CN108350496B - 聚合酶组合物和套组以及其使用与制造方法 - Google Patents

聚合酶组合物和套组以及其使用与制造方法 Download PDF

Info

Publication number
CN108350496B
CN108350496B CN201680064448.7A CN201680064448A CN108350496B CN 108350496 B CN108350496 B CN 108350496B CN 201680064448 A CN201680064448 A CN 201680064448A CN 108350496 B CN108350496 B CN 108350496B
Authority
CN
China
Prior art keywords
polymerase
amino acid
seq
recombinant
nucleic acid
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201680064448.7A
Other languages
English (en)
Other versions
CN108350496A (zh
Inventor
D·马祖尔
P·万德霍恩
E·托泽
陈思红
罗国斌
J·雪利
K·海涅曼
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Life Technologies Corp
Original Assignee
Life Technologies Corp
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Life Technologies Corp filed Critical Life Technologies Corp
Priority to CN202310209408.9A priority Critical patent/CN116218815A/zh
Publication of CN108350496A publication Critical patent/CN108350496A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN108350496B publication Critical patent/CN108350496B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/10—Transferases (2.)
    • C12N9/12—Transferases (2.) transferring phosphorus containing groups, e.g. kinases (2.7)
    • C12N9/1241—Nucleotidyltransferases (2.7.7)
    • C12N9/1252—DNA-directed DNA polymerase (2.7.7.7), i.e. DNA replicase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
    • C12Q1/686—Polymerase chain reaction [PCR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6869—Methods for sequencing
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y207/00—Transferases transferring phosphorus-containing groups (2.7)
    • C12Y207/07—Nucleotidyltransferases (2.7.7)
    • C12Y207/07007—DNA-directed DNA polymerase (2.7.7.7), i.e. DNA replicase

Abstract

本公开提供适用于核酸聚合的组合物、方法、套组、系统以及设备。确切地说，提供允许核酸扩增的重组聚合酶和其生物活性片段。在一些方面中，本公开提供当在合成测序反应中使用时相比于对照聚合酶产生较低系统误差速率和/或改进的准确度的重组聚合酶。在一个方面中，本公开涉及适用于核酸测序、基因分型、拷贝数变异分析、双端测序和基因分析的其它形式的重组聚合酶。在另一个方面中，所述重组聚合酶适用于在PCR、emPCR、等温扩增、重组酶聚合酶扩增、滚环扩增、链置换扩增和邻位连接扩增期间扩增核酸模板。在一些方面中，本公开涉及适用于产生核酸库和/或核酸模板的重组聚合酶。

Description

聚合酶组合物和套组以及其使用与制造方法
相关申请的交叉引用
本申请要求2015年10月1日申请的美国临时申请第62/235,616号的权益。本申请以全文引用的方式并入本文中。
序列表
本申请在此以引用的方式并有与此同时提交的电子序列表材料。电子序列表中的材料以标题为“LT01102PCT_SeqList_092316.txt”、创建于16年9月23日的文件大小为698KB的文本(.txt)文档形式提交，且以全文引用的方式并入本文中。
技术领域
经修饰的DNA聚合酶和组合物和套组，以及其使用和制造方法。
背景技术
酶催化生物反应的能力对生命来说是基本的。一系列生物应用使用酶来活体外合成各种生物分子。一种尤其适用的类别的酶为聚合酶，其可催化生物分子(例如核苷酸或氨基酸)聚合成生物聚合物(例如核酸或肽)。举例来说，尤其以模板依赖性方式可将核苷酸聚合成核酸的聚合酶适用于重组DNA技术和核酸测序应用中。许多核酸测序方法在由聚合酶催化的活体外模板依赖性核酸合成期间监测核苷酸掺入。单分子测序(SMS)和双端测序(PES)典型地包括用于模板依赖性核酸合成的聚合酶。聚合酶也适用于产生核酸库，如在乳液PCR或桥式PCR期间产生的文库。使用此类聚合酶产生的核酸库可用于多种下游工艺中，如基因分型；核苷酸多态性(SNP)分析；拷贝数变异分析；表观遗传分析；基因表达分析；杂交阵列；基因突变分析，包括(但不限于)疾病病况的检测、预后和/或诊断；罕见或低频等位基因突变的检测和分析；以及核酸测序，包括(但不限于)从头测序或目标重测序。
当进行聚合酶依赖性核酸合成或扩增时，其可适用于修饰聚合酶(例如经由突变或化学修饰)以改变其催化特性。在一些情况下，其可适用于修饰聚合酶以增强其催化特性。在一些实施例中，其可适用于经由定点氨基酸取代或缺失增强聚合酶的催化特性。可通过聚合酶对核苷酸底物的动力学行为来限制涉及核酸合成的各种生物分析中的聚合酶性能。举例来说，聚合酶活性分析可因以下非所需行为而变得复杂：如给定聚合酶从模板解离；结合和/或并入不正确(例如非沃森-克里克(Watson-Crick)碱基配对)的核苷酸；或释放正确(例如沃森-克里克碱基配对)的核苷酸而非并入的倾向。这些和其它所需特性可经由所选聚合酶的适合的选择、工程改造和/或修饰来增强。举例来说，可进行此类修饰以有利地改变聚合酶的核苷酸掺入比率、结合到模板的亲和力、持续合成能力、平均阅读长度、核苷酸掺入准确度、链偏差、系统误差和/或总测序通量；此类改变可提高序列信息量和/或获自单一测序反应的测序信息的质量。在所属领域中仍需要展现改变的特性，例如提高的持续合成能力、增加的阅读长度(包括无误差阅读长度)、提高的原始准确度和/或对DNA模板的亲和力、增加的测序通量、减少的链偏差和/或减少的系统误差的改进的聚合酶组合物。此类聚合酶组合物可适用于广泛多种涉及聚合酶依赖性核酸合成的分析，包括核酸测序、qPCR、PCR、桥式PCR、等温扩增、克隆扩增以及核酸库产生。
发明内容
本发明大体上涉及非天然存在的突变(典型地重组)Bst聚合酶和组合物、套组和其使用和制造方法。相比于参考(例如野生型)Bst聚合酶，突变(例如重组)Bst聚合酶含有至少一种氨基酸突变(例如取代、缺失或添加)且具有改良的特性。在一些实施例中，相比于野生型和/或参考突变Bst DNA聚合酶，突变(例如重组)Bst DNA聚合酶在合成测序反应，尤其在其中产生和/或检测氢离子的步骤中使用突变Bst聚合酶的合成测序反应中具有减少的系统误差、提高的信噪比和/或改进的准确度。此外，本文提供用于进行聚合反应的方法，其包括在一种或多种核苷酸存在下使本文所提供的突变(例如重组)Bst DNA聚合酶或其生物活性片段与核酸模板接触，且使用突变聚合酶或其生物活性片段使一种或多种核苷酸中的至少一种聚合。
因此，在说明性实施例中，本发明提供典型地为重组DNA聚合酶的非天然存在的突变DNA聚合酶以及包括突变(例如重组)DNA聚合酶的组合物、套组和方法，其中聚合酶具有与SEQ ID NO:1或其片段具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％序列一致性的多肽链段，展现聚合酶活性，且包括(a)一个或多个选自由以下组成的群组的氨基酸取代：E30K、G209Q、E220H或E220T、N234K、P236I或P236R、E245R、L252R、S260K、D264K或D264M、E267M或E267K或E267R、E277T、T324R、E325R、A344Y、E442R或E442Y、E456R、H473G、D480L、N485R、A492K、E493G或E493R、M495C、N517C或N517K、E522C和H528T；或(b)两个或更多个选自以下的氨基酸取代：E30K、G209Q、E220H、E220K或E220T、N234K或N234R、P236I或P236R、V241K、E245R、V251R、L252R、S260K、D264K或D264M、E267M或E267K或E267R、E277T、E294K、T324R、E325R、A344Y、E442R或E442Y、E456R、H473G、D480L或D480R、N485R、A492K、E493G或E493R、M495C、N517C或N517K、E522C和H528T。相比于使用参考Bst聚合酶，如野生型Bst聚合酶、SEQ ID NO:2的突变Bst聚合酶或SEQ ID NO:35的突变Bst聚合酶获得的误差率、准确度和/或信噪比，当在其中释放和/或检测氢离子的合成测序反应中使用时，突变(例如重组)DNA聚合酶可导致降低的误差率(例如平均系统误差率)、改进的准确度和/或提高的信噪比。聚合酶在说明性实例中具有改进的特性的合成测序反应为释放和检测氢离子的测序反应。说明性实施例中的突变(例如重组)聚合酶包括氨基酸取代H46R、E446Q和H572R，和/或可包括突变H281M、D423K和N487R，其中编号相对于SEQ ID NO:1。在说明性实施例中，突变(例如重组)聚合酶不具有5'到3'核酸外切酶活性和/或3'到5'核酸外切酶活性。在说明性实施例中，突变(例如重组)聚合酶不包含具有3'到5'核酸外切酶活性和/或5'到3'核酸外切酶活性的野生型Bst DNA聚合酶的链段。
说明性实施例中的突变(例如重组)DNA聚合酶包括L252R、H473G和H528T中的一种或多种，其中编号相对于SEQ ID NO:1。因此，在本文所提供的某些实例中，突变(例如重组)DNA聚合酶与SEQ ID NO:1或其片段具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％的一致性，展现聚合酶活性，包括氨基酸取代H46R、E446Q、H572R、H281M、D423K和N487R，且进一步包括L252R、H473G和H528T中的任何一种或两种，或包括L252R、H473G和H528T中的全部，其中编号相对于SEQ ID NO:1。在具有此类突变的示例性实施例中，非天然存在的突变异体具有SEQ ID NO:119序列。
在其它子实施例中，上文提供的实施例中的突变(例如重组)DNA聚合酶的多肽链段可为突变(例如重组)DNA聚合酶的至少50％、60％、70％、75％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％，且可与SEQ ID NO:1具有至少75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％一致性，或与SEQ ID NO:16(其为全长野生型Bst聚合酶)具有至少75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％一致性。此类子实施例中的突变(例如重组)DNA聚合酶展现聚合酶活性，可包括氨基酸取代H341R、E741Q和H867R，和/或可包括突变H576M、D718K和N782R，且包括L547R、H768G和H823T中的一种或多种，其中编号相对于SEQID NO:16。在某些实施例中，突变(例如重组)DNA聚合酶包括L547R、H768G和H823T。在具有此类突变的示例性实施例中，突变DNA聚合酶具有SEQ ID NO:121的氨基酸序列。
在本发明的另一个方面中，提供一种用于进行聚合反应的方法，其包括以下：(a)在一种或多种核苷酸存在下使非天然存在的突变(例如重组)DNA聚合酶与核酸接触；以及(b)使用突变(例如重组)DNA聚合酶使一种或多种核苷酸中的至少一种聚合。此类方法中的突变(例如重组)DNA聚合酶可包括与SEQ ID NO:1或其片段具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％一致性的多肽链段，展现聚合酶活性，可任选地包括H46R、E446Q和H572R和/或H281M、D423K和N487R，且包括i)一个或多个选自由以下组成的群组的氨基酸取代：E30K、G209Q、E220H或E220T、N234K、P236I或P236R、E245R、L252R、S260K、D264K或D264M、E267M或E267K或E267R、E277T、T324R、E325R、A344Y、E442R或E442Y、E456R、H473G、D480L、N485R、A492K、E493G或E493R、M495C、N517C或N517K、E522C和H528T，其中编号相对于SEQ ID NO:1；或ii)两个或更多个选自以下的氨基酸取代：E30K、G209Q、E220H、E220K或E220T、N234K或N234R、P236I或P236R、V241K、E245R、V251R、L252R、S260K、D264K或D264M、E267M或E267K或E267R、E277T、E294K、T324R、E325R、A344Y、E442R或E442Y、E456R、H473G、D480L或D480R、N485R、A492K、E493G或E493R、M495C、N517C或N517K、E522C和H528T，其中编号相对于SEQ ID NO:1。在说明性实施例中，当在合成测序反应中使用时，相比于参考聚合酶，此类方法中使用的重组聚合酶可具有产生较低系统误差率、提高的信噪比和/或较高准确度的特性。说明性实例中的合成测序反应为产生且检测氢离子的反应。在说明性实施例中，方法中使用的突变(例如重组)聚合酶包括氨基酸取代H46R、E446Q和H572R，和/或可包括突变H281M、D423K和N487R，其中编号相对于SEQ ID NO:1。盐可包括于反应混合物中，其中发生接触。反应混合物可例如以50到250mM，或100mM到200mM，或120到200mM，或超过120mM，如125mM到250mM，或125mM到175mM的浓度包括盐。说明性实例中的盐为KCl和/或NaCl。
上文说明性实例中提供的用于进行聚合反应的方法中的突变(例如重组)DNA聚合酶包括L252R、H473G和H528T中的一种或多种，其中编号相对于SEQ ID NO:1。因此，在本文所提供的某些说明性实例中，用于进行聚合反应的方法中使用的突变(例如重组)DNA聚合酶与SEQ ID NO:1或其片段具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％一致性，展现聚合酶活性，包括氨基酸取代H46R、E446Q、H572R、H281M、D423K和N487R，且进一步包括L252R、H473G和H528T，其中编号相对于SEQ ID NO:1。在具有此类突变的示例性实施例中，非天然存在的突变(例如重组)DNA聚合酶具有SEQ ID NO:119的序列。
在其它子实施例中，用于使上文所提供的实施例聚合的方法中的突变(例如重组)DNA聚合酶的多肽链段可为突变(例如重组)DNA聚合酶的至少50％、60％、70％、75％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％，且可与SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:16(其为全长野生型Bst聚合酶)具有至少75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％一致性。用于聚合子实施例的此类方法中的突变(例如重组)DNA聚合酶展现聚合酶活性，可包括氨基酸取代H341R、E741Q和H867R，和/或可包括突变H576M、D718K和N782R，且包括L547R、H768G和H823T中的一种或多种，其中编号相对于SEQ ID NO:16。在某些说明性实施例中，突变(例如重组)DNA聚合酶包括L547R、H768G和H823T。在说明性实施例中，突变(例如重组)聚合酶不具有5'到3'核酸外切酶活性和/或3'到5'核酸外切酶活性。在用于聚合实施例(其中突变(例如重组)DNA聚合酶具有此类突变)的示例性方法中，突变DNA聚合酶具有SEQ IDNO:121的氨基酸序列。
在本发明的另一个方面中，提供一种用于扩增核酸的方法，其包括以下：(a)在一种或多种核苷酸存在下使核酸与非天然存在的突变(例如重组)DNA聚合酶接触，所述聚合酶包括与SEQ ID NO:1或其片段具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％一致性的多肽链段，展现聚合酶活性，可任选地包括H46R、E446Q和H572R和/或H281M、D423K和N487R，且包括i)一个或多个选自由以下组成的群组的氨基酸取代：E30K、G209Q、E220H或E220T、N234K、P236I或P236R、E245R、L252R、S260K、D264K或D264M、E267M或E267K或E267R、E277T、T324R、E325R、A344Y、E442R或E442Y、E456R、H473G、D480L、N485R、A492K、E493G或E493R、M495C、N517C或N517K、E522C和H528T，其中编号相对于SEQ ID NO:1；或ii)两个或更多个选自以下的氨基酸取代：E30K、G209Q、E220H、E220K或E220T、N234K或N234R、P236I或P236R、V241K、E245R、V251R、L252R、S260K、D264K或D264M、E267M或E267K或E267R、E277T、E294K、T324R、E325R、A344Y、E442R或E442Y、E456R、H473G、D480L或D480R、N485R、A492K、E493G或E493R、M495C、N517C或N517K、E522C和H528T，其中编号相对于SEQ ID NO:1。在说明性实施例中，当在合成测序反应中使用时，相比于参考聚合酶，此类方法中使用的突变(例如重组)聚合酶具有产生较低系统误差率和/或较高准确度的特性。说明性实例中的合成测序反应为产生且检测氢离子的反应。说明性实例中的方法中使用的突变(例如重组)聚合酶包括氨基酸取代H46R、E446Q和H572R，和/或可包括突变H281M、D423K和N487R，其中编号相对于SEQ ID NO:1。盐可包括于反应混合物中，其中发生接触。反应混合物可例如以50到250mM，或100mM到200mM，或120到200mM，或120到200mM，或超过120mM，如125mM到250mM，或125mM到175mM的浓度包括盐。说明性实例中的盐为KCl和/或NaCl。
上文说明性实例中提供的用于扩增核酸的方法中的突变(例如重组)DNA聚合酶包括L252R、H473G和H528T中的一种或多种，其中编号相对于SEQ ID NO:1。因此，在本文所提供的某些实例中，重组DNA聚合酶和相关实施例中的突变DNA聚合酶与SEQ ID NO:1或其片段具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％一致性，展现聚合酶活性，包括氨基酸取代H46R、E446Q、H572R、H281M、D423K和N487R，且进一步包括L252R、H473G和H528T，其中编号相对于SEQ ID NO:1。在具有此类突变的示例性实施例中，非天然存在的突变异体具有SEQ ID NO:119序列。
在其它子实施例中，上文所提供的用于扩增实施例的方法中的突变(例如重组)DNA聚合酶的多肽链段可为突变(例如重组)DNA聚合酶的至少50％、60％、70％、75％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％，且可与SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:16(其为全长野生型Bst聚合酶)具有至少75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％一致性。此类子实施例中的突变(例如重组)DNA聚合酶展现聚合酶活性，可包括氨基酸取代H341R、E741Q和H867R，和/或可包括突变H576M、D718K和N782R，且包括L547R、H768G和H823T中的一种或多种，其中编号相对于SEQ ID NO:16。在某些实施例中，突变(例如重组)DNA聚合酶包括L547R、H768G和H823T。在具有此类突变的示例性实施例中，突变DNA聚合酶具有SEQ IDNO:121的氨基酸序列。
在某些实施例中，扩增方法为聚合酶链反应、乳液聚合酶链反应、等温扩增反应、重组酶聚合酶扩增反应、邻位连接扩增反应、滚环扩增反应或链置换扩增反应。在某些实施例中，扩增使核酸在溶液中或在固体载体上克隆扩增。
在本发明的另一个方面中，提供一种从核酸模板获得序列信息的方法，其包括以下：(a)提供包含模板核酸、测序引物、一种或多种核苷酸和非天然存在的突变(例如重组)DNA聚合酶的反应混合物；(b)使模板核酸与至少一种类型的核苷酸接触，其中接触包括将来自至少一种类型的核苷酸的一种或多种核苷酸掺入于测序引物的3'端上且使用突变(例如重组)DNA聚合酶产生延伸的引物产物；以及(c)检测反应混合物中延伸的引物产物的存在，由此判定是否已发生核苷酸掺入。此类方法中的突变(例如重组)DNA聚合酶可包括与SEQ ID NO:1或其片段具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％一致性的多肽链段，展现聚合酶活性，可任选地包括H46R、E446Q和H572R和/或H281M、D423K和N487R，且包括i)一个或多个选自由以下组成的群组的氨基酸取代：E30K、G209Q、E220H或E220T、N234K、P236I或P236R、E245R、L252R、S260K、D264K或D264M、E267M或E267K或E267R、E277T、T324R、E325R、A344Y、E442R或E442Y、E456R、H473G、D480L、N485R、A492K、E493G或E493R、M495C、N517C或N517K、E522C和H528T，其中编号相对于SEQ ID NO:1；或ii)两个或更多个选自以下的氨基酸取代：E30K、G209Q、E220H、E220K或E220T、N234K或N234R、P236I或P236R、V241K、E245R、V251R、L252R、S260K、D264K或D264M、E267M或E267K或E267R、E277T、E294K、T324R、E325R、A344Y、E442R或E442Y、E456R、H473G、D480L或D480R、N485R、A492K、E493G或E493R、M495C、N517C或N517K、E522C和H528T，其中编号相对于SEQ ID NO:1。在说明性实施例中，当在合成测序反应中使用时，相比于参考聚合酶，此类方法中使用的重组聚合酶可产生较低系统误差率和/或较高准确度。说明性实例中的合成测序反应为产生且检测氢离子的反应。反应混合物可例如以50到250mM，或100mM到200mM，或120到200mM，或超过120mM，如125mM到250mM，或125mM到175mM的浓度包括盐。说明性实例中的盐为KCl和/或NaCl。
用于从上文说明性实例中提供的核酸模板获得序列信息的方法中的突变(例如重组)DNA聚合酶包括L252R、H473G和H528T中的一种或多种，其中编号相对于SEQ ID NO:1。因此，在本文所提供的某些实例中，重组DNA聚合酶和相关实施例中的突变DNA聚合酶与SEQID NO:1或其片段具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％一致性，展现聚合酶活性，包括氨基酸取代H46R、E446Q、H572R、H281M、D423K和N487R，且进一步包括L252R、H473G和H528T，其中编号相对于SEQ ID NO:1。在用于获得序列信息的方法的示例性实施例中，具有此类突变的突变(例如重组)DNA聚合酶具有SEQ ID NO:119的序列。
在用于从核酸模板获得序列信息的方法的其它子实施例中，上文所提供的实施例中的突变(例如重组)DNA聚合酶的多肽链段可为突变(例如重组)DNA聚合酶的至少50％、60％、70％、75％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％，且可与SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:16(其为全长野生型Bst聚合酶)具有至少75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％一致性。此类子实施例中的突变(例如重组)DNA聚合酶展现聚合酶活性，可包括氨基酸取代H341R、E741Q和H867R，和/或可包括突变H576M、D718K和N782R，且包括L547R、H768G和H823T中的一种或多种，其中编号相对于SEQ ID NO:16。在某些实施例中，突变(例如重组)DNA聚合酶包括L547R、H768G和H823T。在用于获得序列信息的方法的示例中，具有此类突变的突变(例如重组)DNA聚合酶具有SEQ ID NO:121的氨基酸序列。
在方法的实施例中，掺入于测序引物的3'端上的一种或多种核苷酸中的至少一种为可逆终止子核苷酸；所述接触包括产生一个或多个氢离子作为核苷酸掺入的副产物；检测包括测量作为核苷酸掺入副产物产生的一个或多个氢离子的浓度；且所述方法进一步包括鉴别从至少一种类型的核苷酸掺入的一种或多种核苷酸中的至少一种。方法接触、检测和鉴别步骤重复超过一次，由此鉴别多次连续核苷酸掺入。
附图说明
并入到说明书中且形成说明书的一部分的随附图式说明一个或多个示例性实施例且用以解释各个示例性实施例的原理。图式仅是示例性和解释性的，且不应理解为以任何方式限制或约束。
图1显示概述根据本公开进行的示例性解离分析的曲线图。
图2显示概述根据本公开获得的示例性经修饰的聚合酶的示例性解离速率曲线的曲线图。
图3A到3F为提供使用根据本公开的示例性重组聚合酶获得的示例性核酸测序数据的表。
图4为显示使用根据本公开的三种重组聚合酶获得的示例性核酸测序数据的表和曲线图。
图5为提供使用根据本公开的三种重组聚合酶获得的示例性核酸测序数据的表。
具体实施方式
本文提供衍生自具有改进特性的Bst聚合酶的非天然存在的突变(典型地重组)聚合酶以及包括突变(例如重组)聚合酶的方法和套组。在某些示例性实施例中，当在核酸测序反应中使用时，突变(例如重组)聚合酶产生改进结果。举例来说，在某些说明性实施例中，当在测序反应，如合成测序反应中使用，包括(但不限于)产生且检测氢离子的那些时，本文中的重组突变聚合酶提供改进准确度和读取长度。因此，本文所提供的重组突变聚合酶可用于改进核酸测序准确度且降低成本。
如本文所使用，术语“聚合酶”和其变化形式包含可催化核苷酸(包括其类似物)聚合成核酸链的任何酶。典型地但未必，此类核苷酸聚合可以模板依赖性方式进行。此类聚合酶可包括(不限于)天然存在的聚合酶和其任何次单元和截断、突变聚合酶、变异聚合酶、重组、融合或以其它方式工程化的聚合酶、经化学修饰的聚合酶、合成分子或组件以及保留催化此类聚合的能力的任何类似物、同源物、衍生物或其片段。任选地，聚合酶可为包含一个或多个突变的突变聚合酶，所述突变涉及用其它氨基酸替换一个或多个氨基酸，来自聚合酶的一个或多个氨基酸的插入或缺失或两个或更多个聚合酶的部分的连接。典型地，聚合酶包含可进行核苷酸结合和/或核苷酸聚合催化的一个或多个活性位点。如本文所使用，术语“聚合酶”和其变化形式也指包含至少两个彼此连接的部分的融合蛋白，其中第一部分包含可催化核苷酸聚合成核酸链的肽且所述第一部分连接到包含第二多肽的第二部分。在一些实施例中，第二多肽可包括报导子酶或增强持续合成能力的域。
如本文所使用，术语“连接(link)”、“连接(linked)”、“连接(linkage)”和其变化形式包含任何类型的融合、粘合、粘附或缔合，其具有足够的稳定性以耐受在相关特定生物应用中的使用。此类连接可包含例如共价、离子、氢、偶极-偶极、亲水性、疏水性或亲和性粘合、涉及范德华力(van der Waals force)的粘合或缔合、机械粘合等。任选地，此类连接可在不同分子的组合之间发生，包括(但不限于)：在纳米粒子与蛋白质之间；在蛋白质与标记之间；在连接子与官能化纳米粒子之间；在连接子与蛋白质之间；在核苷酸与标记之间等等。连接的一些实例可见于例如Hermanson,G.,《生物结合物技术(BioconjugateTechniques)》,第二版(2008)；Aslam,M.,Dent,A.,《生物结合：生物医学科学的蛋白质偶联技术(Bioconjugation:Protein Coupling Techniques for the BiomedicalSciences)》,伦敦：麦克米伦(Macmillan)(1998)；Aslam,M.,Dent,A.,《生物结合：生物医学科学的蛋白质偶联技术》,伦敦：麦克米伦(1998)中。
如本文参考多肽或蛋白质(例如聚合酶)所使用的术语“修饰”或“经修饰的”和其变化形式包含蛋白质的结构、生物和/或化学特性的任何变化。在一些实施例中，修饰可包括蛋白质的氨基酸序列变化。举例来说，修饰可任选地包括一个或多个氨基酸突变，包括(但不限于)氨基酸添加、缺失和取代(包括保守性和非保守性取代两种)。使得非天然存在的多肽产生的多肽氨基酸序列的修饰在本文中称为“重组”多肽。举例来说，本文中的多个实例公开重组DNA聚合酶在核酸测序或扩增反应中的用途。此外，实例1概述所属领域的普通技术人员可如何由参考聚合酶制备重组DNA聚合酶库。在一些情况下，重组DNA聚合酶可包括一个或多个沿着DNA聚合酶长度的氨基酸取代。在一些实施例中，一个或多个沿着DNA聚合酶长度的氨基酸取代可产生相比于不具有一个或多个氨基酸取代的对照聚合酶具有改进的准确度和/或降低的系统误差率和/或提高的测序通量和/或提高的信噪比的重组DNA聚合酶。
如本文参考氨基酸序列的任何变化所使用的术语“保守性”和其变化形式是指其中一个或多个氨基酸被另一个具有高度类似特性的氨基酸取代的氨基酸突变。举例来说，包含非极性或脂肪族侧链的一种或多种氨基酸(例如甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、白氨酸或异白氨酸)可彼此取代。类似地，包含极性不带电侧链的一种或多种氨基酸(例如丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸、天冬酰胺或谷氨酰胺)可彼此取代。类似地，包含芳香族侧链的一种或多种氨基酸(例如苯丙氨酸、酪氨酸或色氨酸)可彼此取代。类似地，包含带正电侧链的一种或多种氨基酸(例如赖氨酸、精氨酸或组氨酸)可彼此取代。类似地，包含带负电侧链的一种或多种氨基酸(例如天冬氨酸或谷氨酸)可彼此取代。在一些实施例中，经修饰的聚合酶为包含这些保守性氨基酸取代或其任何组合中的一个或多个的变异体。在一些实施例中，白氨酸的保守性取代包括：丙氨酸、异白氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、甲硫氨酸以及半胱氨酸。在其它实施例中，天冬酰胺的保守性取代包括：精氨酸、赖氨酸、天冬氨酸、谷氨酸以及谷氨酰胺。
在本发明通篇中，包括例如氨基酸取代的各种氨基酸突变使用氨基酸单字母密码提及，且指示参考氨基酸序列内残基的位置。在氨基酸取代的情况下，取代基的一致性也使用氨基酸单字母密码指示。举例来说，参考假设氨基酸取代“D166A”(其中编号相对于SEQID NO:7的氨基酸序列)指示其中在SEQ ID NO:7的氨基酸序列的氨基酸位置166处丙氨酸(A)残基取代通常出现的天冬氨酸(D)残基的氨基酸取代。本文所公开的许多氨基酸序列以甲硫氨酸残基(“M”)开始，其典型地在编码于细菌宿主细胞中表达所需的肽的核酸序列的开端处引入。然而，应理解，本发明也涵盖从前面氨基酸残基开始的所有此类氨基酸序列，而不包括第一甲硫氨酸残基。
如本文所使用，当在两个或更多个核酸或多肽序列的情形中使用时，术语“一致”或“一致性百分比”和其变化形式是指当比较和比对最大对应性时相同或指定百分比的氨基酸残基或核苷酸相同的两个或更多个序列或子序列，如使用以下序列比较算法中的任何一种或多种所测量：尼德曼-翁施(Needleman-Wunsch)(参见例如Needleman,Saul B.和Wunsch,Christian D.(1970).“适用于搜索两个蛋白质的氨基酸序列的类似性的一般方法(A general method applicable to the search for similarities in the amino acidsequence of two proteins)”《分子生物学杂志(Journal of Molecular Biology)》48(3):443-53)；史密斯-沃特曼(Smith-Waterman)(参见例如Smith,Temple F.和Waterman,Michael S.,“鉴别常见分子子序列(Identification of Common MolecularSubsequences)”(1981)《分子生物学杂志》147:195-197)；或BLAST(基本局部对比搜索工具(Basic Local Alignment Search Tool)；参见例如Altschul SF,Gish W,Miller W,MyersEW,Lipman DJ,“基本局部对比搜索工具”(1990)《分子生物学杂志(J Mol Biol)》215(3):403-410)。
如本文所使用，当在两种或更多种核酸或多肽序列的情形下使用时，术语“基本上一致”或“基本一致性”以及其变化形式是指，当经过比较和比对以得到最大对应性时，如使用序列比较算法或通过目视检查所测量，具有至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％核苷酸或氨基酸残基一致性的两种或更多种序列或子序列(如生物活性片段)。大体上一致的序列典型地被认为是同源的，无论实际来源于何种家系。在一些实施例中，在所比较的序列的区域中存在“基本一致性”。在一些实施例中，在长度为至少25个残基、长度为至少50个残基、长度为至少100个残基、长度为至少150个残基、长度为至少200个残基或长度为至少200个残基的区域中存在基本一致性。在一些实施例中，所比较的序列在所比较的序列全长中基本上一致。典型地，基本上一致的核酸或蛋白质序列包括小于100％核苷酸或氨基酸残基一致性，如此序列一般应被视为“一致的”。
当蛋白质和/或蛋白质子序列(如生物活性片段)天然或人工地衍生自共同的祖先蛋白质或蛋白质序列时，蛋白质和/或蛋白质子序列(如生物活性片段)是“同源的”。类似地，当核酸和/或核酸序列天然地或人工地衍生自共同的祖先核酸或核酸序列时，核酸和/或核酸序列是同源的。一般从两个或更多个核酸或蛋白质(或其生物活性片段或序列)之间的序列类似性推断同源性。适用于建立同源性的序列之间的精确类似性百分比随在争论中的核酸和蛋白质变化而变化，但25、50、100、150或更多个核酸或氨基酸残基中少到25％的序列类似性常规用于确定同源性。高水平序列类似性，例如30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％、98％或99％也可用于确定同源性。
用于测定同源性或序列类似性百分比的方法(例如使用默认参数的BLASTP和BLASTN)描述于本文中且一般是可获得的。对于序列比较和同源性测定，典型地一个序列充当与测试序列进行比较的参考序列。本文所提供的表1提供了跨越四种不同类别的DNA聚合酶的同源氨基酸突变的示例性清单，即全长Bst DNA聚合酶(SEQ ID NO:16)、Bst DNA聚合酶的较大片段(SEQ ID NO:1)、Taq DNA聚合酶(SEQ ID NO:15)以及克列诺(Klenow)片段聚合酶(SEQ ID NO:18)。表1提供可在SEQ ID NO:1中突变的若干氨基酸位置的示例性清单且鉴别出其它存在的聚合酶(即，同源物)中的每一个的对应氨基酸位置。举例来说，发现SEQID NO:1中的氨基酸取代E220K与SEQ ID 16中的E515K、SEQ ID NO:18中的E245K以及SEQID NO:15中的E471K同源。熟练的技术人员将显而易见，可使用多种公众可获得的比对工具来鉴别跨越聚合酶氨基酸序列的同源氨基酸突变(如氨基酸取代)，例如NCBI比对和BLAST工具。一般来说，使用序列比较算法时，将测试及参考序列输入电脑，必要时指定子序列座标，且指定序列算法程式参数。随后，序列比较算法根据所指定的程式参数来计算测试序列相对于参考序列的序列一致性百分比。可例如通过Smith&Waterman,《应用数学进展(Adv.Appl.Math.)》2:482(1981)的局部同源算法，通过Needleman&Wunsch,分子生物学杂志《(J.Mol.Biol.)》48:443(1970)的同源性比对算法，通过Pearson&Lipman,《美国国家科学院学报(Proc.Nat'l.Acad.Sci.USA)》85:2444(1988)的类似性方法搜索，通过这些算法(威斯康星遗传学软件包(Wisconsin Genetics Software Package),遗传学计算机组(Genetics Computer Group),575科学博士(Science Dr.),威斯康星州麦迪逊(Madison,Wis.)中的GAP、BESTFIT、FASTA和TFASTA)的计算机化实施方案，或通过目视检验(一般参见《最新分子生物学实验方法汇编(Current Protocols in Molecular Biology)》,Ausubel等人编,实验室指南(Current Protocols),格林出版联合公司与约翰·威利父子公司之间的合资企业(Greene Publishing Associates,Inc.and John Wiley&Sons,Inc.),2004年增补)来进行序列的最佳比对以便比较。适用于测定序列一致性百分比和序列相似性的算法的一个实例是BLAST算法，其描述于Altschul等人,《分子生物学杂志》215:403-410(1990)中。用于进行BLAST分析的软件通过国家生物技术信息中心(National Center forBiotechnology Information)公开可用。此算法涉及通过识别查询序列中的长度W的短字来首先识别高评分序列对(HSP)，所述短字当与数据库序列中相同长度的字比对时匹配或满足某些正值阈值分数T。“T”称为邻域字分数阈值(Altschul等人，前述)。这些初始邻近字命中点充当开始检索以找到含有其的更长HSP的种子。随后，字命中点沿各序列在两个方向上延伸，只要累积比对分数可以增加即可。对于核苷酸序列来说，累积评分使用参数“M”(一对匹配残基的奖励分数；始终>0)及“N”(失配残基的罚分；始终<0)计算。对于氨基酸序列，使用计分矩阵计算累积分数。当累积比对分数从其达到的最大值降低量X；累积分数因一次或多次负分残基比对的累积而变成0或低于0；或到达任一序列的末端时，中断字命中点在各方向上的延伸。BLAST算法参数“W”、“T”和“X”确定比对的灵敏度和速度。BLASTN程序(对于核苷酸序列)使用字长(W)11、预期(E)10、截止值100、M＝5、N＝-4以及两条链的比较作为默认值。对于氨基酸序列来说，BLASTP程序使用字长(W)3、预期(E)10以及BLOSUM62计分矩阵(参见Henikoff&Henikoff(1989)《美国国家科学院学报》89:10915)作为默认值。
除计算序列一致性百分比以外，BLAST算法也进行两个序列之间的相似性统计分析(参见例如Karlin&Altschul,《美国国家科学院学报》90:5873-5787(1993))。由BLAST算法提供的一种类似性度量是最小和概率(P(N))，其提供对两个核苷酸或氨基酸序列之间将偶然发生匹配的概率的指示。举例来说，如果测试核酸与参考核酸比较的最小和概率小于约0.1、小于约0.01或小于约0.001，那么认为核酸与参考序列相似。
如本文所使用，当参考给定聚合酶使用术语“引物延伸活性”和其变异体时，其包含涉及催化核苷酸掺入到延伸核酸分子的末端3'OH端上的给定聚合酶的活体内或活体外酶活性特征。典型地但未必，此类核苷酸掺入以模板依赖性方式进行。在一些实施例中，给定聚合酶的引物延伸活性可定量为在一组具体反应条件下每单位时间(秒)通过单位量聚合酶(以摩尔计)掺入的核苷酸的总数目(如通过例如辐射测量或其它合适分析所测量)。
如本文所使用，当参考给定聚合酶使用术语“DNA结合活性”和其变化形式时，其包含涉及以基于识别的方式聚合酶与DNA序列相互作用的给定聚合酶的任何活体内或活体外酶活性特征。典型地但未必，此类相互作用包括聚合酶结合，且更尤其聚合酶的DNA结合域与识别的DNA序列的结合。在一些实施例中，识别包括聚合酶与序列特异性或非序列特异性DNA序列的结合。在一些实施例中，给定聚合酶的DNA结合活性可定量为聚合酶识别且结合到所识别的DNA序列的亲和性。举例来说，当在一组具体反应条件下形成蛋白质-DNA复合物时，可使用各向异性信号变化(或其它适合的分析)来监测且测定DNA结合活性。
如本文所使用，当参考给定生物分子使用术语“生物活性片段”和其变化形式时，其是指具有生物分子自身特有的活体内或活体外活性的生物分子的任何片段、衍生物、同系物或类似物。举例来说，聚合酶可以通过各种生物活性来表征，所述生物活性例如DNA结合活性、核苷酸聚合活性、引物延伸活性、链置换活性、逆转录酶活性、切口引发聚合酶活性、3'-5'核酸外切酶(校正)活性等。在一些实施例中，聚合酶的“生物活性片段”是可催化核苷酸(包括其同源物和类似物)聚合成核酸链的聚合酶的任何片段、衍生物、同系物或类似物。在一些实施例中，聚合酶的生物活性片段、衍生物、同系物或类似物在任何相关活体内或活体外分析中具有聚合酶的10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、85％或90％或更大的生物活性，所述分析如DNA结合分析、核苷酸聚合分析(其可以是模板依赖性或模板独立性的)、引物延伸分析、链置换分析、逆转录酶分析、校正分析等。在一些实施例中，可通过在限定的反应条件下测量片段的活体外引物延伸活性来分析聚合酶片段的生物活性。在一些实施例中，可以通过在限定的反应条件下测量片段的活体外聚合活性来分析聚合酶片段的生物活性。在一些实施例中，可以通过在限定的反应条件下测量片段的活体外DNA结合活性来分析聚合酶片段的生物活性。在一些实施例中，可以通过在限定的反应条件下测量片段的活体外链置换活性来分析聚合酶片段的生物活性。在一些实施例中，可以通过在限定的反应条件下测量片段的活体外逆转录酶活性来分析聚合酶片段的生物活性。在一些实施例中，可以通过在限定的反应条件下测量片段的活体外切口引发聚合酶活性来分析聚合酶片段的生物活性。在一些实施例中，可以通过在限定的反应条件下测量片段的活体外校正活性来分析聚合酶片段的生物活性。在一些实施例中，聚合酶的生物活性片段可包括测量本文中所概述的聚合酶生物活性中的任何一种或多种的生物活性。
生物活性片段可以任选地在体内存在，如由转录后加工产生或由选择性剪接的RNA的转译产生或替代地可以经由工程化、总合成或其它适合的操作产生的片段。生物活性片段包括在天然或内源细胞中表达的片段以及在表达系统中如在细菌、酵母、昆虫或哺乳动物细胞中制得的那些片段。
在一些实施例中，本文不仅提供本文所公开的特定聚合酶，还提供涵盖在本公开的范围内的此类聚合酶的任何生物活性片段。在一些实施例中，本公开的任何聚合酶的生物活性片段包括展现活体外引物延伸活性和DNA结合活性的任何片段。在一些实施例中，本公开的任何聚合酶的生物活性片段包括保留活体外聚合酶活性的任何片段。可以通过领域中已知的任何方法测定聚合酶活性。举例来说，聚合酶活性的测定可基于在模板上延伸引物的活性。
在一些实施例中，本公开大体上涉及相对于缺乏一种或多种氨基酸突变的参考聚合酶具有一种或多种氨基酸突变(如缺失、取代或添加)的经修饰的聚合酶，且其中经修饰的聚合酶保留活体外聚合酶活性，展现活体外DNA结合活性或展现活体外引物延伸活性。在一些实施例中，经修饰的聚合酶包括保留活体外聚合酶活性，展现活体外DNA结合活性或展现活体外引物延伸活性的此类聚合酶的任何生物活性片段。
在一些实施例中，本公开大体上涉及相对于缺乏一个或多个氨基酸突变的参考聚合酶具有一个或多个氨基酸突变(如缺失、取代或添加)的经修饰的聚合酶，且其中经修饰的聚合酶保留活体外校正活性。在一些实施例中，本公开大体上涉及相对于缺乏一个或多个氨基酸突变的参考聚合酶具有一个或多个氨基酸突变(如缺失、取代或添加)的经修饰的聚合酶，且其中经修饰的聚合酶保留活体外校正活性，展现活体外切口引发聚合酶活性或活体外逆转录酶活性。在一些实施例中，经修饰的聚合酶包括保留活体外校正活性、展现活体外切口引发聚合酶活性或展现活体外逆转录酶活性的此类聚合酶的任何生物活性片段。判定聚合酶是否展现活性核酸外切酶或展现降低的核酸外切酶活性可通过标准方法容易地测定。举例来说，可合成聚核苷酸以使得放射性标记可检测比例的核苷酸。这些聚核苷酸可在适当的缓冲液中在待测试多肽存在下培育。培育后，聚核苷酸沉淀且由于上清液中的游离核苷酸，核酸外切酶活性可检测为放射性计数。如所属领域的技术人员将了解，基于上述生物活性或其组合中的任一者，取决于应用相关，适当的聚合酶或生物活性片段可选自本文所描述的那些。
如本文所使用，术语“核苷酸”和其变化形式包含可与聚合酶选择性结合或可通过聚合酶聚合的任何化合物。典型地但未必，核苷酸与聚合酶的选择性结合后面是核苷酸通过聚合酶聚合成核酸链；然而偶尔，核苷酸可从聚合酶解离而不变得掺入到核酸链中，这是在本文中被称为“非生产性”事件的事件。此类核苷酸不仅包括天然存在的核苷酸，而且包括可与聚合酶选择性结合或可通过聚合酶聚合的任何类似物(无关于其结构)。虽然天然存在的核苷酸典型地包含碱基、糖和磷酸酯部分，但本公开的核苷酸可包括不具有此类部分中的任一个、一些或全部的化合物。在一些实施例中，核苷酸可任选地包括包含三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个或更多个磷原子的磷原子链。在一些实施例中，磷链可连接到糖环的任何碳，如5'碳。磷链可用介入O或S连接到糖。在一个实施例中，链中的一个或多个磷原子可为具有P和O的磷酸酯基的一部分。在另一实施例中，链中的磷原子可与介入O、NH、S、亚甲基、经取代的亚甲基、亚乙基、经取代的亚乙基、CNH2、C(O)、C(CH2)、CH2CH2或C(OH)CH2R(其中R可为4-吡啶或1-咪唑)连接在一起。在一个实施例中，链中的磷原子可具有含O、BH3或S的侧基。在磷链中，磷原子与除O外的侧基一起可为经取代的磷酸酯基。核苷酸类似物的一些实例描述于Xu的美国专利第7,405,281号中。在一些实施例中，核苷酸包含标记(例如报告子部分)且在本文中被称为“经标记的核苷酸”；经标记的核苷酸的标记在本文中被称为“核苷酸标记”。在一些实施例中，标记可呈连接到末端磷酸酯基(即，距糖最远端的磷酸酯基或替代磷酸酯基)的荧光染料形式。可用于所公开的方法和组合物中的核苷酸的一些实例包括(但不限于)核糖核苷酸、脱氧核糖核苷酸、经修饰的核糖核苷酸、经修饰的脱氧核糖核苷酸、核糖核苷酸聚磷酸酯、脱氧核糖核苷酸聚磷酸酯、经修饰的核糖核苷酸聚磷酸酯、经修饰的脱氧核糖核苷酸聚磷酸酯、肽核苷酸、金属核苷酸、膦酸酯核苷和经修饰的磷酸酯-糖主链核苷酸，前述化合物的类似物、衍生物或变化形式等。在一些实施例中，核苷酸可包含非氧部分(如硫基或硼烷部分)代替氧部分，所述氧部分桥连核苷酸的α磷酸酯与糖、或核苷酸的α与β磷酸酯、或核苷酸的β与γ磷酸酯、或核苷酸的任何其它两种磷酸酯之间、或其任何组合。
如本文所使用，术语“核苷酸掺入”和其变化形式包含使一个或多个核苷酸聚合以形成核酸链，所述核酸链包括至少两个典型地但未必经由磷酸二酯键彼此连接的核苷酸，但在特定核苷酸类似物的情况下替代性键可以是可能的。
如本文所使用，术语“持续合成能力”和其变化形式包含聚合酶保留结合到单一引物/模板杂交体的能力。在一些实施例中，可通过在聚合酶从引物/模板杂交体解离之前聚合酶掺入核酸(如测序引物)中的核苷酸数目来测量持续合成能力。在一些实施例中，聚合酶具有至少100个核苷酸的持续合成能力，但在其它实施例中，其可包括至少200个核苷酸、至少300个核苷酸、至少400个核苷酸、至少500个核苷酸或更多个的持续合成能力。所属领域的技术人员应理解，聚合酶的持续合成能力越高，在解离之前可掺入的核苷酸越多，且因此可获得的序列(阅读长度)越长。换句话说，具有较低持续合成能力的聚合酶将典型地提供与具有更高持续合成能力的聚合酶相比更短的平均阅读长度。在一个实施例中，含有一个或多个氨基酸突变的本发明的聚合酶可与缺乏一个或多个氨基酸突变的对照聚合酶相比具有增强的持续合成能力。
在一个示例性分析中，给定聚合酶的持续合成能力可通过在核苷酸掺入条件下用引物:模板双螺旋体培育聚合酶且使用任何适合的方法，例如经由凝胶电泳分解所得引物延伸产物来测量。引物可任选地包括标记以增强引物延伸产物的检测能力。核苷酸掺入反应混合物典型地包括大量过量的未标记的竞争模板，从而确保几乎所有延伸产物经由单一模板结合作用产生。在此类分解之后，平均量的全长延伸产物可使用任何适合的手段，包括全长延伸产物的荧光或辐射测量的检测来进行定量。为了比较两种或更多种不同酶(例如参考和经修饰的聚合酶)的持续合成能力，各酶可用于平行和单独的反应中，其后可分解且测量所得全长引物延伸产物和此类比较测量值。
在其它示例性实施例中，给定聚合酶的持续合成能力可使用所属领域中已知的任何适合的分析测量，所述分析包括(但不限于)Von Hippel,P.H.,Faireld,F.R.和Dolejsi,M.K.,关于聚合酶的持续合成能力(On the processivity of polymerases),《纽约科学院年报(Ann.NY Acad.Sci.)》,726:118-131(1994)；Bambara,R.A.,Uyemura,D.和Choi,T.,关于大肠杆菌DNA聚合酶I的进行机制.持续合成能力的定量评定(On the processivemechanism of Escherichia coli DNA polymerase I.Quantitative assessment ofprocessivity),《生物化学杂志(J.Biol.Chem.)》,253:413-423(1978)；Das,S.K.和Fujimura,R.K.,DNA聚合酶的进行性.使用简单程序的比较性研究(Processiveness ofDNA polymerases.A comparative study using a simple procedure),《生物化学杂志》,254:1227-1232(1979)；Nasir,M.S.和Jolley,M.E.,荧光偏振：用于免疫分析和药物发现、组合化学过程和高产量筛选的分析型工具(Fluorescence polarization:An AnalyticalTool for Immunoassay and Drug Discovery,Combinational Chemistry and HighThroughput Screening),2:177-190(1999)；Mestas,S.P.,Sholders,A.J.,和Peersen,O.B.,用于核酸聚合酶延长活性的基于荧光偏振的筛选分析(A FluorescencePolarization Based Screening Assay for Nucleic Acid Polymerase ElongationActivity),《分析生物化学》,365:194-200(2007)；Nikiforov,T.T.,基于用单一荧光团标记的DNA底物的荧光聚合酶、核酸内切酶和连接酶分析(Fluorogenic polymerase,endonuclease,and ligase assays based on DNA substrates labled with a singlefluorophore),《分析生物化学(Analytical Biochemistry)》412:229-236；以及Yan Wang,Dennis E.Prosen,Li Mei,John C.Sullivan,Michael Finney和Peter B.Vander Horn,《核酸研究(Nucleic Acids Research)》,32(3):1197-1207(2004)中所描述的分析。
如本文所使用，术语“阅读长度”或“阅读-长度”和其变化形式是指以模板依赖性方式在从模板核酸链解离之前通过聚合酶聚合(或掺入到现有核酸链中)的核苷酸数目。在一些实施例中，五次掺入之后从模板核酸链解离的聚合酶将典型地提供具有5个核苷酸的阅读长度的序列，而500个核苷酸掺入之后从模板核酸链解离的聚合酶将典型地提供具有约500个核苷酸的阅读长度的序列。虽然给定聚合酶的实际或绝对持续合成能力(或聚合酶所产生的聚合产物的实际阅读长度)可以因反应而不同(或甚至在单一反应混合物内，其中聚合酶产生具有不同阅读长度的不同产物)，但聚合酶可以通过在一组限定的反应条件下观测到的平均持续合成能力(或聚合产物的平均阅读长度)来表征。“无误差阅读长度”包含在无误差(即，无失配和/或与确定和可预测组的碱基配对规则有偏差)的情况下相继且连续地掺入到新合成的核酸链中的核苷酸的数目。
如本文所使用，术语“系统误差”或“SE”或“SSE”和其变化形式是指含有限定长度的均聚物(HP)的序列基元中误差的百分比，其中系统缺失以指定最小频率在链上出现且具有指定最小频率的测序覆盖度。举例来说，在一些实施例中，系统误差可以测量为含有长度1-6的均聚物的序列基元中的误差的百分比，其中当覆盖度(测序操作的覆盖度)等于或大于20×时系统缺失以大于15％的频率出现在链上。在一些实施例中，系统误差估算为含有长度为1-6的均聚物的序列基元中的随机误差的百分比，其中当覆盖度(测序操作的覆盖度)等于或大于20×时，系统缺失以大于15％的频率出现在链上；此类实施例是本文所公开的若干工作实例的焦点。因此，0.3435％的SSE是指全部位置的0.3435％具有系统链误差。在一些实施例中，相比于不含有一个或多个氨基酸突变或含有一些但非全部氨基酸突变的参考聚合酶(例如野生型聚合酶、SEQ ID NO:2的聚合酶或SEQ ID NO:35的聚合酶(PSP4))，当使用如本文所公开的突变(例如重组)聚合酶时，系统误差百分比降低。举例来说，虽然给定聚合酶的实际系统误差可以因反应而不同(或甚至在单一反应混合物内)，但聚合酶可以通过在一组限定的反应条件下观测到的系统误差百分比来表征。在一些实施例中，相比于不具有氨基酸修饰中的一种或多种的对应参考聚合酶，例如相比于SEQ ID NO:16、SEQ IDNO:2或SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:120或SEQ ID NO:122，本申请的突变聚合酶具有降低的系统误差百分比。在说明性实例中，与SEQ ID NO:35进行比较。在一些实施例中，当在合成测序反应(其中产生且检测氢离子)，如离子激流系统中使用时，本发明的突变(例如重组)聚合酶产生小于1％、0.9％、0.8％、0.75％、0.7％、0.6％、0.5％、0.4％或0.3％的如本文实例中所提供的平均系统误差(平均SSE)的系统误差百分比。本文所提供的突变(例如重组)聚合酶可具有范围低端5、10、15、20、25、30、35、40、45或50％与范围高端10、15、20、25、30、35、40、45、50、60、70、75、80、85或90％之间的系统误差和/或系统误差率的统计显著降低，低于使用如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:16、SEQ IDNO:120或SEQ ID NO:122的参考多肽所获得的平均SSE。在说明性实施例中，本文所提供的分离的突变(例如重组)聚合酶可具有范围低端5、10、15、20和25％与范围高端10、15、20、25、30、35、40、45和50％之间的系统误差和/或系统误差率的统计显著降低，低于使用SEQID NO:35作为参考聚合酶所获得的平均SSE。举例来说，在一些实施例中，系统误差可测量为含有长度为1-6的均聚物的序列基元中的误差的百分比，其中当覆盖度(测序操作的覆盖度)等于或大于20×时，系统缺失以大于15％的频率出现在链上。
如本文所使用，术语“链偏差”是指测序操作中的目标碱基百分比，其中来自一条链(例如正链)的阅读(基因分型)与从另一条(例如负)链推断的阅读(基因分型)不同。通过计数在比对中映射到其的阅读碱基的数目来计算给定目标碱基的覆盖度。平均覆盖度通过跨越目标中的每个碱基取此值的平均值来计算。随后特定碱基的相对覆盖度计算为这些值的比率。1的相对覆盖度指示特定碱基以预期平均比率覆盖。大于1的相对覆盖度指示高于预期覆盖度且小于1指示低于预期覆盖度。一般来说，不明确的映射的机率随着读数变得更小或更不精确而提高。对于从重复或低复杂性区域的基因组(包括具有极端GC含量的一些区域)导出的读数，不明确的映射也更可能。在一些实施例中，相比于不含有相应的一个或多个氨基酸修饰的参考聚合酶(例如野生型聚合酶)，当使用如本文所公开的经修饰的聚合酶时，链偏差百分比降低。在一些实施例中，本申请的经修饰的聚合酶具有与相应的未经修饰的聚合酶相比减少的链偏差。虽然给定聚合酶的实际链偏差可因反应不同而不同(或甚至在单一反应混合物内)，但聚合酶可通过在一组限定的反应条件下观测到的不具有链偏差的目标碱基百分比来表征。在一些实施例中，如本文所公开的经修饰的聚合酶包含高于25％的无链偏差的目标碱基百分比。在一些实施例中，如本文所公开的经修饰的聚合酶包含约30％的无链偏差的目标碱基百分比。在一些实施例中，如本文所公开的经修饰的聚合酶包含约40％的无链偏差的目标碱基百分比。在一些实施例中，如本文所公开的经修饰的聚合酶包含约45％的无链偏差的目标碱基百分比。在一些实施例中，如本文所公开的经修饰的聚合酶包含约50％的无链偏差的目标碱基百分比。在一些实施例中，如本文所公开的经修饰的聚合酶包含约60％的无链偏差的目标碱基百分比。在一些实施例中，如本文所公开的经修饰的聚合酶包含约70％的无链偏差的目标碱基百分比。在一些实施例中，如本文所公开的经修饰的聚合酶包含约75％的无链偏差的目标碱基百分比。在一些实施例中，如本文所公开的经修饰的聚合酶包含约80％的无链偏差的目标碱基百分比。在一些实施例中，如本文所公开的经修饰的聚合酶包含约85％的无链偏差的目标碱基百分比。相反地，在一些实施例中，如本文所公开的经修饰的聚合酶可包括约15％的具有链偏差的目标碱基百分比。在另一个实施例中，如本文所公开的经修饰的聚合酶可包括约20％、25％、30％、35％、40％、45％或50％的具有链偏差的目标碱基百分比。
术语“信噪比”或“SNR”是指信号功率与噪声功率的比率。一般来说，SNR是一种测量与背景噪声水平相比的所需信号的方法。在一些实施例中，“信噪比”可指在测序操作期间获得的信号功率与相同测序操作的背景噪声相比的比率。在一些实施例中，本申请公开提供提高信噪比的手段的方法、套组、设备以及组合物。在一些实施例中，本文提供一种用于进行核酸测序的方法，其包含在一种或多种核苷酸存在下使经修饰的聚合酶与核酸模板接触，其中经修饰的聚合酶包括一个或多个相对于参考聚合酶的氨基酸修饰且具有相对于不具有一个或多个氨基酸突变的参考聚合酶提高的信噪比；以及使用经修饰的聚合酶使一种或多种核苷酸中的至少一种聚合。
关键信号为在测序反应的样品制备期间当对添加到相关序列的5'端中的已知对照序列进行测序时通过测序系统产生的信号量。关键信号取决于质子产生速率(其与核苷酸掺入速率直接相关)和系统中的缓冲量。提高的掺入速率应提高关键信号，而提高的缓冲应减少信号。我们假设因为组氨酸具有6.5的pKa，其可能为存在于测序反应中使用的酶上时缓冲的显著来源。因此，我们假设去除组氨酸可能在如离子激流系统的离子检测测序系统中提供提高的信号。如本文实例中所展现，本发明的突变聚合酶中的一些提供提高的信号，如H473G和H528T取代，参照SEQ ID NO:1编号。
在一些实施例中，本文提供包含通过与其未经修饰的对应物(例如参考聚合酶)相比提高的持续合成能力、阅读长度(包括无误差阅读长度)、总测序通量和/或准确度表征的经修饰的聚合酶的组合物、方法、系统、设备以及套组；以及用于在广泛范围的生物和化学反应(如核苷酸聚合、引物延伸、核酸库产生和核酸测序反应)中制得和使用此类经修饰的聚合酶的方法。在一些实施例中，本文提供包含通过与其未经修饰的对应物(例如参考聚合酶)相比减少的链偏差和/或系统误差表征的经修饰的聚合酶的组合物、方法、系统、设备以及套组；以及用于在广泛范围的生物和化学反应(如核苷酸聚合、引物延伸、核酸库产生和核酸测序反应)中制得和使用此类经修饰的聚合酶的方法。在一些实施例中，经修饰的聚合酶包括相对于其相应未经修饰的对应物的一个或多个氨基酸突变(例如氨基酸取代、添加或缺失)。在一些实施例中，如本文所使用的术语准确度可通过测定与在聚合期间不正确核苷酸的掺入速率相比在聚合期间正确核苷酸的掺入速率来测量。在一些实施例中，在与标准(较低)盐条件相比升高的盐条件(较高离子强度溶液)下，不正确核苷酸的掺入速率可以大于0.3、0.4、0.5、0.6、0.7秒或更久。虽然不希望受任何特定理论束缚，但申请人已发现，在聚合期间提高的盐的存在使不正确核苷酸掺入速率减慢，从而产生不正确核苷酸的较慢掺入常数。在一些实施例中，本公开的经修饰的聚合酶具有与相对聚合酶相比增强的准确度，任选地经修饰的聚合酶或其生物片段在较高离子强度溶液存在下具有增强的准确度(与相对聚合酶相比)。
在一些实施例中，本文提供在较高离子强度溶液存在下保留聚合酶活性的经修饰的聚合酶。在一些实施例中，较高离子强度溶液可为120mM到300mM盐。在一些实施例中，较高离子强度溶液可为130mM盐。在一些实施例中，较高离子强度溶液可为至少125mM盐，如KCl和/或NaCl。在一些实施例中，较高离子强度溶液可为约225mM到约250mM盐。在一些实施例中，盐可包括钾盐和/或钠盐，如KCl和/或NaCl。所属领域的技术人员将显而易见，可替代使用各种其它适合的盐或与KCl和/或NaCl组合使用。在一些实施例中，离子强度溶液可进一步包括硫酸盐。
在一些实施例中，经修饰的聚合酶可在较高离子强度溶液存在下扩增和/或测序核酸分子。在一些实施例中，在相同条件下，与缺乏相同突变(或同源突变)中的一个或多个的参考聚合酶相比，经修饰的聚合酶能够在更大程度上(例如，如通过准确度所测量)在较高离子强度溶液存在下扩增(和/或测序)核酸分子。在一些实施例中，在标准离子强度条件(即，与较高离子强度溶液相比降低的离子强度)下，与不具有突变(或同源突变)中的一个或多个的参考聚合酶相比，经修饰的聚合酶能够以更大能力(例如，如通过准确度所测量)在较高离子强度溶液存在下扩增(和/或测序)核酸分子。
在一些实施例中，本公开大体上涉及可在与参考聚合酶相比提高的盐条件(超过120mM盐)存在下进行核苷酸聚合或核苷酸掺入的经修饰的聚合酶或其生物活性片段。
在一些实施例中，本公开大体上涉及在与参考聚合酶相比提高的盐条件(超过120mM盐)存在下具有提高的准确度或提高的解离时间常数的经修饰的聚合酶或其生物活性片段。
在一些实施例中，本公开大体上涉及可在核苷酸聚合期间在与参考聚合酶相比提高的盐条件(超过120mM盐)存在下检测到离子浓度变化的经修饰的聚合酶或其生物片段。
在一些实施例中，本公开大体上涉及可在提高的盐条件(超过120mM盐)存在下可扩增或可用于核酸测序反应中的经修饰的聚合酶或其生物活性片段。
在一些实施例中，本公开大体上涉及与参考聚合酶相比在核酸测序反应中产生提高的准确度的经修饰的聚合酶或其生物活性片段。
在一些实施例中，本公开大体上涉及在相同条件下与对照聚合酶相比产生改进的准确度和/或提高的解离时间常数和/或降低的系统误差速率的突变(典型地重组)DNA聚合酶或其生物活性片段。那些条件可包括120mM盐，或甚至超过120mM盐，如120mM到200mM盐，如NaCl和/或KCl。
在整个说明书中论述且实例部分中说明的对照或参考聚合酶可具有突变中的一种或多种，但不具有本发明的聚合酶的所有突变。举例来说，在某些说明性实施例中，对照聚合酶为具有野生型Bst聚合酶的序列以及突变H46R、E446Q和H572R(相对于SEQ ID NO:1的Bst DNA聚合酶片段的位置编号)的重组Bst DNA聚合酶片段。这些突变在本文中有时被称作核心缓冲突变。举例来说，SEQ ID NO:2为可用作参考聚合酶且包括这些突变的581氨基酸Bst聚合酶片段。具有这些相同3个核心缓冲突变、可用作参考聚合酶的Bst聚合酶的全长版本(876个氨基酸)为SEQ ID NO:122。在其它实施例中，参考聚合酶可为除了3个核心缓冲突变加额外3个突变：H281M、D423K和N487R(相对于SEQ ID NO:1的位置编号)以外具有野生型Bst聚合酶序列的Bst聚合酶。具有野生型背景序列中的这些6个突变的581个氨基酸的Bst聚合酶片段为SEQ ID NO:35。具有这些6个突变的此对照Bst多肽的全长版本(876个氨基酸)为SEQ ID NO:120。
在一些实施例中，本公开大体上涉及可在核苷酸聚合期间在至少120mM盐存在下检测离子浓度改变的重组DNA聚合酶或其生物片段。
在一些实施例中，本公开大体上涉及可扩增聚核苷酸或可用于在至少或超过120mM盐存在下获得核酸序列信息的方法中的重组DNA聚合酶或其生物活性片段。举例来说，本发明的经修饰的突变和/或重组聚合酶可用于高通量测序反应，尤其涉及氢离子的产生和释放和那些离子的检测的测序反应中。
表2列出本说明书中提及的某些581个氨基酸片段和全长Bst聚合酶。
表2
Figure BDA0001649640760000211
Figure BDA0001649640760000221
本文所提供的所有581个氨基酸Bst DNA聚合酶片段突变异体具有SEQ ID NO:1的相同碱基C端581个氨基酸，如本说明书(例如表2中)和与此一起申请的序列表中所指明的突变除外。
SEQ ID NO:35包括六个相对于SEQ ID NO:1的氨基酸取代，即H46R、E446Q、H572R、H281M、D423K和N487R，其中编号相对于SEQ ID NO:1的氨基酸序列。
SEQ ID NO:119包括九个相对于SEQ ID NO:1的氨基酸取代，即H46R、E446Q、H572R、H281M、D423K、N487R、L252R、H528T和H473G，其中编号相对于SEQ ID NO:1的氨基酸序列。
SEQ ID NO:79-118各自包括突变H46R、E446Q、H572R、H281M、D423K N487R和一个额外突变，如表2中所指明。
SEQ ID NO:38-77各自包括突变H576M、D718K和N782R和一个额外突变，如表2中所指明。
SEQ ID NO:31包括三个相对于SEQ ID NO:16的氨基酸取代，即H576M、D718K和N782R，其中编号相对于SEQ ID NO:16的氨基酸序列。
SEQ ID NO:120包括六个相对于SEQ ID NO:16的氨基酸取代，即H341R、E741Q、H867R、H576M、D718K和N782R，其中编号相对于SEQ ID NO:16的氨基酸序列。
SEQ ID NO:121包括九个相对于SEQ ID NO:16的氨基酸取代，即H341R、E741Q、H867R、H576M、D718K、N782R、L547R、H768G和H823T，其中编号相对于SEQ ID NO:16的氨基酸序列。
SEQ ID NO:122包括三个相对于SEQ ID NO:16的氨基酸取代，即H341R、E741Q和H867R，其中编号相对于SEQ ID NO:16的氨基酸序列。
Bst DNA聚合酶的较大片段长度为581个氨基酸残基且为全长Bst DNA聚合酶的C端581个氨基酸残基。全长Bst DNA聚合酶为876个氨基酸酶。因此，为了鉴别全长Bst DNA聚合酶序列中的较大片段中的氨基酸取代的相应残基数，295应加上残基数。
在说明性实施例中，本发明提供非天然存在的分离的突变DNA聚合酶(其典型地为重组DNA聚合酶或其生物活性片段)以及包括突变(例如重组)DNA聚合酶或其生物活性片段的组合物、套组和方法，其中突变聚合酶具有与SEQ ID NO:1或其片段具有至少75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％序列一致性的多肽链段，展现聚合酶活性，且包括(a)一个或多个选自由以下组成的群组的氨基酸取代：E30K、G209Q、E220H或E220T、N234K、P236I或P236R、E245R、L252R、S260K、D264K或D264M、E267M或E267K或E267R、E277T、T324R、E325R、A344Y、E442R或E442Y、E456R、H473G、D480L、N485R、A492K、E493G或E493R、M495C、N517C或N517K、E522C和H528T；或(b)两个或更多个选自以下的氨基酸取代：E30K、G209Q、E220H、E220K或E220T、N234K或N234R、P236I或P236R、V241K、E245R、V251R、L252R、S260K、D264K或D264M、E267M或E267K或E267R、E277T、E294K、T324R、E325R、A344Y、E442R或E442Y、E456R、H473G、D480L或D480R、N485R、A492K、E493G或E493R、M495C、N517C或N517K、E522C和H528T。相比于使用参考Bst聚合酶，如SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:16的野生型Bst聚合酶、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:122的突变Bst聚合酶、SEQ ID NO:35或SEQ ID NO:120的突变Bst聚合酶获得的平均系统误差率或本文实例中提供的这些聚合酶的改进特性中的任一种，当在合成测序反应中使用时，突变(例如重组)DNA聚合酶可产生较低误差率(例如平均系统误差率)、改进的准确度、提高的信噪比和/或本文所提供的实例中证明的特定特性中的任一种。聚合酶在说明性实例中具有改进的特性的合成测序反应为释放和检测氢离子的测序反应。在说明性实施例中，突变(例如重组)聚合酶包括氨基酸取代H46R、E446Q和H572R，和/或可包括突变H281M、D423K和N487R，其中编号相对于SEQ ID NO:1。在说明性实施例中，突变(例如重组)DNA聚合酶不具有5'到3'核酸外切酶活性和/或3'到5'核酸外切酶活性。在说明性实施例中，突变(例如重组)聚合酶不包含具有3'到5'核酸外切酶活性和/或5'到3'核酸外切酶活性的野生型Bst DNA聚合酶的链段。当在基于离子的测序反应中使用时，本发明的聚合酶产生的改进对特性可为测量到和/或统计显著的平均系统误差(平均SSE)或平均AQ20平均阅读长度(MRL)、关键信号(作为信号强度的度量)、完美的阅读长度、平均原始阅读准确度和6bp或7bp的均聚物ACGT的真实准确度中的一个或多个得到改良作为非限制性实例。
说明性实例中的突变(例如重组)DNA聚合酶包括L252R、H473G和H528T中的一种或多种，其中编号相对于SEQ ID NO:1。因此，在本文所提供的某些实例中，分离的突变(例如重组)DNA聚合酶与SEQ ID NO:1或其片段具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％一致性，展现聚合酶活性，包括氨基酸取代H46R、E446Q、H572R、H281M、D423K和N487R，且进一步包括L252R、H473G和H528T，其中编号相对于SEQ ID NO:1。在具有此类突变的示例性实施例中，非天然存在的突变异体具有SEQ ID NO:119序列。
在其它子实施例中，上文提供的实施例中的分离的突变(例如重组)DNA聚合酶的多肽链段可为突变(例如重组)DNA聚合酶的至少50％、60％、70％、75％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％，且可与SEQ ID NO:1具有至少75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％一致性，或可与SEQ ID NO:16具有至少75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％一致性。在说明性子实施例中，此类子实施例中的突变(例如重组)DNA聚合酶展现聚合酶活性，包括氨基酸取代H341R、E741Q和H867R和/或突变H576M、D718K和N782R，且包括L547R、H768G和H823T中的一种或多种，其中编号相对于SEQ ID NO:16。突变聚合酶可具有本文实例中所提供的改进的特性中的任一种。举例来说，本文所提供的分离的突变(例如重组)聚合酶可具有范围低端5、10、15、20、25、30、35、40、45或50％与范围高端10、15、20、25、30、35、40、45、50、60、70、75、80、85或90％之间的系统误差和/或系统误差率的统计显著降低，低于使用如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:35、SEQ IDNO:16、SEQ ID NO:120或SEQ ID NO:122的参考多肽获得的平均SSE。在说明性实施例中，本文所提供的分离的突变(例如重组)聚合酶可具有范围低端5、10、15、20和25％与范围高端10、15、20、25、30、35、40、45和50％之间的系统误差和/或系统误差率的统计显著降低，低于使用SEQ ID NO:35作为参考聚合酶所获得的平均SSE。在上述范围的说明性实例中，当覆盖度(测序操作)等于或大于20×时，SSE测量为含有长度1-6的均聚物、在链上以大于15％的频率发生系统缺失的序列基元中的随机误差百分比。在一些实施例中，本发明的分离的突变聚合酶具有在平均aq20下比SEQ ID NO:35或SEQ ID NO:120(尤其对于全长突变异体)长范围短端至少5、10或15个核苷酸或5、10、15或25个之间的核苷酸和范围高端20、25、30、40、50、60、75或100个核苷酸；或比SEQ ID NO:35或SEQ ID NO:120(尤其对于全长突变异体)长5、10、15、20、25、30、35、40、45或50％或在范围的低端比SEQ ID NO:35或SEQ ID NO:120长5、10、15、20、25、30、35和40％之间且在范围高端上比SEQ ID NO:35或SEQ ID NO:120(对于全长突变异体)长10、15、20、25、30、35和40、45或50％的平均阅读长度(MRL)。在一些实施例中，本发明的分离的突变聚合酶具有由如SEQ ID NO:35的对照多肽产生的峰值信号的统计显著提高，或相比于SEQ ID NO:35或SEQ ID NO:120(对于全长突变异体)具有范围低端至少5、10、15或20％或5到10和范围高端10、20、25、30、40或50％的提高的峰值信号。在某些说明性实施例中，突变(例如重组)DNA聚合酶包括L547R、H768G和H823T(根据SEQ ID NO:16编号，但聚合酶可为突变581Bst聚合酶片段且更长，高达突变全长Bst聚合酶)，且85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％可与SEQ ID NO:119或SEQ ID NO:121一致。在此等实施例中的一些中，分离的突变聚合酶具有至少80或85％的均聚物ACGT 6bp或在统计学上明显比使用具有L252R的SEQ ID NO:35或SEQ ID NO:35作为参考聚合酶(或具有L547R的全长SEQ IDNO:120或SEQ ID NO:120作为参考)获得的准确度大或大至少5％、10％、15％、20％或25％的ACGT 6bp或7bp的均聚物的准确度。在具有此类突变和特性的示例性实施例中，突变DNA聚合酶具有SEQ ID NO:121的氨基酸序列。
如本文中所指明，突变(例如重组)Bst DNA聚合酶的多肽链段可为突变(例如重组)DNA聚合酶的至少50％、60％、70％、75％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％。因此，突变(例如重组)DNA聚合酶可包括本文所提供的581个氨基酸片段作为整个突变(例如重组)DNA聚合酶或作为突变聚合酶的一部分。举例来说，突变聚合酶可为包括本文所提供的突变581个氨基酸Bst DNA聚合酶片段中的任一种的全长Bst DNA聚合酶或包括来自添加到突变Bst DNA聚合酶581个氨基酸片段上的876个氨基酸全长DNA聚合酶的野生型Bst聚合酶的任何数目的连续氨基酸的突变Bst DNA聚合酶。为了计算为多肽链段的重组多肽的百分比，典型地将链段中的氨基酸残基数目除以整个突变DNA聚合酶中的氨基酸残基数目。如本文中进一步详细解释，据相信，包括本文所提供的突变581个氨基酸Bst DNA聚合酶片段和来自全长野生型Bst DNA聚合酶的额外氨基酸的此类突变Bst DNA聚合酶将保留那些突变581个氨基酸Bst DNA聚合酶片段的本文实例中证明的改进特性。此外，此类突变Bst DNA聚合酶可包括额外序列，如6×组氨酸序列或其它纯化标签。因而，本文所提供的突变Bst DNA聚合酶可为融合蛋白。
在说明性实施例中，突变(例如重组)聚合酶包括来自全长Bst DNA聚合酶的额外氨基酸，但不包括具有5'到3'核酸外切酶活性和/或3'到5'核酸外切酶活性的野生型Bst聚合酶的功能链段。因此，在本文的说明性实施例中，突变Bst DNA聚合酶并不具有5'到3'核酸外切酶活性和/或3'到5'核酸外切酶活性。在说明性实施例中，突变(例如重组)聚合酶不包含具有3'到5'核酸外切酶活性和/或5'到3'核酸外切酶活性的野生型Bst DNA聚合酶的链段。
在一些实施例中，本文所提供的突变(例如重组)Bst DNA聚合酶包括本文中指明的突变，但不包括Bst DNA聚合酶的整个581个氨基酸片段。举例来说，此类突变Bst DNA聚合酶可包括本文所提供的突变581个氨基酸Bst DNA聚合酶片段的250、300、400、500、550、560、570、575、576、577、578、579或580个连续氨基酸。在一些实施例中，经修饰的聚合酶的生物活性片段可包括Bst DNA聚合酶的催化域或DNA结合域的至少25个连续氨基酸残基。
在一些实施例中，本公开大体上涉及一种与SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:31、SEQ IDNO:35、SEQ ID NO:78、SEQ ID NO:120或SEQ ID NO:122或其片段具有至少75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％一致性的任选地经修饰且典型地重组突变DNA聚合酶，且包括一个或多个选自由以下组成的群组的氨基酸取代：(a)E325K、G504Q、P531I或P531R、V546R、L547R、E515H或E515K或E515T、E540R、S555K、D559M、E562M或E562K或E562R、E572T、T619R、E620R、A639Y、E751R、E737R、E737Y、H768G、M790C、A787K、D775L、N780R、E788G、N812C或N812K、E817C和H823T；或(b)E325K、G504Q、N529K或N529R、P531I或P531R、V536K、V546R、L547R、E515H或E515K或E515T、E540R、S555K、D559K或D559M、E562M或E562K或E562R、E572T、E589K、T619R、E620R、A639Y、E751R、E737R、E737Y、H768G、M790C、A787K、D775L、D775R、N780R、E788G或E788R、N812C或N812K、E817C和H823T，其中编号相对于SEQ IDNO:31，且其中重组DNA聚合酶或其片段产生分别相比于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:31、SEQID NO:35、SEQ ID NO:78、SEQ ID NO:120或SEQ ID NO:122改进的准确度和/或降低的系统误差率。在某些示例中，本发明的任选地经修饰且典型地重组突变聚合酶为突变Bst DNA聚合酶，其包括3个核心缓冲突变H341R、E741Q和H867R(相对于SEQ ID NO:16的位置编号)。在其它说明性实施例中，本发明的任选地经修饰且典型地重组突变聚合酶包括3个核心缓冲突变H341R、E741Q和H867R(相对于SEQ ID NO:16的位置编号)以及突变：H576M、D718K、N782R(相对于SEQ ID NO:16的位置编号)。
在一些实施例中，本公开大体上涉及一种与SEQ ID NO:35或其片段具有至少75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％一致性的重组DNA聚合酶，且包括(a)一个或多个选自由以下组成的群组的氨基酸取代：E30K、G209Q、E220H或E220T、N234K、P236I或P236R、E245R、L252R、S260K、D264K或D264M、E267M或E267K或E267R、E277T、T324R、E325R、A344Y、E442R或E442Y、E456R、H473G、D480L、N485R、A492K、E493G或E493R、M495C、N517C或N517K、E522C和H528T；或(b)两个或更多个选自以下的氨基酸取代：E30K、G209Q、E220H、E220K或E220T、N234K或N234R、P236I或P236R、V241K、E245R、V251R、L252R、S260K、D264K或D264M、E267M或E267K或E267R、E277T、E294K、T324R、E325R、A344Y、E442R或E442Y、E456R、H473G、D480L或D480R、N485R、A492K、E493G或E493R、M495C、N517C或N517K、E522C和H528T，其中编号相对于SEQ ID NO:1，且其中重组DNA聚合酶或其片段产生相比于SEQ IDNO:35改进的准确度和/或降低的系统误差率。在某些说明性实例中，本发明的任选地经修饰且典型地重组突变聚合酶为突变Bst DNA聚合酶，其包括3个核心缓冲突变H46R、E446Q和H572R(相对于SEQ ID NO:1的位置编号)。在其它说明性实施例中，本发明的任选地经修饰且典型地重组突变聚合酶包括3个核心缓冲突变H46R、E446Q和H572R(相对于SEQ ID NO:1的位置编号)以及突变：H281M、D423K和N487R(相对于SEQ ID NO:1的位置编号)。
在一些实施例中，本公开大体上涉及与SEQ ID NO:1或其片段具有至少75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％一致性的非天然存在的突变(例如重组)DNA聚合酶，展现聚合酶活性，且包括(a)一个或多个选自由以下组成的群组的氨基酸取代：E30K、G209Q、E220H或E220T、N234K、P236I或P236R、E245R、L252R、S260K、D264K或D264M、E267M或E267K或E267R、E277T、T324R、E325R、A344Y、E442R或E442Y、E456R、H473G、D480L、N485R、A492K、E493G或E493R、M495C、N517C或N517K、E522C和H528T；或(b)两个或更多个选自以下的氨基酸取代：E30K、G209Q、E220H、E220K或E220T、N234K或N234R、P236I或P236R、V241K、E245R、V251R、L252R、S260K、D264K或D264M、E267M或E267K或E267R、E277T、E294K、T324R、E325R、A344Y、E442R或E442Y、E456R、H473G、D480L或D480R、N485R、A492K、E493G或E493R、M495C、N517C或N517K、E522C和H528T，其中编号相对于SEQ ID NO:1。重组DNA聚合酶或其片段产生相比于SEQ ID NO:1改进的准确度和/或降低的系统误差率。在一些实施例中，突变(例如重组)聚合酶可包括氨基酸取代H46R、E446Q和H572R，和/或可包括突变H281M、D423K和N487R，其中编号相对于SEQ ID NO:1。
在一些实施例中，本文提供包括在核苷酸聚合反应(包括核苷酸聚合反应，其中序列信息获自核酸分子)中使用本发明的重组突变聚合酶的方法、组合物、系统和套组。在一些实施例中，本文提供包含在克隆扩增反应(包括核酸库合成)中使用经修饰或重组聚合酶的方法、组合物、系统和套组。在一些实施例中，本公开涉及在基于离子的核酸测序反应中使用经修饰或重组聚合酶的方法，其中使用基于离子的测序系统从模板核酸获得序列信息。在一些实施例中，本文提供使用电子传感器的大规模阵列，例如场效应晶体管(“FET”)进行多种无标记DNA测序反应(例如基于离子的测序反应)的组合物、方法、系统、套组和设备。
在一些实施例中，本公开涉及在测序反应中的核酸扩增期间使用本文所提供的突变聚合酶的方法，其中使用基于固体载体的测序系统(例如基于桥式PCR的测序)从核酸扩增获得序列信息。在一些实施例中，本公开大体上涉及使用固体载体系统扩增一个或多个核酸，从而在固体载体上克隆扩增核酸的方法。
在方法的另一实施例中，突变聚合酶或其生物活性片段具有氨基酸序列SEQ IDNO:80、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:84、SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:87、SEQ ID NO:88、SEQ IDNO:89、SEQ ID NO:90、SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:92、SEQ ID NO:93、SEQ ID NO:95、SEQ IDNO:96、SEQ ID NO:97、SEQ ID NO:98、SEQ ID NO:99、SEQ ID NO:100、SEQ ID NO:101、SEQID NO:102、SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:105、SEQ ID NO:106、SEQ ID NO:107、SEQ ID NO:108、SEQ ID NO:109、SEQ ID NO:111、SEQ ID NO:112、SEQ ID NO:113、SEQ ID NO:114、SEQID NO:115、SEQ ID NO:116、SEQ ID NO:117、SEQ ID NO:118或SEQ ID NO:119。
在本发明的另一个方面中，提供一种用于进行聚合反应的方法，其包括以下：(a)在一种或多种核苷酸存在下使非天然存在的突变(例如重组)DNA聚合酶或其生物活性片段与核酸接触；以及(b)使用突变(例如重组)DNA聚合酶使一种或多种核苷酸中的至少一种聚合。此类方法中的突变(例如重组)DNA聚合酶可包括与SEQ ID NO:1或其片段具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％一致性的多肽链段，展现聚合酶活性，可任选地包括H46R、E446Q和H572R和/或H281M、D423K和N487R，且包括i)一个或多个选自由以下组成的群组的氨基酸取代：E30K、G209Q、E220H或E220T、N234K、P236I或P236R、E245R、L252R、S260K、D264K或D264M、E267M或E267K或E267R、E277T、T324R、E325R、A344Y、E442R或E442Y、E456R、H473G、D480L、N485R、A492K、E493G或E493R、M495C、N517C或N517K、E522C和H528T，其中编号相对于SEQ ID NO:1；或ii)两个或更多个选自以下的氨基酸取代：E30K、G209Q、E220H、E220K或E220T、N234K或N234R、P236I或P236R、V241K、E245R、V251R、L252R、S260K、D264K或D264M、E267M或E267K或E267R、E277T、E294K、T324R、E325R、A344Y、E442R或E442Y、E456R、H473G、D480L或D480R、N485R、A492K、E493G或E493R、M495C、N517C或N517K、E522C和H528T，其中编号相对于SEQ ID NO:1。在说明性实施例中，当在合成测序反应中使用时，相比于参考聚合酶，此类方法中使用的重组聚合酶可具有产生较低系统误差率和/或较高准确度的特性。说明性实例中的合成测序反应为产生且检测氢离子的反应。在说明性实施例中，方法中使用的突变(例如重组)聚合酶包括氨基酸取代H46R、E446Q和H572R，和/或可包括突变H281M、D423K和N487R，其中编号相对于SEQ ID NO:1。盐可包括于反应混合物中，其中发生接触。反应混合物可例如以50到250mM，或100mM到200mM，或120到200mM，或超过120mM，如125mM到250mM，或125mM到175mM的浓度包括盐。说明性实例中的盐为KCl和/或NaCl。
上文说明性实例中提供的用于进行聚合反应的方法中的突变(例如重组)DNA聚合酶包括L252R、H473G和H528T中的一种或多种，其中编号相对于SEQ ID NO:1。因此，在本文所提供的某些说明性实例中，用于进行聚合反应的方法中使用的突变(例如重组)DNA聚合酶与SEQ ID NO:1或其片段具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％一致性，展现聚合酶活性，包括氨基酸取代H46R、E446Q、H572R、H281M、D423K和N487R，且进一步包括L252R、H473G和H528T，其中编号相对于SEQ ID NO:1。在具有此类突变的示例性实施例中，非天然存在的突变(例如重组)DNA聚合酶具有SEQ ID NO:119的序列。
在其它子实施例中，用于上文所提供的聚合实施例的方法中的突变(例如重组)DNA聚合酶的多肽链段可为突变(例如重组)DNA聚合酶的至少50％、60％、70％、75％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％，且可与SEQ ID NO:1具有至少75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％一致性，或与SEQ ID NO:16具有至少75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％一致性。用于聚合子实施例的此类方法中的突变(例如重组)DNA聚合酶展现聚合酶活性，可包括氨基酸取代H341R、E741Q和H867R，和/或可包括突变H576M、D718K和N782R，且包括L547R、H768G和H823T中的一种或多种，其中编号相对于SEQID NO:16。在某些说明性实施例中，突变(例如重组)DNA聚合酶包括L547R、H768G和H823T。在用于聚合实施例(其中突变(例如重组)DNA聚合酶具有此类突变)的示例性方法中，突变DNA聚合酶具有SEQ ID NO:121的氨基酸序列。
在本发明的另一个方面中，提供一种用于扩增核酸的方法，其包括以下：(a)在一种或多种核苷酸存在下使核酸与非天然存在的突变(例如重组)DNA聚合酶接触，所述聚合酶包括与SEQ ID NO:1或其片段具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％一致性的多肽链段，展现聚合酶活性，可任选地包括H46R、E446Q和H572R和/或H281M、D423K和N487R，且包括i)一个或多个选自由以下组成的群组的氨基酸取代：E30K、G209Q、E220H或E220T、N234K、P236I或P236R、E245R、L252R、S260K、D264K或D264M、E267M或E267K或E267R、E277T、T324R、E325R、A344Y、E442R或E442Y、E456R、H473G、D480L、N485R、A492K、E493G或E493R、M495C、N517C或N517K、E522C和H528T，其中编号相对于SEQ ID NO:1；或ii)两个或更多个选自以下的氨基酸取代：E30K、G209Q、E220H、E220K或E220T、N234K或N234R、P236I或P236R、V241K、E245R、V251R、L252R、S260K、D264K或D264M、E267M或E267K或E267R、E277T、E294K、T324R、E325R、A344Y、E442R或E442Y、E456R、H473G、D480L或D480R、N485R、A492K、E493G或E493R、M495C、N517C或N517K、E522C和H528T，其中编号相对于SEQ ID NO:1。在说明性实施例中，当在合成测序反应中使用时，相比于参考聚合酶，此类方法中使用的突变(例如重组)聚合酶具有产生较低系统误差率和/或较高准确度的特性。说明性实例中的合成测序反应为产生且检测氢离子的反应。说明性实例中的方法中使用的突变(例如重组)聚合酶包括氨基酸取代H46R、E446Q和H572R，和/或可包括突变H281M、D423K和N487R，其中编号相对于SEQ ID NO:1。盐可包括于反应混合物中，其中发生接触。反应混合物可例如以50到250mM，或100mM到200mM，或120到200mM，或120到200mM，或超过120mM，如125mM到250mM，或125mM到175mM的浓度包括盐。说明性实例中的盐为KCl和/或NaCl。
上文说明性实例中提供的用于扩增核酸的方法中的突变(例如重组)DNA聚合酶包括L252R、H473G和H528T中的一种或多种，其中编号相对于SEQ ID NO:1。因此，在本文所提供的某些实例中，重组DNA聚合酶和相关实施例中的突变DNA聚合酶与SEQ ID NO:1或其片段具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％一致性，展现聚合酶活性，包括氨基酸取代H46R、E446Q、H572R、H281M、D423K和N487R，且进一步包括L252R、H473G和H528T，其中编号相对于SEQ ID NO:1。在具有此类突变的示例性实施例中，非天然存在的突变异体具有SEQ ID NO:119序列。
在其它子实施例中，上文所提供的用于扩增实施例的方法中的突变(例如重组)DNA聚合酶的多肽链段可为突变(例如重组)DNA聚合酶的至少50％、60％、70％、75％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％，且可与SEQ ID NO:1具有至少75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％一致性，或与SEQ ID NO:16(其为全长野生型Bst聚合酶)具有至少75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％一致性。此类子实施例中的突变(例如重组)DNA聚合酶展现聚合酶活性，可包括氨基酸取代H341R、E741Q和H867R，和/或可包括突变H576M、D718K和N782R，且包括L547R、H768G和H823T中的一种或多种，其中编号相对于SEQ ID NO:16。在某些实施例中，突变(例如重组)DNA聚合酶包括L547R、H768G和H823T。在具有此类突变的示例性实施例中，突变DNA聚合酶具有SEQ ID NO:121的氨基酸序列。
在某些实施例中，扩增方法为聚合酶链反应、乳液聚合酶链反应、等温扩增反应、重组酶聚合酶扩增反应、邻位连接扩增反应、滚环扩增反应或链置换扩增反应。在某些实施例中，扩增使核酸在溶液中或在固体载体上克隆扩增。
在本发明的另一个方面中，提供一种用于从核酸模板获得序列信息的方法，所述方法包括以下：(a)提供包含模板核酸、测序引物、一种或多种核苷酸和非天然存在的突变(例如重组)DNA聚合酶的反应混合物；(b)使模板核酸与至少一种类型的核苷酸接触，其中接触包括将来自至少一种类型的核苷酸的一种或多种核苷酸掺入到测序引物的3'端上且使用突变(例如重组)DNA聚合酶产生延伸的引物产物；以及(c)通过检测如氢离子的离子的产生和/或释放或检测焦磷酸根或磷酸根离子来检测反应混合物中的延伸的引物产物的存在，由此判定是否已发生核苷酸掺入。此类方法中的突变(例如重组)DNA聚合酶可包括与SEQ ID NO:1或其片段具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％一致性的多肽链段，展现聚合酶活性，可任选地包括H46R、E446Q和H572R和/或H281M、D423K和N487R，且包括i)一个或多个选自由以下组成的群组的氨基酸取代：E30K、G209Q、E220H或E220T、N234K、P236I或P236R、E245R、L252R、S260K、D264K或D264M、E267M或E267K或E267R、E277T、T324R、E325R、A344Y、E442R或E442Y、E456R、H473G、D480L、N485R、A492K、E493G或E493R、M495C、N517C或N517K、E522C和H528T，其中编号相对于SEQ ID NO:1；或ii)两个或更多个选自以下的氨基酸取代：E30K、G209Q、E220H、E220K或E220T、N234K或N234R、P236I或P236R、V241K、E245R、V251R、L252R、S260K、D264K或D264M、E267M或E267K或E267R、E277T、E294K、T324R、E325R、A344Y、E442R或E442Y、E456R、H473G、D480L或D480R、N485R、A492K、E493G或E493R、M495C、N517C或N517K、E522C和H528T，其中编号相对于SEQ ID NO:1。在说明性实施例中，当在合成测序反应中使用时，相比于参考聚合酶，此类方法中使用的重组聚合酶可产生较低系统误差率和/或较高准确度。说明性实例中的合成测序反应为产生且检测氢离子的反应。反应混合物可例如以50到250mM，或100mM到200mM，或120到200mM，或超过120mM，如125mM到250mM，或125mM到175mM的浓度包括盐。说明性实例中的盐为KCl和/或NaCl。所述方法可为高通量测序方法。
用于从上文说明性实例中提供的核酸模板获得序列信息的方法中的突变(例如重组)DNA聚合酶包括L252R、H473G和H528T中的一种或多种，其中编号相对于SEQ ID NO:1。因此，在本文所提供的某些实例中，重组DNA聚合酶和相关实施例中的突变DNA聚合酶与SEQID NO:1或其片段具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％一致性，展现聚合酶活性，包括氨基酸取代H46R、E446Q、H572R、H281M、D423K和N487R，且进一步包括L252R、H473G和H528T，其中编号相对于SEQ ID NO:1。在用于获得序列信息的方法的示例性实施例中，具有此类突变的突变(例如重组)DNA聚合酶具有SEQ ID NO:119的序列。
在用于从核酸模板获得序列信息的方法的其它子实施例中，上文提供的实施例中的突变(例如重组)DNA聚合酶的多肽链段可为突变(例如重组)DNA聚合酶的至少50％、60％、70％、75％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％，且可与SEQ ID NO:1具有至少75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％一致性，或与SEQ ID NO:16(其为全长野生型Bst聚合酶)具有至少75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％一致性。此类子实施例中的突变(例如重组)DNA聚合酶展现聚合酶活性，可包括氨基酸取代H341R、E741Q和H867R，和/或可包括突变H576M、D718K和N782R，且包括L547R、H768G和H823T中的一种或多种，其中编号相对于SEQ ID NO:16。在某些实施例中，突变(例如重组)DNA聚合酶包括L547R、H768G和H823T。在用于获得序列信息的方法的示例中，具有此类突变的突变(例如重组)DNA聚合酶具有SEQ ID NO:121的氨基酸序列。
在从核酸模板获得序列信息的方法的某些实施例中，掺入到测序引物的3'端上的一种或多种核苷酸为可逆终止子核苷酸。
在从核酸模板获得序列信息的方法的其它实施例中，接触包括产生一个或多个氢离子作为核苷酸掺入的副产物。此外，在这些或其它实施例中，检测包括测量作为核苷酸掺入副产物产生的一个或多个氢离子的浓度。此外，这些和其它实施例中的方法可包括鉴别由至少一种类型的核苷酸掺入的一种或多种核苷酸中的至少一种。此外，在这些实施例中，接触、检测和鉴别步骤可重复超过一次，由此鉴别多次连续核苷酸掺入。
在一些实施例中，因此，突变(例如重组)聚合酶或生物片段的特征在于相对于对照或参考聚合酶(其为不包括测试中聚合酶的突变中的一种或多种的聚合酶)以下特性中的任何一个或多个的改变(例如提高或降低)：解离时间常数、聚合酶从给定核酸模板解离的速率(在本文中也称为“解离速率”)、聚合酶对给定核酸模板的结合亲和力、平均阅读长度、最低阅读长度、准确度、链偏差、原始阅读准确度、系统误差、总测序通量、盐性能(即，离子强度)、AQ20、无平均误差阅读长度、100Q17值、200Q17值和持续合成能力。
如本文所使用，当参考给定聚合酶使用术语“Q17”或“Q20”和其变化形式时，其是指聚合酶性能的某些方面，尤其给定聚合酶反应中，例如基于聚合酶的合成测序反应中的准确度。举例来说，在特定测序反应中，可经由预测算法或经由与已知参考基因组的实际比对来计算准确度度量值。预测的质量分数(“Q”分数)可从查看输入信号的固有特性的算法导出且关于测序“阅读”中所包括的给定单一碱基是否将比对获得极其精确的估计值。在一些实施例中，此类预测的质量分数可适用于在下游比对之前过滤且去除较低质量读数。在一些实施例中，可以在测量对数尺度上的准确度的类似Phred的Q分数方面报导准确度以使得：Q10＝90％、Q17＝98％、Q20＝99％、Q30＝99.9％、Q40＝99.99％以及Q50＝99.999％。Phred质量分数(“Q”)定义为与碱基判读误差概率(“P”)对数相关的特性。通常针对计算“Q”给出的式是Q＝10×log10(1/误差率)。在一些实施例中，可以过滤获自给定聚合酶反应的数据以仅仅测量聚合酶读数，其测量“N”个核苷酸或更长核苷酸且具有超过一定阈值的Q分数，例如Q10、Q17、Q100(在本文中被称作“NQ17”分数)。举例来说，100Q20分数可指示获自给定反应的阅读数目，其长度为至少100个核苷酸且Q分数为Q20(99％)或更大。类似地，200Q20分数可指示长度为至少200个核苷酸且Q分数为Q20(99％)或更大的阅读数目。
在一些实施例中，也可基于使用参考基因组序列的恰当比对计算准确度，在本文中被称作“原始”准确度。与测量作为与多个读数结果的共同序列的误差率的共同准确度相反，这是涉及测量与单一读数相关的“真实”每个碱基误差的单向准确度。原始准确度测量值可在“AQ”分数(针对比对质量)方面报导。在一些实施例中，可过滤获自给定聚合酶反应的数据以仅仅测量聚合酶读数，其测量“N”个核苷酸或更长核苷酸，具有超过一定阈值的AQ分数，例如AQ10、AQ17、AQ100(在本文中被称作“NAQ17”分数)。举例来说，100AQ20分数可指示获自给定聚合酶反应的阅读数目，其长度为至少100个核苷酸且AQ分数为AQ20(99％)或更大。类似地，200AQ20分数可指示长度为至少200个核苷酸且AQ分数为AQ20(99％)或更大的阅读数目。
在一些实施例中，聚合酶的准确度(包括例如给定测序反应中的准确度)可依据获自聚合酶反应的“完美”(即，零误差)阅读总数测量，其长度大于100、200、300、400、500、750、1000、5000、10000、100000或更多个核苷酸。
在一些实施例中，聚合酶的准确度可依据获自聚合酶反应的最长完美阅读测量(典型地依据阅读中所包括的核苷酸数目测量)。
在一些实施例中，聚合酶的准确度可依据给定测序反应中所获得的测序通量的倍数增加测量。举例来说，在一些实施例中，本申请的示例性重组聚合酶可具有与参考聚合酶相比2倍、5倍、10倍、20倍、50倍、75倍、100倍、150倍、200倍、400倍、500倍或更多倍的准确度的提高的准确度。
准确度度量的一些示例性非限制性描述可以见于：Ewing B,Hillier L,WendlMC,Green P.(1998)：使用phred的自动化测序仪迹线的碱基判读(Base-calling ofautomated sequencer traces using phred).I.准确度评估(Accuracy assessment).《基因组研究(Genome Res.)》8(3):175-185；Ewing B,Green P.(1998)：使用phred的自动化测序仪迹线的碱基判读.II.误差概率(Error probabilities).《基因组研究》8(3):186-194；Dear S,Staden R(1992)：DNA测序仪器的数据的标准文件格式(A standard file formatfor data from DNA sequencing instruments).《DNA序列(DNA Sequence)》,3,107-110；Bonfield JK,Staden R(1995)：DNA测序项目的碱基判读准确度的数值估计值的应用(Theapplication of numerical estimates of base calling accuracy to DNA sequencingprojects).《核酸研究》1995年4月25日；23(8):1406-10，其全部内容以引用的方式并入本文中。
在一些实施例中，可在基于离子的测序反应操作(其中产生且检测氢离子)中测量给定组聚合酶(包括本文所公开的突变(例如重组)聚合酶中的任一种)的测序准确度；此类准确度可任选地彼此比较以判定给定氨基酸突变是否相对于参考或未经修饰的聚合酶而提高或降低测序准确度。在一些实施例中，一种或多种聚合酶的测序准确度可使用离子激流技术供应的基于任何离子的测序设备测量(离子激流系统(Ion Torrent Systems)，生命技术，卡尔斯巴德(Carlsbad)，加利福尼亚州)，包括例如离子激流PGMTM测序仪(离子激流系统，生命技术，部件号4462917)，任选地使用离子激流系统提供的测序方案和试剂。使用此类基于离子的测序系统计算给定聚合酶的准确度度量值的一些实例进一步描述于标题为“离子激流：离子个人基因组MachineTM性能综述，性能弹簧2011(Ion Torrent:IonPersonal Genome MachineTM Performance Overview,Perfomance Spring 2011)”的离子激流应用施加(Ion Torrent Application Note)中，其以引用的方式并入在此。
如本文所使用，当参考给定聚合酶使用术语“解离速率常数”和“解离时间常数”时，其是指在一组限定的反应条件下聚合酶从核酸模板解离的时间常数(“koff”)。用于测量聚合酶的解离时间常数的一些示例性分析进一步描述于下文中。在一些实施例中，解离时间常数可以反时间，例如sec-1或min-1为单位测量。
在一些实施例中，本文提供一种分离的重组聚合酶，其相对于参考聚合酶包括至少一种氨基酸修饰且相对于使用参考聚合酶获得的引物延伸产物的平均阅读长度提供使用重组聚合酶的引物延伸反应中的引物延伸产物的提高的平均阅读长度。在一些实施例中，相对于使用参考聚合酶获得的引物延伸产物的无平均误差阅读长度，分离的重组聚合酶提供使用重组聚合酶的引物延伸反应中的引物延伸产物的提高的无平均误差阅读长度。任选地，相对于参考聚合酶，重组聚合酶包括两个、三个或更多个氨基酸取代。
在一些实施例中，引物延伸反应是基于离子的测序反应。
在一些实施例中，相对于使用参考聚合酶，如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ IDNO:35获得的100Q17或200Q17值，本文所提供的分离的重组聚合酶提供提高的核酸测序反应(例如基于离子的测序反应)中的100Q17或200Q17值。
在一些实施例中，参考聚合酶包括天然存在的或野生型聚合酶。在其它实施例中，参考聚合酶包括与重组聚合酶不同，例如相比于重组聚合酶具有一个或多个省去的氨基酸取代的天然存在的聚合酶的衍生物、截断、突变异体或变异体形式。在一些实施例中，参考聚合酶为SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:120或SEQID NO:122。
在一些实施例中，本文提供用于进行核苷酸聚合反应的方法，其包含：在一种或多种核苷酸存在下使重组聚合酶与核酸模板接触；以及使用重组聚合酶使一种或多种核苷酸中的至少一种聚合。聚合任选地进一步包括以模板依赖性方式使至少一种核苷酸聚合。在一些实施例中，相对于不包括一个或多个氨基酸取代的参考聚合酶，重组聚合酶包括一个或多个氨基酸取代。
在一些实施例中，所述方法进一步包括在接触之前、期间或之后使引物与模板杂交。聚合可包括使用重组聚合酶使至少一种核苷酸聚合到引物的一端上。
在一些实施例中，在能够通过重组聚合酶检测到至少一种核苷酸的聚合的传感器附近进行聚合。
在一些实施例中，所述方法进一步包括检测使用传感器通过重组聚合酶指示一种或多种核苷酸中的至少一种的聚合的信号。
本文所提供的突变异体(例如聚合酶)、参考聚合酶或本发明的重组聚合酶和参考聚合酶典型地均为DNA聚合酶。在说明性实施例中，DNA聚合酶为突变Bst DNA聚合酶。
在一些实施例中，突变(例如重组)聚合酶或其生物活性片段可使用所属领域的技术人员已知的任何适合的方法或分析制备。在一些实施例中，本公开涵盖用以获得重组聚合酶或其生物活性片段的蛋白质工程化的任何适合的方法。举例来说，定点突变诱发为可用于在DNA构筑体内引入一种或多种已知或随机突变的技术。一种或多种氨基酸突变的引入可例如相对于标准或参考聚合酶或经由核酸测序来验证。在验证后，含有氨基酸突变中的一种或多种的构筑体可转化成细菌细胞且表达。可使用本文所提供的核酸和载体产生突变聚合酶。实例1和4提供用于制造本发明的突变聚合酶的非限制性示例性方法。
典型地，在采集(通常经由离心)和纯化上清液之前，在诱导且生长到所需光密度的培养基中接种含有突变表达构筑体的菌落。所属领域的技术人员将显而易见，上清液可通过任何适合的手段纯化。典型地，选择用于分析型或制备型蛋白质纯化的柱。在一些实施例中，使用所述方法制备的重组聚合酶或其生物活性片段可(但不限于)主要根据制造商的说明书在肝素柱上纯化。
在纯化后，任选地经修饰且典型地重组突变聚合酶或其生物活性片段可使用任何适合的方法评估各种聚合酶活性。在一些实施例中，将取决于相关应用评估聚合酶活性。举例来说，用于扩增或测序长度为约400bp的核酸分子的聚合酶可包括如相对于参考聚合酶提高的持续合成能力和/或提高的解离时间常数的聚合酶活性。在另一个实例中，需要长度为约100bp的核酸分子的深度目标重测序的应用可包括具有提高的校正活性、提高的原始准确度、增加的总测序通量、减少的链偏差、减少的系统误差或增加的最小阅读长度的聚合酶。在一些实施例中，所评估的一种或多种聚合酶活性可能与在较高离子强度溶液(例如较高盐条件)存在下的聚合酶性能或聚合酶活性相关。
在一些实施例中，可评估根据本文中的方法制备的任选地经修饰(典型地重组)突变聚合酶或其生物活性片段的DNA结合活性、核苷酸聚合活性、引物延伸活性、链置换活性、逆转录酶活性、3'-5'核酸外切酶(校正)活性等等。
在一些实施例中，可评估根据本文中的方法制备的重组聚合酶或其生物活性片段与参考聚合酶相比提高的准确度、提高的持续合成能力、增加的平均阅读长度、增加的信噪比、提高的信号、增加的最小阅读长度、增加的总测序通量、降低的链偏差、降低的系统误差、提高的AQ20、提高的200Q17值或进行核苷酸聚合的能力。在一些实施例中，可评估重组聚合酶或其生物活性片段在较高离子强度溶液存在下的聚合酶活性中的任一种。在一些实施例中，较高离子强度溶液包含120mM到约300mM盐。在一些实施例中，较高离子强度溶液包含低端120、125、130或135mM与高端150、175、200、225、250、300、350、400或500mM之间的盐范围。在一个实施例中，较高离子强度溶液包含至少125mM盐。在一个实施例中，较高离子强度溶液包含125mM盐到175mM盐。
在一些实施例中，重组聚合酶或其生物活性片段的特征任选地在于以下特性(通常相对于缺乏一个或多个氨基酸突变的聚合酶)中的任何一个或多个的改变(例如提高或降低)：解离时间常数、聚合酶从给定核酸模板解离的速率、聚合酶对给定核酸模板的结合亲和力、平均阅读长度、最低阅读长度、准确度、完美阅读总数、总测序通量、链偏差、系统误差、测序反应通量的倍数提高、盐性能(即，离子强度)、AQ20、无平均误差阅读长度、误差速、100Q17值、200Q17值、Q分数、原始阅读准确度、信号、信噪比和持续合成能力。
在一些实施例中，可单独地相对于相似聚合酶的所属领域中的已知值来评估重组聚合酶或其生物活性片段。在一些实施例中，可在类似或相同条件下相对于已知或参考聚合酶评估根据所述方法制备的重组聚合酶或其生物活性片段。在一些实施例中，条件可包括在较高离子强度溶液存在下扩增或测序核酸分子。在一些实施例中，较高离子强度溶液包括120mM到300mM盐。在一个实施例中，较高离子强度溶液包括大于120mM盐，如在范围低端125、130、140或150mM盐与范围高端150、160、170、175、180、190、200、225、250、275或300mM盐之间。
在一些实施例中，本文提供用于产生多种重组聚合酶或生物活性片段的方法。在一些实施例中，本文提供使用高通量或自动化系统产生多种重组聚合酶或生物活性片段的方法。在一些实施例中，所述方法包含将多种重组聚合酶或生物活性片段与一系列蛋白质纯化所需试剂混合且从混合物中提取经纯化的聚合酶或生物活性片段。在一个实例中，可在96孔或384孔培养板中制备多种随机或定点突变诱发反应物。任选地，96孔或384孔培养板的内含物可经受初始筛检以鉴别聚合酶突变构筑体。可将各个别孔的内含物(或来自初始筛检的各孔的内含物)递送到一连串烧瓶、试管或振荡器中以便接种和诱发。在所需光密度下时，可离心烧瓶、试管或振荡器且回收上清液。各上清液可经受蛋白质纯化，例如经由全自动柱纯化(例如参见Camper和Viola,《分析生物化学》,2009,第176-181页)。可评估经纯化的重组聚合酶或生物活性片段的聚合酶活性中的一个或组合，如DNA结合、引物延伸、链置换、逆转录酶活性等等。据设想，所属领域的技术人员可使用所述方法(或在本公开的范围内的所述方法的变化形式)来鉴别多种重组聚合酶或生物活性片段。在一些方面中，所述方法可用于鉴别与参考聚合酶相比产生改进的准确度的多种重组聚合酶或生物活性片段。在一些实施例中，所述方法可用于鉴别在较高离子强度溶液存在下相比于参考聚合酶产生改进的准确度的多种重组聚合酶或其生物活性片段。在一些实施例中，较高离子强度溶液可包括KCl和/或NaCl盐。在一些实施例中，较高离子强度溶液可为120到300mM盐。在一些实施例中，较高离子强度溶液可为120mM到200mM盐。在一些实施例中，较高离子强度溶液可为125mM到175mM盐。所属领域的技术人员将显而易见，可替代使用各种其它适合的盐或与KCl和/或NaCl组合使用。在一些实施例中，离子强度溶液可进一步包括硫酸盐。
如所属领域的技术人员将显而易见，本公开概述用以产生重组聚合酶或其生物活性片段库的示例性自动化和高通量方法(和相关设备和系统)。本公开还概述用以评估此类重组聚合酶或其生物活性片段的聚合酶活性的方法(和相关套组、组合物、设备以及系统)。本公开也涵盖，所属领域的技术人员可容易地产生构筑体的诱变处理库，其中可使相关聚合酶内的每个氨基酸突变。在一些实施例中，可制备诱变处理库，其中通过每种可能的氨基酸组合使聚合酶内的各个氨基酸突变。在一些实施例中，可制备诱变处理库，其中使聚合酶内的各个氨基酸突变，且其中可能的氨基酸突变的组合限于保守性或非保守性氨基酸取代。在两个实例中，可产生诱变处理库，其含有可经由纯化或初始筛检的自动化或高通量系统应用的大量突变构筑体。在一些实施例中，可使用On-PGM聚合酶筛检，使用个人基因组机器和离子PGM测序芯片(生命技术公司，加利福尼亚州)来评估具有代表诱变处理库的96或384库构筑体的培养板的一种或多种聚合酶活性。在一个实例中，On-PGM聚合酶筛检可包括一种或多种代表诱变处理库的96或384培养板；其中培养板的各孔由与相同培养板上至少一个孔中的参考聚合酶(缺乏至少一个或多个氨基酸突变)相比含有至少一个或更多个氨基酸突变不同构筑体(重组聚合酶)组成。在一些实施例中，参考聚合酶充当96或384培养板内的对照样品以评估培养板的孔内的各种重组聚合酶的聚合酶活性。在一些实施例中，培养板内的构筑体库和参考聚合酶可进一步包括培养板内各种重组聚合酶的独特条码。因此，如果培养板内的各孔含有参考聚合酶或重组聚合酶构筑体，那么96孔培养板可含有96个条码。在纯化后，可评估蛋白质的诱变处理库的聚合酶活性中的一个或组合，如DNA结合、引物延伸、链置换、逆转录酶、切口引发聚合酶活性、原始准确度、增加的总测序通量、减少的链偏差、减少的系统误差、阅读长度等。在一些实施例中，所述库可进一步包括已知在所提出的扩增条件下表现良好的模板库，以使得良好表现的模板库可充当基线或对照阅读。
任选地，可进一步评估经纯化的重组聚合酶或其生物活性片段的其它特性，如在较高盐(离子强度)存在下扩增或测序核酸分子的能力。一般不认为待突变的聚合酶的来源或起源是关键的。举例来说，所述方法中可使用真核、原核、古细菌、细菌、噬菌体或病毒聚合酶。在一些实施例中，聚合酶可为DNA或RNA聚合酶。在一些实施例中，DNA聚合酶可包括家族A或家族B DNA聚合酶。考虑到蛋白质工程化和酶学(enzymatics)的领域，本文所提供的示例性方法应为说明性的，且不应以任何方式理解为限制性的。
在一些实施例中，具有本文所提供的突变中的任一个的任选地经修饰的突变且典型地重组聚合酶或其生物活性片段包括位于重组聚合酶催化域内部的一个或多个氨基酸突变。在一些实施例中，重组聚合酶或其生物活性片段可包括催化域的至少25、50、75、100、150或更多个氨基酸残基。在一些实施例中，重组聚合酶或其生物活性片段可包括催化域中包含至少25、50、75、100、150或更多个连续氨基酸残基的任何部分。在一些实施例中，重组聚合酶或其生物活性片段可包括催化域的至少25个连续氨基酸残基且可任选地包括催化域外部的C端或N端处的一个或多个氨基酸残基。在一些实施例中，重组聚合酶或生物活性片段可包括与任何一个或多个非催化域氨基酸残基偶合的催化域的任何25、50、75、100、150或更多个连续氨基酸残基。
在一些实施例中，经修饰的聚合酶或其生物活性片段包括位于聚合酶的DNA结合域内部的一个或多个氨基酸突变。在一些实施例中，经修饰的聚合酶或其生物活性片段可包括经修饰的聚合酶的DNA结合域的至少25、50、75、100、150或更多个氨基酸残基。在一些实施例中，经修饰的聚合酶或其生物活性片段可包括DNA结合域中包含至少25、50、75、100、150或更多个连续氨基酸残基的任何部分。在一些实施例中，经修饰的聚合酶或其生物活性片段可包括结合域的至少25个连续氨基酸残基且可任选地包括结合域外部的C端或N端处的一个或多个氨基酸残基。在一些实施例中，经修饰的聚合酶或生物活性片段可包括与任何一个或多个非结合域氨基酸残基偶合的结合域的任何25、50、75、100、150或更多个连续氨基酸残基。在一些实施例中，经修饰的聚合酶(或其生物活性片段)包括位于经修饰的聚合酶的DNA结合域内部的一个或多个氨基酸突变，且其中聚合酶与本文所公开的经修饰的聚合酶中的任一种具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更大的一致性。
在一些实施例中，经修饰的聚合酶或其生物活性片段包括位于聚合酶催化域(在本文中也被称作DNA结合裂隙)外部的一个或多个氨基酸突变。A家族DNA聚合酶、B家族DNA聚合酶和逆转录酶以及RNA依赖性RNA聚合酶的催化域是熟知的；所有都享有共同的总结构和催化机制。所有这些聚合酶的催化域具有与右手相比的形状且由“手掌”、“拇指”以及“手指”结构域组成。手掌域典型地含有用于磷酰基转移反应的催化位点。拇指被认为起定位双螺旋体DNA和持续合成能力和易位的作用。手指与引入的核苷酸以及其配对的模板碱基相互作用。手掌域在A、B和RT家族中是同源的，但手指和拇指的布置不同。不同聚合酶家族的拇指域享有共同的特征，含有平行或反平行的α-螺旋，其中至少一种α-螺旋与引物-模板复合物的小沟相互作用。手指域也保存安置在引物-模板复合物的平头末端处的α-螺旋。此螺旋线含有高度保守性侧链(B基元)。
已针对A家族聚合酶鉴别出三个保守性基元A、B和C。A和C基元在B家族聚合酶和RT聚合酶两者中典型地具有保守性。(Delarue等人，《蛋白质工程化(rotein Engineering)》3:461-467(1990))。
在一些实施例中，对于A家族聚合酶，A基元包含共同序列：
DXSXXE(SEQ ID NO:5)。
在一些实施例中，对于A家族聚合酶，B基元包含共同序列：
KXXXXXXYG(SEQ ID NO:6)
在一些实施例中，对于A家族聚合酶，C基元包含共同序列：
VHDE(SEQ ID NO:7)
在一些实施例中，聚合酶任选地包含任何A家族聚合酶或其生物活性片段、突变异体、变异体或截断，其中连接部分连接到位于A、B或C基元外部的A家族聚合酶或其生物活性片段、突变异体、变异体或截断的任何氨基酸残基。在一些实施例中，连接部分连接到A家族聚合酶或生物活性片段中位于A基元、B基元或C基元外部的任何氨基酸残基。
A和C基元典型地形成手掌域的一部分，且各基元典型地含有严格保守性天冬氨酸残基，其参与所有DNA聚合酶共同的催化机制。DNA合成可通过将磷酰基从引入的核苷酸转移到DNA的3'OH，释放多磷酸部分且形成新的DNA磷酸二酯键来介导。此反应典型地通过涉及两种金属离子(通常Mg2+)和两种保守性天冬氨酸残基的机制催化。
在一些实施例中，A家族DNA聚合酶的基元A中的保守性谷氨酸残基在正确核苷酸掺入中起重要作用，B家族成员中相对应的保守性酪氨酸也同样(Minnick等人,《美国国家科学院院刊学院院刊》99:1194-1199(2002)；Parsell等人，《核酸研究》35:3076-3086(2002)。基元A的保守性Leu处的突变影响复制保真度(Venkatesan等人,《生物化学杂志281:4486-4494(2006))。
在一些实施例中，B基元含有保守性赖氨酸、酪氨酸和甘氨酸残基。已显示，大肠杆菌pol I的B基元结合核苷酸底物且含有已显示于活性位点中的保守性酪氨酸。
在一些实施例中，对于B家族聚合酶，A基元包含共同序列：
DXXSLYPS(SEQ ID NO:8)。
在一些实施例中，对于B家族聚合酶，B基元包含共同序列：
KXXXNSXYG(SEQ ID NO:9)
在一些实施例中，对于B家族聚合酶，C基元包含共同序列：
YGDTDS(SEQ ID NO:10)
粗体的残基指示不变的残基。
在一些实施例中，重组聚合酶任选地包含任何B家族聚合酶或其生物活性片段、突变异体、变异体或截断，其中连接部分连接到位于A、B或C基元外部的B家族聚合酶或其生物活性片段、突变异体、变异体或截断的任何氨基酸残基。在一些实施例中，连接部分连接到位于A基元、B基元或C基元外部的B家族聚合酶或生物活性片段的任何氨基酸残基。
在一些实施例中，B家族聚合酶含有六个保守性基元，其中区域I和II对应于A家族的A和C基元。区域III涉及核苷酸结合且在功能上与基元B同源。区域I、II和III在来自手掌(I)、手指(II)和拇指(III)的碱基的活性位点的中心处汇聚以产生连续保守性表面。在这些区域内，一组高度保守性残基形成分别由暴露的芳香族残基、带负电残基以及带正电残基组成的三个化学上不同的群集。举例来说，在细菌噬菌体RB69的复制聚合酶中，这三个群集对应于以下氨基酸残基：Y416、Y567和Y391(暴露的芳香族残基)；D621、D623、D411、D684和E686(带负电残基)；以及K560、R482和K486(带正电残基)。参见Wang等人,《细胞(Cell)》89:1087-1099(1997)。这三个群集典型地涵盖其中引物末端和引入的核苷酸预期结合的区域。在一些实施例中，重组聚合酶任选地包含任何B家族聚合酶或其生物活性片段、突变异体、变异体或截断，其中连接部分连接到位于这些保守性氨基酸群集或基元中的一个或多个外部的B家族聚合酶或其生物活性片段、突变异体、变异体或截断的任何氨基酸残基。在一些实施例中，连接部分连接到位于这些保守性氨基酸群集或基元中的任一个外部的B家族聚合酶或其生物活性片段、突变异体、变异体或截断的任何氨基酸残基。
RT聚合酶含有四个保守性序列基元(Poch等人,《欧洲分子生物学杂志(EMBO J.)》12:3867-3874(1989))，其中基元A和C含有保守性催化性天冬氨酸酯。对于逆转录酶功能来说，还需要基元B的完整性。
基元A的共同序列为DXXXXF/Y(SEQ ID NO:11)
基元B的共同序列为FXGXXXS/A(SEQ ID NO:12)
基元C的共同序列为YXDD(SEQ ID NO:13)
基元D的共同序列为GXXXXXXXK(SEQ ID NO:14)。
YXDD基元(基元C)(这些基元中最高度保守性的)中的突变可消除聚合酶活性且改变持续合成能力和保真度(Sharma等人,《抗病毒化学和化学疗法(Antiviral Chemistryand Chemotherapy)》16:169-182(2005))。另外，基元D(RT聚合酶独有的回路)中的保守性赖氨酸残基为对核苷酸结合至关重要的不变残基(Canard等人,《生物化学杂志274:35768-35776(1999))。
在一些实施例中，重组聚合酶任选地包含任何RT聚合酶或其生物活性片段、突变异体、变异体或截断，其中连接部分连接到位于A、B、C和D基元中的一个或多个外部的RT聚合酶或其生物活性片段、突变异体、变异体或截断的任何氨基酸残基。在一些实施例中，连接部分连接到位于这些基元中的任一个外部的RT聚合酶或其生物活性片段、突变异体、变异体或截断的任何氨基酸残基。
在一些实施例中，重组聚合酶包括一个或多个位于除保守性或不变残基外任何位置处的修饰(包括氨基酸取代、缺失、添加或化学修饰)。
在一些实施例中，除了聚合酶结构域之外，具有本文所提供的突变中的任一种或类似突变(如果此类聚合酶不基于野生型Bst DNA聚合酶的序列)的突变(例如重组)DNA聚合酶可包括一个或多个额外功能域，包括介导新合成的DNA链的校正的3'->5'(逆转)核酸外切酶活性或在DNA修复期间介导切口平移的5'->3'(正向)核酸外切酶活性或FLAP核酸内切酶活性所需的结构域。在一些实施例中，重组聚合酶具有链置换活性且可通过使核苷酸聚合到双链核酸模板内切口的3'端中而同时置换位于切口下游的核酸来催化核酸合成。重组聚合酶任选地还具有这些活性中的任何一个或多个。
A和B家族DNA聚合酶的3'到5'核酸外切酶校正域都含有三个保守性基元，称为ExoI、Exo II和Exo III，其中的每一个都含有对于金属结合和核酸外切酶功能来说必需的天冬氨酸残基。这些保守性天冬氨酸残基的改变产生保留聚合酶活性但核酸外切酶活性不足的蛋白质(Hall等人,《普通病毒学杂志(J.Gen.Virol.)》76:2999-3008(1995))。也已鉴别影响核酸外切酶活性的5'到3'核酸外切酶域中的保守性基元和氨基酸改变(美国专利第5,466,591号)。
A家族酶的代表性实例为大肠杆菌Pol I或大肠杆菌Pol I的克列诺片段、Bst DNA聚合酶、Taq DNA聚合酶、T7DNA聚合酶和Tth DNA聚合酶。家族酶也包括铂Taq DNA聚合酶系列。
在一些实施例中，A家族酶的特征为较高DNA延长率但可具有较差保真度，因为不具有3'-5'核酸外切酶活性。在一些实施例中，B家族酶由于其3'-5'核酸外切酶活性可具有高保真度，但可实现较低DNA延长率。
在一些实施例中，重组聚合酶衍生自嗜热脂肪芽孢杆菌的Bst DNA聚合酶或其任何生物活性片段。Bst聚合酶可为家族A DNA聚合酶。天然存在的Bst DNA聚合酶的581个氨基酸片段(在本文中有时被称作“大片段”)等效于大肠杆菌Pol I的克列诺片段，保留聚合酶和校正核酸外切酶活性，而不具有5'到3'核酸外切酶活性。在一些实施例中，衍生自BstDNA聚合酶的聚合酶可不具有3'到5'核酸外切酶活性。如本文所使用，术语“Bst DNA聚合酶”可指全长蛋白质或Bst大片段。
在一些实施例中，参考聚合酶、重组聚合酶或参考和重组聚合酶两者由具有或包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列(其为Bst DNA聚合酶的大片段(C端部分)的氨基酸序列)的Bst DNA聚合酶的分离变异体组成或包含所述变异体。
SEQ ID NO:1对应于Bst DNA聚合酶的大片段且分别在残基358-363、411-420和533-536处包括DNA聚合酶基元A、B和C(参见例如上文Delarue)。在一些实施例中，为了保留Bst聚合酶的聚合酶活性，可对在基元A、B或C内非高度保守性的氨基酸残基做出任何取代、缺失或化学修饰，所述氨基酸残基如聚合酶活性所需的不变的天冬氨酸残基D358和D535，限制条件为此类突变Bst DNA聚合酶包括本文中鉴别的突变。在一些实施例中，重组聚合酶包括保留可检测水平的聚合酶活性的Bst DNA聚合酶的突变异体或变异体形式。
在一些实施例中，参考聚合酶、重组聚合酶或参考和重组聚合酶两者由具有或包含与SEQ ID NO:1的氨基酸序列至少80％一致的氨基酸序列的聚合酶的分离变异体组成或包含所述变异体。在一些实施例中，参考聚合酶或重组聚合酶为包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的Bst DNA聚合酶的分离变异体，其中变异体包含与SEQ ID NO:1至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％一致的氨基酸序列。
在一些实施例中，参考聚合酶为具有或包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的Bst DNA聚合酶，且相对于参考聚合酶，重组聚合酶进一步包括一个或多个氨基酸修饰(例如氨基酸取代、缺失、添加或化学修饰)。在一些实施例中，参考聚合酶、重组聚合酶或参考和重组聚合酶两者包括位置1处的甲硫氨酸残基的缺失或取代，其中编号相对于SEQ ID NO:1的氨基酸序列。
在一些实施例中，参考聚合酶和/或重组聚合酶可包括具有或包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的聚合酶的任何生物活性片段的氨基酸序列。在一些实施例中，重组聚合酶可包括具有或包含与SEQ ID NO:1的氨基酸序列至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％一致的氨基酸序列的聚合酶的任何生物活性片段的氨基酸序列。
在一些实施例中，重组聚合酶由具有或包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的Bst DNA聚合酶的分离变异体组成或包含所述变异体。
SEQ ID NO:2包括相对于SEQ ID NO:1的三个氨基酸取代，即：His46Arg(H46R)、Glu446Gln(E446Q)以及His572Arg(H572R)，其中编号相对于SEQ ID NO:1的氨基酸序列。
在一些实施例中，重组聚合酶由具有或包含与SEQ ID NO:2的氨基酸序列至少90％一致的氨基酸序列的聚合酶的分离变异体组成或包含所述变异体。在一些实施例中，聚合酶为包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的Bst DNA聚合酶的变异体，其中所述变异体包含与SEQ ID NO:2至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％一致的氨基酸序列。
在一些实施例中，参考聚合酶为具有或包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的Bst DNA聚合酶，且相对于参考聚合酶，重组聚合酶进一步包括一个或多个氨基酸修饰(例如氨基酸取代、缺失、添加或化学修饰)。在一些实施例中，参考聚合酶、重组聚合酶或参考和重组聚合酶两者包括位置1处的甲硫氨酸残基的缺失或取代，其中编号相对于SEQ ID NO:2的氨基酸序列。
SEQ ID NO:35包括相对于SEQ ID NO:2的三个氨基酸取代，即：D423K、N487R以及H281M，其中编号相对于SEQ ID NO:2的氨基酸序列。此序列为本文所提供的说明性Bst DNA聚合酶的碱基序列。因而，本文所提供的非天然存在的Bst DNA聚合酶的示例性实施例与SEQ ID NO:35或其片段具有至少75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％序列一致性，展现聚合酶活性，且包括(a)一个或多个选自由以下组成的群组的氨基酸取代：E30K、G209Q、E220H或E220T、N234K、P236I或P236R、E245R、L252R、S260K、D264K或D264M、E267M或E267K或E267R、E277T、T324R、E325R、A344Y、E442R或E442Y、E456R、H473G、D480L、N485R、A492K、E493G或E493R、M495C、N517C或N517K、E522C和H528T；或(b)两个或更多个选自以下的氨基酸取代：E30K、G209Q、E220H、E220K或E220T、N234K或N234R、P236I或P236R、V241K、E245R、V251R、L252R、S260K、D264K或D264M、E267M或E267K或E267R、E277T、E294K、T324R、E325R、A344Y、E442R或E442Y、E456R、H473G、D480L或D480R、N485R、A492K、E493G或E493R、M495C、N517C或N517K、E522C和H528T。当在合成测序反应中使用时，相比于平均系统误差率，突变(例如重组)DNA聚合酶可产生降低的平均系统误差率，或当在合成测序反应中使用时，相比于SEQ ID NO:35的突变Bst DNA聚合酶产生改进的准确度。聚合酶在说明性实例中具有改进的特性的合成测序反应为释放和检测氢离子的测序反应。
在一些实施例中，突变Bst DNA聚合酶中的任一种的本文所提供的生物活性片段可包括DNA结合域的任何部分或经修饰的聚合酶的催化域的任何部分。在一些实施例中，生物活性片段可任选地包括本文所提供的突变DNA聚合酶中的任一种的DNA结合或催化域的任何25、50、75、100、150或更多个连续氨基酸残基。在一些实施例中，经修饰的聚合酶的生物活性片段可包括与本公开涵盖的聚合酶中的任何一个或多个(在说明性实施例中，SEQID NO:119或SEQ ID NO:121)具有至少80％、85％、90％、95％、98％或99％一致性的催化域或DNA结合域的至少25个连续氨基酸残基。
在一些实施例中，本文提供包括SEQ ID NO:16的重组和/或突变聚合酶或其片段的组合物，其具有聚合酶活性且具有25、50、75、100、150、200、250、300、400、500、600、700、750、800、850、860、870、871、872、873、874或更多个SEQ ID NO:16的连续氨基酸残基，其中聚合酶或其片段包括至少一个选自以下的氨基酸取代：V536K、G504Q、N529K、N529R、P531I、P531R、L547R、E515H、E515K、E515T、S555K、T619R、E562M、E562K、E562R、E572T、E589K、E751R、E788G、E788R、E737R、E737Y、M790C、E620R、A787K、D775L、D775R、A639Y、E540R、E325K、N812C、N812K、V546R、N780R、E817C、D559K、D559M、H823T和H768G(此类突变在本文中总称为全长聚合酶的“有利突变”)，其中编号相对于SEQ ID NO:16。在说明性实施例中，重组和/或突变聚合酶包括H341R+E741Q+H867R且进一步任选地包括H576M+D718K+N782R。
在一些实施例中，所述组合物包括具有聚合酶活性的SEQ ID NO:35的片段，其包括25、50、75、100、150、200或更多个SEQ ID NO:35的连续氨基酸残基，且进一步包括至少一个选自由以下组成的群组的氨基酸取代：V241K、G209Q、N234K或N234R、P236I或P236R、L252R、E220H或E220K或E220T、S260K、T324R、E267M或E267K或E267R、E277T、E294K、E456R、E493G或E493R、E442R或E442Y、M495C、E325R、A492K、D480L或D480R、A344Y、E245R、E30K、N517C或N517K、V251R、N485R、E522C、D264K或D264M、H528T和H473G，其中编号相对于SEQ IDNO:35。组合物典型地展现聚合酶活性。
在一些实施例中，重组经修饰的聚合酶由具有或包含与SEQ ID NO:35的氨基酸序列至少90％一致的氨基酸序列的聚合酶的分离变异体组成或包含所述变异体。在一些实施例中，聚合酶为包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列的Bst DNA聚合酶的变异体，其中变异体包含与SEQ ID NO:35和SEQ ID NO:35变异体至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％一致的氨基酸序列，其包括一个或多个选自由以下组成的群组的氨基酸取代：E30K、G209Q、E220H、E220K或E220T、N234K或N234R、P236I或P236R、V241K、E245R、V251R、L252R、S260K、D264K或D264M、E267M或E267K或E267R、E277T、E294K、T324R、E325R、A344Y、E442R或E442Y、E456R、H473G、D480L或D480R、N485R、A492K、E493G或E493R、M495C、N517C或N517K、E522C和H528T，其中编号相对于SEQ ID NO:1。
在一些实施例中，参考聚合酶为具有或包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列的BstDNA聚合酶，且相对于参考聚合酶，重组聚合酶进一步包括一个或多个氨基酸修饰(例如氨基酸取代、缺失、添加或化学修饰)。在一些实施例中，参考聚合酶、重组聚合酶或参考和重组聚合酶两者包括位置1处的甲硫氨酸残基的缺失或取代，其中编号相对于SEQ ID NO:2的氨基酸序列。
在一些实施例中，本文提供一种重组聚合酶，其包括Bst DNA聚合酶的分离变异体，所述DNA聚合酶包含选自由SEQ ID NO:31和SEQ ID NO:35组成的群组的氨基酸序列且进一步包括一个或多个氨基酸突变。任选地，相对于SEQ ID NO:31和SEQ ID NO:35的氨基酸序列，重组聚合酶包括一个、两个、三个、四个或更多个氨基酸取代。
重组聚合酶可进一步包括选自由以下组成的群组的任何一个或多个氨基酸突变：H46R、C93R、Q238C、H273R、H281A、E446Q、H473R、Y477F、H528A、C550Q、H572R、E220K、N234R、A263K、D264A、D264R、H273N、H281M、D423K、D480R、N485K、N487R、E493R、H528F以及H528S，其中编号相对于SEQ ID NO:1的氨基酸序列。重组聚合酶具有相对于参考聚合酶降低的缓冲能力。不受任何操作特定理论限制，可观测到，前述突变中的一种或多种可相对于未经修饰的聚合酶改变，例如提高或降低经修饰的聚合酶的缓冲能力。因此，此类突变可被称作“缓冲”突变。
在一些实施例中，此类缓冲能力提高或降低可增加基于离子的测序反应中观测到的信号。关于此类突变和其对聚合酶的缓冲能力的可能的作用的其它信息可见于例如2010年2月26日提交的美国临时申请第60/308,863号、2011年2月25日提交的美国专利申请序列号13/035,081、2011年2月25日提交的序列号13/035,177、2011年2月28日提交的序列号13/036,526以及2011年2月25日提交的序列号13/036,623中以及2011年2月25日提交的国际PCT申请第PCT/US2011/026219号、2011年2月25日提交的第PCT/US2011/026228号、2011年2月28日提交的第PCT/US2011/026450号以及2011年2月28日提交的第PCT/US2011/026468号；所有前述申请都以全文引用的方式并入在此。
在一些实施例中，参考聚合酶、重组聚合酶或参考和重组聚合酶两者可进一步包括位置1处的甲硫氨酸残基的缺失或位置1处的甲硫氨酸残基被任何其它氨基酸残基取代，其中编号相对于SEQ ID NO:1的氨基酸序列。任选地，参考聚合酶、重组聚合酶或参考和重组聚合酶两者可进一步包括一个或多个降低或消除核酸外切酶活性的氨基酸突变。可降低或消除聚合酶的核酸外切酶活性的一些示例性突变进一步描述于本文中。
在一些实施例中，参考聚合酶具有或包含SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:36或SEQ ID NO:37的氨基酸序列且所述重组聚合酶具有或包含相比于参考聚合酶进一步包括一个或多个氨基酸突变的参考聚合酶的氨基酸序列。在一些实施例中，重组聚合酶包含与参考聚合酶的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％一致的氨基酸序列。在一些实施例中，重组聚合酶进一步包括选自由以下组成的群组的任何一个或多个位置处的一个或多个氨基酸取代：46、93、220、234、238、263、264、273、281、423、446、473、477、480、485、487、493、528、550和572，其中编号相对于SEQ ID NO:1的氨基酸序列。在一些实施例中，相对于具有SEQID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:35或SEQ IDNO:37的氨基酸序列的相应的参考聚合酶，前述氨基酸取代中的一个或多个可改变(例如提高或降低)经修饰的聚合酶的缓冲能力。因此，此类突变可被称作“缓冲”突变。在一些实施例中，此类缓冲能力提高或降低可增加基于离子的测序反应中观测到的信号。在一些实施例中，氨基酸取代包括用任何其它氨基酸残基(包括天然存在和非天然的氨基酸残基)取代指定位置处的现有氨基酸残基。在一些实施例中，氨基酸取代为保守性取代；替代地，氨基酸取代可为非保守性取代。在一些实施例中，参考聚合酶、重组聚合酶或参考和重组聚合酶两者可进一步包括位置1处的甲硫氨酸残基的缺失或位置1处的甲硫氨酸残基被任何其它氨基酸残基取代，其中编号相对于SEQ ID NO:1的氨基酸序列。在一些实施例中，重组聚合酶展现选自由以下组成的群组的任何一个或多个参数相对于参考聚合酶的改变：平均阅读长度、准确度、总测序通量、链偏差、降低的系统误差、最低阅读长度、在较高离子强度溶液中表现增强、改进的持续合成能力、聚合酶链反应中的性能、乳液聚合酶链反应中的性能、缓冲能力、解离速率、解离时间常数、AQ20、100Q17值和200Q17值。任选地，通过比较基于离子的测序反应中参考和重组聚合酶的性能来观测变化。任选地，参考聚合酶、经修饰的聚合酶或参考和经修饰的聚合酶两者可进一步包括降低或消除核酸外切酶活性的一个或多个氨基酸突变。
在一些实施例中，相对于相应未经修饰的聚合酶或参考聚合酶，包括这些突变中的一种或多种的重组聚合酶展现对核酸模板改变(例如提高或降低)的结合亲和力。在一些实施例中，相对于未经修饰的聚合酶或参考聚合酶，重组聚合酶具有改变(例如提高或降低)的从核酸模板解离的速率(“解离速率”)。在一些实施例中，相对于参考聚合酶，重组聚合酶展现改变(例如提高或降低)的阅读长度或改变的平均无误差阅读长度或改变(例如提高或降低)的观测到的100Q17或200Q17值。在一些实施例中，重组聚合酶展现以下动力学参数中的任何一个或多个相对于参考聚合酶的改变：平均阅读长度、最低阅读长度、在较高离子强度溶液中表现增强、改进的持续合成能力、聚合酶链反应中的性能、乳液聚合酶链反应中的性能、解离时间常数、解离速率、AQ20、100Q17值和200Q17值。任选地，通过比较基于离子的测序反应中参考和重组聚合酶的性能来观测变化。在一些实施例中，氨基酸取代包括用任何其它氨基酸残基(包括天然存在和非天然的氨基酸残基)取代指定位置处的现有氨基酸残基。在一些实施例中，氨基酸取代为保守性取代；替代地，氨基酸取代可为非保守性取代。在一些实施例中，参考聚合酶、重组聚合酶或参考和重组聚合酶两者可进一步包括位置1处的甲硫氨酸残基的缺失或位置1处的甲硫氨酸残基被任何其它氨基酸残基取代，其中编号相对于SEQ ID NO:1的氨基酸序列。在一些实施例中，重组聚合酶展现选自由以下组成的群组的任何一个或多个参数相对于参考聚合酶的改变：平均阅读长度、最低阅读长度、在较高离子强度溶液中表现增强、改进的持续合成能力、聚合酶链反应中的性能、乳液聚合酶链反应中的性能、缓冲能力、解离速率、100Q17值、AQ20和200Q17值。任选地，通过比较基于离子的测序反应中参考和重组聚合酶的性能来观测变化。任选地，参考聚合酶、重组聚合酶或参考和重组聚合酶两者可进一步包括一个或多个降低或消除核酸外切酶活性的氨基酸突变。
在一些实施例中，参考聚合酶具有或包含SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:35、SEQ IDNO:119的氨基酸序列，且包括一个或多个选自由以下组成的群组的氨基酸取代：E30K、G209Q、E220H、E220K或E220T、N234K或N234R、P236I或P236R、V241K、E245R、V251R、L252R、S260K、D264K或D264M、E267M或E267K或E267R、E277T、E294K、T324R、E325R、A344Y、E442R或E442Y、E456R、H473G、D480L或D480R、N485R、A492K、E493G或E493R、M495C、N517C或N517K、E522C和H528T，且所述重组聚合酶具有或包含参考聚合酶的氨基酸序列且进一步包括至少一个相对于参考聚合酶的氨基酸取代。在一些实施例中，重组聚合酶包含与参考聚合酶的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％一致的氨基酸序列。在一些实施例中，重组聚合酶进一步包括选自由以下组成的群组处的任何一个或多个位置处的氨基酸取代：31、46、77、93、113、114、130、144、212、220、234、238、241、251、252、263、264、272、273、280、281、294、299、303、331、325、335、336、354、370、409、416、418、420、423、425、428、429、446、448、457、462、473、477、480、485、487、488、493、495、528、533、550、572、577和579，其中编号相对于SEQ ID NO:1的氨基酸序列。在一些实施例中，氨基酸取代包括用任何其它氨基酸残基(包括天然存在和非天然的氨基酸残基)取代指定位置处的现有氨基酸残基。在一些实施例中，氨基酸取代为保守性取代；替代地，氨基酸取代可为非保守性取代。在一些实施例中，参考聚合酶、重组聚合酶或参考和重组聚合酶两者可进一步包括位置1处的甲硫氨酸残基的缺失或位置1处的甲硫氨酸残基被任何其它氨基酸残基取代，其中编号相对于SEQ ID NO:1的氨基酸序列。在一些实施例中，重组聚合酶展现选自由以下组成的群组的任何一个或多个参数相对于参考聚合酶的改变：对核酸模板的结合亲和力、缓冲能力、平均阅读长度、最低阅读长度、在较高离子强度溶液中表现增强、改进的持续合成能力、聚合酶链反应中的性能、乳液聚合酶链反应中的性能、AQ20、解离时间常数、解离速率、100Q17值和200Q17值。任选地，通过比较基于离子的测序反应中参考和重组聚合酶的性能来观测变化。任选地，参考聚合酶、重组聚合酶或参考和重组聚合酶两者可进一步包括一个或多个降低或消除核酸外切酶活性的氨基酸突变。
不受任何特定操作理论限制，可观测到，在一些实施例中，包括这些突变中的一个或多个的重组聚合酶展现相对于未经修饰的聚合酶改变(例如提高或降低)的对核酸模板的结合亲和力或相对于未经修饰的聚合酶改变(例如提高或降低)的从核酸模板解离的速率(“解离速率”)。在一些实施例中，重组聚合酶展现相对于未经修饰的聚合酶改变(例如提高或降低)的缓冲能力。在一些实施例中，相对于参考聚合酶，重组聚合酶展现改变(例如提高或降低)的阅读长度或改变的平均无误差阅读长度或改变的解离时间常数或改变(例如提高或降低)的观测到的100Q17或200Q17值。在一些实施例中，相对于参考聚合酶，重组聚合酶展现改变(例如提高或降低)的阅读长度或改变的平均无误差阅读长度或改变(例如提高或降低)的观测到的100Q17或200Q17值。在一些实施例中，重组聚合酶展现选自由以下组成的群组的任何一个或多个参数相对于参考聚合酶的改变：缓冲能力、解离速率、平均阅读长度、最低阅读长度、原始准确度、总测序通量、系统误差、链偏差、在较高离子强度溶液中表现增强、改进的持续合成能力、聚合酶链反应中的性能、乳液聚合酶链反应中的性能、AQ20、100Q17值和200Q17值。任选地，通过比较基于离子的测序反应中参考和重组聚合酶的性能来观测变化。在一些实施例中，参考聚合酶、重组聚合酶或参考和重组聚合酶两者可进一步包括位置1处的甲硫氨酸残基的缺失或位置1处的甲硫氨酸残基被任何其它氨基酸残基取代，其中编号相对于SEQ ID NO:1的氨基酸序列。任选地，参考聚合酶、重组聚合酶或参考和重组聚合酶两者可进一步包括一个或多个降低或消除核酸外切酶活性的氨基酸突变。
在一些实施例中，重组聚合酶包含与参考聚合酶的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％一致的氨基酸序列。在一些实施例中，重组聚合酶进一步包括选自由以下组成的群组的任何一个或多个位置处的氨基酸取代：46、93、238、252、273、281、446、473、477、528、550和572，以及一个或多个选自由以下组成的群组的氨基酸取代：31、77、113、114、130、144、212、220、234、241、251、263、264、272、280、294、299、303、331、325、335、336、354、370、409、416、418、420、423、425、428、429、448、457、462、480、485、487、488、493、495、533、577和579，其中编号相对于SEQ ID NO:1的氨基酸序列。在一些实施例中，氨基酸取代包括用任何其它氨基酸残基(包括天然存在和非天然的氨基酸残基)取代指定位置处的现有氨基酸残基。在一些实施例中，氨基酸取代为保守性取代；替代地，氨基酸取代可为非保守性取代。在一些实施例中，参考聚合酶、重组聚合酶或参考和重组聚合酶两者可进一步包括位置1处的甲硫氨酸残基的缺失或位置1处的甲硫氨酸残基被任何其它氨基酸残基取代，其中编号相对于SEQ ID NO:1的氨基酸序列。在一些实施例中，重组聚合酶展现选自由以下组成的群组的任何一个或多个参数相对于参考聚合酶的改变：对核酸模板的结合亲和力、缓冲能力、平均阅读长度、最低阅读长度、原始准确度、总测序通量、系统误差、链偏差、在较高离子强度溶液中表现增强、改进的持续合成能力、聚合酶链反应中的性能、乳液聚合酶链反应中的性能、AQ20、解离时间常数、解离速率、100Q17值和200Q17值。任选地，通过比较基于离子的测序反应中参考和重组聚合酶的性能来观测变化。任选地，参考聚合酶、重组聚合酶或参考和重组聚合酶两者可进一步包括一个或多个降低或消除核酸外切酶活性的氨基酸突变。
在一些实施例中，重组聚合酶包含与SEQ ID NO:38-78或SEQ ID NO:120-122中的任一个的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％一致的氨基酸序列。
在一些实施例中，重组聚合酶包含与SEQ ID NO:79-119中的任一个的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％一致的氨基酸序列。
在一些实施例中，重组聚合酶中的一个或多个突变可包括至少一个氨基酸取代。在一些实施例中，至少一个氨基酸取代可任选地在选自由以下组成的群组的任何一个或多个位置处出现：46、220、234、252、263、264、273、281、423、446、473、477、480、485、487、493、528和572，其中编号相对于SEQ ID NO:1的氨基酸序列。在一些实施例中，重组聚合酶包括选自此群组的位置处出现的至少两个、三个、四个、五个或更多个氨基酸取代。不希望受任何特定活动理论束缚，可观测到，在一些实施例中，相对于相应的未经修饰的聚合酶或相对于参考聚合酶，此类位置处的氨基酸取代可改变(例如提高或降低)经修饰的聚合酶的缓冲能力。因此，此类突变可被称作“缓冲”突变。在一些实施例中，此类缓冲能力提高或降低可增加基于离子的测序反应中观测到的信号。
在一些实施例中，重组聚合酶中的一个或多个突变可包括至少一个氨基酸取代。至少一个氨基酸取代可任选地在选自由以下组成的群组的任何一个或多个位置处出现：31、77、113、114、130、144、212、220、234、241、251、264、272、280、294、299、303、331、325、335、336、354、370、409、416、418、420、423、425、428、429、448、457、462、480、485、487、488、493、495、533、577和579，其中编号相对于SEQ ID NO:1的氨基酸序列。在一些实施例中，至少一个氨基酸取代可任选地在选自由以下组成的群组的任何一个或多个位置处出现：536、504、529、531、515、555、619、562、572、589、751、788、737、790、620、787、775、639、540、325、812、546、780、817、559、823、768和547，其中编号相对于SEQ ID NO:31的氨基酸序列。在一些实施例中，至少一个氨基酸取代可任选地在选自由以下组成的群组的任何一个或多个位置处出现：241、209、234、236、220、260、324、267、277、294、456、493、442、495、325、492、480、344、245、30、517、251、485、522、264、528、473和252，其中编号相对于SEQ ID NO:35的氨基酸序列。在一些实施例中，重组聚合酶包括选自此群组的位置处出现的至少两个、三个、四个、五个或更多个氨基酸取代。不受任何特定操作理论限制，可观测到，在一些实施例中，包括此类氨基酸取代中的任一个的重组聚合酶展现相对于未经修饰的聚合酶改变(例如提高或降低)的对核酸模板的结合亲和力，或相对于相应未经修饰的聚合酶或相对于参考聚合酶改变(例如提高或降低)的从核酸模板解离的速率(“解离速率”)。在一些实施例中，相对于参考聚合酶，重组聚合酶展现改变(例如提高或降低)的阅读长度或改变(例如提高或降低)的平均无误差阅读长度或改变(例如提高或降低)的解离时间常数或改变(例如提高或降低)的观测到的100Q17或200Q17值。在一些实施例中，重组聚合酶展现选自由以下组成的群组的任何一个或多个特性相对于参考聚合酶的改变(例如提高或降低)：DNA结合亲和力、解离速率、100Q17值和200Q17值。任选地，通过比较基于离子的测序反应中参考和重组聚合酶的特性来观测变化。
在一些实施例中，重组聚合酶中的一个或多个突变可包括至少一个氨基酸取代。至少一个氨基酸取代可任选地在选自由以下组成的群组的任何一个或多个位置处出现：31、46、77、113、114、130、144、212、220、234、241、251、263、264、272、273、280、281、294、299、303、331、325、335、336、354、370、409、416、418、420、423、425、428、429、446、448、457、462、473、477、480、485、487、488、493、495、528、533、572、577和579，其中编号相对于SEQ ID NO:1的氨基酸序列。在一些实施例中，重组聚合酶包括选自此群组的位置处出现的至少两个、三个、四个、五个或更多个氨基酸取代。在一些实施例中，重组聚合酶包括SEQ ID NO:1的氨基酸序列，或包括具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的聚合酶的生物活性片段的氨基酸序列，或包括与SEQ ID NO:1的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％一致的氨基酸序列，且进一步包括选自由以下组成的群组的任何一个或多个位置处的至少一个氨基酸取代：46、273、281、446、473、477、528和572，以及选自由以下组成的群组的任何一个或多个位置处的至少一个氨基酸取代：31、77、113、114、130、144、212、220、234、241、251、264、272、280、294、299、303、331、325、335、336、354、370、409、416、418、420、423、425、428、429、448、457、462、480、485、487、488、493、495、533、577和579，其中编号相对于SEQ ID NO:1的氨基酸序列，在一些实施例中，重组聚合酶包括选自氨基酸取代的这两个群组中的每一个的位置处出现的至少两个、三个、四个、五个或更多个氨基酸取代。
在一些实施例中，重组聚合酶具有相对于参考聚合酶改变(例如提高或降低)的对核酸模板的结合亲和力。在一些实施例中，重组聚合酶具有相对于参考聚合酶改变(例如提高或降低)的从核酸模板解离的速率(“解离速率”)。在一些实施例中，相对于参考聚合酶，重组聚合酶展现改变(例如提高或降低)的阅读长度或改变(例如提高或降低)的平均无误差阅读长度或改变(例如提高或降低)的观测到的100Q17或200Q17值。在一些实施例中，重组聚合酶展现以下特性中的任何一个或多个相对于参考聚合酶的改变(例如提高或降低)：对核酸模板的结合亲和力、解离时间常数、解离速率、100Q17值和200Q17值。在一些实施例中，相对于相应的未经修饰的聚合酶或参考聚合酶，改变的特性提高或降低了至少10％、20％、30％、40％、50％、75％、90％、100％、200％、300％、500％、750％、1000％、3000％或更大。任选地，通过比较基于离子的测序反应中参考和重组聚合酶的特性来观测变化。
SEQ ID NO:16包含天然存在的(野生型)Bst DNA聚合酶的氨基酸序列。
在一些实施例中，参考聚合酶为具有或包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列的BstDNA聚合酶，且重组聚合酶为参考聚合酶的突变体或变异体且进一步包括一个或多个相对于参考聚合酶的氨基酸突变。在一些实施例中，重组聚合酶包含与参考聚合酶的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％一致的氨基酸序列。任选地，存在于重组聚合酶中的相对于参考聚合酶的一个或多个氨基酸取代可包括至少一个保守性氨基酸取代。
在一些实施例中，经修饰的聚合酶由具有或包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列的Bst DNA聚合酶的分离的变异体组成或包含所述分离的变异体。
SEQ ID NO:31含有相比于SEQ ID NO:16的三个氨基酸取代，即：D718K、N782R以及H576M，其中编号相对于SEQ ID NO:16的氨基酸序列。
在一些实施例中，参考聚合酶、经修饰的聚合酶或参考和经修饰的聚合酶两者由具有或包含与SEQ ID NO:31的氨基酸序列至少90％一致的氨基酸序列的聚合酶的分离的变异体组成或包含所述分离的变异体。在一些实施例中，经修饰的聚合酶为包含SEQ IDNO:31的氨基酸序列的Bst DNA聚合酶的变异体，其中所述变异体包含与SEQ ID NO:31至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％一致的氨基酸序列。
在一些实施例中，参考聚合酶为具有或包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列的BstDNA聚合酶，且经修饰的聚合酶进一步包括一个或多个相对于参考聚合酶的氨基酸修饰(例如氨基酸取代、缺失、添加或化学修饰)。在一些实施例中，参考聚合酶、经修饰的聚合酶或参考和经修饰的聚合酶两者包括位置1处的甲硫氨酸残基的缺失或取代，其中编号相对于SEQ ID NO:31的氨基酸序列。
在一些实施例中，经修饰的聚合酶可包括具有或包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列的聚合酶的任何生物活性片段的氨基酸序列。在一些实施例中，参考聚合酶和/或经修饰的聚合酶可包括具有或包含与SEQ ID NO:31的氨基酸序列至少90％一致的氨基酸序列的聚合酶的任何生物活性片段的氨基酸序列。
SEQ ID NO:34含有相对于SEQ ID NO:2的五个氨基酸取代，即N487R、H281M、D264A、H273N以及E493R，其中编号相对于SEQ ID NO:2的氨基酸序列。
SEQ ID NO:35含有相比于SEQ ID NO:2的三个氨基酸取代，即N487R、H281M以及D423K，其中编号相对于SEQ ID NO:2的氨基酸序列。
在一些实施例中，经修饰的聚合酶包含含有与SEQ ID NO:2或其生物活性片段具有至少80％同源性的氨基酸序列的重组聚合酶，其中重组聚合酶包含具有在对应于选自由以下组成的群组的位置的位置处的一个或多个氨基酸取代的家族A DNA聚合酶：N487、N485、E493、A263、D264、H528、H273、D423、D480以及H281，其中编号相对于SEQ ID NO:2，且其中重组聚合酶相比于SEQ ID NO:2展现降低的解离速率常数。在一些实施例中，重组聚合酶包括在对应于选自由以下组成的群组的位置的位置处的一个或多个氨基酸取代：N487R、N485K、E493R、A263K、D264A、D264R、H528S、H528F、H273N、D423K、D480R以及H281M，其中编号相对于SEQ ID NO:2。
在一些实施例中，参考聚合酶、经修饰的聚合酶或参考和经修饰的聚合酶两者可进一步包括位置1处的甲硫氨酸残基缺失或位置1处的甲硫氨酸残基被任何其它氨基酸残基取代，其中编号相对于SEQ ID NO:16的氨基酸序列。任选地，参考聚合酶、经修饰的聚合酶或参考和经修饰的聚合酶两者可进一步包括降低或消除核酸外切酶活性的一个或多个氨基酸突变。可降低或消除聚合酶的核酸外切酶活性的一些示例性突变进一步描述于本文中。在一些实施例中，参考聚合酶具有或包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列，且经修饰的聚合酶具有或包含参考聚合酶的氨基酸序列，且进一步包括至少一个相对于参考聚合酶的氨基酸取代。在一些实施例中，经修饰的聚合酶包含与参考聚合酶的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％一致的氨基酸序列。在一些实施例中，经修饰的聚合酶进一步包括选自由以下组成的群组的任何一个或多个氨基酸突变：N326R、N326K、D372K、D372H、D408N、D409R、D425A、D425H、D439M、D439K、L507A、E515K、N529R、N529K、V536K、V546K、A558K、D559A、D559R、D559Q、D559S、Y567R、H568N、L575R、H576M、E589S、E589F、E589G、V594K、V594H、V594F、D598R、I626Q、L630T、E631P、I649W、I649F、I665A、Q704R、G711K、V713M、V713I、G715K、D718S、D718K、D718N、D718R、D718T、D718G、D718I、D718K、G720R、Q723W、N724R、N724K、F743K、N752T、A757T、D775R、D775F、D775H、D775A、D775S、D775N、D775Q、N780W、N780Y、N780K、N782H、N782W、N782F、N782I、E782Q、V783R、E788R、E788Q、M790Q、H823S、H823F V828I、W872Y以及D874F，其中编号相对于SEQ ID NO:16的氨基酸序列。不受任何特定操作理论限制，可观测到，在一些实施例中，包括这些突变中的一个或多个的经修饰的聚合酶展现相对于未经修饰的聚合酶改变(例如提高或降低)的从核酸模板解离的速率(“解离速率”)。在一些实施例中，相对于参考聚合酶，经修饰的聚合酶展现改变(例如提高或降低)的解离时间常数。在一些实施例中，相对于参考聚合酶，经修饰的聚合酶展现改变(例如提高或降低)的阅读长度或改变的平均无误差阅读长度或改变(例如提高或降低)的观测到的100Q17或200Q17值。在一些实施例中，经修饰的聚合酶展现以下动力学参数中的任何一个或多个相对于参考聚合酶的改变：平均阅读长度、最低阅读长度、原始准确度、链偏差、系统误差、总测序通量、在较高离子强度溶液中表现增强、改进的持续合成能力、聚合酶链反应中的性能、乳液聚合酶链反应中的性能、解离时间常数、解离速率、AQ20、100Q17值和200Q17值。任选地，通过比较基于离子的测序反应中参考和经修饰的聚合酶的性能来观测变化。在一些实施例中，参考聚合酶、经修饰的聚合酶或参考和经修饰的聚合酶两者可进一步包括位置1处的甲硫氨酸残基缺失或位置1处的甲硫氨酸残基被任何其它氨基酸残基取代，其中编号相对于SEQ ID NO:16的氨基酸序列。任选地，参考聚合酶、经修饰的聚合酶或参考和经修饰的聚合酶两者可进一步包括降低或消除核酸外切酶活性的一个或多个氨基酸突变。
在一些实施例中，参考聚合酶具有或包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列，且经修饰的聚合酶具有或包含参考聚合酶的氨基酸序列，且进一步包括至少一个相对于参考聚合酶的氨基酸取代。在一些实施例中，经修饰的聚合酶包含与参考聚合酶的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％一致的氨基酸序列。在一些实施例中，经修饰的聚合酶进一步包括选自由以下组成的群组的任何一个或多个位置处的氨基酸取代：326、341、372、388、408、409、425、439、507、515、529、533、536、546、547、558、559、567、568、575、576、589、594、598、626、630、631、649、665、704、711、713、715、718、720、723、724、741、743、752、757、768、772、775、780、782、783、788、790、823、828、845、867、872和874，其中编号相对于SEQ ID NO:16的氨基酸序列。
在一些实施例中，氨基酸取代包括用任何其它氨基酸残基(包括天然存在和非天然的氨基酸残基)取代指定位置处的现有氨基酸残基。在一些实施例中，氨基酸取代为保守性取代；替代地，氨基酸取代可为非保守性取代。在一些实施例中，参考聚合酶、经修饰的聚合酶或参考和经修饰的聚合酶两者可进一步包括位置1处的甲硫氨酸残基缺失或在位置1处的甲硫氨酸残基被任何其它氨基酸残基取代，其中编号相对于SEQ ID NO:16的氨基酸序列。在一些实施例中，相对于参考聚合酶，经修饰的聚合酶展现任何一个或多个选自由以下组成的群组的参数的变化：平均阅读长度、最小阅读长度、原始准确度、链偏差、系统误差、总测序通量、在更高离子强度溶液中表现增强、改进的持续合成能力、聚合酶链反应中的性能、乳液聚合酶链反应中的性能、AQ20、缓冲能力、解离速率、100Q17值以及200Q17值。任选地，通过比较基于离子的测序反应中参考和经修饰的聚合酶的性能来观测变化。任选地，参考聚合酶、经修饰的聚合酶或参考和经修饰的聚合酶两者可进一步包括降低或消除核酸外切酶活性的一个或多个氨基酸突变。
在一些实施例中，参考聚合酶具有或包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列，且经修饰的聚合酶具有或包含参考聚合酶的氨基酸序列，且进一步包括至少一个相对于参考聚合酶的氨基酸取代。在一些实施例中，经修饰的聚合酶包含与参考聚合酶的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％一致的氨基酸序列。至少一个氨基酸取代可任选地在选自由以下组成的群组的任何一个或多个位置处存在：341、388、533、547、568、576、741、768、772、823、845以及867。在一些实施例中，经修饰的聚合酶可进一步包括选自由以下组成的群组的一个或多个位置处的至少一个氨基酸取代：326、372、408、409、425、439、507、515、529、536、546、559、567、575、589、594、598、626、630、631、649、665、704、711、713、715、718、720、723、724、743、752、757、775、780、782、783、788、790、828、872和874，其中编号相对于SEQ ID NO:16的氨基酸序列。在一些实施例中，氨基酸取代包括用任何其它氨基酸残基(包括天然存在和非天然的氨基酸残基)取代指定位置处的现有氨基酸残基。在一些实施例中，氨基酸取代为保守性取代；替代地，氨基酸取代可为非保守性取代。在一些实施例中，参考聚合酶、经修饰的聚合酶或参考和经修饰的聚合酶两者可进一步包括位置1处的甲硫氨酸残基缺失或在位置1处的甲硫氨酸残基被任何其它氨基酸残基取代，其中编号相对于SEQID NO:16的氨基酸序列。在一些实施例中，相对于参考聚合酶，经修饰的聚合酶展现任何一个或多个选自由以下组成的群组的参数的变化：缓冲能力、平均阅读长度、最小阅读长度、原始准确度、链偏差、系统误差、总测序通量、在更高离子强度溶液中表现增强、改进的持续合成能力、聚合酶链反应中的性能、乳液聚合酶链反应中的性能、解离时间常数、解离速率、AQ20、100Q17值以及200Q17值。任选地，通过比较基于离子的测序反应中参考和经修饰的聚合酶的性能来观测变化。任选地，参考聚合酶、经修饰的聚合酶或参考和经修饰的聚合酶两者可进一步包括降低或消除核酸外切酶活性的一个或多个氨基酸突变。
在一些实施例中，重组聚合酶包括与SEQ ID NO:31或其片段至少80％一致性，展现聚合酶活性，且进一步包括选自由以下组成的群组的一个或多个氨基酸取代：E325K、G504Q、N529K或N529R、P531I或P531R、V536K、V546R、L547R、E515H或E515K或E515T、E540R、S555K、D559K或D559M、E562M或E562K或E562R、E572T、E589K、T619R、E620R、A639Y、E751R、E737R、E737Y、H768G、M790C、A787K、D775L、D775R、N780R、E788G或E788R、N812C或N812K、E817C和H823T，其中编号相对于SEQ ID NO:31。
在一些实施例中，氨基酸取代包括用任何其它氨基酸残基(包括天然存在和非天然的氨基酸残基)取代指定位置处的现有氨基酸残基。在一些实施例中，氨基酸取代包括保守性取代；替代地，氨基酸取代可包括非保守性取代。在一些实施例中，参考聚合酶、重组聚合酶或参考和重组聚合酶两者可进一步包括位置1处的甲硫氨酸残基的缺失或位置1处的甲硫氨酸残基被任何其它氨基酸残基取代，其中编号相对于SEQ ID NO:31的氨基酸序列。在一些实施例中，重组聚合酶展现选自由以下组成的群组的任何一个或多个测序参数相比于参考聚合酶的改进：平均阅读长度、准确度、链偏差、系统误差、总测序通量和改进的持续合成能力。任选地，通过比较基于离子的测序反应中的参考和重组聚合酶的性能观测到一个或多个测序参数的改进。任选地，参考聚合酶、重组聚合酶或参考和重组聚合酶两者可进一步包括一个或多个降低或消除核酸外切酶活性的氨基酸取代。
在一些实施例中，重组聚合酶包括与SEQ ID NO:35或其片段至少80％一致性，展现聚合酶活性，且进一步包括一个或多个选自由以下组成的群组的氨基酸取代：E30K、G209Q、E220H或E220T、N234K、P236I或P236R、E245R、L252R、S260K、D264K或D264M、E267M或E267K或E267R、E277T、T324R、E325R、A344Y、E442R或E442Y、E456R、H473G、D480L、N485R、A492K、E493G或E493R、M495C、N517C或N517K、E522C和H528T，其中编号相对于SEQ ID NO:35。
在一些实施例中，重组聚合酶包括与SEQ ID NO:35或其片段至少80％一致性，展现聚合酶活性，且进一步包括两个或更多个选自由以下组成的群组的氨基酸取代：E30K、G209Q、E220H、E220K或E220T、N234K或N234R、P236I或P236R、V241K、E245R、V251R、L252R、S260K、D264K或D264M、E267M或E267K或E267R、E277T、E294K、T324R、E325R、A344Y、E442R或E442Y、E456R、H473G、D480L或D480R、N485R、A492K、E493G或E493R、M495C、N517C或N517K、E522C和H528T，其中编号相对于SEQ ID NO:35。
在一些实施例中，氨基酸取代包括用任何其它氨基酸残基(包括天然存在和非天然的氨基酸残基)取代指定位置处的现有氨基酸残基。在一些实施例中，氨基酸取代包括保守性取代；替代地，氨基酸取代可包括非保守性取代。在一些实施例中，参考聚合酶、重组聚合酶或参考和重组聚合酶两者可进一步包括位置1处的甲硫氨酸残基的缺失或位置1处的甲硫氨酸残基被任何其它氨基酸残基取代，其中编号相对于SEQ ID NO:35的氨基酸序列。在一些实施例中，重组聚合酶展现选自由以下组成的群组的任何一个或多个测序参数相比于参考聚合酶的改进：平均阅读长度、准确度、链偏差、系统误差、总测序通量和改进的持续合成能力。任选地，通过比较基于离子的测序反应中的参考和重组聚合酶的性能观测到一个或多个测序参数的改进。任选地，参考聚合酶、重组聚合酶或参考和重组聚合酶两者可进一步包括一个或多个降低或消除核酸外切酶活性的氨基酸取代。
在一些实施例中，经修饰的聚合酶包含与参考聚合酶的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％一致的氨基酸序列。
在一些实施例中，经修饰的聚合酶具有聚合酶活性。经修饰的聚合酶或生物活性片段可具有活体内或活体外引物延伸活性。
在一些实施例中，经修饰的聚合酶中的一个或多个突变可包括至少一个氨基酸取代。至少一个氨基酸取代可任选地在选自由以下组成的群组的任何一个或多个位置处出现：341、388、533、547、568、576、741、768、772、823、845和867，其中编号相对于SEQ ID NO:16的氨基酸序列。在一些实施例中，经修饰的聚合酶包括在选自这一群组的位置处出现的至少两个、三个、四个、五个或更多个氨基酸取代。不希望受任何特定活动理论束缚，可观测到，在一些实施例中，相对于相应的未经修饰的聚合酶或相对于参考聚合酶，此类位置处的氨基酸取代可改变(例如提高或降低)经修饰的聚合酶的缓冲能力。因此，此类突变可被称作“缓冲”突变。在一些实施例中，此类缓冲能力提高或降低可增加基于离子的测序反应中观测到的信号。
在一些实施例中，经修饰的聚合酶中的一个或多个突变可包括至少一个氨基酸取代。至少一个氨基酸取代可任选地在选自由以下组成的群组的任何一个或多个位置处出现：326、372、408、409、、425、439、507、515、529、536、546、559、567、575、589、594、598、626、630、631、649、665、704、711、713、715、718、720、723、724、743、752、757、775、780、782、783、788、790、828、872和874，其中编号相对于SEQ ID NO:16的氨基酸序列。在一些实施例中，经修饰的聚合酶包括在选自这一群组的位置处出现的至少两个、三个、四个、五个或更多个氨基酸取代。不受任何特定操作理论限制，可观测到，在一些实施例中，包括此类氨基酸取代中的任一个的经修饰的聚合酶展现相对于未经修饰的聚合酶改变(例如提高或降低)的对核酸模板的结合亲和力或相对于相应未经修饰的聚合酶或相对于参考聚合酶改变(例如提高或降低)的从核酸模板解离的速率(“解离速率”)。在一些实施例中，相对于参考聚合酶，经修饰的聚合酶展现改变(例如提高或降低)的阅读长度或改变(例如提高或降低)的平均无误差阅读长度或改变(例如提高或降低)的解离时间常数或改变(例如提高或降低)的观测到的100Q17或200Q17值。在一些实施例中，经修饰的聚合酶展现选自由以下组成的群组的任何一个或多个特性相对于参考聚合酶的改变(例如提高或降低)：DNA结合亲和力、原始准确度、链偏差、系统误差、总测序通量、解离速率、100Q17值和200Q17值。任选地，通过比较基于离子的测序反应中参考和经修饰的聚合酶的特性来观测变化。
在一些实施例中，经修饰的聚合酶中的一个或多个突变可包括至少一个氨基酸取代。至少一个氨基酸取代可任选地在选自由以下组成的群组的任何一个或多个位置处出现：326、341、372、408、409、425、439、507、515、529、536、546、547、559、567、568、575、576、589、594、598、626、630、631、649、665、704、711、713、715、718、720、723、724、741、743、752、757、768、772、775、780、782、783、788、790、823、828、867、872和874，其中编号相对于SEQ IDNO:16的氨基酸序列。在一些实施例中，经修饰的聚合酶包括在选自这一群组的位置处出现的至少两个、三个、四个、五个或更多个氨基酸取代。
在一些实施例中，经修饰的聚合酶包括SEQ ID NO:16的氨基酸序列或具有SEQ IDNO:16的氨基酸序列的聚合酶的生物活性片段的氨基酸序列，且进一步包括选自由以下组成的群组的任何一个或多个位置处的至少一个氨基酸取代：341、568、576、741、768、772、823、845和867，以及选自由以下组成的群组的任何一个或多个位置处的至少一个氨基酸取代：326、372、408、409、425、439、507、515、529、536、546、559、567、575、589、594、598、626、630、631、649、665、704、711、713、715、718、720、723、724、743、752、757、775、780、782、783、788、790、828、872和874，其中编号相对于SEQ ID NO:16的氨基酸序列，在一些实施例中，经修饰的聚合酶包括选自这两个氨基酸取代群组中的每一个的位置处出现的至少两个、三个、四个、五个或更多个氨基酸取代。
在一些实施例中，经修饰的聚合酶进一步包括选自由以下组成的群组的至少一个氨基酸取代：H341A、H341R、L547R、H568A、H568R、H576A、H576R、H576M、E741Q、H768A、H768R、Y772F、H823A、H823R、H823K、H867A以及H867R，其中编号相对于SEQ ID NO:16的氨基酸序列。在一些实施例中，经修饰的聚合酶包括这些氨基酸取代中的任何两个、三个、四个、五个或更多个。
在一些实施例中，包括这些突变中的一个或多个的经修饰的聚合酶展现相对于相应未经修饰的聚合酶或参考聚合酶改变(例如提高或降低)的对核酸模板的结合亲和力。在一些实施例中，经修饰的聚合酶具有相对于未经修饰的聚合酶或参考聚合酶改变(例如提高或降低)的从核酸模板解离的速率(“解离速率”)。在一些实施例中，相对于参考聚合酶，经修饰的聚合酶展现改变(例如提高或降低)的阅读长度或提高的原始准确度或减少的链偏差或减少的系统误差或增加的总测序通量或改变的平均无误差阅读长度或改变(例如提高或降低)的观测到的100Q17或200Q17值。在一些实施例中，经修饰的聚合酶展现以下动力学参数中的任何一个或多个相对于参考聚合酶的改变：平均阅读长度、最低阅读长度、原始准确度、链偏差、系统误差、总测序通量、在较高离子强度溶液中表现增强、改进的持续合成能力、聚合酶链反应中的性能、乳液聚合酶链反应中的性能、解离时间常数、解离速率、AQ20、100Q17值和200Q17值。任选地，通过比较基于离子的测序反应中参考和经修饰的聚合酶的性能来观测变化。在一些实施例中，氨基酸取代包括用任何其它氨基酸残基(包括天然存在和非天然的氨基酸残基)取代指定位置处的现有氨基酸残基。在一些实施例中，氨基酸取代为保守性取代；替代地，氨基酸取代可为非保守性取代。在一些实施例中，参考聚合酶、经修饰的聚合酶或参考和经修饰的聚合酶两者可进一步包括位置1处的甲硫氨酸残基缺失或在位置1处的甲硫氨酸残基被任何其它氨基酸残基取代，其中编号相对于SEQ ID NO:16的氨基酸序列。在一些实施例中，经修饰的聚合酶展现选自由以下组成的群组的任何一个或多个参数相对于参考聚合酶的改变：缓冲能力、平均阅读长度、最低阅读长度、在较高离子强度溶液中表现增强、改进的持续合成能力、聚合酶链反应中的性能、乳液聚合酶链反应中的性能、解离速率、AQ20、100Q17值和200Q17值。任选地，通过比较基于离子的测序反应中参考和经修饰的聚合酶的性能来观测变化。任选地，参考聚合酶、经修饰的聚合酶或参考和经修饰的聚合酶两者可进一步包括降低或消除核酸外切酶活性的一个或多个氨基酸突变。
在一些实施例中，相对于参考聚合酶，经修饰的聚合酶具有改变(例如提高或降低)的核酸模板结合亲和性。在一些实施例中，经修饰的聚合酶具有相对于参考聚合酶改变(例如提高或降低)的从核酸模板解离的速率(“解离速率”)。在一些实施例中，相对于参考聚合酶，经修饰的聚合酶展现改变(例如提高或降低)的阅读长度或改变(例如提高或降低)的平均无误差阅读长度或改变(例如提高或降低)的观测到的100Q17或200Q17值。在一些实施例中，经修饰的聚合酶展现以下特性中的任何一个或多个相对于参考聚合酶的改变(例如提高或降低)：对核酸模板的结合亲和力、解离时间常数、解离速率、100Q17值和200Q17值。在一些实施例中，相对于相应的参考聚合酶，改变的特性提高或降低了至少10％、20％、30％、40％、50％、75％、90％、100％、200％、300％、500％、750％、1000％、3000％或更大。任选地，通过比较基于离子的测序反应中参考和经修饰的聚合酶的特性来观测变化。
任选地，参考聚合酶、经修饰的聚合酶或参考和经修饰的聚合酶两者可进一步包括降低或消除聚合酶的任何核酸外切酶活性的一个或多个氨基酸突变。在一些实施例中，参考聚合酶、经修饰的聚合酶或参考和经修饰的聚合酶两者是具有校正核酸外切酶活性的Bst DNA聚合酶。在不同实施例中，经修饰的Bst DNA聚合酶的校正核酸外切酶活性是相应的野生型蛋白质的活性的至少约40％、50％、60％、70％、80％或90％。为了保留经修饰的Bst DNA聚合酶的校正核酸外切酶活性，所属领域的技术人员将理解，应对在Exo I、Exo II以及Exo III基元内非高度保守性的氨基酸残基进行任何取代、缺失或化学修饰。
如所属领域的技术人员将容易地了解，本发明的范围不仅涵盖本文所公开的特定氨基酸和/或核苷酸序列，还涵盖例如编码具有本文所描述的功能特性的基因和/或肽的多种相关序列。举例来说，本发明的范围和精神涵盖编码本文所公开的各种聚合酶的保守性变异体的任何核苷酸和氨基酸序列。所属领域的技术人员也将显而易见，本文中氨基酸序列所公开的经修饰的聚合酶可以在无过度实验的情况下转换成相应的核苷酸序列，例如使用许多可自由获得的序列转化应用(例如“计算机操作(in-silco)”)。
表1.
SEQ ID NO:16 SEQ ID NO:1 SEQ ID NO:18 SEQ ID NO:15
E515K E220K E245 E471
N529R N234R S259R N485R
V536K V241K T266K R492K
D559K D264K E290K D513K
D718K D423K A448K A675K
D775R D480R D505R D732R
N782R N487R A512W S739W
V783R V488R V740R
E788Q E493Q E518 E745
尽管不希望受任何特定理论束缚，观测到，在四种聚合酶(全长Bst聚合酶(SEQ IDNO:16)、较大片段(581个氨基酸)Bst聚合酶(SEQ ID NO:1)、Taq DNA聚合酶(SEQ ID NO:15)和大肠杆菌Pol I的克列诺片段(SEQ ID NO:18))中每种聚合酶(表1)的九个不同氨基酸突变为可转移的(同源)。因此，有理由相信，在聚合酶中鉴别出氨基酸突变提供改变的催化特性后，可使用所属领域的普通技术人员已知的方法(如氨基酸或核苷酸序列比对)筛选氨基酸突变以确定氨基酸突变是否可转移到不同聚合酶，如不同物种、类别或聚合酶家族(如本文所展现)。在一些实施例中，可转移(或同源)氨基酸突变可包括增强如以下催化特性的氨基酸突变：增加的阅读长度、提高的原始准确度、减少的链偏差、减少的系统误差、改进的均聚物准确度、增加的总测序通量、增加的无误差阅读长度、增强的持续合成能力、提高的100Q17值、提高的200Q17值等。在一些实施例中，可转移(或同源)氨基酸突变可包括如以下降低催化特性的氨基酸突变：减少的阅读长度、减少的无误差阅读长度、降低的持续合成能力、降低的100Q17值、降低的200Q17值等。在一些实施例中，可转移(或同源)氨基酸突变可包括在DNA聚合酶家族内或之间将一个或多个氨基酸突变转移到另一种聚合酶，所述家族如DNA聚合酶家族A、DNA聚合酶家族B或DNA聚合酶家族C。熟练的技术人员将显而易见，可转移(即，同源)氨基酸突变(如存在于第一聚合酶中的氨基酸取代)可转移到同源聚合酶中的相应的氨基酸位置。举例来说，具有第一氨基酸取代的第一聚合酶与B家族DNA聚合酶、A家族DNA聚合酶或C家族DNA聚合酶的序列比对可产生同源A家族、B家族或C家族DNA聚合酶中的相应氨基酸残基的鉴别。B家族DNA聚合酶比对的实例在所属领域中是众所周知的且包括例如Hopfner等人,《美国国家科学院院刊》(1999),96:3600-3605以及Kahler和Antranikian,《细菌学(Bacteriol.)》,(2000),182:655-663，其以全文引用的方式并入本文中。A和C家族DNA聚合酶比对的实例也是所属领域中熟知的且包括例如Ito和Braithwaite,《核酸研究》,(1991),第19卷,15:4045-4057以及Braithwaite和Ito,《核酸研究》,(1993),第21卷,4:787-802，其以全文引用的方式并入本文中。在一些实施例中，可转移(或同源)氨基酸突变可包括在DNA聚合酶家族内或之间，如跨越细菌、病毒、古细菌、真核或噬菌体DNA聚合酶将一个或多个氨基酸突变转移到一种或多种聚合酶。
本发明的某些实施例包括除Bst DNA聚合酶外的突变体A、B或C家族DNA聚合酶，其包括对应于以下各者的氨基酸突变：(a)一个或多个选自由以下组成的群组的氨基酸取代：Bst DNA聚合酶的E30K、G209Q、E220H或E220T、N234K、P236I或P236R、E245R、L252R、S260K、D264K或D264M、E267M或E267K或E267R、E277T、T324R、E325R、A344Y、E442R或E442Y、E456R、H473G、D480L、N485R A492K、E493G或E493R、M495C、N517C或N517K、E522C和H528T；或(b)两个或更多个选自以下的氨基酸取代：Bst DNA聚合酶的E30K、G209Q、E220H、E220K或E220T、N234K或N234R、P236I或P236R、V241K、E245R、V251R、L252R、S260K、D264K或D264M、E267M或E267K或E267R、E277T、、E294K、T324R、E325R、A344Y、E442R或E442Y、E456R、H473G、D480L或D480R、N485R、A492K、E493G或E493R、M495C、N517C或N517K、E522C和H528T。当在合成测序反应中使用时，相比于使用相应野生型聚合酶实现的平均系统误差率或准确度，突变(例如重组)DNA聚合酶可产生降低的平均系统误差率或改进的准确度。在说明性实施例中，突变(例如重组)聚合酶包括等效于Bst DNA聚合酶的H46R、E446Q和H572R和/或突变H281M、D423K和N487R的A、B或C家族聚合酶中的氨基酸取代。在说明性实施例中，突变聚合酶包括A、B或C家族聚合酶，其包括对应于本文中关于Bst DNA聚合酶公开的SEQ ID NO:119中的9个氨基酸突变中的任一个或全部的氨基酸突变。实例3展现用对应于突变(D775R)Bst DNA聚合酶581个氨基酸片段的相应突变(D505R)产生突变克列诺突变体，且提供突变Bst DNA聚合酶的类似改进活性。在说明性实施例中，本文提供一种克列诺片段por(Taq聚合酶)，其包括对应于具有L252R的581突变Bst聚合酶的突变，其中编号相对于SEQ ID NO:1。举例来说，此类克列诺片段具有L276R或此类Taq聚合酶具有I503R。因此，本文提供与具有L276R的SEQ ID NO:18或不具有L276R的SEQ ID NO:18具有85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％一致性的分离的突变(例如重组)克列诺聚合酶。预期克列诺或Taq突变体在基于离子的合成测序反应，如释放或检测氢离子的反应中使用时使得误差减少。在说明性实例中，本文提供与具有I503R的SEQ ID NO:15或不具有I503R的SEQ ID NO:15具有85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％一致性的分离的突变Taq聚合酶。
本发明的某些方面包括编码本文所提供的突变Bst DNA聚合酶中的任一种的核酸或聚核苷酸。此类核酸可包括于包括此类型载体领域中已知的任何额外载体元素的载体，如表达载体中。举例来说，此类载体可包括复制起点、启动子，例如诱导型启动子、聚A信号且可编码标签，如可检测标签或纯化标签。因而，本文中的实施例包括本文所提供的突变多肽作为融合到可检测标签和/或纯化标签的融合蛋白。SEQ ID NO:17包括编码具有SEQ IDNO:2的氨基酸序列且进一步包括突变D775R的示例性经修饰的聚合酶的核酸序列。所属领域的技术人员显而易见如何修饰SEQ ID NO:17的核酸序列以产生编码本文所公开的其它示例性参考或经修饰的聚合酶中的任一个的核酸序列。因而，本文提供重组核酸分子(即，聚核苷酸)和包括所述重组核酸分子的重组表达载体，所述重组表达载体编码突变Bst DNA聚合酶，包括与SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:16具有75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致性的多肽链段，其具有对应于以下各者的氨基酸突变：(a)一个或多个选自由以下组成的群组的氨基酸取代：Bst DNA聚合酶的E30K、G209Q、E220H或E220T、N234K、P236I或P236R、E245R、L252R、S260K、D264K或D264M、E267M或E267K或E267R、E277T、T324R、E325R、A344Y、E442R或E442Y、E456R、H473G、D480L、N485R、A492K、E493G或E493R、M495C、N517C或N517K、E522C和H528T；或(b)两个或更多个选自以下的氨基酸取代：Bst DNA聚合酶的E30K、G209Q、E220H、E220K或E220T、N234K或N234R、P236I或P236R、V241K、E245R、V251R、L252R、S260K、D264K或D264M、E267M或E267K或E267R、E277T、E294K、T324R、E325R、A344Y、E442R或E442Y、E456R、H473G、D480L或D480R、N485R、A492K、E493G或E493R、M495C、N517C或N517K、E522C和H528T。当在合成测序反应中使用时，相比于使用相应的野生型聚合酶实现的平均系统误差率或准确度，经编码的突变(例如重组)DNA聚合酶可产生降低的平均系统误差率或改进的准确度或本文中的实例中所提供的这些聚合酶的改进特性中的任一种。说明性核酸和载体实施例中的经编码的重组突变聚合酶包括Bst DNA聚合酶的氨基酸取代H46R、E446Q和H572R和/或突变H281M、D423K和N487R。说明性核酸和载体实例中的经编码的突变(例如重组)DNA聚合酶包括L252R、H473G和H528T中的一个或多个，其中编号相对于SEQ ID NO:1。因此，在某些实例中，本文提供核酸(即，聚核苷酸)和包括核酸(其编码与SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:16或其片段具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％一致性的突变(例如重组)DNA聚合酶)的载体，展现聚合酶活性，包括氨基酸取代H46R、E446Q、H572R、H281M、D423K和N487R，且进一步包括L252R、H473G或H528T中的任一个或L252R、H473G和H528T中的全部，其中编号相对于SEQ ID NO:1。在具有此类突变的示例性实施例中，核酸和包括所述核酸的载体编码具有SEQ ID NO:119或SEQ ID NO:121的序列的突变Bst DNA聚合酶。
在一些实施例中，可采用密码子偏好原则设计核苷酸序列以提高给定宿主生物体中蛋白质的表达水平。
在一些实施例中，为了减慢模板从聚合酶解离的速率(且提高其持续合成能力)，经修饰的聚合酶或聚合酶的任何生物活性片段可包括使得经修饰的聚合酶更缓慢地从核酸模板解离的一个或多个氨基酸突变。此类突变可具有增加经修饰的聚合酶的阅读长度(或无误差阅读长度)的额外作用，相对于其未经修饰的对应物。
在一些实施例中，经修饰的聚合酶或聚合酶的任何生物活性片段可包括一个或多个生物素部分。如本文所使用，术语“生物素”和“生物素部分”以及其变异体包含生物素(顺-六氢-2-氧代-1H-噻吩并[3,4]咪唑-4-戊酸)和其任何衍生物和类似物，包括生物素类化合物。此类化合物包括例如生物素-e-N-赖氨酸、生物胞素酰肼、2-亚氨基生物素的氨基或硫氢基衍生物和生物素基-ε-氨基己酸-N-羟基琥珀酰亚胺酯、磺酸基琥珀酰亚胺亚氨基生物素、生物素溴乙酰基酰肼、对重氮苯甲酰基生物胞素、3-(N-马来酰亚氨基丙酰基)生物胞素等，以及可特异性结合到抗生物素蛋白部分的任何生物素变异体。如本文所使用，术语“抗生物素蛋白”和“抗生物素蛋白部分”以及其变化形式包含天然卵白糖蛋白抗生物素蛋白以及可特异性结合到生物素部分的抗生物素蛋白的任何衍生物、类似物以及其它非天然形式。在一些实施例中，抗生物素蛋白部分可包含抗生物素蛋白的去糖基化形式、由所选链霉菌属(例如阿维丁链霉菌(Streptomyces avidinii))病毒株产生的细菌抗生蛋白链菌素到截断抗生蛋白链菌素以及到重组抗生物素蛋白和抗生蛋白链菌素以及天然、去糖基化和重组抗生物素蛋白的衍生物所述天然、重组和截断抗生蛋白链菌素的衍生物，例如N-酰基抗生物素蛋白(例如N-乙酰基、N-苯二甲酰基以及N-丁二酰基抗生物素蛋白)以及市售产品
Figure BDA0001649640760000651
以及Neutralite
Figure BDA0001649640760000652
包括天然和重组抗生物素蛋白和抗生蛋白链菌素以及衍生分子(例如非糖基化抗生物素蛋白、N-酰基抗生物素蛋白以及截断抗生蛋白链菌素)的抗生物素蛋白类型分子的所有形式都涵盖在术语“抗生物素蛋白”和“抗生物素蛋白部分”内。典型地但未必，抗生物素蛋白以四聚体蛋白质形式存在，其中四种四聚体中的每一种能够结合至少一个生物素部分。如本文所使用，术语“生物素-抗生物素蛋白键”和其变化形式是指在生物素部分与抗生物素蛋白部分之间形成的特定键。典型地，生物素部分可以高亲和力结合到抗生物素蛋白部分，其中解离常数Kd典型地大约为10-14到10-15mol/L。典型地，此类结合经由非共价相互作用进行。
在一些实施例中，经修饰的聚合酶或聚合酶的任何生物活性片段可包括一个或多个相对于参考聚合酶经修饰或经取代的氨基酸，且可进一步包括连接到一个或多个经修饰或经取代的氨基酸中的至少一个的生物素部分。生物素部分可使用任何适合的连接方法连接到经修饰的聚合酶。在一些实施例中，经修饰的聚合酶包括一个或多个半胱氨酸替换取代，且连接部分包括连接到一个或多个半胱氨酸替换取代中的至少一个的生物素部分。
在一些实施例中，经修饰的聚合酶为生物素化聚合酶。如本文所使用，术语“生物素化”和其变化形式是指生物素与其它部分的任何共价或非共价加合物，所述其它部分如生物分子，例如蛋白质、核酸(包括DNA、RNA、DNA/RNA嵌合分子、核酸类似物以及肽核酸)；蛋白质(包括酶、肽以及抗体)；碳水化合物；脂质等。
在一些实施例中，本公开大体上也涉及包含相对于参考聚合酶包括至少一个氨基酸修饰的重组聚合酶的组合物(以及相关方法、套组以及设备)，其中重组聚合酶具有相对于参考聚合酶更慢地从核酸模板解离的速率。在一些实施例中，可改变解离速率以使得解离速率提高结合亲和性，例如在中性渗透剂存在下，所述渗透剂如甜菜碱、三甲胺N-氧化物、海藻糖、蔗糖、乙二醇等。
如本文所使用，术语“解离速率(dissociation rate)”或“解离速率(off-rate)”是指给定聚合酶从给定模板核酸解离的速率。解离速率(dissociation rate/off-rate)可随着反应条件变化，所述反应条件包括温度、盐浓度、聚合酶和模板的相对浓度等。在一些实施例中，解离速率可通过测量在给定反应条件下结合到模板核酸的聚合酶总量的减少来估算。此类分析可任选地使用防止聚合酶从模板解离之后聚合酶再结合到模板的条件进行。举例来说，在典型的解离结合实验中，为了测量从核酸模板解离的聚合酶的「解离速率」，起初允许聚合酶和核酸模板结合，任选地平衡。任选地，可使用任何适合的标记(例如放射性或荧光标记)标记聚合酶。此时，可任选地阻隔聚合酶进一步结合到模板以简化从模板解离的速率的测量。可使用任何适合的方法进行此类阻隔。举例来说，在模板被固定到表面且聚合酶被标记的实施例中，可通过以下实现阻隔：(1)去除包括标记的聚合酶的缓冲液且用不包括标记的聚合酶的缓冲液替换；或(2)将极高浓度未标记的聚合酶添加到反应混合物中；或(3)以较大因子稀释反应混合物(例如至少20倍或100倍)，尤其当标记的聚合酶的初始浓度较低时。在此类阻隔之后，可在此类阻隔之后不同时间点测量结合到模板的聚合酶的总量以测定聚合酶从模板解离的速度。结合到模板的聚合酶的量可相对于时间(X轴)映射(Y轴线)。在一些实施例中，所得曲线接近单一指数衰减曲线。
在一些实施例中，结合实验的分析可基于衍生自质量作用定律的简单模型。这一模型假定结合是可逆的且允许计算koff(解离速率常数)。(在以下分析中，聚合酶和核酸模板称为“配体”和“受体”)：
Figure BDA0001649640760000671
在一些实施例中，当聚合酶和模板核酸由于扩散而碰撞时，且当碰撞具有正确定向和足够的能量时进行结合。结合速率为：
每单位时间结合事件次数＝[配体]·[受体]·kon。
在结合已发生后，配体和受体可保持结合在一起持续随机的时间量。在每个时刻，解离的机率相同。
解离速率为：
每单位时间解离事件次数＝[配体·受体]·koff。
当新的配体·受体复合物形成速率等于配体·受体复合物解离速率时，达到平衡。平衡时：
[配体]·[受体·kon＝[配体·受体]·koff
这一等式可重新排列以定义平衡解离常数Kd。
Figure BDA0001649640760000672
如果在上述等式中[配体]设定为等于Kd，那么Kd项抵消，且
[受体]/[配体·受体]＝1，
因此[受体]等于[配体·受体]。因为所有受体是自由的或结合到配体，这意味着一半受体是自由的且一半结合到配体。换句话说，当配体的浓度等于Kd时，平衡时将占据一半受体。如果受体对配体具有高亲和力，那么Kd将较低，因为其将采用低浓度配体来结合一半受体。
在此类模型中，Kd(平衡解离常数)与koff(解离速率常数)(在本文中也被称作“解离时间常数”)不同。
在一个示例性分析中，如本文实例中所描述，可通过在限定的条件下用包括荧光标记的经标记的寡核苷酸(在本文中被称作“寡核苷酸221”)培育聚合酶来测量给定聚合酶的解离时间常数。当寡核苷酸未被聚合酶结合时，寡核苷酸上荧光标记的荧光猝灭；聚合酶与寡核苷酸结合导致寡核苷酸标记的去猝灭和荧光的所得增加。通过将未标记的竞争寡核苷酸添加到反应混合物中来引发阻隔；随着聚合酶从荧光标记的寡核苷酸221解离，竞争寡核苷酸与寡核苷酸221杂交且防止聚合酶的进一步结合。随时间推移监测荧光。在添加竞争寡核苷酸后不同时间点测量反应混合物的荧光。绘制所观测到的荧光(以RFU或相对荧光单位计)(Y轴线)与时间(X轴)。为了比较两种或更多种不同酶(例如参考和经修饰的聚合酶)的解离速率，可在平行和单独反应中采用各种酶，其中在不同时间点测量各反应混合物的荧光，其后各种酶的解离速率可使用任何适合的方法计算并比较。在本文所提供的实例中，根据下式计算解离速率：
Y＝(Y0-平线区)*exp(-K*X)+平线区
其中：
Y0为X(时间)是零时的Y值。其以与Y相同的单位表示，
平线区是无限时间时的Y值，以与Y相同的单位表示。
K是速率常数，以X轴时间单位的倒数表示。如果X以分钟计，那么K以相反分钟表示。
Tau是时间常数，以与X轴相同的单位表示。其以K的倒数形式计算。
半衰期以X轴的时间单位计。其以ln(2)/K的形式计算。
时间间隔，即(Y0-平线区)是Y0与平线区之间的差值，以与你的Y值相同的单位表示。
图1描绘如实例中所描述进行的示例性分析的结果，其中在不同盐浓度下测量各种示例性Bst突变体的解离时间常数并比较。
在一些实施例中，本公开大体上涉及一种用于将至少一种核苷酸掺入引物中的方法，其包含在一种或多种核苷酸存在下使包括模板核酸的核酸复合物与引物和本文所提供的突变(例如重组)聚合酶接触，且以模板依赖性方式，使用所述经修饰的聚合酶将一种或多种核苷酸中的至少一种掺入引物中。
用于核苷酸掺入的方法在所属领域中是众所周知的且典型地包含使用聚合酶反应混合物，其中在核苷酸掺入条件下使聚合酶与模板核酸接触。当核苷酸掺入反应包含使核苷酸聚合到引物末端上时，所述过程典型地称为“引物延伸”。典型地但未必，此类核苷酸掺入以模板依赖性方式进行。引物延伸和其它核苷酸掺入分析典型地通过在核苷酸存在下在水溶液中在核苷酸掺入条件下使模板核酸与聚合酶接触来进行。在一些实施例中，核苷酸掺入反应可包括引物，其可任选地与模板杂交以形成引物-模板双螺旋体。典型的核苷酸掺入条件在模板、聚合酶、核苷酸以及任选地引物在适合的水性调配物中彼此混合，从而形成核苷酸掺入反应混合物(或引物延伸混合物)后实现。水性调配物可任选地包括二价阳离子和/或盐，尤其Mg++和/或Ca++离子。水性调配物可任选地包括二价阴离子和/或盐，尤其SO4 2-。典型的核苷酸掺入条件已包括时间、温度、pH、试剂、缓冲液、试剂、盐、辅因子、核苷酸、靶DNA、引物DNA、酶(如核酸依赖性聚合酶)、量和/或反应中组分的比率等熟知参数。试剂或缓冲液可包括单价离子源，如KCl、K-乙酸酯、NH4-乙酸酯、K-谷氨酸、NH4Cl或硫酸铵。试剂或缓冲液可包括二价离子源，如Mg2+和/或Mn2+、MgCl2或Mg-乙酸盐。在一些实施例中，试剂或缓冲液可包括洗涤剂来源，如曲拉通(Triton)和/或吐温(Tween)。大多数聚合酶在约5.0到约9.5的pH范围，更典型在约pH 7与约pH 9之间，有时在约pH 6到约pH 8之间，且有时在7与8之间展现一定水平的核苷酸掺入活性。缓冲液可包括螯合剂，如EDTA和EGTA等。尽管在一些实施例中，核苷酸掺入反应可包括缓冲剂，如Tris、麦黄酮(Tricine)、HEPES、MOPS、ACES或MES，其可以提供约5.0到约9.5的pH范围，可任选地在进行需要检测离子副产物的基于离子的反应时减少或省去此类缓冲剂。进行核酸合成的方法是熟知的且在所属领域中广泛实施且教示广泛范围的核酸合成技术的参考文献是容易获得的。关于核酸合成性能的一些示例性教示内容(包括例如模板依赖性核苷酸掺入以及引物延伸方法)可以见于例如Kim等人,《自然》376:612-616(2002)；Ichida等人,《核酸研究》33:5214-5222(2005)；Pandey等人,《欧洲生物化学杂志》,214:59-65(1993)；Blanco等人,《生物化学杂志》268:16763-16770(1993)；现公开为美国专利公开案第2009/0026082号的美国专利申请序列号12/002781；现公开为美国专利公开案第2010/0137143号的美国专利申请序列号12/474897；以及现公开为美国专利公开案第2010/0282617号的美国专利申请序列号12/492844；现公开为美国专利公开案第20110014612号的美国专利申请序列号12/748359中。考虑到在所属领域中引物延伸和其它核苷酸掺入反应的充分教示，所属领域的技术人员将显而易见使用本发明的重组聚合酶来进行核苷酸掺入的适合的反应条件。
在一些实施例中，本公开大体上涉及适用于使用突变(例如重组)聚合酶(其包括本文中公开的示例性重组突变聚合酶中的任一种)进行核苷酸聚合反应、核酸扩增反应和/或核酸测序反应的组合物(例如试剂)和套组。核苷酸聚合反应可包括(但不限于)核苷酸掺入反应(包括模板依赖性和模板非依赖性核苷酸掺入反应)以及引物延伸反应。因而，本文所提供的组合物可包括聚合组合物、扩增组合物和/或聚核苷酸测序组合物的领域中已知的任何额外组分。突变(例如重组)DNA聚合酶可以范围低端0.1、0.2、0.25、0.5、0.75、0.8、0.9、1、5、6、8或9与范围高端1、5、6、7、8、9、10、20、25、50、75或100mg/ml之间的浓度存在于组合物中。组合物可任选地包括核苷酸来源，如(但不限于)dNTP、缓冲液、盐和/或引物。引物可例如范围低端10、20、25、50、75、100、125、150、200或250μM与范围高端50、75、100、125、150、200、250、500和1000μM的浓度存在。核苷酸可以聚合、扩增和/或测序反应的领域中使用的任何浓度存在。
如(但不限于)NaCl和/或KCl的盐可包括于本发明的组合物中。组合物可为较高离子强度溶液。在一些实施例中，组合物包括100、110或120到200、250或300mM盐。在某些实施例中，组合物包括大于120mM盐，如范围低端125、130、140或150mM盐与范围高端150、160、170、175、180、190、200、225、250、275或300mM盐之间。
本发明的组合物可进一步包括固体载体。举例来说，固体载体可为高通量测序反应中使用的固体载体，如流槽或粒子群。此类固体载体可包括测序引物且任选地克隆或基本上克隆模板分子群体。因此，在某一实施例中，本发明的组合物包括一种或多种模板分子。在某些实施例中，此类模板分子可为一种或典型地一组克隆或基本上克隆模板分子群，如用于高通量核酸测序中。
在说明性实施例中，根据本发明的套组包括至少两个容器，如套管或包括一条孔的多孔板中的孔，各自含有如本文所提供的一种或多种反应混合物组分。容器中的至少一个包括本发明的非天然存在的突变(例如重组)DNA聚合酶，且一个或多个其它套管可包括核苷酸和/或适于例如本文所提供的方法中的一种的缓冲液。在一些实施例中，套组可为虚拟套组，其中多种单独试剂在一起列出、销售和/或出售，如在列出可一起购买的不同试剂的网页或智能手机应用上。
在一些实施例中，适用于进行核酸聚合反应的套组包括缓冲液、至少一种类型核苷酸和非天然存在的突变DNA聚合酶(其典型地为重组DNA聚合酶且任选地经修饰)，其中聚合酶具有与SEQ ID NO:1或其片段具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％序列一致性的多肽链段，展现聚合酶活性，且包括：(a)一个或多个选自由以下组成的群组的氨基酸取代：E30K、G209Q、E220H或E220T、N234K、P236I或P236R、E245R、L252R、S260K、D264K或D264M、E267M或E267K或E267R、E277T、T324R、E325R、A344Y、E442R或E442Y、E456R、H473G、D480L、N485R、A492K、E493G或E493R、M495C、N517C或N517K、E522C和H528T；或(b)两个或更多个选自以下的氨基酸取代：E30K、G209Q、E220H、E220K或E220T、N234K或N234R、P236I或P236R、V241K、E245R、V251R、L252R、S260K、D264K或D264M、E267M或E267K或E267R、E277T、E294K、T324R、E325R、A344Y、E442R或E442Y、E456R、H473G、D480L或D480R、N485R、A492K、E493G或E493R、M495C、N517C或N517K、E522C和H528T。当在合成测序反应中使用时，相比于使用参考Bst聚合酶，如野生型Bst聚合酶、SEQ ID NO:2的突变Bst聚合酶或SEQ IDNO:35的突变Bst聚合酶获得的平均系统误差率，重组DNA聚合酶可具有产生降低平均系统误差率的特性，和/或当在合成测序反应中使用时，相比于使用例如前述参考Bst聚合酶获得的准确度，重组DNA聚合酶具有产生改进的准确度的特性。聚合酶在说明性实例中具有改进的特性的合成测序反应为释放和检测氢离子的测序反应。本文中的套组实施例中的突变(例如重组)聚合酶可包括氨基酸取代H46R、E446Q和H572R，在一些实施例中，和/或可包括突变H281M、D423K和N487R，其中编号相对于SEQ ID NO:1。
本文所提供的套组实施例中的突变(例如重组)DNA聚合酶可进一步包括L252R、H473G和H528T中的一个或多个，其中编号相对于SEQ ID NO:1。因此，在本文所提供的某些实例中，本文中的套组实施例中的突变DNA聚合酶与SEQ ID NO:1或其片段具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％一致性，展现聚合酶活性，包括氨基酸取代H46R、E446Q、H572R、H281M、D423K和N487R，且进一步包括L252R、H473G和H528T，其中编号相对于SEQ ID NO:1。在具有此类突变的示例性套组实施例中，非天然存在的突变体具有SEQ IDNO:119的序列。
在其它子实施例中，上文所提供的实施例中的突变(例如重组)DNA聚合酶的多肽链段可为突变DNA聚合酶的至少50％、60％、70％、75％、80％、90％、95％、96％、97％、98％或99％，且可与SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:16(其为全长野生型Bst聚合酶)具有至少75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％一致性。此类套组子实施例中的突变(例如重组)DNA聚合酶展现聚合酶活性，可任选地包括氨基酸取代H341R、E741Q和H867R，和/或可任选地包括突变H576M、D718K和N782R，且包括L547R、H768G和H823T中的一种或多种，其中编号相对于SEQ ID NO:16。在某些实施例中，突变(例如重组)DNA聚合酶包括L547R、H768G和H823T。在具有此类突变的示例性实施例中，突变DNA聚合酶具有SEQ ID NO:121的氨基酸序列。
在一些实施例中，套组包括至少一种可逆终止子作为至少一种类型核苷酸。在一些实施例中，套组包括至少一种非天然存在的核苷酸作为至少一种类型核苷酸。在一个实施例中，至少一种非天然存在的核苷酸包括dUTP。在一些实施例中，套组包括一种或多种天然存在的核苷酸作为至少一种类型核苷酸，如dATP、dGTP、dCTP和dTTP。在一个实施例中，至少一种类型核苷酸可包括荧光标记的核苷酸。在一些实施例中，套组包括多个在其中进行核酸聚合反应的反应器。在另一实施例中，套组包括在其中进行核酸聚合反应的单一反应容器。套组可任选地含有其它组分，如微球、珠粒和/或滑片以供在聚合反应期间使用。在一些实施例中，缓冲液可包括选自由以下组成的群组的清洁剂：聚氧乙烯化脱水山梨糖醇单月桂酸酯、乙氧基化壬基苯酚、乙氧基化脂肪醇醚、月桂基醚、乙氧基化烷基苯酚、辛基苯氧基聚乙氧基乙醇化合物、经修饰的氧乙基化和/或丙氧基化直链醇、聚乙二醇单油酸酯化合物、聚山梨醇酯化合物和酚类脂肪醇醚或其组合。
在一些实施例中，适用于进行核酸聚合反应的套组可包括缓冲液、至少一种类型核苷酸和SEQ ID NO:79-119的至少一种突变(例如重组)聚合酶。
在一些实施例中，套组可任选地含有测序引物。
在一些实施例中，套组包括至少一种可逆终止子作为至少一种类型核苷酸。在一些实施例中，套组包括至少一种非天然存在的核苷酸作为至少一种类型核苷酸。在一个实施例中，至少一种非天然存在的核苷酸包括dUTP。在一些实施例中，套组包括一种或多种天然存在的核苷酸作为至少一种类型核苷酸，如dATP、dGTP、dCTP和dTTP。在一个实施例中，至少一种类型核苷酸可包括荧光标记的核苷酸。在一些实施例中，套组包括多个在其中进行核酸聚合反应的反应器。在另一实施例中，套组包括在其中进行核酸聚合反应的单一反应容器。套组可任选地含有其它组分，如微球、珠粒和/或滑片以供在聚合反应期间使用。在一些实施例中，缓冲液可包括选自由以下组成的群组的清洁剂：聚氧乙烯化脱水山梨糖醇单月桂酸酯、乙氧基化壬基苯酚、乙氧基化脂肪醇醚、月桂基醚、乙氧基化烷基苯酚、辛基苯氧基聚乙氧基乙醇化合物、经修饰的氧乙基化和/或丙氧基化直链醇、聚乙二醇单油酸酯化合物、聚山梨醇酯化合物和酚类脂肪醇醚或其组合。
在一些套组子实施例中，本文提供适用于进行合成测序反应的套组包括缓冲液、至少一种类型核苷酸和非天然存在的突变DNA聚合酶(其典型地为重组DNA聚合酶且任选地经修饰)，其中聚合酶具有与SEQ ID NO:1或其片段具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％序列一致性的多肽链段，展现聚合酶活性，且包括：(a)一个或多个选自由以下组成的群组的氨基酸取代：E30K、G209Q、E220H或E220T、N234K、P236I或P236R、E245R、L252R、S260K、D264K或D264M、E267M或E267K或E267R、E277T、T324R、E325R、A344Y、E442R或E442Y、E456R、H473G、D480L、N485R、A492K、E493G或E493R、M495C、N517C或N517K、E522C和H528T；或(b)两个或更多个选自以下的氨基酸取代：E30K、G209Q、E220H、E220K或E220T、N234K或N234R、P236I或P236R、V241K、E245R、V251R、L252R、S260K、D264K或D264M、E267M或E267K或E267R、E277T、E294K、T324R、E325R、A344Y、E442R或E442Y、E456R、H473G、D480L或D480R、N485R、A492K、E493G或E493R、M495C、N517C或N517K、E522C和H528T。当在合成测序反应中使用时，相比于使用参考Bst聚合酶，如野生型Bst聚合酶、SEQ ID NO:2的突变Bst聚合酶或SEQ ID NO:35的突变Bst聚合酶获得的平均系统误差率，突变(例如重组)DNA聚合酶可具有产生降低平均系统误差率的特性，和/或当在合成测序反应中使用时，相比于使用例如前述参考Bst聚合酶获得的准确度，重组DNA聚合酶具有产生改进的准确度的特性。聚合酶在说明性实例中具有改进的特性的合成测序反应为释放和检测氢离子的测序反应。本文中的说明性合成测序套组子实施例中的突变(例如重组)聚合酶可包括氨基酸取代H46R、E446Q和H572R，在一些实施例中，和/或可包括突变H281M、D423K和N487R，其中编号相对于SEQ ID NO:1。
本文所提供的说明性合成测序套组子实施例中的突变(例如重组)DNA聚合酶包括L252R、H473G和H528T中的一个或多个，其中编号相对于SEQ ID NO:1。因此，在本文所提供的某些实例中，本文中的合成测序套组子实施例中的突变DNA聚合酶与SEQ ID NO:1或其片段具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％一致性，展现聚合酶活性，包括氨基酸取代H46R、E446Q、H572R、H281M、D423K和N487R，且进一步包括L252R、H473G和H528T，其中编号相对于SEQ ID NO:1。在具有此类突变的示例性合成测序套组子实施例中，非天然存在的突变体具有SEQ ID NO:119的序列。
在其它合成测序套组子实施例中，此类子实施例中的突变(例如重组)DNA聚合酶的多肽链段可为突变DNA聚合酶的至少50％、60％、70％、75％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％，且可与SEQ ID NO:1(野生型581个氨基酸片段)或SEQ ID NO:16(其为野生型全长Bst聚合酶)具有至少75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％一致性。此类合成测序套组子实施例中的突变(例如重组)DNA聚合酶展现聚合酶活性，可任选地包括氨基酸取代H341R、E741Q和H867R，和/或可任选地包括突变H576M、D718K和N782R，且包括L547R、H768G和H823T中的一种或多种，其中编号相对于SEQ ID NO:16。在某些实施例中，突变(例如重组)DNA聚合酶包括L547R、H768G和H823T。在具有此类突变的示例性实施例中，突变DNA聚合酶具有SEQ ID NO:121的氨基酸序列。在一些实施例中，用于进行合成测序反应的套组包括缓冲液、至少一种类型核苷酸和SEQ ID NO:119或SEQ ID NO:121的重组DNA聚合酶。
突变(例如重组)DNA聚合酶可以范围低端0.1、0.2、0.25、0.5、0.75、0.8、0.9、1、5、6、8或9与范围高端1、5、6、7、8、9、10、20、25、50、75或100mg/ml之间的浓度存在于套组中。在一些合成测序套组子实施例中，套组任选地含有测序引物。测序引物可例如范围低端10、20、25、50、75、100、125、150、200或250μM与范围高端50、75、100、125、150、200、250、500和1000μM的浓度存在。此外，包括至少2个容器的套组可任选地为多孔板，其中各孔为单独容器，如单行条孔，可包括固体载体，如测序珠粒或粒子，如离子激流测序粒子，其包括固定化引物。此外，套组可任选地包括清洁剂溶液和固定于固体载体的已知序列的对照DNA片段。此外，套组可包括用于在高通量测序的固体载体上形成基本上单克隆模板的试剂。此类试剂可包括：溶液引物，其中的至少一部分可经生物素化(用于模板分子的克隆或基本上克隆扩增)；以及固体载体上的固定化引物；溶液中的竞争者引物，其具有与固定化引物和/或已知序列的参考模板相同的序列。此外，在一些实施例中，此类套组可包括氢氧化钠和中和溶液。另外，此类套组可包括用于扩增，包括PCR和等温扩增的试剂。举例来说，套组可包括干燥丸粒与用于等温反应，如重组酶聚合酶扩增的试剂、一种或多种复水缓冲剂以及镁离子源，如乙酸镁(MgOAc)。套组可包括本文中公开的突变(例如重组)DNA聚合酶中的任一种。在示例性实施例中，突变DNA聚合酶具有SEQ ID NO:119或SEQ ID NO:121的氨基酸序列。
在一些实施例中，用于进行合成测序反应的套组包括至少一种可逆终止子作为至少一种类型核苷酸。在一些实施例中，套组包括至少一种非天然存在的核苷酸作为至少一种类型核苷酸。在一个实施例中，至少一种非天然存在的核苷酸包括dUTP。在一些实施例中，套组包括一种或多种天然存在的核苷酸作为至少一种类型核苷酸，如dATP、dGTP、dCTP和dTTP。在一个实施例中，至少一种类型核苷酸可包括荧光标记的核苷酸。在一些实施例中，套组包括多个在其中进行合成测序反应的反应器。在另一实施例中，套组包括在其中进行合成测序反应的单一反应容器。套组可任选地含有其它组分，如微球、珠粒、ISFET芯片和/或滑片以供在合成测序反应期间使用。在一些实施例中，缓冲液可包括选自由以下组成的群组的清洁剂：聚氧乙烯化脱水山梨糖醇单月桂酸酯、乙氧基化壬基苯酚、乙氧基化脂肪醇醚、月桂基醚、乙氧基化烷基苯酚、辛基苯氧基聚乙氧基乙醇化合物、经修饰的氧乙基化和/或丙氧基化直链醇、聚乙二醇单油酸酯化合物、聚山梨醇酯化合物和酚类脂肪醇醚或其组合。
在一些实施例中，用于进行合成测序反应的套组包括缓冲液、至少一种类型核苷酸和与SEQ ID NO:35或其片段具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更多一致性的重组聚合酶，其中重组聚合酶或其片段展现聚合酶活性，且包括一个或多个选自由以下组成的群组的氨基酸取代：E30K、G209Q、E220H、E220K或E220T、N234K或N234R、P236I或P236R、V241K、E245R、V251R、L252R、S260K、D264K或D264M、E267M或E267K或E267R、E277T、E294K、T324R、E325R、A344Y、E442R或E442Y、E456R、H473G、D480L或D480R、N485R、A492K、E493G或E493R、M495C、N517C或N517K、E522C和H528T，其中编号相对于SEQ ID NO:35。在一些实施例中，套组可任选地含有测序引物。
在一些实施例中，用于进行合成测序反应的套组包括缓冲液、至少一种类型核苷酸和选自由以下组成的群组的重组聚合酶：SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:84、SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:87、SEQ ID NO:88、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:90、SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:92、SEQ ID NO:93、SEQ ID NO:95、SEQ ID NO:96、SEQ ID NO:97、SEQ IDNO:98、SEQ ID NO:99、SEQ ID NO:100、SEQ ID NO:101、SEQ ID NO:102、SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:105、SEQ ID NO:106、SEQ ID NO:107、SEQ ID NO:108、SEQ ID NO:109、SEQ IDNO:111、SEQ ID NO:112、SEQ ID NO:113、SEQ ID NO:114、SEQ ID NO:115、SEQ ID NO:116、SEQ ID NO:117、SEQ ID NO:118或SEQ ID NO:119。在一些实施例中，套组可任选地含有测序引物。
在一些实施例中，用于进行合成测序反应的套组包括至少一种可逆终止子作为至少一种类型核苷酸。在一些实施例中，套组包括至少一种非天然存在的核苷酸作为至少一种类型核苷酸。在一个实施例中，至少一种非天然存在的核苷酸包括dUTP。在一些实施例中，套组包括一种或多种天然存在的核苷酸作为至少一种类型核苷酸，如dATP、dGTP、dCTP和dTTP。在一个实施例中，至少一种类型核苷酸可包括荧光标记的核苷酸。在一些实施例中，套组包括多个在其中进行合成测序反应的反应器。在另一实施例中，套组包括在其中进行合成测序反应的单一反应容器。套组可任选地含有其它组分，如微球、珠粒和/或滑片以供在合成测序反应期间使用。在一些实施例中，缓冲液可包括选自由以下组成的群组的清洁剂：聚氧乙烯化脱水山梨糖醇单月桂酸酯、乙氧基化壬基苯酚、乙氧基化脂肪醇醚、月桂基醚、乙氧基化烷基苯酚、辛基苯氧基聚乙氧基乙醇化合物、经修饰的氧乙基化和/或丙氧基化直链醇、聚乙二醇单油酸酯化合物、聚山梨醇酯化合物和酚类脂肪醇醚或其组合。在一些实施例中，本发明设想用于扩增核酸模板的套组。套组可包括用于扩增核酸模板的本文所公开的试剂中的任一种，其包括本文所公开的突变(例如重组)DNA聚合酶中的任一种。在一个实施例中，套组包括缓冲液、至少一种类型核苷酸和选自由以下组成的群组的重组聚合酶：SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:46、SEQ IDNO:47、SEQ ID NO:48、SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:52、SEQ IDNO:54、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:60、SEQ IDNO:61、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:67、SEQ IDNO:68、SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:74、SEQ IDNO:75、SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:78或SEQ ID NO:121。
在另一实施例中，套组包括缓冲液、至少一种类型核苷酸和选自由以下组成的群组的重组聚合酶：SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:84、SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:87、SEQ ID NO:88、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:90、SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:92、SEQ IDNO:93、SEQ ID NO:95、SEQ ID NO:96、SEQ ID NO:97、SEQ ID NO:98、SEQ ID NO:99、SEQ IDNO:100、SEQ ID NO:101、SEQ ID NO:102、SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:105、SEQ ID NO:106、SEQ ID NO:107、SEQ ID NO:108、SEQ ID NO:109、SEQ ID NO:111、SEQ ID NO:112、SEQ IDNO:113、SEQ ID NO:114、SEQ ID NO:115、SEQ ID NO:116、SEQ ID NO:117、SEQ ID NO:118或SEQ ID NO:119。
在一些实施例中，本文中的套组和方法中的缓冲液可见于包括以下单价金属盐、二价金属盐、二价阴离子和清洁剂中的任何一个或多个的缓冲液组合物中。举例来说，缓冲液组合物可包括钾盐和/或钠盐。在一些实施例中，缓冲液组合物可包括锰盐或镁盐。在一些实施例中，缓冲液组合物可包括硫酸盐，如硫酸钾和/或硫酸镁。在一些实施例中，缓冲液组合物可包括选自由以下组成的群组的清洁剂：聚氧乙烯化脱水山梨糖醇单月桂酸酯、乙氧基化壬基苯酚、乙氧基化脂肪醇醚、月桂基醚、乙氧基化烷基苯酚、辛基苯氧基聚乙氧基乙醇化合物、经修饰的氧乙基化和/或丙氧基化直链醇、聚乙二醇单油酸酯化合物、聚山梨醇酯化合物和酚类脂肪醇醚或其组合。在一些实施例中，缓冲液组合物可包括选自由曲拉通和吐温组成的群组的洗涤剂。
在一些实施例中，缓冲液组合物可包括至少一种钾盐、至少一种锰盐以及曲拉通X-100(皮尔斯生物化学公司(Pierce Biochemicals))。盐可任选地为氯化物盐或硫酸盐。
在一些实施例中，缓冲液组合物可包括至少一种钾盐、至少一种镁盐以及曲拉通X-100(皮尔斯生物化学公司)。盐可任选地为氯化物盐或硫酸盐。
在一些实施例中，缓冲液组合物具有约7.3到约8.0，典型地约7.4到约7.9的pH。
在一些实施例中，缓冲液组合物包括浓度在1mM与20mM，尤其6-15mM之间的镁盐或锰盐。
在一些实施例中，缓冲液组合物包括浓度在1mM与100mM之间，尤其5-50mM的硫酸盐。
在一些实施例中，缓冲液组合物包括浓度在0.001％到1％之间，典型地在0.0025到0.0125％之间的清洁剂(例如曲拉通X-100或吐温20)。
在一些实施例中，所公开的经修饰的聚合酶组合物(以及相关方法、系统、设备以及套组)可用于从核酸分子获得序列信息。从核酸分子获得序列信息的许多方法是所属领域中已知的，且将容易了解，所有此类方法都在本发明的范围内。使用所公开的经修饰的聚合酶测序的适合的方法包括(但不限于)：桑格测序(Sanger sequencing)、基于连接的测序(也称为杂交测序)以及合成测序。基于模板核酸的序列，合成测序方法典型地涉及模板依赖性核酸合成(例如使用与模板核酸或自引发模板杂交的引物，如所属领域的技术人员将了解)。即，新合成的核酸链的序列典型地与模板核酸的序列互补，且因此知道核苷酸掺入到合成链中的顺序和一致性可提供关于模板核酸链的序列的信息。当通过经修饰的聚合酶以模板依赖性方式使核苷酸聚合时，使用本发明的经修饰的聚合酶的合成测序将典型地涉及检测核苷酸掺入的顺序和一致性。使用经标记的核苷酸合成序列的一些示例性方法包括单分子测序(参见例如美国专利第7,329,492和U.S.7,033,764)，其典型地涉及使用经标记的核苷酸来检测核苷酸掺入。在一些实施例中，所公开的聚合酶组合物(和相关方法、套组、系统以及设备)可用于获得针对全基因组测序、扩增子测序、目标再测序、单分子测序、多重或带条码的测序以及配对端测序应用的序列信息。
在一些实施例中，所公开的经修饰的聚合酶组合物以及相关方法、系统、设备和套组可用于扩增核酸分子。在一些实施例中，核酸分子可使用经修饰的聚合酶，例如通过焦磷酸测序、聚合酶链反应、乳液聚合酶链反应、桥式聚合酶链反应等扩增。
在一些实施例中，所公开的经修饰的聚合酶组合物(以及相关方法、系统、设备和套组)可用于产生核酸库。在一些实施例中，所公开的经修饰的聚合酶组合物可用于产生多种下游工艺的核酸库。用于产生核酸库的许多方法是所属领域中已知的，且将容易了解，所有此类方法都在本发明的范围内。适合的方法包括(但不限于)使用乳液PCR、桥式PCR、PCR、qPCR、RT-PCR以及核酸扩增的其它形式产生的核酸库，取决于聚合。在一些实施例中，所述方法可包括模板依赖性核酸扩增。在一些实施例中，所述方法可包括引物:模板双螺旋体或核酸模板，根据所述引物:模板双螺旋体或核酸模板，经修饰的聚合酶可进行核苷酸掺入。在一些实施例中，核酸可包括具有二级结构的单链核酸，所述二级结构如发夹或茎环，其可以提供在聚合期间经修饰的聚合酶可掺入核苷酸的单链突出端。在一些实施例中，使用根据本发明的经修饰的聚合酶中的一种或多种产生核酸库的方法可包括产生长度为50、100、200、300、400、500、600或更多个碱基对的核酸库。在一些实施例中，经修饰的聚合酶可进行核苷酸掺入的核酸模板可附接、连接或结合到载体，如固体载体。在一些实施例中，载体可包括平坦载体，如滑片。在一些实施例中，载体可包括粒子，如Ion SphereTM粒子(加利福尼亚州生命技术公司(Life Technologies Corp,CA)出售)。
在一些实施例中，本发明大体上涉及一种用于产生核酸库的方法，其包含在聚合条件下使核酸模板与经修饰的聚合酶和一种或多种dNTP接触；从而将一种或多种dNTP掺入到核酸模板中以产生核酸库。在一些实施例中，所述方法可进一步包括在较高离子强度溶液存在下产生核酸库或测序核酸库。在一些实施例中，本公开大体上涉及在较高离子强度溶液存在下保留聚合酶活性的经修饰的聚合酶。在一些实施例中，较高离子强度溶液可为150mM盐。在一些实施例中，较高离子强度溶液可包括125mM到175mM盐。在一些实施例中，较高离子强度溶液可为130mM盐。在一些实施例中，较高离子强度溶液可为125mM到175mM盐。在一些实施例中，所述盐可包括钾盐和/或钠盐。在一些实施例中，离子强度溶液可进一步包括硫酸盐。在一些实施例中，在相同条件下，与不具有相同突变(或同源突变)中的一个或多个的参考聚合酶相比，经修饰的聚合酶能够在较高离子强度溶液存在下以更大能力扩增(和/或测序)核酸分子(例如，如通过原始准确度或均聚物准确度所测量)。在一些实施例中，在标准(即，典型的)离子强度条件(即，低于本文所提供的较高离子强度溶液，例如50mM盐)下，与不具有突变(或同源突变)中的一个或多个的参考聚合酶相比，经修饰的聚合酶能够在较高离子强度溶液存在下以更大能力扩增(和/或测序)核酸分子(例如，如通过原始准确度或均聚物准确度所测量)。
任选地，所述方法进一步包括在聚合条件下重复添加一种或多种dNTP以将多种dNTP掺入到核酸模板中以产生核酸库。在一些实施例中，所述方法包括在聚合条件下检测一种或多种dNTP的添加。在一些实施例中，所述方法包括在聚合条件(例如A、G、C、T、A核苷酸流和核苷酸掺入)下鉴别一种或多种dNTP的添加。
在一些实施例中，所述方法可进一步包括在聚合期间检测核苷酸掺入副产物。在一些实施例中，核苷酸掺入副产物可包括氢、焦磷酸根或磷酸根离子。
在一些实施例中，所述方法进一步包括测定核酸库中掺入的dNTP的一致性。在一些实施例中，所述方法进一步包括测定核酸库中掺入的核苷酸的数目。在一些实施例中，检测可进一步包括测序核酸库。
在一些实施例中，所公开的经修饰的聚合酶组合物(以及相关方法、系统、设备和套组)可用于经由核苷酸掺入事件期间副产物形成产生来检测核苷酸掺入。检测核苷酸掺入副产物的许多方法是所属领域中已知的，且将容易了解，所有此类方法都在本发明的范围内。核苷酸副产物检测的适合的方法包括(但不限于)检测氢离子、无机磷酸盐、无机焦磷酸盐等。若干这些副产物检测方法典型地涉及模板依赖性核苷酸掺入。
在一些实施例中，经修饰的聚合酶可用于进行无标记核酸测序，且尤其基于离子的核酸测序。包括基于离子的核酸测序的无标记核酸测序的概念包括以引用的方式并入的以下参考文献：Rothberg等人，美国专利公开案第2009/0026082号、第2009/0127589号、第2010/0301398号、第2010/0300895号、第2010/0300559号、第2010/0197507号和第2010/0137143号，其以全文引用的方式并入本文中。简单来说，在此类核酸测序应用中，通过检测聚合酶催化的核酸合成反应的天然副产物的存在来确定核苷酸掺入，所述副产物包括氢离子、多磷酸盐、PPi以及Pi(例如在焦磷酸酶存在下)。
在基于离子的核酸测序的典型实施例中，通过检测由聚合酶催化的核酸合成反应(包括例如引物延伸反应)产生的氢离子的存在和/或浓度来检测核苷酸掺入。在一个实施例中，对可操作地结合到引物和聚合酶且位于反应腔室(如上文列举的Rothberg等人中所公开的微孔)内的模板进行聚合酶催化的核苷酸添加到引物(“添加步骤”)中继而洗涤(“洗涤步骤”)的重复循环。在一些实施例中，此类模板可作为克隆种群连接到固体载体，如微粒、珠粒等，且将所述克隆种群装载到反应腔室中。如本文所使用，“可操作地结合”意指引物退火到模板以使得引物可以通过聚合酶延伸且聚合酶结合到此类引物-模板双螺旋体或与其极为接近以使得每当供应核苷酸时，发生引物延伸。
在循环的各个添加步骤中，通过以模板依赖性方式掺入添加的核苷酸，聚合酶使引物延伸，以使得核苷酸仅在模板中的下一个碱基是所添加的核苷酸的补体时才掺入。如果存在一个互补碱基，那么存在一次掺入，如果存在两个互补碱基，那么存在两次掺入，如果存在三个互补碱基，那么存在三次掺入，以此类推。各此类掺入存在所释放的氢离子，且模板释放氢离子群体共同地改变反应腔室的局部pH。在一些实施例中，氢离子的产生与模板中的连续互补碱基数目(以及具有参与延伸反应的引物和聚合酶的模板分子的总数)成正比(例如单调相关)。因此，当模板中存在许多连续一致互补碱基(即，均聚物(HP)区域)时，所产生的氢离子的数目以及因此局部pH变化的幅值与连续一致互补碱基的数目成正比。如果模板中下一个碱基不与所添加的核苷酸互补，那么不会发生掺入且不会释放氢离子。在一些实施例中，在添加核苷酸的各个步骤之后，进行洗涤步骤，其中使用在预定pH下的无缓冲洗涤溶液来前述步骤的核苷酸以防止随后循环中的误掺入。在一些实施例中，在添加核苷酸的各个步骤之后，可进行额外步骤，其中用核苷酸破坏剂(如腺苷三磷酸双磷酸酶)处理反应腔室以消除残留在腔室中的任何残余核苷酸，从而使后续循环中假延伸的机率减到最小。在一些实施例中，可包括处理作为洗涤步骤自身的一部分。
在一个示例性实施例中，将不同种类(或“类型”)的核苷酸依次添加到反应腔室中，以使得各种反应物一次一个地曝露于不同核苷酸类型。举例来说，核苷酸类型可按以下顺序添加：dATP、dCTP、dGTP、dTTP、dATP、dCTP、dGTP、dTTP等；其中每次曝露后接洗涤步骤。循环可重复50次、100次、200次、300次、400次、500次、750次或更多次，取决于所需序列信息长度。在一些实施例中，可取决于所需测序信息，改变将各种核苷酸依次施加到反应腔室中(即，流循环)所花费的时间。举例来说，当测序长核酸分子时，流循环可在一些情况下减少以减少测序整个核酸分子所需的总时间。在一些实施例中，可增加流循环，例如当测序短核酸或扩增子时。在一些实施例中，流循环可为约0.3秒到约3秒，且更典型地约0.5秒到约1.5秒。
在一个例示性实施例中，本公开大体上涉及一种用于从核酸模板获得序列信息的方法，且包括以下：(a)提供包括与测序引物杂交且与经修饰的聚合酶结合的模板核酸的反应混合物，其中所述经修饰的聚合酶包含经由聚合酶内的一个或多个连接位点连接到桥连部分的聚合酶；(b)使模板核酸与核苷酸接触，其中所述接触包括将核苷酸掺入测序引物中且产生测序副产物(如果核苷酸与模板核酸中的相应核苷酸互补)；以及(c)检测反应混合物中测序副产物的存在，由此判定是否已发生核苷酸掺入。
在一些实施例中，所述方法可进一步包括重复接触和检测步骤至少一次。在一些实施例中，这些步骤重复范围低端2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、50、100、250、500或1000次到范围高端10、15、20、25、50、100、250、500、1000、2500、5000、10000、25000、50000或100,000次。
在一些实施例中，经修饰的聚合酶的聚合酶包括单一连接位点，且桥连部分经由单一连接位点直接或经由连接部分连接到聚合酶。在一些实施例中，单一连接位点可连接到生物素部分，且桥连部分可包括抗生物素蛋白部分。在一些实施例中，在另外类似或相同的反应条件下，相对于聚合酶的未经修饰的形式，经修饰的聚合酶展现增加的阅读长度和/或持续合成能力。
在一些实施例中，检测测序副产物的存在包括使反应混合物与能够感测测序副产物存在的传感器接触。所述传感器可包括场效应晶体管，例如chemFET或ISFET。
在一些实施例中，测序副产物包括氢离子、染料连接部分、多磷酸盐、焦磷酸盐或磷酸盐部分，且检测测序副产物的存在包括使用ISFET来检测测序副产物。在一些实施例中，检测测序副产物包括使用ISFET检测氢离子。
在另一实施例中，本公开大体上涉及一种检测核苷酸掺入的方法，且包括以下：(a)使用本文所提供的突变且典型地重组聚合酶进行核苷酸掺入，且产生核苷酸掺入的一种或多种副产物；以及(b)检测核苷酸掺入的一种或多种副产物中的至少一种的存在，由此检测核苷酸掺入。
在一些实施例中，经修饰的聚合酶包括连接到桥连部分的聚合酶。桥连部分任选地经由经修饰的聚合酶内的一个或多个连接位点连接到聚合酶。在一些实施例中，桥连部分经由连接部分连接到聚合酶。连接部分可连接到聚合酶的一个或多个连接位点中的至少一个。在一些实施例中，经修饰的聚合酶的聚合酶包括单一连接位点，且桥连部分经由单一连接位点直接或经由连接部分连接到聚合酶。在一些实施例中，单一连接位点可连接到生物素部分，且桥连部分可包括抗生物素蛋白部分。在一些实施例中，桥连部分经由至少一个生物素-抗生物素蛋白键连接到聚合酶。在一些实施例中，在另外类似或相同的反应条件下，相对于参考聚合酶提高，经修饰的聚合酶展现增加的阅读长度和/或持续合成能力和/或阅读准确度、增加的总通量、减少的链偏差、减少的系统误差。
在一些实施例中，所述方法可进一步包括重复进行和检测步骤至少一次。在一些实施例中，这些步骤重复范围低端2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、50、100、250、500或1000次到范围高端10、15、20、25、50、100、250、500、1000、2500、5000、10000、25000、50000或100,000次。
在一些实施例中，检测核苷酸掺入的至少一种副产物的存在包括使用能够感测副产物的存在的传感器。所述传感器可包括场效应晶体管，例如chemFET或ISFET。
在一些实施例中，核苷酸掺入的至少一种副产物包括氢离子、染料连接部分、多磷酸盐、焦磷酸盐或磷酸盐部分，且检测至少一种副产物的存在包括使用ISFET来检测至少一种副产物。在一些实施例中，至少一种副产物包括氢离子，且检测测序副产物的存在包括使用ISFET检测氢离子。
在一些实施例中，本公开大体上涉及一种检测核苷酸聚合反应期间离子浓度变化的方法，且包括以下：(a)使用突变且典型地重组聚合酶来进行核苷酸聚合反应，所述聚合酶包括连接到桥连部分的聚合酶，其中至少一种类型的离子的浓度在核苷酸聚合反应时程期间变化；以及(b)检测指示至少一种类型的离子的浓度变化的信号。
在一些实施例中，桥连部分经由经修饰的聚合酶内的一个或多个连接位点连接到聚合酶。在一些实施例中，桥连部分经由连接部分连接到聚合酶。连接部分可连接到聚合酶的一个或多个连接位点中的至少一个。在一些实施例中，经修饰的聚合酶的聚合酶包括单一连接位点，且桥连部分经由单一连接位点直接或经由连接部分连接到聚合酶。在一些实施例中，单一连接位点可连接到生物素部分，且桥连部分可包括抗生物素蛋白部分。在一些实施例中，桥连部分经由至少一个生物素-抗生物素蛋白键连接到聚合酶。在一些实施例中，在另外类似或相同的反应条件下，相对于聚合酶的参考形式，经修饰的聚合酶展现增加的阅读长度和/或持续合成能力。
在一些实施例中，所述方法可进一步包括重复进行和检测步骤至少一次。
在一些实施例中，检测至少一种类型离子的浓度变化包括使用能够感测副产物的存在的传感器。所述传感器可包括场效应晶体管，例如chemFET或ISFET。
在一些实施例中，至少类型离子包括氢离子、染料连接部分、多磷酸盐、焦磷酸盐或磷酸盐部分，且检测至少一种类型离子的浓度变化包括使用ISFET来检测至少一种类型的离子。在一些实施例中，至少一种类型的离子包括氢离子，且检测至少一种类型的离子的存在包括使用ISFET检测氢离子。
在一个示例性实施例中，本公开大体上涉及一种用于从核酸模板获得序列信息的方法，且包括以下：(a)提供包括与测序引物杂交且与本文所提供的突变且典型地重组聚合酶结合的模板核酸的反应混合物；(b)使模板核酸与核苷酸接触，其中所述接触包括将核苷酸掺入测序引物中且产生延伸的引物产物；以及(c)检测反应混合物中延伸的引物产物的存在，由此判定是否已发生核苷酸掺入。在一些实施例中，经修饰的聚合酶包含SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:36或SEQ ID NO:37。
在一个示例性实施例中，本公开大体上涉及一种用于扩增核酸模板的方法，且包括以下：(a)提供包括与引物杂交且与本文所提供的突变且典型地重组聚合酶结合的核酸模板的反应混合物；(b)使核酸模板与核苷酸接触，其中所述接触包括将核苷酸掺入引物中且产生延伸的引物产物；以及(c)检测反应混合物中延伸的引物产物的存在，由此判定是否已发生核苷酸掺入。在一些实施例中，经修饰的聚合酶包括SEQ ID NO:119、SEQ ID NO:121、SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:78、SEQ ID NO:120和SEQ ID NO:122，其中：SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:35包括一个或多个选自由以下组成的群组的氨基酸取代：E30K、G209Q、E220H、E220K或E220T、N234K或N234R、P236I或P236R、V241K、E245R、V251R、L252R、S260K、D264K或D264M、E267M或E267K或E267R、E277T、E294K、T324R、E325R、A344Y、E442R或E442Y、E456R、H473G、D480L或D480R、N485R、A492K、E493G或E493R、M495C、N517C或N517K、E522C和H528T；且SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:120和SEQ ID NO:122包括一个或多个选自由以下组成的群组的氨基酸取代：E325K、G504Q、N529K或N529R、P531I或P531R、V536K、V546R、L547R、E515H或E515K或E515T、E540R、S555K、D559K或D559M、E562M或E562K或E562R、E572T、E589K、T619R、E620R、A639Y、E751R、E737R、E737Y、H768G、M790C、A787K、D775L、D775R、N780R、E788G或E788R、N812C或N812K、E817C和H823T。
以下非限制性实例仅借助于说明示例性实施例提供，且决不限制本发明的范围和精神。此外，应理解，本文中所公开或要求的任何本发明涵盖本文所描述的任何一个或多个特征的所有变型、组合以及置换。任何一个或多个特征可明确地从权利要求排除，即使特定排除未明确阐述于本文中。还应理解，除非所属领域的一般技术人员以其它方式将理解，否则根据本文所公开的特定方法或所属领域中已知的其它方法，适用于方法中的试剂的公开内容意图与涉及所述试剂的使用的方法同义(且提供支持)。另外，除非所属领域的一般技术人员将以其它方式理解，否则在说明书和/或权利要求公开一种方法的情况下，本文所公开的试剂中的任何一种或多种可用于所述方法中。
实例
实例1：示例性突变聚合酶的纯化
各种示例性突变可经由定点突变诱发引入具有氨基酸序列SEQ ID NO:1(其为BstDNA聚合酶的581个氨基酸野生型片段)、SEQ ID NO:2(其为具有突变H46R、E446Q和H572R(编号相对于SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2)的Bst DNA聚合酶的581个氨基酸突变片段)或SEQ ID NO:35(其为具有突变H46R、E446Q、H572R、H281M、D423K和N487R(编号相对于SEQ IDNO:1和SEQ ID NO:2)的Bst DNA聚合酶的581个氨基酸突变片段)的示例性参考聚合酶中。此外，突变可引入具有氨基酸序列SEQ ID NO:16(其为全长野生型Bst DNA聚合酶)的示例性参考聚合酶以及参考突变Bst DNA聚合酶，如在全长Bst DNA聚合酶中的相应部位处具有突变作为上文关于581个氨基酸Bst DNA聚合酶片段所指示的那些部位的那些中。可将编码突变/进一步突变聚合酶的重组表达构筑体转化到细菌中。可将含有表达构筑体的菌落接种到BRM培养基中，生长到OD＝0.600且通过添加IPTG达到1mM的最终浓度来进行诱导。可随后在37℃下使细胞另外生长3小时。
可在6000rpm下离心经诱导的细胞10分钟，可丢弃上清液，且可使细胞再悬浮于再悬浮缓冲液(10mM Tris，pH 7.5，100mM NaCl)中。可在60的设定(幅值)下超声处理再悬浮细胞一分钟，且随后放置在冰上1分钟。可以此方式重复超声处理总共5次。
可在65℃下培育样品10分钟。样品可在9000rpm下离心30分钟。可回收上清液且在肝素柱上进一步纯化。
实例2：在核酸测序中比较经修饰的聚合酶和参考聚合酶的性能
包括本文所公开的突变中的任一种的野生型或突变Bst聚合酶可基本上如实例1中所描述进行纯化且作为参考聚合酶或与参考聚合酶(例如具有SEQ ID NO:2或SEQ IDNO:35的氨基酸序列)(对照反应)一起测试，且在基于离子的测序反应中，使用离子激流PGMTM测序系统(离子激流系统，部件号4462917)评估其性能。简单来说，基因组DNA可经纯化、衔接子连接且选择大小，如离子片段文库套组用户指南(离子激流系统，部件号4466464；公开案部件号4467320Rev B)中所描述。可随后基本上根据Ion XpressTM模板套组v 2.0用户指南(离子激流系统，部件号4469004A)中所提供的方案且使用离子模板制备套组(离子激流系统/生命技术公司，部件号4466461)、离子模板试剂套组(离子激流系统/生命技术公司，部件号4466462)以及离子模板溶液套组(离子激流系统/生命技术公司，部件号4466463)中所提供的试剂，使DNA片段扩增到Ion SphereTM粒子(离子激流系统，部件号602-1075-01)上。可随后将扩增的DNA装载到PGMTM314测序芯片中。可将芯片装载到离子激流PGMTM测序系统(离子激流系统/生命技术公司，部件号4462917)且基本上根据离子测序套组v2.0用户指南(离子激流系统/生命技术公司，部件号4469714Rev A)中所提供的方案中且使用具有本文所提供的参考或突变聚合酶的离子测序套组v2.0(离子激流系统/生命技术公司，部件号4466456)和离子晶片套组(离子激流系统/生命技术公司，部件号4462923)中所提供的试剂进行测序。离子激流系统为生命技术公司的子公司(卡尔斯巴德，加利福尼亚州)。
可分析使用参考或突变聚合酶的所得测序读数组来例如测量所得测序读数的原始阅读准确度(如通过装备有离子激流测序系统的离子激流标准软件所报告)、50Q17读数、100Q17读数以及200Q17读数的数值。使用供应有PGMTM测序系统的标准软件，可测量且比较使用参考和经修饰的聚合酶的测序反应中获得的100Q17或200Q17阅读总数。
实例3：从一种经修饰的聚合酶到另一种聚合酶的突变转移
此实例展现，如WO2015/048763中已公布，具有某些特性的Bst聚合酶突变可通过产生类似残基的Taq突变体或克列诺片段突变体“转移”到Taq聚合酶。经由定点突变诱发将各种示例性突变引入到具有SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:15以及SEQ ID NO:18的氨基酸序列的示例性参考聚合酶(参见表1)中。在序列验证之后，将含有氨基酸突变的经修饰的聚合酶(例如具有氨基酸突变D732R的TaqDNA聚合酶，其中编号对应于SEQ IDNO.15；以及具有氨基酸突变D505R的克列诺片段DNA聚合酶，其中编号对应于SEQ IDNO.18)转化到用于表达的细菌细胞中。将含有表达构筑体的菌落接种到BRM培养基中，生长到OD＝0.600且通过添加IPTG达到1mM的最终浓度来进行诱导。随后在37℃下使细胞另外生长3小时。
随后在6000rpm下离心经诱导的细胞10分钟，丢弃上清液，且使细胞再悬浮于再悬浮缓冲液(100mM Tris，pH 7.5，100mM NaCl)中。在60的设定(幅值)下超声处理再悬浮细胞一分钟，且随后放置在冰上1分钟。以此方式重复超声处理总共5次。样品在65℃下培育10分钟且在9000rpm下离心。回收上清液且在肝素柱上进一步纯化。
肝素DNA亲和性柱
在经修饰的聚合酶在肝素柱上的纯化期间观测到以下结果。所有突变体都展现与肝素柱更紧密的结合。在43mS/cm的导电率下，Taq D732R离开柱，其中野生型在39mS/cm下离开。克列诺D505R在47mS/cm的导电率下离开柱，其中野生型克列诺在32mS/cm下离开。
模板亲和性/解离分析：
在过量竞争DNA(发夹寡核苷酸173)存在下测量各种经修饰的聚合酶和参考聚合酶从DNA模板(寡核苷酸221)解离的速率。当聚合酶从荧光素标记的模板解离时，随时间推移在分光光度计上监测不断减少的荧光通过使数据与单相指数衰减等式拟合来计算解离速率。
在时间间隔下测量分析的代表性结果，其中各种经修饰的聚合酶以及具有SEQ IDNO:2或SEQ ID NO:18的氨基酸序列的参考聚合酶的解离速率常数(也称为“解离时间常数”)(描绘于图2中)。分析中所包括的聚合酶表示于如下图2中：Bst 1.0＝具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的参考聚合酶；BST D775R＝具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列且进一步包括突变D775R的经修饰的聚合酶；克列诺WT＝具有SEQ ID NO:18的氨基酸序列的参考聚合酶；克列诺D505R＝具有SEQ ID NO:18的氨基酸序列且进一步包括突变D505R的经修饰的聚合酶。如图2中所指示，相比于相应的参考聚合酶，经修饰的聚合酶展现明显更高的解离时间常数。
实例4：构筑示例性经修饰的聚合酶
各种示例性突变可经由定点突变诱发引入示例性参考聚合酶，如具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的聚合酶(581个氨基酸野生型Bst DNA聚合酶片段)或其参考突变体，如具有SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:35的氨基酸序列的那些；或具有SEQ ID NO:16的氨基酸序列的示例性参考聚合酶(全长野生型Bst DNA聚合酶)或其参考突变体，如具有SEQ ID NO:122或SEQ ID NO:120的氨基酸序列的那些中。此实例概述可用于产生突变聚合酶库或其生物学活性片段的示例性高通量方法。本文中的实例也概述评估此类突变聚合酶或生物活性片段的聚合酶活性的方法或与此类聚合酶活性间接相关的测序反应的各种方面。
在本实例中，可制备向参考聚合酶，如紧接在上文论述的参考聚合酶中的任一种添加突变的构筑体诱变处理库，其中聚合酶中的每个氨基酸可单独地突变，或可产生本文中的这些实例中公开的突变体中的任一种。此外，在说明性实例中，可所选氨基酸残基处的氨基酸的每个可能的组合使选择氨基酸残基突变。可随后将突变体构筑体的所得库施加到许多96孔培养板中，其中可在30℃下在BRM培养基中使突变体构筑体生长过夜。含有突变体构筑体的培养基可接种到深96孔培养板中且在37℃下生长3小时且通过添加IPTG达到1mM的最终浓度来诱导。可随后在37℃下使细胞另外生长3小时。可随后在3700rpm下使经诱导的细胞离心10分钟，可丢弃上清液，且可使细胞再悬浮于100μl再悬浮缓冲液(10mM Tris，pH 7.5，100mM NaCl)中。可在60的设定(幅值)下超声处理再悬浮细胞一分钟，且随后在80℃下放置过夜。
上述样品可在65℃下培育10分钟。样品可随后在3700rpm下离心12分钟。回收上清液且使用生物素化捕获寡核昔酸与亲和树脂和myOne珠粒一起进一步纯化。经纯化的突变聚合酶或生物活性片段可在较高NaCl中洗脱且进行缓冲液更换。可随后分析经纯化的突变体聚合酶或生物活性片段以测量各种聚合酶活性，如信噪比、系统误差、阅读长度、原始准确度、链偏差以及总测序通量，如以下实例中所概述。
实例5：评估系统误差
此实例提供一种评估一般与一个或两个链、极端链偏差、系统链误差和较高GC含量的提前衰减相关的误差的方法。所属领域的技术人员将显而易见，可以修改本文所公开的方法以评估与系统误差相关的其它度量，或可经修改以测量与如模板解离常数的聚合酶活性相关的一个或多个其它度量。
经纯化的聚合酶或其生物活性片段可基本上根据实例1或实例4制备且用于使用个人基因组机器和离子PGM 318芯片或离子激流质子或S5仪器(生命技术公司，加利福尼亚州)来评估系统误差。
突变聚合酶或其生物活性片段或突变聚合酶或其生物活性片段库可与参考序列直接比较基于离子的测序系统(如离子激流合成测序系统)中的性能，所述突变Bst聚合酶如包括测试中突变体(充当对照)的突变中的一些但非全部的碱基(即，参考)突变Bst聚合酶。在使用离子激流PGMTM测序系统(离子激流系统，部件号446462917)的基于离子的测序反应中，可在下游应用获自乳液PCR(emPCR)反应的核酸库。简单来说，模板DNA可经纯化、衔接子连接且选择大小，如离子片段文库套组用户指南(离子激流系统，部件号44646646464；公开案部件号446467320Rev B)中所描述。模板DNA可在如下文所概述的乳液PCR反应中扩增到Ion SphereTM粒子上。96孔乳液PCR反应中使用的核酸库可包括：此前已显示导致参考Bst聚合酶的基于离子的合成测序反应中的一个链提前衰减的24个核酸模板；此前已显示在参考Bst聚合酶的基于离子的合成测序反应中使用时导致两个链提前衰减的12个核酸模板；此前已显示在参考Bst聚合酶的基于离子的合成测序反应中使用时导致极端链偏差的12个核酸模板；此前已显示在参考Bst聚合酶的基于离子的合成测序反应中使用时使得系统链误差提高的24个核酸模板；含有较高GC含量的12个核酸模板，其可在参考Bst聚合酶的基于离子的合成测序反应中使用时使得准确度降低；以及在参考Bst聚合酶的基于离子的合成测序反应中使用时规则地在所提出和测试的测序条件下充分执行的12个核酸模板。乳液PCR可使用上述96模板库，根据离子激流测序样品制备的标准乳液PCR条件和溶液(生命技术公司，卡尔斯巴德，加利福尼亚州)，根据制造商的说明进行。
可将来自上述96带条码的乳液PCR反应中的每一个的离子球形粒子(ISP，2000到4000万)单独地添加到个别PCR套管上。可随后用退火缓冲液填充套管且涡旋。可在台式离心机中以最大速度(16,500RPM)使试管旋转4分钟且可去除上清液。可添加测序引物，通过吸液混合，且通过热循环退火到珠粒。可将再悬浮的引物退火ISP添加到96孔培养板的各个孔中以产生每孔400,000个珠粒。可将个别参考或测试中的诱变处理聚合酶或其生物活性片段添加到各孔中，其中每孔添加仅1种参考或突变聚合酶或生物活性片段。可在室温下培育突变聚合酶(或其生物活性片段)和ISP持续40分钟，继而添加α-硫基dGTP/α-硫基dTTP的混合物以允许参考或测试中的突变聚合酶结合到ISP。可将所有96孔合并到储存器中，转移到2ml导管，且以最大速度旋转3分钟。可去除上清液，导管短暂涡旋，且随后将导管放置在磁块上。可在磁块上培育样品30秒，可去除上清液且可使用制造商所提供的标准装载方案将整个样品装载到离子318芯片(加利福尼亚州的生命技术公司，目录号4484354)上。在装载完成之后，可通过经由装载孔口吸液洗涤溶液来洗涤芯片。洗涤步骤可重复两次，总共洗涤3次。可在装载到离子PGM(生命技术公司，加利福尼亚州，目录号446462921)上之前从芯片去除所有液体，且根据制造商说明书用标准测序400套组(生命技术公司，加利福尼亚州，目录号4482002)进行测序。因此，与ISP结合的参考或测试中的突变聚合酶为进行测序反应的聚合酶。
可评估获自诱变处理聚合酶或生物活性片段库的所得测序操作的系统误差。具体来说，可测量如以下度量：AQ 20总碱基数(总测序通量)、AQ20平均值、原始阅读准确度、链偏差(不具有链偏差的目标碱基)以及系统误差百分比(在本实例中测量为含有长度1-6的均聚物的序列基元中的随机误差百分比，其中当(测序操作的)覆盖度等于或大于20×时，系统缺失以大于15％的频率在链上出现)。任选地，除了与包括与测试中的突变聚合酶相同的突变中的一些的参考聚合酶直接进行比较之外，可使用与其它已知的聚合酶相同的度量进一步评估一些突变聚合酶。
实例6：产生和鉴别具有改进的核酸测序特性的突变Bst DNA聚合酶
由SEQ ID NO:35组成的参考(对照)聚合酶用于产生基本上如实例4中所描述的聚合酶的诱变处理库。根据实例5筛选诱变处理聚合酶库以评估包括准确度和系统误差的各种聚合酶活性，如通过平均AQ20阅读长度、平均原始阅读准确度、6碱基或7碱基均聚物的准确度、平均系统误差(SSE)和平均中值阅读长度(MRL)所测量。
根据所制备的诱变处理库(含有多个单一氨基酸残基取代)，观测到若干氨基酸突变在相同测序条件(如通过准确度和系统误差所测量)下表现胜过对照聚合酶。因此，基本上如实例4中所描述制备额外突变聚合酶，其含有在测序反应中表现胜过对照聚合酶的各种氨基酸取代的组合以产生相比于SEQ ID NO:35具有一个、两个或三个氨基酸取代的多种突变聚合酶。
SEQ ID NO:35为相比于SEQ ID NO:2具有三个氨基酸取代的突变聚合酶(在本文中称为“PSP4”)。SEQ ID NO:35的突变聚合酶由相比于SEQ ID NO:2的氨基酸取代D423K、N487R和H281M组成。
在以下实验中，用于评估核酸测序反应中的参考(对照)聚合酶(如通过平均系统误差(平均SSE)和平均AQ20中值阅读长度(MRL)所测量)的准确度和系统误差为SEQ IDNO.35。
此处，基本上根据实例5，使用SEQ ID NO:35作为参考(对照)聚合酶制备六个96孔培养板。评估来自各96孔培养板的测序数据以鉴别相比于参考(即，对照)聚合酶(SEQ IDNO:35(PSP4))改进的突变测序聚合酶，如通过平均系统误差(平均SSE)或平均AQ20平均阅读长度(MRL)所测量。
图3A到3F提供突变聚合酶中的每一个的测序数据，其显示相比于对照聚合酶(PSP4)改进的测序性能，如平均SSE或平均AQ20MRL所测量。六个96孔培养板中的每一个鉴别多种突变时的氨基酸残基，其显示当用作合成测序系统，如离子激流测序系统的部分时改进的合成测序反应性能，如相比于对照聚合酶(PSP4)改进的准确度和/或降低的系统误差所测量。
此外，经受定点突变诱发的一些氨基酸残基在SEQ ID NO:35的单一氨基酸残基处产生多种改进聚合酶。举例来说，当氨基酸赖氨酸(K)或精氨酸(R)被天冬酰胺取代时，培养板1(图3A)鉴别出SEQ ID NO:35的氨基酸残基234具有改进的测序功能，如平均SSE和平均AQ20MRL两者所测量。当氨基酸甲硫氨酸(M)、赖氨酸(K)或精氨酸(R)被谷氨酸取代时，培养板2(图3B)鉴别出SEQ ID NO:35的氨基酸残基267具有改进的测序功能，如平均SSE和平均AQ20MRL两者所测量。当氨基酸酪氨酸(Y)或精氨酸(R)被谷氨酸取代时，培养板3(图3C)鉴别出SEQ ID NO:35的氨基酸残基442具有改进的测序功能，如平均SSE和平均AQ20MRL两者所测量。当氨基酸白氨酸(L)或精氨酸(R)被天冬氨酸取代时，培养板4(图3D)鉴别出SEQ IDNO:35的氨基酸残基480具有改进的测序功能，如平均SSE和平均AQ20MRL两者所测量。当针对天冬酰胺引入氨基酸半胱氨酸(C)或赖氨酸(K)时，培养板5(图3E)鉴别出SEQ ID NO:35的氨基酸残基517具有改进的测序功能，如平均SSE和平均AQ20MRL两者所测量。当针对天冬氨酸引入氨基酸甲硫氨酸(M)或赖氨酸(K)时，培养板6(图3F)鉴别出SEQ ID NO:35的氨基酸残基264具有改进的测序反应特性，如平均SSE和平均AQ20MRL两者所测量。
实例7：产生和鉴别包括L252R的突变Bst DNA聚合酶
此处，将由SEQ ID NO:35(PSP4)组成的参考(对照)聚合酶与基本上根据实例4产生的两种突变聚合酶进行比较。称为PSP4-252R的第一突变聚合酶含有SEQ ID NO:35的残基252处的单一氨基酸取代(L252R取代)。称为PSP4-252R++的第二突变聚合酶含有相对于SEQ ID NO:35的三个氨基酸取代(L252R、H473G和H528T取代)。因而，PSP4-252R++突变聚合酶含有相比于PSP4-252R突变聚合酶的两个组氨酸突变。PSP4-252R++突变体为SEQ ID NO:119，且在本文中还称为“Bst LRX”突变重组聚合酶。
为了测定关键信号，在样品制备期间使核苷酸序列AGTC退火到核酸模板末端。随后在测序反应开始时，当其阅读AGTC序列时测量离子激流系统的信号强度。
图4显示在相同测序条件下获得的对照聚合酶(PSP4)、L252R突变聚合酶(PSP4-252R)和具有双重组氨酸突变的突变体(PSP4-252R++)的核测序数据的结果，其中测序反应如基本上本文实例5中所描述进行。
两种额外组氨酸突变的存在使得相比于参考聚合酶(PSP4)或PSP4-252R突变聚合酶测序度量明显改进。测序度量包括测量平均AQ20阅读长度、关键信号(其为信号度量)、完美阅读长度、平均原始阅读准确度和6bp或7bp的均聚物ACGT的真实准确度。
实例8：L252R突变体的额外组氨酸突变对阅读长度和准确度的影响
此处，进一步评估PSP4背景技术(如实例7中观测到)中的双重组氨酸突变的作用。在相同细胞核酸测序条件下，将不具有组氨酸突变的PSP4-L252R突变聚合酶(来自实例7)与具有两个组氨酸突变的PSP4-252R++突变聚合酶进行比较。基本上根据实例4制备由残基H528T处仅一个组氨酸突变组成的另一突变聚合酶。在单一组氨酸突变聚合酶纯化后，在核酸测序反应中，在基本上如实例3中所描述进行的相同条件下比较所有三个聚合酶(PSP4-252R；PSP4-252R+H528T；以及PSP4-L252R+H528T+H473G)，不同之处在于对照(参考)聚合酶为SEQ ID NO:35(PSP4)。
图5显示测序反应的结果。相比于不具有两种组氨酸突变(PSP4-L252R)的突变聚合酶，具有两种组氨酸突变(一个在位置473处且一个在位置528处)明显改进PSP4-L252R+H528T+H473G的测序度量。当将单一或双重组氨酸突变引入PSP4聚合酶(SEQ ID NO:35)中时，也观测到信噪比(通过峰值信号测量)基本上改进。类似地，当采用双重组氨酸突变时，平均AQ20阅读长度也得到改进。
除非另外定义，否则本文所使用的所有技术和科学术语都具有与本发明所属领域的一般技术人员通常所理解相同的含义。本文(上文和下文)中所提及的所有专利、专利申请、公布的申请、论文和其它公开案都以全文引用的方式并入。如果在本文中明确地或隐含地阐述的定义和/或描述与以引用的方式并入本文中的专利、专利申请、公布的申请和其它公开案中所阐述的任何定义相反或不一致，那么本文中所阐述的定义和/或描述优先于以引用的方式并入的定义。
除非另外指示，否则本发明的实践将采用在所属领域技术内的分子生物学、微生物学以及重组DNA技术的常规技术。在文献中全面解释了此类技术。参见例如Sambrook,J.,和Russell,D.W.,2001,《分子克隆实验指南(Molecular Cloning:A LaboratoryManual)》,第三版；Ausubel,F.M.等人编,2002,《分子生物学简洁方案(Short ProtocolsIn Molecular Biology)》,第五版。
应注意，并非所有一般描述或实例中所描述的活动都是需要的，一部分具体活动可能是不需要的，且可以进行一种或多种除所描述的活动之外的其它活动。再者，活动所列的次序未必是活动被执行的次序。
在一些情况下，已参考特定实施例描述了一些概念。然而，所属领域的一般技术人员了解，可在不脱离如以下权利要求书中所阐述的本发明范围的情况下进行各种修改和改变。因此，说明书和图式应该以说明性而不是限制性意义来看待，且所有这些修改意欲包括在本发明范围内。
本文中公开某些野生型Bst聚合酶的序列
SEQ ID NO:1
Bst DNA聚合酶的野生型581个氨基酸片段
Figure BDA0001649640760000911
Figure BDA0001649640760000921
SEQ ID NO:16
野生型全长(876个氨基酸)Bst DNA聚合酶
Figure BDA0001649640760000922
Figure BDA0001649640760000931
Figure BDA0001649640760000941
 序列表
<110> 丹尼尔•马祖尔
彼得B.•范德霍恩
艾琳•托泽
陈思洪
罗国斌
约书亚•雪利
凯文•海尼曼
<120> 聚合酶组合物和套组以及其使用与制造方法
<130> LT01102 PCT
<150> 62/235,616
<151> 2015-10-01
<160> 122
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 581
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成：野生型Bst DNA聚合酶的较大片段
<400> 1
Met Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala Asp Arg Val Thr Glu Glu Met
1               5                   10                  15
Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr
            20                  25                  30
His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala Val Val Asn Glu His Gly Arg
        35                  40                  45
Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala
    50                  55                  60
Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg
65                  70                  75                  80
Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser
                85                  90                  95
Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val
            100                 105                 110
Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg
        115                 120                 125
Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp
    130                 135                 140
Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp
145                 150                 155                 160
Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp
                165                 170                 175
Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu
            180                 185                 190
Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met
        195                 200                 205
Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly Thr Val Glu Gln Arg Ile Tyr
    210                 215                 220
Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly
225                 230                 235                 240
Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys
                245                 250                 255
Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val Leu Glu Lys Leu Ala Pro Tyr
            260                 265                 270
His Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu His Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu
        275                 280                 285
Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu Lys Val Val Arg Pro Asp Thr
    290                 295                 300
Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg
305                 310                 315                 320
Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu
                325                 330                 335
Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp
            340                 345                 350
Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala
        355                 360                 365
His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu
    370                 375                 380
Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp
385                 390                 395                 400
Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly
                405                 410                 415
Ile Val Tyr Gly Ile Ser Asp Tyr Gly Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile
            420                 425                 430
Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile Glu Arg Tyr Phe Glu Ser Phe
        435                 440                 445
Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln
    450                 455                 460
Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu His Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp
465                 470                 475                 480
Ile Thr Ser Arg Asn Phe Asn Val Arg Ser Phe Ala Glu Arg Met Ala
                485                 490                 495
Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala
            500                 505                 510
Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys Glu Glu Arg Leu Gln Ala His
        515                 520                 525
Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu
    530                 535                 540
Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val Pro Glu Val Met Glu Gln Ala
545                 550                 555                 560
Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val Asp Tyr His Tyr Gly Ser Thr
                565                 570                 575
Trp Tyr Asp Ala Lys
            580
<210> 2
<211> 581
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成：较大片段Bst DNA聚合酶
<400> 2
Met Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala Asp Arg Val Thr Glu Glu Met
1               5                   10                  15
Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr
            20                  25                  30
His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala Val Val Asn Glu Arg Gly Arg
        35                  40                  45
Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala
    50                  55                  60
Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg
65                  70                  75                  80
Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser
                85                  90                  95
Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val
            100                 105                 110
Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg
        115                 120                 125
Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp
    130                 135                 140
Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp
145                 150                 155                 160
Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp
                165                 170                 175
Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu
            180                 185                 190
Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met
        195                 200                 205
Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly Thr Val Glu Gln Arg Ile Tyr
    210                 215                 220
Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly
225                 230                 235                 240
Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys
                245                 250                 255
Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val Leu Glu Lys Leu Ala Pro Tyr
            260                 265                 270
His Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu His Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu
        275                 280                 285
Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu Lys Val Val Arg Pro Asp Thr
    290                 295                 300
Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg
305                 310                 315                 320
Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu
                325                 330                 335
Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp
            340                 345                 350
Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala
        355                 360                 365
His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu
    370                 375                 380
Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp
385                 390                 395                 400
Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly
                405                 410                 415
Ile Val Tyr Gly Ile Ser Asp Tyr Gly Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile
            420                 425                 430
Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile Glu Arg Tyr Phe Gln Ser Phe
        435                 440                 445
Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln
    450                 455                 460
Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu His Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp
465                 470                 475                 480
Ile Thr Ser Arg Asn Phe Asn Val Arg Ser Phe Ala Glu Arg Met Ala
                485                 490                 495
Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala
            500                 505                 510
Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys Glu Glu Arg Leu Gln Ala His
        515                 520                 525
Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu
    530                 535                 540
Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val Pro Glu Val Met Glu Gln Ala
545                 550                 555                 560
Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val Asp Tyr Arg Tyr Gly Ser Thr
                565                 570                 575
Trp Tyr Asp Ala Lys
            580
<210> 3
<211> 581
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成：
<400> 3
Met Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala Asp Arg Val Thr Glu Glu Met
1               5                   10                  15
Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr
            20                  25                  30
His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala Val Val Asn Glu Arg Gly Arg
        35                  40                  45
Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala
    50                  55                  60
Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg
65                  70                  75                  80
Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser
                85                  90                  95
Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val
            100                 105                 110
Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg
        115                 120                 125
Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp
    130                 135                 140
Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp
145                 150                 155                 160
Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp
                165                 170                 175
Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu
            180                 185                 190
Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met
        195                 200                 205
Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly Thr Val Glu Gln Arg Ile Tyr
    210                 215                 220
Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly
225                 230                 235                 240
Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys
                245                 250                 255
Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val Leu Glu Lys Leu Ala Pro Tyr
            260                 265                 270
His Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu His Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu
        275                 280                 285
Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu Lys Val Val Arg Pro Asp Thr
    290                 295                 300
Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg
305                 310                 315                 320
Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu
                325                 330                 335
Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp
            340                 345                 350
Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala
        355                 360                 365
His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu
    370                 375                 380
Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp
385                 390                 395                 400
Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly
                405                 410                 415
Ile Val Tyr Gly Ile Ser Asp Tyr Gly Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile
            420                 425                 430
Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile Glu Arg Tyr Phe Gln Ser Phe
        435                 440                 445
Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln
    450                 455                 460
Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu Arg Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp
465                 470                 475                 480
Ile Thr Ser Arg Asn Phe Asn Val Arg Ser Phe Ala Glu Arg Met Ala
                485                 490                 495
Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala
            500                 505                 510
Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys Glu Glu Arg Leu Gln Ala Ala
        515                 520                 525
Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu
    530                 535                 540
Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val Pro Glu Val Met Glu Gln Ala
545                 550                 555                 560
Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val Asp Tyr Arg Tyr Gly Ser Thr
                565                 570                 575
Trp Tyr Asp Ala Lys
            580
<210> 4
<211> 581
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成：
<400> 4
Met Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala Asp Arg Val Thr Glu Glu Met
1               5                   10                  15
Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr
            20                  25                  30
His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala Val Val Asn Glu Arg Gly Arg
        35                  40                  45
Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala
    50                  55                  60
Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg
65                  70                  75                  80
Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser
                85                  90                  95
Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val
            100                 105                 110
Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg
        115                 120                 125
Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp
    130                 135                 140
Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp
145                 150                 155                 160
Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp
                165                 170                 175
Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu
            180                 185                 190
Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met
        195                 200                 205
Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly Thr Val Glu Gln Arg Ile Tyr
    210                 215                 220
Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly
225                 230                 235                 240
Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys
                245                 250                 255
Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val Leu Glu Lys Leu Ala Pro Tyr
            260                 265                 270
Arg Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu Ala Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu
        275                 280                 285
Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu Lys Val Val Arg Pro Asp Thr
    290                 295                 300
Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg
305                 310                 315                 320
Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu
                325                 330                 335
Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp
            340                 345                 350
Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala
        355                 360                 365
His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu
    370                 375                 380
Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp
385                 390                 395                 400
Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly
                405                 410                 415
Ile Val Tyr Gly Ile Ser Asp Tyr Gly Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile
            420                 425                 430
Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile Glu Arg Tyr Phe Gln Ser Phe
        435                 440                 445
Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln
    450                 455                 460
Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu Arg Arg Arg Arg Phe Leu Pro Asp
465                 470                 475                 480
Ile Thr Ser Arg Asn Phe Asn Val Arg Ser Phe Ala Glu Arg Met Ala
                485                 490                 495
Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala
            500                 505                 510
Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys Glu Glu Arg Leu Gln Ala Ala
        515                 520                 525
Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu
    530                 535                 540
Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val Pro Glu Val Met Glu Gln Ala
545                 550                 555                 560
Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val Asp Tyr Arg Tyr Gly Ser Thr
                565                 570                 575
Trp Tyr Asp Ala Lys
            580
<210> 5
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> misc_feature
<222> (2)..(2)
<223> Xaa可为任何天然存在的氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (4)..(5)
<223> Xaa可为任何天然存在的氨基酸
<400> 5
Asp Xaa Ser Xaa Xaa Glu
1               5
<210> 6
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> misc_feature
<222> (2)..(7)
<223> Xaa可为任何天然存在的氨基酸
<400> 6
Lys Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Gly
1               5
<210> 7
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 7
Val His Asp Glu
1
<210> 8
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> misc_feature
<222> (2)..(3)
<223> Xaa可为任何天然存在的氨基酸
<400> 8
Asp Xaa Xaa Ser Leu Tyr Pro Ser
1               5
<210> 9
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> misc_feature
<222> (2)..(4)
<223> Xaa可为任何天然存在的氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (7)..(7)
<223> Xaa可为任何天然存在的氨基酸
<400> 9
Lys Xaa Xaa Xaa Asn Ser Xaa Tyr Gly
1               5
<210> 10
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 10
Tyr Gly Asp Thr Asp Ser
1               5
<210> 11
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> misc_feature
<222> (2)..(5)
<223> Xaa可为任何天然存在的氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (6)..(6)
<223> Xaa为Phe或Tyr
<400> 11
Asp Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
1               5
<210> 12
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> misc_feature
<222> (2)..(2)
<223> Xaa可为任何天然存在的氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (4)..(6)
<223> Xaa可为任何天然存在的氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (7)..(7)
<223> Xaa为Ser或Ala
<400> 12
Phe Xaa Gly Xaa Xaa Xaa Xaa
1               5
<210> 13
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> misc_feature
<222> (2)..(2)
<223> Xaa可为任何天然存在的氨基酸
<400> 13
Tyr Xaa Asp Asp
1
<210> 14
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> misc_feature
<222> (2)..(8)
<223> Xaa可为任何天然存在的氨基酸
<400> 14
Gly Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Lys
1               5
<210> 15
<211> 832
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成：
<400> 15
Met Arg Gly Met Leu Pro Leu Phe Glu Pro Lys Gly Arg Val Leu Leu
1               5                   10                  15
Val Asp Gly His His Leu Ala Tyr Arg Thr Phe His Ala Leu Lys Gly
            20                  25                  30
Leu Thr Thr Ser Arg Gly Glu Pro Val Gln Ala Val Tyr Gly Phe Ala
        35                  40                  45
Lys Ser Leu Leu Lys Ala Leu Lys Glu Asp Gly Asp Ala Val Ile Val
    50                  55                  60
Val Phe Asp Ala Lys Ala Pro Ser Phe Arg His Glu Ala Tyr Gly Gly
65                  70                  75                  80
Tyr Lys Ala Gly Arg Ala Pro Thr Pro Glu Asp Phe Pro Arg Gln Leu
                85                  90                  95
Ala Leu Ile Lys Glu Leu Val Asp Leu Leu Gly Leu Ala Arg Leu Glu
            100                 105                 110
Val Pro Gly Tyr Glu Ala Asp Asp Val Leu Ala Ser Leu Ala Lys Lys
        115                 120                 125
Ala Glu Lys Glu Gly Tyr Glu Val Arg Ile Leu Thr Ala Asp Lys Asp
    130                 135                 140
Leu Tyr Gln Leu Leu Ser Asp Arg Ile His Val Leu His Pro Glu Gly
145                 150                 155                 160
Tyr Leu Ile Thr Pro Ala Trp Leu Trp Glu Lys Tyr Gly Leu Arg Pro
                165                 170                 175
Asp Gln Trp Ala Asp Tyr Arg Ala Leu Thr Gly Asp Glu Ser Asp Asn
            180                 185                 190
Leu Pro Gly Val Lys Gly Ile Gly Glu Lys Thr Ala Arg Lys Leu Leu
        195                 200                 205
Glu Glu Trp Gly Ser Leu Glu Ala Leu Leu Lys Asn Leu Asp Arg Leu
    210                 215                 220
Lys Pro Ala Ile Arg Glu Lys Ile Leu Ala His Met Asp Asp Leu Lys
225                 230                 235                 240
Leu Ser Trp Asp Leu Ala Lys Val Arg Thr Asp Leu Pro Leu Glu Val
                245                 250                 255
Asp Phe Ala Lys Arg Arg Glu Pro Asp Arg Glu Arg Leu Arg Ala Phe
            260                 265                 270
Leu Glu Arg Leu Glu Phe Gly Ser Leu Leu His Glu Phe Gly Leu Leu
        275                 280                 285
Glu Ser Pro Lys Ala Leu Glu Glu Ala Pro Trp Pro Pro Pro Glu Gly
    290                 295                 300
Ala Phe Val Gly Phe Val Leu Ser Arg Lys Glu Pro Met Trp Ala Asp
305                 310                 315                 320
Leu Leu Ala Leu Ala Ala Ala Arg Gly Gly Arg Val His Arg Ala Pro
                325                 330                 335
Glu Pro Tyr Lys Ala Leu Arg Asp Leu Lys Glu Ala Arg Gly Leu Leu
            340                 345                 350
Ala Lys Asp Leu Ser Val Leu Ala Leu Arg Glu Gly Leu Gly Leu Pro
        355                 360                 365
Pro Gly Asp Asp Pro Met Leu Leu Ala Tyr Leu Leu Asp Pro Ser Asn
    370                 375                 380
Thr Thr Pro Glu Gly Val Ala Arg Arg Tyr Gly Gly Glu Trp Thr Glu
385                 390                 395                 400
Glu Ala Gly Glu Arg Ala Ala Leu Ser Glu Arg Leu Phe Ala Asn Leu
                405                 410                 415
Trp Gly Arg Leu Glu Gly Glu Glu Arg Leu Leu Trp Leu Tyr Arg Glu
            420                 425                 430
Val Glu Arg Pro Leu Ser Ala Val Leu Ala His Met Glu Ala Thr Gly
        435                 440                 445
Val Arg Leu Asp Val Ala Tyr Leu Arg Ala Leu Ser Leu Glu Val Ala
    450                 455                 460
Glu Glu Ile Ala Arg Leu Glu Ala Glu Val Phe Arg Leu Ala Gly His
465                 470                 475                 480
Pro Phe Asn Leu Asn Ser Arg Asp Gln Leu Glu Arg Val Leu Phe Asp
                485                 490                 495
Glu Leu Gly Leu Pro Ala Ile Gly Lys Thr Glu Lys Thr Gly Lys Arg
            500                 505                 510
Ser Thr Ser Ala Ala Val Leu Glu Ala Leu Arg Glu Ala His Pro Ile
        515                 520                 525
Val Glu Lys Ile Leu Gln Tyr Arg Glu Leu Thr Lys Leu Lys Ser Thr
    530                 535                 540
Tyr Ile Asp Pro Leu Pro Asp Leu Ile His Pro Arg Thr Gly Arg Leu
545                 550                 555                 560
His Thr Arg Phe Asn Gln Thr Ala Thr Ala Thr Gly Arg Leu Ser Ser
                565                 570                 575
Ser Asp Pro Asn Leu Gln Asn Ile Pro Val Arg Thr Pro Leu Gly Gln
            580                 585                 590
Arg Ile Arg Arg Ala Phe Ile Ala Glu Glu Gly Trp Leu Leu Val Ala
        595                 600                 605
Leu Asp Tyr Ser Gln Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala His Leu Ser Gly
    610                 615                 620
Asp Glu Asn Leu Ile Arg Val Phe Gln Glu Gly Arg Asp Ile His Thr
625                 630                 635                 640
Glu Thr Ala Ser Trp Met Phe Gly Val Pro Arg Glu Ala Val Asp Pro
                645                 650                 655
Leu Met Arg Arg Ala Ala Lys Thr Ile Asn Phe Gly Val Leu Tyr Gly
            660                 665                 670
Met Ser Ala His Arg Leu Ser Gln Glu Leu Ala Ile Pro Tyr Glu Glu
        675                 680                 685
Ala Gln Ala Phe Ile Glu Arg Tyr Phe Gln Ser Phe Pro Lys Val Arg
    690                 695                 700
Ala Trp Ile Glu Lys Thr Leu Glu Glu Gly Arg Arg Arg Gly Tyr Val
705                 710                 715                 720
Glu Thr Leu Phe Gly Arg Arg Arg Tyr Val Pro Asp Leu Glu Ala Arg
                725                 730                 735
Val Lys Ser Val Arg Glu Ala Ala Glu Arg Met Ala Phe Asn Met Pro
            740                 745                 750
Val Gln Gly Thr Ala Ala Asp Leu Met Lys Leu Ala Met Val Lys Leu
        755                 760                 765
Phe Pro Arg Leu Glu Glu Met Gly Ala Arg Met Leu Leu Gln Val His
    770                 775                 780
Asp Glu Leu Val Leu Glu Ala Pro Lys Glu Arg Ala Glu Ala Val Ala
785                 790                 795                 800
Arg Leu Ala Lys Glu Val Met Glu Gly Val Tyr Pro Leu Ala Val Pro
                805                 810                 815
Leu Glu Val Glu Val Gly Ile Gly Glu Asp Trp Leu Ser Ala Lys Glu
            820                 825                 830
<210> 16
<211> 876
<212> PRT
<213> 生物体：嗜热脂肪芽孢杆菌
<220>
<223> 合成：野生型Bst DNA聚合酶
<400> 16
Met Lys Lys Lys Leu Val Leu Ile Asp Gly Ser Ser Val Ala Tyr Arg
1               5                   10                  15
Ala Phe Phe Ala Leu Pro Leu Leu His Asn Asp Lys Gly Ile His Thr
            20                  25                  30
Asn Ala Val Tyr Gly Phe Thr Met Met Leu Asn Lys Ile Leu Ala Glu
        35                  40                  45
Glu Glu Pro Thr His Met Leu Val Ala Phe Asp Ala Gly Lys Thr Thr
    50                  55                  60
Phe Arg His Glu Ala Phe Gln Glu Tyr Lys Gly Gly Arg Gln Gln Thr
65                  70                  75                  80
Pro Pro Glu Leu Ser Glu Gln Phe Pro Leu Leu Arg Glu Leu Leu Arg
                85                  90                  95
Ala Tyr Arg Ile Pro Ala Tyr Glu Leu Glu Asn Tyr Glu Ala Asp Asp
            100                 105                 110
Ile Ile Gly Thr Leu Ala Ala Arg Ala Glu Gln Glu Gly Phe Glu Val
        115                 120                 125
Lys Val Ile Ser Gly Asp Arg Asp Leu Thr Gln Leu Ala Ser Pro His
    130                 135                 140
Val Thr Val Asp Ile Thr Lys Lys Gly Ile Thr Asp Ile Glu Pro Tyr
145                 150                 155                 160
Thr Pro Glu Thr Val Arg Glu Lys Tyr Gly Leu Thr Pro Glu Gln Ile
                165                 170                 175
Val Asp Leu Lys Gly Leu Met Gly Asp Lys Ser Asp Asn Ile Pro Gly
            180                 185                 190
Val Pro Gly Ile Gly Glu Lys Thr Ala Val Lys Leu Leu Arg Gln Phe
        195                 200                 205
Gly Thr Val Glu Asn Val Leu Ala Ser Ile Asp Glu Ile Lys Gly Glu
    210                 215                 220
Lys Leu Lys Glu Thr Leu Arg Gln His Arg Glu Met Ala Leu Leu Ser
225                 230                 235                 240
Lys Lys Leu Ala Ala Ile Arg Arg Asp Ala Pro Val Glu Leu Ser Leu
                245                 250                 255
Asp Asp Ile Ala Tyr Gln Gly Glu Asp Arg Glu Lys Val Val Ala Leu
            260                 265                 270
Phe Lys Glu Leu Gly Phe Gln Ser Phe Leu Glu Lys Met Glu Ser Pro
        275                 280                 285
Ser Ser Glu Glu Glu Lys Pro Leu Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala
    290                 295                 300
Asp Arg Val Thr Glu Glu Met Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val
305                 310                 315                 320
Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala
                325                 330                 335
Val Val Asn Glu His Gly Arg Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu
            340                 345                 350
Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys
        355                 360                 365
Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly
    370                 375                 380
Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu
385                 390                 395                 400
Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met
                405                 410                 415
Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly
            420                 425                 430
Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val
        435                 440                 445
Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu
    450                 455                 460
Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro
465                 470                 475                 480
Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp
                485                 490                 495
Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly
            500                 505                 510
Thr Val Glu Gln Arg Ile Tyr Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile
        515                 520                 525
Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu
    530                 535                 540
Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val
545                 550                 555                 560
Leu Glu Lys Leu Ala Pro Tyr His Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu His
                565                 570                 575
Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu
            580                 585                 590
Lys Val Val Arg Pro Asp Thr Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln
        595                 600                 605
Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln
    610                 615                 620
Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe
625                 630                 635                 640
Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln
                645                 650                 655
Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met
            660                 665                 670
Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp
        675                 680                 685
Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln
    690                 695                 700
Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly Ile Val Tyr Gly Ile Ser Asp Tyr Gly
705                 710                 715                 720
Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile
                725                 730                 735
Glu Arg Tyr Phe Glu Ser Phe Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn
            740                 745                 750
Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu His
        755                 760                 765
Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp Ile Thr Ser Arg Asn Phe Asn Val Arg
    770                 775                 780
Ser Phe Ala Glu Arg Met Ala Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala
785                 790                 795                 800
Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys
                805                 810                 815
Glu Glu Arg Leu Gln Ala His Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu
            820                 825                 830
Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val
        835                 840                 845
Pro Glu Val Met Glu Gln Ala Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val
    850                 855                 860
Asp Tyr His Tyr Gly Ser Thr Trp Tyr Asp Ala Lys
865                 870                 875
<210> 17
<211> 1746
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成：
<400> 17
atggcaaaaa tggcatttac cctggcagat cgtgttaccg aagaaatgct ggcagataaa 60
gcagcactgg ttgttgaagt tgtggaagaa aactatcatg atgcaccgat tgttggtatt 120
gccgttgtta atgaacgcgg tcgttttttt ctgcgtccgg aaaccgcact ggcagatccg 180
cagtttgttg catggctggg tgatgaaacc aaaaagaaaa gcatgttcga cagcaaacgt 240
gcagcagttg cactgaaatg gaaaggtatt gaactgtgcg gtgtgtcatt tgatctgctg 300
ctggcagcat atctgctgga tccggcacag ggtgttgatg atgttgcagc agcagcaaaa 360
atgaaacagt atgaagcagt tcgtccggat gaagcagttt atggtaaagg tgcaaaacgt 420
gcagttccgg atgaaccggt tctggcagaa catctggttc gtaaagcagc agcaatttgg 480
gaactggaac gtccgtttct ggatgaactg cgtcgtaatg aacaggatcg tctgctggtt 540
gaactggaac agccgctgag cagcattctg gcagaaatgg aatttgccgg tgttaaagtt 600
gataccaaac gtctggaaca aatgggtaaa gaactggccg aacaactggg caccgttgaa 660
cagcgtattt atgaactggc aggccaagaa tttaacatta atagcccgaa acagctgggc 720
gttatcctgt ttgaaaaact gcagctgccg gttctgaaaa aaaccaaaac cggttatagc 780
accagcgcag atgttctgga aaaactggca ccgtatcatg aaattgtgga aaacattctg 840
cactatcgtc agctgggtaa actgcagagc acctatattg aaggtctgct gaaagttgtg 900
cgtccggata ccaaaaaagt gcataccatt tttaaccagg cactgaccca gaccggtcgt 960
ctgagcagca ccgaaccgaa tctgcagaat attccgattc gtctggaaga aggtcgtaaa 1020
attcgtcagg catttgttcc gagcgaaagc gattggctga tttttgcagc agattatagc 1080
cagattgaac tgcgtgttct ggcacatatt gccgaagatg ataatctgat ggaagcattt 1140
cgtcgcgatc tggatattca taccaaaacc gccatggata tttttcaggt tagcgaagat 1200
gaagtgaccc cgaatatgcg tcgtcaggca aaagcagtta attttggtat tgtgtatggc 1260
atcagcgatt atggtctggc acagaatctg aatattagcc gtaaagaagc agccgaattt 1320
atcgaacgtt actttcagag ctttccgggt gttaaacgct atatggaaaa cattgtccaa 1380
gaagccaaac agaaaggtta tgttaccacc ctgctgcatc gtcgtcgtta tctgccgcgt 1440
attaccagcc gtaactttaa tgttcgtagc tttgcagaac gcatggcaat gaataccccg 1500
attcagggta gcgcagcaga tattatcaaa aaagccatga tcgatctgaa cgcacgtctg 1560
aaagaagaac gtctgcaggc acatttactg ctgcaggttc atgatgaact gattctggaa 1620
gcaccgaaag aagaaatgga acgtctttgt cgtctggttc cggaagttat ggaacaggca 1680
gttaccctgc gtgttccgct gaaagttgat tatcgttatg gtagcacctg gtatgatgcc 1740
aaataa 1746
<210> 18
<211> 606
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成：
<400> 18
Met Val Ile Ser Tyr Asp Asn Tyr Val Thr Ile Leu Asp Glu Glu Thr
1               5                   10                  15
Leu Lys Ala Trp Ile Ala Lys Leu Glu Lys Ala Pro Val Phe Ala Phe
            20                  25                  30
Asp Thr Glu Thr Asp Ser Leu Asp Asn Ile Ser Ala Asn Leu Val Gly
        35                  40                  45
Leu Ser Phe Ala Ile Glu Pro Gly Val Ala Ala Tyr Ile Pro Val Ala
    50                  55                  60
His Asp Tyr Leu Asp Ala Pro Asp Gln Ile Ser Arg Glu Arg Ala Leu
65                  70                  75                  80
Glu Leu Leu Lys Pro Leu Leu Glu Asp Glu Lys Ala Leu Lys Val Gly
                85                  90                  95
Gln Asn Leu Lys Tyr Asp Arg Gly Ile Leu Ala Asn Tyr Gly Ile Glu
            100                 105                 110
Leu Arg Gly Ile Ala Phe Asp Thr Met Leu Glu Ser Tyr Ile Leu Asn
        115                 120                 125
Ser Val Ala Gly Arg His Asp Met Asp Ser Leu Ala Glu Arg Trp Leu
    130                 135                 140
Lys His Lys Thr Ile Thr Phe Glu Glu Ile Ala Gly Lys Gly Lys Asn
145                 150                 155                 160
Gln Leu Thr Phe Asn Gln Ile Ala Leu Glu Glu Ala Gly Arg Tyr Ala
                165                 170                 175
Ala Glu Asp Ala Asp Val Thr Leu Gln Leu His Leu Lys Met Trp Pro
            180                 185                 190
Asp Leu Gln Lys His Lys Gly Pro Leu Asn Val Phe Glu Asn Ile Glu
        195                 200                 205
Met Pro Leu Val Pro Val Leu Ser Arg Ile Glu Arg Asn Gly Val Lys
    210                 215                 220
Ile Asp Pro Lys Val Leu His Asn His Ser Glu Glu Leu Thr Leu Arg
225                 230                 235                 240
Leu Ala Glu Leu Glu Lys Lys Ala His Glu Ile Ala Gly Glu Glu Phe
                245                 250                 255
Asn Leu Ser Ser Thr Lys Gln Leu Gln Thr Ile Leu Phe Glu Lys Gln
            260                 265                 270
Gly Ile Lys Pro Leu Lys Lys Thr Pro Gly Gly Ala Pro Ser Thr Ser
        275                 280                 285
Glu Glu Val Leu Glu Glu Leu Ala Leu Asp Tyr Pro Leu Pro Lys Val
    290                 295                 300
Ile Leu Glu Tyr Arg Gly Leu Ala Lys Leu Lys Ser Thr Tyr Thr Asp
305                 310                 315                 320
Lys Leu Pro Leu Met Ile Asn Pro Lys Thr Gly Arg Val His Thr Ser
                325                 330                 335
Tyr His Gln Ala Val Thr Ala Thr Gly Arg Leu Ser Ser Thr Asp Pro
            340                 345                 350
Asn Leu Gln Asn Ile Pro Val Arg Asn Glu Glu Gly Arg Arg Ile Arg
        355                 360                 365
Gln Ala Phe Ile Ala Pro Glu Asp Tyr Val Ile Val Ser Ala Asp Tyr
    370                 375                 380
Ser Gln Ile Glu Leu Arg Ile Met Ala His Leu Ser Arg Asp Lys Gly
385                 390                 395                 400
Leu Leu Thr Ala Phe Ala Glu Gly Lys Asp Ile His Arg Ala Thr Ala
                405                 410                 415
Ala Glu Val Phe Gly Leu Pro Leu Glu Thr Val Thr Ser Glu Gln Arg
            420                 425                 430
Arg Ser Ala Lys Ala Ile Asn Phe Gly Leu Ile Tyr Gly Met Ser Ala
        435                 440                 445
Phe Gly Leu Ala Arg Gln Leu Asn Ile Pro Arg Lys Glu Ala Gln Lys
    450                 455                 460
Tyr Met Asp Leu Tyr Phe Glu Arg Tyr Pro Gly Val Leu Glu Tyr Met
465                 470                 475                 480
Glu Arg Thr Arg Ala Gln Ala Lys Glu Gln Gly Tyr Val Glu Thr Leu
                485                 490                 495
Asp Gly Arg Arg Leu Tyr Leu Pro Asp Ile Lys Ser Ser Asn Gly Ala
            500                 505                 510
Arg Arg Ala Ala Ala Glu Arg Ala Ala Ile Asn Ala Pro Met Gln Gly
        515                 520                 525
Thr Ala Ala Asp Ile Ile Lys Arg Ala Met Ile Ala Val Asp Ala Trp
    530                 535                 540
Leu Gln Ala Glu Gln Pro Arg Val Arg Met Ile Met Gln Val His Asp
545                 550                 555                 560
Glu Leu Val Phe Glu Val His Lys Asp Asp Val Asp Ala Val Ala Lys
                565                 570                 575
Gln Ile His Gln Leu Met Glu Asn Cys Thr Arg Leu Asp Val Pro Leu
            580                 585                 590
Leu Val Glu Val Gly Ser Gly Glu Asn Trp Asp Gln Ala His
        595                 600                 605
<210> 19
<211> 581
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成：
<400> 19
Met Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala Asp Arg Val Thr Glu Glu Met
1               5                   10                  15
Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr
            20                  25                  30
His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala Val Val Asn Glu Arg Gly Arg
        35                  40                  45
Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala
    50                  55                  60
Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg
65                  70                  75                  80
Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser
                85                  90                  95
Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val
            100                 105                 110
Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg
        115                 120                 125
Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp
    130                 135                 140
Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp
145                 150                 155                 160
Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp
                165                 170                 175
Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu
            180                 185                 190
Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met
        195                 200                 205
Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly Thr Val Lys Gln Arg Ile Tyr
    210                 215                 220
Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile Arg Ser Pro Lys Gln Leu Gly
225                 230                 235                 240
Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys
                245                 250                 255
Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val Leu Glu Lys Leu Ala Pro Tyr
            260                 265                 270
His Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu His Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu
        275                 280                 285
Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu Lys Val Val Arg Pro Asp Thr
    290                 295                 300
Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg
305                 310                 315                 320
Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu
                325                 330                 335
Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp
            340                 345                 350
Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala
        355                 360                 365
His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu
    370                 375                 380
Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp
385                 390                 395                 400
Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly
                405                 410                 415
Ile Val Tyr Gly Ile Ser Lys Tyr Gly Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile
            420                 425                 430
Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile Glu Arg Tyr Phe Gln Ser Phe
        435                 440                 445
Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln
    450                 455                 460
Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu His Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp
465                 470                 475                 480
Ile Thr Ser Arg Asn Phe Asn Val Arg Ser Phe Ala Glu Arg Met Ala
                485                 490                 495
Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala
            500                 505                 510
Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys Glu Glu Arg Leu Gln Ala His
        515                 520                 525
Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu
    530                 535                 540
Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val Pro Glu Val Met Glu Gln Ala
545                 550                 555                 560
Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val Asp Tyr Arg Tyr Gly Ser Thr
                565                 570                 575
Trp Tyr Asp Ala Lys
            580
<210> 20
<211> 581
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成：
<400> 20
Met Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala Asp Arg Val Thr Glu Glu Met
1               5                   10                  15
Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr
            20                  25                  30
His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala Val Val Asn Glu Arg Gly Arg
        35                  40                  45
Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala
    50                  55                  60
Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg
65                  70                  75                  80
Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser
                85                  90                  95
Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val
            100                 105                 110
Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg
        115                 120                 125
Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp
    130                 135                 140
Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp
145                 150                 155                 160
Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp
                165                 170                 175
Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu
            180                 185                 190
Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met
        195                 200                 205
Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly Thr Val Lys Gln Arg Ile Tyr
    210                 215                 220
Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile Arg Ser Pro Lys Gln Leu Gly
225                 230                 235                 240
Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys
                245                 250                 255
Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val Leu Glu Lys Leu Ala Pro Tyr
            260                 265                 270
His Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu His Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu
        275                 280                 285
Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu Lys Val Val Arg Pro Asp Thr
    290                 295                 300
Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg
305                 310                 315                 320
Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu
                325                 330                 335
Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp
            340                 345                 350
Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala
        355                 360                 365
His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu
    370                 375                 380
Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp
385                 390                 395                 400
Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly
                405                 410                 415
Ile Val Tyr Gly Ile Ser Lys Tyr Gly Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile
            420                 425                 430
Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile Glu Arg Tyr Phe Gln Ser Phe
        435                 440                 445
Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln
    450                 455                 460
Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu Arg Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp
465                 470                 475                 480
Ile Thr Ser Arg Asn Phe Asn Val Arg Ser Phe Ala Glu Arg Met Ala
                485                 490                 495
Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala
            500                 505                 510
Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys Glu Glu Arg Leu Gln Ala Ala
        515                 520                 525
Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu
    530                 535                 540
Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val Pro Glu Val Met Glu Gln Ala
545                 550                 555                 560
Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val Asp Tyr Arg Tyr Gly Ser Thr
                565                 570                 575
Trp Tyr Asp Ala Lys
            580
<210> 21
<211> 36
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成：寡聚221
<220>
<221> misc_feature
<222> (34)..(34)
<223> n为荧光素-dT
<400> 21
tttttttgca ggtgacaggt ttttcctgtc accngc 36
<210> 22
<211> 44
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成：发夹寡聚物
<400> 22
tttttttccc tttcctttcg ggtgacaggt ttttcctgtc accc 44
<210> 23
<211> 1740
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成：
<400> 23
atggctaaaa tggcttttac tcttgctgat cgtgttactg aagaaatgct tgctgataaa 60
gctgctcttg ttgttgaagt tgttgaagaa aattatcatg atgctcctat tgttggtatt 120
gctgttgtta atgaacgtgg tcgttttttt cttcgtcctg aaactgctct tgctgatcct 180
caatttgttg cttggcttgg tgatgaaact aaaaaaaaat ctatgtttga ttctaaacgt 240
gctgctgttg ctcttaaatg gaaaggtatt gaactttgtg gtgtttcttt tgatcttctt 300
cttgctgctt atcttcttga tcctgctcaa ggtgttgatg atgttgctgc tgctgctaaa 360
atgaaacaat atgaagctgt tcgtcctgat gaagctgttt atggtaaagg tgctaaacgt 420
gctgttcctg atgaacctgt tcttgctgaa catcttgttc gtaaagctgc tgctatttgg 480
gaacttgaac gtccttttct tgatgaactt cgtcgtaatg aacaagatcg tcttcttgtt 540
gaacttgaac aacctctttc ttctattctt gctgaaatgg aatttgctgg tgttaaagtt 600
gatactaaac gtcttgaaca aatgggtaaa gaacttgctg aacaacttgg tactgttaaa 660
caacgtattt atgaacttgc tggtcaagaa tttaatattc gttctcctaa acaacttggt 720
gttattcttt ttgaaaaact tcaacttcct gttcttaaaa aaactaaaac tggttattct 780
acttctgctg atgttcttga aaaacttgct ccttatcatg aaattgttga aaatattctt 840
cattatcgtc aacttggtaa acttcaatct acttatattg aaggtcttct taaagttgtt 900
cgtcctgata ctaaaaaagt tcatactatt tttaatcaag ctcttactca aactggtcgt 960
ctttcttcta ctgaacctaa tcttcaaaat attcctattc gtcttgaaga aggtcgtaaa 1020
attcgtcaag cttttgttcc ttctgaatct gattggctta tttttgctgc tgattattct 1080
caaattgaac ttcgtgttct tgctcatatt gctgaagatg ataatcttat ggaagctttt 1140
cgtcgtgatc ttgatattca tactaaaact gctatggata tttttcaagt ttctgaagat 1200
gaagttactc ctaatatgcg tcgtcaagct aaagctgtta attttggtat tgtttatggt 1260
atttctaaat atggtcttgc tcaaaatctt aatatttctc gtaaagaagc tgctgaattt 1320
attgaacgtt attttcaatc ttttcctggt gttaaacgtt atatggaaaa tattgttcaa 1380
gaagctaaac aaaaaggtta tgttactact cttcttcatc gtcgtcgtta tcttcctgat 1440
attacttctc gtaattttaa tgttcgttct tttgctgaac gtatggctat gaatactcct 1500
attcaaggtt ctgctgctga tattattaaa aaagctatga ttgatcttaa tgctcgtctt 1560
aaagaagaac gtcttcaagc tcatcttctt cttcaagttc atgatgaact tattcttgaa 1620
gctcctaaag aagaaatgga acgtctttgt cgtcttgttc ctgaagttat ggaacaagct 1680
gttactcttc gtgttcctct taaagttgat tatcgttatg gttctacttg gtatgatgct 1740
<210> 24
<211> 832
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成：
<400> 24
Met Arg Gly Met Leu Pro Leu Phe Glu Pro Lys Gly Arg Val Leu Leu
1               5                   10                  15
Val Asp Gly His His Leu Ala Tyr Arg Thr Phe His Ala Leu Lys Gly
            20                  25                  30
Leu Thr Thr Ser Arg Gly Glu Pro Val Gln Ala Val Tyr Gly Phe Ala
        35                  40                  45
Lys Ser Leu Leu Lys Ala Leu Lys Glu Asp Gly Asp Ala Val Ile Val
    50                  55                  60
Val Phe Asp Ala Lys Ala Pro Ser Phe Arg His Glu Ala Tyr Gly Gly
65                  70                  75                  80
Tyr Lys Ala Gly Arg Ala Pro Thr Pro Glu Asp Phe Pro Arg Gln Leu
                85                  90                  95
Ala Leu Ile Lys Glu Leu Val Asp Leu Leu Gly Leu Ala Arg Leu Glu
            100                 105                 110
Val Pro Gly Tyr Glu Ala Asp Asp Val Leu Ala Ser Leu Ala Lys Lys
        115                 120                 125
Ala Glu Lys Glu Gly Tyr Glu Val Arg Ile Leu Thr Ala Asp Lys Asp
    130                 135                 140
Leu Tyr Gln Leu Leu Ser Asp Arg Ile His Val Leu His Pro Glu Gly
145                 150                 155                 160
Tyr Leu Ile Thr Pro Ala Trp Leu Trp Glu Lys Tyr Gly Leu Arg Pro
                165                 170                 175
Asp Gln Trp Ala Asp Tyr Arg Ala Leu Thr Gly Asp Glu Ser Asp Asn
            180                 185                 190
Leu Pro Gly Val Lys Gly Ile Gly Glu Lys Thr Ala Arg Lys Leu Leu
        195                 200                 205
Glu Glu Trp Gly Ser Leu Glu Ala Leu Leu Lys Asn Leu Asp Arg Leu
    210                 215                 220
Lys Pro Ala Ile Arg Glu Lys Ile Leu Ala His Met Asp Asp Leu Lys
225                 230                 235                 240
Leu Ser Trp Asp Leu Ala Lys Val Arg Thr Asp Leu Pro Leu Glu Val
                245                 250                 255
Asp Phe Ala Lys Arg Arg Glu Pro Asp Arg Glu Arg Leu Arg Ala Phe
            260                 265                 270
Leu Glu Arg Leu Glu Phe Gly Ser Leu Leu His Glu Phe Gly Leu Leu
        275                 280                 285
Glu Ser Pro Lys Ala Leu Glu Glu Ala Pro Trp Pro Pro Pro Glu Gly
    290                 295                 300
Ala Phe Val Gly Phe Val Leu Ser Arg Lys Glu Pro Met Trp Ala Asp
305                 310                 315                 320
Leu Leu Ala Leu Ala Ala Ala Arg Gly Gly Arg Val His Arg Ala Pro
                325                 330                 335
Glu Pro Tyr Lys Ala Leu Arg Asp Leu Lys Glu Ala Arg Gly Leu Leu
            340                 345                 350
Ala Lys Asp Leu Ser Val Leu Ala Leu Arg Glu Gly Leu Gly Leu Pro
        355                 360                 365
Pro Gly Asp Asp Pro Met Leu Leu Ala Tyr Leu Leu Asp Pro Ser Asn
    370                 375                 380
Thr Thr Pro Glu Gly Val Ala Arg Arg Tyr Gly Gly Glu Trp Thr Glu
385                 390                 395                 400
Glu Ala Gly Glu Arg Ala Ala Leu Ser Glu Arg Leu Phe Ala Asn Leu
                405                 410                 415
Trp Gly Arg Leu Glu Gly Glu Glu Arg Leu Leu Trp Leu Tyr Arg Glu
            420                 425                 430
Val Glu Arg Pro Leu Ser Ala Val Leu Ala His Met Glu Ala Thr Gly
        435                 440                 445
Val Arg Leu Asp Val Ala Tyr Leu Arg Ala Leu Ser Leu Glu Val Ala
    450                 455                 460
Glu Glu Ile Ala Arg Leu Glu Ala Glu Val Phe Arg Leu Ala Gly His
465                 470                 475                 480
Pro Phe Asn Leu Asn Ser Arg Asp Gln Leu Glu Arg Val Leu Phe Asp
                485                 490                 495
Glu Leu Gly Leu Pro Ala Ile Gly Lys Thr Glu Lys Thr Gly Lys Arg
            500                 505                 510
Ser Thr Ser Ala Ala Val Leu Glu Ala Leu Arg Glu Ala His Pro Ile
        515                 520                 525
Val Glu Lys Ile Leu Gln Tyr Arg Glu Leu Thr Lys Leu Lys Ser Thr
    530                 535                 540
Tyr Ile Asp Pro Leu Pro Asp Leu Ile His Pro Arg Thr Gly Arg Leu
545                 550                 555                 560
His Thr Arg Phe Asn Gln Thr Ala Thr Ala Thr Gly Arg Leu Ser Ser
                565                 570                 575
Ser Asp Pro Asn Leu Gln Asn Ile Pro Val Arg Thr Pro Leu Gly Gln
            580                 585                 590
Arg Ile Arg Arg Ala Phe Ile Ala Glu Glu Gly Trp Leu Leu Val Ala
        595                 600                 605
Leu Asp Tyr Ser Gln Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala His Leu Ser Gly
    610                 615                 620
Asp Glu Asn Leu Ile Arg Val Phe Gln Glu Gly Arg Asp Ile His Thr
625                 630                 635                 640
Glu Thr Ala Ser Trp Met Phe Gly Val Pro Arg Glu Ala Val Asp Pro
                645                 650                 655
Leu Met Arg Arg Ala Ala Lys Thr Ile Asn Phe Gly Val Leu Tyr Gly
            660                 665                 670
Met Ser Ala His Arg Leu Ser Gln Glu Leu Ala Ile Pro Tyr Glu Glu
        675                 680                 685
Ala Gln Ala Phe Ile Glu Arg Tyr Phe Gln Ser Phe Pro Lys Val Arg
    690                 695                 700
Ala Trp Ile Glu Lys Thr Leu Glu Glu Gly Arg Arg Arg Gly Tyr Val
705                 710                 715                 720
Glu Thr Leu Phe Gly Arg Arg Arg Tyr Val Pro Arg Leu Glu Ala Arg
                725                 730                 735
Val Lys Ser Val Arg Glu Ala Ala Glu Arg Met Ala Phe Asn Met Pro
            740                 745                 750
Val Gln Gly Thr Ala Ala Asp Leu Met Lys Leu Ala Met Val Lys Leu
        755                 760                 765
Phe Pro Arg Leu Glu Glu Met Gly Ala Arg Met Leu Leu Gln Val His
    770                 775                 780
Asp Glu Leu Val Leu Glu Ala Pro Lys Glu Arg Ala Glu Ala Val Ala
785                 790                 795                 800
Arg Leu Ala Lys Glu Val Met Glu Gly Val Tyr Pro Leu Ala Val Pro
                805                 810                 815
Leu Glu Val Glu Val Gly Ile Gly Glu Asp Trp Leu Ser Ala Lys Glu
            820                 825                 830
<210> 25
<211> 876
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成：
<400> 25
Met Lys Lys Lys Leu Val Leu Ile Asp Gly Ser Ser Val Ala Tyr Arg
1               5                   10                  15
Ala Phe Phe Ala Leu Pro Leu Leu His Asn Asp Lys Gly Ile His Thr
            20                  25                  30
Asn Ala Val Tyr Gly Phe Thr Met Met Leu Asn Lys Ile Leu Ala Glu
        35                  40                  45
Glu Glu Pro Thr His Met Leu Val Ala Phe Asp Ala Gly Lys Thr Thr
    50                  55                  60
Phe Arg His Glu Ala Phe Gln Glu Tyr Lys Gly Gly Arg Gln Gln Thr
65                  70                  75                  80
Pro Pro Glu Leu Ser Glu Gln Phe Pro Leu Leu Arg Glu Leu Leu Arg
                85                  90                  95
Ala Tyr Arg Ile Pro Ala Tyr Glu Leu Glu Asn Tyr Glu Ala Asp Asp
            100                 105                 110
Ile Ile Gly Thr Leu Ala Ala Arg Ala Glu Gln Glu Gly Phe Glu Val
        115                 120                 125
Lys Val Ile Ser Gly Asp Arg Asp Leu Thr Gln Leu Ala Ser Pro His
    130                 135                 140
Val Thr Val Asp Ile Thr Lys Lys Gly Ile Thr Asp Ile Glu Pro Tyr
145                 150                 155                 160
Thr Pro Glu Thr Val Arg Glu Lys Tyr Gly Leu Thr Pro Glu Gln Ile
                165                 170                 175
Val Asp Leu Lys Gly Leu Met Gly Asp Lys Ser Asp Asn Ile Pro Gly
            180                 185                 190
Val Pro Gly Ile Gly Glu Lys Thr Ala Val Lys Leu Leu Arg Gln Phe
        195                 200                 205
Gly Thr Val Glu Asn Val Leu Ala Ser Ile Asp Glu Ile Lys Gly Glu
    210                 215                 220
Lys Leu Lys Glu Thr Leu Arg Gln His Arg Glu Met Ala Leu Leu Ser
225                 230                 235                 240
Lys Lys Leu Ala Ala Ile Arg Arg Asp Ala Pro Val Glu Leu Ser Leu
                245                 250                 255
Asp Asp Ile Ala Tyr Gln Gly Glu Asp Arg Glu Lys Val Val Ala Leu
            260                 265                 270
Phe Lys Glu Leu Gly Phe Gln Ser Phe Leu Glu Lys Met Glu Ser Pro
        275                 280                 285
Ser Ser Glu Glu Glu Lys Pro Leu Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala
    290                 295                 300
Asp Arg Val Thr Glu Glu Met Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val
305                 310                 315                 320
Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala
                325                 330                 335
Val Val Asn Glu His Gly Arg Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu
            340                 345                 350
Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys
        355                 360                 365
Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly
    370                 375                 380
Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu
385                 390                 395                 400
Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met
                405                 410                 415
Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly
            420                 425                 430
Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val
        435                 440                 445
Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu
    450                 455                 460
Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro
465                 470                 475                 480
Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp
                485                 490                 495
Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly
            500                 505                 510
Thr Val Glu Gln Arg Ile Tyr Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile
        515                 520                 525
Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu
    530                 535                 540
Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val
545                 550                 555                 560
Leu Glu Lys Leu Ala Pro Tyr His Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu His
                565                 570                 575
Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu
            580                 585                 590
Lys Val Val Arg Pro Asp Thr Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln
        595                 600                 605
Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln
    610                 615                 620
Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe
625                 630                 635                 640
Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln
                645                 650                 655
Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met
            660                 665                 670
Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp
        675                 680                 685
Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln
    690                 695                 700
Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly Ile Val Tyr Gly Ile Ser Asp Tyr Gly
705                 710                 715                 720
Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile
                725                 730                 735
Glu Arg Tyr Phe Glu Ser Phe Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn
            740                 745                 750
Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu His
        755                 760                 765
Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp Ile Thr Ser Arg Asn Phe Arg Val Arg
    770                 775                 780
Ser Phe Ala Glu Arg Met Ala Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala
785                 790                 795                 800
Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys
                805                 810                 815
Glu Glu Arg Leu Gln Ala His Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu
            820                 825                 830
Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val
        835                 840                 845
Pro Glu Val Met Glu Gln Ala Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val
    850                 855                 860
Asp Tyr His Tyr Gly Ser Thr Trp Tyr Asp Ala Lys
865                 870                 875
<210> 26
<211> 876
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成：
<400> 26
Met Lys Lys Lys Leu Val Leu Ile Asp Gly Ser Ser Val Ala Tyr Arg
1               5                   10                  15
Ala Phe Phe Ala Leu Pro Leu Leu His Asn Asp Lys Gly Ile His Thr
            20                  25                  30
Asn Ala Val Tyr Gly Phe Thr Met Met Leu Asn Lys Ile Leu Ala Glu
        35                  40                  45
Glu Glu Pro Thr His Met Leu Val Ala Phe Asp Ala Gly Lys Thr Thr
    50                  55                  60
Phe Arg His Glu Ala Phe Gln Glu Tyr Lys Gly Gly Arg Gln Gln Thr
65                  70                  75                  80
Pro Pro Glu Leu Ser Glu Gln Phe Pro Leu Leu Arg Glu Leu Leu Arg
                85                  90                  95
Ala Tyr Arg Ile Pro Ala Tyr Glu Leu Glu Asn Tyr Glu Ala Asp Asp
            100                 105                 110
Ile Ile Gly Thr Leu Ala Ala Arg Ala Glu Gln Glu Gly Phe Glu Val
        115                 120                 125
Lys Val Ile Ser Gly Asp Arg Asp Leu Thr Gln Leu Ala Ser Pro His
    130                 135                 140
Val Thr Val Asp Ile Thr Lys Lys Gly Ile Thr Asp Ile Glu Pro Tyr
145                 150                 155                 160
Thr Pro Glu Thr Val Arg Glu Lys Tyr Gly Leu Thr Pro Glu Gln Ile
                165                 170                 175
Val Asp Leu Lys Gly Leu Met Gly Asp Lys Ser Asp Asn Ile Pro Gly
            180                 185                 190
Val Pro Gly Ile Gly Glu Lys Thr Ala Val Lys Leu Leu Arg Gln Phe
        195                 200                 205
Gly Thr Val Glu Asn Val Leu Ala Ser Ile Asp Glu Ile Lys Gly Glu
    210                 215                 220
Lys Leu Lys Glu Thr Leu Arg Gln His Arg Glu Met Ala Leu Leu Ser
225                 230                 235                 240
Lys Lys Leu Ala Ala Ile Arg Arg Asp Ala Pro Val Glu Leu Ser Leu
                245                 250                 255
Asp Asp Ile Ala Tyr Gln Gly Glu Asp Arg Glu Lys Val Val Ala Leu
            260                 265                 270
Phe Lys Glu Leu Gly Phe Gln Ser Phe Leu Glu Lys Met Glu Ser Pro
        275                 280                 285
Ser Ser Glu Glu Glu Lys Pro Leu Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala
    290                 295                 300
Asp Arg Val Thr Glu Glu Met Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val
305                 310                 315                 320
Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala
                325                 330                 335
Val Val Asn Glu His Gly Arg Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu
            340                 345                 350
Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys
        355                 360                 365
Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly
    370                 375                 380
Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu
385                 390                 395                 400
Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met
                405                 410                 415
Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly
            420                 425                 430
Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val
        435                 440                 445
Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu
    450                 455                 460
Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro
465                 470                 475                 480
Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp
                485                 490                 495
Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly
            500                 505                 510
Thr Val Glu Gln Arg Ile Tyr Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile
        515                 520                 525
Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu
    530                 535                 540
Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val
545                 550                 555                 560
Leu Glu Lys Leu Ala Pro Tyr His Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu His
                565                 570                 575
Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu
            580                 585                 590
Lys Val Val Arg Pro Asp Thr Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln
        595                 600                 605
Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln
    610                 615                 620
Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe
625                 630                 635                 640
Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln
                645                 650                 655
Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met
            660                 665                 670
Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp
        675                 680                 685
Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln
    690                 695                 700
Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly Ile Val Tyr Gly Ile Ser Lys Tyr Gly
705                 710                 715                 720
Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile
                725                 730                 735
Glu Arg Tyr Phe Glu Ser Phe Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn
            740                 745                 750
Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu His
        755                 760                 765
Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp Ile Thr Ser Arg Asn Phe Arg Val Arg
    770                 775                 780
Ser Phe Ala Glu Arg Met Ala Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala
785                 790                 795                 800
Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys
                805                 810                 815
Glu Glu Arg Leu Gln Ala His Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu
            820                 825                 830
Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val
        835                 840                 845
Pro Glu Val Met Glu Gln Ala Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val
    850                 855                 860
Asp Tyr His Tyr Gly Ser Thr Trp Tyr Asp Ala Lys
865                 870                 875
<210> 27
<211> 876
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成：
<400> 27
Met Lys Lys Lys Leu Val Leu Ile Asp Gly Ser Ser Val Ala Tyr Arg
1               5                   10                  15
Ala Phe Phe Ala Leu Pro Leu Leu His Asn Asp Lys Gly Ile His Thr
            20                  25                  30
Asn Ala Val Tyr Gly Phe Thr Met Met Leu Asn Lys Ile Leu Ala Glu
        35                  40                  45
Glu Glu Pro Thr His Met Leu Val Ala Phe Asp Ala Gly Lys Thr Thr
    50                  55                  60
Phe Arg His Glu Ala Phe Gln Glu Tyr Lys Gly Gly Arg Gln Gln Thr
65                  70                  75                  80
Pro Pro Glu Leu Ser Glu Gln Phe Pro Leu Leu Arg Glu Leu Leu Arg
                85                  90                  95
Ala Tyr Arg Ile Pro Ala Tyr Glu Leu Glu Asn Tyr Glu Ala Asp Asp
            100                 105                 110
Ile Ile Gly Thr Leu Ala Ala Arg Ala Glu Gln Glu Gly Phe Glu Val
        115                 120                 125
Lys Val Ile Ser Gly Asp Arg Asp Leu Thr Gln Leu Ala Ser Pro His
    130                 135                 140
Val Thr Val Asp Ile Thr Lys Lys Gly Ile Thr Asp Ile Glu Pro Tyr
145                 150                 155                 160
Thr Pro Glu Thr Val Arg Glu Lys Tyr Gly Leu Thr Pro Glu Gln Ile
                165                 170                 175
Val Asp Leu Lys Gly Leu Met Gly Asp Lys Ser Asp Asn Ile Pro Gly
            180                 185                 190
Val Pro Gly Ile Gly Glu Lys Thr Ala Val Lys Leu Leu Arg Gln Phe
        195                 200                 205
Gly Thr Val Glu Asn Val Leu Ala Ser Ile Asp Glu Ile Lys Gly Glu
    210                 215                 220
Lys Leu Lys Glu Thr Leu Arg Gln His Arg Glu Met Ala Leu Leu Ser
225                 230                 235                 240
Lys Lys Leu Ala Ala Ile Arg Arg Asp Ala Pro Val Glu Leu Ser Leu
                245                 250                 255
Asp Asp Ile Ala Tyr Gln Gly Glu Asp Arg Glu Lys Val Val Ala Leu
            260                 265                 270
Phe Lys Glu Leu Gly Phe Gln Ser Phe Leu Glu Lys Met Glu Ser Pro
        275                 280                 285
Ser Ser Glu Glu Glu Lys Pro Leu Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala
    290                 295                 300
Asp Arg Val Thr Glu Glu Met Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val
305                 310                 315                 320
Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala
                325                 330                 335
Val Val Asn Glu His Gly Arg Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu
            340                 345                 350
Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys
        355                 360                 365
Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly
    370                 375                 380
Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu
385                 390                 395                 400
Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met
                405                 410                 415
Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly
            420                 425                 430
Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val
        435                 440                 445
Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu
    450                 455                 460
Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro
465                 470                 475                 480
Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp
                485                 490                 495
Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly
            500                 505                 510
Thr Val Glu Gln Arg Ile Tyr Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile
        515                 520                 525
Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu
    530                 535                 540
Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val
545                 550                 555                 560
Leu Glu Lys Leu Ala Pro Tyr Asn Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu His
                565                 570                 575
Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu
            580                 585                 590
Lys Val Val Arg Pro Asp Thr Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln
        595                 600                 605
Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln
    610                 615                 620
Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe
625                 630                 635                 640
Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln
                645                 650                 655
Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met
            660                 665                 670
Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp
        675                 680                 685
Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln
    690                 695                 700
Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly Ile Val Tyr Gly Ile Ser Lys Tyr Gly
705                 710                 715                 720
Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile
                725                 730                 735
Glu Arg Tyr Phe Glu Ser Phe Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn
            740                 745                 750
Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu His
        755                 760                 765
Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp Ile Thr Ser Arg Asn Phe Arg Val Arg
    770                 775                 780
Ser Phe Ala Glu Arg Met Ala Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala
785                 790                 795                 800
Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys
                805                 810                 815
Glu Glu Arg Leu Gln Ala His Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu
            820                 825                 830
Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val
        835                 840                 845
Pro Glu Val Met Glu Gln Ala Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val
    850                 855                 860
Asp Tyr His Tyr Gly Ser Thr Trp Tyr Asp Ala Lys
865                 870                 875
<210> 28
<211> 876
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成：
<400> 28
Met Lys Lys Lys Leu Val Leu Ile Asp Gly Ser Ser Val Ala Tyr Arg
1               5                   10                  15
Ala Phe Phe Ala Leu Pro Leu Leu His Asn Asp Lys Gly Ile His Thr
            20                  25                  30
Asn Ala Val Tyr Gly Phe Thr Met Met Leu Asn Lys Ile Leu Ala Glu
        35                  40                  45
Glu Glu Pro Thr His Met Leu Val Ala Phe Asp Ala Gly Lys Thr Thr
    50                  55                  60
Phe Arg His Glu Ala Phe Gln Glu Tyr Lys Gly Gly Arg Gln Gln Thr
65                  70                  75                  80
Pro Pro Glu Leu Ser Glu Gln Phe Pro Leu Leu Arg Glu Leu Leu Arg
                85                  90                  95
Ala Tyr Arg Ile Pro Ala Tyr Glu Leu Glu Asn Tyr Glu Ala Asp Asp
            100                 105                 110
Ile Ile Gly Thr Leu Ala Ala Arg Ala Glu Gln Glu Gly Phe Glu Val
        115                 120                 125
Lys Val Ile Ser Gly Asp Arg Asp Leu Thr Gln Leu Ala Ser Pro His
    130                 135                 140
Val Thr Val Asp Ile Thr Lys Lys Gly Ile Thr Asp Ile Glu Pro Tyr
145                 150                 155                 160
Thr Pro Glu Thr Val Arg Glu Lys Tyr Gly Leu Thr Pro Glu Gln Ile
                165                 170                 175
Val Asp Leu Lys Gly Leu Met Gly Asp Lys Ser Asp Asn Ile Pro Gly
            180                 185                 190
Val Pro Gly Ile Gly Glu Lys Thr Ala Val Lys Leu Leu Arg Gln Phe
        195                 200                 205
Gly Thr Val Glu Asn Val Leu Ala Ser Ile Asp Glu Ile Lys Gly Glu
    210                 215                 220
Lys Leu Lys Glu Thr Leu Arg Gln His Arg Glu Met Ala Leu Leu Ser
225                 230                 235                 240
Lys Lys Leu Ala Ala Ile Arg Arg Asp Ala Pro Val Glu Leu Ser Leu
                245                 250                 255
Asp Asp Ile Ala Tyr Gln Gly Glu Asp Arg Glu Lys Val Val Ala Leu
            260                 265                 270
Phe Lys Glu Leu Gly Phe Gln Ser Phe Leu Glu Lys Met Glu Ser Pro
        275                 280                 285
Ser Ser Glu Glu Glu Lys Pro Leu Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala
    290                 295                 300
Asp Arg Val Thr Glu Glu Met Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val
305                 310                 315                 320
Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala
                325                 330                 335
Val Val Asn Glu His Gly Arg Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu
            340                 345                 350
Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys
        355                 360                 365
Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly
    370                 375                 380
Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu
385                 390                 395                 400
Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met
                405                 410                 415
Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly
            420                 425                 430
Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val
        435                 440                 445
Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu
    450                 455                 460
Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro
465                 470                 475                 480
Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp
                485                 490                 495
Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly
            500                 505                 510
Thr Val Glu Gln Arg Ile Tyr Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile
        515                 520                 525
Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu
    530                 535                 540
Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val
545                 550                 555                 560
Leu Glu Lys Leu Ala Pro Tyr His Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu Met
                565                 570                 575
Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu
            580                 585                 590
Lys Val Val Arg Pro Asp Thr Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln
        595                 600                 605
Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln
    610                 615                 620
Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe
625                 630                 635                 640
Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln
                645                 650                 655
Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met
            660                 665                 670
Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp
        675                 680                 685
Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln
    690                 695                 700
Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly Ile Val Tyr Gly Ile Ser Asp Tyr Gly
705                 710                 715                 720
Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile
                725                 730                 735
Glu Arg Tyr Phe Glu Ser Phe Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn
            740                 745                 750
Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu His
        755                 760                 765
Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp Ile Thr Ser Arg Asn Phe Arg Val Arg
    770                 775                 780
Ser Phe Ala Glu Arg Met Ala Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala
785                 790                 795                 800
Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys
                805                 810                 815
Glu Glu Arg Leu Gln Ala His Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu
            820                 825                 830
Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val
        835                 840                 845
Pro Glu Val Met Glu Gln Ala Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val
    850                 855                 860
Asp Tyr His Tyr Gly Ser Thr Trp Tyr Asp Ala Lys
865                 870                 875
<210> 29
<211> 876
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成：
<400> 29
Met Lys Lys Lys Leu Val Leu Ile Asp Gly Ser Ser Val Ala Tyr Arg
1               5                   10                  15
Ala Phe Phe Ala Leu Pro Leu Leu His Asn Asp Lys Gly Ile His Thr
            20                  25                  30
Asn Ala Val Tyr Gly Phe Thr Met Met Leu Asn Lys Ile Leu Ala Glu
        35                  40                  45
Glu Glu Pro Thr His Met Leu Val Ala Phe Asp Ala Gly Lys Thr Thr
    50                  55                  60
Phe Arg His Glu Ala Phe Gln Glu Tyr Lys Gly Gly Arg Gln Gln Thr
65                  70                  75                  80
Pro Pro Glu Leu Ser Glu Gln Phe Pro Leu Leu Arg Glu Leu Leu Arg
                85                  90                  95
Ala Tyr Arg Ile Pro Ala Tyr Glu Leu Glu Asn Tyr Glu Ala Asp Asp
            100                 105                 110
Ile Ile Gly Thr Leu Ala Ala Arg Ala Glu Gln Glu Gly Phe Glu Val
        115                 120                 125
Lys Val Ile Ser Gly Asp Arg Asp Leu Thr Gln Leu Ala Ser Pro His
    130                 135                 140
Val Thr Val Asp Ile Thr Lys Lys Gly Ile Thr Asp Ile Glu Pro Tyr
145                 150                 155                 160
Thr Pro Glu Thr Val Arg Glu Lys Tyr Gly Leu Thr Pro Glu Gln Ile
                165                 170                 175
Val Asp Leu Lys Gly Leu Met Gly Asp Lys Ser Asp Asn Ile Pro Gly
            180                 185                 190
Val Pro Gly Ile Gly Glu Lys Thr Ala Val Lys Leu Leu Arg Gln Phe
        195                 200                 205
Gly Thr Val Glu Asn Val Leu Ala Ser Ile Asp Glu Ile Lys Gly Glu
    210                 215                 220
Lys Leu Lys Glu Thr Leu Arg Gln His Arg Glu Met Ala Leu Leu Ser
225                 230                 235                 240
Lys Lys Leu Ala Ala Ile Arg Arg Asp Ala Pro Val Glu Leu Ser Leu
                245                 250                 255
Asp Asp Ile Ala Tyr Gln Gly Glu Asp Arg Glu Lys Val Val Ala Leu
            260                 265                 270
Phe Lys Glu Leu Gly Phe Gln Ser Phe Leu Glu Lys Met Glu Ser Pro
        275                 280                 285
Ser Ser Glu Glu Glu Lys Pro Leu Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala
    290                 295                 300
Asp Arg Val Thr Glu Glu Met Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val
305                 310                 315                 320
Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala
                325                 330                 335
Val Val Asn Glu His Gly Arg Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu
            340                 345                 350
Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys
        355                 360                 365
Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly
    370                 375                 380
Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu
385                 390                 395                 400
Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met
                405                 410                 415
Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly
            420                 425                 430
Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val
        435                 440                 445
Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu
    450                 455                 460
Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro
465                 470                 475                 480
Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp
                485                 490                 495
Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly
            500                 505                 510
Thr Val Glu Gln Arg Ile Tyr Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile
        515                 520                 525
Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu
    530                 535                 540
Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val
545                 550                 555                 560
Leu Glu Lys Leu Ala Pro Tyr His Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu His
                565                 570                 575
Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu
            580                 585                 590
Lys Val Val Arg Pro Asp Thr Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln
        595                 600                 605
Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln
    610                 615                 620
Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe
625                 630                 635                 640
Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln
                645                 650                 655
Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met
            660                 665                 670
Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp
        675                 680                 685
Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln
    690                 695                 700
Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly Ile Val Tyr Gly Ile Ser Asp Tyr Gly
705                 710                 715                 720
Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile
                725                 730                 735
Glu Arg Tyr Phe Glu Ser Phe Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn
            740                 745                 750
Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu His
        755                 760                 765
Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp Ile Thr Ser Arg Asn Phe Arg Val Arg
    770                 775                 780
Ser Phe Ala Glu Arg Met Ala Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala
785                 790                 795                 800
Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys
                805                 810                 815
Glu Glu Arg Leu Gln Ala Ser Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu
            820                 825                 830
Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val
        835                 840                 845
Pro Glu Val Met Glu Gln Ala Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val
    850                 855                 860
Asp Tyr His Tyr Gly Ser Thr Trp Tyr Asp Ala Lys
865                 870                 875
<210> 30
<211> 876
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成：
<400> 30
Met Lys Lys Lys Leu Val Leu Ile Asp Gly Ser Ser Val Ala Tyr Arg
1               5                   10                  15
Ala Phe Phe Ala Leu Pro Leu Leu His Asn Asp Lys Gly Ile His Thr
            20                  25                  30
Asn Ala Val Tyr Gly Phe Thr Met Met Leu Asn Lys Ile Leu Ala Glu
        35                  40                  45
Glu Glu Pro Thr His Met Leu Val Ala Phe Asp Ala Gly Lys Thr Thr
    50                  55                  60
Phe Arg His Glu Ala Phe Gln Glu Tyr Lys Gly Gly Arg Gln Gln Thr
65                  70                  75                  80
Pro Pro Glu Leu Ser Glu Gln Phe Pro Leu Leu Arg Glu Leu Leu Arg
                85                  90                  95
Ala Tyr Arg Ile Pro Ala Tyr Glu Leu Glu Asn Tyr Glu Ala Asp Asp
            100                 105                 110
Ile Ile Gly Thr Leu Ala Ala Arg Ala Glu Gln Glu Gly Phe Glu Val
        115                 120                 125
Lys Val Ile Ser Gly Asp Arg Asp Leu Thr Gln Leu Ala Ser Pro His
    130                 135                 140
Val Thr Val Asp Ile Thr Lys Lys Gly Ile Thr Asp Ile Glu Pro Tyr
145                 150                 155                 160
Thr Pro Glu Thr Val Arg Glu Lys Tyr Gly Leu Thr Pro Glu Gln Ile
                165                 170                 175
Val Asp Leu Lys Gly Leu Met Gly Asp Lys Ser Asp Asn Ile Pro Gly
            180                 185                 190
Val Pro Gly Ile Gly Glu Lys Thr Ala Val Lys Leu Leu Arg Gln Phe
        195                 200                 205
Gly Thr Val Glu Asn Val Leu Ala Ser Ile Asp Glu Ile Lys Gly Glu
    210                 215                 220
Lys Leu Lys Glu Thr Leu Arg Gln His Arg Glu Met Ala Leu Leu Ser
225                 230                 235                 240
Lys Lys Leu Ala Ala Ile Arg Arg Asp Ala Pro Val Glu Leu Ser Leu
                245                 250                 255
Asp Asp Ile Ala Tyr Gln Gly Glu Asp Arg Glu Lys Val Val Ala Leu
            260                 265                 270
Phe Lys Glu Leu Gly Phe Gln Ser Phe Leu Glu Lys Met Glu Ser Pro
        275                 280                 285
Ser Ser Glu Glu Glu Lys Pro Leu Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala
    290                 295                 300
Asp Arg Val Thr Glu Glu Met Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val
305                 310                 315                 320
Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala
                325                 330                 335
Val Val Asn Glu His Gly Arg Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu
            340                 345                 350
Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys
        355                 360                 365
Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly
    370                 375                 380
Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu
385                 390                 395                 400
Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met
                405                 410                 415
Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly
            420                 425                 430
Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val
        435                 440                 445
Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu
    450                 455                 460
Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro
465                 470                 475                 480
Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp
                485                 490                 495
Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly
            500                 505                 510
Thr Val Glu Gln Arg Ile Tyr Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile
        515                 520                 525
Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu
    530                 535                 540
Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val
545                 550                 555                 560
Leu Glu Lys Leu Ala Pro Tyr His Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu His
                565                 570                 575
Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu
            580                 585                 590
Lys Val Val Arg Pro Asp Thr Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln
        595                 600                 605
Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln
    610                 615                 620
Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe
625                 630                 635                 640
Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln
                645                 650                 655
Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met
            660                 665                 670
Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp
        675                 680                 685
Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln
    690                 695                 700
Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly Ile Val Tyr Gly Ile Ser Lys Tyr Gly
705                 710                 715                 720
Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile
                725                 730                 735
Glu Arg Tyr Phe Glu Ser Phe Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn
            740                 745                 750
Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu His
        755                 760                 765
Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp Ile Thr Ser Arg Asn Phe Asn Val Arg
    770                 775                 780
Ser Phe Ala Glu Arg Met Ala Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala
785                 790                 795                 800
Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys
                805                 810                 815
Glu Glu Arg Leu Gln Ala His Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu
            820                 825                 830
Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val
        835                 840                 845
Pro Glu Val Met Glu Gln Ala Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val
    850                 855                 860
Asp Tyr His Tyr Gly Ser Thr Trp Tyr Asp Ala Lys
865                 870                 875
<210> 31
<211> 876
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成：
<400> 31
Met Lys Lys Lys Leu Val Leu Ile Asp Gly Ser Ser Val Ala Tyr Arg
1               5                   10                  15
Ala Phe Phe Ala Leu Pro Leu Leu His Asn Asp Lys Gly Ile His Thr
            20                  25                  30
Asn Ala Val Tyr Gly Phe Thr Met Met Leu Asn Lys Ile Leu Ala Glu
        35                  40                  45
Glu Glu Pro Thr His Met Leu Val Ala Phe Asp Ala Gly Lys Thr Thr
    50                  55                  60
Phe Arg His Glu Ala Phe Gln Glu Tyr Lys Gly Gly Arg Gln Gln Thr
65                  70                  75                  80
Pro Pro Glu Leu Ser Glu Gln Phe Pro Leu Leu Arg Glu Leu Leu Arg
                85                  90                  95
Ala Tyr Arg Ile Pro Ala Tyr Glu Leu Glu Asn Tyr Glu Ala Asp Asp
            100                 105                 110
Ile Ile Gly Thr Leu Ala Ala Arg Ala Glu Gln Glu Gly Phe Glu Val
        115                 120                 125
Lys Val Ile Ser Gly Asp Arg Asp Leu Thr Gln Leu Ala Ser Pro His
    130                 135                 140
Val Thr Val Asp Ile Thr Lys Lys Gly Ile Thr Asp Ile Glu Pro Tyr
145                 150                 155                 160
Thr Pro Glu Thr Val Arg Glu Lys Tyr Gly Leu Thr Pro Glu Gln Ile
                165                 170                 175
Val Asp Leu Lys Gly Leu Met Gly Asp Lys Ser Asp Asn Ile Pro Gly
            180                 185                 190
Val Pro Gly Ile Gly Glu Lys Thr Ala Val Lys Leu Leu Arg Gln Phe
        195                 200                 205
Gly Thr Val Glu Asn Val Leu Ala Ser Ile Asp Glu Ile Lys Gly Glu
    210                 215                 220
Lys Leu Lys Glu Thr Leu Arg Gln His Arg Glu Met Ala Leu Leu Ser
225                 230                 235                 240
Lys Lys Leu Ala Ala Ile Arg Arg Asp Ala Pro Val Glu Leu Ser Leu
                245                 250                 255
Asp Asp Ile Ala Tyr Gln Gly Glu Asp Arg Glu Lys Val Val Ala Leu
            260                 265                 270
Phe Lys Glu Leu Gly Phe Gln Ser Phe Leu Glu Lys Met Glu Ser Pro
        275                 280                 285
Ser Ser Glu Glu Glu Lys Pro Leu Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala
    290                 295                 300
Asp Arg Val Thr Glu Glu Met Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val
305                 310                 315                 320
Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala
                325                 330                 335
Val Val Asn Glu His Gly Arg Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu
            340                 345                 350
Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys
        355                 360                 365
Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly
    370                 375                 380
Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu
385                 390                 395                 400
Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met
                405                 410                 415
Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly
            420                 425                 430
Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val
        435                 440                 445
Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu
    450                 455                 460
Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro
465                 470                 475                 480
Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp
                485                 490                 495
Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly
            500                 505                 510
Thr Val Glu Gln Arg Ile Tyr Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile
        515                 520                 525
Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu
    530                 535                 540
Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val
545                 550                 555                 560
Leu Glu Lys Leu Ala Pro Tyr His Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu Met
                565                 570                 575
Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu
            580                 585                 590
Lys Val Val Arg Pro Asp Thr Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln
        595                 600                 605
Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln
    610                 615                 620
Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe
625                 630                 635                 640
Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln
                645                 650                 655
Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met
            660                 665                 670
Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp
        675                 680                 685
Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln
    690                 695                 700
Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly Ile Val Tyr Gly Ile Ser Lys Tyr Gly
705                 710                 715                 720
Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile
                725                 730                 735
Glu Arg Tyr Phe Glu Ser Phe Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn
            740                 745                 750
Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu His
        755                 760                 765
Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp Ile Thr Ser Arg Asn Phe Arg Val Arg
    770                 775                 780
Ser Phe Ala Glu Arg Met Ala Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala
785                 790                 795                 800
Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys
                805                 810                 815
Glu Glu Arg Leu Gln Ala His Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu
            820                 825                 830
Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val
        835                 840                 845
Pro Glu Val Met Glu Gln Ala Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val
    850                 855                 860
Asp Tyr His Tyr Gly Ser Thr Trp Tyr Asp Ala Lys
865                 870                 875
<210> 32
<211> 876
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成：
<400> 32
Met Lys Lys Lys Leu Val Leu Ile Asp Gly Ser Ser Val Ala Tyr Arg
1               5                   10                  15
Ala Phe Phe Ala Leu Pro Leu Leu His Asn Asp Lys Gly Ile His Thr
            20                  25                  30
Asn Ala Val Tyr Gly Phe Thr Met Met Leu Asn Lys Ile Leu Ala Glu
        35                  40                  45
Glu Glu Pro Thr His Met Leu Val Ala Phe Asp Ala Gly Lys Thr Thr
    50                  55                  60
Phe Arg His Glu Ala Phe Gln Glu Tyr Lys Gly Gly Arg Gln Gln Thr
65                  70                  75                  80
Pro Pro Glu Leu Ser Glu Gln Phe Pro Leu Leu Arg Glu Leu Leu Arg
                85                  90                  95
Ala Tyr Arg Ile Pro Ala Tyr Glu Leu Glu Asn Tyr Glu Ala Asp Asp
            100                 105                 110
Ile Ile Gly Thr Leu Ala Ala Arg Ala Glu Gln Glu Gly Phe Glu Val
        115                 120                 125
Lys Val Ile Ser Gly Asp Arg Asp Leu Thr Gln Leu Ala Ser Pro His
    130                 135                 140
Val Thr Val Asp Ile Thr Lys Lys Gly Ile Thr Asp Ile Glu Pro Tyr
145                 150                 155                 160
Thr Pro Glu Thr Val Arg Glu Lys Tyr Gly Leu Thr Pro Glu Gln Ile
                165                 170                 175
Val Asp Leu Lys Gly Leu Met Gly Asp Lys Ser Asp Asn Ile Pro Gly
            180                 185                 190
Val Pro Gly Ile Gly Glu Lys Thr Ala Val Lys Leu Leu Arg Gln Phe
        195                 200                 205
Gly Thr Val Glu Asn Val Leu Ala Ser Ile Asp Glu Ile Lys Gly Glu
    210                 215                 220
Lys Leu Lys Glu Thr Leu Arg Gln His Arg Glu Met Ala Leu Leu Ser
225                 230                 235                 240
Lys Lys Leu Ala Ala Ile Arg Arg Asp Ala Pro Val Glu Leu Ser Leu
                245                 250                 255
Asp Asp Ile Ala Tyr Gln Gly Glu Asp Arg Glu Lys Val Val Ala Leu
            260                 265                 270
Phe Lys Glu Leu Gly Phe Gln Ser Phe Leu Glu Lys Met Glu Ser Pro
        275                 280                 285
Ser Ser Glu Glu Glu Lys Pro Leu Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala
    290                 295                 300
Asp Arg Val Thr Glu Glu Met Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val
305                 310                 315                 320
Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala
                325                 330                 335
Val Val Asn Glu His Gly Arg Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu
            340                 345                 350
Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys
        355                 360                 365
Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly
    370                 375                 380
Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu
385                 390                 395                 400
Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met
                405                 410                 415
Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly
            420                 425                 430
Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val
        435                 440                 445
Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu
    450                 455                 460
Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro
465                 470                 475                 480
Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp
                485                 490                 495
Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly
            500                 505                 510
Thr Val Glu Gln Arg Ile Tyr Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile
        515                 520                 525
Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu
    530                 535                 540
Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Ala Val
545                 550                 555                 560
Leu Glu Lys Leu Ala Pro Tyr Asn Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu Met
                565                 570                 575
Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu
            580                 585                 590
Lys Val Val Arg Pro Asp Thr Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln
        595                 600                 605
Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln
    610                 615                 620
Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe
625                 630                 635                 640
Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln
                645                 650                 655
Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met
            660                 665                 670
Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp
        675                 680                 685
Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln
    690                 695                 700
Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly Ile Val Tyr Gly Ile Ser Asp Tyr Gly
705                 710                 715                 720
Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile
                725                 730                 735
Glu Arg Tyr Phe Glu Ser Phe Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn
            740                 745                 750
Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu His
        755                 760                 765
Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp Ile Thr Ser Arg Asn Phe Arg Val Arg
    770                 775                 780
Ser Phe Ala Arg Arg Met Ala Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala
785                 790                 795                 800
Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys
                805                 810                 815
Glu Glu Arg Leu Gln Ala His Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu
            820                 825                 830
Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val
        835                 840                 845
Pro Glu Val Met Glu Gln Ala Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val
    850                 855                 860
Asp Tyr His Tyr Gly Ser Thr Trp Tyr Asp Ala Lys
865                 870                 875
<210> 33
<211> 581
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成：
<400> 33
Met Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala Asp Arg Val Thr Glu Glu Met
1               5                   10                  15
Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr
            20                  25                  30
His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala Val Val Asn Glu Arg Gly Arg
        35                  40                  45
Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala
    50                  55                  60
Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg
65                  70                  75                  80
Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser
                85                  90                  95
Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val
            100                 105                 110
Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg
        115                 120                 125
Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp
    130                 135                 140
Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp
145                 150                 155                 160
Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp
                165                 170                 175
Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu
            180                 185                 190
Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met
        195                 200                 205
Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly Thr Val Glu Gln Arg Ile Tyr
    210                 215                 220
Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly
225                 230                 235                 240
Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys
                245                 250                 255
Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val Leu Glu Lys Leu Ala Pro Tyr
            260                 265                 270
His Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu His Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu
        275                 280                 285
Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu Lys Val Val Arg Pro Asp Thr
    290                 295                 300
Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg
305                 310                 315                 320
Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu
                325                 330                 335
Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp
            340                 345                 350
Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala
        355                 360                 365
His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu
    370                 375                 380
Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp
385                 390                 395                 400
Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly
                405                 410                 415
Ile Val Tyr Gly Ile Ser Lys Tyr Gly Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile
            420                 425                 430
Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile Glu Arg Tyr Phe Gln Ser Phe
        435                 440                 445
Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln
    450                 455                 460
Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu His Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp
465                 470                 475                 480
Ile Thr Ser Arg Asn Phe Asn Val Arg Ser Phe Ala Glu Arg Met Ala
                485                 490                 495
Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala
            500                 505                 510
Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys Glu Glu Arg Leu Gln Ala His
        515                 520                 525
Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu
    530                 535                 540
Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val Pro Glu Val Met Glu Gln Ala
545                 550                 555                 560
Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val Asp Tyr Arg Tyr Gly Ser Thr
                565                 570                 575
Trp Tyr Asp Ala Lys
            580
<210> 34
<211> 581
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成：
<400> 34
Met Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala Asp Arg Val Thr Glu Glu Met
1               5                   10                  15
Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr
            20                  25                  30
His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala Val Val Asn Glu Arg Gly Arg
        35                  40                  45
Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala
    50                  55                  60
Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg
65                  70                  75                  80
Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser
                85                  90                  95
Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val
            100                 105                 110
Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg
        115                 120                 125
Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp
    130                 135                 140
Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp
145                 150                 155                 160
Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp
                165                 170                 175
Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu
            180                 185                 190
Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met
        195                 200                 205
Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly Thr Val Glu Gln Arg Ile Tyr
    210                 215                 220
Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly
225                 230                 235                 240
Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys
                245                 250                 255
Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Ala Val Leu Glu Lys Leu Ala Pro Tyr
            260                 265                 270
Asn Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu Met Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu
        275                 280                 285
Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu Lys Val Val Arg Pro Asp Thr
    290                 295                 300
Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg
305                 310                 315                 320
Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu
                325                 330                 335
Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp
            340                 345                 350
Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala
        355                 360                 365
His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu
    370                 375                 380
Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp
385                 390                 395                 400
Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly
                405                 410                 415
Ile Val Tyr Gly Ile Ser Asp Tyr Gly Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile
            420                 425                 430
Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile Glu Arg Tyr Phe Gln Ser Phe
        435                 440                 445
Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln
    450                 455                 460
Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu His Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp
465                 470                 475                 480
Ile Thr Ser Arg Asn Phe Arg Val Arg Ser Phe Ala Arg Arg Met Ala
                485                 490                 495
Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala
            500                 505                 510
Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys Glu Glu Arg Leu Gln Ala His
        515                 520                 525
Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu
    530                 535                 540
Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val Pro Glu Val Met Glu Gln Ala
545                 550                 555                 560
Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val Asp Tyr Arg Tyr Gly Ser Thr
                565                 570                 575
Trp Tyr Asp Ala Lys
            580
<210> 35
<211> 581
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成：
<400> 35
Met Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala Asp Arg Val Thr Glu Glu Met
1               5                   10                  15
Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr
            20                  25                  30
His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala Val Val Asn Glu Arg Gly Arg
        35                  40                  45
Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala
    50                  55                  60
Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg
65                  70                  75                  80
Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser
                85                  90                  95
Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val
            100                 105                 110
Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg
        115                 120                 125
Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp
    130                 135                 140
Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp
145                 150                 155                 160
Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp
                165                 170                 175
Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu
            180                 185                 190
Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met
        195                 200                 205
Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly Thr Val Glu Gln Arg Ile Tyr
    210                 215                 220
Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly
225                 230                 235                 240
Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys
                245                 250                 255
Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val Leu Glu Lys Leu Ala Pro Tyr
            260                 265                 270
His Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu Met Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu
        275                 280                 285
Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu Lys Val Val Arg Pro Asp Thr
    290                 295                 300
Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg
305                 310                 315                 320
Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu
                325                 330                 335
Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp
            340                 345                 350
Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala
        355                 360                 365
His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu
    370                 375                 380
Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp
385                 390                 395                 400
Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly
                405                 410                 415
Ile Val Tyr Gly Ile Ser Lys Tyr Gly Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile
            420                 425                 430
Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile Glu Arg Tyr Phe Gln Ser Phe
        435                 440                 445
Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln
    450                 455                 460
Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu His Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp
465                 470                 475                 480
Ile Thr Ser Arg Asn Phe Arg Val Arg Ser Phe Ala Glu Arg Met Ala
                485                 490                 495
Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala
            500                 505                 510
Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys Glu Glu Arg Leu Gln Ala His
        515                 520                 525
Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu
    530                 535                 540
Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val Pro Glu Val Met Glu Gln Ala
545                 550                 555                 560
Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val Asp Tyr Arg Tyr Gly Ser Thr
                565                 570                 575
Trp Tyr Asp Ala Lys
            580
<210> 36
<211> 581
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成：
<400> 36
Met Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala Asp Arg Val Thr Glu Glu Met
1               5                   10                  15
Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr
            20                  25                  30
His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala Val Val Asn Glu Arg Gly Arg
        35                  40                  45
Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala
    50                  55                  60
Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg
65                  70                  75                  80
Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser
                85                  90                  95
Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val
            100                 105                 110
Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg
        115                 120                 125
Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp
    130                 135                 140
Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp
145                 150                 155                 160
Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp
                165                 170                 175
Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu
            180                 185                 190
Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met
        195                 200                 205
Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly Thr Val Glu Gln Arg Ile Tyr
    210                 215                 220
Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly
225                 230                 235                 240
Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys
                245                 250                 255
Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val Leu Glu Lys Leu Ala Pro Tyr
            260                 265                 270
His Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu His Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu
        275                 280                 285
Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu Lys Val Val Arg Pro Asp Thr
    290                 295                 300
Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg
305                 310                 315                 320
Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu
                325                 330                 335
Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp
            340                 345                 350
Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala
        355                 360                 365
His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu
    370                 375                 380
Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp
385                 390                 395                 400
Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly
                405                 410                 415
Ile Val Tyr Gly Ile Ser Lys Tyr Gly Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile
            420                 425                 430
Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile Glu Arg Tyr Phe Gln Ser Phe
        435                 440                 445
Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln
    450                 455                 460
Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu His Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp
465                 470                 475                 480
Ile Thr Ser Arg Asn Phe Arg Val Arg Ser Phe Ala Glu Arg Met Ala
                485                 490                 495
Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala
            500                 505                 510
Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys Glu Glu Arg Leu Gln Ala His
        515                 520                 525
Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu
    530                 535                 540
Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val Pro Glu Val Met Glu Gln Ala
545                 550                 555                 560
Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val Asp Tyr Arg Tyr Gly Ser Thr
                565                 570                 575
Trp Tyr Asp Ala Lys
            580
<210> 37
<211> 581
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成：
<400> 37
Met Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala Asp Arg Val Thr Glu Glu Met
1               5                   10                  15
Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr
            20                  25                  30
His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala Val Val Asn Glu Arg Gly Arg
        35                  40                  45
Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala
    50                  55                  60
Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg
65                  70                  75                  80
Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser
                85                  90                  95
Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val
            100                 105                 110
Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg
        115                 120                 125
Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp
    130                 135                 140
Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp
145                 150                 155                 160
Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp
                165                 170                 175
Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu
            180                 185                 190
Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met
        195                 200                 205
Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly Thr Val Glu Gln Arg Ile Tyr
    210                 215                 220
Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly
225                 230                 235                 240
Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys
                245                 250                 255
Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val Leu Glu Lys Leu Ala Pro Tyr
            260                 265                 270
His Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu Met Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu
        275                 280                 285
Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu Lys Val Val Arg Pro Asp Thr
    290                 295                 300
Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg
305                 310                 315                 320
Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu
                325                 330                 335
Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp
            340                 345                 350
Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala
        355                 360                 365
His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu
    370                 375                 380
Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp
385                 390                 395                 400
Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly
                405                 410                 415
Ile Val Tyr Gly Ile Ser Asp Tyr Gly Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile
            420                 425                 430
Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile Glu Arg Tyr Phe Gln Ser Phe
        435                 440                 445
Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln
    450                 455                 460
Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu His Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp
465                 470                 475                 480
Ile Thr Ser Arg Asn Phe Arg Val Arg Ser Phe Ala Glu Arg Met Ala
                485                 490                 495
Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala
            500                 505                 510
Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys Glu Glu Arg Leu Gln Ala His
        515                 520                 525
Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu
    530                 535                 540
Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val Pro Glu Val Met Glu Gln Ala
545                 550                 555                 560
Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val Asp Tyr Arg Tyr Gly Ser Thr
                565                 570                 575
Trp Tyr Asp Ala Lys
            580
<210> 38
<211> 876
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽序列
<400> 38
Met Lys Lys Lys Leu Val Leu Ile Asp Gly Ser Ser Val Ala Tyr Arg
1               5                   10                  15
Ala Phe Phe Ala Leu Pro Leu Leu His Asn Asp Lys Gly Ile His Thr
            20                  25                  30
Asn Ala Val Tyr Gly Phe Thr Met Met Leu Asn Lys Ile Leu Ala Glu
        35                  40                  45
Glu Glu Pro Thr His Met Leu Val Ala Phe Asp Ala Gly Lys Thr Thr
    50                  55                  60
Phe Arg His Glu Ala Phe Gln Glu Tyr Lys Gly Gly Arg Gln Gln Thr
65                  70                  75                  80
Pro Pro Glu Leu Ser Glu Gln Phe Pro Leu Leu Arg Glu Leu Leu Arg
                85                  90                  95
Ala Tyr Arg Ile Pro Ala Tyr Glu Leu Glu Asn Tyr Glu Ala Asp Asp
            100                 105                 110
Ile Ile Gly Thr Leu Ala Ala Arg Ala Glu Gln Glu Gly Phe Glu Val
        115                 120                 125
Lys Val Ile Ser Gly Asp Arg Asp Leu Thr Gln Leu Ala Ser Pro His
    130                 135                 140
Val Thr Val Asp Ile Thr Lys Lys Gly Ile Thr Asp Ile Glu Pro Tyr
145                 150                 155                 160
Thr Pro Glu Thr Val Arg Glu Lys Tyr Gly Leu Thr Pro Glu Gln Ile
                165                 170                 175
Val Asp Leu Lys Gly Leu Met Gly Asp Lys Ser Asp Asn Ile Pro Gly
            180                 185                 190
Val Pro Gly Ile Gly Glu Lys Thr Ala Val Lys Leu Leu Arg Gln Phe
        195                 200                 205
Gly Thr Val Glu Asn Val Leu Ala Ser Ile Asp Glu Ile Lys Gly Glu
    210                 215                 220
Lys Leu Lys Glu Thr Leu Arg Gln His Arg Glu Met Ala Leu Leu Ser
225                 230                 235                 240
Lys Lys Leu Ala Ala Ile Arg Arg Asp Ala Pro Val Glu Leu Ser Leu
                245                 250                 255
Asp Asp Ile Ala Tyr Gln Gly Glu Asp Arg Glu Lys Val Val Ala Leu
            260                 265                 270
Phe Lys Glu Leu Gly Phe Gln Ser Phe Leu Glu Lys Met Glu Ser Pro
        275                 280                 285
Ser Ser Glu Glu Glu Lys Pro Leu Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala
    290                 295                 300
Asp Arg Val Thr Glu Glu Met Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val
305                 310                 315                 320
Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala
                325                 330                 335
Val Val Asn Glu His Gly Arg Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu
            340                 345                 350
Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys
        355                 360                 365
Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly
    370                 375                 380
Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu
385                 390                 395                 400
Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met
                405                 410                 415
Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly
            420                 425                 430
Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val
        435                 440                 445
Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu
    450                 455                 460
Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro
465                 470                 475                 480
Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp
                485                 490                 495
Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly
            500                 505                 510
Thr Val Glu Gln Arg Ile Tyr Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile
        515                 520                 525
Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly Lys Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu
    530                 535                 540
Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val
545                 550                 555                 560
Leu Glu Lys Leu Ala Pro Tyr His Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu Met
                565                 570                 575
Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu
            580                 585                 590
Lys Val Val Arg Pro Asp Thr Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln
        595                 600                 605
Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln
    610                 615                 620
Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe
625                 630                 635                 640
Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln
                645                 650                 655
Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met
            660                 665                 670
Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp
        675                 680                 685
Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln
    690                 695                 700
Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly Ile Val Tyr Gly Ile Ser Lys Tyr Gly
705                 710                 715                 720
Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile
                725                 730                 735
Glu Arg Tyr Phe Glu Ser Phe Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn
            740                 745                 750
Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu His
        755                 760                 765
Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp Ile Thr Ser Arg Asn Phe Arg Val Arg
    770                 775                 780
Ser Phe Ala Glu Arg Met Ala Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala
785                 790                 795                 800
Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys
                805                 810                 815
Glu Glu Arg Leu Gln Ala His Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu
            820                 825                 830
Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val
        835                 840                 845
Pro Glu Val Met Glu Gln Ala Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val
    850                 855                 860
Asp Tyr His Tyr Gly Ser Thr Trp Tyr Asp Ala Lys
865                 870                 875
<210> 39
<211> 876
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽序列
<400> 39
Met Lys Lys Lys Leu Val Leu Ile Asp Gly Ser Ser Val Ala Tyr Arg
1               5                   10                  15
Ala Phe Phe Ala Leu Pro Leu Leu His Asn Asp Lys Gly Ile His Thr
            20                  25                  30
Asn Ala Val Tyr Gly Phe Thr Met Met Leu Asn Lys Ile Leu Ala Glu
        35                  40                  45
Glu Glu Pro Thr His Met Leu Val Ala Phe Asp Ala Gly Lys Thr Thr
    50                  55                  60
Phe Arg His Glu Ala Phe Gln Glu Tyr Lys Gly Gly Arg Gln Gln Thr
65                  70                  75                  80
Pro Pro Glu Leu Ser Glu Gln Phe Pro Leu Leu Arg Glu Leu Leu Arg
                85                  90                  95
Ala Tyr Arg Ile Pro Ala Tyr Glu Leu Glu Asn Tyr Glu Ala Asp Asp
            100                 105                 110
Ile Ile Gly Thr Leu Ala Ala Arg Ala Glu Gln Glu Gly Phe Glu Val
        115                 120                 125
Lys Val Ile Ser Gly Asp Arg Asp Leu Thr Gln Leu Ala Ser Pro His
    130                 135                 140
Val Thr Val Asp Ile Thr Lys Lys Gly Ile Thr Asp Ile Glu Pro Tyr
145                 150                 155                 160
Thr Pro Glu Thr Val Arg Glu Lys Tyr Gly Leu Thr Pro Glu Gln Ile
                165                 170                 175
Val Asp Leu Lys Gly Leu Met Gly Asp Lys Ser Asp Asn Ile Pro Gly
            180                 185                 190
Val Pro Gly Ile Gly Glu Lys Thr Ala Val Lys Leu Leu Arg Gln Phe
        195                 200                 205
Gly Thr Val Glu Asn Val Leu Ala Ser Ile Asp Glu Ile Lys Gly Glu
    210                 215                 220
Lys Leu Lys Glu Thr Leu Arg Gln His Arg Glu Met Ala Leu Leu Ser
225                 230                 235                 240
Lys Lys Leu Ala Ala Ile Arg Arg Asp Ala Pro Val Glu Leu Ser Leu
                245                 250                 255
Asp Asp Ile Ala Tyr Gln Gly Glu Asp Arg Glu Lys Val Val Ala Leu
            260                 265                 270
Phe Lys Glu Leu Gly Phe Gln Ser Phe Leu Glu Lys Met Glu Ser Pro
        275                 280                 285
Ser Ser Glu Glu Glu Lys Pro Leu Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala
    290                 295                 300
Asp Arg Val Thr Glu Glu Met Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val
305                 310                 315                 320
Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala
                325                 330                 335
Val Val Asn Glu His Gly Arg Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu
            340                 345                 350
Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys
        355                 360                 365
Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly
    370                 375                 380
Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu
385                 390                 395                 400
Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met
                405                 410                 415
Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly
            420                 425                 430
Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val
        435                 440                 445
Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu
    450                 455                 460
Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro
465                 470                 475                 480
Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp
                485                 490                 495
Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met Gln Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly
            500                 505                 510
Thr Val Glu Gln Arg Ile Tyr Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile
        515                 520                 525
Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu
    530                 535                 540
Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val
545                 550                 555                 560
Leu Glu Lys Leu Ala Pro Tyr His Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu Met
                565                 570                 575
Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu
            580                 585                 590
Lys Val Val Arg Pro Asp Thr Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln
        595                 600                 605
Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln
    610                 615                 620
Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe
625                 630                 635                 640
Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln
                645                 650                 655
Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met
            660                 665                 670
Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp
        675                 680                 685
Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln
    690                 695                 700
Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly Ile Val Tyr Gly Ile Ser Lys Tyr Gly
705                 710                 715                 720
Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile
                725                 730                 735
Glu Arg Tyr Phe Glu Ser Phe Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn
            740                 745                 750
Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu His
        755                 760                 765
Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp Ile Thr Ser Arg Asn Phe Arg Val Arg
    770                 775                 780
Ser Phe Ala Glu Arg Met Ala Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala
785                 790                 795                 800
Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys
                805                 810                 815
Glu Glu Arg Leu Gln Ala His Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu
            820                 825                 830
Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val
        835                 840                 845
Pro Glu Val Met Glu Gln Ala Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val
    850                 855                 860
Asp Tyr His Tyr Gly Ser Thr Trp Tyr Asp Ala Lys
865                 870                 875
<210> 40
<211> 876
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽序列
<400> 40
Met Lys Lys Lys Leu Val Leu Ile Asp Gly Ser Ser Val Ala Tyr Arg
1               5                   10                  15
Ala Phe Phe Ala Leu Pro Leu Leu His Asn Asp Lys Gly Ile His Thr
            20                  25                  30
Asn Ala Val Tyr Gly Phe Thr Met Met Leu Asn Lys Ile Leu Ala Glu
        35                  40                  45
Glu Glu Pro Thr His Met Leu Val Ala Phe Asp Ala Gly Lys Thr Thr
    50                  55                  60
Phe Arg His Glu Ala Phe Gln Glu Tyr Lys Gly Gly Arg Gln Gln Thr
65                  70                  75                  80
Pro Pro Glu Leu Ser Glu Gln Phe Pro Leu Leu Arg Glu Leu Leu Arg
                85                  90                  95
Ala Tyr Arg Ile Pro Ala Tyr Glu Leu Glu Asn Tyr Glu Ala Asp Asp
            100                 105                 110
Ile Ile Gly Thr Leu Ala Ala Arg Ala Glu Gln Glu Gly Phe Glu Val
        115                 120                 125
Lys Val Ile Ser Gly Asp Arg Asp Leu Thr Gln Leu Ala Ser Pro His
    130                 135                 140
Val Thr Val Asp Ile Thr Lys Lys Gly Ile Thr Asp Ile Glu Pro Tyr
145                 150                 155                 160
Thr Pro Glu Thr Val Arg Glu Lys Tyr Gly Leu Thr Pro Glu Gln Ile
                165                 170                 175
Val Asp Leu Lys Gly Leu Met Gly Asp Lys Ser Asp Asn Ile Pro Gly
            180                 185                 190
Val Pro Gly Ile Gly Glu Lys Thr Ala Val Lys Leu Leu Arg Gln Phe
        195                 200                 205
Gly Thr Val Glu Asn Val Leu Ala Ser Ile Asp Glu Ile Lys Gly Glu
    210                 215                 220
Lys Leu Lys Glu Thr Leu Arg Gln His Arg Glu Met Ala Leu Leu Ser
225                 230                 235                 240
Lys Lys Leu Ala Ala Ile Arg Arg Asp Ala Pro Val Glu Leu Ser Leu
                245                 250                 255
Asp Asp Ile Ala Tyr Gln Gly Glu Asp Arg Glu Lys Val Val Ala Leu
            260                 265                 270
Phe Lys Glu Leu Gly Phe Gln Ser Phe Leu Glu Lys Met Glu Ser Pro
        275                 280                 285
Ser Ser Glu Glu Glu Lys Pro Leu Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala
    290                 295                 300
Asp Arg Val Thr Glu Glu Met Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val
305                 310                 315                 320
Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala
                325                 330                 335
Val Val Asn Glu His Gly Arg Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu
            340                 345                 350
Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys
        355                 360                 365
Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly
    370                 375                 380
Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu
385                 390                 395                 400
Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met
                405                 410                 415
Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly
            420                 425                 430
Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val
        435                 440                 445
Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu
    450                 455                 460
Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro
465                 470                 475                 480
Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp
                485                 490                 495
Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly
            500                 505                 510
Thr Val Glu Gln Arg Ile Tyr Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile
        515                 520                 525
Lys Ser Pro Lys Gln Leu Gly Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu
    530                 535                 540
Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val
545                 550                 555                 560
Leu Glu Lys Leu Ala Pro Tyr His Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu Met
                565                 570                 575
Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu
            580                 585                 590
Lys Val Val Arg Pro Asp Thr Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln
        595                 600                 605
Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln
    610                 615                 620
Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe
625                 630                 635                 640
Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln
                645                 650                 655
Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met
            660                 665                 670
Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp
        675                 680                 685
Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln
    690                 695                 700
Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly Ile Val Tyr Gly Ile Ser Lys Tyr Gly
705                 710                 715                 720
Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile
                725                 730                 735
Glu Arg Tyr Phe Glu Ser Phe Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn
            740                 745                 750
Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu His
        755                 760                 765
Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp Ile Thr Ser Arg Asn Phe Arg Val Arg
    770                 775                 780
Ser Phe Ala Glu Arg Met Ala Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala
785                 790                 795                 800
Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys
                805                 810                 815
Glu Glu Arg Leu Gln Ala His Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu
            820                 825                 830
Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val
        835                 840                 845
Pro Glu Val Met Glu Gln Ala Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val
    850                 855                 860
Asp Tyr His Tyr Gly Ser Thr Trp Tyr Asp Ala Lys
865                 870                 875
<210> 41
<211> 876
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽序列
<400> 41
Met Lys Lys Lys Leu Val Leu Ile Asp Gly Ser Ser Val Ala Tyr Arg
1               5                   10                  15
Ala Phe Phe Ala Leu Pro Leu Leu His Asn Asp Lys Gly Ile His Thr
            20                  25                  30
Asn Ala Val Tyr Gly Phe Thr Met Met Leu Asn Lys Ile Leu Ala Glu
        35                  40                  45
Glu Glu Pro Thr His Met Leu Val Ala Phe Asp Ala Gly Lys Thr Thr
    50                  55                  60
Phe Arg His Glu Ala Phe Gln Glu Tyr Lys Gly Gly Arg Gln Gln Thr
65                  70                  75                  80
Pro Pro Glu Leu Ser Glu Gln Phe Pro Leu Leu Arg Glu Leu Leu Arg
                85                  90                  95
Ala Tyr Arg Ile Pro Ala Tyr Glu Leu Glu Asn Tyr Glu Ala Asp Asp
            100                 105                 110
Ile Ile Gly Thr Leu Ala Ala Arg Ala Glu Gln Glu Gly Phe Glu Val
        115                 120                 125
Lys Val Ile Ser Gly Asp Arg Asp Leu Thr Gln Leu Ala Ser Pro His
    130                 135                 140
Val Thr Val Asp Ile Thr Lys Lys Gly Ile Thr Asp Ile Glu Pro Tyr
145                 150                 155                 160
Thr Pro Glu Thr Val Arg Glu Lys Tyr Gly Leu Thr Pro Glu Gln Ile
                165                 170                 175
Val Asp Leu Lys Gly Leu Met Gly Asp Lys Ser Asp Asn Ile Pro Gly
            180                 185                 190
Val Pro Gly Ile Gly Glu Lys Thr Ala Val Lys Leu Leu Arg Gln Phe
        195                 200                 205
Gly Thr Val Glu Asn Val Leu Ala Ser Ile Asp Glu Ile Lys Gly Glu
    210                 215                 220
Lys Leu Lys Glu Thr Leu Arg Gln His Arg Glu Met Ala Leu Leu Ser
225                 230                 235                 240
Lys Lys Leu Ala Ala Ile Arg Arg Asp Ala Pro Val Glu Leu Ser Leu
                245                 250                 255
Asp Asp Ile Ala Tyr Gln Gly Glu Asp Arg Glu Lys Val Val Ala Leu
            260                 265                 270
Phe Lys Glu Leu Gly Phe Gln Ser Phe Leu Glu Lys Met Glu Ser Pro
        275                 280                 285
Ser Ser Glu Glu Glu Lys Pro Leu Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala
    290                 295                 300
Asp Arg Val Thr Glu Glu Met Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val
305                 310                 315                 320
Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala
                325                 330                 335
Val Val Asn Glu His Gly Arg Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu
            340                 345                 350
Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys
        355                 360                 365
Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly
    370                 375                 380
Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu
385                 390                 395                 400
Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met
                405                 410                 415
Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly
            420                 425                 430
Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val
        435                 440                 445
Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu
    450                 455                 460
Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro
465                 470                 475                 480
Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp
                485                 490                 495
Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly
            500                 505                 510
Thr Val Glu Gln Arg Ile Tyr Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile
        515                 520                 525
Arg Ser Pro Lys Gln Leu Gly Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu
    530                 535                 540
Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val
545                 550                 555                 560
Leu Glu Lys Leu Ala Pro Tyr His Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu Met
                565                 570                 575
Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu
            580                 585                 590
Lys Val Val Arg Pro Asp Thr Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln
        595                 600                 605
Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln
    610                 615                 620
Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe
625                 630                 635                 640
Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln
                645                 650                 655
Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met
            660                 665                 670
Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp
        675                 680                 685
Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln
    690                 695                 700
Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly Ile Val Tyr Gly Ile Ser Lys Tyr Gly
705                 710                 715                 720
Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile
                725                 730                 735
Glu Arg Tyr Phe Glu Ser Phe Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn
            740                 745                 750
Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu His
        755                 760                 765
Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp Ile Thr Ser Arg Asn Phe Arg Val Arg
    770                 775                 780
Ser Phe Ala Glu Arg Met Ala Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala
785                 790                 795                 800
Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys
                805                 810                 815
Glu Glu Arg Leu Gln Ala His Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu
            820                 825                 830
Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val
        835                 840                 845
Pro Glu Val Met Glu Gln Ala Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val
    850                 855                 860
Asp Tyr His Tyr Gly Ser Thr Trp Tyr Asp Ala Lys
865                 870                 875
<210> 42
<211> 876
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽序列
<400> 42
Met Lys Lys Lys Leu Val Leu Ile Asp Gly Ser Ser Val Ala Tyr Arg
1               5                   10                  15
Ala Phe Phe Ala Leu Pro Leu Leu His Asn Asp Lys Gly Ile His Thr
            20                  25                  30
Asn Ala Val Tyr Gly Phe Thr Met Met Leu Asn Lys Ile Leu Ala Glu
        35                  40                  45
Glu Glu Pro Thr His Met Leu Val Ala Phe Asp Ala Gly Lys Thr Thr
    50                  55                  60
Phe Arg His Glu Ala Phe Gln Glu Tyr Lys Gly Gly Arg Gln Gln Thr
65                  70                  75                  80
Pro Pro Glu Leu Ser Glu Gln Phe Pro Leu Leu Arg Glu Leu Leu Arg
                85                  90                  95
Ala Tyr Arg Ile Pro Ala Tyr Glu Leu Glu Asn Tyr Glu Ala Asp Asp
            100                 105                 110
Ile Ile Gly Thr Leu Ala Ala Arg Ala Glu Gln Glu Gly Phe Glu Val
        115                 120                 125
Lys Val Ile Ser Gly Asp Arg Asp Leu Thr Gln Leu Ala Ser Pro His
    130                 135                 140
Val Thr Val Asp Ile Thr Lys Lys Gly Ile Thr Asp Ile Glu Pro Tyr
145                 150                 155                 160
Thr Pro Glu Thr Val Arg Glu Lys Tyr Gly Leu Thr Pro Glu Gln Ile
                165                 170                 175
Val Asp Leu Lys Gly Leu Met Gly Asp Lys Ser Asp Asn Ile Pro Gly
            180                 185                 190
Val Pro Gly Ile Gly Glu Lys Thr Ala Val Lys Leu Leu Arg Gln Phe
        195                 200                 205
Gly Thr Val Glu Asn Val Leu Ala Ser Ile Asp Glu Ile Lys Gly Glu
    210                 215                 220
Lys Leu Lys Glu Thr Leu Arg Gln His Arg Glu Met Ala Leu Leu Ser
225                 230                 235                 240
Lys Lys Leu Ala Ala Ile Arg Arg Asp Ala Pro Val Glu Leu Ser Leu
                245                 250                 255
Asp Asp Ile Ala Tyr Gln Gly Glu Asp Arg Glu Lys Val Val Ala Leu
            260                 265                 270
Phe Lys Glu Leu Gly Phe Gln Ser Phe Leu Glu Lys Met Glu Ser Pro
        275                 280                 285
Ser Ser Glu Glu Glu Lys Pro Leu Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala
    290                 295                 300
Asp Arg Val Thr Glu Glu Met Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val
305                 310                 315                 320
Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala
                325                 330                 335
Val Val Asn Glu His Gly Arg Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu
            340                 345                 350
Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys
        355                 360                 365
Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly
    370                 375                 380
Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu
385                 390                 395                 400
Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met
                405                 410                 415
Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly
            420                 425                 430
Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val
        435                 440                 445
Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu
    450                 455                 460
Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro
465                 470                 475                 480
Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp
                485                 490                 495
Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly
            500                 505                 510
Thr Val Glu Gln Arg Ile Tyr Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile
        515                 520                 525
Asn Ser Ile Lys Gln Leu Gly Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu
    530                 535                 540
Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val
545                 550                 555                 560
Leu Glu Lys Leu Ala Pro Tyr His Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu Met
                565                 570                 575
Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu
            580                 585                 590
Lys Val Val Arg Pro Asp Thr Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln
        595                 600                 605
Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln
    610                 615                 620
Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe
625                 630                 635                 640
Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln
                645                 650                 655
Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met
            660                 665                 670
Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp
        675                 680                 685
Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln
    690                 695                 700
Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly Ile Val Tyr Gly Ile Ser Lys Tyr Gly
705                 710                 715                 720
Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile
                725                 730                 735
Glu Arg Tyr Phe Glu Ser Phe Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn
            740                 745                 750
Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu His
        755                 760                 765
Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp Ile Thr Ser Arg Asn Phe Arg Val Arg
    770                 775                 780
Ser Phe Ala Glu Arg Met Ala Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala
785                 790                 795                 800
Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys
                805                 810                 815
Glu Glu Arg Leu Gln Ala His Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu
            820                 825                 830
Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val
        835                 840                 845
Pro Glu Val Met Glu Gln Ala Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val
    850                 855                 860
Asp Tyr His Tyr Gly Ser Thr Trp Tyr Asp Ala Lys
865                 870                 875
<210> 43
<211> 876
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽序列
<400> 43
Met Lys Lys Lys Leu Val Leu Ile Asp Gly Ser Ser Val Ala Tyr Arg
1               5                   10                  15
Ala Phe Phe Ala Leu Pro Leu Leu His Asn Asp Lys Gly Ile His Thr
            20                  25                  30
Asn Ala Val Tyr Gly Phe Thr Met Met Leu Asn Lys Ile Leu Ala Glu
        35                  40                  45
Glu Glu Pro Thr His Met Leu Val Ala Phe Asp Ala Gly Lys Thr Thr
    50                  55                  60
Phe Arg His Glu Ala Phe Gln Glu Tyr Lys Gly Gly Arg Gln Gln Thr
65                  70                  75                  80
Pro Pro Glu Leu Ser Glu Gln Phe Pro Leu Leu Arg Glu Leu Leu Arg
                85                  90                  95
Ala Tyr Arg Ile Pro Ala Tyr Glu Leu Glu Asn Tyr Glu Ala Asp Asp
            100                 105                 110
Ile Ile Gly Thr Leu Ala Ala Arg Ala Glu Gln Glu Gly Phe Glu Val
        115                 120                 125
Lys Val Ile Ser Gly Asp Arg Asp Leu Thr Gln Leu Ala Ser Pro His
    130                 135                 140
Val Thr Val Asp Ile Thr Lys Lys Gly Ile Thr Asp Ile Glu Pro Tyr
145                 150                 155                 160
Thr Pro Glu Thr Val Arg Glu Lys Tyr Gly Leu Thr Pro Glu Gln Ile
                165                 170                 175
Val Asp Leu Lys Gly Leu Met Gly Asp Lys Ser Asp Asn Ile Pro Gly
            180                 185                 190
Val Pro Gly Ile Gly Glu Lys Thr Ala Val Lys Leu Leu Arg Gln Phe
        195                 200                 205
Gly Thr Val Glu Asn Val Leu Ala Ser Ile Asp Glu Ile Lys Gly Glu
    210                 215                 220
Lys Leu Lys Glu Thr Leu Arg Gln His Arg Glu Met Ala Leu Leu Ser
225                 230                 235                 240
Lys Lys Leu Ala Ala Ile Arg Arg Asp Ala Pro Val Glu Leu Ser Leu
                245                 250                 255
Asp Asp Ile Ala Tyr Gln Gly Glu Asp Arg Glu Lys Val Val Ala Leu
            260                 265                 270
Phe Lys Glu Leu Gly Phe Gln Ser Phe Leu Glu Lys Met Glu Ser Pro
        275                 280                 285
Ser Ser Glu Glu Glu Lys Pro Leu Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala
    290                 295                 300
Asp Arg Val Thr Glu Glu Met Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val
305                 310                 315                 320
Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala
                325                 330                 335
Val Val Asn Glu His Gly Arg Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu
            340                 345                 350
Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys
        355                 360                 365
Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly
    370                 375                 380
Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu
385                 390                 395                 400
Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met
                405                 410                 415
Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly
            420                 425                 430
Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val
        435                 440                 445
Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu
    450                 455                 460
Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro
465                 470                 475                 480
Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp
                485                 490                 495
Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly
            500                 505                 510
Thr Val Glu Gln Arg Ile Tyr Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile
        515                 520                 525
Asn Ser Arg Lys Gln Leu Gly Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu
    530                 535                 540
Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val
545                 550                 555                 560
Leu Glu Lys Leu Ala Pro Tyr His Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu Met
                565                 570                 575
Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu
            580                 585                 590
Lys Val Val Arg Pro Asp Thr Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln
        595                 600                 605
Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln
    610                 615                 620
Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe
625                 630                 635                 640
Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln
                645                 650                 655
Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met
            660                 665                 670
Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp
        675                 680                 685
Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln
    690                 695                 700
Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly Ile Val Tyr Gly Ile Ser Lys Tyr Gly
705                 710                 715                 720
Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile
                725                 730                 735
Glu Arg Tyr Phe Glu Ser Phe Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn
            740                 745                 750
Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu His
        755                 760                 765
Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp Ile Thr Ser Arg Asn Phe Arg Val Arg
    770                 775                 780
Ser Phe Ala Glu Arg Met Ala Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala
785                 790                 795                 800
Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys
                805                 810                 815
Glu Glu Arg Leu Gln Ala His Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu
            820                 825                 830
Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val
        835                 840                 845
Pro Glu Val Met Glu Gln Ala Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val
    850                 855                 860
Asp Tyr His Tyr Gly Ser Thr Trp Tyr Asp Ala Lys
865                 870                 875
<210> 44
<211> 876
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽序列
<400> 44
Met Lys Lys Lys Leu Val Leu Ile Asp Gly Ser Ser Val Ala Tyr Arg
1               5                   10                  15
Ala Phe Phe Ala Leu Pro Leu Leu His Asn Asp Lys Gly Ile His Thr
            20                  25                  30
Asn Ala Val Tyr Gly Phe Thr Met Met Leu Asn Lys Ile Leu Ala Glu
        35                  40                  45
Glu Glu Pro Thr His Met Leu Val Ala Phe Asp Ala Gly Lys Thr Thr
    50                  55                  60
Phe Arg His Glu Ala Phe Gln Glu Tyr Lys Gly Gly Arg Gln Gln Thr
65                  70                  75                  80
Pro Pro Glu Leu Ser Glu Gln Phe Pro Leu Leu Arg Glu Leu Leu Arg
                85                  90                  95
Ala Tyr Arg Ile Pro Ala Tyr Glu Leu Glu Asn Tyr Glu Ala Asp Asp
            100                 105                 110
Ile Ile Gly Thr Leu Ala Ala Arg Ala Glu Gln Glu Gly Phe Glu Val
        115                 120                 125
Lys Val Ile Ser Gly Asp Arg Asp Leu Thr Gln Leu Ala Ser Pro His
    130                 135                 140
Val Thr Val Asp Ile Thr Lys Lys Gly Ile Thr Asp Ile Glu Pro Tyr
145                 150                 155                 160
Thr Pro Glu Thr Val Arg Glu Lys Tyr Gly Leu Thr Pro Glu Gln Ile
                165                 170                 175
Val Asp Leu Lys Gly Leu Met Gly Asp Lys Ser Asp Asn Ile Pro Gly
            180                 185                 190
Val Pro Gly Ile Gly Glu Lys Thr Ala Val Lys Leu Leu Arg Gln Phe
        195                 200                 205
Gly Thr Val Glu Asn Val Leu Ala Ser Ile Asp Glu Ile Lys Gly Glu
    210                 215                 220
Lys Leu Lys Glu Thr Leu Arg Gln His Arg Glu Met Ala Leu Leu Ser
225                 230                 235                 240
Lys Lys Leu Ala Ala Ile Arg Arg Asp Ala Pro Val Glu Leu Ser Leu
                245                 250                 255
Asp Asp Ile Ala Tyr Gln Gly Glu Asp Arg Glu Lys Val Val Ala Leu
            260                 265                 270
Phe Lys Glu Leu Gly Phe Gln Ser Phe Leu Glu Lys Met Glu Ser Pro
        275                 280                 285
Ser Ser Glu Glu Glu Lys Pro Leu Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala
    290                 295                 300
Asp Arg Val Thr Glu Glu Met Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val
305                 310                 315                 320
Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala
                325                 330                 335
Val Val Asn Glu His Gly Arg Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu
            340                 345                 350
Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys
        355                 360                 365
Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly
    370                 375                 380
Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu
385                 390                 395                 400
Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met
                405                 410                 415
Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly
            420                 425                 430
Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val
        435                 440                 445
Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu
    450                 455                 460
Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro
465                 470                 475                 480
Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp
                485                 490                 495
Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly
            500                 505                 510
Thr Val His Gln Arg Ile Tyr Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile
        515                 520                 525
Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu
    530                 535                 540
Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val
545                 550                 555                 560
Leu Glu Lys Leu Ala Pro Tyr His Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu Met
                565                 570                 575
Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu
            580                 585                 590
Lys Val Val Arg Pro Asp Thr Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln
        595                 600                 605
Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln
    610                 615                 620
Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe
625                 630                 635                 640
Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln
                645                 650                 655
Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met
            660                 665                 670
Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp
        675                 680                 685
Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln
    690                 695                 700
Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly Ile Val Tyr Gly Ile Ser Lys Tyr Gly
705                 710                 715                 720
Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile
                725                 730                 735
Glu Arg Tyr Phe Glu Ser Phe Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn
            740                 745                 750
Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu His
        755                 760                 765
Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp Ile Thr Ser Arg Asn Phe Arg Val Arg
    770                 775                 780
Ser Phe Ala Glu Arg Met Ala Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala
785                 790                 795                 800
Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys
                805                 810                 815
Glu Glu Arg Leu Gln Ala His Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu
            820                 825                 830
Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val
        835                 840                 845
Pro Glu Val Met Glu Gln Ala Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val
    850                 855                 860
Asp Tyr His Tyr Gly Ser Thr Trp Tyr Asp Ala Lys
865                 870                 875
<210> 45
<211> 876
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽序列
<400> 45
Met Lys Lys Lys Leu Val Leu Ile Asp Gly Ser Ser Val Ala Tyr Arg
1               5                   10                  15
Ala Phe Phe Ala Leu Pro Leu Leu His Asn Asp Lys Gly Ile His Thr
            20                  25                  30
Asn Ala Val Tyr Gly Phe Thr Met Met Leu Asn Lys Ile Leu Ala Glu
        35                  40                  45
Glu Glu Pro Thr His Met Leu Val Ala Phe Asp Ala Gly Lys Thr Thr
    50                  55                  60
Phe Arg His Glu Ala Phe Gln Glu Tyr Lys Gly Gly Arg Gln Gln Thr
65                  70                  75                  80
Pro Pro Glu Leu Ser Glu Gln Phe Pro Leu Leu Arg Glu Leu Leu Arg
                85                  90                  95
Ala Tyr Arg Ile Pro Ala Tyr Glu Leu Glu Asn Tyr Glu Ala Asp Asp
            100                 105                 110
Ile Ile Gly Thr Leu Ala Ala Arg Ala Glu Gln Glu Gly Phe Glu Val
        115                 120                 125
Lys Val Ile Ser Gly Asp Arg Asp Leu Thr Gln Leu Ala Ser Pro His
    130                 135                 140
Val Thr Val Asp Ile Thr Lys Lys Gly Ile Thr Asp Ile Glu Pro Tyr
145                 150                 155                 160
Thr Pro Glu Thr Val Arg Glu Lys Tyr Gly Leu Thr Pro Glu Gln Ile
                165                 170                 175
Val Asp Leu Lys Gly Leu Met Gly Asp Lys Ser Asp Asn Ile Pro Gly
            180                 185                 190
Val Pro Gly Ile Gly Glu Lys Thr Ala Val Lys Leu Leu Arg Gln Phe
        195                 200                 205
Gly Thr Val Glu Asn Val Leu Ala Ser Ile Asp Glu Ile Lys Gly Glu
    210                 215                 220
Lys Leu Lys Glu Thr Leu Arg Gln His Arg Glu Met Ala Leu Leu Ser
225                 230                 235                 240
Lys Lys Leu Ala Ala Ile Arg Arg Asp Ala Pro Val Glu Leu Ser Leu
                245                 250                 255
Asp Asp Ile Ala Tyr Gln Gly Glu Asp Arg Glu Lys Val Val Ala Leu
            260                 265                 270
Phe Lys Glu Leu Gly Phe Gln Ser Phe Leu Glu Lys Met Glu Ser Pro
        275                 280                 285
Ser Ser Glu Glu Glu Lys Pro Leu Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala
    290                 295                 300
Asp Arg Val Thr Glu Glu Met Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val
305                 310                 315                 320
Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala
                325                 330                 335
Val Val Asn Glu His Gly Arg Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu
            340                 345                 350
Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys
        355                 360                 365
Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly
    370                 375                 380
Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu
385                 390                 395                 400
Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met
                405                 410                 415
Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly
            420                 425                 430
Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val
        435                 440                 445
Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu
    450                 455                 460
Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro
465                 470                 475                 480
Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp
                485                 490                 495
Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly
            500                 505                 510
Thr Val Lys Gln Arg Ile Tyr Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile
        515                 520                 525
Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu
    530                 535                 540
Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val
545                 550                 555                 560
Leu Glu Lys Leu Ala Pro Tyr His Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu Met
                565                 570                 575
Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu
            580                 585                 590
Lys Val Val Arg Pro Asp Thr Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln
        595                 600                 605
Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln
    610                 615                 620
Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe
625                 630                 635                 640
Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln
                645                 650                 655
Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met
            660                 665                 670
Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp
        675                 680                 685
Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln
    690                 695                 700
Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly Ile Val Tyr Gly Ile Ser Lys Tyr Gly
705                 710                 715                 720
Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile
                725                 730                 735
Glu Arg Tyr Phe Glu Ser Phe Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn
            740                 745                 750
Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu His
        755                 760                 765
Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp Ile Thr Ser Arg Asn Phe Arg Val Arg
    770                 775                 780
Ser Phe Ala Glu Arg Met Ala Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala
785                 790                 795                 800
Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys
                805                 810                 815
Glu Glu Arg Leu Gln Ala His Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu
            820                 825                 830
Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val
        835                 840                 845
Pro Glu Val Met Glu Gln Ala Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val
    850                 855                 860
Asp Tyr His Tyr Gly Ser Thr Trp Tyr Asp Ala Lys
865                 870                 875
<210> 46
<211> 876
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽序列
<400> 46
Met Lys Lys Lys Leu Val Leu Ile Asp Gly Ser Ser Val Ala Tyr Arg
1               5                   10                  15
Ala Phe Phe Ala Leu Pro Leu Leu His Asn Asp Lys Gly Ile His Thr
            20                  25                  30
Asn Ala Val Tyr Gly Phe Thr Met Met Leu Asn Lys Ile Leu Ala Glu
        35                  40                  45
Glu Glu Pro Thr His Met Leu Val Ala Phe Asp Ala Gly Lys Thr Thr
    50                  55                  60
Phe Arg His Glu Ala Phe Gln Glu Tyr Lys Gly Gly Arg Gln Gln Thr
65                  70                  75                  80
Pro Pro Glu Leu Ser Glu Gln Phe Pro Leu Leu Arg Glu Leu Leu Arg
                85                  90                  95
Ala Tyr Arg Ile Pro Ala Tyr Glu Leu Glu Asn Tyr Glu Ala Asp Asp
            100                 105                 110
Ile Ile Gly Thr Leu Ala Ala Arg Ala Glu Gln Glu Gly Phe Glu Val
        115                 120                 125
Lys Val Ile Ser Gly Asp Arg Asp Leu Thr Gln Leu Ala Ser Pro His
    130                 135                 140
Val Thr Val Asp Ile Thr Lys Lys Gly Ile Thr Asp Ile Glu Pro Tyr
145                 150                 155                 160
Thr Pro Glu Thr Val Arg Glu Lys Tyr Gly Leu Thr Pro Glu Gln Ile
                165                 170                 175
Val Asp Leu Lys Gly Leu Met Gly Asp Lys Ser Asp Asn Ile Pro Gly
            180                 185                 190
Val Pro Gly Ile Gly Glu Lys Thr Ala Val Lys Leu Leu Arg Gln Phe
        195                 200                 205
Gly Thr Val Glu Asn Val Leu Ala Ser Ile Asp Glu Ile Lys Gly Glu
    210                 215                 220
Lys Leu Lys Glu Thr Leu Arg Gln His Arg Glu Met Ala Leu Leu Ser
225                 230                 235                 240
Lys Lys Leu Ala Ala Ile Arg Arg Asp Ala Pro Val Glu Leu Ser Leu
                245                 250                 255
Asp Asp Ile Ala Tyr Gln Gly Glu Asp Arg Glu Lys Val Val Ala Leu
            260                 265                 270
Phe Lys Glu Leu Gly Phe Gln Ser Phe Leu Glu Lys Met Glu Ser Pro
        275                 280                 285
Ser Ser Glu Glu Glu Lys Pro Leu Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala
    290                 295                 300
Asp Arg Val Thr Glu Glu Met Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val
305                 310                 315                 320
Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala
                325                 330                 335
Val Val Asn Glu His Gly Arg Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu
            340                 345                 350
Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys
        355                 360                 365
Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly
    370                 375                 380
Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu
385                 390                 395                 400
Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met
                405                 410                 415
Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly
            420                 425                 430
Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val
        435                 440                 445
Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu
    450                 455                 460
Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro
465                 470                 475                 480
Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp
                485                 490                 495
Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly
            500                 505                 510
Thr Val Thr Gln Arg Ile Tyr Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile
        515                 520                 525
Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu
    530                 535                 540
Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val
545                 550                 555                 560
Leu Glu Lys Leu Ala Pro Tyr His Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu Met
                565                 570                 575
Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu
            580                 585                 590
Lys Val Val Arg Pro Asp Thr Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln
        595                 600                 605
Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln
    610                 615                 620
Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe
625                 630                 635                 640
Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln
                645                 650                 655
Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met
            660                 665                 670
Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp
        675                 680                 685
Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln
    690                 695                 700
Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly Ile Val Tyr Gly Ile Ser Lys Tyr Gly
705                 710                 715                 720
Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile
                725                 730                 735
Glu Arg Tyr Phe Glu Ser Phe Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn
            740                 745                 750
Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu His
        755                 760                 765
Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp Ile Thr Ser Arg Asn Phe Arg Val Arg
    770                 775                 780
Ser Phe Ala Glu Arg Met Ala Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala
785                 790                 795                 800
Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys
                805                 810                 815
Glu Glu Arg Leu Gln Ala His Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu
            820                 825                 830
Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val
        835                 840                 845
Pro Glu Val Met Glu Gln Ala Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val
    850                 855                 860
Asp Tyr His Tyr Gly Ser Thr Trp Tyr Asp Ala Lys
865                 870                 875
<210> 47
<211> 876
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽序列
<400> 47
Met Lys Lys Lys Leu Val Leu Ile Asp Gly Ser Ser Val Ala Tyr Arg
1               5                   10                  15
Ala Phe Phe Ala Leu Pro Leu Leu His Asn Asp Lys Gly Ile His Thr
            20                  25                  30
Asn Ala Val Tyr Gly Phe Thr Met Met Leu Asn Lys Ile Leu Ala Glu
        35                  40                  45
Glu Glu Pro Thr His Met Leu Val Ala Phe Asp Ala Gly Lys Thr Thr
    50                  55                  60
Phe Arg His Glu Ala Phe Gln Glu Tyr Lys Gly Gly Arg Gln Gln Thr
65                  70                  75                  80
Pro Pro Glu Leu Ser Glu Gln Phe Pro Leu Leu Arg Glu Leu Leu Arg
                85                  90                  95
Ala Tyr Arg Ile Pro Ala Tyr Glu Leu Glu Asn Tyr Glu Ala Asp Asp
            100                 105                 110
Ile Ile Gly Thr Leu Ala Ala Arg Ala Glu Gln Glu Gly Phe Glu Val
        115                 120                 125
Lys Val Ile Ser Gly Asp Arg Asp Leu Thr Gln Leu Ala Ser Pro His
    130                 135                 140
Val Thr Val Asp Ile Thr Lys Lys Gly Ile Thr Asp Ile Glu Pro Tyr
145                 150                 155                 160
Thr Pro Glu Thr Val Arg Glu Lys Tyr Gly Leu Thr Pro Glu Gln Ile
                165                 170                 175
Val Asp Leu Lys Gly Leu Met Gly Asp Lys Ser Asp Asn Ile Pro Gly
            180                 185                 190
Val Pro Gly Ile Gly Glu Lys Thr Ala Val Lys Leu Leu Arg Gln Phe
        195                 200                 205
Gly Thr Val Glu Asn Val Leu Ala Ser Ile Asp Glu Ile Lys Gly Glu
    210                 215                 220
Lys Leu Lys Glu Thr Leu Arg Gln His Arg Glu Met Ala Leu Leu Ser
225                 230                 235                 240
Lys Lys Leu Ala Ala Ile Arg Arg Asp Ala Pro Val Glu Leu Ser Leu
                245                 250                 255
Asp Asp Ile Ala Tyr Gln Gly Glu Asp Arg Glu Lys Val Val Ala Leu
            260                 265                 270
Phe Lys Glu Leu Gly Phe Gln Ser Phe Leu Glu Lys Met Glu Ser Pro
        275                 280                 285
Ser Ser Glu Glu Glu Lys Pro Leu Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala
    290                 295                 300
Asp Arg Val Thr Glu Glu Met Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val
305                 310                 315                 320
Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala
                325                 330                 335
Val Val Asn Glu His Gly Arg Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu
            340                 345                 350
Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys
        355                 360                 365
Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly
    370                 375                 380
Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu
385                 390                 395                 400
Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met
                405                 410                 415
Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly
            420                 425                 430
Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val
        435                 440                 445
Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu
    450                 455                 460
Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro
465                 470                 475                 480
Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp
                485                 490                 495
Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly
            500                 505                 510
Thr Val Glu Gln Arg Ile Tyr Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile
        515                 520                 525
Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu
    530                 535                 540
Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys Thr Gly Tyr Lys Thr Ser Ala Asp Val
545                 550                 555                 560
Leu Glu Lys Leu Ala Pro Tyr His Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu Met
                565                 570                 575
Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu
            580                 585                 590
Lys Val Val Arg Pro Asp Thr Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln
        595                 600                 605
Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln
    610                 615                 620
Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe
625                 630                 635                 640
Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln
                645                 650                 655
Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met
            660                 665                 670
Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp
        675                 680                 685
Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln
    690                 695                 700
Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly Ile Val Tyr Gly Ile Ser Lys Tyr Gly
705                 710                 715                 720
Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile
                725                 730                 735
Glu Arg Tyr Phe Glu Ser Phe Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn
            740                 745                 750
Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu His
        755                 760                 765
Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp Ile Thr Ser Arg Asn Phe Arg Val Arg
    770                 775                 780
Ser Phe Ala Glu Arg Met Ala Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala
785                 790                 795                 800
Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys
                805                 810                 815
Glu Glu Arg Leu Gln Ala His Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu
            820                 825                 830
Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val
        835                 840                 845
Pro Glu Val Met Glu Gln Ala Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val
    850                 855                 860
Asp Tyr His Tyr Gly Ser Thr Trp Tyr Asp Ala Lys
865                 870                 875
<210> 48
<211> 876
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽序列
<400> 48
Met Lys Lys Lys Leu Val Leu Ile Asp Gly Ser Ser Val Ala Tyr Arg
1               5                   10                  15
Ala Phe Phe Ala Leu Pro Leu Leu His Asn Asp Lys Gly Ile His Thr
            20                  25                  30
Asn Ala Val Tyr Gly Phe Thr Met Met Leu Asn Lys Ile Leu Ala Glu
        35                  40                  45
Glu Glu Pro Thr His Met Leu Val Ala Phe Asp Ala Gly Lys Thr Thr
    50                  55                  60
Phe Arg His Glu Ala Phe Gln Glu Tyr Lys Gly Gly Arg Gln Gln Thr
65                  70                  75                  80
Pro Pro Glu Leu Ser Glu Gln Phe Pro Leu Leu Arg Glu Leu Leu Arg
                85                  90                  95
Ala Tyr Arg Ile Pro Ala Tyr Glu Leu Glu Asn Tyr Glu Ala Asp Asp
            100                 105                 110
Ile Ile Gly Thr Leu Ala Ala Arg Ala Glu Gln Glu Gly Phe Glu Val
        115                 120                 125
Lys Val Ile Ser Gly Asp Arg Asp Leu Thr Gln Leu Ala Ser Pro His
    130                 135                 140
Val Thr Val Asp Ile Thr Lys Lys Gly Ile Thr Asp Ile Glu Pro Tyr
145                 150                 155                 160
Thr Pro Glu Thr Val Arg Glu Lys Tyr Gly Leu Thr Pro Glu Gln Ile
                165                 170                 175
Val Asp Leu Lys Gly Leu Met Gly Asp Lys Ser Asp Asn Ile Pro Gly
            180                 185                 190
Val Pro Gly Ile Gly Glu Lys Thr Ala Val Lys Leu Leu Arg Gln Phe
        195                 200                 205
Gly Thr Val Glu Asn Val Leu Ala Ser Ile Asp Glu Ile Lys Gly Glu
    210                 215                 220
Lys Leu Lys Glu Thr Leu Arg Gln His Arg Glu Met Ala Leu Leu Ser
225                 230                 235                 240
Lys Lys Leu Ala Ala Ile Arg Arg Asp Ala Pro Val Glu Leu Ser Leu
                245                 250                 255
Asp Asp Ile Ala Tyr Gln Gly Glu Asp Arg Glu Lys Val Val Ala Leu
            260                 265                 270
Phe Lys Glu Leu Gly Phe Gln Ser Phe Leu Glu Lys Met Glu Ser Pro
        275                 280                 285
Ser Ser Glu Glu Glu Lys Pro Leu Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala
    290                 295                 300
Asp Arg Val Thr Glu Glu Met Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val
305                 310                 315                 320
Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala
                325                 330                 335
Val Val Asn Glu His Gly Arg Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu
            340                 345                 350
Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys
        355                 360                 365
Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly
    370                 375                 380
Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu
385                 390                 395                 400
Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met
                405                 410                 415
Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly
            420                 425                 430
Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val
        435                 440                 445
Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu
    450                 455                 460
Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro
465                 470                 475                 480
Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp
                485                 490                 495
Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly
            500                 505                 510
Thr Val Glu Gln Arg Ile Tyr Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile
        515                 520                 525
Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu
    530                 535                 540
Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val
545                 550                 555                 560
Leu Glu Lys Leu Ala Pro Tyr His Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu Met
                565                 570                 575
Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu
            580                 585                 590
Lys Val Val Arg Pro Asp Thr Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln
        595                 600                 605
Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg Leu Ser Ser Arg Glu Pro Asn Leu Gln
    610                 615                 620
Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe
625                 630                 635                 640
Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln
                645                 650                 655
Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met
            660                 665                 670
Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp
        675                 680                 685
Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln
    690                 695                 700
Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly Ile Val Tyr Gly Ile Ser Lys Tyr Gly
705                 710                 715                 720
Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile
                725                 730                 735
Glu Arg Tyr Phe Glu Ser Phe Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn
            740                 745                 750
Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu His
        755                 760                 765
Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp Ile Thr Ser Arg Asn Phe Arg Val Arg
    770                 775                 780
Ser Phe Ala Glu Arg Met Ala Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala
785                 790                 795                 800
Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys
                805                 810                 815
Glu Glu Arg Leu Gln Ala His Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu
            820                 825                 830
Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val
        835                 840                 845
Pro Glu Val Met Glu Gln Ala Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val
    850                 855                 860
Asp Tyr His Tyr Gly Ser Thr Trp Tyr Asp Ala Lys
865                 870                 875
<210> 49
<211> 876
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽序列
<400> 49
Met Lys Lys Lys Leu Val Leu Ile Asp Gly Ser Ser Val Ala Tyr Arg
1               5                   10                  15
Ala Phe Phe Ala Leu Pro Leu Leu His Asn Asp Lys Gly Ile His Thr
            20                  25                  30
Asn Ala Val Tyr Gly Phe Thr Met Met Leu Asn Lys Ile Leu Ala Glu
        35                  40                  45
Glu Glu Pro Thr His Met Leu Val Ala Phe Asp Ala Gly Lys Thr Thr
    50                  55                  60
Phe Arg His Glu Ala Phe Gln Glu Tyr Lys Gly Gly Arg Gln Gln Thr
65                  70                  75                  80
Pro Pro Glu Leu Ser Glu Gln Phe Pro Leu Leu Arg Glu Leu Leu Arg
                85                  90                  95
Ala Tyr Arg Ile Pro Ala Tyr Glu Leu Glu Asn Tyr Glu Ala Asp Asp
            100                 105                 110
Ile Ile Gly Thr Leu Ala Ala Arg Ala Glu Gln Glu Gly Phe Glu Val
        115                 120                 125
Lys Val Ile Ser Gly Asp Arg Asp Leu Thr Gln Leu Ala Ser Pro His
    130                 135                 140
Val Thr Val Asp Ile Thr Lys Lys Gly Ile Thr Asp Ile Glu Pro Tyr
145                 150                 155                 160
Thr Pro Glu Thr Val Arg Glu Lys Tyr Gly Leu Thr Pro Glu Gln Ile
                165                 170                 175
Val Asp Leu Lys Gly Leu Met Gly Asp Lys Ser Asp Asn Ile Pro Gly
            180                 185                 190
Val Pro Gly Ile Gly Glu Lys Thr Ala Val Lys Leu Leu Arg Gln Phe
        195                 200                 205
Gly Thr Val Glu Asn Val Leu Ala Ser Ile Asp Glu Ile Lys Gly Glu
    210                 215                 220
Lys Leu Lys Glu Thr Leu Arg Gln His Arg Glu Met Ala Leu Leu Ser
225                 230                 235                 240
Lys Lys Leu Ala Ala Ile Arg Arg Asp Ala Pro Val Glu Leu Ser Leu
                245                 250                 255
Asp Asp Ile Ala Tyr Gln Gly Glu Asp Arg Glu Lys Val Val Ala Leu
            260                 265                 270
Phe Lys Glu Leu Gly Phe Gln Ser Phe Leu Glu Lys Met Glu Ser Pro
        275                 280                 285
Ser Ser Glu Glu Glu Lys Pro Leu Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala
    290                 295                 300
Asp Arg Val Thr Glu Glu Met Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val
305                 310                 315                 320
Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala
                325                 330                 335
Val Val Asn Glu His Gly Arg Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu
            340                 345                 350
Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys
        355                 360                 365
Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly
    370                 375                 380
Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu
385                 390                 395                 400
Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met
                405                 410                 415
Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly
            420                 425                 430
Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val
        435                 440                 445
Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu
    450                 455                 460
Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro
465                 470                 475                 480
Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp
                485                 490                 495
Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly
            500                 505                 510
Thr Val Glu Gln Arg Ile Tyr Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile
        515                 520                 525
Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu
    530                 535                 540
Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val
545                 550                 555                 560
Leu Met Lys Leu Ala Pro Tyr His Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu Met
                565                 570                 575
Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu
            580                 585                 590
Lys Val Val Arg Pro Asp Thr Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln
        595                 600                 605
Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln
    610                 615                 620
Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe
625                 630                 635                 640
Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln
                645                 650                 655
Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met
            660                 665                 670
Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp
        675                 680                 685
Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln
    690                 695                 700
Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly Ile Val Tyr Gly Ile Ser Lys Tyr Gly
705                 710                 715                 720
Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile
                725                 730                 735
Glu Arg Tyr Phe Glu Ser Phe Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn
            740                 745                 750
Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu His
        755                 760                 765
Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp Ile Thr Ser Arg Asn Phe Arg Val Arg
    770                 775                 780
Ser Phe Ala Glu Arg Met Ala Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala
785                 790                 795                 800
Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys
                805                 810                 815
Glu Glu Arg Leu Gln Ala His Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu
            820                 825                 830
Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val
        835                 840                 845
Pro Glu Val Met Glu Gln Ala Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val
    850                 855                 860
Asp Tyr His Tyr Gly Ser Thr Trp Tyr Asp Ala Lys
865                 870                 875
<210> 50
<211> 876
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽序列
<400> 50
Met Lys Lys Lys Leu Val Leu Ile Asp Gly Ser Ser Val Ala Tyr Arg
1               5                   10                  15
Ala Phe Phe Ala Leu Pro Leu Leu His Asn Asp Lys Gly Ile His Thr
            20                  25                  30
Asn Ala Val Tyr Gly Phe Thr Met Met Leu Asn Lys Ile Leu Ala Glu
        35                  40                  45
Glu Glu Pro Thr His Met Leu Val Ala Phe Asp Ala Gly Lys Thr Thr
    50                  55                  60
Phe Arg His Glu Ala Phe Gln Glu Tyr Lys Gly Gly Arg Gln Gln Thr
65                  70                  75                  80
Pro Pro Glu Leu Ser Glu Gln Phe Pro Leu Leu Arg Glu Leu Leu Arg
                85                  90                  95
Ala Tyr Arg Ile Pro Ala Tyr Glu Leu Glu Asn Tyr Glu Ala Asp Asp
            100                 105                 110
Ile Ile Gly Thr Leu Ala Ala Arg Ala Glu Gln Glu Gly Phe Glu Val
        115                 120                 125
Lys Val Ile Ser Gly Asp Arg Asp Leu Thr Gln Leu Ala Ser Pro His
    130                 135                 140
Val Thr Val Asp Ile Thr Lys Lys Gly Ile Thr Asp Ile Glu Pro Tyr
145                 150                 155                 160
Thr Pro Glu Thr Val Arg Glu Lys Tyr Gly Leu Thr Pro Glu Gln Ile
                165                 170                 175
Val Asp Leu Lys Gly Leu Met Gly Asp Lys Ser Asp Asn Ile Pro Gly
            180                 185                 190
Val Pro Gly Ile Gly Glu Lys Thr Ala Val Lys Leu Leu Arg Gln Phe
        195                 200                 205
Gly Thr Val Glu Asn Val Leu Ala Ser Ile Asp Glu Ile Lys Gly Glu
    210                 215                 220
Lys Leu Lys Glu Thr Leu Arg Gln His Arg Glu Met Ala Leu Leu Ser
225                 230                 235                 240
Lys Lys Leu Ala Ala Ile Arg Arg Asp Ala Pro Val Glu Leu Ser Leu
                245                 250                 255
Asp Asp Ile Ala Tyr Gln Gly Glu Asp Arg Glu Lys Val Val Ala Leu
            260                 265                 270
Phe Lys Glu Leu Gly Phe Gln Ser Phe Leu Glu Lys Met Glu Ser Pro
        275                 280                 285
Ser Ser Glu Glu Glu Lys Pro Leu Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala
    290                 295                 300
Asp Arg Val Thr Glu Glu Met Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val
305                 310                 315                 320
Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala
                325                 330                 335
Val Val Asn Glu His Gly Arg Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu
            340                 345                 350
Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys
        355                 360                 365
Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly
    370                 375                 380
Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu
385                 390                 395                 400
Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met
                405                 410                 415
Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly
            420                 425                 430
Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val
        435                 440                 445
Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu
    450                 455                 460
Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro
465                 470                 475                 480
Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp
                485                 490                 495
Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly
            500                 505                 510
Thr Val Glu Gln Arg Ile Tyr Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile
        515                 520                 525
Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu
    530                 535                 540
Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val
545                 550                 555                 560
Leu Lys Lys Leu Ala Pro Tyr His Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu Met
                565                 570                 575
Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu
            580                 585                 590
Lys Val Val Arg Pro Asp Thr Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln
        595                 600                 605
Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln
    610                 615                 620
Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe
625                 630                 635                 640
Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln
                645                 650                 655
Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met
            660                 665                 670
Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp
        675                 680                 685
Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln
    690                 695                 700
Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly Ile Val Tyr Gly Ile Ser Lys Tyr Gly
705                 710                 715                 720
Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile
                725                 730                 735
Glu Arg Tyr Phe Glu Ser Phe Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn
            740                 745                 750
Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu His
        755                 760                 765
Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp Ile Thr Ser Arg Asn Phe Arg Val Arg
    770                 775                 780
Ser Phe Ala Glu Arg Met Ala Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala
785                 790                 795                 800
Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys
                805                 810                 815
Glu Glu Arg Leu Gln Ala His Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu
            820                 825                 830
Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val
        835                 840                 845
Pro Glu Val Met Glu Gln Ala Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val
    850                 855                 860
Asp Tyr His Tyr Gly Ser Thr Trp Tyr Asp Ala Lys
865                 870                 875
<210> 51
<211> 876
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽序列
<400> 51
Met Lys Lys Lys Leu Val Leu Ile Asp Gly Ser Ser Val Ala Tyr Arg
1               5                   10                  15
Ala Phe Phe Ala Leu Pro Leu Leu His Asn Asp Lys Gly Ile His Thr
            20                  25                  30
Asn Ala Val Tyr Gly Phe Thr Met Met Leu Asn Lys Ile Leu Ala Glu
        35                  40                  45
Glu Glu Pro Thr His Met Leu Val Ala Phe Asp Ala Gly Lys Thr Thr
    50                  55                  60
Phe Arg His Glu Ala Phe Gln Glu Tyr Lys Gly Gly Arg Gln Gln Thr
65                  70                  75                  80
Pro Pro Glu Leu Ser Glu Gln Phe Pro Leu Leu Arg Glu Leu Leu Arg
                85                  90                  95
Ala Tyr Arg Ile Pro Ala Tyr Glu Leu Glu Asn Tyr Glu Ala Asp Asp
            100                 105                 110
Ile Ile Gly Thr Leu Ala Ala Arg Ala Glu Gln Glu Gly Phe Glu Val
        115                 120                 125
Lys Val Ile Ser Gly Asp Arg Asp Leu Thr Gln Leu Ala Ser Pro His
    130                 135                 140
Val Thr Val Asp Ile Thr Lys Lys Gly Ile Thr Asp Ile Glu Pro Tyr
145                 150                 155                 160
Thr Pro Glu Thr Val Arg Glu Lys Tyr Gly Leu Thr Pro Glu Gln Ile
                165                 170                 175
Val Asp Leu Lys Gly Leu Met Gly Asp Lys Ser Asp Asn Ile Pro Gly
            180                 185                 190
Val Pro Gly Ile Gly Glu Lys Thr Ala Val Lys Leu Leu Arg Gln Phe
        195                 200                 205
Gly Thr Val Glu Asn Val Leu Ala Ser Ile Asp Glu Ile Lys Gly Glu
    210                 215                 220
Lys Leu Lys Glu Thr Leu Arg Gln His Arg Glu Met Ala Leu Leu Ser
225                 230                 235                 240
Lys Lys Leu Ala Ala Ile Arg Arg Asp Ala Pro Val Glu Leu Ser Leu
                245                 250                 255
Asp Asp Ile Ala Tyr Gln Gly Glu Asp Arg Glu Lys Val Val Ala Leu
            260                 265                 270
Phe Lys Glu Leu Gly Phe Gln Ser Phe Leu Glu Lys Met Glu Ser Pro
        275                 280                 285
Ser Ser Glu Glu Glu Lys Pro Leu Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala
    290                 295                 300
Asp Arg Val Thr Glu Glu Met Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val
305                 310                 315                 320
Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala
                325                 330                 335
Val Val Asn Glu His Gly Arg Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu
            340                 345                 350
Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys
        355                 360                 365
Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly
    370                 375                 380
Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu
385                 390                 395                 400
Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met
                405                 410                 415
Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly
            420                 425                 430
Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val
        435                 440                 445
Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu
    450                 455                 460
Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro
465                 470                 475                 480
Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp
                485                 490                 495
Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly
            500                 505                 510
Thr Val Glu Gln Arg Ile Tyr Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile
        515                 520                 525
Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu
    530                 535                 540
Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val
545                 550                 555                 560
Leu Arg Lys Leu Ala Pro Tyr His Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu Met
                565                 570                 575
Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu
            580                 585                 590
Lys Val Val Arg Pro Asp Thr Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln
        595                 600                 605
Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln
    610                 615                 620
Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe
625                 630                 635                 640
Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln
                645                 650                 655
Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met
            660                 665                 670
Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp
        675                 680                 685
Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln
    690                 695                 700
Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly Ile Val Tyr Gly Ile Ser Lys Tyr Gly
705                 710                 715                 720
Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile
                725                 730                 735
Glu Arg Tyr Phe Glu Ser Phe Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn
            740                 745                 750
Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu His
        755                 760                 765
Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp Ile Thr Ser Arg Asn Phe Arg Val Arg
    770                 775                 780
Ser Phe Ala Glu Arg Met Ala Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala
785                 790                 795                 800
Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys
                805                 810                 815
Glu Glu Arg Leu Gln Ala His Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu
            820                 825                 830
Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val
        835                 840                 845
Pro Glu Val Met Glu Gln Ala Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val
    850                 855                 860
Asp Tyr His Tyr Gly Ser Thr Trp Tyr Asp Ala Lys
865                 870                 875
<210> 52
<211> 876
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽序列
<400> 52
Met Lys Lys Lys Leu Val Leu Ile Asp Gly Ser Ser Val Ala Tyr Arg
1               5                   10                  15
Ala Phe Phe Ala Leu Pro Leu Leu His Asn Asp Lys Gly Ile His Thr
            20                  25                  30
Asn Ala Val Tyr Gly Phe Thr Met Met Leu Asn Lys Ile Leu Ala Glu
        35                  40                  45
Glu Glu Pro Thr His Met Leu Val Ala Phe Asp Ala Gly Lys Thr Thr
    50                  55                  60
Phe Arg His Glu Ala Phe Gln Glu Tyr Lys Gly Gly Arg Gln Gln Thr
65                  70                  75                  80
Pro Pro Glu Leu Ser Glu Gln Phe Pro Leu Leu Arg Glu Leu Leu Arg
                85                  90                  95
Ala Tyr Arg Ile Pro Ala Tyr Glu Leu Glu Asn Tyr Glu Ala Asp Asp
            100                 105                 110
Ile Ile Gly Thr Leu Ala Ala Arg Ala Glu Gln Glu Gly Phe Glu Val
        115                 120                 125
Lys Val Ile Ser Gly Asp Arg Asp Leu Thr Gln Leu Ala Ser Pro His
    130                 135                 140
Val Thr Val Asp Ile Thr Lys Lys Gly Ile Thr Asp Ile Glu Pro Tyr
145                 150                 155                 160
Thr Pro Glu Thr Val Arg Glu Lys Tyr Gly Leu Thr Pro Glu Gln Ile
                165                 170                 175
Val Asp Leu Lys Gly Leu Met Gly Asp Lys Ser Asp Asn Ile Pro Gly
            180                 185                 190
Val Pro Gly Ile Gly Glu Lys Thr Ala Val Lys Leu Leu Arg Gln Phe
        195                 200                 205
Gly Thr Val Glu Asn Val Leu Ala Ser Ile Asp Glu Ile Lys Gly Glu
    210                 215                 220
Lys Leu Lys Glu Thr Leu Arg Gln His Arg Glu Met Ala Leu Leu Ser
225                 230                 235                 240
Lys Lys Leu Ala Ala Ile Arg Arg Asp Ala Pro Val Glu Leu Ser Leu
                245                 250                 255
Asp Asp Ile Ala Tyr Gln Gly Glu Asp Arg Glu Lys Val Val Ala Leu
            260                 265                 270
Phe Lys Glu Leu Gly Phe Gln Ser Phe Leu Glu Lys Met Glu Ser Pro
        275                 280                 285
Ser Ser Glu Glu Glu Lys Pro Leu Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala
    290                 295                 300
Asp Arg Val Thr Glu Glu Met Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val
305                 310                 315                 320
Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala
                325                 330                 335
Val Val Asn Glu His Gly Arg Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu
            340                 345                 350
Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys
        355                 360                 365
Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly
    370                 375                 380
Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu
385                 390                 395                 400
Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met
                405                 410                 415
Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly
            420                 425                 430
Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val
        435                 440                 445
Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu
    450                 455                 460
Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro
465                 470                 475                 480
Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp
                485                 490                 495
Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly
            500                 505                 510
Thr Val Glu Gln Arg Ile Tyr Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile
        515                 520                 525
Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu
    530                 535                 540
Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val
545                 550                 555                 560
Leu Glu Lys Leu Ala Pro Tyr His Glu Ile Val Thr Asn Ile Leu Met
                565                 570                 575
Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu
            580                 585                 590
Lys Val Val Arg Pro Asp Thr Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln
        595                 600                 605
Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln
    610                 615                 620
Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe
625                 630                 635                 640
Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln
                645                 650                 655
Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met
            660                 665                 670
Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp
        675                 680                 685
Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln
    690                 695                 700
Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly Ile Val Tyr Gly Ile Ser Lys Tyr Gly
705                 710                 715                 720
Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile
                725                 730                 735
Glu Arg Tyr Phe Glu Ser Phe Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn
            740                 745                 750
Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu His
        755                 760                 765
Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp Ile Thr Ser Arg Asn Phe Arg Val Arg
    770                 775                 780
Ser Phe Ala Glu Arg Met Ala Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala
785                 790                 795                 800
Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys
                805                 810                 815
Glu Glu Arg Leu Gln Ala His Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu
            820                 825                 830
Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val
        835                 840                 845
Pro Glu Val Met Glu Gln Ala Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val
    850                 855                 860
Asp Tyr His Tyr Gly Ser Thr Trp Tyr Asp Ala Lys
865                 870                 875
<210> 53
<211> 876
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽序列
<400> 53
Met Lys Lys Lys Leu Val Leu Ile Asp Gly Ser Ser Val Ala Tyr Arg
1               5                   10                  15
Ala Phe Phe Ala Leu Pro Leu Leu His Asn Asp Lys Gly Ile His Thr
            20                  25                  30
Asn Ala Val Tyr Gly Phe Thr Met Met Leu Asn Lys Ile Leu Ala Glu
        35                  40                  45
Glu Glu Pro Thr His Met Leu Val Ala Phe Asp Ala Gly Lys Thr Thr
    50                  55                  60
Phe Arg His Glu Ala Phe Gln Glu Tyr Lys Gly Gly Arg Gln Gln Thr
65                  70                  75                  80
Pro Pro Glu Leu Ser Glu Gln Phe Pro Leu Leu Arg Glu Leu Leu Arg
                85                  90                  95
Ala Tyr Arg Ile Pro Ala Tyr Glu Leu Glu Asn Tyr Glu Ala Asp Asp
            100                 105                 110
Ile Ile Gly Thr Leu Ala Ala Arg Ala Glu Gln Glu Gly Phe Glu Val
        115                 120                 125
Lys Val Ile Ser Gly Asp Arg Asp Leu Thr Gln Leu Ala Ser Pro His
    130                 135                 140
Val Thr Val Asp Ile Thr Lys Lys Gly Ile Thr Asp Ile Glu Pro Tyr
145                 150                 155                 160
Thr Pro Glu Thr Val Arg Glu Lys Tyr Gly Leu Thr Pro Glu Gln Ile
                165                 170                 175
Val Asp Leu Lys Gly Leu Met Gly Asp Lys Ser Asp Asn Ile Pro Gly
            180                 185                 190
Val Pro Gly Ile Gly Glu Lys Thr Ala Val Lys Leu Leu Arg Gln Phe
        195                 200                 205
Gly Thr Val Glu Asn Val Leu Ala Ser Ile Asp Glu Ile Lys Gly Glu
    210                 215                 220
Lys Leu Lys Glu Thr Leu Arg Gln His Arg Glu Met Ala Leu Leu Ser
225                 230                 235                 240
Lys Lys Leu Ala Ala Ile Arg Arg Asp Ala Pro Val Glu Leu Ser Leu
                245                 250                 255
Asp Asp Ile Ala Tyr Gln Gly Glu Asp Arg Glu Lys Val Val Ala Leu
            260                 265                 270
Phe Lys Glu Leu Gly Phe Gln Ser Phe Leu Glu Lys Met Glu Ser Pro
        275                 280                 285
Ser Ser Glu Glu Glu Lys Pro Leu Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala
    290                 295                 300
Asp Arg Val Thr Glu Glu Met Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val
305                 310                 315                 320
Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala
                325                 330                 335
Val Val Asn Glu His Gly Arg Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu
            340                 345                 350
Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys
        355                 360                 365
Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly
    370                 375                 380
Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu
385                 390                 395                 400
Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met
                405                 410                 415
Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly
            420                 425                 430
Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val
        435                 440                 445
Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu
    450                 455                 460
Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro
465                 470                 475                 480
Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp
                485                 490                 495
Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly
            500                 505                 510
Thr Val Glu Gln Arg Ile Tyr Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile
        515                 520                 525
Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu
    530                 535                 540
Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val
545                 550                 555                 560
Leu Glu Lys Leu Ala Pro Tyr His Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu Met
                565                 570                 575
Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu Gln Ser Thr Tyr Ile Lys Gly Leu Leu
            580                 585                 590
Lys Val Val Arg Pro Asp Thr Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln
        595                 600                 605
Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln
    610                 615                 620
Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe
625                 630                 635                 640
Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln
                645                 650                 655
Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met
            660                 665                 670
Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp
        675                 680                 685
Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln
    690                 695                 700
Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly Ile Val Tyr Gly Ile Ser Lys Tyr Gly
705                 710                 715                 720
Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile
                725                 730                 735
Glu Arg Tyr Phe Glu Ser Phe Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn
            740                 745                 750
Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu His
        755                 760                 765
Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp Ile Thr Ser Arg Asn Phe Arg Val Arg
    770                 775                 780
Ser Phe Ala Glu Arg Met Ala Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala
785                 790                 795                 800
Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys
                805                 810                 815
Glu Glu Arg Leu Gln Ala His Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu
            820                 825                 830
Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val
        835                 840                 845
Pro Glu Val Met Glu Gln Ala Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val
    850                 855                 860
Asp Tyr His Tyr Gly Ser Thr Trp Tyr Asp Ala Lys
865                 870                 875
<210> 54
<211> 876
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽序列
<400> 54
Met Lys Lys Lys Leu Val Leu Ile Asp Gly Ser Ser Val Ala Tyr Arg
1               5                   10                  15
Ala Phe Phe Ala Leu Pro Leu Leu His Asn Asp Lys Gly Ile His Thr
            20                  25                  30
Asn Ala Val Tyr Gly Phe Thr Met Met Leu Asn Lys Ile Leu Ala Glu
        35                  40                  45
Glu Glu Pro Thr His Met Leu Val Ala Phe Asp Ala Gly Lys Thr Thr
    50                  55                  60
Phe Arg His Glu Ala Phe Gln Glu Tyr Lys Gly Gly Arg Gln Gln Thr
65                  70                  75                  80
Pro Pro Glu Leu Ser Glu Gln Phe Pro Leu Leu Arg Glu Leu Leu Arg
                85                  90                  95
Ala Tyr Arg Ile Pro Ala Tyr Glu Leu Glu Asn Tyr Glu Ala Asp Asp
            100                 105                 110
Ile Ile Gly Thr Leu Ala Ala Arg Ala Glu Gln Glu Gly Phe Glu Val
        115                 120                 125
Lys Val Ile Ser Gly Asp Arg Asp Leu Thr Gln Leu Ala Ser Pro His
    130                 135                 140
Val Thr Val Asp Ile Thr Lys Lys Gly Ile Thr Asp Ile Glu Pro Tyr
145                 150                 155                 160
Thr Pro Glu Thr Val Arg Glu Lys Tyr Gly Leu Thr Pro Glu Gln Ile
                165                 170                 175
Val Asp Leu Lys Gly Leu Met Gly Asp Lys Ser Asp Asn Ile Pro Gly
            180                 185                 190
Val Pro Gly Ile Gly Glu Lys Thr Ala Val Lys Leu Leu Arg Gln Phe
        195                 200                 205
Gly Thr Val Glu Asn Val Leu Ala Ser Ile Asp Glu Ile Lys Gly Glu
    210                 215                 220
Lys Leu Lys Glu Thr Leu Arg Gln His Arg Glu Met Ala Leu Leu Ser
225                 230                 235                 240
Lys Lys Leu Ala Ala Ile Arg Arg Asp Ala Pro Val Glu Leu Ser Leu
                245                 250                 255
Asp Asp Ile Ala Tyr Gln Gly Glu Asp Arg Glu Lys Val Val Ala Leu
            260                 265                 270
Phe Lys Glu Leu Gly Phe Gln Ser Phe Leu Glu Lys Met Glu Ser Pro
        275                 280                 285
Ser Ser Glu Glu Glu Lys Pro Leu Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala
    290                 295                 300
Asp Arg Val Thr Glu Glu Met Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val
305                 310                 315                 320
Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala
                325                 330                 335
Val Val Asn Glu His Gly Arg Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu
            340                 345                 350
Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys
        355                 360                 365
Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly
    370                 375                 380
Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu
385                 390                 395                 400
Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met
                405                 410                 415
Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly
            420                 425                 430
Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val
        435                 440                 445
Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu
    450                 455                 460
Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro
465                 470                 475                 480
Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp
                485                 490                 495
Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly
            500                 505                 510
Thr Val Glu Gln Arg Ile Tyr Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile
        515                 520                 525
Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu
    530                 535                 540
Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val
545                 550                 555                 560
Leu Glu Lys Leu Ala Pro Tyr His Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu Met
                565                 570                 575
Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu
            580                 585                 590
Lys Val Val Arg Pro Asp Thr Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln
        595                 600                 605
Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln
    610                 615                 620
Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe
625                 630                 635                 640
Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln
                645                 650                 655
Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met
            660                 665                 670
Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp
        675                 680                 685
Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln
    690                 695                 700
Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly Ile Val Tyr Gly Ile Ser Lys Tyr Gly
705                 710                 715                 720
Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile
                725                 730                 735
Glu Arg Tyr Phe Glu Ser Phe Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Arg Asn
            740                 745                 750
Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu His
        755                 760                 765
Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp Ile Thr Ser Arg Asn Phe Arg Val Arg
    770                 775                 780
Ser Phe Ala Glu Arg Met Ala Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala
785                 790                 795                 800
Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys
                805                 810                 815
Glu Glu Arg Leu Gln Ala His Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu
            820                 825                 830
Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val
        835                 840                 845
Pro Glu Val Met Glu Gln Ala Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val
    850                 855                 860
Asp Tyr His Tyr Gly Ser Thr Trp Tyr Asp Ala Lys
865                 870                 875
<210> 55
<211> 876
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽序列
<400> 55
Met Lys Lys Lys Leu Val Leu Ile Asp Gly Ser Ser Val Ala Tyr Arg
1               5                   10                  15
Ala Phe Phe Ala Leu Pro Leu Leu His Asn Asp Lys Gly Ile His Thr
            20                  25                  30
Asn Ala Val Tyr Gly Phe Thr Met Met Leu Asn Lys Ile Leu Ala Glu
        35                  40                  45
Glu Glu Pro Thr His Met Leu Val Ala Phe Asp Ala Gly Lys Thr Thr
    50                  55                  60
Phe Arg His Glu Ala Phe Gln Glu Tyr Lys Gly Gly Arg Gln Gln Thr
65                  70                  75                  80
Pro Pro Glu Leu Ser Glu Gln Phe Pro Leu Leu Arg Glu Leu Leu Arg
                85                  90                  95
Ala Tyr Arg Ile Pro Ala Tyr Glu Leu Glu Asn Tyr Glu Ala Asp Asp
            100                 105                 110
Ile Ile Gly Thr Leu Ala Ala Arg Ala Glu Gln Glu Gly Phe Glu Val
        115                 120                 125
Lys Val Ile Ser Gly Asp Arg Asp Leu Thr Gln Leu Ala Ser Pro His
    130                 135                 140
Val Thr Val Asp Ile Thr Lys Lys Gly Ile Thr Asp Ile Glu Pro Tyr
145                 150                 155                 160
Thr Pro Glu Thr Val Arg Glu Lys Tyr Gly Leu Thr Pro Glu Gln Ile
                165                 170                 175
Val Asp Leu Lys Gly Leu Met Gly Asp Lys Ser Asp Asn Ile Pro Gly
            180                 185                 190
Val Pro Gly Ile Gly Glu Lys Thr Ala Val Lys Leu Leu Arg Gln Phe
        195                 200                 205
Gly Thr Val Glu Asn Val Leu Ala Ser Ile Asp Glu Ile Lys Gly Glu
    210                 215                 220
Lys Leu Lys Glu Thr Leu Arg Gln His Arg Glu Met Ala Leu Leu Ser
225                 230                 235                 240
Lys Lys Leu Ala Ala Ile Arg Arg Asp Ala Pro Val Glu Leu Ser Leu
                245                 250                 255
Asp Asp Ile Ala Tyr Gln Gly Glu Asp Arg Glu Lys Val Val Ala Leu
            260                 265                 270
Phe Lys Glu Leu Gly Phe Gln Ser Phe Leu Glu Lys Met Glu Ser Pro
        275                 280                 285
Ser Ser Glu Glu Glu Lys Pro Leu Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala
    290                 295                 300
Asp Arg Val Thr Glu Glu Met Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val
305                 310                 315                 320
Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala
                325                 330                 335
Val Val Asn Glu His Gly Arg Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu
            340                 345                 350
Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys
        355                 360                 365
Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly
    370                 375                 380
Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu
385                 390                 395                 400
Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met
                405                 410                 415
Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly
            420                 425                 430
Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val
        435                 440                 445
Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu
    450                 455                 460
Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro
465                 470                 475                 480
Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp
                485                 490                 495
Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly
            500                 505                 510
Thr Val Glu Gln Arg Ile Tyr Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile
        515                 520                 525
Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu
    530                 535                 540
Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val
545                 550                 555                 560
Leu Glu Lys Leu Ala Pro Tyr His Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu Met
                565                 570                 575
Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu
            580                 585                 590
Lys Val Val Arg Pro Asp Thr Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln
        595                 600                 605
Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln
    610                 615                 620
Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe
625                 630                 635                 640
Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln
                645                 650                 655
Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met
            660                 665                 670
Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp
        675                 680                 685
Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln
    690                 695                 700
Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly Ile Val Tyr Gly Ile Ser Lys Tyr Gly
705                 710                 715                 720
Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile
                725                 730                 735
Glu Arg Tyr Phe Glu Ser Phe Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn
            740                 745                 750
Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu His
        755                 760                 765
Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp Ile Thr Ser Arg Asn Phe Arg Val Arg
    770                 775                 780
Ser Phe Ala Gly Arg Met Ala Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala
785                 790                 795                 800
Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys
                805                 810                 815
Glu Glu Arg Leu Gln Ala His Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu
            820                 825                 830
Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val
        835                 840                 845
Pro Glu Val Met Glu Gln Ala Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val
    850                 855                 860
Asp Tyr His Tyr Gly Ser Thr Trp Tyr Asp Ala Lys
865                 870                 875
<210> 56
<211> 876
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽序列
<400> 56
Met Lys Lys Lys Leu Val Leu Ile Asp Gly Ser Ser Val Ala Tyr Arg
1               5                   10                  15
Ala Phe Phe Ala Leu Pro Leu Leu His Asn Asp Lys Gly Ile His Thr
            20                  25                  30
Asn Ala Val Tyr Gly Phe Thr Met Met Leu Asn Lys Ile Leu Ala Glu
        35                  40                  45
Glu Glu Pro Thr His Met Leu Val Ala Phe Asp Ala Gly Lys Thr Thr
    50                  55                  60
Phe Arg His Glu Ala Phe Gln Glu Tyr Lys Gly Gly Arg Gln Gln Thr
65                  70                  75                  80
Pro Pro Glu Leu Ser Glu Gln Phe Pro Leu Leu Arg Glu Leu Leu Arg
                85                  90                  95
Ala Tyr Arg Ile Pro Ala Tyr Glu Leu Glu Asn Tyr Glu Ala Asp Asp
            100                 105                 110
Ile Ile Gly Thr Leu Ala Ala Arg Ala Glu Gln Glu Gly Phe Glu Val
        115                 120                 125
Lys Val Ile Ser Gly Asp Arg Asp Leu Thr Gln Leu Ala Ser Pro His
    130                 135                 140
Val Thr Val Asp Ile Thr Lys Lys Gly Ile Thr Asp Ile Glu Pro Tyr
145                 150                 155                 160
Thr Pro Glu Thr Val Arg Glu Lys Tyr Gly Leu Thr Pro Glu Gln Ile
                165                 170                 175
Val Asp Leu Lys Gly Leu Met Gly Asp Lys Ser Asp Asn Ile Pro Gly
            180                 185                 190
Val Pro Gly Ile Gly Glu Lys Thr Ala Val Lys Leu Leu Arg Gln Phe
        195                 200                 205
Gly Thr Val Glu Asn Val Leu Ala Ser Ile Asp Glu Ile Lys Gly Glu
    210                 215                 220
Lys Leu Lys Glu Thr Leu Arg Gln His Arg Glu Met Ala Leu Leu Ser
225                 230                 235                 240
Lys Lys Leu Ala Ala Ile Arg Arg Asp Ala Pro Val Glu Leu Ser Leu
                245                 250                 255
Asp Asp Ile Ala Tyr Gln Gly Glu Asp Arg Glu Lys Val Val Ala Leu
            260                 265                 270
Phe Lys Glu Leu Gly Phe Gln Ser Phe Leu Glu Lys Met Glu Ser Pro
        275                 280                 285
Ser Ser Glu Glu Glu Lys Pro Leu Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala
    290                 295                 300
Asp Arg Val Thr Glu Glu Met Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val
305                 310                 315                 320
Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala
                325                 330                 335
Val Val Asn Glu His Gly Arg Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu
            340                 345                 350
Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys
        355                 360                 365
Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly
    370                 375                 380
Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu
385                 390                 395                 400
Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met
                405                 410                 415
Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly
            420                 425                 430
Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val
        435                 440                 445
Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu
    450                 455                 460
Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro
465                 470                 475                 480
Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp
                485                 490                 495
Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly
            500                 505                 510
Thr Val Glu Gln Arg Ile Tyr Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile
        515                 520                 525
Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu
    530                 535                 540
Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val
545                 550                 555                 560
Leu Glu Lys Leu Ala Pro Tyr His Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu Met
                565                 570                 575
Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu
            580                 585                 590
Lys Val Val Arg Pro Asp Thr Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln
        595                 600                 605
Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln
    610                 615                 620
Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe
625                 630                 635                 640
Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln
                645                 650                 655
Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met
            660                 665                 670
Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp
        675                 680                 685
Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln
    690                 695                 700
Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly Ile Val Tyr Gly Ile Ser Lys Tyr Gly
705                 710                 715                 720
Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile
                725                 730                 735
Glu Arg Tyr Phe Glu Ser Phe Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn
            740                 745                 750
Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu His
        755                 760                 765
Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp Ile Thr Ser Arg Asn Phe Arg Val Arg
    770                 775                 780
Ser Phe Ala Arg Arg Met Ala Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala
785                 790                 795                 800
Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys
                805                 810                 815
Glu Glu Arg Leu Gln Ala His Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu
            820                 825                 830
Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val
        835                 840                 845
Pro Glu Val Met Glu Gln Ala Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val
    850                 855                 860
Asp Tyr His Tyr Gly Ser Thr Trp Tyr Asp Ala Lys
865                 870                 875
<210> 57
<211> 876
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽序列
<400> 57
Met Lys Lys Lys Leu Val Leu Ile Asp Gly Ser Ser Val Ala Tyr Arg
1               5                   10                  15
Ala Phe Phe Ala Leu Pro Leu Leu His Asn Asp Lys Gly Ile His Thr
            20                  25                  30
Asn Ala Val Tyr Gly Phe Thr Met Met Leu Asn Lys Ile Leu Ala Glu
        35                  40                  45
Glu Glu Pro Thr His Met Leu Val Ala Phe Asp Ala Gly Lys Thr Thr
    50                  55                  60
Phe Arg His Glu Ala Phe Gln Glu Tyr Lys Gly Gly Arg Gln Gln Thr
65                  70                  75                  80
Pro Pro Glu Leu Ser Glu Gln Phe Pro Leu Leu Arg Glu Leu Leu Arg
                85                  90                  95
Ala Tyr Arg Ile Pro Ala Tyr Glu Leu Glu Asn Tyr Glu Ala Asp Asp
            100                 105                 110
Ile Ile Gly Thr Leu Ala Ala Arg Ala Glu Gln Glu Gly Phe Glu Val
        115                 120                 125
Lys Val Ile Ser Gly Asp Arg Asp Leu Thr Gln Leu Ala Ser Pro His
    130                 135                 140
Val Thr Val Asp Ile Thr Lys Lys Gly Ile Thr Asp Ile Glu Pro Tyr
145                 150                 155                 160
Thr Pro Glu Thr Val Arg Glu Lys Tyr Gly Leu Thr Pro Glu Gln Ile
                165                 170                 175
Val Asp Leu Lys Gly Leu Met Gly Asp Lys Ser Asp Asn Ile Pro Gly
            180                 185                 190
Val Pro Gly Ile Gly Glu Lys Thr Ala Val Lys Leu Leu Arg Gln Phe
        195                 200                 205
Gly Thr Val Glu Asn Val Leu Ala Ser Ile Asp Glu Ile Lys Gly Glu
    210                 215                 220
Lys Leu Lys Glu Thr Leu Arg Gln His Arg Glu Met Ala Leu Leu Ser
225                 230                 235                 240
Lys Lys Leu Ala Ala Ile Arg Arg Asp Ala Pro Val Glu Leu Ser Leu
                245                 250                 255
Asp Asp Ile Ala Tyr Gln Gly Glu Asp Arg Glu Lys Val Val Ala Leu
            260                 265                 270
Phe Lys Glu Leu Gly Phe Gln Ser Phe Leu Glu Lys Met Glu Ser Pro
        275                 280                 285
Ser Ser Glu Glu Glu Lys Pro Leu Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala
    290                 295                 300
Asp Arg Val Thr Glu Glu Met Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val
305                 310                 315                 320
Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala
                325                 330                 335
Val Val Asn Glu His Gly Arg Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu
            340                 345                 350
Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys
        355                 360                 365
Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly
    370                 375                 380
Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu
385                 390                 395                 400
Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met
                405                 410                 415
Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly
            420                 425                 430
Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val
        435                 440                 445
Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu
    450                 455                 460
Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro
465                 470                 475                 480
Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp
                485                 490                 495
Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly
            500                 505                 510
Thr Val Glu Gln Arg Ile Tyr Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile
        515                 520                 525
Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu
    530                 535                 540
Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val
545                 550                 555                 560
Leu Glu Lys Leu Ala Pro Tyr His Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu Met
                565                 570                 575
Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu
            580                 585                 590
Lys Val Val Arg Pro Asp Thr Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln
        595                 600                 605
Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln
    610                 615                 620
Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe
625                 630                 635                 640
Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln
                645                 650                 655
Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met
            660                 665                 670
Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp
        675                 680                 685
Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln
    690                 695                 700
Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly Ile Val Tyr Gly Ile Ser Lys Tyr Gly
705                 710                 715                 720
Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile
                725                 730                 735
Arg Arg Tyr Phe Glu Ser Phe Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn
            740                 745                 750
Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu His
        755                 760                 765
Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp Ile Thr Ser Arg Asn Phe Arg Val Arg
    770                 775                 780
Ser Phe Ala Glu Arg Met Ala Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala
785                 790                 795                 800
Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys
                805                 810                 815
Glu Glu Arg Leu Gln Ala His Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu
            820                 825                 830
Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val
        835                 840                 845
Pro Glu Val Met Glu Gln Ala Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val
    850                 855                 860
Asp Tyr His Tyr Gly Ser Thr Trp Tyr Asp Ala Lys
865                 870                 875
<210> 58
<211> 876
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽序列
<400> 58
Met Lys Lys Lys Leu Val Leu Ile Asp Gly Ser Ser Val Ala Tyr Arg
1               5                   10                  15
Ala Phe Phe Ala Leu Pro Leu Leu His Asn Asp Lys Gly Ile His Thr
            20                  25                  30
Asn Ala Val Tyr Gly Phe Thr Met Met Leu Asn Lys Ile Leu Ala Glu
        35                  40                  45
Glu Glu Pro Thr His Met Leu Val Ala Phe Asp Ala Gly Lys Thr Thr
    50                  55                  60
Phe Arg His Glu Ala Phe Gln Glu Tyr Lys Gly Gly Arg Gln Gln Thr
65                  70                  75                  80
Pro Pro Glu Leu Ser Glu Gln Phe Pro Leu Leu Arg Glu Leu Leu Arg
                85                  90                  95
Ala Tyr Arg Ile Pro Ala Tyr Glu Leu Glu Asn Tyr Glu Ala Asp Asp
            100                 105                 110
Ile Ile Gly Thr Leu Ala Ala Arg Ala Glu Gln Glu Gly Phe Glu Val
        115                 120                 125
Lys Val Ile Ser Gly Asp Arg Asp Leu Thr Gln Leu Ala Ser Pro His
    130                 135                 140
Val Thr Val Asp Ile Thr Lys Lys Gly Ile Thr Asp Ile Glu Pro Tyr
145                 150                 155                 160
Thr Pro Glu Thr Val Arg Glu Lys Tyr Gly Leu Thr Pro Glu Gln Ile
                165                 170                 175
Val Asp Leu Lys Gly Leu Met Gly Asp Lys Ser Asp Asn Ile Pro Gly
            180                 185                 190
Val Pro Gly Ile Gly Glu Lys Thr Ala Val Lys Leu Leu Arg Gln Phe
        195                 200                 205
Gly Thr Val Glu Asn Val Leu Ala Ser Ile Asp Glu Ile Lys Gly Glu
    210                 215                 220
Lys Leu Lys Glu Thr Leu Arg Gln His Arg Glu Met Ala Leu Leu Ser
225                 230                 235                 240
Lys Lys Leu Ala Ala Ile Arg Arg Asp Ala Pro Val Glu Leu Ser Leu
                245                 250                 255
Asp Asp Ile Ala Tyr Gln Gly Glu Asp Arg Glu Lys Val Val Ala Leu
            260                 265                 270
Phe Lys Glu Leu Gly Phe Gln Ser Phe Leu Glu Lys Met Glu Ser Pro
        275                 280                 285
Ser Ser Glu Glu Glu Lys Pro Leu Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala
    290                 295                 300
Asp Arg Val Thr Glu Glu Met Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val
305                 310                 315                 320
Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala
                325                 330                 335
Val Val Asn Glu His Gly Arg Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu
            340                 345                 350
Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys
        355                 360                 365
Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly
    370                 375                 380
Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu
385                 390                 395                 400
Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met
                405                 410                 415
Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly
            420                 425                 430
Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val
        435                 440                 445
Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu
    450                 455                 460
Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro
465                 470                 475                 480
Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp
                485                 490                 495
Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly
            500                 505                 510
Thr Val Glu Gln Arg Ile Tyr Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile
        515                 520                 525
Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu
    530                 535                 540
Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val
545                 550                 555                 560
Leu Glu Lys Leu Ala Pro Tyr His Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu Met
                565                 570                 575
Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu
            580                 585                 590
Lys Val Val Arg Pro Asp Thr Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln
        595                 600                 605
Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln
    610                 615                 620
Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe
625                 630                 635                 640
Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln
                645                 650                 655
Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met
            660                 665                 670
Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp
        675                 680                 685
Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln
    690                 695                 700
Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly Ile Val Tyr Gly Ile Ser Lys Tyr Gly
705                 710                 715                 720
Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile
                725                 730                 735
Tyr Arg Tyr Phe Glu Ser Phe Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn
            740                 745                 750
Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu His
        755                 760                 765
Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp Ile Thr Ser Arg Asn Phe Arg Val Arg
    770                 775                 780
Ser Phe Ala Glu Arg Met Ala Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala
785                 790                 795                 800
Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys
                805                 810                 815
Glu Glu Arg Leu Gln Ala His Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu
            820                 825                 830
Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val
        835                 840                 845
Pro Glu Val Met Glu Gln Ala Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val
    850                 855                 860
Asp Tyr His Tyr Gly Ser Thr Trp Tyr Asp Ala Lys
865                 870                 875
<210> 59
<211> 876
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽序列
<400> 59
Met Lys Lys Lys Leu Val Leu Ile Asp Gly Ser Ser Val Ala Tyr Arg
1               5                   10                  15
Ala Phe Phe Ala Leu Pro Leu Leu His Asn Asp Lys Gly Ile His Thr
            20                  25                  30
Asn Ala Val Tyr Gly Phe Thr Met Met Leu Asn Lys Ile Leu Ala Glu
        35                  40                  45
Glu Glu Pro Thr His Met Leu Val Ala Phe Asp Ala Gly Lys Thr Thr
    50                  55                  60
Phe Arg His Glu Ala Phe Gln Glu Tyr Lys Gly Gly Arg Gln Gln Thr
65                  70                  75                  80
Pro Pro Glu Leu Ser Glu Gln Phe Pro Leu Leu Arg Glu Leu Leu Arg
                85                  90                  95
Ala Tyr Arg Ile Pro Ala Tyr Glu Leu Glu Asn Tyr Glu Ala Asp Asp
            100                 105                 110
Ile Ile Gly Thr Leu Ala Ala Arg Ala Glu Gln Glu Gly Phe Glu Val
        115                 120                 125
Lys Val Ile Ser Gly Asp Arg Asp Leu Thr Gln Leu Ala Ser Pro His
    130                 135                 140
Val Thr Val Asp Ile Thr Lys Lys Gly Ile Thr Asp Ile Glu Pro Tyr
145                 150                 155                 160
Thr Pro Glu Thr Val Arg Glu Lys Tyr Gly Leu Thr Pro Glu Gln Ile
                165                 170                 175
Val Asp Leu Lys Gly Leu Met Gly Asp Lys Ser Asp Asn Ile Pro Gly
            180                 185                 190
Val Pro Gly Ile Gly Glu Lys Thr Ala Val Lys Leu Leu Arg Gln Phe
        195                 200                 205
Gly Thr Val Glu Asn Val Leu Ala Ser Ile Asp Glu Ile Lys Gly Glu
    210                 215                 220
Lys Leu Lys Glu Thr Leu Arg Gln His Arg Glu Met Ala Leu Leu Ser
225                 230                 235                 240
Lys Lys Leu Ala Ala Ile Arg Arg Asp Ala Pro Val Glu Leu Ser Leu
                245                 250                 255
Asp Asp Ile Ala Tyr Gln Gly Glu Asp Arg Glu Lys Val Val Ala Leu
            260                 265                 270
Phe Lys Glu Leu Gly Phe Gln Ser Phe Leu Glu Lys Met Glu Ser Pro
        275                 280                 285
Ser Ser Glu Glu Glu Lys Pro Leu Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala
    290                 295                 300
Asp Arg Val Thr Glu Glu Met Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val
305                 310                 315                 320
Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala
                325                 330                 335
Val Val Asn Glu His Gly Arg Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu
            340                 345                 350
Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys
        355                 360                 365
Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly
    370                 375                 380
Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu
385                 390                 395                 400
Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met
                405                 410                 415
Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly
            420                 425                 430
Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val
        435                 440                 445
Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu
    450                 455                 460
Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro
465                 470                 475                 480
Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp
                485                 490                 495
Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly
            500                 505                 510
Thr Val Glu Gln Arg Ile Tyr Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile
        515                 520                 525
Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu
    530                 535                 540
Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val
545                 550                 555                 560
Leu Glu Lys Leu Ala Pro Tyr His Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu Met
                565                 570                 575
Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu
            580                 585                 590
Lys Val Val Arg Pro Asp Thr Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln
        595                 600                 605
Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln
    610                 615                 620
Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe
625                 630                 635                 640
Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln
                645                 650                 655
Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met
            660                 665                 670
Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp
        675                 680                 685
Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln
    690                 695                 700
Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly Ile Val Tyr Gly Ile Ser Lys Tyr Gly
705                 710                 715                 720
Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile
                725                 730                 735
Glu Arg Tyr Phe Glu Ser Phe Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn
            740                 745                 750
Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu His
        755                 760                 765
Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp Ile Thr Ser Arg Asn Phe Arg Val Arg
    770                 775                 780
Ser Phe Ala Glu Arg Cys Ala Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala
785                 790                 795                 800
Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys
                805                 810                 815
Glu Glu Arg Leu Gln Ala His Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu
            820                 825                 830
Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val
        835                 840                 845
Pro Glu Val Met Glu Gln Ala Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val
    850                 855                 860
Asp Tyr His Tyr Gly Ser Thr Trp Tyr Asp Ala Lys
865                 870                 875
<210> 60
<211> 876
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽序列
<400> 60
Met Lys Lys Lys Leu Val Leu Ile Asp Gly Ser Ser Val Ala Tyr Arg
1               5                   10                  15
Ala Phe Phe Ala Leu Pro Leu Leu His Asn Asp Lys Gly Ile His Thr
            20                  25                  30
Asn Ala Val Tyr Gly Phe Thr Met Met Leu Asn Lys Ile Leu Ala Glu
        35                  40                  45
Glu Glu Pro Thr His Met Leu Val Ala Phe Asp Ala Gly Lys Thr Thr
    50                  55                  60
Phe Arg His Glu Ala Phe Gln Glu Tyr Lys Gly Gly Arg Gln Gln Thr
65                  70                  75                  80
Pro Pro Glu Leu Ser Glu Gln Phe Pro Leu Leu Arg Glu Leu Leu Arg
                85                  90                  95
Ala Tyr Arg Ile Pro Ala Tyr Glu Leu Glu Asn Tyr Glu Ala Asp Asp
            100                 105                 110
Ile Ile Gly Thr Leu Ala Ala Arg Ala Glu Gln Glu Gly Phe Glu Val
        115                 120                 125
Lys Val Ile Ser Gly Asp Arg Asp Leu Thr Gln Leu Ala Ser Pro His
    130                 135                 140
Val Thr Val Asp Ile Thr Lys Lys Gly Ile Thr Asp Ile Glu Pro Tyr
145                 150                 155                 160
Thr Pro Glu Thr Val Arg Glu Lys Tyr Gly Leu Thr Pro Glu Gln Ile
                165                 170                 175
Val Asp Leu Lys Gly Leu Met Gly Asp Lys Ser Asp Asn Ile Pro Gly
            180                 185                 190
Val Pro Gly Ile Gly Glu Lys Thr Ala Val Lys Leu Leu Arg Gln Phe
        195                 200                 205
Gly Thr Val Glu Asn Val Leu Ala Ser Ile Asp Glu Ile Lys Gly Glu
    210                 215                 220
Lys Leu Lys Glu Thr Leu Arg Gln His Arg Glu Met Ala Leu Leu Ser
225                 230                 235                 240
Lys Lys Leu Ala Ala Ile Arg Arg Asp Ala Pro Val Glu Leu Ser Leu
                245                 250                 255
Asp Asp Ile Ala Tyr Gln Gly Glu Asp Arg Glu Lys Val Val Ala Leu
            260                 265                 270
Phe Lys Glu Leu Gly Phe Gln Ser Phe Leu Glu Lys Met Glu Ser Pro
        275                 280                 285
Ser Ser Glu Glu Glu Lys Pro Leu Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala
    290                 295                 300
Asp Arg Val Thr Glu Glu Met Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val
305                 310                 315                 320
Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala
                325                 330                 335
Val Val Asn Glu His Gly Arg Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu
            340                 345                 350
Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys
        355                 360                 365
Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly
    370                 375                 380
Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu
385                 390                 395                 400
Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met
                405                 410                 415
Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly
            420                 425                 430
Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val
        435                 440                 445
Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu
    450                 455                 460
Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro
465                 470                 475                 480
Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp
                485                 490                 495
Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly
            500                 505                 510
Thr Val Glu Gln Arg Ile Tyr Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile
        515                 520                 525
Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu
    530                 535                 540
Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val
545                 550                 555                 560
Leu Glu Lys Leu Ala Pro Tyr His Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu Met
                565                 570                 575
Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu
            580                 585                 590
Lys Val Val Arg Pro Asp Thr Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln
        595                 600                 605
Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg Leu Ser Ser Thr Arg Pro Asn Leu Gln
    610                 615                 620
Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe
625                 630                 635                 640
Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln
                645                 650                 655
Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met
            660                 665                 670
Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp
        675                 680                 685
Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln
    690                 695                 700
Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly Ile Val Tyr Gly Ile Ser Lys Tyr Gly
705                 710                 715                 720
Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile
                725                 730                 735
Glu Arg Tyr Phe Glu Ser Phe Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn
            740                 745                 750
Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu His
        755                 760                 765
Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp Ile Thr Ser Arg Asn Phe Arg Val Arg
    770                 775                 780
Ser Phe Ala Glu Arg Met Ala Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala
785                 790                 795                 800
Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys
                805                 810                 815
Glu Glu Arg Leu Gln Ala His Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu
            820                 825                 830
Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val
        835                 840                 845
Pro Glu Val Met Glu Gln Ala Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val
    850                 855                 860
Asp Tyr His Tyr Gly Ser Thr Trp Tyr Asp Ala Lys
865                 870                 875
<210> 61
<211> 876
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽序列
<400> 61
Met Lys Lys Lys Leu Val Leu Ile Asp Gly Ser Ser Val Ala Tyr Arg
1               5                   10                  15
Ala Phe Phe Ala Leu Pro Leu Leu His Asn Asp Lys Gly Ile His Thr
            20                  25                  30
Asn Ala Val Tyr Gly Phe Thr Met Met Leu Asn Lys Ile Leu Ala Glu
        35                  40                  45
Glu Glu Pro Thr His Met Leu Val Ala Phe Asp Ala Gly Lys Thr Thr
    50                  55                  60
Phe Arg His Glu Ala Phe Gln Glu Tyr Lys Gly Gly Arg Gln Gln Thr
65                  70                  75                  80
Pro Pro Glu Leu Ser Glu Gln Phe Pro Leu Leu Arg Glu Leu Leu Arg
                85                  90                  95
Ala Tyr Arg Ile Pro Ala Tyr Glu Leu Glu Asn Tyr Glu Ala Asp Asp
            100                 105                 110
Ile Ile Gly Thr Leu Ala Ala Arg Ala Glu Gln Glu Gly Phe Glu Val
        115                 120                 125
Lys Val Ile Ser Gly Asp Arg Asp Leu Thr Gln Leu Ala Ser Pro His
    130                 135                 140
Val Thr Val Asp Ile Thr Lys Lys Gly Ile Thr Asp Ile Glu Pro Tyr
145                 150                 155                 160
Thr Pro Glu Thr Val Arg Glu Lys Tyr Gly Leu Thr Pro Glu Gln Ile
                165                 170                 175
Val Asp Leu Lys Gly Leu Met Gly Asp Lys Ser Asp Asn Ile Pro Gly
            180                 185                 190
Val Pro Gly Ile Gly Glu Lys Thr Ala Val Lys Leu Leu Arg Gln Phe
        195                 200                 205
Gly Thr Val Glu Asn Val Leu Ala Ser Ile Asp Glu Ile Lys Gly Glu
    210                 215                 220
Lys Leu Lys Glu Thr Leu Arg Gln His Arg Glu Met Ala Leu Leu Ser
225                 230                 235                 240
Lys Lys Leu Ala Ala Ile Arg Arg Asp Ala Pro Val Glu Leu Ser Leu
                245                 250                 255
Asp Asp Ile Ala Tyr Gln Gly Glu Asp Arg Glu Lys Val Val Ala Leu
            260                 265                 270
Phe Lys Glu Leu Gly Phe Gln Ser Phe Leu Glu Lys Met Glu Ser Pro
        275                 280                 285
Ser Ser Glu Glu Glu Lys Pro Leu Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala
    290                 295                 300
Asp Arg Val Thr Glu Glu Met Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val
305                 310                 315                 320
Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala
                325                 330                 335
Val Val Asn Glu His Gly Arg Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu
            340                 345                 350
Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys
        355                 360                 365
Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly
    370                 375                 380
Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu
385                 390                 395                 400
Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met
                405                 410                 415
Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly
            420                 425                 430
Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val
        435                 440                 445
Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu
    450                 455                 460
Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro
465                 470                 475                 480
Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp
                485                 490                 495
Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly
            500                 505                 510
Thr Val Glu Gln Arg Ile Tyr Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile
        515                 520                 525
Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu
    530                 535                 540
Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val
545                 550                 555                 560
Leu Glu Lys Leu Ala Pro Tyr His Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu Met
                565                 570                 575
Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu
            580                 585                 590
Lys Val Val Arg Pro Asp Thr Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln
        595                 600                 605
Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln
    610                 615                 620
Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe
625                 630                 635                 640
Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln
                645                 650                 655
Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met
            660                 665                 670
Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp
        675                 680                 685
Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln
    690                 695                 700
Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly Ile Val Tyr Gly Ile Ser Lys Tyr Gly
705                 710                 715                 720
Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile
                725                 730                 735
Glu Arg Tyr Phe Glu Ser Phe Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn
            740                 745                 750
Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu His
        755                 760                 765
Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp Ile Thr Ser Arg Asn Phe Arg Val Arg
    770                 775                 780
Ser Phe Lys Glu Arg Met Ala Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala
785                 790                 795                 800
Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys
                805                 810                 815
Glu Glu Arg Leu Gln Ala His Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu
            820                 825                 830
Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val
        835                 840                 845
Pro Glu Val Met Glu Gln Ala Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val
    850                 855                 860
Asp Tyr His Tyr Gly Ser Thr Trp Tyr Asp Ala Lys
865                 870                 875
<210> 62
<211> 876
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽序列
<400> 62
Met Lys Lys Lys Leu Val Leu Ile Asp Gly Ser Ser Val Ala Tyr Arg
1               5                   10                  15
Ala Phe Phe Ala Leu Pro Leu Leu His Asn Asp Lys Gly Ile His Thr
            20                  25                  30
Asn Ala Val Tyr Gly Phe Thr Met Met Leu Asn Lys Ile Leu Ala Glu
        35                  40                  45
Glu Glu Pro Thr His Met Leu Val Ala Phe Asp Ala Gly Lys Thr Thr
    50                  55                  60
Phe Arg His Glu Ala Phe Gln Glu Tyr Lys Gly Gly Arg Gln Gln Thr
65                  70                  75                  80
Pro Pro Glu Leu Ser Glu Gln Phe Pro Leu Leu Arg Glu Leu Leu Arg
                85                  90                  95
Ala Tyr Arg Ile Pro Ala Tyr Glu Leu Glu Asn Tyr Glu Ala Asp Asp
            100                 105                 110
Ile Ile Gly Thr Leu Ala Ala Arg Ala Glu Gln Glu Gly Phe Glu Val
        115                 120                 125
Lys Val Ile Ser Gly Asp Arg Asp Leu Thr Gln Leu Ala Ser Pro His
    130                 135                 140
Val Thr Val Asp Ile Thr Lys Lys Gly Ile Thr Asp Ile Glu Pro Tyr
145                 150                 155                 160
Thr Pro Glu Thr Val Arg Glu Lys Tyr Gly Leu Thr Pro Glu Gln Ile
                165                 170                 175
Val Asp Leu Lys Gly Leu Met Gly Asp Lys Ser Asp Asn Ile Pro Gly
            180                 185                 190
Val Pro Gly Ile Gly Glu Lys Thr Ala Val Lys Leu Leu Arg Gln Phe
        195                 200                 205
Gly Thr Val Glu Asn Val Leu Ala Ser Ile Asp Glu Ile Lys Gly Glu
    210                 215                 220
Lys Leu Lys Glu Thr Leu Arg Gln His Arg Glu Met Ala Leu Leu Ser
225                 230                 235                 240
Lys Lys Leu Ala Ala Ile Arg Arg Asp Ala Pro Val Glu Leu Ser Leu
                245                 250                 255
Asp Asp Ile Ala Tyr Gln Gly Glu Asp Arg Glu Lys Val Val Ala Leu
            260                 265                 270
Phe Lys Glu Leu Gly Phe Gln Ser Phe Leu Glu Lys Met Glu Ser Pro
        275                 280                 285
Ser Ser Glu Glu Glu Lys Pro Leu Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala
    290                 295                 300
Asp Arg Val Thr Glu Glu Met Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val
305                 310                 315                 320
Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala
                325                 330                 335
Val Val Asn Glu His Gly Arg Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu
            340                 345                 350
Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys
        355                 360                 365
Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly
    370                 375                 380
Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu
385                 390                 395                 400
Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met
                405                 410                 415
Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly
            420                 425                 430
Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val
        435                 440                 445
Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu
    450                 455                 460
Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro
465                 470                 475                 480
Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp
                485                 490                 495
Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly
            500                 505                 510
Thr Val Glu Gln Arg Ile Tyr Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile
        515                 520                 525
Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu
    530                 535                 540
Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val
545                 550                 555                 560
Leu Glu Lys Leu Ala Pro Tyr His Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu Met
                565                 570                 575
Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu
            580                 585                 590
Lys Val Val Arg Pro Asp Thr Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln
        595                 600                 605
Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln
    610                 615                 620
Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe
625                 630                 635                 640
Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln
                645                 650                 655
Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met
            660                 665                 670
Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp
        675                 680                 685
Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln
    690                 695                 700
Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly Ile Val Tyr Gly Ile Ser Lys Tyr Gly
705                 710                 715                 720
Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile
                725                 730                 735
Glu Arg Tyr Phe Glu Ser Phe Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn
            740                 745                 750
Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu His
        755                 760                 765
Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Leu Ile Thr Ser Arg Asn Phe Arg Val Arg
    770                 775                 780
Ser Phe Ala Glu Arg Met Ala Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala
785                 790                 795                 800
Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys
                805                 810                 815
Glu Glu Arg Leu Gln Ala His Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu
            820                 825                 830
Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val
        835                 840                 845
Pro Glu Val Met Glu Gln Ala Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val
    850                 855                 860
Asp Tyr His Tyr Gly Ser Thr Trp Tyr Asp Ala Lys
865                 870                 875
<210> 63
<211> 876
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽序列
<400> 63
Met Lys Lys Lys Leu Val Leu Ile Asp Gly Ser Ser Val Ala Tyr Arg
1               5                   10                  15
Ala Phe Phe Ala Leu Pro Leu Leu His Asn Asp Lys Gly Ile His Thr
            20                  25                  30
Asn Ala Val Tyr Gly Phe Thr Met Met Leu Asn Lys Ile Leu Ala Glu
        35                  40                  45
Glu Glu Pro Thr His Met Leu Val Ala Phe Asp Ala Gly Lys Thr Thr
    50                  55                  60
Phe Arg His Glu Ala Phe Gln Glu Tyr Lys Gly Gly Arg Gln Gln Thr
65                  70                  75                  80
Pro Pro Glu Leu Ser Glu Gln Phe Pro Leu Leu Arg Glu Leu Leu Arg
                85                  90                  95
Ala Tyr Arg Ile Pro Ala Tyr Glu Leu Glu Asn Tyr Glu Ala Asp Asp
            100                 105                 110
Ile Ile Gly Thr Leu Ala Ala Arg Ala Glu Gln Glu Gly Phe Glu Val
        115                 120                 125
Lys Val Ile Ser Gly Asp Arg Asp Leu Thr Gln Leu Ala Ser Pro His
    130                 135                 140
Val Thr Val Asp Ile Thr Lys Lys Gly Ile Thr Asp Ile Glu Pro Tyr
145                 150                 155                 160
Thr Pro Glu Thr Val Arg Glu Lys Tyr Gly Leu Thr Pro Glu Gln Ile
                165                 170                 175
Val Asp Leu Lys Gly Leu Met Gly Asp Lys Ser Asp Asn Ile Pro Gly
            180                 185                 190
Val Pro Gly Ile Gly Glu Lys Thr Ala Val Lys Leu Leu Arg Gln Phe
        195                 200                 205
Gly Thr Val Glu Asn Val Leu Ala Ser Ile Asp Glu Ile Lys Gly Glu
    210                 215                 220
Lys Leu Lys Glu Thr Leu Arg Gln His Arg Glu Met Ala Leu Leu Ser
225                 230                 235                 240
Lys Lys Leu Ala Ala Ile Arg Arg Asp Ala Pro Val Glu Leu Ser Leu
                245                 250                 255
Asp Asp Ile Ala Tyr Gln Gly Glu Asp Arg Glu Lys Val Val Ala Leu
            260                 265                 270
Phe Lys Glu Leu Gly Phe Gln Ser Phe Leu Glu Lys Met Glu Ser Pro
        275                 280                 285
Ser Ser Glu Glu Glu Lys Pro Leu Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala
    290                 295                 300
Asp Arg Val Thr Glu Glu Met Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val
305                 310                 315                 320
Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala
                325                 330                 335
Val Val Asn Glu His Gly Arg Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu
            340                 345                 350
Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys
        355                 360                 365
Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly
    370                 375                 380
Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu
385                 390                 395                 400
Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met
                405                 410                 415
Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly
            420                 425                 430
Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val
        435                 440                 445
Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu
    450                 455                 460
Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro
465                 470                 475                 480
Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp
                485                 490                 495
Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly
            500                 505                 510
Thr Val Glu Gln Arg Ile Tyr Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile
        515                 520                 525
Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu
    530                 535                 540
Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val
545                 550                 555                 560
Leu Glu Lys Leu Ala Pro Tyr His Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu Met
                565                 570                 575
Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu
            580                 585                 590
Lys Val Val Arg Pro Asp Thr Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln
        595                 600                 605
Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln
    610                 615                 620
Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe
625                 630                 635                 640
Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln
                645                 650                 655
Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met
            660                 665                 670
Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp
        675                 680                 685
Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln
    690                 695                 700
Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly Ile Val Tyr Gly Ile Ser Lys Tyr Gly
705                 710                 715                 720
Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile
                725                 730                 735
Glu Arg Tyr Phe Glu Ser Phe Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn
            740                 745                 750
Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu His
        755                 760                 765
Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Arg Ile Thr Ser Arg Asn Phe Arg Val Arg
    770                 775                 780
Ser Phe Ala Glu Arg Met Ala Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala
785                 790                 795                 800
Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys
                805                 810                 815
Glu Glu Arg Leu Gln Ala His Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu
            820                 825                 830
Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val
        835                 840                 845
Pro Glu Val Met Glu Gln Ala Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val
    850                 855                 860
Asp Tyr His Tyr Gly Ser Thr Trp Tyr Asp Ala Lys
865                 870                 875
<210> 64
<211> 876
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽序列
<400> 64
Met Lys Lys Lys Leu Val Leu Ile Asp Gly Ser Ser Val Ala Tyr Arg
1               5                   10                  15
Ala Phe Phe Ala Leu Pro Leu Leu His Asn Asp Lys Gly Ile His Thr
            20                  25                  30
Asn Ala Val Tyr Gly Phe Thr Met Met Leu Asn Lys Ile Leu Ala Glu
        35                  40                  45
Glu Glu Pro Thr His Met Leu Val Ala Phe Asp Ala Gly Lys Thr Thr
    50                  55                  60
Phe Arg His Glu Ala Phe Gln Glu Tyr Lys Gly Gly Arg Gln Gln Thr
65                  70                  75                  80
Pro Pro Glu Leu Ser Glu Gln Phe Pro Leu Leu Arg Glu Leu Leu Arg
                85                  90                  95
Ala Tyr Arg Ile Pro Ala Tyr Glu Leu Glu Asn Tyr Glu Ala Asp Asp
            100                 105                 110
Ile Ile Gly Thr Leu Ala Ala Arg Ala Glu Gln Glu Gly Phe Glu Val
        115                 120                 125
Lys Val Ile Ser Gly Asp Arg Asp Leu Thr Gln Leu Ala Ser Pro His
    130                 135                 140
Val Thr Val Asp Ile Thr Lys Lys Gly Ile Thr Asp Ile Glu Pro Tyr
145                 150                 155                 160
Thr Pro Glu Thr Val Arg Glu Lys Tyr Gly Leu Thr Pro Glu Gln Ile
                165                 170                 175
Val Asp Leu Lys Gly Leu Met Gly Asp Lys Ser Asp Asn Ile Pro Gly
            180                 185                 190
Val Pro Gly Ile Gly Glu Lys Thr Ala Val Lys Leu Leu Arg Gln Phe
        195                 200                 205
Gly Thr Val Glu Asn Val Leu Ala Ser Ile Asp Glu Ile Lys Gly Glu
    210                 215                 220
Lys Leu Lys Glu Thr Leu Arg Gln His Arg Glu Met Ala Leu Leu Ser
225                 230                 235                 240
Lys Lys Leu Ala Ala Ile Arg Arg Asp Ala Pro Val Glu Leu Ser Leu
                245                 250                 255
Asp Asp Ile Ala Tyr Gln Gly Glu Asp Arg Glu Lys Val Val Ala Leu
            260                 265                 270
Phe Lys Glu Leu Gly Phe Gln Ser Phe Leu Glu Lys Met Glu Ser Pro
        275                 280                 285
Ser Ser Glu Glu Glu Lys Pro Leu Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala
    290                 295                 300
Asp Arg Val Thr Glu Glu Met Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val
305                 310                 315                 320
Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala
                325                 330                 335
Val Val Asn Glu His Gly Arg Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu
            340                 345                 350
Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys
        355                 360                 365
Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly
    370                 375                 380
Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu
385                 390                 395                 400
Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met
                405                 410                 415
Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly
            420                 425                 430
Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val
        435                 440                 445
Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu
    450                 455                 460
Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro
465                 470                 475                 480
Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp
                485                 490                 495
Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly
            500                 505                 510
Thr Val Glu Gln Arg Ile Tyr Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile
        515                 520                 525
Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu
    530                 535                 540
Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val
545                 550                 555                 560
Leu Glu Lys Leu Ala Pro Tyr His Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu Met
                565                 570                 575
Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu
            580                 585                 590
Lys Val Val Arg Pro Asp Thr Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln
        595                 600                 605
Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln
    610                 615                 620
Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Tyr Phe
625                 630                 635                 640
Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln
                645                 650                 655
Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met
            660                 665                 670
Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp
        675                 680                 685
Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln
    690                 695                 700
Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly Ile Val Tyr Gly Ile Ser Lys Tyr Gly
705                 710                 715                 720
Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile
                725                 730                 735
Glu Arg Tyr Phe Glu Ser Phe Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn
            740                 745                 750
Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu His
        755                 760                 765
Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp Ile Thr Ser Arg Asn Phe Arg Val Arg
    770                 775                 780
Ser Phe Ala Glu Arg Met Ala Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala
785                 790                 795                 800
Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys
                805                 810                 815
Glu Glu Arg Leu Gln Ala His Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu
            820                 825                 830
Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val
        835                 840                 845
Pro Glu Val Met Glu Gln Ala Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val
    850                 855                 860
Asp Tyr His Tyr Gly Ser Thr Trp Tyr Asp Ala Lys
865                 870                 875
<210> 65
<211> 876
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽序列
<400> 65
Met Lys Lys Lys Leu Val Leu Ile Asp Gly Ser Ser Val Ala Tyr Arg
1               5                   10                  15
Ala Phe Phe Ala Leu Pro Leu Leu His Asn Asp Lys Gly Ile His Thr
            20                  25                  30
Asn Ala Val Tyr Gly Phe Thr Met Met Leu Asn Lys Ile Leu Ala Glu
        35                  40                  45
Glu Glu Pro Thr His Met Leu Val Ala Phe Asp Ala Gly Lys Thr Thr
    50                  55                  60
Phe Arg His Glu Ala Phe Gln Glu Tyr Lys Gly Gly Arg Gln Gln Thr
65                  70                  75                  80
Pro Pro Glu Leu Ser Glu Gln Phe Pro Leu Leu Arg Glu Leu Leu Arg
                85                  90                  95
Ala Tyr Arg Ile Pro Ala Tyr Glu Leu Glu Asn Tyr Glu Ala Asp Asp
            100                 105                 110
Ile Ile Gly Thr Leu Ala Ala Arg Ala Glu Gln Glu Gly Phe Glu Val
        115                 120                 125
Lys Val Ile Ser Gly Asp Arg Asp Leu Thr Gln Leu Ala Ser Pro His
    130                 135                 140
Val Thr Val Asp Ile Thr Lys Lys Gly Ile Thr Asp Ile Glu Pro Tyr
145                 150                 155                 160
Thr Pro Glu Thr Val Arg Glu Lys Tyr Gly Leu Thr Pro Glu Gln Ile
                165                 170                 175
Val Asp Leu Lys Gly Leu Met Gly Asp Lys Ser Asp Asn Ile Pro Gly
            180                 185                 190
Val Pro Gly Ile Gly Glu Lys Thr Ala Val Lys Leu Leu Arg Gln Phe
        195                 200                 205
Gly Thr Val Glu Asn Val Leu Ala Ser Ile Asp Glu Ile Lys Gly Glu
    210                 215                 220
Lys Leu Lys Glu Thr Leu Arg Gln His Arg Glu Met Ala Leu Leu Ser
225                 230                 235                 240
Lys Lys Leu Ala Ala Ile Arg Arg Asp Ala Pro Val Glu Leu Ser Leu
                245                 250                 255
Asp Asp Ile Ala Tyr Gln Gly Glu Asp Arg Glu Lys Val Val Ala Leu
            260                 265                 270
Phe Lys Glu Leu Gly Phe Gln Ser Phe Leu Glu Lys Met Glu Ser Pro
        275                 280                 285
Ser Ser Glu Glu Glu Lys Pro Leu Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala
    290                 295                 300
Asp Arg Val Thr Glu Glu Met Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val
305                 310                 315                 320
Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala
                325                 330                 335
Val Val Asn Glu His Gly Arg Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu
            340                 345                 350
Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys
        355                 360                 365
Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly
    370                 375                 380
Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu
385                 390                 395                 400
Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met
                405                 410                 415
Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly
            420                 425                 430
Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val
        435                 440                 445
Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu
    450                 455                 460
Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro
465                 470                 475                 480
Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp
                485                 490                 495
Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly
            500                 505                 510
Thr Val Glu Gln Arg Ile Tyr Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile
        515                 520                 525
Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly Val Ile Leu Phe Arg Lys Leu Gln Leu
    530                 535                 540
Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val
545                 550                 555                 560
Leu Glu Lys Leu Ala Pro Tyr His Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu Met
                565                 570                 575
Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu
            580                 585                 590
Lys Val Val Arg Pro Asp Thr Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln
        595                 600                 605
Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln
    610                 615                 620
Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe
625                 630                 635                 640
Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln
                645                 650                 655
Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met
            660                 665                 670
Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp
        675                 680                 685
Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln
    690                 695                 700
Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly Ile Val Tyr Gly Ile Ser Lys Tyr Gly
705                 710                 715                 720
Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile
                725                 730                 735
Glu Arg Tyr Phe Glu Ser Phe Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn
            740                 745                 750
Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu His
        755                 760                 765
Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp Ile Thr Ser Arg Asn Phe Arg Val Arg
    770                 775                 780
Ser Phe Ala Glu Arg Met Ala Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala
785                 790                 795                 800
Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys
                805                 810                 815
Glu Glu Arg Leu Gln Ala His Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu
            820                 825                 830
Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val
        835                 840                 845
Pro Glu Val Met Glu Gln Ala Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val
    850                 855                 860
Asp Tyr His Tyr Gly Ser Thr Trp Tyr Asp Ala Lys
865                 870                 875
<210> 66
<211> 876
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽序列
<400> 66
Met Lys Lys Lys Leu Val Leu Ile Asp Gly Ser Ser Val Ala Tyr Arg
1               5                   10                  15
Ala Phe Phe Ala Leu Pro Leu Leu His Asn Asp Lys Gly Ile His Thr
            20                  25                  30
Asn Ala Val Tyr Gly Phe Thr Met Met Leu Asn Lys Ile Leu Ala Glu
        35                  40                  45
Glu Glu Pro Thr His Met Leu Val Ala Phe Asp Ala Gly Lys Thr Thr
    50                  55                  60
Phe Arg His Glu Ala Phe Gln Glu Tyr Lys Gly Gly Arg Gln Gln Thr
65                  70                  75                  80
Pro Pro Glu Leu Ser Glu Gln Phe Pro Leu Leu Arg Glu Leu Leu Arg
                85                  90                  95
Ala Tyr Arg Ile Pro Ala Tyr Glu Leu Glu Asn Tyr Glu Ala Asp Asp
            100                 105                 110
Ile Ile Gly Thr Leu Ala Ala Arg Ala Glu Gln Glu Gly Phe Glu Val
        115                 120                 125
Lys Val Ile Ser Gly Asp Arg Asp Leu Thr Gln Leu Ala Ser Pro His
    130                 135                 140
Val Thr Val Asp Ile Thr Lys Lys Gly Ile Thr Asp Ile Glu Pro Tyr
145                 150                 155                 160
Thr Pro Glu Thr Val Arg Glu Lys Tyr Gly Leu Thr Pro Glu Gln Ile
                165                 170                 175
Val Asp Leu Lys Gly Leu Met Gly Asp Lys Ser Asp Asn Ile Pro Gly
            180                 185                 190
Val Pro Gly Ile Gly Glu Lys Thr Ala Val Lys Leu Leu Arg Gln Phe
        195                 200                 205
Gly Thr Val Glu Asn Val Leu Ala Ser Ile Asp Glu Ile Lys Gly Glu
    210                 215                 220
Lys Leu Lys Glu Thr Leu Arg Gln His Arg Glu Met Ala Leu Leu Ser
225                 230                 235                 240
Lys Lys Leu Ala Ala Ile Arg Arg Asp Ala Pro Val Glu Leu Ser Leu
                245                 250                 255
Asp Asp Ile Ala Tyr Gln Gly Glu Asp Arg Glu Lys Val Val Ala Leu
            260                 265                 270
Phe Lys Glu Leu Gly Phe Gln Ser Phe Leu Glu Lys Met Glu Ser Pro
        275                 280                 285
Ser Ser Glu Glu Glu Lys Pro Leu Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala
    290                 295                 300
Asp Arg Val Thr Glu Glu Met Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val
305                 310                 315                 320
Glu Val Val Glu Lys Asn Tyr His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala
                325                 330                 335
Val Val Asn Glu His Gly Arg Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu
            340                 345                 350
Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys
        355                 360                 365
Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly
    370                 375                 380
Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu
385                 390                 395                 400
Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met
                405                 410                 415
Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly
            420                 425                 430
Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val
        435                 440                 445
Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu
    450                 455                 460
Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro
465                 470                 475                 480
Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp
                485                 490                 495
Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly
            500                 505                 510
Thr Val Glu Gln Arg Ile Tyr Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile
        515                 520                 525
Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu
    530                 535                 540
Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val
545                 550                 555                 560
Leu Glu Lys Leu Ala Pro Tyr His Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu Met
                565                 570                 575
Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu
            580                 585                 590
Lys Val Val Arg Pro Asp Thr Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln
        595                 600                 605
Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln
    610                 615                 620
Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe
625                 630                 635                 640
Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln
                645                 650                 655
Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met
            660                 665                 670
Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp
        675                 680                 685
Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln
    690                 695                 700
Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly Ile Val Tyr Gly Ile Ser Lys Tyr Gly
705                 710                 715                 720
Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile
                725                 730                 735
Glu Arg Tyr Phe Glu Ser Phe Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn
            740                 745                 750
Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu His
        755                 760                 765
Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp Ile Thr Ser Arg Asn Phe Arg Val Arg
    770                 775                 780
Ser Phe Ala Glu Arg Met Ala Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala
785                 790                 795                 800
Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys
                805                 810                 815
Glu Glu Arg Leu Gln Ala His Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu
            820                 825                 830
Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val
        835                 840                 845
Pro Glu Val Met Glu Gln Ala Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val
    850                 855                 860
Asp Tyr His Tyr Gly Ser Thr Trp Tyr Asp Ala Lys
865                 870                 875
<210> 67
<211> 876
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽序列
<400> 67
Met Lys Lys Lys Leu Val Leu Ile Asp Gly Ser Ser Val Ala Tyr Arg
1               5                   10                  15
Ala Phe Phe Ala Leu Pro Leu Leu His Asn Asp Lys Gly Ile His Thr
            20                  25                  30
Asn Ala Val Tyr Gly Phe Thr Met Met Leu Asn Lys Ile Leu Ala Glu
        35                  40                  45
Glu Glu Pro Thr His Met Leu Val Ala Phe Asp Ala Gly Lys Thr Thr
    50                  55                  60
Phe Arg His Glu Ala Phe Gln Glu Tyr Lys Gly Gly Arg Gln Gln Thr
65                  70                  75                  80
Pro Pro Glu Leu Ser Glu Gln Phe Pro Leu Leu Arg Glu Leu Leu Arg
                85                  90                  95
Ala Tyr Arg Ile Pro Ala Tyr Glu Leu Glu Asn Tyr Glu Ala Asp Asp
            100                 105                 110
Ile Ile Gly Thr Leu Ala Ala Arg Ala Glu Gln Glu Gly Phe Glu Val
        115                 120                 125
Lys Val Ile Ser Gly Asp Arg Asp Leu Thr Gln Leu Ala Ser Pro His
    130                 135                 140
Val Thr Val Asp Ile Thr Lys Lys Gly Ile Thr Asp Ile Glu Pro Tyr
145                 150                 155                 160
Thr Pro Glu Thr Val Arg Glu Lys Tyr Gly Leu Thr Pro Glu Gln Ile
                165                 170                 175
Val Asp Leu Lys Gly Leu Met Gly Asp Lys Ser Asp Asn Ile Pro Gly
            180                 185                 190
Val Pro Gly Ile Gly Glu Lys Thr Ala Val Lys Leu Leu Arg Gln Phe
        195                 200                 205
Gly Thr Val Glu Asn Val Leu Ala Ser Ile Asp Glu Ile Lys Gly Glu
    210                 215                 220
Lys Leu Lys Glu Thr Leu Arg Gln His Arg Glu Met Ala Leu Leu Ser
225                 230                 235                 240
Lys Lys Leu Ala Ala Ile Arg Arg Asp Ala Pro Val Glu Leu Ser Leu
                245                 250                 255
Asp Asp Ile Ala Tyr Gln Gly Glu Asp Arg Glu Lys Val Val Ala Leu
            260                 265                 270
Phe Lys Glu Leu Gly Phe Gln Ser Phe Leu Glu Lys Met Glu Ser Pro
        275                 280                 285
Ser Ser Glu Glu Glu Lys Pro Leu Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala
    290                 295                 300
Asp Arg Val Thr Glu Glu Met Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val
305                 310                 315                 320
Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala
                325                 330                 335
Val Val Asn Glu His Gly Arg Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu
            340                 345                 350
Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys
        355                 360                 365
Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly
    370                 375                 380
Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu
385                 390                 395                 400
Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met
                405                 410                 415
Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly
            420                 425                 430
Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val
        435                 440                 445
Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu
    450                 455                 460
Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro
465                 470                 475                 480
Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp
                485                 490                 495
Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly
            500                 505                 510
Thr Val Glu Gln Arg Ile Tyr Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile
        515                 520                 525
Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu
    530                 535                 540
Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val
545                 550                 555                 560
Leu Glu Lys Leu Ala Pro Tyr His Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu Met
                565                 570                 575
Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu
            580                 585                 590
Lys Val Val Arg Pro Asp Thr Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln
        595                 600                 605
Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln
    610                 615                 620
Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe
625                 630                 635                 640
Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln
                645                 650                 655
Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met
            660                 665                 670
Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp
        675                 680                 685
Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln
    690                 695                 700
Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly Ile Val Tyr Gly Ile Ser Lys Tyr Gly
705                 710                 715                 720
Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile
                725                 730                 735
Glu Arg Tyr Phe Glu Ser Phe Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn
            740                 745                 750
Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu His
        755                 760                 765
Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp Ile Thr Ser Arg Asn Phe Arg Val Arg
    770                 775                 780
Ser Phe Ala Glu Arg Met Ala Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala
785                 790                 795                 800
Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala Met Ile Asp Leu Cys Ala Arg Leu Lys
                805                 810                 815
Glu Glu Arg Leu Gln Ala His Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu
            820                 825                 830
Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val
        835                 840                 845
Pro Glu Val Met Glu Gln Ala Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val
    850                 855                 860
Asp Tyr His Tyr Gly Ser Thr Trp Tyr Asp Ala Lys
865                 870                 875
<210> 68
<211> 876
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽序列
<400> 68
Met Lys Lys Lys Leu Val Leu Ile Asp Gly Ser Ser Val Ala Tyr Arg
1               5                   10                  15
Ala Phe Phe Ala Leu Pro Leu Leu His Asn Asp Lys Gly Ile His Thr
            20                  25                  30
Asn Ala Val Tyr Gly Phe Thr Met Met Leu Asn Lys Ile Leu Ala Glu
        35                  40                  45
Glu Glu Pro Thr His Met Leu Val Ala Phe Asp Ala Gly Lys Thr Thr
    50                  55                  60
Phe Arg His Glu Ala Phe Gln Glu Tyr Lys Gly Gly Arg Gln Gln Thr
65                  70                  75                  80
Pro Pro Glu Leu Ser Glu Gln Phe Pro Leu Leu Arg Glu Leu Leu Arg
                85                  90                  95
Ala Tyr Arg Ile Pro Ala Tyr Glu Leu Glu Asn Tyr Glu Ala Asp Asp
            100                 105                 110
Ile Ile Gly Thr Leu Ala Ala Arg Ala Glu Gln Glu Gly Phe Glu Val
        115                 120                 125
Lys Val Ile Ser Gly Asp Arg Asp Leu Thr Gln Leu Ala Ser Pro His
    130                 135                 140
Val Thr Val Asp Ile Thr Lys Lys Gly Ile Thr Asp Ile Glu Pro Tyr
145                 150                 155                 160
Thr Pro Glu Thr Val Arg Glu Lys Tyr Gly Leu Thr Pro Glu Gln Ile
                165                 170                 175
Val Asp Leu Lys Gly Leu Met Gly Asp Lys Ser Asp Asn Ile Pro Gly
            180                 185                 190
Val Pro Gly Ile Gly Glu Lys Thr Ala Val Lys Leu Leu Arg Gln Phe
        195                 200                 205
Gly Thr Val Glu Asn Val Leu Ala Ser Ile Asp Glu Ile Lys Gly Glu
    210                 215                 220
Lys Leu Lys Glu Thr Leu Arg Gln His Arg Glu Met Ala Leu Leu Ser
225                 230                 235                 240
Lys Lys Leu Ala Ala Ile Arg Arg Asp Ala Pro Val Glu Leu Ser Leu
                245                 250                 255
Asp Asp Ile Ala Tyr Gln Gly Glu Asp Arg Glu Lys Val Val Ala Leu
            260                 265                 270
Phe Lys Glu Leu Gly Phe Gln Ser Phe Leu Glu Lys Met Glu Ser Pro
        275                 280                 285
Ser Ser Glu Glu Glu Lys Pro Leu Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala
    290                 295                 300
Asp Arg Val Thr Glu Glu Met Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val
305                 310                 315                 320
Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala
                325                 330                 335
Val Val Asn Glu His Gly Arg Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu
            340                 345                 350
Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys
        355                 360                 365
Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly
    370                 375                 380
Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu
385                 390                 395                 400
Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met
                405                 410                 415
Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly
            420                 425                 430
Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val
        435                 440                 445
Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu
    450                 455                 460
Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro
465                 470                 475                 480
Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp
                485                 490                 495
Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly
            500                 505                 510
Thr Val Glu Gln Arg Ile Tyr Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile
        515                 520                 525
Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu
    530                 535                 540
Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val
545                 550                 555                 560
Leu Glu Lys Leu Ala Pro Tyr His Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu Met
                565                 570                 575
Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu
            580                 585                 590
Lys Val Val Arg Pro Asp Thr Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln
        595                 600                 605
Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln
    610                 615                 620
Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe
625                 630                 635                 640
Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln
                645                 650                 655
Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met
            660                 665                 670
Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp
        675                 680                 685
Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln
    690                 695                 700
Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly Ile Val Tyr Gly Ile Ser Lys Tyr Gly
705                 710                 715                 720
Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile
                725                 730                 735
Glu Arg Tyr Phe Glu Ser Phe Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn
            740                 745                 750
Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu His
        755                 760                 765
Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp Ile Thr Ser Arg Asn Phe Arg Val Arg
    770                 775                 780
Ser Phe Ala Glu Arg Met Ala Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala
785                 790                 795                 800
Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala Met Ile Asp Leu Lys Ala Arg Leu Lys
                805                 810                 815
Glu Glu Arg Leu Gln Ala His Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu
            820                 825                 830
Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val
        835                 840                 845
Pro Glu Val Met Glu Gln Ala Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val
    850                 855                 860
Asp Tyr His Tyr Gly Ser Thr Trp Tyr Asp Ala Lys
865                 870                 875
<210> 69
<211> 876
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽序列
<400> 69
Met Lys Lys Lys Leu Val Leu Ile Asp Gly Ser Ser Val Ala Tyr Arg
1               5                   10                  15
Ala Phe Phe Ala Leu Pro Leu Leu His Asn Asp Lys Gly Ile His Thr
            20                  25                  30
Asn Ala Val Tyr Gly Phe Thr Met Met Leu Asn Lys Ile Leu Ala Glu
        35                  40                  45
Glu Glu Pro Thr His Met Leu Val Ala Phe Asp Ala Gly Lys Thr Thr
    50                  55                  60
Phe Arg His Glu Ala Phe Gln Glu Tyr Lys Gly Gly Arg Gln Gln Thr
65                  70                  75                  80
Pro Pro Glu Leu Ser Glu Gln Phe Pro Leu Leu Arg Glu Leu Leu Arg
                85                  90                  95
Ala Tyr Arg Ile Pro Ala Tyr Glu Leu Glu Asn Tyr Glu Ala Asp Asp
            100                 105                 110
Ile Ile Gly Thr Leu Ala Ala Arg Ala Glu Gln Glu Gly Phe Glu Val
        115                 120                 125
Lys Val Ile Ser Gly Asp Arg Asp Leu Thr Gln Leu Ala Ser Pro His
    130                 135                 140
Val Thr Val Asp Ile Thr Lys Lys Gly Ile Thr Asp Ile Glu Pro Tyr
145                 150                 155                 160
Thr Pro Glu Thr Val Arg Glu Lys Tyr Gly Leu Thr Pro Glu Gln Ile
                165                 170                 175
Val Asp Leu Lys Gly Leu Met Gly Asp Lys Ser Asp Asn Ile Pro Gly
            180                 185                 190
Val Pro Gly Ile Gly Glu Lys Thr Ala Val Lys Leu Leu Arg Gln Phe
        195                 200                 205
Gly Thr Val Glu Asn Val Leu Ala Ser Ile Asp Glu Ile Lys Gly Glu
    210                 215                 220
Lys Leu Lys Glu Thr Leu Arg Gln His Arg Glu Met Ala Leu Leu Ser
225                 230                 235                 240
Lys Lys Leu Ala Ala Ile Arg Arg Asp Ala Pro Val Glu Leu Ser Leu
                245                 250                 255
Asp Asp Ile Ala Tyr Gln Gly Glu Asp Arg Glu Lys Val Val Ala Leu
            260                 265                 270
Phe Lys Glu Leu Gly Phe Gln Ser Phe Leu Glu Lys Met Glu Ser Pro
        275                 280                 285
Ser Ser Glu Glu Glu Lys Pro Leu Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala
    290                 295                 300
Asp Arg Val Thr Glu Glu Met Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val
305                 310                 315                 320
Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala
                325                 330                 335
Val Val Asn Glu His Gly Arg Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu
            340                 345                 350
Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys
        355                 360                 365
Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly
    370                 375                 380
Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu
385                 390                 395                 400
Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met
                405                 410                 415
Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly
            420                 425                 430
Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val
        435                 440                 445
Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu
    450                 455                 460
Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro
465                 470                 475                 480
Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp
                485                 490                 495
Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly
            500                 505                 510
Thr Val Glu Gln Arg Ile Tyr Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile
        515                 520                 525
Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu
    530                 535                 540
Pro Arg Leu Lys Lys Thr Lys Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val
545                 550                 555                 560
Leu Glu Lys Leu Ala Pro Tyr His Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu Met
                565                 570                 575
Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu
            580                 585                 590
Lys Val Val Arg Pro Asp Thr Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln
        595                 600                 605
Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln
    610                 615                 620
Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe
625                 630                 635                 640
Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln
                645                 650                 655
Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met
            660                 665                 670
Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp
        675                 680                 685
Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln
    690                 695                 700
Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly Ile Val Tyr Gly Ile Ser Lys Tyr Gly
705                 710                 715                 720
Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile
                725                 730                 735
Glu Arg Tyr Phe Glu Ser Phe Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn
            740                 745                 750
Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu His
        755                 760                 765
Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp Ile Thr Ser Arg Asn Phe Arg Val Arg
    770                 775                 780
Ser Phe Ala Glu Arg Met Ala Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala
785                 790                 795                 800
Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys
                805                 810                 815
Glu Glu Arg Leu Gln Ala His Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu
            820                 825                 830
Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val
        835                 840                 845
Pro Glu Val Met Glu Gln Ala Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val
    850                 855                 860
Asp Tyr His Tyr Gly Ser Thr Trp Tyr Asp Ala Lys
865                 870                 875
<210> 70
<211> 876
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽序列
<400> 70
Met Lys Lys Lys Leu Val Leu Ile Asp Gly Ser Ser Val Ala Tyr Arg
1               5                   10                  15
Ala Phe Phe Ala Leu Pro Leu Leu His Asn Asp Lys Gly Ile His Thr
            20                  25                  30
Asn Ala Val Tyr Gly Phe Thr Met Met Leu Asn Lys Ile Leu Ala Glu
        35                  40                  45
Glu Glu Pro Thr His Met Leu Val Ala Phe Asp Ala Gly Lys Thr Thr
    50                  55                  60
Phe Arg His Glu Ala Phe Gln Glu Tyr Lys Gly Gly Arg Gln Gln Thr
65                  70                  75                  80
Pro Pro Glu Leu Ser Glu Gln Phe Pro Leu Leu Arg Glu Leu Leu Arg
                85                  90                  95
Ala Tyr Arg Ile Pro Ala Tyr Glu Leu Glu Asn Tyr Glu Ala Asp Asp
            100                 105                 110
Ile Ile Gly Thr Leu Ala Ala Arg Ala Glu Gln Glu Gly Phe Glu Val
        115                 120                 125
Lys Val Ile Ser Gly Asp Arg Asp Leu Thr Gln Leu Ala Ser Pro His
    130                 135                 140
Val Thr Val Asp Ile Thr Lys Lys Gly Ile Thr Asp Ile Glu Pro Tyr
145                 150                 155                 160
Thr Pro Glu Thr Val Arg Glu Lys Tyr Gly Leu Thr Pro Glu Gln Ile
                165                 170                 175
Val Asp Leu Lys Gly Leu Met Gly Asp Lys Ser Asp Asn Ile Pro Gly
            180                 185                 190
Val Pro Gly Ile Gly Glu Lys Thr Ala Val Lys Leu Leu Arg Gln Phe
        195                 200                 205
Gly Thr Val Glu Asn Val Leu Ala Ser Ile Asp Glu Ile Lys Gly Glu
    210                 215                 220
Lys Leu Lys Glu Thr Leu Arg Gln His Arg Glu Met Ala Leu Leu Ser
225                 230                 235                 240
Lys Lys Leu Ala Ala Ile Arg Arg Asp Ala Pro Val Glu Leu Ser Leu
                245                 250                 255
Asp Asp Ile Ala Tyr Gln Gly Glu Asp Arg Glu Lys Val Val Ala Leu
            260                 265                 270
Phe Lys Glu Leu Gly Phe Gln Ser Phe Leu Glu Lys Met Glu Ser Pro
        275                 280                 285
Ser Ser Glu Glu Glu Lys Pro Leu Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala
    290                 295                 300
Asp Arg Val Thr Glu Glu Met Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val
305                 310                 315                 320
Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala
                325                 330                 335
Val Val Asn Glu His Gly Arg Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu
            340                 345                 350
Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys
        355                 360                 365
Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly
    370                 375                 380
Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu
385                 390                 395                 400
Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met
                405                 410                 415
Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly
            420                 425                 430
Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val
        435                 440                 445
Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu
    450                 455                 460
Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro
465                 470                 475                 480
Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp
                485                 490                 495
Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly
            500                 505                 510
Thr Val Glu Gln Arg Ile Tyr Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile
        515                 520                 525
Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu
    530                 535                 540
Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val
545                 550                 555                 560
Leu Glu Lys Leu Ala Pro Tyr His Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu Met
                565                 570                 575
Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu
            580                 585                 590
Lys Val Val Arg Pro Asp Thr Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln
        595                 600                 605
Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln
    610                 615                 620
Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe
625                 630                 635                 640
Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln
                645                 650                 655
Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met
            660                 665                 670
Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp
        675                 680                 685
Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln
    690                 695                 700
Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly Ile Val Tyr Gly Ile Ser Lys Tyr Gly
705                 710                 715                 720
Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile
                725                 730                 735
Glu Arg Tyr Phe Glu Ser Phe Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn
            740                 745                 750
Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu His
        755                 760                 765
Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp Ile Thr Ser Arg Arg Phe Arg Val Arg
    770                 775                 780
Ser Phe Ala Glu Arg Met Ala Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala
785                 790                 795                 800
Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys
                805                 810                 815
Glu Glu Arg Leu Gln Ala His Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu
            820                 825                 830
Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val
        835                 840                 845
Pro Glu Val Met Glu Gln Ala Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val
    850                 855                 860
Asp Tyr His Tyr Gly Ser Thr Trp Tyr Asp Ala Lys
865                 870                 875
<210> 71
<211> 876
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽序列
<400> 71
Met Lys Lys Lys Leu Val Leu Ile Asp Gly Ser Ser Val Ala Tyr Arg
1               5                   10                  15
Ala Phe Phe Ala Leu Pro Leu Leu His Asn Asp Lys Gly Ile His Thr
            20                  25                  30
Asn Ala Val Tyr Gly Phe Thr Met Met Leu Asn Lys Ile Leu Ala Glu
        35                  40                  45
Glu Glu Pro Thr His Met Leu Val Ala Phe Asp Ala Gly Lys Thr Thr
    50                  55                  60
Phe Arg His Glu Ala Phe Gln Glu Tyr Lys Gly Gly Arg Gln Gln Thr
65                  70                  75                  80
Pro Pro Glu Leu Ser Glu Gln Phe Pro Leu Leu Arg Glu Leu Leu Arg
                85                  90                  95
Ala Tyr Arg Ile Pro Ala Tyr Glu Leu Glu Asn Tyr Glu Ala Asp Asp
            100                 105                 110
Ile Ile Gly Thr Leu Ala Ala Arg Ala Glu Gln Glu Gly Phe Glu Val
        115                 120                 125
Lys Val Ile Ser Gly Asp Arg Asp Leu Thr Gln Leu Ala Ser Pro His
    130                 135                 140
Val Thr Val Asp Ile Thr Lys Lys Gly Ile Thr Asp Ile Glu Pro Tyr
145                 150                 155                 160
Thr Pro Glu Thr Val Arg Glu Lys Tyr Gly Leu Thr Pro Glu Gln Ile
                165                 170                 175
Val Asp Leu Lys Gly Leu Met Gly Asp Lys Ser Asp Asn Ile Pro Gly
            180                 185                 190
Val Pro Gly Ile Gly Glu Lys Thr Ala Val Lys Leu Leu Arg Gln Phe
        195                 200                 205
Gly Thr Val Glu Asn Val Leu Ala Ser Ile Asp Glu Ile Lys Gly Glu
    210                 215                 220
Lys Leu Lys Glu Thr Leu Arg Gln His Arg Glu Met Ala Leu Leu Ser
225                 230                 235                 240
Lys Lys Leu Ala Ala Ile Arg Arg Asp Ala Pro Val Glu Leu Ser Leu
                245                 250                 255
Asp Asp Ile Ala Tyr Gln Gly Glu Asp Arg Glu Lys Val Val Ala Leu
            260                 265                 270
Phe Lys Glu Leu Gly Phe Gln Ser Phe Leu Glu Lys Met Glu Ser Pro
        275                 280                 285
Ser Ser Glu Glu Glu Lys Pro Leu Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala
    290                 295                 300
Asp Arg Val Thr Glu Glu Met Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val
305                 310                 315                 320
Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala
                325                 330                 335
Val Val Asn Glu His Gly Arg Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu
            340                 345                 350
Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys
        355                 360                 365
Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly
    370                 375                 380
Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu
385                 390                 395                 400
Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met
                405                 410                 415
Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly
            420                 425                 430
Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val
        435                 440                 445
Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu
    450                 455                 460
Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro
465                 470                 475                 480
Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp
                485                 490                 495
Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly
            500                 505                 510
Thr Val Glu Gln Arg Ile Tyr Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile
        515                 520                 525
Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu
    530                 535                 540
Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val
545                 550                 555                 560
Leu Glu Lys Leu Ala Pro Tyr His Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu Met
                565                 570                 575
Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu
            580                 585                 590
Lys Val Val Arg Pro Asp Thr Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln
        595                 600                 605
Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln
    610                 615                 620
Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe
625                 630                 635                 640
Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln
                645                 650                 655
Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met
            660                 665                 670
Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp
        675                 680                 685
Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln
    690                 695                 700
Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly Ile Val Tyr Gly Ile Ser Lys Tyr Gly
705                 710                 715                 720
Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile
                725                 730                 735
Glu Arg Tyr Phe Glu Ser Phe Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn
            740                 745                 750
Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu His
        755                 760                 765
Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp Ile Thr Ser Arg Asn Phe Arg Val Arg
    770                 775                 780
Ser Phe Ala Glu Arg Met Ala Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala
785                 790                 795                 800
Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys
                805                 810                 815
Glu Glu Arg Leu Gln Ala His Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu
            820                 825                 830
Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val
        835                 840                 845
Pro Glu Val Met Glu Gln Ala Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val
    850                 855                 860
Asp Tyr His Tyr Gly Ser Thr Trp Tyr Asp Ala Lys
865                 870                 875
<210> 72
<211> 876
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽序列
<400> 72
Met Lys Lys Lys Leu Val Leu Ile Asp Gly Ser Ser Val Ala Tyr Arg
1               5                   10                  15
Ala Phe Phe Ala Leu Pro Leu Leu His Asn Asp Lys Gly Ile His Thr
            20                  25                  30
Asn Ala Val Tyr Gly Phe Thr Met Met Leu Asn Lys Ile Leu Ala Glu
        35                  40                  45
Glu Glu Pro Thr His Met Leu Val Ala Phe Asp Ala Gly Lys Thr Thr
    50                  55                  60
Phe Arg His Glu Ala Phe Gln Glu Tyr Lys Gly Gly Arg Gln Gln Thr
65                  70                  75                  80
Pro Pro Glu Leu Ser Glu Gln Phe Pro Leu Leu Arg Glu Leu Leu Arg
                85                  90                  95
Ala Tyr Arg Ile Pro Ala Tyr Glu Leu Glu Asn Tyr Glu Ala Asp Asp
            100                 105                 110
Ile Ile Gly Thr Leu Ala Ala Arg Ala Glu Gln Glu Gly Phe Glu Val
        115                 120                 125
Lys Val Ile Ser Gly Asp Arg Asp Leu Thr Gln Leu Ala Ser Pro His
    130                 135                 140
Val Thr Val Asp Ile Thr Lys Lys Gly Ile Thr Asp Ile Glu Pro Tyr
145                 150                 155                 160
Thr Pro Glu Thr Val Arg Glu Lys Tyr Gly Leu Thr Pro Glu Gln Ile
                165                 170                 175
Val Asp Leu Lys Gly Leu Met Gly Asp Lys Ser Asp Asn Ile Pro Gly
            180                 185                 190
Val Pro Gly Ile Gly Glu Lys Thr Ala Val Lys Leu Leu Arg Gln Phe
        195                 200                 205
Gly Thr Val Glu Asn Val Leu Ala Ser Ile Asp Glu Ile Lys Gly Glu
    210                 215                 220
Lys Leu Lys Glu Thr Leu Arg Gln His Arg Glu Met Ala Leu Leu Ser
225                 230                 235                 240
Lys Lys Leu Ala Ala Ile Arg Arg Asp Ala Pro Val Glu Leu Ser Leu
                245                 250                 255
Asp Asp Ile Ala Tyr Gln Gly Glu Asp Arg Glu Lys Val Val Ala Leu
            260                 265                 270
Phe Lys Glu Leu Gly Phe Gln Ser Phe Leu Glu Lys Met Glu Ser Pro
        275                 280                 285
Ser Ser Glu Glu Glu Lys Pro Leu Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala
    290                 295                 300
Asp Arg Val Thr Glu Glu Met Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val
305                 310                 315                 320
Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala
                325                 330                 335
Val Val Asn Glu His Gly Arg Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu
            340                 345                 350
Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys
        355                 360                 365
Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly
    370                 375                 380
Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu
385                 390                 395                 400
Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met
                405                 410                 415
Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly
            420                 425                 430
Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val
        435                 440                 445
Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu
    450                 455                 460
Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro
465                 470                 475                 480
Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp
                485                 490                 495
Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly
            500                 505                 510
Thr Val Glu Gln Arg Ile Tyr Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile
        515                 520                 525
Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu
    530                 535                 540
Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Lys Val
545                 550                 555                 560
Leu Glu Lys Leu Ala Pro Tyr His Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu Met
                565                 570                 575
Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu
            580                 585                 590
Lys Val Val Arg Pro Asp Thr Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln
        595                 600                 605
Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln
    610                 615                 620
Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe
625                 630                 635                 640
Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln
                645                 650                 655
Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met
            660                 665                 670
Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp
        675                 680                 685
Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln
    690                 695                 700
Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly Ile Val Tyr Gly Ile Ser Lys Tyr Gly
705                 710                 715                 720
Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile
                725                 730                 735
Glu Arg Tyr Phe Glu Ser Phe Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn
            740                 745                 750
Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu His
        755                 760                 765
Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp Ile Thr Ser Arg Asn Phe Arg Val Arg
    770                 775                 780
Ser Phe Ala Glu Arg Met Ala Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala
785                 790                 795                 800
Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys
                805                 810                 815
Glu Glu Arg Leu Gln Ala His Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu
            820                 825                 830
Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val
        835                 840                 845
Pro Glu Val Met Glu Gln Ala Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val
    850                 855                 860
Asp Tyr His Tyr Gly Ser Thr Trp Tyr Asp Ala Lys
865                 870                 875
<210> 73
<211> 876
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽序列
<400> 73
Met Lys Lys Lys Leu Val Leu Ile Asp Gly Ser Ser Val Ala Tyr Arg
1               5                   10                  15
Ala Phe Phe Ala Leu Pro Leu Leu His Asn Asp Lys Gly Ile His Thr
            20                  25                  30
Asn Ala Val Tyr Gly Phe Thr Met Met Leu Asn Lys Ile Leu Ala Glu
        35                  40                  45
Glu Glu Pro Thr His Met Leu Val Ala Phe Asp Ala Gly Lys Thr Thr
    50                  55                  60
Phe Arg His Glu Ala Phe Gln Glu Tyr Lys Gly Gly Arg Gln Gln Thr
65                  70                  75                  80
Pro Pro Glu Leu Ser Glu Gln Phe Pro Leu Leu Arg Glu Leu Leu Arg
                85                  90                  95
Ala Tyr Arg Ile Pro Ala Tyr Glu Leu Glu Asn Tyr Glu Ala Asp Asp
            100                 105                 110
Ile Ile Gly Thr Leu Ala Ala Arg Ala Glu Gln Glu Gly Phe Glu Val
        115                 120                 125
Lys Val Ile Ser Gly Asp Arg Asp Leu Thr Gln Leu Ala Ser Pro His
    130                 135                 140
Val Thr Val Asp Ile Thr Lys Lys Gly Ile Thr Asp Ile Glu Pro Tyr
145                 150                 155                 160
Thr Pro Glu Thr Val Arg Glu Lys Tyr Gly Leu Thr Pro Glu Gln Ile
                165                 170                 175
Val Asp Leu Lys Gly Leu Met Gly Asp Lys Ser Asp Asn Ile Pro Gly
            180                 185                 190
Val Pro Gly Ile Gly Glu Lys Thr Ala Val Lys Leu Leu Arg Gln Phe
        195                 200                 205
Gly Thr Val Glu Asn Val Leu Ala Ser Ile Asp Glu Ile Lys Gly Glu
    210                 215                 220
Lys Leu Lys Glu Thr Leu Arg Gln His Arg Glu Met Ala Leu Leu Ser
225                 230                 235                 240
Lys Lys Leu Ala Ala Ile Arg Arg Asp Ala Pro Val Glu Leu Ser Leu
                245                 250                 255
Asp Asp Ile Ala Tyr Gln Gly Glu Asp Arg Glu Lys Val Val Ala Leu
            260                 265                 270
Phe Lys Glu Leu Gly Phe Gln Ser Phe Leu Glu Lys Met Glu Ser Pro
        275                 280                 285
Ser Ser Glu Glu Glu Lys Pro Leu Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala
    290                 295                 300
Asp Arg Val Thr Glu Glu Met Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val
305                 310                 315                 320
Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala
                325                 330                 335
Val Val Asn Glu His Gly Arg Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu
            340                 345                 350
Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys
        355                 360                 365
Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly
    370                 375                 380
Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu
385                 390                 395                 400
Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met
                405                 410                 415
Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly
            420                 425                 430
Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val
        435                 440                 445
Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu
    450                 455                 460
Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro
465                 470                 475                 480
Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp
                485                 490                 495
Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly
            500                 505                 510
Thr Val Glu Gln Arg Ile Tyr Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile
        515                 520                 525
Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu
    530                 535                 540
Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Met Val
545                 550                 555                 560
Leu Glu Lys Leu Ala Pro Tyr His Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu Met
                565                 570                 575
Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu
            580                 585                 590
Lys Val Val Arg Pro Asp Thr Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln
        595                 600                 605
Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln
    610                 615                 620
Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe
625                 630                 635                 640
Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln
                645                 650                 655
Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met
            660                 665                 670
Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp
        675                 680                 685
Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln
    690                 695                 700
Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly Ile Val Tyr Gly Ile Ser Lys Tyr Gly
705                 710                 715                 720
Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile
                725                 730                 735
Glu Arg Tyr Phe Glu Ser Phe Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn
            740                 745                 750
Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu His
        755                 760                 765
Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp Ile Thr Ser Arg Asn Phe Arg Val Arg
    770                 775                 780
Ser Phe Ala Glu Arg Met Ala Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala
785                 790                 795                 800
Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys
                805                 810                 815
Glu Glu Arg Leu Gln Ala His Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu
            820                 825                 830
Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val
        835                 840                 845
Pro Glu Val Met Glu Gln Ala Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val
    850                 855                 860
Asp Tyr His Tyr Gly Ser Thr Trp Tyr Asp Ala Lys
865                 870                 875
<210> 74
<211> 876
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽序列
<400> 74
Met Lys Lys Lys Leu Val Leu Ile Asp Gly Ser Ser Val Ala Tyr Arg
1               5                   10                  15
Ala Phe Phe Ala Leu Pro Leu Leu His Asn Asp Lys Gly Ile His Thr
            20                  25                  30
Asn Ala Val Tyr Gly Phe Thr Met Met Leu Asn Lys Ile Leu Ala Glu
        35                  40                  45
Glu Glu Pro Thr His Met Leu Val Ala Phe Asp Ala Gly Lys Thr Thr
    50                  55                  60
Phe Arg His Glu Ala Phe Gln Glu Tyr Lys Gly Gly Arg Gln Gln Thr
65                  70                  75                  80
Pro Pro Glu Leu Ser Glu Gln Phe Pro Leu Leu Arg Glu Leu Leu Arg
                85                  90                  95
Ala Tyr Arg Ile Pro Ala Tyr Glu Leu Glu Asn Tyr Glu Ala Asp Asp
            100                 105                 110
Ile Ile Gly Thr Leu Ala Ala Arg Ala Glu Gln Glu Gly Phe Glu Val
        115                 120                 125
Lys Val Ile Ser Gly Asp Arg Asp Leu Thr Gln Leu Ala Ser Pro His
    130                 135                 140
Val Thr Val Asp Ile Thr Lys Lys Gly Ile Thr Asp Ile Glu Pro Tyr
145                 150                 155                 160
Thr Pro Glu Thr Val Arg Glu Lys Tyr Gly Leu Thr Pro Glu Gln Ile
                165                 170                 175
Val Asp Leu Lys Gly Leu Met Gly Asp Lys Ser Asp Asn Ile Pro Gly
            180                 185                 190
Val Pro Gly Ile Gly Glu Lys Thr Ala Val Lys Leu Leu Arg Gln Phe
        195                 200                 205
Gly Thr Val Glu Asn Val Leu Ala Ser Ile Asp Glu Ile Lys Gly Glu
    210                 215                 220
Lys Leu Lys Glu Thr Leu Arg Gln His Arg Glu Met Ala Leu Leu Ser
225                 230                 235                 240
Lys Lys Leu Ala Ala Ile Arg Arg Asp Ala Pro Val Glu Leu Ser Leu
                245                 250                 255
Asp Asp Ile Ala Tyr Gln Gly Glu Asp Arg Glu Lys Val Val Ala Leu
            260                 265                 270
Phe Lys Glu Leu Gly Phe Gln Ser Phe Leu Glu Lys Met Glu Ser Pro
        275                 280                 285
Ser Ser Glu Glu Glu Lys Pro Leu Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala
    290                 295                 300
Asp Arg Val Thr Glu Glu Met Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val
305                 310                 315                 320
Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala
                325                 330                 335
Val Val Asn Glu His Gly Arg Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu
            340                 345                 350
Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys
        355                 360                 365
Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly
    370                 375                 380
Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu
385                 390                 395                 400
Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met
                405                 410                 415
Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly
            420                 425                 430
Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val
        435                 440                 445
Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu
    450                 455                 460
Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro
465                 470                 475                 480
Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp
                485                 490                 495
Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly
            500                 505                 510
Thr Val Glu Gln Arg Ile Tyr Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile
        515                 520                 525
Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu
    530                 535                 540
Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val
545                 550                 555                 560
Leu Glu Lys Leu Ala Pro Tyr His Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu Met
                565                 570                 575
Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu
            580                 585                 590
Lys Val Val Arg Pro Asp Thr Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln
        595                 600                 605
Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln
    610                 615                 620
Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe
625                 630                 635                 640
Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln
                645                 650                 655
Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met
            660                 665                 670
Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp
        675                 680                 685
Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln
    690                 695                 700
Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly Ile Val Tyr Gly Ile Ser Lys Tyr Gly
705                 710                 715                 720
Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile
                725                 730                 735
Glu Arg Tyr Phe Glu Ser Phe Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn
            740                 745                 750
Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu His
        755                 760                 765
Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp Ile Thr Ser Arg Asn Phe Arg Val Arg
    770                 775                 780
Ser Phe Ala Glu Arg Met Ala Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala
785                 790                 795                 800
Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys
                805                 810                 815
Glu Glu Arg Leu Gln Ala Thr Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu
            820                 825                 830
Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val
        835                 840                 845
Pro Glu Val Met Glu Gln Ala Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val
    850                 855                 860
Asp Tyr His Tyr Gly Ser Thr Trp Tyr Asp Ala Lys
865                 870                 875
<210> 75
<211> 876
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽序列
<400> 75
Met Lys Lys Lys Leu Val Leu Ile Asp Gly Ser Ser Val Ala Tyr Arg
1               5                   10                  15
Ala Phe Phe Ala Leu Pro Leu Leu His Asn Asp Lys Gly Ile His Thr
            20                  25                  30
Asn Ala Val Tyr Gly Phe Thr Met Met Leu Asn Lys Ile Leu Ala Glu
        35                  40                  45
Glu Glu Pro Thr His Met Leu Val Ala Phe Asp Ala Gly Lys Thr Thr
    50                  55                  60
Phe Arg His Glu Ala Phe Gln Glu Tyr Lys Gly Gly Arg Gln Gln Thr
65                  70                  75                  80
Pro Pro Glu Leu Ser Glu Gln Phe Pro Leu Leu Arg Glu Leu Leu Arg
                85                  90                  95
Ala Tyr Arg Ile Pro Ala Tyr Glu Leu Glu Asn Tyr Glu Ala Asp Asp
            100                 105                 110
Ile Ile Gly Thr Leu Ala Ala Arg Ala Glu Gln Glu Gly Phe Glu Val
        115                 120                 125
Lys Val Ile Ser Gly Asp Arg Asp Leu Thr Gln Leu Ala Ser Pro His
    130                 135                 140
Val Thr Val Asp Ile Thr Lys Lys Gly Ile Thr Asp Ile Glu Pro Tyr
145                 150                 155                 160
Thr Pro Glu Thr Val Arg Glu Lys Tyr Gly Leu Thr Pro Glu Gln Ile
                165                 170                 175
Val Asp Leu Lys Gly Leu Met Gly Asp Lys Ser Asp Asn Ile Pro Gly
            180                 185                 190
Val Pro Gly Ile Gly Glu Lys Thr Ala Val Lys Leu Leu Arg Gln Phe
        195                 200                 205
Gly Thr Val Glu Asn Val Leu Ala Ser Ile Asp Glu Ile Lys Gly Glu
    210                 215                 220
Lys Leu Lys Glu Thr Leu Arg Gln His Arg Glu Met Ala Leu Leu Ser
225                 230                 235                 240
Lys Lys Leu Ala Ala Ile Arg Arg Asp Ala Pro Val Glu Leu Ser Leu
                245                 250                 255
Asp Asp Ile Ala Tyr Gln Gly Glu Asp Arg Glu Lys Val Val Ala Leu
            260                 265                 270
Phe Lys Glu Leu Gly Phe Gln Ser Phe Leu Glu Lys Met Glu Ser Pro
        275                 280                 285
Ser Ser Glu Glu Glu Lys Pro Leu Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala
    290                 295                 300
Asp Arg Val Thr Glu Glu Met Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val
305                 310                 315                 320
Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala
                325                 330                 335
Val Val Asn Glu His Gly Arg Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu
            340                 345                 350
Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys
        355                 360                 365
Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly
    370                 375                 380
Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu
385                 390                 395                 400
Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met
                405                 410                 415
Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly
            420                 425                 430
Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val
        435                 440                 445
Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu
    450                 455                 460
Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro
465                 470                 475                 480
Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp
                485                 490                 495
Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly
            500                 505                 510
Thr Val Glu Gln Arg Ile Tyr Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile
        515                 520                 525
Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu
    530                 535                 540
Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val
545                 550                 555                 560
Leu Glu Lys Leu Ala Pro Tyr His Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu Met
                565                 570                 575
Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu
            580                 585                 590
Lys Val Val Arg Pro Asp Thr Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln
        595                 600                 605
Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln
    610                 615                 620
Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe
625                 630                 635                 640
Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln
                645                 650                 655
Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met
            660                 665                 670
Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp
        675                 680                 685
Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln
    690                 695                 700
Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly Ile Val Tyr Gly Ile Ser Lys Tyr Gly
705                 710                 715                 720
Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile
                725                 730                 735
Glu Arg Tyr Phe Glu Ser Phe Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn
            740                 745                 750
Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu Gly
        755                 760                 765
Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp Ile Thr Ser Arg Asn Phe Arg Val Arg
    770                 775                 780
Ser Phe Ala Glu Arg Met Ala Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala
785                 790                 795                 800
Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys
                805                 810                 815
Glu Glu Arg Leu Gln Ala His Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu
            820                 825                 830
Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val
        835                 840                 845
Pro Glu Val Met Glu Gln Ala Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val
    850                 855                 860
Asp Tyr His Tyr Gly Ser Thr Trp Tyr Asp Ala Lys
865                 870                 875
<210> 76
<211> 876
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽序列
<400> 76
Met Lys Lys Lys Leu Val Leu Ile Asp Gly Ser Ser Val Ala Tyr Arg
1               5                   10                  15
Ala Phe Phe Ala Leu Pro Leu Leu His Asn Asp Lys Gly Ile His Thr
            20                  25                  30
Asn Ala Val Tyr Gly Phe Thr Met Met Leu Asn Lys Ile Leu Ala Glu
        35                  40                  45
Glu Glu Pro Thr His Met Leu Val Ala Phe Asp Ala Gly Lys Thr Thr
    50                  55                  60
Phe Arg His Glu Ala Phe Gln Glu Tyr Lys Gly Gly Arg Gln Gln Thr
65                  70                  75                  80
Pro Pro Glu Leu Ser Glu Gln Phe Pro Leu Leu Arg Glu Leu Leu Arg
                85                  90                  95
Ala Tyr Arg Ile Pro Ala Tyr Glu Leu Glu Asn Tyr Glu Ala Asp Asp
            100                 105                 110
Ile Ile Gly Thr Leu Ala Ala Arg Ala Glu Gln Glu Gly Phe Glu Val
        115                 120                 125
Lys Val Ile Ser Gly Asp Arg Asp Leu Thr Gln Leu Ala Ser Pro His
    130                 135                 140
Val Thr Val Asp Ile Thr Lys Lys Gly Ile Thr Asp Ile Glu Pro Tyr
145                 150                 155                 160
Thr Pro Glu Thr Val Arg Glu Lys Tyr Gly Leu Thr Pro Glu Gln Ile
                165                 170                 175
Val Asp Leu Lys Gly Leu Met Gly Asp Lys Ser Asp Asn Ile Pro Gly
            180                 185                 190
Val Pro Gly Ile Gly Glu Lys Thr Ala Val Lys Leu Leu Arg Gln Phe
        195                 200                 205
Gly Thr Val Glu Asn Val Leu Ala Ser Ile Asp Glu Ile Lys Gly Glu
    210                 215                 220
Lys Leu Lys Glu Thr Leu Arg Gln His Arg Glu Met Ala Leu Leu Ser
225                 230                 235                 240
Lys Lys Leu Ala Ala Ile Arg Arg Asp Ala Pro Val Glu Leu Ser Leu
                245                 250                 255
Asp Asp Ile Ala Tyr Gln Gly Glu Asp Arg Glu Lys Val Val Ala Leu
            260                 265                 270
Phe Lys Glu Leu Gly Phe Gln Ser Phe Leu Glu Lys Met Glu Ser Pro
        275                 280                 285
Ser Ser Glu Glu Glu Lys Pro Leu Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala
    290                 295                 300
Asp Arg Val Thr Glu Glu Met Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val
305                 310                 315                 320
Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala
                325                 330                 335
Val Val Asn Glu His Gly Arg Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu
            340                 345                 350
Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys
        355                 360                 365
Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly
    370                 375                 380
Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu
385                 390                 395                 400
Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met
                405                 410                 415
Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly
            420                 425                 430
Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val
        435                 440                 445
Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu
    450                 455                 460
Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro
465                 470                 475                 480
Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp
                485                 490                 495
Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly
            500                 505                 510
Thr Val Glu Gln Arg Ile Tyr Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile
        515                 520                 525
Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu
    530                 535                 540
Pro Val Arg Lys Lys Thr Lys Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val
545                 550                 555                 560
Leu Glu Lys Leu Ala Pro Tyr His Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu Met
                565                 570                 575
Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu
            580                 585                 590
Lys Val Val Arg Pro Asp Thr Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln
        595                 600                 605
Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln
    610                 615                 620
Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe
625                 630                 635                 640
Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln
                645                 650                 655
Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met
            660                 665                 670
Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp
        675                 680                 685
Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln
    690                 695                 700
Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly Ile Val Tyr Gly Ile Ser Lys Tyr Gly
705                 710                 715                 720
Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile
                725                 730                 735
Glu Arg Tyr Phe Glu Ser Phe Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn
            740                 745                 750
Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu His
        755                 760                 765
Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp Ile Thr Ser Arg Asn Phe Arg Val Arg
    770                 775                 780
Ser Phe Ala Glu Arg Met Ala Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala
785                 790                 795                 800
Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys
                805                 810                 815
Glu Glu Arg Leu Gln Ala His Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu
            820                 825                 830
Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val
        835                 840                 845
Pro Glu Val Met Glu Gln Ala Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val
    850                 855                 860
Asp Tyr His Tyr Gly Ser Thr Trp Tyr Asp Ala Lys
865                 870                 875
<210> 77
<211> 876
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽序列
<400> 77
Met Lys Lys Lys Leu Val Leu Ile Asp Gly Ser Ser Val Ala Tyr Arg
1               5                   10                  15
Ala Phe Phe Ala Leu Pro Leu Leu His Asn Asp Lys Gly Ile His Thr
            20                  25                  30
Asn Ala Val Tyr Gly Phe Thr Met Met Leu Asn Lys Ile Leu Ala Glu
        35                  40                  45
Glu Glu Pro Thr His Met Leu Val Ala Phe Asp Ala Gly Lys Thr Thr
    50                  55                  60
Phe Arg His Glu Ala Phe Gln Glu Tyr Lys Gly Gly Arg Gln Gln Thr
65                  70                  75                  80
Pro Pro Glu Leu Ser Glu Gln Phe Pro Leu Leu Arg Glu Leu Leu Arg
                85                  90                  95
Ala Tyr Arg Ile Pro Ala Tyr Glu Leu Glu Asn Tyr Glu Ala Asp Asp
            100                 105                 110
Ile Ile Gly Thr Leu Ala Ala Arg Ala Glu Gln Glu Gly Phe Glu Val
        115                 120                 125
Lys Val Ile Ser Gly Asp Arg Asp Leu Thr Gln Leu Ala Ser Pro His
    130                 135                 140
Val Thr Val Asp Ile Thr Lys Lys Gly Ile Thr Asp Ile Glu Pro Tyr
145                 150                 155                 160
Thr Pro Glu Thr Val Arg Glu Lys Tyr Gly Leu Thr Pro Glu Gln Ile
                165                 170                 175
Val Asp Leu Lys Gly Leu Met Gly Asp Lys Ser Asp Asn Ile Pro Gly
            180                 185                 190
Val Pro Gly Ile Gly Glu Lys Thr Ala Val Lys Leu Leu Arg Gln Phe
        195                 200                 205
Gly Thr Val Glu Asn Val Leu Ala Ser Ile Asp Glu Ile Lys Gly Glu
    210                 215                 220
Lys Leu Lys Glu Thr Leu Arg Gln His Arg Glu Met Ala Leu Leu Ser
225                 230                 235                 240
Lys Lys Leu Ala Ala Ile Arg Arg Asp Ala Pro Val Glu Leu Ser Leu
                245                 250                 255
Asp Asp Ile Ala Tyr Gln Gly Glu Asp Arg Glu Lys Val Val Ala Leu
            260                 265                 270
Phe Lys Glu Leu Gly Phe Gln Ser Phe Leu Glu Lys Met Glu Ser Pro
        275                 280                 285
Ser Ser Glu Glu Glu Lys Pro Leu Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala
    290                 295                 300
Asp Arg Val Thr Glu Glu Met Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val
305                 310                 315                 320
Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala
                325                 330                 335
Val Val Asn Glu His Gly Arg Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu
            340                 345                 350
Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys
        355                 360                 365
Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly
    370                 375                 380
Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu
385                 390                 395                 400
Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met
                405                 410                 415
Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly
            420                 425                 430
Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val
        435                 440                 445
Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu
    450                 455                 460
Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro
465                 470                 475                 480
Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp
                485                 490                 495
Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly
            500                 505                 510
Thr Val Glu Gln Arg Ile Tyr Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile
        515                 520                 525
Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu
    530                 535                 540
Pro Val Arg Lys Lys Thr Lys Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val
545                 550                 555                 560
Leu Glu Lys Leu Ala Pro Tyr His Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu Met
                565                 570                 575
Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu
            580                 585                 590
Lys Val Val Arg Pro Asp Thr Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln
        595                 600                 605
Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln
    610                 615                 620
Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe
625                 630                 635                 640
Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln
                645                 650                 655
Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met
            660                 665                 670
Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp
        675                 680                 685
Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln
    690                 695                 700
Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly Ile Val Tyr Gly Ile Ser Lys Tyr Gly
705                 710                 715                 720
Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile
                725                 730                 735
Glu Arg Tyr Phe Glu Ser Phe Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn
            740                 745                 750
Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu His
        755                 760                 765
Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp Ile Thr Ser Arg Asn Phe Arg Val Arg
    770                 775                 780
Ser Phe Ala Glu Arg Met Ala Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala
785                 790                 795                 800
Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys
                805                 810                 815
Glu Glu Arg Leu Gln Ala Thr Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu
            820                 825                 830
Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val
        835                 840                 845
Pro Glu Val Met Glu Gln Ala Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val
    850                 855                 860
Asp Tyr His Tyr Gly Ser Thr Trp Tyr Asp Ala Lys
865                 870                 875
<210> 78
<211> 876
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽序列
<400> 78
Met Lys Lys Lys Leu Val Leu Ile Asp Gly Ser Ser Val Ala Tyr Arg
1               5                   10                  15
Ala Phe Phe Ala Leu Pro Leu Leu His Asn Asp Lys Gly Ile His Thr
            20                  25                  30
Asn Ala Val Tyr Gly Phe Thr Met Met Leu Asn Lys Ile Leu Ala Glu
        35                  40                  45
Glu Glu Pro Thr His Met Leu Val Ala Phe Asp Ala Gly Lys Thr Thr
    50                  55                  60
Phe Arg His Glu Ala Phe Gln Glu Tyr Lys Gly Gly Arg Gln Gln Thr
65                  70                  75                  80
Pro Pro Glu Leu Ser Glu Gln Phe Pro Leu Leu Arg Glu Leu Leu Arg
                85                  90                  95
Ala Tyr Arg Ile Pro Ala Tyr Glu Leu Glu Asn Tyr Glu Ala Asp Asp
            100                 105                 110
Ile Ile Gly Thr Leu Ala Ala Arg Ala Glu Gln Glu Gly Phe Glu Val
        115                 120                 125
Lys Val Ile Ser Gly Asp Arg Asp Leu Thr Gln Leu Ala Ser Pro His
    130                 135                 140
Val Thr Val Asp Ile Thr Lys Lys Gly Ile Thr Asp Ile Glu Pro Tyr
145                 150                 155                 160
Thr Pro Glu Thr Val Arg Glu Lys Tyr Gly Leu Thr Pro Glu Gln Ile
                165                 170                 175
Val Asp Leu Lys Gly Leu Met Gly Asp Lys Ser Asp Asn Ile Pro Gly
            180                 185                 190
Val Pro Gly Ile Gly Glu Lys Thr Ala Val Lys Leu Leu Arg Gln Phe
        195                 200                 205
Gly Thr Val Glu Asn Val Leu Ala Ser Ile Asp Glu Ile Lys Gly Glu
    210                 215                 220
Lys Leu Lys Glu Thr Leu Arg Gln His Arg Glu Met Ala Leu Leu Ser
225                 230                 235                 240
Lys Lys Leu Ala Ala Ile Arg Arg Asp Ala Pro Val Glu Leu Ser Leu
                245                 250                 255
Asp Asp Ile Ala Tyr Gln Gly Glu Asp Arg Glu Lys Val Val Ala Leu
            260                 265                 270
Phe Lys Glu Leu Gly Phe Gln Ser Phe Leu Glu Lys Met Glu Ser Pro
        275                 280                 285
Ser Ser Glu Glu Glu Lys Pro Leu Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala
    290                 295                 300
Asp Arg Val Thr Glu Glu Met Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val
305                 310                 315                 320
Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala
                325                 330                 335
Val Val Asn Glu His Gly Arg Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu
            340                 345                 350
Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys
        355                 360                 365
Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly
    370                 375                 380
Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu
385                 390                 395                 400
Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met
                405                 410                 415
Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly
            420                 425                 430
Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val
        435                 440                 445
Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu
    450                 455                 460
Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro
465                 470                 475                 480
Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp
                485                 490                 495
Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly
            500                 505                 510
Thr Val Glu Gln Arg Ile Tyr Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile
        515                 520                 525
Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu
    530                 535                 540
Pro Val Arg Lys Lys Thr Lys Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val
545                 550                 555                 560
Leu Glu Lys Leu Ala Pro Tyr His Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu Met
                565                 570                 575
Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu
            580                 585                 590
Lys Val Val Arg Pro Asp Thr Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln
        595                 600                 605
Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln
    610                 615                 620
Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe
625                 630                 635                 640
Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln
                645                 650                 655
Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met
            660                 665                 670
Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp
        675                 680                 685
Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln
    690                 695                 700
Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly Ile Val Tyr Gly Ile Ser Lys Tyr Gly
705                 710                 715                 720
Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile
                725                 730                 735
Glu Arg Tyr Phe Glu Ser Phe Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn
            740                 745                 750
Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu Gly
        755                 760                 765
Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp Ile Thr Ser Arg Asn Phe Arg Val Arg
    770                 775                 780
Ser Phe Ala Glu Arg Met Ala Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala
785                 790                 795                 800
Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys
                805                 810                 815
Glu Glu Arg Leu Gln Ala Thr Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu
            820                 825                 830
Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val
        835                 840                 845
Pro Glu Val Met Glu Gln Ala Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val
    850                 855                 860
Asp Tyr His Tyr Gly Ser Thr Trp Tyr Asp Ala Lys
865                 870                 875
<210> 79
<211> 581
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽序列
<400> 79
Met Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala Asp Arg Val Thr Glu Glu Met
1               5                   10                  15
Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr
            20                  25                  30
His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala Val Val Asn Glu Arg Gly Arg
        35                  40                  45
Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala
    50                  55                  60
Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg
65                  70                  75                  80
Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser
                85                  90                  95
Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val
            100                 105                 110
Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg
        115                 120                 125
Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp
    130                 135                 140
Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp
145                 150                 155                 160
Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp
                165                 170                 175
Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu
            180                 185                 190
Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met
        195                 200                 205
Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly Thr Val Glu Gln Arg Ile Tyr
    210                 215                 220
Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly
225                 230                 235                 240
Lys Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys
                245                 250                 255
Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val Leu Glu Lys Leu Ala Pro Tyr
            260                 265                 270
His Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu Met Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu
        275                 280                 285
Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu Lys Val Val Arg Pro Asp Thr
    290                 295                 300
Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg
305                 310                 315                 320
Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu
                325                 330                 335
Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp
            340                 345                 350
Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala
        355                 360                 365
His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu
    370                 375                 380
Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp
385                 390                 395                 400
Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly
                405                 410                 415
Ile Val Tyr Gly Ile Ser Lys Tyr Gly Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile
            420                 425                 430
Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile Glu Arg Tyr Phe Gln Ser Phe
        435                 440                 445
Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln
    450                 455                 460
Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu His Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp
465                 470                 475                 480
Ile Thr Ser Arg Asn Phe Arg Val Arg Ser Phe Ala Glu Arg Met Ala
                485                 490                 495
Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala
            500                 505                 510
Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys Glu Glu Arg Leu Gln Ala His
        515                 520                 525
Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu
    530                 535                 540
Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val Pro Glu Val Met Glu Gln Ala
545                 550                 555                 560
Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val Asp Tyr Arg Tyr Gly Ser Thr
                565                 570                 575
Trp Tyr Asp Ala Lys
            580
<210> 80
<211> 581
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽序列
<400> 80
Met Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala Asp Arg Val Thr Glu Glu Met
1               5                   10                  15
Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr
            20                  25                  30
His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala Val Val Asn Glu Arg Gly Arg
        35                  40                  45
Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala
    50                  55                  60
Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg
65                  70                  75                  80
Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser
                85                  90                  95
Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val
            100                 105                 110
Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg
        115                 120                 125
Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp
    130                 135                 140
Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp
145                 150                 155                 160
Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp
                165                 170                 175
Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu
            180                 185                 190
Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met
        195                 200                 205
Gln Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly Thr Val Glu Gln Arg Ile Tyr
    210                 215                 220
Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly
225                 230                 235                 240
Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys
                245                 250                 255
Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val Leu Glu Lys Leu Ala Pro Tyr
            260                 265                 270
His Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu Met Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu
        275                 280                 285
Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu Lys Val Val Arg Pro Asp Thr
    290                 295                 300
Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg
305                 310                 315                 320
Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu
                325                 330                 335
Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp
            340                 345                 350
Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala
        355                 360                 365
His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu
    370                 375                 380
Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp
385                 390                 395                 400
Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly
                405                 410                 415
Ile Val Tyr Gly Ile Ser Lys Tyr Gly Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile
            420                 425                 430
Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile Glu Arg Tyr Phe Gln Ser Phe
        435                 440                 445
Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln
    450                 455                 460
Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu His Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp
465                 470                 475                 480
Ile Thr Ser Arg Asn Phe Arg Val Arg Ser Phe Ala Glu Arg Met Ala
                485                 490                 495
Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala
            500                 505                 510
Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys Glu Glu Arg Leu Gln Ala His
        515                 520                 525
Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu
    530                 535                 540
Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val Pro Glu Val Met Glu Gln Ala
545                 550                 555                 560
Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val Asp Tyr Arg Tyr Gly Ser Thr
                565                 570                 575
Trp Tyr Asp Ala Lys
            580
<210> 81
<211> 581
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽序列
<400> 81
Met Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala Asp Arg Val Thr Glu Glu Met
1               5                   10                  15
Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr
            20                  25                  30
His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala Val Val Asn Glu Arg Gly Arg
        35                  40                  45
Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala
    50                  55                  60
Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg
65                  70                  75                  80
Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser
                85                  90                  95
Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val
            100                 105                 110
Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg
        115                 120                 125
Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp
    130                 135                 140
Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp
145                 150                 155                 160
Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp
                165                 170                 175
Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu
            180                 185                 190
Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met
        195                 200                 205
Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly Thr Val Glu Gln Arg Ile Tyr
    210                 215                 220
Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile Lys Ser Pro Lys Gln Leu Gly
225                 230                 235                 240
Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys
                245                 250                 255
Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val Leu Glu Lys Leu Ala Pro Tyr
            260                 265                 270
His Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu Met Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu
        275                 280                 285
Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu Lys Val Val Arg Pro Asp Thr
    290                 295                 300
Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg
305                 310                 315                 320
Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu
                325                 330                 335
Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp
            340                 345                 350
Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala
        355                 360                 365
His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu
    370                 375                 380
Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp
385                 390                 395                 400
Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly
                405                 410                 415
Ile Val Tyr Gly Ile Ser Lys Tyr Gly Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile
            420                 425                 430
Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile Glu Arg Tyr Phe Gln Ser Phe
        435                 440                 445
Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln
    450                 455                 460
Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu His Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp
465                 470                 475                 480
Ile Thr Ser Arg Asn Phe Arg Val Arg Ser Phe Ala Glu Arg Met Ala
                485                 490                 495
Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala
            500                 505                 510
Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys Glu Glu Arg Leu Gln Ala His
        515                 520                 525
Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu
    530                 535                 540
Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val Pro Glu Val Met Glu Gln Ala
545                 550                 555                 560
Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val Asp Tyr Arg Tyr Gly Ser Thr
                565                 570                 575
Trp Tyr Asp Ala Lys
            580
<210> 82
<211> 581
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽序列
<400> 82
Met Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala Asp Arg Val Thr Glu Glu Met
1               5                   10                  15
Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr
            20                  25                  30
His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala Val Val Asn Glu Arg Gly Arg
        35                  40                  45
Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala
    50                  55                  60
Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg
65                  70                  75                  80
Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser
                85                  90                  95
Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val
            100                 105                 110
Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg
        115                 120                 125
Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp
    130                 135                 140
Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp
145                 150                 155                 160
Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp
                165                 170                 175
Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu
            180                 185                 190
Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met
        195                 200                 205
Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly Thr Val Glu Gln Arg Ile Tyr
    210                 215                 220
Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile Arg Ser Pro Lys Gln Leu Gly
225                 230                 235                 240
Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys
                245                 250                 255
Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val Leu Glu Lys Leu Ala Pro Tyr
            260                 265                 270
His Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu Met Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu
        275                 280                 285
Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu Lys Val Val Arg Pro Asp Thr
    290                 295                 300
Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg
305                 310                 315                 320
Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu
                325                 330                 335
Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp
            340                 345                 350
Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala
        355                 360                 365
His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu
    370                 375                 380
Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp
385                 390                 395                 400
Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly
                405                 410                 415
Ile Val Tyr Gly Ile Ser Lys Tyr Gly Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile
            420                 425                 430
Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile Glu Arg Tyr Phe Gln Ser Phe
        435                 440                 445
Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln
    450                 455                 460
Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu His Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp
465                 470                 475                 480
Ile Thr Ser Arg Asn Phe Arg Val Arg Ser Phe Ala Glu Arg Met Ala
                485                 490                 495
Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala
            500                 505                 510
Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys Glu Glu Arg Leu Gln Ala His
        515                 520                 525
Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu
    530                 535                 540
Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val Pro Glu Val Met Glu Gln Ala
545                 550                 555                 560
Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val Asp Tyr Arg Tyr Gly Ser Thr
                565                 570                 575
Trp Tyr Asp Ala Lys
            580
<210> 83
<211> 581
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽序列
<400> 83
Met Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala Asp Arg Val Thr Glu Glu Met
1               5                   10                  15
Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr
            20                  25                  30
His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala Val Val Asn Glu Arg Gly Arg
        35                  40                  45
Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala
    50                  55                  60
Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg
65                  70                  75                  80
Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser
                85                  90                  95
Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val
            100                 105                 110
Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg
        115                 120                 125
Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp
    130                 135                 140
Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp
145                 150                 155                 160
Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp
                165                 170                 175
Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu
            180                 185                 190
Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met
        195                 200                 205
Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly Thr Val Glu Gln Arg Ile Tyr
    210                 215                 220
Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile Asn Ser Ile Lys Gln Leu Gly
225                 230                 235                 240
Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys
                245                 250                 255
Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val Leu Glu Lys Leu Ala Pro Tyr
            260                 265                 270
His Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu Met Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu
        275                 280                 285
Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu Lys Val Val Arg Pro Asp Thr
    290                 295                 300
Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg
305                 310                 315                 320
Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu
                325                 330                 335
Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp
            340                 345                 350
Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala
        355                 360                 365
His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu
    370                 375                 380
Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp
385                 390                 395                 400
Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly
                405                 410                 415
Ile Val Tyr Gly Ile Ser Lys Tyr Gly Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile
            420                 425                 430
Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile Glu Arg Tyr Phe Gln Ser Phe
        435                 440                 445
Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln
    450                 455                 460
Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu His Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp
465                 470                 475                 480
Ile Thr Ser Arg Asn Phe Arg Val Arg Ser Phe Ala Glu Arg Met Ala
                485                 490                 495
Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala
            500                 505                 510
Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys Glu Glu Arg Leu Gln Ala His
        515                 520                 525
Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu
    530                 535                 540
Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val Pro Glu Val Met Glu Gln Ala
545                 550                 555                 560
Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val Asp Tyr Arg Tyr Gly Ser Thr
                565                 570                 575
Trp Tyr Asp Ala Lys
            580
<210> 84
<211> 581
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽序列
<400> 84
Met Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala Asp Arg Val Thr Glu Glu Met
1               5                   10                  15
Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr
            20                  25                  30
His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala Val Val Asn Glu Arg Gly Arg
        35                  40                  45
Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala
    50                  55                  60
Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg
65                  70                  75                  80
Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser
                85                  90                  95
Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val
            100                 105                 110
Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg
        115                 120                 125
Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp
    130                 135                 140
Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp
145                 150                 155                 160
Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp
                165                 170                 175
Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu
            180                 185                 190
Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met
        195                 200                 205
Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly Thr Val Glu Gln Arg Ile Tyr
    210                 215                 220
Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile Asn Ser Arg Lys Gln Leu Gly
225                 230                 235                 240
Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys
                245                 250                 255
Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val Leu Glu Lys Leu Ala Pro Tyr
            260                 265                 270
His Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu Met Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu
        275                 280                 285
Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu Lys Val Val Arg Pro Asp Thr
    290                 295                 300
Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg
305                 310                 315                 320
Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu
                325                 330                 335
Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp
            340                 345                 350
Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala
        355                 360                 365
His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu
    370                 375                 380
Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp
385                 390                 395                 400
Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly
                405                 410                 415
Ile Val Tyr Gly Ile Ser Lys Tyr Gly Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile
            420                 425                 430
Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile Glu Arg Tyr Phe Gln Ser Phe
        435                 440                 445
Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln
    450                 455                 460
Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu His Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp
465                 470                 475                 480
Ile Thr Ser Arg Asn Phe Arg Val Arg Ser Phe Ala Glu Arg Met Ala
                485                 490                 495
Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala
            500                 505                 510
Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys Glu Glu Arg Leu Gln Ala His
        515                 520                 525
Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu
    530                 535                 540
Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val Pro Glu Val Met Glu Gln Ala
545                 550                 555                 560
Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val Asp Tyr Arg Tyr Gly Ser Thr
                565                 570                 575
Trp Tyr Asp Ala Lys
            580
<210> 85
<211> 581
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽序列
<400> 85
Met Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala Asp Arg Val Thr Glu Glu Met
1               5                   10                  15
Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr
            20                  25                  30
His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala Val Val Asn Glu Arg Gly Arg
        35                  40                  45
Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala
    50                  55                  60
Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg
65                  70                  75                  80
Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser
                85                  90                  95
Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val
            100                 105                 110
Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg
        115                 120                 125
Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp
    130                 135                 140
Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp
145                 150                 155                 160
Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp
                165                 170                 175
Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu
            180                 185                 190
Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met
        195                 200                 205
Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly Thr Val His Gln Arg Ile Tyr
    210                 215                 220
Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly
225                 230                 235                 240
Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys
                245                 250                 255
Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val Leu Glu Lys Leu Ala Pro Tyr
            260                 265                 270
His Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu Met Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu
        275                 280                 285
Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu Lys Val Val Arg Pro Asp Thr
    290                 295                 300
Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg
305                 310                 315                 320
Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu
                325                 330                 335
Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp
            340                 345                 350
Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala
        355                 360                 365
His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu
    370                 375                 380
Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp
385                 390                 395                 400
Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly
                405                 410                 415
Ile Val Tyr Gly Ile Ser Lys Tyr Gly Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile
            420                 425                 430
Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile Glu Arg Tyr Phe Gln Ser Phe
        435                 440                 445
Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln
    450                 455                 460
Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu His Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp
465                 470                 475                 480
Ile Thr Ser Arg Asn Phe Arg Val Arg Ser Phe Ala Glu Arg Met Ala
                485                 490                 495
Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala
            500                 505                 510
Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys Glu Glu Arg Leu Gln Ala His
        515                 520                 525
Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu
    530                 535                 540
Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val Pro Glu Val Met Glu Gln Ala
545                 550                 555                 560
Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val Asp Tyr Arg Tyr Gly Ser Thr
                565                 570                 575
Trp Tyr Asp Ala Lys
            580
<210> 86
<211> 581
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽序列
<400> 86
Met Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala Asp Arg Val Thr Glu Glu Met
1               5                   10                  15
Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr
            20                  25                  30
His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala Val Val Asn Glu Arg Gly Arg
        35                  40                  45
Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala
    50                  55                  60
Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg
65                  70                  75                  80
Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser
                85                  90                  95
Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val
            100                 105                 110
Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg
        115                 120                 125
Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp
    130                 135                 140
Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp
145                 150                 155                 160
Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp
                165                 170                 175
Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu
            180                 185                 190
Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met
        195                 200                 205
Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly Thr Val Lys Gln Arg Ile Tyr
    210                 215                 220
Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly
225                 230                 235                 240
Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys
                245                 250                 255
Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val Leu Glu Lys Leu Ala Pro Tyr
            260                 265                 270
His Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu Met Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu
        275                 280                 285
Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu Lys Val Val Arg Pro Asp Thr
    290                 295                 300
Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg
305                 310                 315                 320
Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu
                325                 330                 335
Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp
            340                 345                 350
Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala
        355                 360                 365
His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu
    370                 375                 380
Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp
385                 390                 395                 400
Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly
                405                 410                 415
Ile Val Tyr Gly Ile Ser Lys Tyr Gly Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile
            420                 425                 430
Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile Glu Arg Tyr Phe Gln Ser Phe
        435                 440                 445
Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln
    450                 455                 460
Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu His Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp
465                 470                 475                 480
Ile Thr Ser Arg Asn Phe Arg Val Arg Ser Phe Ala Glu Arg Met Ala
                485                 490                 495
Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala
            500                 505                 510
Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys Glu Glu Arg Leu Gln Ala His
        515                 520                 525
Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu
    530                 535                 540
Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val Pro Glu Val Met Glu Gln Ala
545                 550                 555                 560
Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val Asp Tyr Arg Tyr Gly Ser Thr
                565                 570                 575
Trp Tyr Asp Ala Lys
            580
<210> 87
<211> 581
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽序列
<400> 87
Met Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala Asp Arg Val Thr Glu Glu Met
1               5                   10                  15
Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr
            20                  25                  30
His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala Val Val Asn Glu Arg Gly Arg
        35                  40                  45
Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala
    50                  55                  60
Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg
65                  70                  75                  80
Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser
                85                  90                  95
Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val
            100                 105                 110
Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg
        115                 120                 125
Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp
    130                 135                 140
Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp
145                 150                 155                 160
Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp
                165                 170                 175
Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu
            180                 185                 190
Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met
        195                 200                 205
Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly Thr Val Thr Gln Arg Ile Tyr
    210                 215                 220
Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly
225                 230                 235                 240
Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys
                245                 250                 255
Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val Leu Glu Lys Leu Ala Pro Tyr
            260                 265                 270
His Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu Met Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu
        275                 280                 285
Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu Lys Val Val Arg Pro Asp Thr
    290                 295                 300
Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg
305                 310                 315                 320
Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu
                325                 330                 335
Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp
            340                 345                 350
Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala
        355                 360                 365
His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu
    370                 375                 380
Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp
385                 390                 395                 400
Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly
                405                 410                 415
Ile Val Tyr Gly Ile Ser Lys Tyr Gly Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile
            420                 425                 430
Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile Glu Arg Tyr Phe Gln Ser Phe
        435                 440                 445
Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln
    450                 455                 460
Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu His Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp
465                 470                 475                 480
Ile Thr Ser Arg Asn Phe Arg Val Arg Ser Phe Ala Glu Arg Met Ala
                485                 490                 495
Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala
            500                 505                 510
Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys Glu Glu Arg Leu Gln Ala His
        515                 520                 525
Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu
    530                 535                 540
Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val Pro Glu Val Met Glu Gln Ala
545                 550                 555                 560
Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val Asp Tyr Arg Tyr Gly Ser Thr
                565                 570                 575
Trp Tyr Asp Ala Lys
            580
<210> 88
<211> 581
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽序列
<400> 88
Met Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala Asp Arg Val Thr Glu Glu Met
1               5                   10                  15
Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr
            20                  25                  30
His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala Val Val Asn Glu Arg Gly Arg
        35                  40                  45
Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala
    50                  55                  60
Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg
65                  70                  75                  80
Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser
                85                  90                  95
Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val
            100                 105                 110
Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg
        115                 120                 125
Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp
    130                 135                 140
Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp
145                 150                 155                 160
Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp
                165                 170                 175
Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu
            180                 185                 190
Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met
        195                 200                 205
Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly Thr Val Glu Gln Arg Ile Tyr
    210                 215                 220
Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly
225                 230                 235                 240
Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys
                245                 250                 255
Thr Gly Tyr Lys Thr Ser Ala Asp Val Leu Glu Lys Leu Ala Pro Tyr
            260                 265                 270
His Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu Met Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu
        275                 280                 285
Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu Lys Val Val Arg Pro Asp Thr
    290                 295                 300
Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg
305                 310                 315                 320
Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu
                325                 330                 335
Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp
            340                 345                 350
Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala
        355                 360                 365
His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu
    370                 375                 380
Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp
385                 390                 395                 400
Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly
                405                 410                 415
Ile Val Tyr Gly Ile Ser Lys Tyr Gly Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile
            420                 425                 430
Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile Glu Arg Tyr Phe Gln Ser Phe
        435                 440                 445
Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln
    450                 455                 460
Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu His Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp
465                 470                 475                 480
Ile Thr Ser Arg Asn Phe Arg Val Arg Ser Phe Ala Glu Arg Met Ala
                485                 490                 495
Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala
            500                 505                 510
Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys Glu Glu Arg Leu Gln Ala His
        515                 520                 525
Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu
    530                 535                 540
Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val Pro Glu Val Met Glu Gln Ala
545                 550                 555                 560
Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val Asp Tyr Arg Tyr Gly Ser Thr
                565                 570                 575
Trp Tyr Asp Ala Lys
            580
<210> 89
<211> 581
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽序列
<400> 89
Met Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala Asp Arg Val Thr Glu Glu Met
1               5                   10                  15
Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr
            20                  25                  30
His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala Val Val Asn Glu Arg Gly Arg
        35                  40                  45
Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala
    50                  55                  60
Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg
65                  70                  75                  80
Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser
                85                  90                  95
Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val
            100                 105                 110
Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg
        115                 120                 125
Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp
    130                 135                 140
Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp
145                 150                 155                 160
Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp
                165                 170                 175
Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu
            180                 185                 190
Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met
        195                 200                 205
Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly Thr Val Glu Gln Arg Ile Tyr
    210                 215                 220
Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly
225                 230                 235                 240
Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys
                245                 250                 255
Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val Leu Glu Lys Leu Ala Pro Tyr
            260                 265                 270
His Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu Met Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu
        275                 280                 285
Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu Lys Val Val Arg Pro Asp Thr
    290                 295                 300
Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg
305                 310                 315                 320
Leu Ser Ser Arg Glu Pro Asn Leu Gln Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu
                325                 330                 335
Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp
            340                 345                 350
Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala
        355                 360                 365
His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu
    370                 375                 380
Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp
385                 390                 395                 400
Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly
                405                 410                 415
Ile Val Tyr Gly Ile Ser Lys Tyr Gly Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile
            420                 425                 430
Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile Glu Arg Tyr Phe Gln Ser Phe
        435                 440                 445
Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln
    450                 455                 460
Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu His Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp
465                 470                 475                 480
Ile Thr Ser Arg Asn Phe Arg Val Arg Ser Phe Ala Glu Arg Met Ala
                485                 490                 495
Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala
            500                 505                 510
Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys Glu Glu Arg Leu Gln Ala His
        515                 520                 525
Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu
    530                 535                 540
Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val Pro Glu Val Met Glu Gln Ala
545                 550                 555                 560
Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val Asp Tyr Arg Tyr Gly Ser Thr
                565                 570                 575
Trp Tyr Asp Ala Lys
            580
<210> 90
<211> 581
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽序列
<400> 90
Met Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala Asp Arg Val Thr Glu Glu Met
1               5                   10                  15
Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr
            20                  25                  30
His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala Val Val Asn Glu Arg Gly Arg
        35                  40                  45
Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala
    50                  55                  60
Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg
65                  70                  75                  80
Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser
                85                  90                  95
Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val
            100                 105                 110
Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg
        115                 120                 125
Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp
    130                 135                 140
Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp
145                 150                 155                 160
Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp
                165                 170                 175
Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu
            180                 185                 190
Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met
        195                 200                 205
Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly Thr Val Glu Gln Arg Ile Tyr
    210                 215                 220
Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly
225                 230                 235                 240
Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys
                245                 250                 255
Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val Leu Met Lys Leu Ala Pro Tyr
            260                 265                 270
His Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu Met Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu
        275                 280                 285
Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu Lys Val Val Arg Pro Asp Thr
    290                 295                 300
Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg
305                 310                 315                 320
Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu
                325                 330                 335
Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp
            340                 345                 350
Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala
        355                 360                 365
His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu
    370                 375                 380
Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp
385                 390                 395                 400
Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly
                405                 410                 415
Ile Val Tyr Gly Ile Ser Lys Tyr Gly Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile
            420                 425                 430
Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile Glu Arg Tyr Phe Gln Ser Phe
        435                 440                 445
Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln
    450                 455                 460
Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu His Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp
465                 470                 475                 480
Ile Thr Ser Arg Asn Phe Arg Val Arg Ser Phe Ala Glu Arg Met Ala
                485                 490                 495
Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala
            500                 505                 510
Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys Glu Glu Arg Leu Gln Ala His
        515                 520                 525
Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu
    530                 535                 540
Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val Pro Glu Val Met Glu Gln Ala
545                 550                 555                 560
Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val Asp Tyr Arg Tyr Gly Ser Thr
                565                 570                 575
Trp Tyr Asp Ala Lys
            580
<210> 91
<211> 581
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽序列
<400> 91
Met Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala Asp Arg Val Thr Glu Glu Met
1               5                   10                  15
Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr
            20                  25                  30
His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala Val Val Asn Glu Arg Gly Arg
        35                  40                  45
Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala
    50                  55                  60
Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg
65                  70                  75                  80
Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser
                85                  90                  95
Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val
            100                 105                 110
Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg
        115                 120                 125
Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp
    130                 135                 140
Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp
145                 150                 155                 160
Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp
                165                 170                 175
Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu
            180                 185                 190
Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met
        195                 200                 205
Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly Thr Val Glu Gln Arg Ile Tyr
    210                 215                 220
Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly
225                 230                 235                 240
Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys
                245                 250                 255
Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val Leu Lys Lys Leu Ala Pro Tyr
            260                 265                 270
His Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu Met Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu
        275                 280                 285
Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu Lys Val Val Arg Pro Asp Thr
    290                 295                 300
Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg
305                 310                 315                 320
Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu
                325                 330                 335
Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp
            340                 345                 350
Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala
        355                 360                 365
His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu
    370                 375                 380
Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp
385                 390                 395                 400
Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly
                405                 410                 415
Ile Val Tyr Gly Ile Ser Lys Tyr Gly Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile
            420                 425                 430
Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile Glu Arg Tyr Phe Gln Ser Phe
        435                 440                 445
Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln
    450                 455                 460
Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu His Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp
465                 470                 475                 480
Ile Thr Ser Arg Asn Phe Arg Val Arg Ser Phe Ala Glu Arg Met Ala
                485                 490                 495
Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala
            500                 505                 510
Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys Glu Glu Arg Leu Gln Ala His
        515                 520                 525
Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu
    530                 535                 540
Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val Pro Glu Val Met Glu Gln Ala
545                 550                 555                 560
Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val Asp Tyr Arg Tyr Gly Ser Thr
                565                 570                 575
Trp Tyr Asp Ala Lys
            580
<210> 92
<211> 581
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽序列
<400> 92
Met Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala Asp Arg Val Thr Glu Glu Met
1               5                   10                  15
Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr
            20                  25                  30
His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala Val Val Asn Glu Arg Gly Arg
        35                  40                  45
Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala
    50                  55                  60
Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg
65                  70                  75                  80
Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser
                85                  90                  95
Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val
            100                 105                 110
Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg
        115                 120                 125
Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp
    130                 135                 140
Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp
145                 150                 155                 160
Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp
                165                 170                 175
Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu
            180                 185                 190
Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met
        195                 200                 205
Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly Thr Val Glu Gln Arg Ile Tyr
    210                 215                 220
Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly
225                 230                 235                 240
Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys
                245                 250                 255
Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val Leu Arg Lys Leu Ala Pro Tyr
            260                 265                 270
His Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu Met Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu
        275                 280                 285
Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu Lys Val Val Arg Pro Asp Thr
    290                 295                 300
Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg
305                 310                 315                 320
Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu
                325                 330                 335
Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp
            340                 345                 350
Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala
        355                 360                 365
His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu
    370                 375                 380
Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp
385                 390                 395                 400
Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly
                405                 410                 415
Ile Val Tyr Gly Ile Ser Lys Tyr Gly Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile
            420                 425                 430
Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile Glu Arg Tyr Phe Gln Ser Phe
        435                 440                 445
Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln
    450                 455                 460
Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu His Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp
465                 470                 475                 480
Ile Thr Ser Arg Asn Phe Arg Val Arg Ser Phe Ala Glu Arg Met Ala
                485                 490                 495
Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala
            500                 505                 510
Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys Glu Glu Arg Leu Gln Ala His
        515                 520                 525
Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu
    530                 535                 540
Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val Pro Glu Val Met Glu Gln Ala
545                 550                 555                 560
Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val Asp Tyr Arg Tyr Gly Ser Thr
                565                 570                 575
Trp Tyr Asp Ala Lys
            580
<210> 93
<211> 581
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽序列
<400> 93
Met Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala Asp Arg Val Thr Glu Glu Met
1               5                   10                  15
Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr
            20                  25                  30
His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala Val Val Asn Glu Arg Gly Arg
        35                  40                  45
Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala
    50                  55                  60
Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg
65                  70                  75                  80
Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser
                85                  90                  95
Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val
            100                 105                 110
Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg
        115                 120                 125
Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp
    130                 135                 140
Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp
145                 150                 155                 160
Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp
                165                 170                 175
Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu
            180                 185                 190
Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met
        195                 200                 205
Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly Thr Val Glu Gln Arg Ile Tyr
    210                 215                 220
Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly
225                 230                 235                 240
Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys
                245                 250                 255
Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val Leu Glu Lys Leu Ala Pro Tyr
            260                 265                 270
His Glu Ile Val Thr Asn Ile Leu Met Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu
        275                 280                 285
Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu Lys Val Val Arg Pro Asp Thr
    290                 295                 300
Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg
305                 310                 315                 320
Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu
                325                 330                 335
Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp
            340                 345                 350
Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala
        355                 360                 365
His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu
    370                 375                 380
Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp
385                 390                 395                 400
Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly
                405                 410                 415
Ile Val Tyr Gly Ile Ser Lys Tyr Gly Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile
            420                 425                 430
Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile Glu Arg Tyr Phe Gln Ser Phe
        435                 440                 445
Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln
    450                 455                 460
Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu His Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp
465                 470                 475                 480
Ile Thr Ser Arg Asn Phe Arg Val Arg Ser Phe Ala Glu Arg Met Ala
                485                 490                 495
Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala
            500                 505                 510
Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys Glu Glu Arg Leu Gln Ala His
        515                 520                 525
Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu
    530                 535                 540
Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val Pro Glu Val Met Glu Gln Ala
545                 550                 555                 560
Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val Asp Tyr Arg Tyr Gly Ser Thr
                565                 570                 575
Trp Tyr Asp Ala Lys
            580
<210> 94
<211> 581
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽序列
<400> 94
Met Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala Asp Arg Val Thr Glu Glu Met
1               5                   10                  15
Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr
            20                  25                  30
His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala Val Val Asn Glu Arg Gly Arg
        35                  40                  45
Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala
    50                  55                  60
Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg
65                  70                  75                  80
Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser
                85                  90                  95
Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val
            100                 105                 110
Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg
        115                 120                 125
Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp
    130                 135                 140
Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp
145                 150                 155                 160
Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp
                165                 170                 175
Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu
            180                 185                 190
Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met
        195                 200                 205
Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly Thr Val Glu Gln Arg Ile Tyr
    210                 215                 220
Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly
225                 230                 235                 240
Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys
                245                 250                 255
Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val Leu Glu Lys Leu Ala Pro Tyr
            260                 265                 270
His Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu Met Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu
        275                 280                 285
Gln Ser Thr Tyr Ile Lys Gly Leu Leu Lys Val Val Arg Pro Asp Thr
    290                 295                 300
Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg
305                 310                 315                 320
Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu
                325                 330                 335
Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp
            340                 345                 350
Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala
        355                 360                 365
His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu
    370                 375                 380
Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp
385                 390                 395                 400
Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly
                405                 410                 415
Ile Val Tyr Gly Ile Ser Lys Tyr Gly Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile
            420                 425                 430
Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile Glu Arg Tyr Phe Gln Ser Phe
        435                 440                 445
Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln
    450                 455                 460
Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu His Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp
465                 470                 475                 480
Ile Thr Ser Arg Asn Phe Arg Val Arg Ser Phe Ala Glu Arg Met Ala
                485                 490                 495
Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala
            500                 505                 510
Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys Glu Glu Arg Leu Gln Ala His
        515                 520                 525
Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu
    530                 535                 540
Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val Pro Glu Val Met Glu Gln Ala
545                 550                 555                 560
Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val Asp Tyr Arg Tyr Gly Ser Thr
                565                 570                 575
Trp Tyr Asp Ala Lys
            580
<210> 95
<211> 581
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽序列
<400> 95
Met Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala Asp Arg Val Thr Glu Glu Met
1               5                   10                  15
Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr
            20                  25                  30
His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala Val Val Asn Glu Arg Gly Arg
        35                  40                  45
Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala
    50                  55                  60
Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg
65                  70                  75                  80
Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser
                85                  90                  95
Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val
            100                 105                 110
Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg
        115                 120                 125
Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp
    130                 135                 140
Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp
145                 150                 155                 160
Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp
                165                 170                 175
Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu
            180                 185                 190
Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met
        195                 200                 205
Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly Thr Val Glu Gln Arg Ile Tyr
    210                 215                 220
Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly
225                 230                 235                 240
Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys
                245                 250                 255
Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val Leu Glu Lys Leu Ala Pro Tyr
            260                 265                 270
His Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu Met Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu
        275                 280                 285
Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu Lys Val Val Arg Pro Asp Thr
    290                 295                 300
Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg
305                 310                 315                 320
Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu
                325                 330                 335
Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp
            340                 345                 350
Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala
        355                 360                 365
His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu
    370                 375                 380
Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp
385                 390                 395                 400
Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly
                405                 410                 415
Ile Val Tyr Gly Ile Ser Lys Tyr Gly Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile
            420                 425                 430
Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile Glu Arg Tyr Phe Gln Ser Phe
        435                 440                 445
Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Arg Asn Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln
    450                 455                 460
Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu His Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp
465                 470                 475                 480
Ile Thr Ser Arg Asn Phe Arg Val Arg Ser Phe Ala Glu Arg Met Ala
                485                 490                 495
Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala
            500                 505                 510
Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys Glu Glu Arg Leu Gln Ala His
        515                 520                 525
Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu
    530                 535                 540
Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val Pro Glu Val Met Glu Gln Ala
545                 550                 555                 560
Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val Asp Tyr Arg Tyr Gly Ser Thr
                565                 570                 575
Trp Tyr Asp Ala Lys
            580
<210> 96
<211> 581
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽序列
<400> 96
Met Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala Asp Arg Val Thr Glu Glu Met
1               5                   10                  15
Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr
            20                  25                  30
His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala Val Val Asn Glu Arg Gly Arg
        35                  40                  45
Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala
    50                  55                  60
Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg
65                  70                  75                  80
Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser
                85                  90                  95
Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val
            100                 105                 110
Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg
        115                 120                 125
Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp
    130                 135                 140
Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp
145                 150                 155                 160
Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp
                165                 170                 175
Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu
            180                 185                 190
Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met
        195                 200                 205
Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly Thr Val Glu Gln Arg Ile Tyr
    210                 215                 220
Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly
225                 230                 235                 240
Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys
                245                 250                 255
Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val Leu Glu Lys Leu Ala Pro Tyr
            260                 265                 270
His Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu Met Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu
        275                 280                 285
Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu Lys Val Val Arg Pro Asp Thr
    290                 295                 300
Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg
305                 310                 315                 320
Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu
                325                 330                 335
Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp
            340                 345                 350
Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala
        355                 360                 365
His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu
    370                 375                 380
Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp
385                 390                 395                 400
Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly
                405                 410                 415
Ile Val Tyr Gly Ile Ser Lys Tyr Gly Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile
            420                 425                 430
Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile Glu Arg Tyr Phe Gln Ser Phe
        435                 440                 445
Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln
    450                 455                 460
Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu His Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp
465                 470                 475                 480
Ile Thr Ser Arg Asn Phe Arg Val Arg Ser Phe Ala Gly Arg Met Ala
                485                 490                 495
Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala
            500                 505                 510
Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys Glu Glu Arg Leu Gln Ala His
        515                 520                 525
Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu
    530                 535                 540
Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val Pro Glu Val Met Glu Gln Ala
545                 550                 555                 560
Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val Asp Tyr Arg Tyr Gly Ser Thr
                565                 570                 575
Trp Tyr Asp Ala Lys
            580
<210> 97
<211> 581
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽序列
<400> 97
Met Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala Asp Arg Val Thr Glu Glu Met
1               5                   10                  15
Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr
            20                  25                  30
His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala Val Val Asn Glu Arg Gly Arg
        35                  40                  45
Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala
    50                  55                  60
Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg
65                  70                  75                  80
Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser
                85                  90                  95
Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val
            100                 105                 110
Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg
        115                 120                 125
Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp
    130                 135                 140
Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp
145                 150                 155                 160
Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp
                165                 170                 175
Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu
            180                 185                 190
Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met
        195                 200                 205
Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly Thr Val Glu Gln Arg Ile Tyr
    210                 215                 220
Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly
225                 230                 235                 240
Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys
                245                 250                 255
Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val Leu Glu Lys Leu Ala Pro Tyr
            260                 265                 270
His Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu Met Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu
        275                 280                 285
Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu Lys Val Val Arg Pro Asp Thr
    290                 295                 300
Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg
305                 310                 315                 320
Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu
                325                 330                 335
Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp
            340                 345                 350
Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala
        355                 360                 365
His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu
    370                 375                 380
Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp
385                 390                 395                 400
Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly
                405                 410                 415
Ile Val Tyr Gly Ile Ser Lys Tyr Gly Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile
            420                 425                 430
Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile Glu Arg Tyr Phe Gln Ser Phe
        435                 440                 445
Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln
    450                 455                 460
Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu His Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp
465                 470                 475                 480
Ile Thr Ser Arg Asn Phe Arg Val Arg Ser Phe Ala Arg Arg Met Ala
                485                 490                 495
Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala
            500                 505                 510
Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys Glu Glu Arg Leu Gln Ala His
        515                 520                 525
Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu
    530                 535                 540
Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val Pro Glu Val Met Glu Gln Ala
545                 550                 555                 560
Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val Asp Tyr Arg Tyr Gly Ser Thr
                565                 570                 575
Trp Tyr Asp Ala Lys
            580
<210> 98
<211> 581
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽序列
<400> 98
Met Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala Asp Arg Val Thr Glu Glu Met
1               5                   10                  15
Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr
            20                  25                  30
His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala Val Val Asn Glu Arg Gly Arg
        35                  40                  45
Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala
    50                  55                  60
Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg
65                  70                  75                  80
Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser
                85                  90                  95
Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val
            100                 105                 110
Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg
        115                 120                 125
Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp
    130                 135                 140
Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp
145                 150                 155                 160
Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp
                165                 170                 175
Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu
            180                 185                 190
Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met
        195                 200                 205
Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly Thr Val Glu Gln Arg Ile Tyr
    210                 215                 220
Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly
225                 230                 235                 240
Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys
                245                 250                 255
Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val Leu Glu Lys Leu Ala Pro Tyr
            260                 265                 270
His Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu Met Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu
        275                 280                 285
Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu Lys Val Val Arg Pro Asp Thr
    290                 295                 300
Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg
305                 310                 315                 320
Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu
                325                 330                 335
Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp
            340                 345                 350
Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala
        355                 360                 365
His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu
    370                 375                 380
Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp
385                 390                 395                 400
Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly
                405                 410                 415
Ile Val Tyr Gly Ile Ser Lys Tyr Gly Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile
            420                 425                 430
Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile Arg Arg Tyr Phe Gln Ser Phe
        435                 440                 445
Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln
    450                 455                 460
Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu His Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp
465                 470                 475                 480
Ile Thr Ser Arg Asn Phe Arg Val Arg Ser Phe Ala Glu Arg Met Ala
                485                 490                 495
Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala
            500                 505                 510
Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys Glu Glu Arg Leu Gln Ala His
        515                 520                 525
Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu
    530                 535                 540
Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val Pro Glu Val Met Glu Gln Ala
545                 550                 555                 560
Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val Asp Tyr Arg Tyr Gly Ser Thr
                565                 570                 575
Trp Tyr Asp Ala Lys
            580
<210> 99
<211> 581
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽序列
<400> 99
Met Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala Asp Arg Val Thr Glu Glu Met
1               5                   10                  15
Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr
            20                  25                  30
His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala Val Val Asn Glu Arg Gly Arg
        35                  40                  45
Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala
    50                  55                  60
Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg
65                  70                  75                  80
Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser
                85                  90                  95
Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val
            100                 105                 110
Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg
        115                 120                 125
Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp
    130                 135                 140
Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp
145                 150                 155                 160
Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp
                165                 170                 175
Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu
            180                 185                 190
Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met
        195                 200                 205
Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly Thr Val Glu Gln Arg Ile Tyr
    210                 215                 220
Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly
225                 230                 235                 240
Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys
                245                 250                 255
Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val Leu Glu Lys Leu Ala Pro Tyr
            260                 265                 270
His Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu Met Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu
        275                 280                 285
Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu Lys Val Val Arg Pro Asp Thr
    290                 295                 300
Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg
305                 310                 315                 320
Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu
                325                 330                 335
Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp
            340                 345                 350
Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala
        355                 360                 365
His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu
    370                 375                 380
Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp
385                 390                 395                 400
Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly
                405                 410                 415
Ile Val Tyr Gly Ile Ser Lys Tyr Gly Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile
            420                 425                 430
Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile Tyr Arg Tyr Phe Gln Ser Phe
        435                 440                 445
Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln
    450                 455                 460
Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu His Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp
465                 470                 475                 480
Ile Thr Ser Arg Asn Phe Arg Val Arg Ser Phe Ala Glu Arg Met Ala
                485                 490                 495
Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala
            500                 505                 510
Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys Glu Glu Arg Leu Gln Ala His
        515                 520                 525
Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu
    530                 535                 540
Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val Pro Glu Val Met Glu Gln Ala
545                 550                 555                 560
Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val Asp Tyr Arg Tyr Gly Ser Thr
                565                 570                 575
Trp Tyr Asp Ala Lys
            580
<210> 100
<211> 581
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽序列
<400> 100
Met Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala Asp Arg Val Thr Glu Glu Met
1               5                   10                  15
Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr
            20                  25                  30
His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala Val Val Asn Glu Arg Gly Arg
        35                  40                  45
Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala
    50                  55                  60
Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg
65                  70                  75                  80
Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser
                85                  90                  95
Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val
            100                 105                 110
Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg
        115                 120                 125
Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp
    130                 135                 140
Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp
145                 150                 155                 160
Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp
                165                 170                 175
Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu
            180                 185                 190
Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met
        195                 200                 205
Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly Thr Val Glu Gln Arg Ile Tyr
    210                 215                 220
Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly
225                 230                 235                 240
Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys
                245                 250                 255
Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val Leu Glu Lys Leu Ala Pro Tyr
            260                 265                 270
His Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu Met Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu
        275                 280                 285
Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu Lys Val Val Arg Pro Asp Thr
    290                 295                 300
Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg
305                 310                 315                 320
Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu
                325                 330                 335
Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp
            340                 345                 350
Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala
        355                 360                 365
His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu
    370                 375                 380
Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp
385                 390                 395                 400
Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly
                405                 410                 415
Ile Val Tyr Gly Ile Ser Lys Tyr Gly Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile
            420                 425                 430
Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile Glu Arg Tyr Phe Gln Ser Phe
        435                 440                 445
Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln
    450                 455                 460
Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu His Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp
465                 470                 475                 480
Ile Thr Ser Arg Asn Phe Arg Val Arg Ser Phe Ala Glu Arg Cys Ala
                485                 490                 495
Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala
            500                 505                 510
Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys Glu Glu Arg Leu Gln Ala His
        515                 520                 525
Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu
    530                 535                 540
Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val Pro Glu Val Met Glu Gln Ala
545                 550                 555                 560
Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val Asp Tyr Arg Tyr Gly Ser Thr
                565                 570                 575
Trp Tyr Asp Ala Lys
            580
<210> 101
<211> 581
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽序列
<400> 101
Met Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala Asp Arg Val Thr Glu Glu Met
1               5                   10                  15
Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr
            20                  25                  30
His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala Val Val Asn Glu Arg Gly Arg
        35                  40                  45
Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala
    50                  55                  60
Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg
65                  70                  75                  80
Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser
                85                  90                  95
Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val
            100                 105                 110
Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg
        115                 120                 125
Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp
    130                 135                 140
Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp
145                 150                 155                 160
Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp
                165                 170                 175
Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu
            180                 185                 190
Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met
        195                 200                 205
Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly Thr Val Glu Gln Arg Ile Tyr
    210                 215                 220
Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly
225                 230                 235                 240
Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys
                245                 250                 255
Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val Leu Glu Lys Leu Ala Pro Tyr
            260                 265                 270
His Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu Met Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu
        275                 280                 285
Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu Lys Val Val Arg Pro Asp Thr
    290                 295                 300
Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg
305                 310                 315                 320
Leu Ser Ser Thr Arg Pro Asn Leu Gln Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu
                325                 330                 335
Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp
            340                 345                 350
Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala
        355                 360                 365
His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu
    370                 375                 380
Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp
385                 390                 395                 400
Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly
                405                 410                 415
Ile Val Tyr Gly Ile Ser Lys Tyr Gly Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile
            420                 425                 430
Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile Glu Arg Tyr Phe Gln Ser Phe
        435                 440                 445
Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln
    450                 455                 460
Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu His Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp
465                 470                 475                 480
Ile Thr Ser Arg Asn Phe Arg Val Arg Ser Phe Ala Glu Arg Met Ala
                485                 490                 495
Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala
            500                 505                 510
Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys Glu Glu Arg Leu Gln Ala His
        515                 520                 525
Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu
    530                 535                 540
Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val Pro Glu Val Met Glu Gln Ala
545                 550                 555                 560
Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val Asp Tyr Arg Tyr Gly Ser Thr
                565                 570                 575
Trp Tyr Asp Ala Lys
            580
<210> 102
<211> 581
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽序列
<400> 102
Met Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala Asp Arg Val Thr Glu Glu Met
1               5                   10                  15
Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr
            20                  25                  30
His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala Val Val Asn Glu Arg Gly Arg
        35                  40                  45
Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala
    50                  55                  60
Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg
65                  70                  75                  80
Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser
                85                  90                  95
Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val
            100                 105                 110
Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg
        115                 120                 125
Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp
    130                 135                 140
Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp
145                 150                 155                 160
Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp
                165                 170                 175
Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu
            180                 185                 190
Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met
        195                 200                 205
Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly Thr Val Glu Gln Arg Ile Tyr
    210                 215                 220
Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly
225                 230                 235                 240
Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys
                245                 250                 255
Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val Leu Glu Lys Leu Ala Pro Tyr
            260                 265                 270
His Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu Met Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu
        275                 280                 285
Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu Lys Val Val Arg Pro Asp Thr
    290                 295                 300
Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg
305                 310                 315                 320
Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu
                325                 330                 335
Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp
            340                 345                 350
Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala
        355                 360                 365
His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu
    370                 375                 380
Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp
385                 390                 395                 400
Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly
                405                 410                 415
Ile Val Tyr Gly Ile Ser Lys Tyr Gly Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile
            420                 425                 430
Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile Glu Arg Tyr Phe Gln Ser Phe
        435                 440                 445
Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln
    450                 455                 460
Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu His Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp
465                 470                 475                 480
Ile Thr Ser Arg Asn Phe Arg Val Arg Ser Phe Lys Glu Arg Met Ala
                485                 490                 495
Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala
            500                 505                 510
Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys Glu Glu Arg Leu Gln Ala His
        515                 520                 525
Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu
    530                 535                 540
Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val Pro Glu Val Met Glu Gln Ala
545                 550                 555                 560
Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val Asp Tyr Arg Tyr Gly Ser Thr
                565                 570                 575
Trp Tyr Asp Ala Lys
            580
<210> 103
<211> 581
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽序列
<400> 103
Met Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala Asp Arg Val Thr Glu Glu Met
1               5                   10                  15
Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr
            20                  25                  30
His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala Val Val Asn Glu Arg Gly Arg
        35                  40                  45
Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala
    50                  55                  60
Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg
65                  70                  75                  80
Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser
                85                  90                  95
Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val
            100                 105                 110
Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg
        115                 120                 125
Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp
    130                 135                 140
Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp
145                 150                 155                 160
Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp
                165                 170                 175
Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu
            180                 185                 190
Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met
        195                 200                 205
Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly Thr Val Glu Gln Arg Ile Tyr
    210                 215                 220
Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly
225                 230                 235                 240
Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys
                245                 250                 255
Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val Leu Glu Lys Leu Ala Pro Tyr
            260                 265                 270
His Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu Met Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu
        275                 280                 285
Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu Lys Val Val Arg Pro Asp Thr
    290                 295                 300
Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg
305                 310                 315                 320
Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu
                325                 330                 335
Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp
            340                 345                 350
Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala
        355                 360                 365
His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu
    370                 375                 380
Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp
385                 390                 395                 400
Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly
                405                 410                 415
Ile Val Tyr Gly Ile Ser Lys Tyr Gly Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile
            420                 425                 430
Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile Glu Arg Tyr Phe Gln Ser Phe
        435                 440                 445
Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln
    450                 455                 460
Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu His Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Leu
465                 470                 475                 480
Ile Thr Ser Arg Asn Phe Arg Val Arg Ser Phe Ala Glu Arg Met Ala
                485                 490                 495
Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala
            500                 505                 510
Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys Glu Glu Arg Leu Gln Ala His
        515                 520                 525
Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu
    530                 535                 540
Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val Pro Glu Val Met Glu Gln Ala
545                 550                 555                 560
Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val Asp Tyr Arg Tyr Gly Ser Thr
                565                 570                 575
Trp Tyr Asp Ala Lys
            580
<210> 104
<211> 581
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽序列
<400> 104
Met Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala Asp Arg Val Thr Glu Glu Met
1               5                   10                  15
Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr
            20                  25                  30
His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala Val Val Asn Glu Arg Gly Arg
        35                  40                  45
Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala
    50                  55                  60
Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg
65                  70                  75                  80
Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser
                85                  90                  95
Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val
            100                 105                 110
Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg
        115                 120                 125
Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp
    130                 135                 140
Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp
145                 150                 155                 160
Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp
                165                 170                 175
Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu
            180                 185                 190
Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met
        195                 200                 205
Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly Thr Val Glu Gln Arg Ile Tyr
    210                 215                 220
Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly
225                 230                 235                 240
Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys
                245                 250                 255
Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val Leu Glu Lys Leu Ala Pro Tyr
            260                 265                 270
His Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu Met Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu
        275                 280                 285
Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu Lys Val Val Arg Pro Asp Thr
    290                 295                 300
Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg
305                 310                 315                 320
Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu
                325                 330                 335
Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp
            340                 345                 350
Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala
        355                 360                 365
His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu
    370                 375                 380
Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp Ile Phe Gln Val Ser Glu Arg
385                 390                 395                 400
Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly
                405                 410                 415
Ile Val Tyr Gly Ile Ser Lys Tyr Gly Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile
            420                 425                 430
Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile Glu Arg Tyr Phe Gln Ser Phe
        435                 440                 445
Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln
    450                 455                 460
Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu His Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp
465                 470                 475                 480
Ile Thr Ser Arg Asn Phe Arg Val Arg Ser Phe Ala Glu Arg Met Ala
                485                 490                 495
Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala
            500                 505                 510
Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys Glu Glu Arg Leu Gln Ala His
        515                 520                 525
Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu
    530                 535                 540
Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val Pro Glu Val Met Glu Gln Ala
545                 550                 555                 560
Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val Asp Tyr Arg Tyr Gly Ser Thr
                565                 570                 575
Trp Tyr Asp Ala Lys
            580
<210> 105
<211> 581
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽序列
<400> 105
Met Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala Asp Arg Val Thr Glu Glu Met
1               5                   10                  15
Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr
            20                  25                  30
His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala Val Val Asn Glu Arg Gly Arg
        35                  40                  45
Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala
    50                  55                  60
Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg
65                  70                  75                  80
Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser
                85                  90                  95
Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val
            100                 105                 110
Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg
        115                 120                 125
Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp
    130                 135                 140
Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp
145                 150                 155                 160
Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp
                165                 170                 175
Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu
            180                 185                 190
Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met
        195                 200                 205
Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly Thr Val Glu Gln Arg Ile Tyr
    210                 215                 220
Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly
225                 230                 235                 240
Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys
                245                 250                 255
Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val Leu Glu Lys Leu Ala Pro Tyr
            260                 265                 270
His Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu Met Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu
        275                 280                 285
Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu Lys Val Val Arg Pro Asp Thr
    290                 295                 300
Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg
305                 310                 315                 320
Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu
                325                 330                 335
Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Tyr Phe Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp
            340                 345                 350
Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala
        355                 360                 365
His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu
    370                 375                 380
Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp
385                 390                 395                 400
Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly
                405                 410                 415
Ile Val Tyr Gly Ile Ser Lys Tyr Gly Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile
            420                 425                 430
Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile Glu Arg Tyr Phe Gln Ser Phe
        435                 440                 445
Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln
    450                 455                 460
Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu His Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp
465                 470                 475                 480
Ile Thr Ser Arg Asn Phe Arg Val Arg Ser Phe Ala Glu Arg Met Ala
                485                 490                 495
Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala
            500                 505                 510
Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys Glu Glu Arg Leu Gln Ala His
        515                 520                 525
Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu
    530                 535                 540
Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val Pro Glu Val Met Glu Gln Ala
545                 550                 555                 560
Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val Asp Tyr Arg Tyr Gly Ser Thr
                565                 570                 575
Trp Tyr Asp Ala Lys
            580
<210> 106
<211> 581
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽序列
<400> 106
Met Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala Asp Arg Val Thr Glu Glu Met
1               5                   10                  15
Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr
            20                  25                  30
His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala Val Val Asn Glu Arg Gly Arg
        35                  40                  45
Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala
    50                  55                  60
Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg
65                  70                  75                  80
Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser
                85                  90                  95
Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val
            100                 105                 110
Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg
        115                 120                 125
Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp
    130                 135                 140
Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp
145                 150                 155                 160
Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp
                165                 170                 175
Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu
            180                 185                 190
Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met
        195                 200                 205
Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly Thr Val Glu Gln Arg Ile Tyr
    210                 215                 220
Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly
225                 230                 235                 240
Val Ile Leu Phe Arg Lys Leu Gln Leu Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys
                245                 250                 255
Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val Leu Glu Lys Leu Ala Pro Tyr
            260                 265                 270
His Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu Met Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu
        275                 280                 285
Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu Lys Val Val Arg Pro Asp Thr
    290                 295                 300
Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg
305                 310                 315                 320
Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu
                325                 330                 335
Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp
            340                 345                 350
Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala
        355                 360                 365
His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu
    370                 375                 380
Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp
385                 390                 395                 400
Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly
                405                 410                 415
Ile Val Tyr Gly Ile Ser Lys Tyr Gly Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile
            420                 425                 430
Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile Glu Arg Tyr Phe Gln Ser Phe
        435                 440                 445
Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln
    450                 455                 460
Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu His Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp
465                 470                 475                 480
Ile Thr Ser Arg Asn Phe Arg Val Arg Ser Phe Ala Glu Arg Met Ala
                485                 490                 495
Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala
            500                 505                 510
Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys Glu Glu Arg Leu Gln Ala His
        515                 520                 525
Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu
    530                 535                 540
Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val Pro Glu Val Met Glu Gln Ala
545                 550                 555                 560
Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val Asp Tyr Arg Tyr Gly Ser Thr
                565                 570                 575
Trp Tyr Asp Ala Lys
            580
<210> 107
<211> 581
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽序列
<400> 107
Met Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala Asp Arg Val Thr Glu Glu Met
1               5                   10                  15
Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val Glu Val Val Glu Lys Asn Tyr
            20                  25                  30
His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala Val Val Asn Glu Arg Gly Arg
        35                  40                  45
Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala
    50                  55                  60
Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg
65                  70                  75                  80
Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser
                85                  90                  95
Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val
            100                 105                 110
Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg
        115                 120                 125
Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp
    130                 135                 140
Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp
145                 150                 155                 160
Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp
                165                 170                 175
Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu
            180                 185                 190
Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met
        195                 200                 205
Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly Thr Val Glu Gln Arg Ile Tyr
    210                 215                 220
Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly
225                 230                 235                 240
Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys
                245                 250                 255
Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val Leu Glu Lys Leu Ala Pro Tyr
            260                 265                 270
His Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu Met Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu
        275                 280                 285
Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu Lys Val Val Arg Pro Asp Thr
    290                 295                 300
Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg
305                 310                 315                 320
Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu
                325                 330                 335
Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp
            340                 345                 350
Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala
        355                 360                 365
His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu
    370                 375                 380
Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp
385                 390                 395                 400
Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly
                405                 410                 415
Ile Val Tyr Gly Ile Ser Lys Tyr Gly Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile
            420                 425                 430
Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile Glu Arg Tyr Phe Gln Ser Phe
        435                 440                 445
Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln
    450                 455                 460
Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu His Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp
465                 470                 475                 480
Ile Thr Ser Arg Asn Phe Arg Val Arg Ser Phe Ala Glu Arg Met Ala
                485                 490                 495
Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala
            500                 505                 510
Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys Glu Glu Arg Leu Gln Ala His
        515                 520                 525
Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu
    530                 535                 540
Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val Pro Glu Val Met Glu Gln Ala
545                 550                 555                 560
Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val Asp Tyr Arg Tyr Gly Ser Thr
                565                 570                 575
Trp Tyr Asp Ala Lys
            580
<210> 108
<211> 581
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽序列
<400> 108
Met Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala Asp Arg Val Thr Glu Glu Met
1               5                   10                  15
Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr
            20                  25                  30
His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala Val Val Asn Glu Arg Gly Arg
        35                  40                  45
Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala
    50                  55                  60
Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg
65                  70                  75                  80
Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser
                85                  90                  95
Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val
            100                 105                 110
Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg
        115                 120                 125
Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp
    130                 135                 140
Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp
145                 150                 155                 160
Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp
                165                 170                 175
Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu
            180                 185                 190
Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met
        195                 200                 205
Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly Thr Val Glu Gln Arg Ile Tyr
    210                 215                 220
Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly
225                 230                 235                 240
Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys
                245                 250                 255
Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val Leu Glu Lys Leu Ala Pro Tyr
            260                 265                 270
His Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu Met Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu
        275                 280                 285
Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu Lys Val Val Arg Pro Asp Thr
    290                 295                 300
Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg
305                 310                 315                 320
Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu
                325                 330                 335
Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp
            340                 345                 350
Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala
        355                 360                 365
His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu
    370                 375                 380
Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp
385                 390                 395                 400
Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly
                405                 410                 415
Ile Val Tyr Gly Ile Ser Lys Tyr Gly Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile
            420                 425                 430
Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile Glu Arg Tyr Phe Gln Ser Phe
        435                 440                 445
Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln
    450                 455                 460
Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu His Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp
465                 470                 475                 480
Ile Thr Ser Arg Asn Phe Arg Val Arg Ser Phe Ala Glu Arg Met Ala
                485                 490                 495
Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala
            500                 505                 510
Met Ile Asp Leu Cys Ala Arg Leu Lys Glu Glu Arg Leu Gln Ala His
        515                 520                 525
Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu
    530                 535                 540
Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val Pro Glu Val Met Glu Gln Ala
545                 550                 555                 560
Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val Asp Tyr Arg Tyr Gly Ser Thr
                565                 570                 575
Trp Tyr Asp Ala Lys
            580
<210> 109
<211> 581
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽序列
<400> 109
Met Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala Asp Arg Val Thr Glu Glu Met
1               5                   10                  15
Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr
            20                  25                  30
His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala Val Val Asn Glu Arg Gly Arg
        35                  40                  45
Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala
    50                  55                  60
Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg
65                  70                  75                  80
Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser
                85                  90                  95
Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val
            100                 105                 110
Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg
        115                 120                 125
Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp
    130                 135                 140
Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp
145                 150                 155                 160
Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp
                165                 170                 175
Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu
            180                 185                 190
Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met
        195                 200                 205
Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly Thr Val Glu Gln Arg Ile Tyr
    210                 215                 220
Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly
225                 230                 235                 240
Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys
                245                 250                 255
Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val Leu Glu Lys Leu Ala Pro Tyr
            260                 265                 270
His Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu Met Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu
        275                 280                 285
Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu Lys Val Val Arg Pro Asp Thr
    290                 295                 300
Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg
305                 310                 315                 320
Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu
                325                 330                 335
Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp
            340                 345                 350
Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala
        355                 360                 365
His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu
    370                 375                 380
Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp
385                 390                 395                 400
Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly
                405                 410                 415
Ile Val Tyr Gly Ile Ser Lys Tyr Gly Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile
            420                 425                 430
Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile Glu Arg Tyr Phe Gln Ser Phe
        435                 440                 445
Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln
    450                 455                 460
Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu His Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp
465                 470                 475                 480
Ile Thr Ser Arg Asn Phe Arg Val Arg Ser Phe Ala Glu Arg Met Ala
                485                 490                 495
Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala
            500                 505                 510
Met Ile Asp Leu Lys Ala Arg Leu Lys Glu Glu Arg Leu Gln Ala His
        515                 520                 525
Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu
    530                 535                 540
Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val Pro Glu Val Met Glu Gln Ala
545                 550                 555                 560
Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val Asp Tyr Arg Tyr Gly Ser Thr
                565                 570                 575
Trp Tyr Asp Ala Lys
            580
<210> 110
<211> 581
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽序列
<400> 110
Met Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala Asp Arg Val Thr Glu Glu Met
1               5                   10                  15
Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr
            20                  25                  30
His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala Val Val Asn Glu Arg Gly Arg
        35                  40                  45
Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala
    50                  55                  60
Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg
65                  70                  75                  80
Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser
                85                  90                  95
Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val
            100                 105                 110
Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg
        115                 120                 125
Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp
    130                 135                 140
Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp
145                 150                 155                 160
Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp
                165                 170                 175
Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu
            180                 185                 190
Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met
        195                 200                 205
Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly Thr Val Glu Gln Arg Ile Tyr
    210                 215                 220
Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly
225                 230                 235                 240
Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu Pro Arg Leu Lys Lys Thr Lys
                245                 250                 255
Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val Leu Glu Lys Leu Ala Pro Tyr
            260                 265                 270
His Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu Met Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu
        275                 280                 285
Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu Lys Val Val Arg Pro Asp Thr
    290                 295                 300
Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg
305                 310                 315                 320
Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu
                325                 330                 335
Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp
            340                 345                 350
Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala
        355                 360                 365
His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu
    370                 375                 380
Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp
385                 390                 395                 400
Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly
                405                 410                 415
Ile Val Tyr Gly Ile Ser Lys Tyr Gly Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile
            420                 425                 430
Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile Glu Arg Tyr Phe Gln Ser Phe
        435                 440                 445
Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln
    450                 455                 460
Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu His Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp
465                 470                 475                 480
Ile Thr Ser Arg Asn Phe Arg Val Arg Ser Phe Ala Glu Arg Met Ala
                485                 490                 495
Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala
            500                 505                 510
Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys Glu Glu Arg Leu Gln Ala His
        515                 520                 525
Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu
    530                 535                 540
Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val Pro Glu Val Met Glu Gln Ala
545                 550                 555                 560
Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val Asp Tyr Arg Tyr Gly Ser Thr
                565                 570                 575
Trp Tyr Asp Ala Lys
            580
<210> 111
<211> 581
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽序列
<400> 111
Met Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala Asp Arg Val Thr Glu Glu Met
1               5                   10                  15
Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr
            20                  25                  30
His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala Val Val Asn Glu Arg Gly Arg
        35                  40                  45
Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala
    50                  55                  60
Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg
65                  70                  75                  80
Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser
                85                  90                  95
Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val
            100                 105                 110
Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg
        115                 120                 125
Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp
    130                 135                 140
Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp
145                 150                 155                 160
Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp
                165                 170                 175
Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu
            180                 185                 190
Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met
        195                 200                 205
Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly Thr Val Glu Gln Arg Ile Tyr
    210                 215                 220
Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly
225                 230                 235                 240
Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys
                245                 250                 255
Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val Leu Glu Lys Leu Ala Pro Tyr
            260                 265                 270
His Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu Met Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu
        275                 280                 285
Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu Lys Val Val Arg Pro Asp Thr
    290                 295                 300
Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg
305                 310                 315                 320
Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu
                325                 330                 335
Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp
            340                 345                 350
Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala
        355                 360                 365
His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu
    370                 375                 380
Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp
385                 390                 395                 400
Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly
                405                 410                 415
Ile Val Tyr Gly Ile Ser Lys Tyr Gly Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile
            420                 425                 430
Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile Glu Arg Tyr Phe Gln Ser Phe
        435                 440                 445
Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln
    450                 455                 460
Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu His Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp
465                 470                 475                 480
Ile Thr Ser Arg Arg Phe Arg Val Arg Ser Phe Ala Glu Arg Met Ala
                485                 490                 495
Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala
            500                 505                 510
Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys Glu Glu Arg Leu Gln Ala His
        515                 520                 525
Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu
    530                 535                 540
Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val Pro Glu Val Met Glu Gln Ala
545                 550                 555                 560
Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val Asp Tyr Arg Tyr Gly Ser Thr
                565                 570                 575
Trp Tyr Asp Ala Lys
            580
<210> 112
<211> 581
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽序列
<400> 112
Met Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala Asp Arg Val Thr Glu Glu Met
1               5                   10                  15
Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr
            20                  25                  30
His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala Val Val Asn Glu Arg Gly Arg
        35                  40                  45
Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala
    50                  55                  60
Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg
65                  70                  75                  80
Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser
                85                  90                  95
Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val
            100                 105                 110
Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg
        115                 120                 125
Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp
    130                 135                 140
Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp
145                 150                 155                 160
Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp
                165                 170                 175
Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu
            180                 185                 190
Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met
        195                 200                 205
Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly Thr Val Glu Gln Arg Ile Tyr
    210                 215                 220
Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly
225                 230                 235                 240
Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys
                245                 250                 255
Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val Leu Glu Lys Leu Ala Pro Tyr
            260                 265                 270
His Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu Met Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu
        275                 280                 285
Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu Lys Val Val Arg Pro Asp Thr
    290                 295                 300
Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg
305                 310                 315                 320
Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu
                325                 330                 335
Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp
            340                 345                 350
Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala
        355                 360                 365
His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu
    370                 375                 380
Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp
385                 390                 395                 400
Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly
                405                 410                 415
Ile Val Tyr Gly Ile Ser Lys Tyr Gly Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile
            420                 425                 430
Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile Glu Arg Tyr Phe Gln Ser Phe
        435                 440                 445
Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln
    450                 455                 460
Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu His Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp
465                 470                 475                 480
Ile Thr Ser Arg Asn Phe Arg Val Arg Ser Phe Ala Glu Arg Met Ala
                485                 490                 495
Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala
            500                 505                 510
Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys Cys Glu Arg Leu Gln Ala His
        515                 520                 525
Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu
    530                 535                 540
Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val Pro Glu Val Met Glu Gln Ala
545                 550                 555                 560
Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val Asp Tyr Arg Tyr Gly Ser Thr
                565                 570                 575
Trp Tyr Asp Ala Lys
            580
<210> 113
<211> 581
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽序列
<400> 113
Met Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala Asp Arg Val Thr Glu Glu Met
1               5                   10                  15
Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr
            20                  25                  30
His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala Val Val Asn Glu Arg Gly Arg
        35                  40                  45
Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala
    50                  55                  60
Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg
65                  70                  75                  80
Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser
                85                  90                  95
Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val
            100                 105                 110
Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg
        115                 120                 125
Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp
    130                 135                 140
Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp
145                 150                 155                 160
Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp
                165                 170                 175
Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu
            180                 185                 190
Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met
        195                 200                 205
Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly Thr Val Glu Gln Arg Ile Tyr
    210                 215                 220
Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly
225                 230                 235                 240
Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys
                245                 250                 255
Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Lys Val Leu Glu Lys Leu Ala Pro Tyr
            260                 265                 270
His Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu Met Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu
        275                 280                 285
Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu Lys Val Val Arg Pro Asp Thr
    290                 295                 300
Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg
305                 310                 315                 320
Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu
                325                 330                 335
Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp
            340                 345                 350
Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala
        355                 360                 365
His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu
    370                 375                 380
Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp
385                 390                 395                 400
Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly
                405                 410                 415
Ile Val Tyr Gly Ile Ser Lys Tyr Gly Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile
            420                 425                 430
Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile Glu Arg Tyr Phe Gln Ser Phe
        435                 440                 445
Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln
    450                 455                 460
Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu His Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp
465                 470                 475                 480
Ile Thr Ser Arg Asn Phe Arg Val Arg Ser Phe Ala Glu Arg Met Ala
                485                 490                 495
Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala
            500                 505                 510
Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys Glu Glu Arg Leu Gln Ala His
        515                 520                 525
Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu
    530                 535                 540
Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val Pro Glu Val Met Glu Gln Ala
545                 550                 555                 560
Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val Asp Tyr Arg Tyr Gly Ser Thr
                565                 570                 575
Trp Tyr Asp Ala Lys
            580
<210> 114
<211> 581
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽序列
<400> 114
Met Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala Asp Arg Val Thr Glu Glu Met
1               5                   10                  15
Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr
            20                  25                  30
His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala Val Val Asn Glu Arg Gly Arg
        35                  40                  45
Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala
    50                  55                  60
Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg
65                  70                  75                  80
Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser
                85                  90                  95
Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val
            100                 105                 110
Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg
        115                 120                 125
Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp
    130                 135                 140
Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp
145                 150                 155                 160
Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp
                165                 170                 175
Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu
            180                 185                 190
Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met
        195                 200                 205
Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly Thr Val Glu Gln Arg Ile Tyr
    210                 215                 220
Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly
225                 230                 235                 240
Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys
                245                 250                 255
Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Met Val Leu Glu Lys Leu Ala Pro Tyr
            260                 265                 270
His Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu Met Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu
        275                 280                 285
Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu Lys Val Val Arg Pro Asp Thr
    290                 295                 300
Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg
305                 310                 315                 320
Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu
                325                 330                 335
Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp
            340                 345                 350
Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala
        355                 360                 365
His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu
    370                 375                 380
Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp
385                 390                 395                 400
Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly
                405                 410                 415
Ile Val Tyr Gly Ile Ser Lys Tyr Gly Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile
            420                 425                 430
Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile Glu Arg Tyr Phe Gln Ser Phe
        435                 440                 445
Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln
    450                 455                 460
Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu His Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp
465                 470                 475                 480
Ile Thr Ser Arg Asn Phe Arg Val Arg Ser Phe Ala Glu Arg Met Ala
                485                 490                 495
Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala
            500                 505                 510
Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys Glu Glu Arg Leu Gln Ala His
        515                 520                 525
Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu
    530                 535                 540
Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val Pro Glu Val Met Glu Gln Ala
545                 550                 555                 560
Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val Asp Tyr Arg Tyr Gly Ser Thr
                565                 570                 575
Trp Tyr Asp Ala Lys
            580
<210> 115
<211> 581
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽序列
<400> 115
Met Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala Asp Arg Val Thr Glu Glu Met
1               5                   10                  15
Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr
            20                  25                  30
His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala Val Val Asn Glu Arg Gly Arg
        35                  40                  45
Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala
    50                  55                  60
Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg
65                  70                  75                  80
Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser
                85                  90                  95
Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val
            100                 105                 110
Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg
        115                 120                 125
Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp
    130                 135                 140
Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp
145                 150                 155                 160
Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp
                165                 170                 175
Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu
            180                 185                 190
Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met
        195                 200                 205
Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly Thr Val Glu Gln Arg Ile Tyr
    210                 215                 220
Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly
225                 230                 235                 240
Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys
                245                 250                 255
Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val Leu Glu Lys Leu Ala Pro Tyr
            260                 265                 270
His Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu Met Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu
        275                 280                 285
Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu Lys Val Val Arg Pro Asp Thr
    290                 295                 300
Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg
305                 310                 315                 320
Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu
                325                 330                 335
Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp
            340                 345                 350
Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala
        355                 360                 365
His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu
    370                 375                 380
Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp
385                 390                 395                 400
Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly
                405                 410                 415
Ile Val Tyr Gly Ile Ser Lys Tyr Gly Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile
            420                 425                 430
Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile Glu Arg Tyr Phe Gln Ser Phe
        435                 440                 445
Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln
    450                 455                 460
Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu His Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp
465                 470                 475                 480
Ile Thr Ser Arg Asn Phe Arg Val Arg Ser Phe Ala Glu Arg Met Ala
                485                 490                 495
Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala
            500                 505                 510
Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys Glu Glu Arg Leu Gln Ala Thr
        515                 520                 525
Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu
    530                 535                 540
Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val Pro Glu Val Met Glu Gln Ala
545                 550                 555                 560
Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val Asp Tyr Arg Tyr Gly Ser Thr
                565                 570                 575
Trp Tyr Asp Ala Lys
            580
<210> 116
<211> 581
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽序列
<400> 116
Met Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala Asp Arg Val Thr Glu Glu Met
1               5                   10                  15
Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr
            20                  25                  30
His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala Val Val Asn Glu Arg Gly Arg
        35                  40                  45
Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala
    50                  55                  60
Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg
65                  70                  75                  80
Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser
                85                  90                  95
Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val
            100                 105                 110
Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg
        115                 120                 125
Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp
    130                 135                 140
Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp
145                 150                 155                 160
Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp
                165                 170                 175
Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu
            180                 185                 190
Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met
        195                 200                 205
Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly Thr Val Glu Gln Arg Ile Tyr
    210                 215                 220
Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly
225                 230                 235                 240
Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys
                245                 250                 255
Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val Leu Glu Lys Leu Ala Pro Tyr
            260                 265                 270
His Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu Met Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu
        275                 280                 285
Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu Lys Val Val Arg Pro Asp Thr
    290                 295                 300
Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg
305                 310                 315                 320
Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu
                325                 330                 335
Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp
            340                 345                 350
Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala
        355                 360                 365
His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu
    370                 375                 380
Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp
385                 390                 395                 400
Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly
                405                 410                 415
Ile Val Tyr Gly Ile Ser Lys Tyr Gly Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile
            420                 425                 430
Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile Glu Arg Tyr Phe Gln Ser Phe
        435                 440                 445
Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln
    450                 455                 460
Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu Gly Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp
465                 470                 475                 480
Ile Thr Ser Arg Asn Phe Arg Val Arg Ser Phe Ala Glu Arg Met Ala
                485                 490                 495
Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala
            500                 505                 510
Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys Glu Glu Arg Leu Gln Ala His
        515                 520                 525
Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu
    530                 535                 540
Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val Pro Glu Val Met Glu Gln Ala
545                 550                 555                 560
Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val Asp Tyr Arg Tyr Gly Ser Thr
                565                 570                 575
Trp Tyr Asp Ala Lys
            580
<210> 117
<211> 581
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽序列
<400> 117
Met Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala Asp Arg Val Thr Glu Glu Met
1               5                   10                  15
Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr
            20                  25                  30
His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala Val Val Asn Glu Arg Gly Arg
        35                  40                  45
Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala
    50                  55                  60
Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg
65                  70                  75                  80
Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser
                85                  90                  95
Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val
            100                 105                 110
Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg
        115                 120                 125
Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp
    130                 135                 140
Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp
145                 150                 155                 160
Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp
                165                 170                 175
Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu
            180                 185                 190
Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met
        195                 200                 205
Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly Thr Val Glu Gln Arg Ile Tyr
    210                 215                 220
Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly
225                 230                 235                 240
Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu Pro Val Arg Lys Lys Thr Lys
                245                 250                 255
Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val Leu Glu Lys Leu Ala Pro Tyr
            260                 265                 270
His Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu Met Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu
        275                 280                 285
Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu Lys Val Val Arg Pro Asp Thr
    290                 295                 300
Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg
305                 310                 315                 320
Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu
                325                 330                 335
Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp
            340                 345                 350
Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala
        355                 360                 365
His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu
    370                 375                 380
Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp
385                 390                 395                 400
Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly
                405                 410                 415
Ile Val Tyr Gly Ile Ser Lys Tyr Gly Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile
            420                 425                 430
Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile Glu Arg Tyr Phe Gln Ser Phe
        435                 440                 445
Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln
    450                 455                 460
Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu His Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp
465                 470                 475                 480
Ile Thr Ser Arg Asn Phe Arg Val Arg Ser Phe Ala Glu Arg Met Ala
                485                 490                 495
Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala
            500                 505                 510
Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys Glu Glu Arg Leu Gln Ala His
        515                 520                 525
Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu
    530                 535                 540
Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val Pro Glu Val Met Glu Gln Ala
545                 550                 555                 560
Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val Asp Tyr Arg Tyr Gly Ser Thr
                565                 570                 575
Trp Tyr Asp Ala Lys
            580
<210> 118
<211> 581
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽序列
<400> 118
Met Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala Asp Arg Val Thr Glu Glu Met
1               5                   10                  15
Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr
            20                  25                  30
His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala Val Val Asn Glu Arg Gly Arg
        35                  40                  45
Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala
    50                  55                  60
Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg
65                  70                  75                  80
Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser
                85                  90                  95
Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val
            100                 105                 110
Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg
        115                 120                 125
Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp
    130                 135                 140
Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp
145                 150                 155                 160
Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp
                165                 170                 175
Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu
            180                 185                 190
Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met
        195                 200                 205
Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly Thr Val Glu Gln Arg Ile Tyr
    210                 215                 220
Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly
225                 230                 235                 240
Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu Pro Val Arg Lys Lys Thr Lys
                245                 250                 255
Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val Leu Glu Lys Leu Ala Pro Tyr
            260                 265                 270
His Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu Met Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu
        275                 280                 285
Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu Lys Val Val Arg Pro Asp Thr
    290                 295                 300
Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg
305                 310                 315                 320
Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu
                325                 330                 335
Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp
            340                 345                 350
Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala
        355                 360                 365
His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu
    370                 375                 380
Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp
385                 390                 395                 400
Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly
                405                 410                 415
Ile Val Tyr Gly Ile Ser Lys Tyr Gly Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile
            420                 425                 430
Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile Glu Arg Tyr Phe Gln Ser Phe
        435                 440                 445
Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln
    450                 455                 460
Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu His Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp
465                 470                 475                 480
Ile Thr Ser Arg Asn Phe Arg Val Arg Ser Phe Ala Glu Arg Met Ala
                485                 490                 495
Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala
            500                 505                 510
Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys Glu Glu Arg Leu Gln Ala Thr
        515                 520                 525
Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu
    530                 535                 540
Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val Pro Glu Val Met Glu Gln Ala
545                 550                 555                 560
Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val Asp Tyr Arg Tyr Gly Ser Thr
                565                 570                 575
Trp Tyr Asp Ala Lys
            580
<210> 119
<211> 581
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽序列
<400> 119
Met Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala Asp Arg Val Thr Glu Glu Met
1               5                   10                  15
Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr
            20                  25                  30
His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala Val Val Asn Glu Arg Gly Arg
        35                  40                  45
Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala
    50                  55                  60
Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg
65                  70                  75                  80
Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser
                85                  90                  95
Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val
            100                 105                 110
Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg
        115                 120                 125
Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp
    130                 135                 140
Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp
145                 150                 155                 160
Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp
                165                 170                 175
Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu
            180                 185                 190
Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met
        195                 200                 205
Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly Thr Val Glu Gln Arg Ile Tyr
    210                 215                 220
Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly
225                 230                 235                 240
Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu Pro Val Arg Lys Lys Thr Lys
                245                 250                 255
Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val Leu Glu Lys Leu Ala Pro Tyr
            260                 265                 270
His Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu Met Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu
        275                 280                 285
Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu Lys Val Val Arg Pro Asp Thr
    290                 295                 300
Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg
305                 310                 315                 320
Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu
                325                 330                 335
Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp
            340                 345                 350
Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala
        355                 360                 365
His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu
    370                 375                 380
Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp
385                 390                 395                 400
Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly
                405                 410                 415
Ile Val Tyr Gly Ile Ser Lys Tyr Gly Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile
            420                 425                 430
Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile Glu Arg Tyr Phe Gln Ser Phe
        435                 440                 445
Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln
    450                 455                 460
Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu Gly Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp
465                 470                 475                 480
Ile Thr Ser Arg Asn Phe Arg Val Arg Ser Phe Ala Glu Arg Met Ala
                485                 490                 495
Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala
            500                 505                 510
Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys Glu Glu Arg Leu Gln Ala Thr
        515                 520                 525
Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu
    530                 535                 540
Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val Pro Glu Val Met Glu Gln Ala
545                 550                 555                 560
Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val Asp Tyr Arg Tyr Gly Ser Thr
                565                 570                 575
Trp Tyr Asp Ala Lys
            580
<210> 120
<211> 876
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成：
<400> 120
Met Lys Lys Lys Leu Val Leu Ile Asp Gly Ser Ser Val Ala Tyr Arg
1               5                   10                  15
Ala Phe Phe Ala Leu Pro Leu Leu His Asn Asp Lys Gly Ile His Thr
            20                  25                  30
Asn Ala Val Tyr Gly Phe Thr Met Met Leu Asn Lys Ile Leu Ala Glu
        35                  40                  45
Glu Glu Pro Thr His Met Leu Val Ala Phe Asp Ala Gly Lys Thr Thr
    50                  55                  60
Phe Arg His Glu Ala Phe Gln Glu Tyr Lys Gly Gly Arg Gln Gln Thr
65                  70                  75                  80
Pro Pro Glu Leu Ser Glu Gln Phe Pro Leu Leu Arg Glu Leu Leu Arg
                85                  90                  95
Ala Tyr Arg Ile Pro Ala Tyr Glu Leu Glu Asn Tyr Glu Ala Asp Asp
            100                 105                 110
Ile Ile Gly Thr Leu Ala Ala Arg Ala Glu Gln Glu Gly Phe Glu Val
        115                 120                 125
Lys Val Ile Ser Gly Asp Arg Asp Leu Thr Gln Leu Ala Ser Pro His
    130                 135                 140
Val Thr Val Asp Ile Thr Lys Lys Gly Ile Thr Asp Ile Glu Pro Tyr
145                 150                 155                 160
Thr Pro Glu Thr Val Arg Glu Lys Tyr Gly Leu Thr Pro Glu Gln Ile
                165                 170                 175
Val Asp Leu Lys Gly Leu Met Gly Asp Lys Ser Asp Asn Ile Pro Gly
            180                 185                 190
Val Pro Gly Ile Gly Glu Lys Thr Ala Val Lys Leu Leu Arg Gln Phe
        195                 200                 205
Gly Thr Val Glu Asn Val Leu Ala Ser Ile Asp Glu Ile Lys Gly Glu
    210                 215                 220
Lys Leu Lys Glu Thr Leu Arg Gln His Arg Glu Met Ala Leu Leu Ser
225                 230                 235                 240
Lys Lys Leu Ala Ala Ile Arg Arg Asp Ala Pro Val Glu Leu Ser Leu
                245                 250                 255
Asp Asp Ile Ala Tyr Gln Gly Glu Asp Arg Glu Lys Val Val Ala Leu
            260                 265                 270
Phe Lys Glu Leu Gly Phe Gln Ser Phe Leu Glu Lys Met Glu Ser Pro
        275                 280                 285
Ser Ser Glu Glu Glu Lys Pro Leu Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala
    290                 295                 300
Asp Arg Val Thr Glu Glu Met Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val
305                 310                 315                 320
Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala
                325                 330                 335
Val Val Asn Glu Arg Gly Arg Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu
            340                 345                 350
Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys
        355                 360                 365
Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly
    370                 375                 380
Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu
385                 390                 395                 400
Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met
                405                 410                 415
Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly
            420                 425                 430
Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val
        435                 440                 445
Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu
    450                 455                 460
Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro
465                 470                 475                 480
Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp
                485                 490                 495
Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly
            500                 505                 510
Thr Val Glu Gln Arg Ile Tyr Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile
        515                 520                 525
Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu
    530                 535                 540
Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val
545                 550                 555                 560
Leu Glu Lys Leu Ala Pro Tyr His Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu Met
                565                 570                 575
Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu
            580                 585                 590
Lys Val Val Arg Pro Asp Thr Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln
        595                 600                 605
Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln
    610                 615                 620
Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe
625                 630                 635                 640
Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln
                645                 650                 655
Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met
            660                 665                 670
Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp
        675                 680                 685
Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln
    690                 695                 700
Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly Ile Val Tyr Gly Ile Ser Lys Tyr Gly
705                 710                 715                 720
Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile
                725                 730                 735
Glu Arg Tyr Phe Gln Ser Phe Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn
            740                 745                 750
Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu His
        755                 760                 765
Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp Ile Thr Ser Arg Asn Phe Arg Val Arg
    770                 775                 780
Ser Phe Ala Glu Arg Met Ala Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala
785                 790                 795                 800
Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys
                805                 810                 815
Glu Glu Arg Leu Gln Ala His Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu
            820                 825                 830
Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val
        835                 840                 845
Pro Glu Val Met Glu Gln Ala Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val
    850                 855                 860
Asp Tyr Arg Tyr Gly Ser Thr Trp Tyr Asp Ala Lys
865                 870                 875
<210> 121
<211> 876
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成：
<400> 121
Met Lys Lys Lys Leu Val Leu Ile Asp Gly Ser Ser Val Ala Tyr Arg
1               5                   10                  15
Ala Phe Phe Ala Leu Pro Leu Leu His Asn Asp Lys Gly Ile His Thr
            20                  25                  30
Asn Ala Val Tyr Gly Phe Thr Met Met Leu Asn Lys Ile Leu Ala Glu
        35                  40                  45
Glu Glu Pro Thr His Met Leu Val Ala Phe Asp Ala Gly Lys Thr Thr
    50                  55                  60
Phe Arg His Glu Ala Phe Gln Glu Tyr Lys Gly Gly Arg Gln Gln Thr
65                  70                  75                  80
Pro Pro Glu Leu Ser Glu Gln Phe Pro Leu Leu Arg Glu Leu Leu Arg
                85                  90                  95
Ala Tyr Arg Ile Pro Ala Tyr Glu Leu Glu Asn Tyr Glu Ala Asp Asp
            100                 105                 110
Ile Ile Gly Thr Leu Ala Ala Arg Ala Glu Gln Glu Gly Phe Glu Val
        115                 120                 125
Lys Val Ile Ser Gly Asp Arg Asp Leu Thr Gln Leu Ala Ser Pro His
    130                 135                 140
Val Thr Val Asp Ile Thr Lys Lys Gly Ile Thr Asp Ile Glu Pro Tyr
145                 150                 155                 160
Thr Pro Glu Thr Val Arg Glu Lys Tyr Gly Leu Thr Pro Glu Gln Ile
                165                 170                 175
Val Asp Leu Lys Gly Leu Met Gly Asp Lys Ser Asp Asn Ile Pro Gly
            180                 185                 190
Val Pro Gly Ile Gly Glu Lys Thr Ala Val Lys Leu Leu Arg Gln Phe
        195                 200                 205
Gly Thr Val Glu Asn Val Leu Ala Ser Ile Asp Glu Ile Lys Gly Glu
    210                 215                 220
Lys Leu Lys Glu Thr Leu Arg Gln His Arg Glu Met Ala Leu Leu Ser
225                 230                 235                 240
Lys Lys Leu Ala Ala Ile Arg Arg Asp Ala Pro Val Glu Leu Ser Leu
                245                 250                 255
Asp Asp Ile Ala Tyr Gln Gly Glu Asp Arg Glu Lys Val Val Ala Leu
            260                 265                 270
Phe Lys Glu Leu Gly Phe Gln Ser Phe Leu Glu Lys Met Glu Ser Pro
        275                 280                 285
Ser Ser Glu Glu Glu Lys Pro Leu Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala
    290                 295                 300
Asp Arg Val Thr Glu Glu Met Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val
305                 310                 315                 320
Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala
                325                 330                 335
Val Val Asn Glu Arg Gly Arg Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu
            340                 345                 350
Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys
        355                 360                 365
Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly
    370                 375                 380
Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu
385                 390                 395                 400
Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met
                405                 410                 415
Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly
            420                 425                 430
Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val
        435                 440                 445
Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu
    450                 455                 460
Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro
465                 470                 475                 480
Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp
                485                 490                 495
Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly
            500                 505                 510
Thr Val Glu Gln Arg Ile Tyr Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile
        515                 520                 525
Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu
    530                 535                 540
Pro Val Arg Lys Lys Thr Lys Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val
545                 550                 555                 560
Leu Glu Lys Leu Ala Pro Tyr His Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu Met
                565                 570                 575
Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu
            580                 585                 590
Lys Val Val Arg Pro Asp Thr Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln
        595                 600                 605
Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln
    610                 615                 620
Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe
625                 630                 635                 640
Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln
                645                 650                 655
Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met
            660                 665                 670
Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp
        675                 680                 685
Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln
    690                 695                 700
Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly Ile Val Tyr Gly Ile Ser Lys Tyr Gly
705                 710                 715                 720
Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile
                725                 730                 735
Glu Arg Tyr Phe Gln Ser Phe Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn
            740                 745                 750
Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu Gly
        755                 760                 765
Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp Ile Thr Ser Arg Asn Phe Arg Val Arg
    770                 775                 780
Ser Phe Ala Glu Arg Met Ala Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala
785                 790                 795                 800
Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys
                805                 810                 815
Glu Glu Arg Leu Gln Ala Thr Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu
            820                 825                 830
Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val
        835                 840                 845
Pro Glu Val Met Glu Gln Ala Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val
    850                 855                 860
Asp Tyr Arg Tyr Gly Ser Thr Trp Tyr Asp Ala Lys
865                 870                 875
<210> 122
<211> 876
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成：
<400> 122
Met Lys Lys Lys Leu Val Leu Ile Asp Gly Ser Ser Val Ala Tyr Arg
1               5                   10                  15
Ala Phe Phe Ala Leu Pro Leu Leu His Asn Asp Lys Gly Ile His Thr
            20                  25                  30
Asn Ala Val Tyr Gly Phe Thr Met Met Leu Asn Lys Ile Leu Ala Glu
        35                  40                  45
Glu Glu Pro Thr His Met Leu Val Ala Phe Asp Ala Gly Lys Thr Thr
    50                  55                  60
Phe Arg His Glu Ala Phe Gln Glu Tyr Lys Gly Gly Arg Gln Gln Thr
65                  70                  75                  80
Pro Pro Glu Leu Ser Glu Gln Phe Pro Leu Leu Arg Glu Leu Leu Arg
                85                  90                  95
Ala Tyr Arg Ile Pro Ala Tyr Glu Leu Glu Asn Tyr Glu Ala Asp Asp
            100                 105                 110
Ile Ile Gly Thr Leu Ala Ala Arg Ala Glu Gln Glu Gly Phe Glu Val
        115                 120                 125
Lys Val Ile Ser Gly Asp Arg Asp Leu Thr Gln Leu Ala Ser Pro His
    130                 135                 140
Val Thr Val Asp Ile Thr Lys Lys Gly Ile Thr Asp Ile Glu Pro Tyr
145                 150                 155                 160
Thr Pro Glu Thr Val Arg Glu Lys Tyr Gly Leu Thr Pro Glu Gln Ile
                165                 170                 175
Val Asp Leu Lys Gly Leu Met Gly Asp Lys Ser Asp Asn Ile Pro Gly
            180                 185                 190
Val Pro Gly Ile Gly Glu Lys Thr Ala Val Lys Leu Leu Arg Gln Phe
        195                 200                 205
Gly Thr Val Glu Asn Val Leu Ala Ser Ile Asp Glu Ile Lys Gly Glu
    210                 215                 220
Lys Leu Lys Glu Thr Leu Arg Gln His Arg Glu Met Ala Leu Leu Ser
225                 230                 235                 240
Lys Lys Leu Ala Ala Ile Arg Arg Asp Ala Pro Val Glu Leu Ser Leu
                245                 250                 255
Asp Asp Ile Ala Tyr Gln Gly Glu Asp Arg Glu Lys Val Val Ala Leu
            260                 265                 270
Phe Lys Glu Leu Gly Phe Gln Ser Phe Leu Glu Lys Met Glu Ser Pro
        275                 280                 285
Ser Ser Glu Glu Glu Lys Pro Leu Ala Lys Met Ala Phe Thr Leu Ala
    290                 295                 300
Asp Arg Val Thr Glu Glu Met Leu Ala Asp Lys Ala Ala Leu Val Val
305                 310                 315                 320
Glu Val Val Glu Glu Asn Tyr His Asp Ala Pro Ile Val Gly Ile Ala
                325                 330                 335
Val Val Asn Glu Arg Gly Arg Phe Phe Leu Arg Pro Glu Thr Ala Leu
            340                 345                 350
Ala Asp Pro Gln Phe Val Ala Trp Leu Gly Asp Glu Thr Lys Lys Lys
        355                 360                 365
Ser Met Phe Asp Ser Lys Arg Ala Ala Val Ala Leu Lys Trp Lys Gly
    370                 375                 380
Ile Glu Leu Cys Gly Val Ser Phe Asp Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Leu
385                 390                 395                 400
Leu Asp Pro Ala Gln Gly Val Asp Asp Val Ala Ala Ala Ala Lys Met
                405                 410                 415
Lys Gln Tyr Glu Ala Val Arg Pro Asp Glu Ala Val Tyr Gly Lys Gly
            420                 425                 430
Ala Lys Arg Ala Val Pro Asp Glu Pro Val Leu Ala Glu His Leu Val
        435                 440                 445
Arg Lys Ala Ala Ala Ile Trp Glu Leu Glu Arg Pro Phe Leu Asp Glu
    450                 455                 460
Leu Arg Arg Asn Glu Gln Asp Arg Leu Leu Val Glu Leu Glu Gln Pro
465                 470                 475                 480
Leu Ser Ser Ile Leu Ala Glu Met Glu Phe Ala Gly Val Lys Val Asp
                485                 490                 495
Thr Lys Arg Leu Glu Gln Met Gly Lys Glu Leu Ala Glu Gln Leu Gly
            500                 505                 510
Thr Val Glu Gln Arg Ile Tyr Glu Leu Ala Gly Gln Glu Phe Asn Ile
        515                 520                 525
Asn Ser Pro Lys Gln Leu Gly Val Ile Leu Phe Glu Lys Leu Gln Leu
    530                 535                 540
Pro Val Leu Lys Lys Thr Lys Thr Gly Tyr Ser Thr Ser Ala Asp Val
545                 550                 555                 560
Leu Glu Lys Leu Ala Pro Tyr His Glu Ile Val Glu Asn Ile Leu His
                565                 570                 575
Tyr Arg Gln Leu Gly Lys Leu Gln Ser Thr Tyr Ile Glu Gly Leu Leu
            580                 585                 590
Lys Val Val Arg Pro Asp Thr Lys Lys Val His Thr Ile Phe Asn Gln
        595                 600                 605
Ala Leu Thr Gln Thr Gly Arg Leu Ser Ser Thr Glu Pro Asn Leu Gln
    610                 615                 620
Asn Ile Pro Ile Arg Leu Glu Glu Gly Arg Lys Ile Arg Gln Ala Phe
625                 630                 635                 640
Val Pro Ser Glu Ser Asp Trp Leu Ile Phe Ala Ala Asp Tyr Ser Gln
                645                 650                 655
Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala His Ile Ala Glu Asp Asp Asn Leu Met
            660                 665                 670
Glu Ala Phe Arg Arg Asp Leu Asp Ile His Thr Lys Thr Ala Met Asp
        675                 680                 685
Ile Phe Gln Val Ser Glu Asp Glu Val Thr Pro Asn Met Arg Arg Gln
    690                 695                 700
Ala Lys Ala Val Asn Phe Gly Ile Val Tyr Gly Ile Ser Asp Tyr Gly
705                 710                 715                 720
Leu Ala Gln Asn Leu Asn Ile Ser Arg Lys Glu Ala Ala Glu Phe Ile
                725                 730                 735
Glu Arg Tyr Phe Gln Ser Phe Pro Gly Val Lys Arg Tyr Met Glu Asn
            740                 745                 750
Ile Val Gln Glu Ala Lys Gln Lys Gly Tyr Val Thr Thr Leu Leu His
        755                 760                 765
Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Asp Ile Thr Ser Arg Asn Phe Asn Val Arg
    770                 775                 780
Ser Phe Ala Glu Arg Met Ala Met Asn Thr Pro Ile Gln Gly Ser Ala
785                 790                 795                 800
Ala Asp Ile Ile Lys Lys Ala Met Ile Asp Leu Asn Ala Arg Leu Lys
                805                 810                 815
Glu Glu Arg Leu Gln Ala His Leu Leu Leu Gln Val His Asp Glu Leu
            820                 825                 830
Ile Leu Glu Ala Pro Lys Glu Glu Met Glu Arg Leu Cys Arg Leu Val
        835                 840                 845
Pro Glu Val Met Glu Gln Ala Val Thr Leu Arg Val Pro Leu Lys Val
    850                 855                 860
Asp Tyr Arg Tyr Gly Ser Thr Trp Tyr Asp Ala Lys
865                 870                 875

Claims (26)

1.一种包含重组DNA聚合酶的组合物，其中所述DNA聚合酶展现聚合酶活性，并且是相对于SEQ ID NO:35包含取代的突变聚合酶，其包含：
(a)选自由以下组成的群组的单个氨基酸取代：E30K、G209Q、E220H或E220T、P236I或P236R、E245R、L252R、S260K、D264K或D264M、E267M或E267K或E267R、E277T、T324R、E325R、A344Y、E442R或E442Y、E456R、D480L、N485R、A492K、E493G或E493R、M495C、N517C或N517K、和E522C，其中编号相对于SEQ ID NO:35；或
(b)L252R、H473G和H528T所示的三个氨基酸取代，其中编号相对于SEQ ID NO:35。
2.根据权利要求1所述的组合物，其中当在其中检测出氢离子的合成测序反应中使用时，相比于使用SEQ ID NO:35获得的准确度，所述重组DNA聚合酶产生较低误差率、改进的准确度和/或提高的信号。
3.根据权利要求1或2所述的组合物，其中所述重组DNA聚合酶包括L252R、H528T和H473G，其中编号相对于SEQ ID NO:35。
4.根据权利要求1或2所述的组合物，其中所述重组DNA聚合酶包括L252R，其中编号相对于SEQ ID NO:35。
5.根据权利要求2所述的组合物，其中所述重组DNA聚合酶具有SEQ ID NO:119的序列。
6.根据权利要求1或2所述的组合物，其中所述重组DNA聚合酶不包含具有3'到5’核酸外切酶活性和/或5'到3'核酸外切酶活性的野生型Bst DNA聚合酶的链段。
7.一种用于进行聚合反应的方法，其包含
(a)在一种或多种核苷酸存在下，使权利要求1中定义的重组DNA聚合酶与核酸模板接触；以及，
(b)使用所述重组DNA聚合酶使所述一种或多种核苷酸中的至少一种聚合。
8.根据权利要求7所述的方法，其中在一种或多种核苷酸和盐存在下使所述重组DNA聚合酶与所述核酸模板接触，其中所述盐为KCl和/或NaCl。
9.根据权利要求8所述的方法，其中所述盐浓度为125mM到175mM。
10.权利要求7所述的方法，其中使用所述重组DNA聚合酶使所述一种或多种核苷酸中的至少一种聚合，在核酸存在下、在适用于所述核酸模板扩增的条件下进行，其中所述核酸模板被扩增。
11.根据权利要求10所述的方法，其中在一种或多种核苷酸和盐存在下使所述模板核酸与所述重组DNA聚合酶接触，其中所述盐为KCl和/或NaCl。
12.根据权利要求11所述的方法，其中所述盐以125mM到175mM的浓度存在。
13.根据权利要求10所述的方法，其中所述扩增为聚合酶链反应。
14.根据权利要求10所述的方法，其中所述扩增为乳液聚合酶链反应。
15.根据权利要求10所述的方法，其中所述扩增为等温扩增反应。
16.根据权利要求10所述的方法，其中所述扩增为重组酶聚合酶扩增反应。
17.根据权利要求10所述的方法，其中所述扩增为邻位连接扩增反应、滚环扩增反应或链置换扩增反应。
18.根据权利要求10所述的方法，其中所述扩增包含使所述核酸在溶液中或在固体载体上克隆扩增。
19.一种用于从核酸模板获得序列信息的方法，其包含：
(a)提供包含核酸模板、一种或多种核苷酸、测序引物和权利要求1所定义的重组DNA聚合酶的反应混合物；
(b)使所述核酸模板与至少一种类型的核苷酸接触，其中所述接触包括使来自所述至少一种类型的核苷酸的一种或多种核苷酸掺入到所述测序引物的3’端上，且产生延伸的引物产物；以及
(c)通过检测氢离子的释放检测所述反应混合物中的所述延伸的引物产物的存在，由此判定是否已发生核苷酸掺入。
20.根据权利要求19所述的方法，其中在一种或多种核苷酸和盐存在下使所述重组DNA聚合酶与所述核酸模板接触，其中所述盐为KCl和/或NaCl。
21.根据权利要求20所述的方法，其中所述盐以125mM与175mM之间的浓度存在。
22.根据权利要求19-21中任一项所述的方法，其中所述接触包括产生一种或多种氢离子作为核苷酸掺入的副产物。
23.根据权利要求19-21中任一项所述的方法，其中所述检测包括测量一种或多种作为核苷酸掺入副产物产生的氢离子的浓度。
24.根据权利要求19-21中任一项所述的方法，其进一步包含鉴别由所述至少一种类型的核苷酸掺入的所述一种或多种核苷酸中的至少一种。
25.根据权利要求24所述的方法，其中所述接触、检测和鉴别步骤重复超过一次，由此鉴别多种连续核苷酸掺入。
26.一种组合物，其中包含具有SEQ ID NO:121所示序列的重组DNA聚合酶。
CN201680064448.7A 2015-10-01 2016-09-27 聚合酶组合物和套组以及其使用与制造方法 Active CN108350496B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202310209408.9A CN116218815A (zh) 2015-10-01 2016-09-27 聚合酶组合物和套组以及其使用与制造方法

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201562235616P 2015-10-01 2015-10-01
US62/235,616 2015-10-01
PCT/US2016/053994 WO2017058810A2 (en) 2015-10-01 2016-09-27 Polymerase compositions and kits, and methods of using and making the same

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202310209408.9A Division CN116218815A (zh) 2015-10-01 2016-09-27 聚合酶组合物和套组以及其使用与制造方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN108350496A CN108350496A (zh) 2018-07-31
CN108350496B true CN108350496B (zh) 2023-04-18

Family

ID=57256403

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202310209408.9A Pending CN116218815A (zh) 2015-10-01 2016-09-27 聚合酶组合物和套组以及其使用与制造方法
CN201680064448.7A Active CN108350496B (zh) 2015-10-01 2016-09-27 聚合酶组合物和套组以及其使用与制造方法

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202310209408.9A Pending CN116218815A (zh) 2015-10-01 2016-09-27 聚合酶组合物和套组以及其使用与制造方法

Country Status (5)

Country Link
US (4) US10344268B2 (zh)
EP (2) EP3356557B1 (zh)
CN (2) CN116218815A (zh)
ES (1) ES2925905T3 (zh)
WO (1) WO2017058810A2 (zh)

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2017058810A2 (en) 2015-10-01 2017-04-06 Life Technologies Corporation Polymerase compositions and kits, and methods of using and making the same
GB201721053D0 (en) 2017-12-15 2018-01-31 Univ I Tromsø - Norges Arktiske Univ DNA polymerases
CN111684064A (zh) * 2018-01-19 2020-09-18 生物辐射实验室股份有限公司 突变dna聚合酶
CN113583996B (zh) * 2021-09-29 2022-01-14 翌圣生物科技(上海)股份有限公司 Bst DNA聚合酶重组突变体、其编码DNA及超快磁珠LAMP检测方法
WO2023081653A1 (en) * 2021-11-02 2023-05-11 Ultima Genomics, Inc. Nucleic acid polymerase for incorporating labeled nucleotides

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2011106629A2 (en) * 2010-02-26 2011-09-01 Life Technologies Corporation Modified proteins and methods of making and using same
CN103857805A (zh) * 2011-08-10 2014-06-11 生命技术公司 聚合酶组合物、制备和使用所述聚合酶组合物的方法
WO2015048763A1 (en) * 2013-09-30 2015-04-02 Life Technologies Corporation Polymerase compositions, methods of making and using same

Family Cites Families (28)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US278107A (en) 1883-05-22 dowson
US5466591A (en) 1986-08-22 1995-11-14 Hoffmann-La Roche Inc. 5' to 3' exonuclease mutations of thermostable DNA polymerases
JP2709311B2 (ja) 1990-09-28 1998-02-04 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アクチェンゲゼルシャフト 熱安定性ｄｎａポリメラーゼの５→３′のエキソヌクレアーゼ突然変異
EP1233061A3 (en) 1991-06-03 2002-09-04 Takara Shuzo Co., Ltd. A method for cloning of a gene for pol I type DNA polymerase
WO1994016107A1 (en) 1993-01-12 1994-07-21 Thomas Jefferson University DNA SEQUENCING WITH Bst POLYMERASE
SG86311A1 (en) 1997-04-10 2002-02-19 Univ Singapore Bacillus stearothermophilus dna polymerase i (klenow) clones with reduced 3'-to-5' exonuclease activity
US7056661B2 (en) 1999-05-19 2006-06-06 Cornell Research Foundation, Inc. Method for sequencing nucleic acid molecules
GB9918150D0 (en) 1999-08-03 1999-10-06 Univ Sheffield Nuclease variant
WO2002004680A2 (en) 2000-07-07 2002-01-17 Visigen Biotechnologies, Inc. Real-time sequence determination
US20070172866A1 (en) 2000-07-07 2007-07-26 Susan Hardin Methods for sequence determination using depolymerizing agent
WO2002086088A2 (en) 2001-04-24 2002-10-31 Li-Cor, Inc. Polymerases with charge-switch activity and methods of generating such polymerases
US20030180741A1 (en) 2001-12-21 2003-09-25 Holly Hogrefe High fidelity DNA polymerase compositions and uses therefor
GB0208768D0 (en) 2002-04-17 2002-05-29 Univ Newcastle DNA polymerases
US7405281B2 (en) 2005-09-29 2008-07-29 Pacific Biosciences Of California, Inc. Fluorescent nucleotide analogs and uses therefor
US8262900B2 (en) 2006-12-14 2012-09-11 Life Technologies Corporation Methods and apparatus for measuring analytes using large scale FET arrays
US8349167B2 (en) 2006-12-14 2013-01-08 Life Technologies Corporation Methods and apparatus for detecting molecular interactions using FET arrays
CA2672315A1 (en) 2006-12-14 2008-06-26 Ion Torrent Systems Incorporated Methods and apparatus for measuring analytes using large scale fet arrays
US7932034B2 (en) 2006-12-20 2011-04-26 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Heat and pH measurement for sequencing of DNA
US20100137143A1 (en) 2008-10-22 2010-06-03 Ion Torrent Systems Incorporated Methods and apparatus for measuring analytes
US20100301398A1 (en) 2009-05-29 2010-12-02 Ion Torrent Systems Incorporated Methods and apparatus for measuring analytes
US8546128B2 (en) 2008-10-22 2013-10-01 Life Technologies Corporation Fluidics system for sequential delivery of reagents
US8603792B2 (en) 2009-03-27 2013-12-10 Life Technologies Corporation Conjugates of biomolecules to nanoparticles
US8673627B2 (en) 2009-05-29 2014-03-18 Life Technologies Corporation Apparatus and methods for performing electrochemical reactions
US20110301041A1 (en) 2010-02-26 2011-12-08 Life Technologies Corporation Modified Proteins and Methods of Making and Using Same
US20120202276A1 (en) * 2010-02-26 2012-08-09 Life Technologies Corporation Modified Proteins and Methods of Making and Using Same
US20150280880A1 (en) 2014-04-01 2015-10-01 Qualcomm Incorporated Managing hybrid automatic repeat request (harq) buffer
CN107208074B (zh) 2014-12-16 2021-06-15 生命技术公司 聚合酶组合物和制造与使用其的方法
WO2017058810A2 (en) 2015-10-01 2017-04-06 Life Technologies Corporation Polymerase compositions and kits, and methods of using and making the same

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2011106629A2 (en) * 2010-02-26 2011-09-01 Life Technologies Corporation Modified proteins and methods of making and using same
CN103857805A (zh) * 2011-08-10 2014-06-11 生命技术公司 聚合酶组合物、制备和使用所述聚合酶组合物的方法
WO2015048763A1 (en) * 2013-09-30 2015-04-02 Life Technologies Corporation Polymerase compositions, methods of making and using same

Also Published As

Publication number Publication date
US20190270974A1 (en) 2019-09-05
US20240101980A1 (en) 2024-03-28
CN116218815A (zh) 2023-06-06
US20170096648A1 (en) 2017-04-06
US11001814B2 (en) 2021-05-11
ES2925905T3 (es) 2022-10-20
CN108350496A (zh) 2018-07-31
US10344268B2 (en) 2019-07-09
EP3356557A2 (en) 2018-08-08
WO2017058810A3 (en) 2017-06-22
US11866740B2 (en) 2024-01-09
EP3356557B1 (en) 2022-07-20
US20210284976A1 (en) 2021-09-16
EP4141126A1 (en) 2023-03-01
WO2017058810A2 (en) 2017-04-06

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20220162573A1 (en) Polymerase compositions, methods of making and using same
US11091746B2 (en) Polymerase compositions, methods of making and using same
US11866740B2 (en) Polymerase compositions and kits, and methods of using and making the same
EP3234115B1 (en) Polymerase compositions and methods of making and using same
US11208636B2 (en) Polymerase compositions, methods of making and using same

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant