到，液体流动状态的检测。

本发明将定量槽，标记物槽和反应槽合三为一，既可以有效定量加样，同时又能将标记抗体和包被抗体放置在同一槽内的不同区域，有效避免非特异结合，提高信噪比。同时设计简单实用。

本发明通过液路连接芯片，清洗反应槽，有效降低反应本底，提高产品灵敏度。

本发明的另一技术目的是提供一种基于上述微流控芯片的检测方法，包括以下步骤：

1)试剂芯片本体插入仪器内，读取上面信息；

2)采用移液器将样本加入进样模块的进样孔内；

3)芯片本体进入仪器内部，孵育2分钟；

4)将仪器和芯片接触装置结合；芯片接触装置包括外接流路装置、带有导电橡胶探头的阀门作动头；

5)外接流路装置中的气路装置缓慢充气，推动样本往前移动；

6)样本在气流的推动下，通过第一防回流流道进入本底检测窗口；

7)样本继续向前，经过第二防回流流道，进入反应-定量腔内；

8)样本继续向前，经过第三防回流流道，进入阀门装置内，样本一旦接触阀门内导电橡胶，电容变化会触动阀门开关，关闭阀门；同时关闭气路开关，停止加压；此时反应-定量腔内的流体处于静置状态；

9)仪器和芯片接触装置分离，混匀3-10分钟，进行免疫反应；

10)仪器和芯片接触装置结合，外接流路装置中的气路装置工作，通过气体推动样本在微流控流道中向前移动，吹干进样模块的出样孔和微流控流道中的残留样本，此时导电橡胶探头数据变回原来的值，关闭气路装置；

11)外接流路装置中的清洗液路装置启动，清洗液通过进样模块的出样孔进入微流控流道内；

12)清洗液继续向前进入反应-定量模块的反应-定量腔内；

13)清洗液继续向前，进入阀门装置内，清洗液一旦接触阀门装置内的导电橡胶，电容变化会触动阀门开关，关闭阀门装置，此时在阀门装置后面的第四防回流流道能够避免阀门装置关闭不及时的情况下，吹走液体的问题；同时关闭气路装置，停止加压；

14)混匀1-3分钟，进行清洗；

15)气路装置工作，气体推动清洗液向前移动，吹干出样孔和微流控流道中的液体，此时导电橡胶探头数据变回原来的值，关闭气路装置；

16)重复操作11)到15)步骤3-8次；

17)启动外接流路装置中的显色液液路装置，显色液通过进样模块的出样孔进入微流控流道内；

18)显色液继续向前经过本底检测窗口后，进入反应-定量模块的反应-定量腔内；

19)显色液继续向前，进入阀门装置内，显色液一旦接触阀门装置内的导电橡胶，电容变化会触动阀门装置，关闭阀门装置；同时关闭气路装置，停止加压；

20)混匀3-8分钟，进行显色反应；

21)仪器和芯片接触装置分离；

22)仪器读取数据，通过分析、计算本底检测窗口、反应-定量腔的显色数据，得到检测结果；

23)仪器退出芯片，完成检测。

Claims (9)

1.一种具有显色本底检测功能的微流控芯片，包括芯片本体；芯片本体上分别设置有进样模块、微流控流道、反应模块以及废液模块；进样模块的出样端通过微流控流道与反应模块、废液模块顺序连通；其特征在于：所述进样模块的出样端与反应模块之间的微流控流道上设置有显色液本底检测窗口。

2.根据权利要求 1 所述的具有显色本底检测功能的微流控芯片，其特征在于：所述进样模块的进样端通过外接流路接口与外接流路连通；所述外接流路包括外接气路、外接清洗液路、外接显色液路；外接气路、外接清洗液路、外接显色液路合并使用同一个外接流路接口；所述进样模块的出样端设置有一个横截面呈圆形设置的出样孔，且出样孔的外围设置有一锥形过渡连接面。

3.根据权利要求 2 所述具有显色本底检测功能的微流控芯片，其特征在于：所述反应模块包括定量‐反应腔，该定量‐反应腔具有流体入口、流体出口；定量‐反应腔的流体入口、流体出口均分别与定量‐反应腔在芯片本体上的所在平面相垂直。

4.根据权利要求 3 所述具有显色本底检测功能的微流控芯片，其特征在于：定量‐反应腔的流体入口、流体出口均分别通过一坡度斜面过渡连接至定量‐反应腔。

5.根据权利要求 4 所述具有显色本底检测功能的微流控芯片，其特征在于：定量‐反应腔的横截面呈圆形设置。

6.根据权利要求 2 所述具有显色本底检测功能的微流控芯片，其特征在于：所述芯片本体包括能够上下叠合成一体的上层芯片、下层芯片，且上层芯片的上表面覆盖有一层密封贴纸；所述下层芯片上分别设置有进样模块的出样端、反应模块的反应池、废液模块的废液池；上层芯片在与进样模块的出样端对应的位置处设置进样模块的进样端，在与反应池对应的位置处设置反应池盖板，在与废液池对应的位置处设置废液池盖板，同时在反应池盖板的外侧设置防漏吸水纸置放槽；防漏吸水纸置放槽，在芯片本体的水平面上能够与废液池拼接成一个沿着芯片本体整个外缘一圈设置的槽体，且防漏吸水纸置放槽的槽底设置有透气孔。

7.根据权利要求 6 所述具有显色本底检测功能的微流控芯片，其特征在于：所述废液池在紧靠着池壁的位置处、沿着池壁均匀分布有若干废液池定位柱，而废液池盖板则相对于每一个废液池定位柱配置一个废液池定位孔；废液池与废液池盖板通过废液池定位柱、废液池定位孔扣接成一体；置放于废液池中的吸水纸处于各废液池定位柱围成的内圈中。

8.根据权利要求 7 所述具有显色本底检测功能的微流控芯片，其特征在于：所述上层芯片上分别设置有第一防回流流道、第二防回流流道、第三防回流流道、第四防回流通道；进样模块的出样孔通过第一防回流流道与本底检测窗口连接；本底检测窗口通过第二防回流流道与反应池连通；反应池通过第三防回流流道与阀门装置连通；而阀门装置则通过第四防回流通道与废液池连通。

9.一种基于权利要求 1 所述的微流控芯片的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）试剂芯片本体插入仪器内，读取上面信息；

2）采用移液器将样本加入进样模块的进样孔内；

3）芯片本体进入仪器内部，孵育 2 分钟；

4）将仪器和芯片接触装置结合；芯片接触装置包括外接流路装置、带有导电橡胶探头的阀门作动头；

5）外接流路装置中的气路装置缓慢充气，推动样本往前移动；

6）样本在气流的推动下，通过第一防回流流道进入本底检测窗口；

7）样本继续向前，经过第二防回流流道，进入反应-定量腔内；

8）样本继续向前，经过第三防回流流道，进入阀门装置内，样本一旦接触阀门内导电橡胶，电容变化会触动阀门开关，关闭阀门；同时关闭气路开关，停止加压；此时反应-定量腔内的流体处于静置状态；

9）仪器和芯片接触装置分离，混匀 3-10 分钟，进行免疫反应；

10）仪器和芯片接触装置结合，外接流路装置中的气路装置工作，通过气体推动样本在微流控流道中向前移动，吹干进样模块的出样孔和微流控流道中的残留样本，此时导电橡胶探头数据变回原来的值，关闭气路装置；

11）外接流路装置中的清洗液路装置启动，清洗液通过进样模块的出样孔进入微流控流道内；

12）清洗液继续向前进入反应-定量模块的反应-定量腔内；

13）清洗液继续向前，进入阀门装置内，清洗液一旦接触阀门装置内的导电橡胶，电容变化会触动阀门开关，关闭阀门装置，此时在阀门装置后面的第四防回流流道能够避免阀门装置关闭不及时的情况下，吹走液体的问题；同时关闭气路装置，停止加压；

14）混匀 1-3 分钟，进行清洗；

15）气路装置工作，气体推动清洗液向前移动，吹干出样孔和微流控流道中的液体，此时导电橡胶探头数据变回原来的值，关闭气路装置；

16）重复操作 11）到 15）步骤 3-8 次；

17）启动外接流路装置中的显色液液路装置，显色液通过进样模块的出样孔进入微流控流道内；

18）显色液继续向前经过本底检测窗口后，进入反应-定量模块的反应-定量腔内；

19）显色液继续向前，进入阀门装置内，显色液一旦接触阀门装置内的导电橡胶，电容变化会触动阀门装置，关闭阀门装置；同时关闭气路装置，停止加压；

20）混匀 3-8 分钟，进行显色反应；

21）仪器和芯片接触装置分离；

22）仪器读取数据，通过分析、计算本底检测窗口、反应-定量腔的显色数据，

得到检测结果；

23）仪器退出芯片，完成检测。