CN108367046B - 用于控制生殖周期和排卵的制剂和方法 - Google Patents

Abstract

激素制剂、包括该激素制剂的剂量单位和使用方法涉及控释制剂，其包括激素，例如孕酮。制剂和方法用于控制雌性哺乳动物的生殖周期和/或排卵，例如促进雌性哺乳动物的排卵或使一组雌性哺乳动物的排卵或发情/动情同期化。另外，制剂用于增加雌性哺乳动物例如在授精或胚胎移植后怀孕的可能性。另外，制剂用于减少雌性哺乳动物的不动情期。

Description

用于控制生殖周期和排卵的制剂和方法

领域

在动物生产领域，特别是在肉类和乳制品行业，牲畜生殖管理和控制至关重要。通过对雌性动物应用各种激素干预处理可以实现生殖管理和控制。

本公开实施方案涉及激素制剂、包含它们的剂型及其用途。具体而言，这些实施方案涉及激素(例如孕酮)的可注射控释制剂。其他实施方案涉及用于控制雌性哺乳动物的生殖周期和/或排卵的制剂和方法，例如，以减少不动情期，促进雌性哺乳动物的排卵或使一组雌性哺乳动物同期排卵。另外，又一些实施方案涉及增加雌性哺乳动物例如在授精或胚胎移植后怀孕的可能性。

背景

生殖周期或动情周期可以被定义为在雌性哺乳动物的整个卵巢周期中发生的一系列生理事件。动情周期代表卵巢活动的周期性模式，允许雌性动物从非接受性的生殖期移动至接受性期，从而允许配对并随后建立妊娠。

在动情周期期间发生的变化受在下丘脑(促性腺激素释放激素(GnRH))、垂体(促卵泡激素(FSH)和黄体生成素(LH))、卵巢(孕酮(P4)、雌二醇(E2)和抑制素)和子宫(前列腺素F2(PGF))中合成和分泌的激素之间的微妙相互作用调节，形成通常被称为下丘脑-垂体-性腺-子宫轴的系统。控制通过调节系统来执行，通过该调节系统激素或分泌器产物可以抑制另一种激素的释放(负反馈)，或反之，刺激大量激素的合成和释放(正反馈)。

动情周期的第0天是观察到发情的第一天。然而，从生理学角度来看，动情周期在黄体破坏后开始，并以下一周期的黄体破坏结束。

动情周期可以分为三个阶段：

1)卵泡或黄体退化阶段(动情前期)：这一时期从前一本体的黄体退化开始，以动情表现结束。

2)排卵前阶段(动情期和动情后期)：该阶段始于对雄性动物的接受性，并涉及允许排卵和开始黄体形成的所有变化。在黄体的形成(拉丁化(latinization))中，存在允许卵泡细胞变成黄体细胞的一系列形态学和生物化学变化，即以功能性黄体结束的变化。

3)黄体阶段(动情间期)：该阶段的特征是黄体占优势。黄体的维持以及孕酮合成与促孕酮和促黄体的LH激素有关。

孕酮合成作用所归因的其他激素是FSH和前列环素(PG12)。FSH激素与位于黄体中的受体结合并引起孕酮分泌增加。关于PG12，除了刺激黄体细胞产生孕酮之外，它还增加卵巢水平的血流量，对孕酮的合成和分泌具有积极作用。

本领域众所周知的是，生殖周期和排卵的控制和同期化可以在动物生产中提供巨大的经济效益。为了控制和同期化生殖周期和排卵，以及为了尝试提高雌性生育力和授精后怀孕的可能性，已经开发了几种技术，允许通过为本领域技术人员众所周知的激素干预程序控制和操纵雌性激素水平。

对于激素的持续施用，存在通常由聚合物材料制成的释放基质，其设计用于在持续的一段时间内连续释放药物。聚合物基质可以采用不同的形式，并位于动物的不同位置以激活其功能。

目前，用于使生殖周期同期化的最常用系统是受控的阴道内激素释放装置。阴道内装置试图实现一种或多种激素的持续释放，目的是鼓励诱导动物发情。这些装置需要被引入到动物的阴道以发挥其功能。市场上可获得各种各样的阴道内装置，其中可以提及的有例如阴道内装置

(孕酮释放阴道内装置)、阴道内装置

(受控的内部药物释放)或阴道内装置INVAS(阴道内应用系统)。

另一方面，有许多海绵型阴道内装置。但是，已被大量生产并作为商业产品出售的却极少。这些装置具有更大的比表面积，这增加了在它们内部微生物增殖的可能性，可能引起感染。这就是为什么这些设备常常除激素之外还含有抗生素的原因。

存在与阴道内装置的使用相关的一些问题，其中最重要的是它们的低效性和高感染以及阴道炎率，以及它们对动物造成的应激和不适。

此外，这些阴道内装置的使用涉及一系列复杂的特定动作，例如，a)固定动物以接近其背部并清洁动物的阴道区域以最小化感染风险；b)参与此项任务的操作人员必须遵守所要求的安全性标准，以避免与装置的激素接触，并防止感染在动物间传播；c)装置必须准确插入，否则装置可能会从阴道掉出来；以及最后d)在约7至15天的期限届满过后，必须采用上述要求和提及的所有安全性措施取出装置，然后必须将其丢弃，例如焚烧或掩埋，这意味着环境影响。因此，该过程内必须遵守的不同步骤一方面意味着经过培训的人员的反复参与及其导致的成本，另一方面意味着更大的动物移动和干预，这导致对动物造成更多的压力。

由于与阴道内装置的使用相关的这些缺点(其可能被认为不利于获得良好结果和动物健康)，已经尝试开发使用例如皮下植入物的用于受控释放激素的其他装置。

可植入递送系统由硅、Hydron或其他不可生物降解的生物相容性聚合物的管、球体、板或盘组成，该管、球体、板或盘已填充有孕酮或其他激素。这些装置通过小手术程序植入动物皮肤下，以使激素直接释放到动物体内。有时有必要进行额外的手术程序以取出任何耗尽的系统。

存在与这些可植入系统的使用相关的一些明显的缺点。例如，需要固定动物以进行手术程序，要求与这种程序类型有关的无菌条件以及需要取出耗尽的植入物。

进一步地，目前市场上一些用于控制生殖周期的现有产品的主要缺点之一是实现怀孕的百分比低。这是因为，除了其他因素之外，参数和排卵时间在每只动物之间差别很大，因此，并非所有经过处理的雌性动物在实施授精时都具有成熟的卵子。

可注射系统是解决与使用阴道内或可植入装置相关的困难和缺点的替代产品。这些系统的优点是例如它的应用非常简单并且不要求对注射区域进行严格的无菌调控。另外，可注射系统的应用使得能够特别是通过控制注射量对每只个体动物给药。可注射系统还允许避免一旦递送系统被耗尽就需要取出该递送系统的步骤。

已知有不同的可注射器械和系统用于激素(例如孕酮)的受控递送。然而，可注射激素控释系统尚未达到成功替代阴道内和可植入系统所需的目标，阴道内和可植入系统仍然是使用最广泛的装置。

本领域已知的可注射系统在成功应用于控制牲畜的繁殖周期方面具有一些缺点。

首先，一些已知的可注射系统产生持续的激素释放，其持续的时间非常短(在施用后不到48小时)。这是不够的，因为在本领域中众所周知的是，为支持适当的卵泡发育和生长，要求供应孕酮以使血浆水平维持约5至7天。

其次，一些用于受控释放孕酮的可注射系统随时间产生持续释放，这种持续释放可以持续超过30天，而无中断这种释放的可能性。这也是不合适的，因为要求孕酮水平在较短的时间内降低，以允许发育的优势卵泡排卵。

另一方面，一些其他已知的可注射系统，主要是开发用于人类健康的那些可注射系统，使用昂贵的组件，这大大降低了其在动物生产中的商业应用。

鉴于所有上述原因，即使考虑到可注射系统提供的巨大优势，迄今为止也没有相同产品达到在市场上占有一席之地所需的有效性水平。事实上，如上所述，阴道内或可植入装置是最常用的，因为它们满足在足够长的时间内产生持续释放激素的目的，这可以在期望的时间通过从动物体内取出装置而自动结束。

总之，在动物繁殖领域为获得用于受控释放激素(特别是孕酮)的可注射系统取得了显著的改善，该可注射系统在足够长以允许适当的卵泡发育从而区分卵泡与其余部分的时间段内产生持续释放的激素，但同时不会太长以便降低血液中的激素水平从而使优势卵泡成熟(释放LH)并发生排卵。

因此，市场上需要易于施用的用于控制生殖周期和/或排卵的系统，例如可注射系统，并且同时实现与目前使用的阴道内和可植入装置相当或更好的有效性，提供更好的排卵百分比、更好的同期排卵时间和更高的怀孕率。

附图简要说明

图1是显示处理期间母牛的血液孕酮水平(ng/mL)的图。带圆形标记的虚线表示处理一组Holando-Argentino品种的母牛后获得的平均数据。带有方形标记的实线表示在处理一组布兰格斯(Brangus)品种的母牛后获得的平均数据。带有三角形标记的虚线表示在处理一组亚伯丁安格斯(Aberdeen Angus)品种的母牛后获得的平均数据。

图2A至2C显示对评价的三种母牛(A：Holando-Argentina，B：布兰格斯，和C：亚伯丁安格斯)比较卵泡生长(cm)与可变血液孕酮(ng/mL)随处理天数而变化的图。评价最具代表性的卵泡(FOL 1、2、3和4)，即具有用于实施测量的适当尺寸的卵泡。还显示了是黄体(CL)的尺寸。

具体实施方案详述

孕前激素(Progestagen)是具有孕前活性的激素。在本申请中，术语“孕前激素”包括孕酮和所有天然或合成的类似物(有时被称为孕激素(progestins))、醋酸甲羟孕酮(甲羟松)、炔诺酮、醋酸炔诺酮、醋酸甲地孕酮、17-α-羟基孕酮己酸酯、甲基炔诺酮，及其衍生物。

本申请中使用的术语“药学上可接受的”意指该组分可用于制备通常无毒并且不具有不希望的生物学效应的药物组合物，其包括被接受用于兽药用途和/或用于人类的药物用途的那些。

本申请中使用的术语“表面活性剂”是指降低其所在介质的表面张力的化合物。

在本申请中使用的术语“载体”意指其中存在活性剂的惰性介质，其促进活性剂的施用。

本申请中使用的术语“药学上可接受的油性载体”意指任何常规的植物油或合成油或其混合物，其可被接受用于兽药用途和/或用于人类的药物用途。

前列腺素是由含有环戊烷环的20碳脂肪酸衍生的一组脂质性物质，并构成具有不同作用的细胞介导物家族。在本申请中，术语“前列腺素”可以是指任何已有的天然或合成前列腺素或任何功能性前列腺素类似物如前列腺素F2α或前列腺素衍生物如氯前列醇或其盐。

本申请中使用的术语“剂量单位”是指适合作为用于待处理的受试者的单一剂量的任何离散物理单位；每个所述单位包含经计算以产生与相关赋形剂或载体相关的所需治疗作用的预定量的活性化合物。

本申请中使用的术语“元件组”或“试剂盒”定义包括本公开实施方案的一个或多个组件和/或与本公开实施方案有关的任何其他组件的包装、装配件或容器。其也可以包括使用这些组件的说明书。

本申请中使用的术语“结构形成剂”是指保持制剂的物理稳定性防止其相分离的任何赋形剂。本公开的一些实施方案的结构形成剂的实例是但不限于纤维素、纤维素衍生物、微晶纤维素、乙基纤维素、羟乙基纤维素、羟乙基甲基纤维素、羟乙基丙基纤维素、羧甲基纤维素、瓜尔豆胶、阿拉伯树胶、黄原胶、壳聚糖、海藻酸盐、明胶、卡波姆、卡波姆71G NF、卡波姆971P NF、卡波姆974P NF、卡波姆ETD 2020NF、卡波姆5984ETD、卡波姆Ultrez 10、羟基乙酸淀粉钠、交联羧甲基纤维素钠、海藻酸、果胶及其组合。

本申请中使用的术语“微粒”是指尺寸为约1μm至1000μm的颗粒。所述颗粒可以包括微囊(储库系统)和微晶。在微囊的情况下，活性物质被聚合物或涂层包封，而在微晶的情况下，活性组分可以以限定的形式或以无定形形式存在于不相容溶剂中。

本申请中使用的术语“微囊”是指两亲试剂(包含疏水部分和亲水部分，例如脂肪酸)的薄层或涂层，其可以包封作为固体或溶于溶剂中的活性物质。其尺寸可以在1至500微米之间变化，其目的可以是例如随时间以缓慢或持续的方式将活性成分释放到周围环境中。

本申请中使用的术语“授精”是指将精子引入到雌性生殖系统中。

本申请中使用的术语“人工授精”是指包括将雄性的精子沉积在雌性的生殖系统内以使其授精的任何生殖技术。

本申请中使用的术语“固定时间人工授精”是指在相同的固定时间对一只或多只动物进行人工授精，而不需要检测所述动物的发情。

本申请中使用的术语“在检测到发情检测时人工授精”是指一只或多只动物的人工授精，其中首先检测动物表现出的发情然后使动物授精。

促性腺激素释放激素(GnRH)是由下丘脑释放的激素，其作用中心是垂体。它是一种十肽，刺激从垂体前叶释放促性腺激素(黄体生成素LH和促卵泡激素FSH)。在本公开中，当我们提到GnRH时，我们意图包括所有已有的天然或合成的功能类似物和盐，例如布舍瑞林或醋酸布舍瑞林。

本申请中使用的术语“牲畜”是指可以由人类为利用和生产其而驯化的一组动物。

本申请中使用的术语“牛”是指可以由人类为利用和生产其而驯化的一组母牛、公牛和阉牛。

雌性哺乳动物的“生殖周期”是以周期且规律的时间间隔在卵巢中发生的许多生理事件。

本申请中使用的术语“发情”和“动情”是指动物的性接受性行为。

本申请中使用的术语“不动情”是指在雌性动物未表现出性接受性行为期间雌性动物的性不活跃状态。不动情的原因包括例如怀孕、后代的存在、季节、压力和病理等等。

马绒毛膜促性腺激素(eCG)是由具有FSH(促卵泡激素)功能的怀孕母马的子宫内膜环产生的糖蛋白。在本公开中，关于eCG，我们意图包括所有已有的天然或合成的功能类似物和盐。

本申请中使用的术语“药学上可接受的凝胶形成剂”是指能够在某种条件下凝胶化的任何化合物，其可被接受用于兽药用途或用于人类的药物用途。实例可以包括泊洛沙姆，其是中信为聚氧丙烯疏水链、两侧为两个亲水聚氧乙烯链的非离子型三嵌段共聚物化合物。聚合物的一些已知商标是Synperonics、Pluronics和Kolliphor。由于聚合物嵌段的长度可以有所不同，因此存在许多具有不同性质的泊洛沙姆。后跟三位数字的术语“泊洛沙姆”给出了信息，其中前两位数字乘以100是聚氧丙烯核心的近似分子量，最后一位乘以10是聚氧乙烯的百分比。例如，泊洛沙姆P407意指具有4000g/mol的聚氧丙烯分子量和70％的聚氧乙烯的泊洛沙姆。例如，Kolliphor P407是泊洛沙姆P407的商业形式。

本公开的一个实施方案的第一方面是提供用于控制雌性哺乳动物的生殖周期和/或排卵的制剂。例如，本公开的制剂可用于减少不动情期，促进雌性哺乳动物的排卵和/或使一组雌性哺乳动物同期排卵。另外，它们可用于增加雌性哺乳动物例如在授精或胚胎移植后怀孕的可能性。在本公开的一个实施方案中，制剂包含i)所述一种或多种激素；ii)所述一种或多种药学上可接受的有机溶剂；iii)任选地，所述药学上可接受的油性载体；iv)所述一种或多种药学上可接受的脂肪酸；v)任选地，所述一种或多种药学上可接受的结构形成剂；vi)所述一种或多种药学上可接受的表面活性剂；vii)所述一种或多种药学上可接受的凝胶形成剂；和viii)水。

在本公开的一个实施方案中，制剂可以包含一种或多种天然或合成的孕激素(例如孕酮(P4))或所述激素的类似物或盐或其组合。在本公开的其他实施方案中，制剂还可以包含其他激素，例如雌激素、苯甲酸雌二醇、环戊丙酸雌二醇、d-氯前列醇钠、DL氯前列醇钠、醋酸布舍瑞林。在本公开的另一个实施方案中，制剂包含孕酮或所述激素的盐或类似物。孕酮或其类似物或其盐可以包含例如天然或合成来源的孕酮。此外，孕酮可以包含BP级(英国药典)或USP级(美国药典)孕酮或任何其他商业类似物。

在本公开的一个实施方案中，所述一种或多种药学上可接受的有机溶剂可以包含例如乙醇、苯甲醇、苯甲酸苄酯、甘油、甘油缩甲醛、油酸乙酯、PEG400、丙二醇、二甲基亚砜(DMSO)、N-甲基吡咯烷酮、Miglyol、Miglyol 808、Miglyol 810、Miglyol 812、Miglyol829、Miglyol 8108、Dynacetin 660、Softisan 649、Imwitor491、Imwitor 900K、Imwitor900P、Imwitor 960K、Imwitor 642、Imwitor 742、Imwitor 928、Imwitor 988、Imwitor948、Softigen 701或任何其他类似物或其组合。在本公开的另一个实施方案中，制剂包含乙醇、苯甲醇、苯甲酸苄酯或其组合，并且甚至更优选地，其包含乙醇、苯甲醇和苯甲酸苄酯。

在本公开的一个实施方案中，所述任选的药学上可接受的油性载体可以包含例如亚麻油、芝麻油、精制芝麻油、蓖麻油、棕榈酸、大豆油、乙氧基化大豆油、葵花油、玉米油、椰子油、橄榄油、杏仁油、棉花油或其组合。在本公开的另一个实施方案中，制剂包含芝麻油，优选精制芝麻油。

在本公开的一个实施方案中，所述一种或多种药学上可接受的脂肪酸可以包含例如14至22个碳原子的脂肪酸，并且可以是饱和的或部分不饱和的脂肪酸，但优选饱和的脂肪酸。在另一个实施方案中，所述一种或多种药学上可接受的脂肪酸可以包含例如硬脂酸、花生四烯酸、棕榈酸、肉豆蔻酸、油酸、亚油酸、亚麻酸、花生酸、芥酸或其组合。在又一个实施方案中，所述一种或多种药学上可接受的脂肪酸包含硬脂酸。

在本公开的一个实施方案中，所述任选的一种或多种药学上可接受的结构形成剂可以包含例如纤维素或其衍生物，例如微晶纤维素、乙基纤维素、羟乙基纤维素、羟乙基甲基纤维素、羟乙基丙基纤维素、羧甲基纤维素、瓜尔豆胶、阿拉伯树胶、黄原胶、壳聚糖、海藻酸盐、明胶、卡波姆、卡波姆71G NF、卡波姆971P NF、卡波姆974P NF、卡波姆ETD 2020NF、卡波姆5984ETD、卡波姆Ultrez 10、羟基乙酸淀粉钠、交联羧甲基纤维素钠、海藻酸、果胶或其组合。在本公开的另一个实施方案中，制剂包含羟乙基纤维素。在本公开的又一个实施方案中，制剂包含羟乙基纤维素、阿拉伯树胶和黄原胶。

在本公开的一个实施方案中，所述一种或多种药学上可接受的表面活性剂可以包含例如蓖麻油(例如氢化蓖麻油、乙氧基化蓖麻油、15-60摩尔环氧乙烷的乙氧基化蓖麻油(例如40摩尔环氧乙烷的乙氧基化蓖麻油))、7-10摩尔的乙氧基化月桂醇、Cremophor RH40、Cremophor RH 60、Cremophor CO 455、Kolliphor EL、Lipocol oxo 650、Lipocol oxo600、Solutol HS 15、Emulgin Bl PH、Lanette 20PH、Lanette N PH、聚山梨醇酯、聚山梨醇酯20PH、聚山梨醇酯60PH、聚山梨醇酯80PH、衍生自辛醇(Capri alcohol)、癸醇、月桂醇、异十三醇、肉豆蔻醇、乙醇、棕榈油醇、硬脂醇、油醇、反油醇、岩芹烯(petroselinyl)醇、亚油醇、亚麻醇、油硬脂醇(elaeostearyl alcohol)、二十烷醇、花生醇、二十碳烯醇、山嵛醇、二十二烯醇、巴惟醇的乙氧基化脂肪醇(具有6至30摩尔的环氧乙烷)或其组合。在另一个实施方案中，制剂包含蓖麻油，优选40摩尔环氧乙烷的乙氧基化蓖麻油。

在本公开的一个实施方案中，所述一种或多种药学上可接受的凝胶形成剂可以包含例如蔗糖乙酸异丁酸酯(SAIB)、氧乙烯化和丙氧基乙烯化嵌段共聚物、Pluronic F 127、泊洛沙姆(例如泊洛沙姆P407)、Kolliphor P188、Kolliphor P237、Kolliphor P338、Kolliphor P407、马来酸或酸酐和甲基乙烯基醚共聚物、改性的丙烯酸聚合物、PEG 3000、Macrogol 4000、Macrogol 6000、Poloxamine或其组合。在另一个实施方案中，制剂包含热敏凝胶形成剂，优选泊洛沙姆P407(例如Kolliphor P407)。

在本公开的另一个实施方案中，制剂包含：a)孕酮或其类似物或盐；b)苯甲醇；c)苯甲酸苄酯；d)乙醇；e)硬脂酸；f)羟乙基纤维素；g)40摩尔环氧乙烷的乙氧基化蓖麻油；h)泊洛沙姆P407；i)精制芝麻油；和j)水。

在本公开的另一个实施方案中，制剂包含：a)孕酮或其类似物或盐；b)苯甲醇；c)苯甲酸苄酯；d)乙醇；e)硬脂酸；f)羟乙基纤维素；g)40摩尔环氧乙烷的乙氧基化蓖麻油；h)泊洛沙姆P407；和i)水。

在本公开的另一个实施方案中，制剂包含：a)孕酮或其类似物或盐；b)苯甲醇；c)苯甲酸苄酯；d)乙醇；e)硬脂酸；f)40摩尔环氧乙烷的乙氧基化蓖麻油；g)泊洛沙姆P407；h)精制芝麻油；和i)水。

在本公开的另一个实施方案中，制剂是控释制剂，其中所述一种或多种激素的一部分溶解于包含所述一种或多种药学上可接受的有机溶剂和任选的所述药学上可接受的油性载体的混合物中以形成游离部分；并且所述一种或多种激素的一部分被所述一种或多种药学上可接受的脂肪酸包封以形成封闭部分。所述一种或多种激素的所述游离部分和封闭部分可以包含在基质中，所述基质包含：i)任选地，所述一种或多种药学上可接受的结构形成剂，ii)所述一种或多种药学上可接受的凝胶形成剂，和iii)所述一种或多种药学上可接受的表面活性剂。

在本公开的另一个实施方案中，控释制剂可以包含：

1)一种或多种天然或合成的孕前激素或其盐，优选孕酮，其溶解于i)所述一种或多种药学上可接受的有机溶剂(优选乙醇、苯甲醇和苯甲酸苄酯)和ii)所述药学上可接受的油性载体(优选精制芝麻油)的混合物中；

2)一种或多种天然或合成的孕前激素或其盐，优选孕酮，形成由所述一种或多种药学上可接受的脂肪酸(优选硬脂酸)包封的微囊或微粒；和

3)包括所述组分1)和2)的基质，其中所述基质包含i)所述一种或多种药学上可接受的结构形成剂，优选羟乙基纤维素；ii)所述一种或多种药学上可接受的凝胶形成剂，优选泊洛沙姆P407；和iii)所述一种或多种药学上可接受的表面活性剂，优选40摩尔环氧乙烷的乙氧基化蓖麻油。

本公开实施方案的控释制剂允许在其施用后将一种或多种激素(例如孕酮)受控地释放到雌性哺乳动物的血流中。首先，所述一种或多种激素存在持续的血液浓度，然后激素浓度降低。例如，激素血液浓度的降低可以在施用后约5至约10天发生，并且优选在施用该制剂后约6至8天发生。

在施用本公开实施方案的制剂后，血液中的激素浓度和释放时间可以根据施用该制剂的动物的特征、应用制剂的途径或多种其他因素而变化。

本公开实施方案的制剂可以任选地包含保护剂，例如药学上可接受的抗氧化剂。所述药学上可接受的抗氧化剂可以包含例如维生素E、维生素E TGPS(d-α-生育酚丙二醇1000琥珀酸酯)、Kolliphor TGPS、丁基化羟基甲苯(BHT)、丁基化羟基茴香醚(BHA)、亚硫酸氢钠、抗坏血酸、抗坏血酸棕榈酸酯、维生素A、没食子酸丙酯、一硫代甘油、次硫酸钠缩甲醛(sodium sulfoxilatoformal)或其组合。

本公开实施方案的制剂中的水可以被任何其他液体或水溶液替代，例如盐溶液。本公开实施方案的制剂中的水可以是例如用于注射的水或任何可接受的溶液或含水液体。

上述的本公开实施方案的制剂可以包含浓度为约1mg/mL至约250mg/mL，优选约10mg/mL至约200mg/mL，优选约20mg/mL至约100mg/mL，优选约30mg/mL至约70mg/mL，优选约40mg/mL至约60mg/mL，更优选约50mg/mL的孕酮或其类似物或盐。

本公开实施方案的制剂还可以包含浓度为至多约1000mg/mL、或约5mg/mL至约500mg/mL、或约10mg/mL至约250mg/mL、或约20mg/mL至约150mg/mL、或约30mg/mL至约100mg/mL、或约40mg/mL至约60mg/mL、优选约40mg/mL的苯甲醇。

本公开实施方案的制剂还可以包含浓度为至多约60mg/mL、或约1mg/mL至约40mg/mL、或约10mg/mL至约30mg/mL、优选约20mg/mL的苯甲酸苄酯。

本公开实施方案的制剂还可以包含浓度为至多约300mg/mL、或约10mg/mL至约250mg/mL、或约50mg/mL至约200mg/mL、或约100mg/mL至约150mg/mL、优选约120mg/mL的乙醇。

本公开实施方案的制剂还可以包含浓度为至多约60mg/mL、或约1mg/mL至约40mg/mL、或约10mg/mL至约30mg/mL、优选约20mg/mL的硬脂酸。

本公开的一个实施方案的制剂还可以任选地包含浓度为至多约50mg/mL、或至多约40mg/mL或至多约30mg/mL、或至多约20mg/mL或至多约10mg/mL、或约2mg/mL至约8mg/mL、优选约4mg/mL的羟乙基纤维素。

本公开实施方案的制剂还可以包含浓度为至多约120mg/mL、或约10mg/mL至约120mg/mL、或约20mg/mL至约80mg/mL、或约40mg/mL至约70mg/mL、优选约100mg/mL的40摩尔环氧乙烷的乙氧基化蓖麻油。

本公开实施方案的制剂还可以包含浓度为至多约120mg/mL、或约10mg/mL至约100mg/mL、或约50mg/mL至约90mg/mL，或者优选地或约50mg/mL至约90mg/mL、优选约70mg/mL的泊洛沙姆P407(例如，Kolliphor P407)。

本公开实施方案的制剂还可以任选地包含浓度为至多约100mg/mL、或约5mg/mL至约70mg/mL、或约10mg/mL至约30mg/mL、优选约20mg/mL的精制芝麻油。

本公开实施方案的制剂还可以在制剂中以至多约1000mg/mL、或约100mg/mL至约900mg/mL、或约200mg/mL至约800mg/mL、优选约500mg/mL至约600mg/mL的量包含水。

本公开实施方案的制剂可包含约1mg/mL至约250mg/mL的孕酮或其类似物或盐、至多约1000mg/mL的苯甲醇、至多约60mg/mL的苯甲酸苄酯、至多约300mg/mL的乙醇、至多约60mg/mL的硬脂酸、至多约50mg/mL的羟乙基纤维素、至多约120mg/mL的40摩尔环氧乙烷的乙氧基化蓖麻油、至多约120mg/mL的泊洛沙姆P407、至多约100mg/mL的精制芝麻油和至多约1000mg/mL的水。

本公开实施方案的制剂可以包含约1mg/mL至约250mg/mL的孕酮或其类似物或盐、至多约1000mg/mL的苯甲醇、至多约60mg/mL的苯甲酸苄酯、至多约300mg/mL的乙醇、至多约60mg/mL的硬脂酸、至多约50mg/mL的羟乙基纤维素、至多约120mg/mL的40摩尔环氧乙烷的乙氧基化蓖麻油、至多约120mg/mL的泊洛沙姆P407和至多约1000mg/mL的水。

本公开实施方案的制剂可以包含约1mg/mL至约250mg/mL的孕酮或其类似物或盐、至多约1000mg/mL的苯甲醇、至多约60mg/mL的苯甲酸苄酯、至多约300mg/mL的乙醇、至多约60mg/mL的硬脂酸、至多约120mg/mL的40摩尔环氧乙烷的乙氧基化蓖麻油、至多约120mg/mL的泊洛沙姆P407、至多约100mg/mL的精制芝麻油和至多约1000mg/mL的水。

本公开实施方案的制剂还可以进一步任选地包含pH调节剂。在任何情况下，最终制剂的pH可以调节至约4.0至约8.0，或约4.5至约7.5，优选约5.0至约7.0的值。制剂的优选最终pH可以是例如5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0。

本公开实施方案的制剂可以为溶液(例如液体溶液、胶束溶液)、悬浮液、两相或多相体系、乳液(例如微乳液、细乳液、小颗粒乳液)或它们的组合的形式。

本公开实施方案的制剂可以是无菌制剂。本公开实施方案的制剂或其单独组分可以使用不同的方法灭菌。灭菌方法是本领域中众所周知的，并且适当地，可以包括热灭菌、过滤灭菌、UV辐射灭菌、γ辐射灭菌等等。

本公开实施方案的制剂可以适合用作可注射制剂，但是应该理解，制剂可以适于经由不同的替代途径施用。在可注射制剂的情况下，这些可以根据动物的特征通过最合适的途径施用，例如肠胃外、皮下、静脉内、皮内或肌内。本公开的一个实施方案是适用于肌内施用的可注射制剂。

本公开实施方案的制剂可以用于控制雌性哺乳动物的生殖周期和/或排卵。本公开实施方案的制剂也可以用于促进排卵。本公开实施方案的制剂的另一个用途可以是使一组雌性哺乳动物同期排卵或发情。另外，本公开实施方案的制剂可以用于减少不动情期。另外，本公开实施方案的制剂可以用于增加雌性哺乳动物怀孕的可能性。例如，本公开实施方案的制剂可以用于增加雌性哺乳动物在授精后怀孕的可能性，授精可以是人工授精或自然授精。例如，本公开实施方案的制剂可以与固定时间人工授精(FTAI)方案或发情检测授精方案一起使用。本公开实施方案的制剂也可以用于卵巢超刺激方案以超排卵，它们也可以用于卵巢穿刺方案中用于随后的体外授精或增加胚胎转移过程成功的可能性。

所述雌性哺乳动物可以是例如家养或农场动物。例如，雌性哺乳动物可以是反刍动物，如牛、猪、山羊、绵羊、马、骆驼等等。例如，雌性哺乳动物可以是生殖成熟的雌性牛动物。

本公开实施方案的制剂可以与其他处理(如其他激素处理)协调使用以实现期望的目标。

本公开实施方案的第二方面提供了包含如本公开实施方案的第一方面所述的制剂的剂量单位。

在一个实施方案中，剂量单位可以具有约1mL至约20mL、或约2mL至约10mL或约4mL至约5mL的体积。

一个实施方案中的剂量单位可以容纳在容器中，例如瓶、小瓶、安瓿或注射器等等。因此，本公开实施方案还提供了预填充有需要量的本公开实施方案的第一方面中描述的制剂的容器，例如预填充有该制剂的注射器。

本公开实施方案的另一个方面提供了元件组(试剂盒)，其包含如上所述的制剂、剂量单位或预填充容器，例如预填充注射器。本公开实施方案的元件组(试剂盒)可以进一步包括例如使用包括它的一些或全部元件的说明书。

本公开实施方案的另一个方面提供了用于制备制剂(如本公开实施方案的第一方面中描述的制剂)的方法。该方法包括合并该制剂的每种组分。

在本公开的一个实施方案中，用于制备制剂的方法包括合并i)所述一种或多种激素；ii)所述一种或多种药学上可接受的有机溶剂；iii)任选地，所述药学上可接受的油性载体；iv)所述一种或多种药学上可接受的脂肪酸；v)任选地，所述一种或多种药学上可接受的结构形成剂；vi)所述一种或多种药学上可接受的表面活性剂；vii)所述一种或多种药学上可接受的凝胶形成剂；和viii)水。

在本公开的另一个实施方案中，用于制备制剂的方法包括单独制备包含某些组分的混合物，稍后将其合并。例如，用于制备本公开实施方案的制剂的方法可以包括：

1)制备包含所述一种或多种药学上可接受的表面活性剂和水的第一溶液(预产品A)：

2)制备包含所述一种或多种激素、所述一种或多种药学上可接受的脂肪酸、所述一种或多种药学上可接受的有机溶剂、所述一种或多种药学上可接受的凝胶形成剂和水的第二溶液，其中所述第二溶液通过合并混合物I(预产品B)和混合物II(预产品C)来制备，其中

a)混合物I(预产品B)包含所述一种或多种激素、所述药学上可接受的脂肪酸和所述一种或多种药学上可接受的有机溶剂；并且

b)混合物II(预产品C)包含所述一种或多种药学上可接受的凝胶形成剂和水；

3)制备包含所述一种或多种激素、所述一种或多种药学上可接受的有机溶剂和任选的所述药学上可接受的油性载体的第三溶液(预产品D)；和

4)任选地，制备包含所述一种或多种药学上可接受的结构形成剂和水的第四溶液(预产品E)；

5)将所述第一溶液与所述第二溶液合并；

6)将所述第三溶液并入到步骤5)中获得的混合物中；和

7)任选地，将所述第四溶液加入到步骤6)中获得的混合物中。

在本公开实施方案的方法中，所述第一溶液可以包含例如40摩尔环氧乙烷的乙氧基化蓖麻油和水；所述混合物I可以包含例如孕酮或其类似物或盐、硬脂酸和乙醇；所述混合物II可以包含例如泊洛沙姆P407(例如Kolliphor P407)和水；所述第三溶液可以包含例如孕酮或其类似物或盐、乙醇、苯甲醇、苯甲酸苄酯和任选的精制芝麻油；并且所述任选的第四溶液可以包含例如羟乙基纤维素和水。

在本公开实施方案的方法中，任选地，在混合物I中可以包括药学上可接受的抗氧化剂。药学上可接受的抗氧化剂可以是例如维生素E、维生素E TGPS(d-α-生育酚丙二醇1000琥珀酸酯)、Kolliphor TGPS、丁基化羟基甲苯(BHT)、丁基化羟基茴香醚(BHA)、亚硫酸氢钠、抗坏血酸、抗坏血酸棕榈酸酯、维生素A、没食子酸丙酯、单硫代甘油、次硫酸钠缩甲醛或其组合。

制备根据本公开实施方案的制剂的方法可以包括调节pH的步骤。可以通过添加pH调节剂来调节pH。在一个替代实施方案中，可以使用酸性或碱性溶液来调节最终制剂的pH。例如，最终制剂的pH值可以调节至约4.0至约8.0、或约4.5至约7.5、优选约5.0至约7.0的值。制剂的优选最终pH可以是例如5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9或7.0。

根据本公开实施方案的方法可以进一步包括一个或多个灭菌步骤。灭菌可以通过任何合适的方法完成，例如热灭菌、过滤灭菌、UV辐射灭菌、γ灭菌等等。根据本公开实施方案的制剂或其组分可以单独灭菌。

在本公开实施方案的另一方面，提供了一种用于控制雌性哺乳动物的生殖周期和/或排卵的方法，该方法包括向所述雌性哺乳动物施用合适剂量的本公开实施方案的制剂。

在本公开实施方案的另一方面，提供了一种用于使一组雌性哺乳动物同期排卵的方法，该方法包括向所述雌性哺乳动物施用合适剂量的本公开实施方案的制剂。

在本公开实施方案的另一方面，提供了一种用于促进雌性哺乳动物排卵的方法，该方法包括向所述雌性哺乳动物施用合适剂量的本公开实施方案的制剂。

在本公开实施方案的另一方面，提供了一种用于增加雌性哺乳动物怀孕的可能性的方法，该方法包括向所述雌性哺乳动物施用合适剂量的本公开实施方案的制剂。例如，所述方法可以包括一种用于增加雌性哺乳动物在其自然或人工授精后或者在胚胎移植后怀孕的可能性的方法。

在本公开实施方案的另一方面，提供了一种用于减少雌性哺乳动物的不动情期的方法，该方法包括向所述雌性哺乳动物施用合适剂量的本公开实施方案的制剂。

在根据本公开实施方案的方法中，施用合适剂量的本公开实施方案的制剂，其中可以根据待处理的动物的特征修改所需激素的剂量。在另一个实施方案中，施用本公开实施方案的制剂的剂量包含约50mg至约500mg的孕酮或其类似物或盐，更优选约约150mg至约350mg的孕酮或其类似物或其，或优选约200mg至约300mg的孕酮或其类似物或盐，例如240mg的孕酮或其类似物或盐。

在根据本公开实施方案的方法中，本公开实施方案的制剂可以通过注射或通过不同的替代途径来施用。另外，制剂可以例如通过皮下、静脉内、肠胃外、肌内或皮内注射施用。优选地，制剂通过肌内注射施用。

根据本公开实施方案的方法可以包括向在人工授精程序(例如固定时间人工授精(FTAI)程序或发情检测授精程序)中的一组雌性哺乳动物施用本公开实施方案的制剂，这增加了在授精后怀孕的动物的比例。在一个实施方案中，可以在施用制剂后约9至约11天实施授精，例如可以在施用制剂后约9天、约10天或约11天进行授精。

根据本公开实施方案的方法可以任选地包括施用苯甲酸雌二醇。苯甲酸雌二醇的施用包含例如至多约3mg的苯甲酸雌二醇的剂量，例如约1mg至约3m的苯甲酸雌二醇的剂量，优选约2mg的苯甲酸雌二醇的剂量。在其他实施方案中，可以使用任何其他合适的剂量来引起在处理开始时存在的卵泡的闭锁，因而防止形成负面干扰生育力的持续性卵泡。可以例如通过肌内注射或通过任何其他适当的施用途径实施苯甲酸雌二醇的施用。例如在施用本公开实施方案的制剂的同一天实施苯甲酸雌二醇的施用。在另一个实施方案中，也可以在施用本公开实施方案的制剂之前一天或多天或之后一天或更多天实施苯甲酸雌二醇的施用。

根据本公开实施方案的方法可以任选地包括施用前列腺素或前列腺素类似物或其盐，例如，醋酸d-氯前列醇。施用前列腺素可以包含例如至多约0.500mg前列腺素的剂量，例如约0.075mg至约0.500mg前列腺素的剂量，优选约0.150mg前列腺素的剂量。在其他实施方案中，可以使用任何其他合适的剂量来产生黄体溶解作用，从而实现血液中孕酮浓度的降低。可以例如通过肌内注射或通过任何其他适当的施用途径实施前列腺素的施用。可以例如在施用本公开实施方案的制剂之前几天和/或之后几天，例如在应用所述制剂之前约4天至之后10天实施前列腺素的施用。可以例如在施用所述制剂之前约2天和/或之后约7至约9天进行前列腺素的施用。可以例如在施用所述制剂之前约2天和/或之后约7天和/或在施用所述制剂之后约8天实施前列腺素的施用。

根据本公开实施方案的方法可以任选地包括施用促性腺激素释放激素(GnRH)或其类似物或盐，例如醋酸布舍瑞林。GnRH或其类似物或盐的施用可以包含例如至多约0.03mg的剂量或约0.001mg至约0.03mg的剂量或约0.005mg至约0.0150mg的剂量，优选约0.0084mg的剂量。在其他实施方案中，可以使用任何其他合适的剂量来控制LH和FSH的合成和释放，以帮助卵泡成熟和生长，然后产生排卵并形成黄体。可以例如通过肌内注射或通过任何其他适当的施用途径实施GnRH或其类似物或盐的施用。可以例如在施用本公开实施方案的制剂后一些天，例如在施用制剂后约9天至约11天，例如在施用制剂后约9天、约10天或约11天实施GnRH或其类似物或盐的施用。在人工授精程序中，可以在例如授精的同一天或另一天例如在进行授精的那天之前的一天实施GnRH或其类似物或盐的施用。

根据本公开实施方案的方法可以任选地包括施用马绒毛膜促性腺激素(eCG)激素。eCG的施用可以包含例如至多约1000IU eCG的剂量或约400IU至约800IU eCG的剂量或约300IU至约400IU eCG的剂量，优选约500IU eCG的剂量。在其他实施方案中，可以使用任何其他合适的替代剂量来控制FSH和LH的合成和释放以帮助卵泡成熟和生长。可以例如通过肌内注射或通过任何其他适当的施用途径实施eCG的施用。可以例如在已施用本公开实施方案的制剂之后一些天，例如施用制剂后约6天至约8天，例如在施用制剂后约6天、约7天或约8天实施eCG的施用。

根据本公开实施方案的方法可以任选地包括施用环戊丙酸雌二醇或其类似物。环戊丙酸雌二醇的施用可以包含例如至多约1mg环戊丙酸雌二醇的剂量，优选约0.5mg环戊丙酸雌二醇的剂量。在其他实施方案中，可以使用任何其他合适的剂量来产生排卵前LH高峰并准备成熟卵泡以排卵。可以例如通过肌内注射或通过任何其他适当的施用途径实施环戊丙酸雌二醇的施用。可以例如在已施用本公开实施方案的制剂后一些天，例如在施用所述制剂后约7天至约8天，例如在施用所述制剂后约7天或施用所述制剂后约8天实施环戊丙酸雌二醇的施用。在根据本公开实施方案的方法中，如果所述方法包括施用前列腺素，则可以例如在施用前列腺素的同一天实施环戊丙酸雌二醇的施用。

根据本公开实施方案的方法主要适应用于牛，但可以进行修改以使它们适应于任何雌性哺乳动物，例如其他家养或农场动物。在其他实施方案中，所述雌性哺乳动物可以是猪、山羊、绵羊、马、骆驼等等。

根据本公开实施方案的方法可以包括例如但不限于以下描述的方案。授精步骤是任选的，并且包括在旨在增加雌性哺乳动物在授精后怀孕的可能性的方法中。可以通过了解排卵前的时间来预先确定授精的时机，排卵前的时间可以通过超声波检查法或通过发情表现来检测。

方案1

第0天：施用本公开实施方案的制剂。施用苯甲酸雌二醇。

第7天：施用前列腺素。

第9天：施用促性腺激素释放激素(GnRH)。

第10天：授精。

方案2

第0天：施用本公开实施方案的制剂。施用苯甲酸雌二醇。

第7天：施用前列腺素。

第9天：施用促性腺激素释放激素(GnRH)。授精。

方案3

第0天：施用本公开实施方案的制剂。施用苯甲酸雌二醇。

第8天：施用前列腺素。施用环戊丙酸雌二醇。

第10天：施用促性腺激素释放激素(GnRH)。授精。

方案4

第0天：施用本公开实施方案的制剂。施用苯甲酸雌二醇。

第8天：施用前列腺素。

第10天：施用促性腺激素释放激素(GnRH)。

第11天：授精。

方案5

第0天：施用本公开实施方案的制剂。施用苯甲酸雌二醇。

第8天：施用前列腺素。施用环戊丙酸雌二醇。

第11天：授精。

方案6

第0天：施用本公开实施方案的制剂。施用苯甲酸雌二醇。

第7天：施用前列腺素。施用环戊丙酸雌二醇。

第9天：施用促性腺激素释放激素(GnRH)。

第10天：授精。

方案7

第0天：施用本公开实施方案的制剂。施用苯甲酸雌二醇。

第8天：施用前列腺素。施用马绒毛膜促性腺激素(eCG)。

第9天：施用苯甲酸雌二醇。

第10天(施用前列腺素后68小时)：授精。

方案8

第0天：施用本公开实施方案的制剂。施用苯甲酸雌二醇。

第6天：施用前列腺素。

第9天(施用前列腺素后68-72小时)：授精。

方案9

第0天：施用本公开实施方案的制剂。施用苯甲酸雌二醇。

第7天(早晨)：施用前列腺素。

第8天(早晨)：施用苯甲酸雌二醇。

第9天(施用前列腺素后68-72小时)：固定时间授精。

方案10

第0天：人工授精。

第13天：施用本公开实施方案的制剂。

第21-25天：在检测到发情时授精。

方案11

第0天：施用本公开实施方案的制剂。

第23天：施用促性腺激素释放激素(GnRH)。

第30天：施用前列腺素。

第30天+52小时：检测发情。

第33天：施用促性腺激素释放激素(GnRH)。授精。

方案12

第0天：施用本公开实施方案的制剂。施用促性腺激素释放激素(GnRH)。

第5天：施用前列腺素并在12小时时重复给药。

第5天+52小时：检测发情。

第8天：施用促性腺激素释放激素(GnRH)。授精。

方案13

第0天：施用本公开实施方案的制剂。施用促性腺激素释放激素(GnRH)。

第7天：施用前列腺素。

第7-13天：检测发情。授精。

方案14

第0天：施用本公开实施方案的制剂。施用促性腺激素释放激素(GnRH)。

第7天(早晨)：施用前列腺素。

第7天+72-84小时：检测发情。

第10天：施用促性腺激素释放激素(GnRH)。授精。

方案15

第0天：施用前列腺素。

第0-3天：检测动情。授精。

第3天：施用本公开实施方案的制剂。施用促性腺激素释放激素(GnRH)。

第9天：施用前列腺素。

第9-12天：检测发情。授精。

方案16

第0天：施用前列腺素。

第0-3天：检测发情。授精。

第3天：施用本公开实施方案的制剂。施用促性腺激素释放激素(GnRH)。

第9天：施用前列腺素。

第12天：施用促性腺激素释放激素(GnRH)。授精。

方案17

第0天：施用前列腺素。

第14天：施用前列腺素。

第28天：施用本公开实施方案的制剂。施用促性腺激素释放激素(GnRH)。

第35天：施用前列腺素。

第37天：施用促性腺激素释放激素(GnRH)。

第38天：固定时间授精。

方案18

第0天：施用本公开实施方案的制剂。施用苯甲酸雌二醇。

第6天：施用前列腺素。施用马绒毛膜促性腺激素(eCG)。

第9天(前列腺素后72小时)：施用促性腺激素释放激素(GnRH)。固定时间授精。

本公开实施方案的制剂的施用时间和剂量以及如上所述的方法的每种激素的施用时间和剂量可以根据待处理的动物或动物组的特征进行修改。

实施例

实施例1：制剂

制备和测定的本公开实施方案制剂的一些非限制性实施例包含如下表中所示的化合物和浓度。

制剂1

制剂2

制剂3

制剂4

制剂5

制剂6

制剂7

实施例2：制备可注射制剂的方法

下面描述的方法是如何制备本公开实施方案的可注射制剂之一(实施例1的制剂1)的实施例。

制备本公开的可注射制剂的方法首先包括制备五种预产品A-E。下面描述制备这些预产品的方法。

预产品A的制备

在70℃的温度下将40摩尔环氧乙烷的乙氧基化蓖麻油溶解在蒸馏水中至浓度为约30重量％(m/m)。在缓慢搅拌下进行溶解5分钟或直至完全溶解。该预产品可以在4℃储存直到进一步使用。

预产品B的制备

首先，在60℃的温度下将硬脂酸加入到含有乙醇的容器中，并使用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。接下来，加入孕酮并继续搅拌直到其完全溶解。硬脂酸和孕酮的最终浓度包含约14重量％(m/m)。

预产品C的制备

在约70℃的温度下将泊洛沙姆P407(例如

P407)加入到蒸馏水中至浓度为约25重量％(m/m)。将混合物连续搅拌一段时间。然后，混合物在4℃的温度下储存直至形成澄清且均匀的液体。

预产品D的制备

首先，制备苯甲醇、苯甲酸苄酯和乙醇的混合物。向该混合物中加入孕酮并将混合物搅拌至其完全溶解。最后，加入精制芝麻油并搅拌直至获得均匀的混合物。最终的半成品含有约38重量％(m/m)苯甲醇、约22重量％(m/m)苯甲酸苄酯、约0.3重量％(m/m)乙醇、约16重量％(m/m)芝麻油和约24重量％(m/m)孕酮。该预产品可以在4℃储存直到进一步使用。

预产品E的制备

在70℃的温度下将羟乙基纤维素(HEC)溶解在蒸馏水中至最终浓度为约3重量％(m/m)HEC。然后，缓慢搅拌溶液直至形成均匀的凝胶。该预产品可以在4℃下储存直到进一步使用。

最终制备

一旦预产品A-E准备就绪，即可实施最终制剂的制备。

例如，为了制备5000mg实施例1的制剂1，首先将约850mg预产品B与约1400mg预产品C混合。然后，将约1650mg预产品A和约500mg预产品D添加到该悬浮液中。最后，加入约600mg的预产品E。

实施例3：处理方案

初步考虑

首先，对于如下列测定中描述的处理方案，根据下面列出的标准选择牛科动物。进行该选择是为了选出适用于发情同期化的母牛。

选择已达到性成熟的母牛，即年龄大于约15个月并且体重超过约260公斤的那些。

关于它们的身体状况，优选选择按照如Lowman等人,(The East of ScotlandCollege of Agriculture；Edinburgh；1976；pp.1-31(Vol.6)所述的5分量表得分为约2.5分至3.5分的那些动物。

按照这个量表评估并不是排除性的，因为有些情况下满足得分，但动物由于其他原因并不适合，例如，母牛处于不动情阶段。此外，选择了一些未达到优选得分的动物，例如体重不足但处于体重增加状态的动物。此外，放弃具有优选得分但具有可能防止动物正确饲养的畸形的动物，例如具有弯曲颌骨的动物。

选择动物所考虑的另一方面是它们的健康状态。

例如，放弃显示出由感染如阴道炎引起的脓性阴道分泌物、不规则行为、颤动(wobbling)、或由内部或外部寄生虫引起的心境恶劣、缺少牙齿或牙齿显着磨损的母牛以及具有任何其他类型病理的母牛。

此外，在上个月的饲养历史研究中评估营养状态以确定将要选择的母牛的体重增加。

最后，在所有预先选择的动物中进行超声波检查，并选择具有等于或大于8mm的黄体或卵泡尺寸的那些母牛。放弃具有小卵巢、小卵泡(指示不动情期)的母牛和怀孕的母牛。

方案

包括施用本公开实施方案的制剂的方案适应用于牛，但可以根据需要进行修改以用于其他动物。此外，评估的剂量和应用时间可以根据动物的类型和其他因素而变化。测试以下方案：

方案A

第0天(早晨)：

以240mg孕酮的剂量实施本公开实施方案的制剂的肌内注射。

实施2mg苯甲酸雌二醇的肌内注射。

第7天(早晨)：

实施0.150mg醋酸d-氯前列醇的肌内注射。

第9天(早晨)：

实施0.0084mg布舍瑞林的肌内注射。

第10天(早晨)：

授精。

方案B

第0天(早晨)：

以240mg孕酮的剂量实施本公开实施方案的制剂的肌内注射。

实施2mg苯甲酸雌二醇的肌内注射。

第7天(早晨)：

实施0.150mg醋酸d-氯前列醇的肌内注射。

第9天(早晨)：

实施0.0084mg布舍瑞林的肌内注射。

授精。

方案B1

第0天(早晨)：

插入具有1g孕酮的牛阴道内装置(DIB)。

实施2mg苯甲酸雌二醇的肌内注射。

第7天(早晨)：

实施0.150mg醋酸d-氯前列醇的肌内注射。

取出DIB。

第9天(早晨)：

实施0.0084mg布舍瑞林的肌内注射。

授精。

方案C

第0天(早晨)：

以240mg孕酮的剂量实施本公开实施方案的制剂的肌内注射。

实施2mg苯甲酸雌二醇的肌内注射。

第8天(早晨)：

实施0.150mg醋酸d-氯前列醇的肌内注射。

实施0.5mg环戊丙酸雌二醇的肌内注射。

第10天(早晨)：

实施0.0084mg布舍瑞林的肌内注射。

授精。

方案D

第0天(早晨)：

以240mg孕酮的剂量实施本公开实施方案的制剂的肌内注射。

实施2mg苯甲酸雌二醇的肌内注射。

第8天(早晨)：

实施0.150mg醋酸d-氯前列醇的肌内注射。

第10天(早晨)：

实施0.0084mg布舍瑞林的肌内注射。

第11天(早晨)：

授精。

方案E

第0天(早晨)：

以240mg孕酮的剂量实施本公开实施方案的制剂的肌内注射。

实施2mg苯甲酸雌二醇的肌内注射。

第8天(早晨)：

实施0.150mg醋酸d-氯前列醇的肌内注射。

实施0.5mg环戊丙酸雌二醇的肌内注射。

第11天(早晨)：

授精。

方案E1

第0天(早晨)：

插入具有0.5g孕酮的牛阴道内装置(DIB)。

实施2mg苯甲酸雌二醇的肌内注射。

第8天(早晨)：

实施0.150mg醋酸d-氯前列醇的肌内注射。

实施0.5mg环戊丙酸雌二醇的肌内注射。

取出DIB。

第10天(早晨)：

授精。

方案F

第0天(早晨)：

插入具有0.5g孕酮的牛阴道内装置(DIB)。

实施2mg苯甲酸雌二醇的肌内注射。

第7天(早晨)：

实施0.150mg醋酸d-氯前列醇的肌内注射。

实施0.5mg环戊丙酸雌二醇的肌内注射。

取出DIB。

第9天(早晨)：

授精。

方案F1

第0天(早晨)：

插入具有1g孕酮的牛阴道内装置(DIB)。

实施2mg苯甲酸雌二醇的肌内注射。

第7天(早晨)：

实施0.150mg醋酸d-氯前列醇的肌内注射。

取出DIB。

第9天(早晨)：

授精。

实施0.0084mg布舍瑞林的肌内注射。

在小母牛的情况下，本公开的制剂的剂量可以替换为192g孕酮。

实施例4：血液孕酮水平

根据实施例3中列出的标准选择以下品种的母牛：Holando-Argentino(阿根廷乳用品种)、布兰格斯(由英国品种如亚伯丁安格斯与3/8关系的婆罗门(Brahman)品种的母牛杂交得到的合成品种，一种杂交指定的zebuine)和亚伯丁安格斯。

每个品中选择约15只动物，并如方案A中所述用本公开实施方案的制剂(实施例1的制剂1)处理。在所有情况下，在开始处理方案前两天应用0.150mg醋酸d-氯前列醇以溶解黄体并得到第0天的基线孕酮。

从开始处理方案之前两天开始，对于所有动物进行血液提取。然后，在开始处理后，定期进行血液提取直到第14天。

在预先用70％v/v乙醇或10％v/v聚维酮-碘溶液清洗提取区之后，优选从颈静脉或尾骨静脉提取大约8至10mL的静脉血。将血液收集在5mL无菌管中，并在室温下放置2至3小时直至已发生凝血。然后以45000rpm将其离心15分钟以提取血清。最后，取出2个等分的1.5mL血清并放入5mL试管中。这些管可以在-18℃保存用于进一步分析。

使用Immulite 2000系统(DPC/Siemens)分析血清样品以测量孕酮水平。

在下列表格中汇总了对于不同母牛组获得的结果。显示每组动物血液中孕酮浓度的平均值。

下列表1至表3中所示的结果也在图1中示出。

表1.Holando-Argentino

表2.布兰格斯

表3.亚伯丁安格斯

从以上结果可以观察到，本公开实施方案的制剂允许孕酮延迟释放到血流中，因而在开始处理方案(此时具有明显降低的孕酮浓度)后约5至7天时产生所述激素的持续浓度。

本实施例中获得的结果表明，本公开实施方案的产品定义了特征曲线，同时保持了正确的卵泡生长所需的值。应该指出的是，到处理结束时，即约7天或8天后，孕酮水平降低，模拟了取出阴道内或可植入装置所发生的情况。换句话说，图1所示的动力学显示，到那时大部分注射的孕酮已被消耗，这是实现排卵的要求。

实施例5：排卵和卵泡动力学

实施例5A

根据实施例3中列出的标准选择Holando-Argentino、布兰格斯和亚伯丁安格斯品种的母牛。

每个品种选择大约30只动物并分成两组。如方案A中所述，用本公开实施方案的制剂(实施例1的制剂1)处理每个品种的一组。使用如方案F(布兰格斯和亚伯丁安格斯品种)或如方案F1(Holando-Argentino品种)中所述的阴道内装置(布兰格斯和亚伯丁安格斯品种)处理另一组。在所有情况下，在开始处理方案之前两天应用0.150mg醋酸d-氯前列醇，以溶解黄体并获得在第0天的基线孕酮。

为了监测处理动物的卵泡动力学，使用具有线性传感器的6-8.5Mhz的DP-10(Mindray Medical International Ltd.)进行经直肠超声波扫描。在处理第0、2、4、6、7、8、9、10和11天在下表中示出的时间进行超声波检查：

表4.超声波检查的天和时间

下面总结了每组所选动物的超声检查结果，并示于表5至7中。

本实施例的结果证明本公开实施方案的制剂提供了排卵百分比的增加。如表5中可以看出的，在三个分析品种中用本公开实施方案的制剂进行处理比使用阴道内装置进行处理产生更高的排卵百分比。另外，观察到排卵卵泡的平均尺寸更大(表6)。使用本公开实施方案的制剂时的另一个重要优点是观察到与采用使用阴道内装置的方案获得的结果相比排卵时间的同期化得到改善(表7)。采用包括本公开实施方案的制剂的方案处理的大多数动物在第10天(即，在施用制剂10天后)下午排卵。相比之下，使用阴道内装置进行处理时，排卵时间是更加可变的。

表5.排卵百分比

表6.排卵卵泡的平均尺寸

表7.排卵时间

Holando-Argentina品种

布兰格斯品种

亚伯丁安格斯品种

此外，图2所示的结果证明，卵泡生长伴随着孕酮的持续释放。血液中的孕酮浓度从第一天到第六天(包括第一天和第六天)(或者在某些情况下为第五天)逐渐增加，然后从第五天起出现尺寸不同的卵泡，以继续其生长直到排卵(第10天结束)。从第7天开始，观察到孕酮浓度开始降低，其到第9-10天达到基线水平，与上面提及的卵泡生长一致。这些结果对于达到预期的益处是关键的，因为不仅在整个处理期间保持孕酮释放，而且到处理期间结束时其也被消耗，模拟了取出阴道内装置并允许正确的卵泡成熟直到排卵。

通过使用本公开实施方案的制剂获得的排卵百分比(约100％)和排卵时间的同期化增强与阴道内装置相比是意料不到的优点。

实施例5B

还使用实施例1中描述的制剂1、6和7进行比较测定以评估排卵百分比。

对于这种测定，使用身边没有小牛的亚伯丁安格斯母牛。

使用实施例3中描述的方案A，用制剂1、6和7中的每一种处理最少三只动物。结果显示在下表8中。

表8.排卵百分比

结果显示测定的三种制剂产生可接受的排卵百分比(约2/3的动物)。

实施例6.怀孕百分比

挤奶场母牛

根据实施例3中所述的标准选择Holando-Argentina品种的母牛，并且所有经过处理的母牛已具有至少一次产犊并且正在产奶。

选择九批，每批约30只动物，并且每批分成两组。如方案A中所述用本公开实施方案的制剂(实施例1的制剂1)处理每批的一个组，另一组按照方案B1用阴道内装置处理。

评价在开始处理后35-45天期间经过处理的动物的怀孕情况。通过超声进行测定。由此获得的结果显示在下表9中。

表9.怀孕百分比

此外，按照实施例3中列出的标准选择Holando-Argentina品种的母牛，不同之处在于经过处理的母牛仅为小母牛。

选择45只动物并分成两组。如方案A中所述用本公开实施方案的制剂(实施例1的制剂1)处理每批的一个组，另一组按照方案F用阴道内装置处理。

评价开始处理后35-45天期间经过处理的动物的怀孕情况。通过超声进行测定。由此获得的结果显示在下表10中。

表10.Holando-Argentina小母牛的怀孕百分比

肉母牛

根据实施例3中列出的标准选择56头亚伯丁安格斯品种的母牛，并分成两批。第一批包含30头母牛，如方案E中所述用本公开实施方案的制剂(实施例1的制剂1)进行处理，第二批包含26头动物，如方案E1所述用阴道内装置进行处理。通过超声评价开始处理后35-45天期间经过处理的动物的怀孕情况。

注意到在用本公开实施方案的制剂处理的30头母牛中有21头在开始处理后45天之前怀孕，即获得了70％的怀孕百分比。另一方面，用阴道内装置处理的26头母牛中只有14头在开始处理后45天之前怀孕，即怀孕百分比为54％。

在60只动物中重复了上述测定，区别在于在这种情况下用性控精液进行授精。如方案E中所述用本公开实施方案的制剂(实施例1的制剂1)处理第一组40只动物，并按照方案E1中所述用阴道内装置处理第二组20只动物。

注意到在用本公开的制剂(方案E)处理的40头母牛中有24头在处理开始后45天之前怀孕，即获得了58％的怀孕百分比。另一方面，用阴道内装置(方案E1)处理的20头母牛中只有7头在开始处理45天之前怀孕，即怀孕百分比为35％。

以上结果汇总在表11中。

表11.肉母牛的怀孕百分比

在本实施例的上述测定中，对于挤奶场母牛以及肉母牛而言，与使用阴道内装置相比，使用本公开实施方案的制剂时获得的怀孕百分比更高。这些结果显示与使用阴道内装置的处理相比，包含施用本公开实施方案的制剂的处理增加了动物怀孕的可能性。应该指出的是，这些结果与所有评估品种获得的高比率和排卵同期化一致，如实施例5中观察到的。

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Claims (35)

1.一种用于控制雌性哺乳动物的生殖周期和排卵、使一组雌性哺乳动物同期排卵的控释可注射制剂，其包含：

激素，所述激素包含1mg/mL至250mg/mL的孕酮或盐；

药学上可接受的有机溶剂，其包含乙醇、苯甲醇和苯甲酸苄酯，所述乙醇的含量为至多300mg/mL，所述苯甲醇的含量为至多1000mg/mL，并且所述苯甲酸苄酯的含量为至多60mg/mL；

药学上可接受的脂肪酸，其包含硬脂酸，所述硬脂酸的含量为至多60mg/mL；

药学上可接受的表面活性剂，其包含具有40摩尔环氧乙烷的乙氧基化蓖麻油，所述具有40摩尔环氧乙烷的乙氧基化蓖麻油的含量为至多120mg/mL；

药学上可接受的凝胶形成剂，其包含泊洛沙姆P407，所述泊洛沙姆P407的含量为至多120mg/mL；和

水；

其中所述激素的一部分溶解于包含所述药学上可接受的有机溶剂的混合物中以形成游离部分；并且所述激素的一部分被所述药学上可接受的脂肪酸包封以形成封闭部分，

其中所述游离部分和所述封闭部分被包含在基质中，所述基质包含：所述药学上可接受的凝胶形成剂，和所述药学上可接受的表面活性剂。

2.根据权利要求1所述的控释可注射制剂，还包含药学上可接受的油性载体，其中所述激素的一部分溶解于包含所述药学上可接受的有机溶剂和所述药学上可接受的油性载体的混合物中。

3.根据权利要求1所述的控释可注射制剂，其中所述基质还包含药学上可接受的结构形成剂。

4.根据权利要求2所述的控释可注射制剂，其中所述基质还包含药学上可接受的结构形成剂。

5.根据权利要求1所述的控释可注射制剂，其被配制用于：增加雌性哺乳动物怀孕的可能性，使一组雌性哺乳动物同期排卵，减少雌性哺乳动物的不动情期，或其组合。

6.根据权利要求2所述的控释可注射制剂，其中所述药学上可接受的油性载体选自亚麻油、芝麻油、蓖麻油、棕榈酸、大豆油、葵花油、玉米油、椰子油、橄榄油、杏仁油、棉花油，及其组合。

7.根据权利要求6所述的控释可注射制剂，其中所述药学上可接受的油性载体包含精制芝麻油。

8.根据权利要求2所述的控释可注射制剂，其中所述药学上可接受的结构形成剂选自纤维素、瓜尔豆胶、阿拉伯树胶、黄原胶、壳聚糖、海藻酸盐、明胶、卡波姆、羟基乙酸淀粉钠、交联羧甲基纤维素钠、海藻酸、果胶，及其组合。

9.根据权利要求8所述的控释可注射制剂，其中所述药学上可接受的结构形成剂选自微晶纤维素、乙基纤维素、羟乙基纤维素、羟乙基甲基纤维素、羟乙基丙基纤维素、羧甲基纤维素、卡波姆71G NF、卡波姆971P NF、卡波姆974P NF、卡波姆ETD 2020NF、卡波姆5984ETD和卡波姆Ultrez10。

10.根据权利要求8所述的控释可注射制剂，其中所述药学上可接受的结构形成剂选自羟乙基纤维素、阿拉伯树胶、黄原胶及其组合。

11.根据权利要求8所述的控释可注射制剂，其中所述药学上可接受的结构形成剂包含羟乙基纤维素。

12.根据权利要求1所述的控释可注射制剂，其中所述泊洛沙姆P407是KolliphorP407。

13.根据权利要求4所述的控释可注射制剂，其中所述激素包含孕酮或盐，所述药学上可接受的有机溶剂为苯甲醇、苯甲酸苄酯和乙醇的混合物，所述药学上可接受的脂肪酸为硬脂酸，所述药学上可接受的结构形成剂为羟乙基纤维素，所述药学上可接受的表面活性剂为具有40摩尔环氧乙烷的乙氧基化蓖麻油，所述药学上可接受的凝胶形成剂为泊洛沙姆P407，并且所述药学上可接受的油性载体为精制芝麻油。

14.根据权利要求1所述的控释可注射制剂，还包含至多50mg/mL的羟乙基纤维素。

15.根据权利要求1所述的控释可注射制剂，还包含至多100mg/mL的精制芝麻油。

16.根据权利要求1所述的控释可注射制剂，其中所述制剂具有4.0至8.0的pH。

17.根据权利要求1所述的控释可注射制剂，还包含药学上可接受的抗氧化剂，所述药学上可接受的抗氧化剂选自维生素E、Kolliphor TGPS、丁基羟基甲苯、丁基羟基茴香醚、亚硫酸氢钠、抗坏血酸、抗坏血酸棕榈酸酯、维生素A、没食子酸丙酯、一硫代甘油、次硫酸钠缩甲醛，及其组合。

18.根据权利要求17所述的控释可注射制剂，其中所述维生素E是维生素E TGPS。

19.根据权利要求1所述的控释可注射制剂，其中所述制剂适合通过肌内注射施用于雌性哺乳动物。

20.根据权利要求1所述的控释可注射制剂，其中向雌性哺乳动物施用后，所述激素具有持续的血液浓度，然后血液激素浓度降低。

21.根据权利要求20所述的控释可注射制剂，其中激素的血液浓度的降低在施用所述制剂后5天至10天发生。

22.根据权利要求21所述的控释可注射制剂，其中激素的血液浓度的降低在施用所述制剂后6天至8天发生。

23.根据权利要求1所述的控释可注射制剂，其中1至20mL的所述制剂形成剂量单位。

24.一种预填充注射器，包含根据权利要求23中定义的剂量单位。

25.一种试剂盒，包含根据权利要求23中定义的剂量单位，以及使用说明书。

26.一种制备根据权利要求1所述的控释可注射制剂的方法，包括：

i)制备包含药学上可接受的表面活性剂和水的第一溶液，所述药学上可接受的表面活性剂是具有40摩尔环氧乙烷的乙氧基化蓖麻油；

ii)制备包含激素、药学上可接受的脂肪酸、药学上可接受的有机溶剂、药学上可接受的凝胶形成剂和水的第二溶液，其中所述第二溶液通过合并混合物I和混合物II来制备，并且所述激素包括孕酮或盐，其中

a)混合物I包含激素、药学上可接受的脂肪酸和药学上可接受的有机溶剂，其中所述药学上可接受的脂肪酸是硬脂酸，所述药学上可接受的有机溶剂是乙醇；并且

b)混合物II包含药学上可接受的凝胶形成剂和水，所述药学上可接受的凝胶形成剂为泊洛沙姆P407；

iii)制备包含所述激素和药学上可接受的有机溶剂的第三溶液，所述药学上可接受的有机溶剂是乙醇、苯甲醇和苯甲酸苄酯的混合物；

iv)将所述第一溶液与所述第二溶液合并；和

v)将所述第三溶液并入到步骤iv)中获得的混合物中。

27.根据权利要求26所述的方法，其中所述第三溶液还包含药学上可接受的油性载体。

28.根据权利要求26所述的方法，还包括制备包括药学上可接受的结构形成剂和水的第四溶液。

29.根据权利要求28所述的方法，包括将所述第四溶液加入到步骤v)中获得的混合物中。

30.根据权利要求29所述的方法，其中所述第一溶液的药学上可接受的表面活性剂是具有40摩尔环氧乙烷的乙氧基化蓖麻油；

所述混合物I的所述激素包含孕酮或盐，

所述混合物I的所述药学上可接受的脂肪酸是硬脂酸，

所述混合物I的所述药学上可接受的有机溶剂是乙醇；

所述混合物II的所述药学上可接受的凝胶形成剂是泊洛沙姆P407；

所述第三溶液的所述激素包含孕酮或盐，

所述第三溶液的所述药学上可接受的有机溶剂是乙醇、苯甲醇和苯甲酸苄酯的混合物，

所述第三溶液的所述药学上可接受的油性载体是精制芝麻油；并且

所述第四溶液的所述药学上可接受的结构形成剂是羟乙基纤维素。

31.一种用于控制雌性哺乳动物的生殖周期和排卵、使一组雌性哺乳动物同期排卵的非治疗方法，包括向所述雌性哺乳动物施用根据权利要求1所述的制剂。

32.根据权利要求31所述的方法，其中所述雌性哺乳动物选自牛、猪、山羊、绵羊、马和骆驼。

33.根据权利要求31所述的方法，其中所述雌性哺乳动物是生殖成熟的牛科动物。

34.根据权利要求31所述的方法，其中在授精前将所述制剂施用于所述雌性哺乳动物。

35.根据权利要求34所述的方法，其中在施用所述制剂后9天至11天实施授精。

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