CN108348503B

CN108348503B - 药物化合物

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Publication number: CN108348503B
Application number: CN201680060658.9A
Authority: CN
Inventors: P·M·考利; Y·韩
Original assignee: Iomet Pharma Ltd; Merck Sharp and Dohme LLC
Current assignee: Iomet Pharma Ltd; Merck Sharp and Dohme LLC
Priority date: 2015-09-16
Filing date: 2016-09-12
Publication date: 2021-10-08
Anticipated expiration: 2036-09-12
Also published as: US10336731B2; AU2016324013B2; RU2018113339A; GB201516411D0; CA2998186A1; AU2016324013A1; EP3349750A4; US20180258075A1; EP3349750A1; MX2018003276A; RU2018113339A3; WO2017048612A1; JP2018531230A; MA42840A; KR20180053337A; CN108348503A; RU2730842C2; JP6837479B2

Abstract

提供了一种具有式(I)的化合物：其中R²选自‑Cl、‑Br和‑CN；R¹和R⁴独立地选自H和‑F；R⁶³¹、R⁶³²、R⁶⁴¹和R⁶⁴²独立地选自‑H、‑F和取代的或未取代的C₁‑C₃烷基；并且R⁶⁵¹和R⁶⁵²独立地选自‑H和取代的或未取代的C₁‑C₃烷基和取代的或未取代的苯基；并且其中R⁶³¹、R⁶³²、R⁶⁴¹、R⁶⁴²和R⁶⁵²中的至少一个不是‑H，或者其中当R⁶³¹、R⁶³²、R⁶⁴¹、R⁶⁴²和R⁶⁵²全部是‑H时，R⁶⁵¹不是Me或Et。

Description

药物化合物

背景技术

本发明涉及吲哚胺-2,3-双加氧酶(IDO)抑制剂，特别是用于药物的IDO抑制剂。可以将本发明的抑制剂用于药物组合物中，特别是用于治疗癌症、炎性状况、感染性疾病、中枢神经系统疾病或病症以及其他疾病、状况和病症的药物组合物。本发明还涉及制造此类抑制剂的方法，以及使用此类抑制剂的治疗方法。

色氨酸代谢-犬尿氨酸途径(KP)负责>95％的必需氨基酸色氨酸的降解。色氨酸代谢的犬尿氨酸途径导致产生必需的吡啶核苷酸NAD+和许多神经活性代谢产物，包括犬尿氨酸(KYN)、犬尿酸(KYNA)，神经毒性自由基生成剂3-羟基犬尿氨酸(3-HK)、邻氨基苯甲酸、3-HAA、吡啶甲酸(PIC)以及兴奋性N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体激动剂和神经毒素喹啉酸(QUIN)(见图1)。剩余5％的色氨酸被色氨酸羟化酶代谢为5-羟色氨酸，然后进一步代谢为5-羟色胺(血清素)和褪黑激素。

色氨酸的消耗和免疫抑制性色氨酸分解代谢产物的累积起到抑制抗原特异性T细胞和自然杀伤细胞的应答并诱导调节性T细胞形成的作用。由于色氨酸分解代谢是由炎症介质(特别是IFN-γ)所诱导的，因此认为其代表了限制过度免疫应答，从而预防免疫病理学的内源性机制。然而，有证据表明，在疾病状态下，这种反馈回路可能并不是有益的((Munn和Mellor,2013)中综述)。

IDO-色氨酸分解代谢的第一步由TDO或IDO催化。这两种酶催化吲哚环中2,3双键的氧化裂解，将色氨酸转化为N-甲酰犬尿氨酸。这是通过犬尿氨酸途径的色氨酸分解代谢中的限速步骤(Grohmann等，2003；Stone和Darlington,2002)。TDO是一种同源四聚体，每个单体具有48kDa的分子量，而IDO具有45kDa的分子量和单体结构(Sugimoto等，2006；Thackray等，2008；Zhang等，2007)。尽管介导相同的反应，但TDO和IDO在结构上是不同的，主要在活性位点内仅共享10％的同源性(Thackray等，2008)。

IDO是主要的色氨酸分解代谢酶，特别是在肝脏中，并且存在于多种细胞中，包括巨噬细胞、小胶质细胞、神经元和星形胶质细胞(Guillemin等，2007；Guillemin等，2001；Guillemin等，2003；Guillemin等，2005)。IDO转录受到严格控制，其对特定炎症介质产生应答。小鼠和人IDO基因启动子含有多个序列元件，其赋予对I型(IFN-α/β)，以及更有效地对II型(IFN-γ)干扰素的响应性(Chang等，2011；Dai和Gupta,1990；Hassanain等，1993；Mellor等，2003)。多种细胞类型，包括某些髓系细胞(单核细胞来源的巨噬细胞和DC)、成纤维细胞、内皮细胞和一些肿瘤细胞系，在暴露于IFN-γ后表达IDO(Burke等，1995；Hwu等，2000；Mellor等，2003；Munn等，1999；Varga等，1996)。然而，对IDO转录的控制是复杂的，并且是细胞类型特异性的。发现IDO活性在母体-胎儿界面处是由人绒毛外滋养层细胞组成型表达(Kudo和Boyd,2000)。据报道，在胎盘外，功能性IDO表达在小鼠附睾、肠(远端回肠和结肠)、淋巴结、脾脏、胸腺和肺中最高(Takikawa等，1986)。

另一种最近的IDO变体酶：吲哚胺-2,3-双加氧酶2(IDO2)已显示出催化相同的酶促步骤。然而，其生理相关性仍是不清楚的，因为其活性非常低，在大约一半的所有高加索人和亚洲人中存在使其酶活性失活的常见多态性，并且存在多种剪接变体(Lob等，2008；Meininger等，2011；Metz等，2007)。

IDO缺陷小鼠处于总体水平的表型正常(Mellor等，2003)，然而，它们略微更易于诱导自身免疫和先天免疫系统刺激。IDO-/-敲除小鼠还表现出增强的炎性介导的结肠癌发生，并表现出对炎症驱动的肺癌和皮肤癌的抗性(Chang等，2011；Yan等，2010)。

免疫调节：色氨酸消耗和犬尿氨酸累积-通过色氨酸代谢的免疫调节通过在微环境中消耗TDO/IDO底物(色氨酸)和累积产物(如犬尿氨酸)而调节免疫系统。

效应T细胞对低色氨酸浓度特别敏感，因此，自局部微环境中消耗必需氨基酸色氨酸导致效应T细胞失能和凋亡。通过一般性调控阻遏蛋白激酶2(GCN2)对色氨酸的消耗进行检测(Munn等，2005)。GCN2的活化触发应激反应程序，导致细胞周期阻滞、分化、适应或凋亡。在小鼠中缺乏GCN2的T细胞不易受通过髓细胞(包括肿瘤引流淋巴结中的树突状细胞)的IDO介导的失能的影响(Munn等，2005)。

色氨酸代谢产物如犬尿氨酸、犬尿酸、3-羟基犬尿氨酸和3-羟基邻氨基苯甲酸抑制T-细胞功能并能够诱导T-细胞凋亡。最近的研究表明芳香烃受体(AHR)是犬尿氨酸的直接靶点(Mezrich等，2010；Nguyen等，2010；Opitz等，2011)。AHR是一种碱性螺旋-环-螺旋Per-Arnt-Sim(PAS)家族转录因子。随着犬尿氨酸在肿瘤中累积，KYN与AHR结合，转位至细胞核并激活由二恶英应答元件(DRE)调控的靶基因的转录。在T-辅助细胞中，犬尿氨酸导致调节性T细胞(Treg)的产生。

IDO的药理学抑制剂可用于各种适应症，包括感染性疾病、癌症、神经病学状况和很多其他疾病。

感染性疾病和炎症-由细菌、寄生虫或病毒引起的感染诱导强IFN-γ-依赖性炎症应答。IDO可以抑制保护性宿主免疫，从而间接导致病原体负荷增加。例如，IDO活性减弱肺中刚地弓形虫的复制，感染后通过施用IDO抑制剂1MT显著减轻炎症损伤(Murakami等，2012)。而且，在感染小鼠白血病病毒(MuLV)的小鼠中，发现IDO高度表达，并且除去IDO增强了对病毒复制的控制并增加了存活(Hoshi等，2010)。在一个流感感染模型中，IDO的免疫抑制作用可使肺易于继发细菌感染(van der Sluijs.等，2006)。在由克氏锥虫(Trypanosomacruzi)寄生虫引起的查加斯病中，犬尿氨酸在患者中增加，并且其与疾病的严重程度相关(Maranon等，2013)。因此，IDO抑制剂可用于改善患有各种感染性疾病和炎症状况的患者的结局。

IDO和对肠道细菌的免疫力-IDO在调节对肠道微生物群的粘膜免疫中发挥作用。已发现IDO调节肠道中共生体诱导的抗体产生；IDO缺陷小鼠血清中免疫球蛋白A(IgA)和免疫球蛋白G(IgG)的基线水平升高，并且肠分泌物中的IgA升高。由于抗体产生增加，IDO缺陷小鼠比WT小鼠对革兰氏阴性肠道细菌病原体柠檬酸杆菌(Citrobacter rodentium)具有更强的抗肠定殖作用。IDO缺陷小鼠还展现出增强的对由柠檬酸杆菌感染所引起的结肠炎的抗性(Harrington等，2008)。

因此，药理学靶向IDO活性可能代表了一种操纵肠道免疫和控制由肠道病原体引起的病理学(包括结肠炎)的新方法(Harrington等，2008)。

HIV感染-感染HIV的患者具有长期血浆色氨酸水平降低和犬尿氨酸水平增加，以及IDO表达增加(Fuchs等，1990和Zangerle等，2002)。

在HIV患者中，IDO上调起到抑制对HIV抗原的免疫应答的作用，这有助于病毒的免疫逃逸。当在体外感染人巨噬细胞时，HIV触发IDO的高水平表达(Grant等，2000)，猿猴免疫缺陷病毒(SIV)在体内对脑的感染诱导巨噬细胞谱系的细胞表达IDO(Burudi等，2002)。

HIV的发病机制以CD4⁺T细胞消耗和慢性T细胞活化为特征，最终导致AIDS(Douek等，2009)。CD4⁺T辅助(TH)细胞通过不同的免疫细胞功能亚群(包括TH1、TH2、T调节性(Treg)和TH17细胞)提供保护性免疫和免疫调节。进行性HIV与TH17细胞的丧失和免疫抑制性Treg细胞部分的反比增加相关。TH17/Treg平衡的丧失与髓样抗原提呈树突状细胞诱导IDO相关(Favre等，2010)。在体外，TH17/Treg平衡的丧失直接由来自IDO代谢的近端色氨酸分解代谢产物3-羟基邻氨基苯甲酸所介导。因此，在进行性HIV中，诱导IDO有助于逆转TH17/Treg平衡并维持慢性炎症状态(Favre等，2010)。因此，IDO抑制剂可用于解决HIV中的TH17/Treg平衡问题。

脓毒症诱导的低血压-全身性炎症(如脓毒症)的特征在于动脉低血压和全身性炎症反应综合征(Riedemann等，2003)。循环促炎性细胞因子(包括干扰素-γ(IFN-γ))的相关增加导致效应分子的无限制产生，所述效应分子例如活性氧物质和活性氮物质，其自身可以促进病理(Riedemann等，2003)。

由内皮细胞中表达的IDO使色氨酸代谢为犬尿氨酸有助于动脉血管舒张和控制血压(Wang等，2010)。使用疟原虫(伯氏疟原虫(Plasmodium berghei))感染小鼠，以及实验性诱导内毒素血症导致IDO的内皮表达，引起血浆中色氨酸减少和犬尿氨酸增加以及低血压。IDO的药理学抑制使得全身性发炎小鼠的血压增加，但是在IDO或干扰素-γ(IDO诱导所需)缺陷小鼠中没有观察到这一现象。犬尿氨酸引起的动脉舒张是由腺苷酸和可溶性鸟苷酸环化酶通路的活化所介导(Wang等，2010)。因此，可以将IDO抑制剂用于治疗脓毒症诱导的低血压。

CNS病症-在中枢神经系统中，TRP的两个结局是作为犬尿氨酸和血清素的前体，其均是值得关注和重要的通路。由犬尿氨酸通路产生的代谢产物涉及在神经炎症和神经退行性疾病的病理机制中发挥作用(总结在图2中)。来自犬尿氨酸通路的第一稳定中间体是KYN。随后，产生若干神经活性中间体。它们包括犬尿酸(KYNA)、3-羟基犬尿氨酸(3-HK)和喹啉酸(QUIN)。3-HK和QUIN通过不同机制而具有神经毒性；3-HK是一种强效的自由基产生剂(Hiraku等，1995；Ishii等，1992；Thevandavakkam等，2010)，而QUIN是一种兴奋毒性的N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体激动剂(Schwarcz等，1983；Stone和Perkins,1981)。另一方面，KYNA作为兴奋性氨基酸受体拮抗剂和自由基清除剂具有神经保护性质(Carpenedo等，2001；Foster等，1984；Goda等，1999；Vecsei和Beal,1990)。犬尿氨酸浓度水平的变化可以将平衡转变成病理状态。影响朝向犬尿氨酸通路的神经保护性分支(即朝向犬尿酸(KYNA)合成)的代谢的能力可能是预防神经退行性疾病的一个选项。

在CNS中，犬尿氨酸通路以不同程度存在于大部分细胞类型中。浸润性巨噬细胞、活化的小胶质细胞和神经元具有完整的犬尿氨酸通路酶库(Guillemin等，2000；Lim等，2007)。

鉴于IDO在若干CNS病症发病机制中的作用，可以将IDO抑制剂用于改善患有各种CNS疾病和神经退行性疾病的患者的结局。

肌萎缩性侧索硬化症-肌萎缩性侧索硬化症(ALS)或卢伽雷氏病是一种靶向运动系统的进行性和致命性的神经退行性疾病。ALS导致运动皮质、脑干和脊髓中运动神经元受到选择性攻击和破坏。

虽然多种机制可能有助于ALS，但是在神经炎症过程中激活的犬尿氨酸通路作为促进因素而出现。初始炎症可能对具有易感基因构成的个体的运动神经元造成非致命性损伤，进而引发进行性炎症过程，其激活小胶质细胞以产生神经毒性犬尿氨酸代谢产物，进一步破坏运动神经元。

已在ALS患者的脑和脊髓中观察到大量活化的小胶质细胞、反应性星形胶质细胞、T细胞和浸润性巨噬细胞(Graves等，2004；Henkel等，2004)。这些细胞释放炎性和神经毒性介质，其中INF-γ是最强效的IDO诱导剂(McGeer和McGeer，2002)。在ALS运动皮质和脊髓中，IDO在神经元和小胶质细胞中的表达增加(Chen等，2010)。有人提出，免疫活化剂的释放激活KP的限速酶IDO，其产生代谢产物如神经毒素QUIN。因此，抑制IDO将减少神经毒素QUIN的合成，所述QUIN已明确QUIN参与ALS的发病机制。

亨廷顿氏病-亨廷顿氏病(HD)是由亨廷顿(htt)基因中CAG重复序列扩增所导致的遗传性常染色体显性神经退行性病症。受HD影响的患者表现出进行性运动功能障碍，其特征在于自主和非自主运动异常(舞蹈病)以及精神和认知紊乱。对KYN通路中代谢产物的生时(in-life)监测提供了与CAG重复序列数目相关并因此与病症严重程度相关的少数生物标记之一(Forrest等，2010)。尸检发现在神经变性区域处存在极高水平的QUIN，而QUIN作为其兴奋性毒素的纹状体谷氨酸能神经元是在该疾病中丧失的主要类别。

阿尔茨海默病-阿尔茨海默病(AD)是以神经元损失和痴呆为特征的与年龄相关的神经退行性病症。该疾病的组织病理学表现为细胞内β-淀粉样蛋白(Aβ)的蓄积和随后形成的神经炎斑，以及在与学习和记忆相关的特定脑区中存在神经原纤维缠结。这种疾病的病理机制仍存在争议，然而，越来越多的证据表明KP代谢产物参与AD的发展和进展。

已发现Aβ(1-42)能够活化原代培养的小胶质细胞并诱导IDO表达(Guillemin等，2003；Walker等，2006)。而且，在与AD患者脑中淀粉样斑相关的小胶质细胞中观察到IDO过表达和QUIN产生增加(Guillemin等，2005)。已发现QUIN在人皮层神经元中导致tau高度磷酸化(Rahman等，2009)。因此，在小胶质细胞中IDO的过表达和KP的过活化参与了AD的发病机制。

精神疾病和疼痛-大部分色氨酸通过犬尿氨酸通路加工。一小部分色氨酸被加工成5-HT并因此被加工成褪黑激素，这两者也都是IDO的底物。早已知晓，除其他影响之外，急性色氨酸耗竭可引发抑郁发作，并且即使在健康个体中也会引起情绪的显著变化。这些观察结果与血清素能药物提高情绪和刺激神经形成的临床益处很好地联系在一起。

抑郁症状的共同发病和犬尿氨酸通路参与炎症也提示了其在治疗慢性疼痛中的作用(Stone和Darlington 2013)。

精神分裂症患者在CSF和脑组织(特别是额叶皮层)中均显示出KYN水平升高。这与在精神分裂症中观察到的“前额叶功能低下(hypofrontality)”相关。事实上，用精神抑制剂处理啮齿动物显示出额面KYN水平显著降低。这些变化与KMO和3HAO减少相关。证据包括KMO多态性、CSF KYN升高和精神分裂症之间的关联(Holtze等，2012)。总而言之，对这个通路的操纵可能是亲同源的和精神抑制的。

疼痛和抑郁通常是合并症。已发现IDO1在这种合并症中发挥关键作用。最近的研究表明IDO活性与下述相关：(a)血清素含量减少和抑郁(Dantzer等，2008；Sullivan等，1992)以及(b)犬尿氨酸含量增加和通过其衍生物(如喹啉酸)对谷氨酸受体的作用使神经可塑性改变(Heyes等，1992)。

在大鼠中，慢性疼痛诱导抑郁行为和双侧海马中的IDO上调。IDO上调导致在双侧海马中犬尿氨酸/色氨酸比率增加和血清素/色氨酸比率降低。而且，IDO基因敲除或海马IDO活性的药理学抑制减弱了伤害性和抑郁行为(Kim等，2012)。

由于促炎性细胞因子与疼痛和抑郁的病理生理学有关，因此促炎性细胞因子对脑IDO的调节通过调节色氨酸代谢而作为疼痛和抑郁之间共病关系的关键机制联系。

多发性硬化症-多发性硬化症(MS)是一种自身免疫性疾病，其特征在于由对髓鞘的特异性免疫反应组成的在神经系统白质中的炎性损伤，其导致炎症和轴突损失(Trapp等，1999；Owens,2003)。

由免疫系统活化引起的神经毒性犬尿氨酸代谢产物的累积参与了MS的发病机制。已发现QUIN在具有EAE的大鼠(一种MS的自身免疫性动物模型)的脊髓中选择性增加(Flanagan等，1995)。据认为，在EAE中增加的QUIN的来源是巨噬细胞。QUIN是脂质过氧化引发剂，在髓鞘附近具有较高的局部QUIN水平可能有助于在EAE和可能在MS中的脱髓鞘。

干扰素β1b(IFN-β1b)在巨噬细胞中诱导KP代谢的浓度与IFN-b治疗患者血清中存在的浓度相当，这可能是其治疗MS疗效的限制因素(Guillemin等，2001)。施用IFN-β后，发现与健康受试者相比，接受IFN-b注射的MS患者血浆中犬尿氨酸水平以及犬尿氨酸/色氨酸比率增加，表明IFN-β对IDO具有诱导作用(Amirkhani等，2005)。IFN-β1b导致QUIN产生的浓度足以干扰神经元树突整合输入信号的能力并杀死少突胶质细胞(Cammer 2001)。在使用IFN-β1b治疗的患者中伴随使用IDO抑制剂阻断KP可以改善IFN-β1b的疗效。

帕金森病-帕金森病(PD)是一种常见的神经退行性病症，其特征在于多巴胺能神经元丢失和局部神经炎症。

帕金森病与小胶质细胞的慢性活化相关(Gao和Hong,2008)。通过诱导IDO的表达，小胶质细胞活化释放神经毒性物质，包括活性氧物质(ROS)和促炎性细胞因子，如IFN-γ(一种KP的强力活化剂)(Block等，2007)。在活化的小胶质细胞中的KP导致3HK和QUIN的上调。3HK主要由于转化为ROS而具有毒性(Okuda等，1998)。ROS和通过QUIN的NMDA受体介导的兴奋性毒性的联合作用导致神经元功能障碍及其死亡(Braidy等，2009；Stone和Perkins,1981)。然而，通过KP活化在神经元中产生的吡啶甲酸(PIC)具有保护神经元免受作为NMDA激动剂的QUIN诱导的神经毒性的能力(Jhamandas等，1990)。小胶质细胞可通过促炎性介质和来自死亡神经元的刺激而变得过度活化，并导致进一步的小胶质细胞活化小胶质细胞增生的永久循环。过度的小胶质细胞增生将导致对邻近神经元的神经毒性并造成神经元死亡，促进帕金森病的发展(Zinger等，2011)。

因此，PD与脑内KP两个主要分支之间的失衡相关。由星形胶质细胞合成的KYNA减少，同时伴随着由小胶质细胞产生的QUIN增加。

HIV-HIV患者(特别是伴有HIV相关性痴呆的患者(Kandanearatchi&Brew 2012))通常在CSF中具有水平显著升高的KYN。这些水平与神经认知下降的发展直接相关，并且通常存在严重的精神病症状(Stone&Darlington 2013)。

癌症-很明显，肿瘤可以诱导对其自身抗原的耐受。癌症中色氨酸的分解代谢越来越被认为是抑制抗肿瘤免疫应答的重要微环境因子。色氨酸的耗竭和免疫抑制性色氨酸分解代谢产物(如犬尿氨酸)的累积通过诱导T-细胞失能和凋亡而在肿瘤和肿瘤引流淋巴结中产生了免疫抑制环境。在肿瘤微环境中的这种免疫抑制可能有助于癌症逃逸免疫应答并增强致瘤性(在Adam等，2012中综述)。

最近，发现了IDO参与肿瘤进展。已发现IDO在多种癌症中过表达。IDO通过将Trp代谢为犬尿氨酸而介导免疫抑制作用，通过能够影响T细胞分化和增殖的GCN2、mTOR和AHR触发下游信号转导。而且，由活化的树突细胞表达IDO可用于活化调节性T细胞(Treg)并抑制肿瘤特异性效应CD8⁺T细胞，从而构成免疫系统通过其能够限制过度的淋巴细胞反应性的机制(在Platten等，2012中综述)。

IDO-已发现IDO表达增加是急性髓性白血病(AML)、小细胞肺癌、黑色素瘤、卵巢癌、结直肠癌、胰腺癌和子宫内膜癌患者中存活率降低的一个独立预后变量(Okamoto等，2005；Ino等，2006)。事实上，来自癌症患者的血清与来自正常志愿者的血清相比具有更高的犬尿氨酸/色氨酸比率(Liu等，2010；Weinlich等，2007；Huang等，2002)。在结直肠癌患者中，IDO表达水平还显示出与肿瘤浸润淋巴结的数目相关(Brandacher等，2006)。

在临床前模型中，使用重组IDO转染免疫原性肿瘤细胞预防了其在小鼠中的排斥(Uyttenhove等，2003)。而将IDO表达消除导致7,12-二甲基苯(a)蒽诱导的癌前皮肤乳头状瘤的发生率和生长降低(Muller等，2008)。而且，IDO抑制减缓肿瘤生长并恢复抗肿瘤免疫(Koblish等，2010)，并且IDO抑制与细胞毒剂、疫苗和细胞因子协同以诱导高效的抗肿瘤活性(Uyttenhove等，2003；Muller等，2005；Zeng等，2009)。

IDO抑制将显著降低犬尿氨酸水平，解除免疫系统的制动，使其攻击并消除肿瘤。虽然有证据表明IDO抑制剂将可作为独立药物使用，但这种类型的抑制剂当与其他癌症免疫疗法联合使用时将特别有效。事实上，已将IDO表达上调鉴定为肿瘤对CTLA-4阻断抗体伊匹单抗产生抗性的机制。伊匹单抗阻断共刺激分子CTLA-4，导致肿瘤特异性T细胞保持活化状态。当与野生型小鼠相比时，使用抗CTLA-4抗体治疗的IDO敲除小鼠表现出B16黑色素瘤肿瘤生长的显著延迟和总体存活增加。而且，CTLA-4阻断与IDO抑制剂显著协同以介导肿瘤排斥。在将IDO抑制剂与抗-PD1和抗-PDL-1抗体联用时也报道了类似的数据(Holmgaard等，2013)。

还可以将影响免疫抑制环境的药剂与嵌合抗原受体T细胞疗法(CAR-T)疗法相关联，以增强疗效和患者应答。

其他疾病-尽管这些作用是应对感染和炎症的防御策略，但它们可能具有意想不到的后果，因为在IDO介导的色氨酸降解过程中形成的犬尿氨酸可以化学修饰蛋白质，并且已发现其具有细胞毒性(Morita等，2001；Okuda等，1998)。在冠心病中，炎症和免疫活化与可能通过干扰素-γ介导的IDO活化而导致的犬尿氨酸血液水平升高有关(Wirleitner等，2003)。在实验性慢性肾衰竭中，IDO活化导致犬尿氨酸血液水平升高(Tankiewicz等，2003)，并且在尿毒症患者尿液中存在犬尿氨酸修饰蛋白(Sala等，2004)。此外，肾脏IDO表达可能在炎症过程中是有害的，因为其增强了肾小管细胞损伤。

不幸的是，全身麻醉模拟诱发应激和炎症过程的多种这些作用。麻醉后认知功能障碍通常与这些后遗症有关。最近，这些缺陷已被证明与心脏手术后和中风恢复中患者的犬尿氨酸通路标志物的变化相关，但不与细胞因子相关(Stone和Darlington 2013)。

白内障-白内障是眼内晶状体的混浊，其导致视力下降。最近的研究表明犬尿氨酸可能化学地改变人体晶状体中的蛋白质结构，导致白内障形成。在人体晶状体中，IDO活性主要存在于前上皮细胞中(Takikawa等，1999)。已经在晶状体中检测到若干种犬尿氨酸，如犬尿氨酸(KYN)、3-羟基犬尿氨酸(3OHKYN)和3-羟基犬尿氨酸葡糖苷(3OHKG)；认为其通过吸收紫外线来保护视网膜，因此通常称为紫外线过滤器。然而，若干近期研究表明，犬尿氨酸易于脱氨和氧化以形成α,β-不饱和酮类，其发生化学反应并修饰晶状体蛋白(Taylor等，2002)。犬尿氨酸介导的修饰可能有助于老化和白内障发生期间的晶状体蛋白修饰。它们还可降低α-晶状体蛋白的分子伴侣功能，其是维持晶状体透明度所必需的。

在晶状体中过表达人IDO的转基因小鼠品系在出生后3个月内发展成双侧白内障。已经证明IDO介导的犬尿氨酸产生导致纤维细胞分化及其凋亡中的缺陷(Mailankot等，2009)。因此抑制IDO可减缓白内障形成的进程。

子宫内膜异位症-子宫内膜异位症是在宫腔外存在子宫内膜，这是一种常见的妇科病症，引起腹痛、性交困难和不孕。通过微阵列分析发现患有子宫内膜异位症的女性的正位子宫内膜中的IDO表达更高(Burney等，2007和Aghajanova等，2011)。而且，发现IDO增强子宫内膜间质细胞的存活和侵袭(Mei等，2013)。因此，可以将IDO抑制剂用于治疗子宫内膜异位症。

避孕和流产-胚胎植入过程需要防止同种异体移植物排斥的机制；并且对胎儿同种异体移植物的耐受性代表了维持妊娠的重要机制。在胎儿-母体界面中表达IDO的细胞通过母体免疫应答保护同种异体胎儿免受致死性排斥。通过将妊娠小鼠暴露于1-甲基色氨酸对IDO进行抑制诱导了T细胞介导的异基因概念性排斥，而同基因概念不受影响；这表明IDO在胎儿-母体界面处的表达对于防止胎儿同种异体移植物排斥是必需的(Munn等，1998)。越来越多的证据表明，IDO在胎儿-母体界面处的产生和正常功能可能在妊娠耐受中发挥重要作用(Durr和Kindler，2013)。因此，可以将IDO抑制剂用作避孕药或流产药。

在上述基础上，发明人已经确定，阻断IDO活性的药物在治疗上述疾病、状况和病症中的治疗应用存在很强的理论基础。

考虑到上述情况，本发明的一个目的是提供IDO抑制剂，特别是用于药物中使用的IDO抑制剂。进一步的目的是提供包含此类抑制剂的药物组合物，特别是提供用于治疗癌症、炎性状况、感染性疾病、中枢神经系统疾病或病症以及其他疾病、状况和病症的化合物和药物组合物。还有一个目的是提供所述化合物的合成方法。

WO 2012/084971公开了具有不同于本申请设想的取代模式的吲哚酰胺化合物。这些化合物作为直接抗菌剂而被公开。IDO抑制未被提及，且未公开所述化合物具有IDO抑制活性或与IDO机制相关的药理学作用。

WO 94/19321和WO 2014/009794各自公开了用于治疗HIV的化合物。最相似的化合物是具有不同于本申请设想的取代模式的吲哚酰胺。在WO 94/19321中，化合物被指示为直接逆转录酶抑制剂，而在WO 2014/009794中，其被指示为直接抗病毒剂。IDO抑制未被提及，且未公开所述化合物具有IDO抑制活性或与IDO机制相关的药理学作用。

WO 2008/002674和WO 03/035621公开了蛋白激酶和磷酸酶抑制剂，其特别可用于治疗癌症。一些这样的化合物是具有不同于本发明人设想的取代模式的吲哚酰胺。IDO抑制未被提及，且未公开所述化合物具有IDO抑制活性或与IDO机制相关的药理学作用，即消除色氨酸消耗/犬尿氨酸生成，伴随T细胞增殖和肿瘤免疫应答的相关增加。

此前，Dolusic等已经对吲哚化合物进行了测试以确定其IDO抑制活性(EuropeanJournal of Medicinal Chemistry 46(2011)3058-3065；Bioorganic and MedicinalChemistry,Vol.19(4),2011,pp1550-1561)。该研究确定某些在2位具有酮取代基的吲哚化合物可能是有用的IDO抑制剂。然而，发现这样的化合物的活性最多是边缘性的。据推断，发明人已研究的酰胺化合物类型与所述酮化合物相比不是有效的抑制剂。然而，发明人现在已确定，Dolusic等关于此类酰胺化合物的观点是错误的，因为某些变体具有高活性。

发明内容

本文公开了具有式(I)的化合物：

其中R²选自-Cl、-Br和-CN；R¹和R⁴独立地选自-H和-F；R⁶³¹、R⁶³²、R⁶⁴¹和R⁶⁴²独立地选自-H、-F和取代的或未取代的C₁-C₃烷基；并且R⁶⁵¹和R⁶⁵²独立地选自-H和取代的或未取代的C₁-C₃烷基和取代的或未取代的苯基；并且其中R⁶³¹、R⁶³²、R⁶⁴¹、R⁶⁴²和R⁶⁵²中的至少一个不是-H，或者其中当R⁶³¹、R⁶³²、R⁶⁴¹、R⁶⁴²和R⁶⁵²全部是-H时，R⁶⁵¹不是Me或Et。

附图说明

图1显示了沿KP的色氨酸分解代谢的示意图(来自“The Kynurenine Pathway inBrain Tumour Pathogenesis”，Adam等，2012,Cancer Res 72:5649-57)。

图2显示了犬尿氨酸参与CNS病症的示意性总结(来自“The kynurenine pathwayas a therapeutic target in cognitive and neurodegenerative disorders”，Stone和Darlington.Br.J.Pharmacol.2013 169(6):1211-27)。

具体实施方式

现已确定，具有上示式(I)的化合物具有强IDO抑制活性。这样的化合物具有用于药物中的显著可能性。因此，可以将该化合物用作IDO抑制剂，例如用于治疗与IDO机制相关的任何疾病。与IDO机制相关的典型疾病在本文的上下文中进行描述，因此本发明将化合物扩展用于治疗这些疾病。

在本发明背景下，R¹和R⁴可以是相同的或不同的，因为独立地对它们进行选择。在典型的实施方式中，R¹和R⁴均是-H。在其他典型的实施方式中，R¹是F且R⁴是H，或R¹是-H且R⁴是-F，或R¹是-F且R⁴是-F。在一个实施方式中，R¹和R⁴两者均是-H，或R¹和R⁴中的一个是-F而另一个是-H，但在一些不太典型的实施方式中，R¹和R⁴两者可以是-F。

R⁶³¹、R⁶³²、R⁶⁴¹和R⁶⁴²可以是相同的或不同的，因为独立地对它们进行选择。在典型的实施方式中，R⁶³¹、R⁶³²、R⁶⁴¹和R⁶⁴²中的至少一个不是-H。在其他实施方式中，R⁶³¹、R⁶³²、R⁶⁴¹和R⁶⁴²中的两个或更多个、三个或更多个、或者全部不是-H。在一个实施方式中，R⁶⁴¹和/或R⁶⁴²不是-H。在一个实施方式中，R⁶⁴²不是-H。然而，不排除其中R⁶³¹、R⁶³²、R⁶⁴¹和R⁶⁴²全部是-H的其他实施方式。当R⁶³¹、R⁶³²、R⁶⁴¹和R⁶⁴²中的一个或多个是取代的或未取代的C₁-C₃烷基时，C₁-C₃烷基通常可以选自甲基(Me)、乙基(Et)、丙基(Pr)和异丙基(i-Pr)。当C₁-C₃烷基是取代的C₁-C₃烷基时，其通常可以选自具有氟取代的烷基，如-CH₂F、CHF₂和-CF₃。

R⁶⁵¹和R⁶⁵²可以是相同的或不同的，因为独立地对它们进行选择。在典型的实施方式中，R⁶⁵¹和R⁶⁵²中的至少一个不是-H。又在其它典型的实施方式中，R⁶⁵¹和R⁶⁵²均不是-H。然而，不排除其中R⁶⁵¹和R⁶⁵²均是-H的其他实施方式。当R⁶⁵¹和R⁶⁵²中的一个或全部两个是取代的或未取代的C₁-C₃烷基时，C₁-C₃烷基通常可以选自甲基(Me)、乙基(Et)、丙基(Pr)和异丙基(i-Pr)。当C₁-C₃烷基是取代的C₁-C₃烷基时，其通常可以选自具有氟取代的烷基，如-CH₂F、CHF₂和-CF₃。当R⁶⁵¹和R⁶⁵²中的一个或全部两个是取代的或未取代的苯基时，通常苯基是未取代的，即是-Ph。在一个实施方式中，如果这些基团中的一个是苯基，则R⁶⁵¹而非R⁶⁵²是苯基。

在本文的结构式中，旨在包括环系的所有互变异构形式(包括6元环的互变异构形式和5元环的互变异构形式)。此外，在本文的结构式中，在未明确指出立体化学的情况下，旨在包括该结构式的所有立体异构体，包括对映异构体、顺反异构体、内消旋化合物等。因此，在手性中心没有给出立体化学的情况下，本发明还包括分离的对映异构体和外消旋混合物。因此，将本发明的化合物扩展至分离的对映异构体，和/或两种或更多种对映异构体的混合物，和/或两种或更多种非对映异构体的混合物(例如，在具有多于一个手性中心的情况下)，和/或两种或更多种差向异构体的混合物，和/或外消旋混合物。

在本发明背景下，在一些实施方式中，R⁶³¹、R⁶³²、R⁶⁴¹和R⁶⁴²中的任意一个可以与R⁶³¹、R⁶³²、R⁶⁴¹和R⁶⁴²中的任意其他基团形成环。在一个实施方式中，未形成环。因此，在一些实施方式中，以下取代基可以一起成环：R⁶³¹和R⁶³²、R⁶³¹和R⁶⁴¹、R⁶³¹和R⁶⁴²、R⁶³²和R⁶⁴¹、R⁶³²和R⁶⁴²以及R⁶⁴¹和R⁶⁴²。在一个实施方式中，连接在相同原子上的R基团不能一起成环，尽管这并未被排除在外。

在本发明的背景下，如果与不存在其时的相同转化相比，化合物的存在能够预防、减少或减缓色氨酸通过IDO而转化为N-甲酰基犬尿氨酸，则认为该化合物是IDO抑制剂。在一个实施方式中，如果化合物在如实施例中所示的基于SKOV-3卵巢腺癌细胞的测定中显示出pIC50值为4.50或更高的抑制活性，则认为化合物是IDO抑制剂。典型地，本发明的化合物所具有的这种pIC50值高于REF 1化合物，更典型地，本发明的化合物具有高于7.00的此pIC50值。

在本发明的所有实施方式(本文上下文)中，除非另有指明，否则当R基团为取代的R基团时，取代基不受特别限制，条件是其不阻止IDO抑制功能的发生。在有关于本发明而被提及的所有实施方式中，除非另有指明，否则在上下文中，取代的R基团上的取代基可以选自-H、-F和-Me。此外，任意取代基可以包括两个或更多个上文所定义的取代基的组合。

如同已描述的，本文公开的化合物具有式(I)：

因此，鉴于已经描述的典型实施方式，在某些实施方式中，本发明涉及如上定义的化合物，该化合物是下式所示的化合物：

其中R²、R⁶³¹、R⁶³²、R⁶⁴¹、R⁶⁴²、R⁶⁵¹和R⁶⁵²具有与上文和本文所述相同的含义，并且其中R⁶³¹、R⁶³²、R⁶⁴¹、R⁶⁴²和R⁶⁵²中的至少一个不是-H，或者其中当R⁶³¹、R⁶³²、R⁶⁴¹、R⁶⁴²和R⁶⁵²全部是-H时，R⁶⁵¹不是-Me或-Et。

另外，鉴于已经描述的典型实施方式，在某些实施方式中，本发明涉及如上定义的化合物，该化合物是下式所示的化合物：

其中R²、R⁶³¹、R⁶³²、R⁶⁴¹、R⁶⁴²和R⁶⁵²具有与上文和本文所述相同的含义，并且其中R⁶³¹、R⁶³²、R⁶⁴¹、R⁶⁴²和R⁶⁵²中的至少一个不是-H。

其中R²和R⁶⁴²具有与上文和本文所述相同的含义，并且其中R⁶⁴²不是-H。在一个实施方式中，R²是-Br和/或R⁶⁴²是C₁-C₃烷基。在另一个实施方式中，R²是-Cl和/或R⁶⁴²是C₁-C₃烷基。在另一个实施方式中，R²是-CN和/或R⁶⁴²是C₁-C₃烷基。在一个实施方式中，R²是-Br且R⁶⁴²是甲基。在另一个实施方式中，R²是-Cl且R⁶⁴²是甲基。在另一个实施方式中，R²是-CN且R⁶⁴²是甲基。

在一个实施方式中，化合物选自：

如前所述，在未指示立体化学的情况下描述本文中任何一种本发明化合物时，旨在包括该化合物的所有可能的立体化学变化。因此，本文上下文中所述的化合物包括所有可能的分离的对映异构体(包括所有可能的分离的(+)对映异构体和所有可能的分离的(-)对映异构体)、所有可能的分离的顺式异构体和所有可能的分离的反式异构体、以及所有可能的内消旋化合物等。本发明还包括任何比例的对映异构体的所有可能的混合物，以及所有可能的外消旋混合物。因此，将本发明的化合物扩展至两种或更多种对映异构体的混合物，和/或两种或更多种非对映异构体的混合物(例如，在具有多于一个手性中心的情况下)，和/或两种或更多种差向异构体的混合物。

在更典型的实施方式中，特定的立体化学是优选的。因此，分离的本文化合物的反式异构体(反式跨环丙烷环)是优选的。在某些更特定的情况下，分离的本文化合物的(+)对映异构体是优选的。

因此，在本发明的典型实施方式中，其中环丙基环上的含吲哚基团与R⁶³¹、R⁶³²、R⁶⁴¹和R⁶⁴²基团中在空间上最大的基团呈反式的化合物是特别优选的。更优选地，在此类化合物中，R⁶³¹、R⁶³²、R⁶⁴¹和R⁶⁴²基团中在空间上最大的基团是R⁶⁴²基团，并且因此在这种情况下，更优选的是环丙基环上的含吲哚基团与R⁶⁴²基团呈反式。此外，此类化合物的(+)对映异构体是优选的，尽管还包括(-)对映异构体、外消旋体和任何比例的对映异构体的混合物。然而，还包括环丙基环上的含吲哚基团与R⁶³¹、R⁶³²、R⁶⁴¹和R⁶⁴²基团中在空间上最大的基团呈顺式的化合物。与反式化合物一样，在这些顺式化合物中，也优选R⁶⁴²基团是R⁶³¹、R⁶³²、R⁶⁴¹和R⁶⁴²基团中在空间上最大的基团，以使得环丙基环上的含吲哚基团与R⁶⁴²基团呈顺式。

另外，鉴于已经描述的典型实施方式，在某些实施方式中，本发明涉及如上定义的化合物，该化合物是手性化合物，其包含具有下式中的一个(分离的对映异构体)或全部两个(外消旋混合物)的外消旋混合物或分离的对映异构体：

其中R²选自-Cl、-Br和-CN；R¹和R⁴独立地选自-H和-F；R⁶³¹、R⁶³²、R⁶⁴¹和R⁶⁴²独立地选自-H、-F和取代的或未取代的C₁-C₃烷基；并且R⁶⁵¹和R⁶⁵²独立地选自-H和取代的或未取代的C₁-C₃烷基和取代的或未取代的苯基；并且其中R⁶⁴²是比R⁶³¹、R⁶³²和R⁶⁴¹中的任意一个在空间上更大的基团。

因此，在本发明的典型实施方式中，本发明涉及如上定义的化合物，该化合物是手性化合物，其包含具有下式中的一个(分离的对映异构体)或全部两个(外消旋混合物)的外消旋混合物或分离的对映异构体：

其中R²选自-Cl、-Br和-CN；R⁶³¹、R⁶³²、R⁶⁴¹和R⁶⁴²独立地选自-H、-F和取代的或未取代的C₁-C₃烷基；R⁶⁵¹和R⁶⁵²独立地选自-H和取代的或未取代的C₁-C₃烷基和取代的或未取代的苯基；并且其中R⁶⁴²是比R⁶³¹、R⁶³²和R⁶⁴¹中的任意一个在空间上更大的基团。

在本发明进一步典型的实施方式中，本发明涉及如上定义的化合物，该化合物是手性化合物，其包含具有下式中的一个(分离的对映异构体)或全部两个(外消旋混合物)的外消旋混合物或分离的对映异构体：

其中R²选自-Cl、-Br和-CN；R⁶³¹、R⁶³²、R⁶⁴¹和R⁶⁴²独立地选自-H、-F和取代的或未取代的C₁-C₃烷基；R⁶⁵²选自-H和取代的或未取代的C₁-C₃烷基和取代的或未取代的苯基；并且其中R⁶⁴²是比R⁶³¹、R⁶³²和R⁶⁴¹中的任意一个在空间上更大的基团。

其中R²选自-Cl、-Br和-CN；并且其中R⁶⁴²独立地选自-F和取代的或未取代的C₁-C₃烷基。此类化合物的分离的(+)对映异构体是优选的。

因此，在本发明典型的实施方式中，以下手性化合物的分离的对映异构体和外消旋混合物是特别优选的：

如上所述，此类化合物的分离的(+)对映异构体是特别优选的。

在替代实施方式(其是不太优选的，但未被排除)中，本发明还提供了手性化合物，其包含具有下式中的一个(分离的对映异构体)或全部两个(外消旋混合物)的外消旋混合物或分离的对映异构体：

因此，在本发明的一些实施方式中，使用具有下式中的一个(分离的对映异构体)或全部两个(外消旋混合物)的下述手性化合物：

在本发明进一步的实施方式中，使用具有下式中的一个(分离的对映异构体)或全部两个(外消旋混合物)的下述手性化合物：

其中R²选自-Cl、-Br和-CN；并且其中R⁶⁴²独立地选自-F和取代的或未取代的C₁-C₃烷基。

因此，在本发明的实施方式中，可以使用下述手性化合物的分离的对映异构体和外消旋混合物：

现在将更加详细地对R基团的性质进行描述。

在典型的实施方式中，R¹和R⁴均是-H。然而，在替代的实施方式中，R¹是-F且R⁴是-H，或者R¹是-H且R⁴是-F。最优选的是R¹和R⁴均是-H，并且优选的是R¹和R⁴中的一个是-F而另一个是-H，同时在不太典型的实施方式中，R₁和R₄均可以是-F。

在典型的实施方式中，R⁶³¹、R⁶³²、R⁶⁴¹和R⁶⁴²中的至少一个不是-H。在其他实施方式中，R⁶³¹、R⁶³²、R⁶⁴¹和R⁶⁴²中的两个或更多个、三个或更多个、或者全部不是-H。在此类实施方式中，优选的是R⁶⁴¹和R⁶⁴²中的一个或全部两个不是-H，并且更优选的是R⁶⁴²不是-H。因此，在最优选的实施方式中，R⁶³¹、R⁶³²和R⁶⁴¹是-H且R⁶⁴²不是-H。然而，不排除其中R⁶³¹、R⁶³²、R⁶⁴¹和R⁶⁴²均是-H的其他实施方式。

当R⁶³¹、R⁶³²、R⁶⁴¹和R⁶⁴²的一个或多个是取代的或未取代的C₁-C₃烷基时，C₁-C₃烷基通常可以选自甲基(Me)、乙基(Et)、丙基(Pr)和异丙基(i-Pr)。当C₁-C₃烷基是取代的C₁-C₃烷基时，其通常可以选自具有氟取代的烷基，如-CH₂F、CHF₂和-CF₃。

在更优选的实施方式中，R⁶⁴²优选是-Me、CF₃或-F。在此类实施方式中，特别优选的是R⁶³¹、R⁶³²和R⁶⁴¹是-H。

R⁶⁵¹和R⁶⁵²可以是相同的或不同的，因为是独立地对它们进行选择。在典型的实施方式中，R⁶⁵¹和R⁶⁵²中的至少一个不是-H。又在其它典型的实施方式中，R⁶⁵¹和R⁶⁵²均不是-H。然而，不排除其中R⁶⁵¹和R⁶⁵²均是-H的其他实施方式。

当R⁶⁵¹和R⁶⁵²中的一个或全部两个是取代的或未取代的C₁-C₃烷基时，C₁-C₃烷基通常可以选自甲基(Me)、乙基(Et)、丙基(Pr)和异丙基(i-Pr)。当C₁-C₃烷基是取代的C₁-C₃烷基时，其通常可以选自具有氟取代的烷基，如-CH₂F、CHF₂和-CF₃。

当R⁶⁵¹和R⁶⁵²中的一个或全部两个是取代的或未取代的苯基时，通常苯基是未取代的，即是-Ph。如果这些基团中的一个是苯基，则更优选地R⁶⁵¹而非R⁶⁵²是苯基。

在更优选的实施方式中，R⁶⁵¹是-Me且R⁶⁵²是-H、-Et或-iPr。

因此，本发明提供了具有下式的分离的对映异构体、外消旋混合物和手性化合物(尚不知晓绝对立体化学，但是(+)对映异构体是优选的，并且可以通过标准方法鉴定(如通过测定其旋光度)，如本文实施例中所证实的)：

分离的(+)和(-)对映异构体和外消旋混合物1：[(+)1、(-)1和外消旋1]，

分离的(+)和(-)对映异构体和外消旋混合物2：[(+)2、(-)2和外消旋2]，

分离的(+)和(-)对映异构体和外消旋混合物7：[(+)7、(-)7和外消旋7]，

在一些情况下，本文的结构式以非立体异构形式表示，在其他情况下则以立体异构形式表示。为避免疑义，当未明确指出立体化学时，在本发明背景下的单一结构式旨在表示特定结构所有可能的立体异构体，包括与结构式对应的所有可能的分离的对映异构体，与结构式对应的所有可能的对映异构体的混合物，与结构式对应的所有可能的非对映异构体的混合物(例如，在具有多于一个手性中心的情况下)，与结构式对应的所有可能的差向异构体的混合物，与结构式对应的所有可能的外消旋混合物，以及与结构式对应的所有可能的顺式和反式异构体。除此之外，上述结构式(以及本文中的所有结构式)旨在表示等同于相应结构式的所有互变异构形式。

在本发明背景下，对药物用途没有特别的限制，只要其是由化合物的IDO抑制作用所促进的用途即可。因此，可以将本发明化合物用于可以使用IDO抑制剂预防、缓解或治疗的任何疾病、状况或病症中。典型地，其包括选自以下的疾病状况和/或病症：癌症、炎性状况、感染性疾病、中枢神经系统疾病或病症、冠心病、慢性肾衰竭、麻醉后认知功能障碍、与女性生殖健康相关的疾病状况或病症(包括避孕或流产)以及白内障。

当疾病、状况或病症是炎性疾病、状况或病症时，对其没有特别的限制，只要该疾病、状况或病症是可以通过使用IDO抑制剂治疗、预防或减轻的疾病、状况或病症即可。然而，典型地，炎性状况是与免疫B细胞、T细胞、树突状细胞、自然杀伤细胞、巨噬细胞和/或中性粒细胞失调相关的状况。

当疾病、状况或病症是癌症时，对其没有特别的限制，只要该癌症是可以通过使用IDO抑制剂治疗、预防或减轻的癌症即可。因此，癌症可以是选自以下的癌症：实体或液体瘤，包括眼、脑(如神经胶质瘤、胶质母细胞瘤、髓母细胞瘤、颅咽管瘤、室管膜瘤和星形细胞瘤)、脊髓、肾脏、嘴、唇、咽喉、口腔、鼻腔、小肠、结肠、甲状旁腺、胆囊、头颈部、乳腺、骨骼、胆管、子宫颈、心脏、下咽腺、肺、支气管、肝脏、皮肤、输尿管、尿道、睾丸、阴道、肛门、喉腺、卵巢、甲状腺、食管、鼻咽腺、垂体腺、唾液腺、前列腺、胰腺、肾上腺的癌症；子宫内膜癌、口腔癌、黑色素瘤、神经母细胞瘤、胃癌、血管瘤病、血管母细胞瘤、嗜铬细胞瘤、胰腺囊肿、肾细胞癌、维尔姆斯瘤、鳞状细胞癌、肉瘤、骨肉瘤、卡波西肉瘤、横纹肌肉瘤、肝细胞癌、PTEN错构瘤-肿瘤综合征(PHTS)(如Lhermitte-Duclos病、Cowden综合征、Proteus综合征和Proteus样综合征)、白血病和淋巴瘤(如急性淋巴细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病，急性髓性白血病、慢性髓性白血病、毛细胞白血病、T细胞幼淋巴细胞白血病(T-PLL)、大颗粒淋巴细胞白血病、成人T-细胞白血病、幼年型粒单核细胞白血病、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤、AIDS相关性淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、弥漫性B细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤和皮肤T细胞淋巴瘤)。更典型地(但非排他地)，癌症是选自急性髓性白血病(AML)、小细胞肺癌、黑色素瘤、卵巢癌、结肠直肠癌、胰腺癌、子宫内膜癌和皮肤乳头状瘤的癌症。

当疾病是感染性疾病时，对其没有特别的限制，只要该疾病是可以通过使用IDO抑制剂治疗、预防或减轻的疾病即可。然而，典型地，感染性疾病选自细菌感染和病毒感染，优选肠道感染、脓毒症、脓毒症诱导的低血压、HIV感染和HCV感染。

当疾病、状况或病症是中枢神经系统疾病、状况或病症时，对其没有特别的限制，只要该疾病、状况或病症是可以通过使用IDO抑制剂治疗、预防或减轻的疾病、状况或病症即可。然而，中枢神经系统疾病、状况或病症通常选自肌萎缩性侧索硬化症(ALS)、亨廷顿氏病、阿尔茨海默病、疼痛、精神紊乱、多发性硬化症、帕金森病和HIV相关性神经认知下降。

当疾病、状况或病症是与女性生殖健康相关的疾病、状况或病症时，对其没有特别的限制，只要该疾病、状况或病症是可以通过使用IDO抑制剂治疗、预防或减轻的疾病、状况或病症即可。在典型的实施方式中，疾病、状况或病症选自妇科疾病，例如子宫内膜异位症。包含在本发明中的与女性生殖健康相关的状况包括避孕和流产，以使得可以将本发明的化合物用作避孕药和/或流产药。

本发明还提供了包含如上定义的化合物的药物组合物。尽管对药物组合物没有特别的限制，但通常组合物还包含药学上可接受的添加剂和/或赋形剂。在药物组合物中，如上定义的化合物可以以上述形式存在，但是替代地可以是适于改善生物利用度、溶解度和/或活性的形式，和/或可以是适于改善制剂的形式。因此，化合物可以是以下形式：药学上可接受的盐、水合物、酸、酯、或其他替代的适宜形式。典型地，组合物用于治疗如上定义的疾病、状况或病症。在一些情况下，化合物可以作为药学上可接受的盐或化合物的其他替代形式而存在于组合物中，以改善药物制剂。

在一些实施方式中，药物组合物是用于治疗癌症的组合物，所述组合物还包含用于治疗癌症的其他药剂。对用于治疗癌症的其他药剂没有特别的限制，只要其为癌症治疗提供一些效用即可。然而，典型地，用于治疗癌症的其他药剂选自抗微管剂、铂配位配合物、烷化剂、抗生素剂、拓扑异构酶II抑制剂、抗代谢剂、拓扑异构酶I抑制剂、激素和激素类似物、信号转导通路抑制剂、非受体酪氨酸激酶血管生成抑制剂、免疫治疗剂、促凋亡剂和细胞周期信号抑制剂。免疫治疗剂可以由下述组成(但不限于)：抗肿瘤疫苗、溶瘤病毒、免疫刺激抗体如抗-CTLA4、抗-PD1、抗-PDL-1、抗-OX40、抗-41BB、抗-CD27、抗-CD40、抗-LAG3、抗-TIM3和抗-GITR、新型佐剂、肽、细胞因子、嵌合抗原受体T细胞疗法(CAR-T)、小分子免疫调节剂、肿瘤微环境调节剂和抗血管生成剂。

本发明还提供了一种治疗疾病和/或状况和/或病症的方法，该方法包括向患者施用如上定义的化合物或组合物。该方法是用于治疗本文所述的任何疾病状况或病症的典型方法。在典型的实施方式中，该方法是用于治疗癌症的方法。优选地，这样的方法包括向患者施用如上定义的化合物或组合物以及如上定义的用于治疗癌症的其他药剂。化合物或组合物以及其他药剂可以同时、顺序或分别施用，这取决于所涉及的药剂和患者以及所示的癌症类型。

通常，在本发明上下文的所有实施方式中，患者是动物，通常是哺乳动物，更通常是人。

本发明还提供了一种合成如上定义的化合物的方法，该方法包括在吲哚2-位的取代基上进行偶联反应(如酰胺偶联反应)。

现在将参考以下具体实施方式仅通过示例更详细地描述本发明。

实验部分

以下实施例仅仅旨在是说明性的，而非以任何方式进行限制。所使用的缩写是本领域中常规的那些或者以下。

ACN 乙腈

℃ 摄氏度

DCM 二氯甲烷

DMA 二甲胺

DMF N,N-二甲基甲酰胺

DMSO 二甲亚砜

EtOAc 乙酸乙酯

EtOH 乙醇

g 克

h 小时

HPLC 高压液相色谱

kg 千克

L 升

LC 液相色谱

LCMS 液相色谱和质谱

Me 甲基

MeOH 甲醇

MS 质谱

MTBE 甲基叔丁基醚

min 分钟

mL 毫升

m/z 质荷比

nm 纳米

nM 纳摩

N 正常

MR 核磁共振

rt或RT 室温

sat. 饱和的

TEA 三乙胺

FA 三氟乙酸

THF 四氢呋喃

制备本发明的示例性化合物，并对其进行测试以确定其作为IDO抑制剂的作用。将其与在PCT公开WO2015150097中公开的对照化合物REF 1、REF 2和REF 3进行比较：

实施例

如同已述的，可以使用已知的偶联反应和易于商购的初始原料合成本文公开的化合物。化合物1至9的示例性合成如下所示。

实施例1：化合物1的合成(对映异构体(+)1和(-)1的外消旋混合物)

外消旋1002A和外消旋1002B的制备

在室温下，向腈1001(25.0g，0.23mol)在THF(135mL)中的溶液中加入Ti(O-i-Pr)₄(73mL，0.46mol)。在氩气氛和-78℃下向上述反应混合物中滴加格氏试剂(500mL，0.58mol)，并在-78℃下搅拌反应混合物0.5小时。然后在环境温度下搅拌反应混合物1小时。在室温下，将BF₃·OEt₂(67.0mL，0.46mol)加入上述反应混合物中并搅拌1小时。反应完成后，使用水(17mL)淬灭反应混合物，使用HCl(2N，30mL)将pH调节至3并搅拌15分钟，然后使用6N NaOH碱化(将pH调节至10)。分离有机层并使用10％CH₂Cl₂/CH₃OH(200mL×2)提取水层。将合并的有机层经无水Na₂SO₄干燥并减压浓缩。通过Combiflash柱色谱(CH₂Cl₂/CH₃OH，0至10％)进一步纯化粗残留物以分离红褐色油状的外消旋1002A(4.0g，11％)(反式)和外消旋1002B(6.0g，14％)(顺式)。MS(MM)m/z 152.1[M+H]⁺。

2A的¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)：δ7.61(s,1H)、7.38(s,1H)、4.32(bs,3H)、4.02(s,3H)、1.25-1.21(m,1H)、1.20-1.16(m,1H)、1.00(d,2H)、0.78(t,1H)。

化合物1的制备(对映异构体(+)1和(-)1的外消旋混合物)

向1003(9.0g，0.046mol)在DMF中的溶液中加入外消旋1002A(7.0g，0.046mol)，随后加入HATU(26.0g，0.06mol)和DIPEA(16.0mL，0.092mol)。在室温下搅拌所得到的反应混合物1小时。用水(200mL)稀释反应混合物并过滤，通过Combiflash柱色谱(己烷/EtOAc，1:1)进一步纯化所得到的固体以获得固体状的化合物1外消旋混合物(2.42g，16％)。MS(MM)m/z 329.1[M+H]⁺；HPLC：96.9％，Zorbax-SB-CN，220nm。

¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)：δ11.66(s,1H)、9.11(s,1H)、7.65(d,1H)、7.56(s,1H)、7.41(d,1H)、7.32(s,1H)、7.15(dd,1H)、7.07(d,1H)、3.76(s,3H)、1.32(m,1H)、1.26(m,1H)、0.89(m,4H)。

将化合物1手性分离为对映异构体(+)1和(-)1

对化合物1(110mg)进行手性色谱以分离对映异构体。产生灰白色固体状的分离的化合物对映异构体(-)1(30.0mg，54％)，还产生灰白色固体状的分离的化合物对映异构体(+)1(21.9mg)。

用于纯化的HPLC条件

柱：Chiralcel OD-H 250x 20mm，5um(批号00H0CJ-QH004；部件号14245)。流动相：己烷：IPA(75:25％v/v)；UV：220nm。

(-)1的分析数据

MS(MM)m/z 329.1[M+H]⁺；HPLC：>99％，Zorbax-SB-CN，220nm；

(-)1：[α]²⁵ _D-125.7°(c 0.1，甲醇)；

¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)：δ11.66(s,1H)、9.11(s,1H)、7.65(d,1H)、7.56(s,1H)、7.41(d,1H)、7.32(s,1H)、7.15(dd,1H)、7.07(d,1H)、3.76(s,3H)、1.32(m,1H)、1.26(m,1H)、0.89(m,4H)。

(+)1的分析数据

MS(MM)m/z 329.1[M+H]⁺；HPLC：>99％，Zorbax-SB-CN，220nm；

(+)1:[α]²⁵ _D+119.2°(c 0.1，甲醇)；

实施例2：化合物2的合成(对映异构体(+)2和(-)2的外消旋混合物)

化合物2的制备(对映异构体(+)2和(-)2的外消旋混合物)

在室温下，向1004(9.0g，0.037mol)在DMF中的溶液中加入外消旋1002A和外消旋1002B的粗混合物(19.0g，通过如上所述的将化合物1001转化为1002A/1002B而获得，但不分离反式和顺式异构体)，随后加入HATU(21.0g，0.056mol)和DIPEA(13.0mL，0.075mol)。在室温下搅拌所得到的反应混合物1小时。反应完成后，将反应混合物倒入水(200mL)中，过滤，然后通过Combiflash柱色谱使用120g

柱(己烷/EtOAc，1：1)将获得的固体进一步纯化以分离反式和顺式异构体，以得到固体状的化合物2外消旋混合物(2.40g，14％)。MS(MM)m/z 373.1[M+H]⁺；HPLC：96.9％，Zorbax-SB-CN，220nm。

¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)：δ11.68(s,1H)、9.13(s,1H)、7.80(s,1H)、7.56(s,1H)、7.35(t,2H)、7.25(d,1H)、7.07(s,1H)、3.76(s,3H)、1.32(m,1H)、1.26(m,1H)、0.89(m,4H)。

将化合物2手性分离为对映异构体(+)2和(-)2

对化合物2(110mg)进行手性HPLC纯化分离对映异构体。产生固体状的分离的化合物2对映异构体(-)2(20mg，rt，9.64)和对映异构体(+)2(20mg，rt，13.59)。

用于纯化的制备性HPLC条件

柱：Chiralcel OD-H 250x 20mm，5um(批号00H0CJ-QH004；部件号14245)。流动相：己烷：IPA(75:25％v/v)。

UV:220nm

(-)2的分析数据

MS(MM)m/z 373.1[M+H]⁺；HPLC：>99％，Zorbax-SB-CN，220nm；

(-)2：[α]²⁵ _D-120°(c 0.1，甲醇)；

¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)：δ11.68(s,1H)、9.12(s,1H)、7.80(dd,1H)、7.56(s,1H)、7.35(t,2H)、7.25(dd,1H)、7.07(dd,1H)、3.76(s,3H)、1.32(m,1H)、1.26(m,1H)、0.89(m,4H)。

(+)2的分析数据

MS(MM)m/z 373.1[M+H]⁺；HPLC：99.0％，Zorbax-SB-CN，220nm；

(+)2:[α]²⁵ _D+110°(c 0.1，甲醇)；

实施例3：化合物7的合成(对映异构体(+)7和(-)7的外消旋混合物)

1006的制备

向1005(10.0g，68.7mmol)在庚烷(100ml)中的溶液中加入(Boc)₂O(16.4mL，76.6mmol)。在80℃下将反应混合物搅拌16小时后，蒸发溶剂并通过Combiflash柱色谱(己烷/EtOAc，1:2)纯化残留物以获得固体状的1006(7.0g，43％)。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δ7.44(dd,1H)、7.27(t,1H)、6.94(dd,1H)、6.53(s,1H)、1.50(s,9H)。

1007的制备

在-78℃下，向1006(7.0g，28.5mmol)在THF(70ml)中的溶液中加入n-BuLi(2.5M)(34.2mL，85.5mmol)。在将反应混合物搅拌0.5小时后，在-78℃下，加入含碘(25.2g99.7mmol)的THF。然后，在-78℃下搅拌反应混合物2小时，用NH₄Cl水溶液(50mL)淬灭并用EtOAc(2x 100mL)萃取。将合并的有机层经无水Na₂SO₄干燥，并通过Combiflash柱色谱(己烷/EtOAc，1:2)纯化以获得固体状的1007(5.0g，粗品)。

1008的制备

在室温下向1007(3.0g，8.0mmol)在CH₂Cl₂(30mL)中的溶液中加入TFA(10.0mL)。在室温下搅拌反应混合物16小时后，蒸发溶剂并使用己烷(20mL)洗涤粗品以获得固体状的1008(1.0g，粗品)。

1009的制备

向1008(3.0g，11.07mmol)在DMF(40ml)中的溶液中加入丙酮酸(2.4mL，33.2mmol)和DABCO(3.7mL，33.2mmol)。然后使用氩气将反应混合物脱气10分钟，并加入Pd(OAc)₂(246mg)。在100℃下搅拌反应混合物3小时后，将水(15ml)加入反应混合物中，然后使用EtOAc(2x 30mL)萃取。将合并的有机层经无水Na₂SO₄干燥并减压浓缩。通过Combiflash柱色谱(己烷/EtOAc，1:2)纯化粗残留物以获得固体状的1009(1.0g，43％)。¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)：δ12.32(s,1H)、7.31(q,2H)、7.12(s,1H)。

化合物7的制备(对映异构体(+)7和(-)7的外消旋混合物)

向1009(100mg，4.69mmol)在DMF中的溶液中加入1002A(通过如上所述的将化合物1001转化为1002A/1002B而获得)(71mg，4.69mmol)，随后加入HATU(267mg，7.03mmol)和DIPEA(0.16mL，9.38mmol)。在室温下搅拌1小时后，用水(20mL)稀释反应混合物，然后通过过滤收集固体，并通过Combiflash柱色谱(己烷/EtOAc，1:1)进一步纯化以获得固体状的化合物7外消旋混合物(42mg，26％)。MS(MM)m/z 347.1[M+H]⁺；HPLC：96.9％，Zorbax-SB-CN，220nm。

¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)：δ12.0(s,1H)、9.18(s,1H)、7.56(s,1H)、7.33(s,1H)、7.24(t,3H)、3.76(s,3H)、1.32(m,1H)、1.18(m,1H)、0.91(m,4H)。

实施例4：化合物5的合成

1011的制备

向1010(1.0g，5.43mmol)在THF(12mL)中的溶液中加入t-BuONO(0.67g，6.52mmol)。回流搅拌3小时后，用水(20mL)稀释反应混合物，并使用EtOAc(25mL×3)萃取。将合并的有机层经无水Na₂SO₄干燥并减压浓缩。通过Combiflash柱色谱(己烷/EtOAc，1:1)纯化粗残留物以获得固体状的1011(800mg，87％)。¹H NMR(300MHz，CDCl₃)：δ8.31(d,1H)、8.00(s,1H)、7.68(m,2H)、7.52(m,2H)、7.43(m,1H)。

1012的制备

在室温下，向腈1011(300mg，1.77mmol)在THF(3mL)中的溶液中加入Ti(O-i-Pr)₄(0.6mL，1.94mmol)。在氩气氛和-78℃下向反应混合物中滴加格氏试剂(4.5mL，4.43mmol)，并将反应混合物在-78℃下搅拌0.5小时，然后在环境温度下搅拌1小时。在室温下，将BF₃·OEt₂(0.5mL，3.54mmol)加入上述反应混合物中并搅拌1小时。反应完成后，用水(3.0mL)淬灭反应混合物，用2M HCl(2.0mL)调至pH＝3并搅拌15分钟，然后使用6N NaOH碱化直至pH＝10。使用10％CH₂Cl₂/MeOH(15mL×3)萃取反应混合物。将合并的有机层经无水Na₂SO₄干燥并减压浓缩。通过Combiflash柱色谱(CH₂Cl₂/MeOH，0至10％)进一步纯化粗残留物以获得油状的1012(60mg，17％)。MS(MM)m/z 199.1[M+H]⁺。

化合物5的制备

向1012(60mg，0.30mmol)在DMF(1.2mL)中的溶液中加入1003(58mg，0.30mmol)，随后加入EDC·HCl(115mg，0.60mmol)、HOBT(81mg，0.60mmol)和DIPEA(0.15mL，0.60mol)。在室温下搅拌反应混合物16小时后，用水(15mL)稀释反应混合物，通过过滤收集固体并通过Combiflash柱色谱(己烷/EtOAc，1:1)将其进一步纯化以获得固体状的5(10mg，11％)。MS(MM)m/z377.0[M+H]⁺；HPLC：>99％，Eclipse XDB C18，220nm。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ11.73(s,1H)、9.22(s,1H)、8.26(s,1H)、7.77(d,2H)、7.69(s,1H)、7.58(s,1H)、7.44(m,3H)、7.26(t,1H)、7.18(t,2H)、1.22(d,4H)。

实施例5：化合物4的合成

1014的制备

在室温下，向腈1013(500mg，3.3mmol)在THF(10mL)中的溶液中加入Ti(O-i-Pr)₄(1mL，8.3mmol)。在氩气氛和-15℃下向上述反应混合物中滴加格氏试剂(2.7mL，8.3mmol)，并将反应混合物在-15℃下搅拌0.5小时，然后在环境温度下搅拌1小时。在室温下，将BF₃·OEt₂(1.4mL，9.9mmol)加入上述反应混合物中并搅拌1小时。反应完成后，用水(1mL)淬灭反应混合物，用2M HCl(3mL)调至pH＝3并搅拌15分钟，然后用6N NaOH碱化直至pH＝10。收集有机层并使用EtOAc(20mL×2)萃取水层。将合并的有机层经无水Na₂SO₄干燥并减压浓缩以获得1014(500mg)，其未经纯化即用于下一步骤。

化合物4的制备

向1003(200mg，1.0mmol)在DMF(10mL)中的溶液中加入1014(196mg，1.1mmol)，随后加入HATU(760mg，2.0mmol)和DIPEA(0.5mL，3.0mmol)。将所得到的反应混合物在室温下搅拌1小时。用水(20mL)稀释反应混合物，过滤并通过Combiflash柱色谱(己烷/EtOAc，1:1)进一步纯化所得到的固体以获得固体状的化合物4(95mg，24％)。MS(MM)m/z 357.9[M+H]⁺；HPLC：98％，Eclipse XDB C18，220nm。

¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)：δ11.66(s,1H)、8.91(s,1H)、7.65(s,1H)、7.45(s,1H)、7.34(d,1H)、7.15(m,2H)、3.69(s,3H)、2.56(m,1H)、1.19(d,6H)、1.19(m,4H)。

实施例6：化合物3的合成

1016的制备

在室温下，向腈1015(500mg，3.7mmol)在THF(10mL)中的溶液中加入Ti(O-i-Pr)₄(1.1mL，4.0mmol)。在氩气氛和-15℃下向上述反应混合物中滴加格氏试剂(3.0mL，9.2mmol)，并将反应混合物在-15℃下搅拌0.5小时，然后在环境温度下搅拌1小时。在室温下，将BF₃·OEt₂(1.0mL，7.4mmol)加入上述反应混合物中并搅拌1小时。反应完成后，用水(1mL)淬灭反应混合物，用2M HCl(3mL)调至pH＝3并搅拌15分钟，然后用6N NaOH碱化直至pH＝10。收集有机层并使用EtOAc(20mL×2)萃取水层。将合并的有机层经无水Na₂SO₄干燥并减压浓缩以获得1016(300mg)，其未经纯化即用于下一步骤。

化合物3的制备

向1003(200mg，1.0mmol)在DMF(10mL)中的溶液中加入1016(186mg，1.1mmol)，随后加入HATU(760mg，2.0mmol)和DIPEA(0.5mL，3.0mmol)。将所得到的反应混合物在室温下搅拌1小时。用水(20mL)稀释反应混合物，过滤并通过Combiflash柱色谱(己烷/EtOAc，1:1)进一步纯化所得到的固体以获得固体状的化合物3(55mg，13％)。

MS(MM)m/z 342.8[M+H]⁺；HPLC：99％，Eclipse XDB C18，220nm。

¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)：δ11.66(s,1H)、8.99(s,1H)、7.67(s,1H)、7.56(s,1H)、7.35(d,1H)、7.16(d,1H)、7.09(s,1H)、3.67(s,3H)、2.69(q,2H)、1.15(m,5H)、0.96(m,2H)。

实施例7：化合物6的合成

1018的制备

向1017(10.0g，52.6mmol)在乙醇(50ml)中的溶液中加入硫酸银(16.4g，52.6mmol)和I₂(25.2g，99.9mmol)。将所得到的反应混合物在室温下搅拌3小时。自反应混合物中蒸发溶剂，使用硫代硫酸钠溶液(3x20ml)洗涤粗化合物，然后使用EtOAC(3x50mL)萃取。将合并的有机层经无水Na₂SO₄干燥并减压浓缩。通过Combiflash柱色谱(己烷/EtOAc，1:2)纯化粗残留物以获得固体状的1018(13g，79％)。¹H NMR(300MHz，CDCl₃)：δ7.54(s,1H)、7.15(dd,1H)、4.12(s,1H)。

1019的制备

向1018(13.0g，41.2mmol)在DMF(50ml)中的溶液中加入丙酮酸(10.89mL，123.8mmol)和DABCO(13.8mL，123.8mmol)。在室温下使用氩气将反应混合物脱气10分钟并加入Pd(OAc)₂(923mg，4.12mmol)。在100℃下搅拌反应混合物3小时后，将水(50ml)加入反应混合物中，然后使用EtOAc(2x 50mL)对其进行萃取。将合并的有机层经无水Na₂SO₄干燥并减压浓缩。通过Combiflash柱色谱(己烷/EtOAc，1:2)纯化粗残留物以获得固体状的1019(2.0g，19％)。¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)：δ13.25(bs,1H)、12.52(s,1H)、7.71(s,1H)、7.33(d,1H)、7.15(s,1H)。

化合物6的制备

向1019(200mg，0.77mmol)在DMF(10mL)中的溶液中加入1020(116mg，0.85mmol)，随后加入HATU(585mg，1.54mmol)和DIPEA(0.4mL，2.31mmol)。在室温下搅拌所得到的反应混合物1小时。用水(20mL)稀释反应混合物，过滤并通过Combiflash柱色谱(己烷/EtOAc，1:1)进一步纯化所得到的固体以获得固体状的化合物6(65mg，22％)。MS(MM)m/z 377.1[M+H]⁺；HPLC：90.5％，Eclipse XDB C18，220nm。

¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)：δ12.26(s,1H)、9.17(s,1H)、7.70(s,1H)、7.49(s,1H)、7.25(m,3H)、3.73(s,3H)、1.16(m,4H)。

实施例8：化合物8-对映异构体1和2的合成

外消旋1021A和外消旋1021B的制备

在0℃下，向腈1011(6.0g,35.5mmol)在THF(70mL)中的溶液中加入Ti(O-i-Pr)₄(11.09mL，39.05mmol)。在氩气氛下向上述反应混合物中滴加格氏试剂的1M THF溶液(78.1mL，78.1mmol)，并将反应混合物在-78℃下搅拌0.5小时。然后将反应混合物在0℃下搅拌1.5小时。将BF₃·OEt₂(10.0mL，71.1mmol)加入上述反应混合物中，将其搅拌0.5小时。反应完成后，使用HCl(2N，30mL)处理反应混合物并搅拌15分钟，然后使用6N NaOH碱化。使用乙酸乙酯(3x100mL)萃取混合物，将有机层经无水Na₂SO₄干燥并减压浓缩。通过Combiflash柱色谱(乙酸乙酯/己烷，0至100％)进一步纯化粗残留物以分离外消旋1021A(1.0g)(反式)和外消旋1021B(0.8g)(顺式)油状物。

MS(MM)m/z：214.1[M+H]⁺。

化合物8对映异构体1和2的制备

向1003(0.546g，2.8mmol)在DCM(20mL)中的溶液中加入外消旋1101A(0.5g，2.8mmol)，随后加入乙基碳二亚胺盐酸盐(1.07g，5.6mmol)、羟基苯并三唑(0.756g，0.056mol)和4-二甲基氨基吡啶(0.34g，2.8mmol)。将所得到的反应混合物在室温下搅拌18小时。反应完成后，将反应混合物倒入水(30mL)中，用乙酸乙酯(3x20mL)对其进行萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并蒸发。通过Combiflash柱色谱使用40g

柱(EtOAc/己烷，0-70％)纯化以提供固体状的外消旋化合物8。

对外消旋化合物8(400mg)进行手性HPLC纯化以分离对映异构体。产生固体状的分离的化合物8对映异构体1(142mg，rt，20.39)和对映异构体2(129mg，rt，25.81)。

用于纯化的制备性HPLC条件

柱：Chiralpak IC 250x 20mm，5um(批号IC00CJ-RC003；部件号83345)。流动相：正己烷：乙醇：DEA(95：5：0.1％v/v/v)。

化合物8对映异构体1：

MS(MM)m/z：391.1[M+H]⁺。

手性HPLC：99.1％，

¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)：δ11.70(s,1H)、9.21(s,1H)、8.34(s,1H)、7.80(d,J＝7.8Hz,2H)、7.69(s,1H)、7.67(d,J＝1.5Hz,1H)、7.49-7.40(m,3H)、7.27(t,J＝7.5Hz,1H)、7.16(dd,J＝9.0,2.1Hz,2H)、7.12(s,1H)、1.46-1.37(m,1H)、1.27-1.22(m,1H)、1.09(t,J＝6.0Hz,1H)、0.97(d,J＝6.0Hz,3H)。

化合物8对映异构体2：

MS(MM)m/z：391.1[M+H]⁺。

手性HPLC：97.9％，

¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)：δ11.69(s,1H)、9.20(s,1H)、8.34(s,1H)、7.80(d,J＝7.8Hz,2H)、7.69(s,2H)、7.67(d,J＝1.2Hz,1H)、7.49-7.40(m,3H)、7.27(t,J＝7.2Hz,1H)、7.16(dd,J＝9.0,2.1Hz,2H)、7.12(s,1H)、1.46-1.37(m,1H)、1.27-1.22(m,1H)、1.09(t,J＝6.0Hz,1H)、0.97(d,J＝6.0Hz,3H)。

实施例9：化合物9-11的制备

使用经公开的用于制备化合物8的一般方法和有机合成的常识，制备下表中的化合物9-11。

实施例10：化合物12的合成

向含有5-氰基-1H-吲哚-2-甲酸(250mg，1.34mmol)和HATU(664mg，1.75mmol)的20mL小瓶中加入DMF(5040μl)。将反应物在室温下搅拌5分钟。然后将溶于DMF(1680μl)中的(1R,2R)-2-甲基-1-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙胺(229mg，1.52mmol)加入活化的酸反应混合物中，随后加入二异丙基乙胺(DIPEA)(1060μl，6.04mmol)。将反应混合物在室温下搅拌30分钟，然后使用乙酸乙酯稀释并使用饱和NaHCO₃洗涤。将合并的有机相经无水硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩以获得油状物。

通过柱层析纯化粗产物，使用100％己烷至100％乙酸乙酯的梯度洗脱。通过非手性SFC(柱：Chiralcel OJ-H,21x 250(mm)；改性剂：甲醇+0.25％二甲基乙胺；改性剂在CO₂中的％：20)对所获得的油状物进行进一步纯化以获得固体状的5-氰基-N-((1R,2R)-2-甲基-1-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环丙基)-1H-吲哚-2-甲酰胺，得到化合物12。

MS ESI计算值C₁₈H₁₇N₅O[M+H]⁺320，实测值320。

¹H NMR(600MHz，DMSO-d₆)δ12.06(s,1H)、9.25(s,1H)、8.21(s,1H)、7.57-7.49(m,3H)、7.33(s,1H)、7.24(s,1H)、3.77(s,3H)、1.35-1.30(m,1H)、0.92-0.88(m,5H)。

生物测定

对于REF1-REF3和化合物1-11，使用两种不同类型的测定：1.IDO生化偶联测定，其使用重组生产和纯化的IDO酶与甲酰胺酶的组合。该偶联酶系允许由IDO活性产生的N-甲酰犬尿氨酸转化为犬尿氨酸，然后通过加入Erhlich试剂后的荧光对其进行定量。2.基于细胞的测定，用于检测测试化合物对癌细胞中犬尿氨酸产生的影响。该测定利用了表达IDO的癌细胞，并因此被用作测试化合物对细胞背景下的酶的活性的手段。这些测定方案在以下列出。

IDO生化测定

在存在50mM KPO₄，pH 7.0，0.5mM EDTA、0.5mM EGTA、0.05％Triton X-100、20mM抗坏血酸盐、500U/ml过氧化氢酶、10μM亚甲基蓝的情况下，在室温下在384孔板中将0.17μM人IDO蛋白与测试化合物在室温下预孵育120分钟。加入0.05μg/μl犬尿氨酸甲酰胺酶和45μM L-色氨酸(L-Trp)，并将测定系统在室温下孵育40分钟。终止测定并通过在室温下与Ehrlich试剂孵育至终浓度1.33％来确定犬尿氨酸的水平。在475nm/530nm下读取荧光强度。

基于细胞的IDO测定

在补充有15％胎牛血清的McCoys 5A+L-Glutamax培养基中生长SKOV-3卵巢腺癌(ATCC)细胞。在测定当天，使用胰蛋白酶-EDTA(0.25％v/v)分离细胞并在测定培养基(补充有10％经透析的胎牛血清的RPMI 1640无酚红+L-谷氨酰胺)中将细胞再悬。以40K细胞每孔将SKOV-3细胞接种在96孔板中，所述96孔板含有测试样品/载剂对照以及500mM L-Trp。然后在37℃、5％CO₂下培养细胞48小时。还以500ng/ml加入IFNγ培养48小时以诱导IDO表达。将板离心并弃去上清，在存在1％Erhlich试剂的条件下孵育5分钟。然后通过测量490nm处的吸光度对犬尿氨酸水平进行定量。

REF1-REF3和化合物1-11的pIC50值在表1中示出。

表1-抑制IDO的pIC50值(SKOV-3细胞)

化合物	pIC<sub>50</sub>，IDO细胞测定(SKOV3)
		REF 1	6.90
REF 2	6.73
		REF 3	6.74
化合物1，(+)1	7.38
		化合物1，(-)1	6.44
化合物1，外消旋	7.10
		化合物2，(-)2	6.55
化合物2，(+)2	7.67
		化合物2，外消旋	7.50
化合物3	7.05
		化合物4	7.06
化合物5	7.04
		化合物6	7.08
化合物7，外消旋	7.06
		化合物8，对映异构体1	7.73
化合物8，对映异构体2	7.83
		化合物9，对映异构体1	7.11
化合物9，对映异构体2	7.36
		化合物10，对映异构体1	7.46
化合物10，对映异构体2	7.93
		化合物11，对映异构体1	7.55
化合物11，对映异构体2	8.00

该表显示，所测试的化合物在基于细胞的测定中显示出强IDO抑制功能。将其与REF化合物进行比较，后者的得分对于每个测试而言均较差。

根据上述方案进行了生化酶测定，并且结果证实了化合物确实具有酶抑制剂的活性。结果在表2中示出。

表2-REF1-REF3和化合物1-7抑制IDO的pIC50值

化合物	hIDO生化测定pIC50
		REF 1	5.42
REF 2	5.17
		REF 3	5.84
化合物1，(+)1	6.40
		化合物1，(-)1	5.77
化合物1，外消旋	5.90
		化合物2，(-)2	5.54
化合物2，(+)2	6.42
		化合物2，外消旋	6.40
化合物3	6.36
		化合物4	6.35
化合物5	4.84
		化合物6	5.96
化合物7，外消旋	5.87

针对化合物12的IDO1细胞测定

自10mM DMSO储备液开始使用DMSO将待测化合物进行10次3倍比例系列稀释。然后使用Echo 550声控移液设备(Labcyte)将化合物稀释物或单独的DMSO由稀释板分配到Greiner黑色384孔测定板(目录号781086)。

在完全HEK293培养基(89％DMEM、10％FBS、1％青霉素/链霉素)中将HEK293细胞球团再悬为5x 10⁵个细胞/mL。将再悬的细胞(2mL)分配到6孔Corning板(目录号3516)的各孔中。使细胞贴附并在37℃下在5％CO₂培养箱中将其培养20小时。将在150uL Opti-MEM培养基中的Flag-IDO1载体(Genscript True ORF Gold，2ug)添加到Corning24孔板(目录号3527)的每个孔中，并在室温下孵育5分钟。向24孔板的每个孔中加入150μL Lipofectamine2000(Gibco)，并将板在室温下孵育20-30分钟。向在6孔板中贴附细胞的各孔中轻柔加入250μL来自24孔板的转染混合物，并使IDO1蛋白在37℃下在5％CO₂培养箱中表达24-30小时。

自细胞除去培养基，然后使用2mL Dulbecco磷酸盐缓冲盐水(DPBS)洗涤细胞。除去DPBS后，加入0.5mL TrypLE(Gibco)并孵育5分钟直至细胞从孔表面上升起。向各孔中加入完全HEK293培养基(4mL)，收集细胞并汇集至锥形管中。在200xg下离心5分钟使细胞成团，并将其再悬于等体积的完全DMEM培养基中。在完全HEK293培养基中将细胞稀释至4x10⁵个细胞/mL。加入L-色氨酸以得到200μM的最终浓度。将稀释的转染细胞(50μL)或非转染细胞(50μL)分配至含有此前稀释的化合物的Greiner黑色384孔测定板(目录号781086)的各孔中。将板简单混合并在200xg下离心10秒以收集板底部的细胞。将板覆盖并在37℃下在5％CO₂培养箱中孵育20-24小时。然后将10μL含0.5M六氢异烟酸甲酯的二甲亚砜加入各孔中，混合，密封并在500rpm下离心10秒。在37℃下在5％CO₂培养箱中孵育板过夜以显影荧光。使板冷却，然后在1000xg下离心1分钟。在具有400/25nm激发滤光片和510/20nm发射滤光片的Envision酶标仪(Perkin Elmer)中对所得到的荧光进行测量。

针对在未转染细胞的孔中观察到的背景对每个孔的荧光强度进行校正，并将其表示为仅在IDO1转染细胞和DMSO的孔中观察到的强度的分数。通过拟合至四参数逻辑IC₅₀方程的线性最小二乘法计算效力。

使用上述测定，在瞬时表达hIDO1的HEK293细胞系中化合物12具有202nM的IC50(n＝1)。

尽管已参考本发明的某些特定实施方式对本发明进行了描述和说明，但是本领域技术人员将会意识到，在不脱离本发明精神和范围的情况下，可以对程序和方案进行各种改编、改变、修饰、替换、删除或添加。

Claims

1.一种具有式(I)的化合物，或其药学上可接受的盐：

其中R²选自-Cl和-Br；R¹和R⁴独立地选自-H和-F；R⁶³¹、R⁶³²、R⁶⁴¹和R⁶⁴²独立地选自-H、-F和C₁-C₃烷基；R⁶⁵¹和R⁶⁵²独立地选自-H、C₁-C₃烷基、和苯基；并且其中R⁶³¹、R⁶³²、R⁶⁴¹、R⁶⁴²和R⁶⁵²中的至少一个不是-H，或者其中当R⁶³¹、R⁶³²、R⁶⁴¹、R⁶⁴²和R⁶⁵²全部是-H时，R⁶⁵¹不是Me或Et，并且所述化合物不是

2.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，所述化合物是下式所示的化合物：

3.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，所述化合物是下式所示的化合物：

其中R⁶³¹、R⁶³²、R⁶⁴¹、R⁶⁴²和R⁶⁵²中的至少一个不是-H。

4.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，所述化合物是下式所示的化合物：

其中R⁶⁴²是甲基或乙基。

5.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，所述化合物是具有下式之一的化合物：

6.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，所述化合物是具有下式中的一个或两个的分离的对映异构体或外消旋混合物：

其中R⁶⁴²是比R⁶³¹、R⁶³²和R⁶⁴¹中的任意一个在空间上更大的基团。

7.根据权利要求1所述的化合物，所述化合物是分离的对映异构体或外消旋混合物，其具有下式中的一个或两个：

或者下式中的一个或两个：

8.根据权利要求1所述的化合物，其是下式中的任意一个所示的分离的对映异构体、外消旋混合物或非手性化合物：

9.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，所述化合物包括：

-分离的对映异构体；

-两种或更多种对映异构体的混合物，

-两种或更多种非对映异构体的混合物，

-外消旋混合物，

-反式异构体；和/或

-所述化合物的一种或多种互变异构体。

10.一种药物组合物，其包含权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐。

11.根据权利要求10所述的药物组合物，其还包含药学上可接受的添加剂和/或赋形剂。

12.根据权利要求11所述的药物组合物，其还包含选自以下的药剂：抗肿瘤疫苗；免疫调节剂；酪氨酸激酶抑制剂。

13.一种用于治疗癌症的药物试剂盒，所述药物试剂盒包含：

(a)权利要求1所述的化合物；以及

(b)用于治疗癌症的其他药剂；其中所述用于治疗癌症的其他药剂选自抗微管剂、铂配位配合物、烷化剂、抗生素剂、拓扑异构酶II抑制剂、抗代谢剂、拓扑异构酶I抑制剂、激素和激素类似物、信号转导通路抑制剂、非受体酪氨酸激酶血管生成抑制剂、免疫治疗剂、促凋亡剂和细胞周期信号抑制剂；

其中所述化合物和所述其他药剂适于同时、顺序或单独施用。

14.权利要求1所述的化合物在制备用于治疗患者中与IDO机制相关的疾病和/或状况和/或病症的药物中的用途。

15.根据权利要求14所述的用途，其中所述疾病或状况或病症是选自以下的癌症：实体或液体瘤，所述实体或液体瘤选自眼、脑、脊髓、肾脏、嘴、唇、咽喉、口腔、鼻腔、小肠、结肠、甲状旁腺、胆囊、头颈部、乳腺、骨骼、胆管、子宫颈、心脏、下咽腺、肺、支气管、肝脏、皮肤、输尿管、尿道、睾丸、阴道、肛门、喉腺、卵巢、甲状腺、食管、鼻咽腺、垂体腺、唾液腺、前列腺、胰腺、肾上腺的癌症；子宫内膜癌、神经母细胞瘤、胃癌、血管瘤病、嗜铬细胞瘤、鳞状细胞癌、肉瘤、PTEN错构瘤-肿瘤综合征(PHTS)、白血病和淋巴瘤。

16.根据权利要求15所述的在制备用于治疗癌症的药物中的用途，所述癌症的治疗包括向患者施用权利要求1所述的化合物以及如权利要求12中所定义的用于治疗癌症的其他药剂；其中所述化合物以及所述其他药剂同时、顺序或单独施用。

17.根据权利要求14所述的用途，其中所述患者是动物。