CN108310384A - Pi3k抑制剂在制备治疗血小板数量减少相关疾病药物中的用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开PI3K抑制剂在制备治疗血小板数量减少相关疾病药物中的用途。首次通过实验探究PI3K在调控血小板被清除过程中的作用，证明血小板减少症患者的血小板发生活化和凋亡。抗Ibα抗体诱导PI3K活化，PI3K活化后激活Akt，Akt介导血小板活化和凋亡。Akt通过磷酸二酯酶介导的蛋白激酶A活化调控血小板凋亡。凋亡和活化血小板暴露PS，被肝脏的巨噬细胞吞噬。抑制PI3K活化，抑制血小板活化和凋亡，阻断血小板被清除，表明PI3K抑制剂可用于血小板数量变化相关疾病的治疗，抑制外周循环血中血小板数量减少，因此，上述抑制剂具有开发成新型血小板保护药物和治疗血小板减少性疾病药物的潜力，极具科研和经济价值。

Description

PI3K抑制剂在制备治疗血小板数量减少相关疾病药物中的 用途

技术领域

本发明属于血小板相关药物领域，具体涉及PI3K抑制剂在制备治疗血小板数量减少相关疾病药物中的用途。

背景技术

血小板数量减少是临床上常见的症状，可导致出血甚至致死性内出血的严重后果。血小板数量减少相关疾病包括免疫性血小板减少症、感染所致的血小板减少疾病、继发性血小板减少疾病、药物引起的血小板减少疾病、血小板生成缺欠疾病、非免疫性血小板减少疾病、血小板生成减少导致的疾病、血小板破坏增多导致的疾病或血栓性血小板减少性紫癜等等。这些不同病因导致的血小板减少，其发病机制都是由于凋亡和活化导致的血小板寿命缩短，而被清除。免疫性血小板减少症（Immune Thrombocytopenia，ITP）是一种常见的自身免疫性疾病，其特点是血小板计数低，可导致危及生命的出血。在ITP患者中检测到两种针对血小板受体的自身抗体，分别是抗纤维蛋白原受体糖蛋白（Glycoprotein，GP）IIb/IIIa和（或）抗（Von Willebrand Factor，VWF）受体GPIb-IX复合物的抗体。目前认为，自身抗体结合的血小板通过脾脏内Fc（Crystalline Fragment，Fc）依赖方式的吞噬引起血小板清除。因此，ITP的主要治疗策略是免疫抑制、免疫调节和脾切除术。然而，抗GPIb-IX自身抗体的ITP患者出现更严重的血小板计数下降。此外，大多数抗GPIb-IX自身抗体介导的血小板减少症对传统疗法的反应较差，如静脉注射免疫球蛋白G（IntravenousImmunoglobulin G，IVIG）和类固醇治疗，甚至脾切除术，提示，抗GPIb-IX自身抗体诱导的血小板破坏可能涉及不同的病因。

GPIbα是GPIb-IX复合体的主要亚基，事实上，经研究发现抗GPIbα单克隆抗体可以在体外激活血小板，并在体内引起血小板被清除[Yan, R. et al. Glycoprotein Ibalphaclustering induces macrophage-mediated platelet clearance in the liver（GPIbα诱导肝脏中巨噬细胞介导的血小板清除）. Thromb Haemost（血栓和凝血疾病杂质）113,107-117 (2015)；Bergmeier, W.et al. Structural and functional characterizationof the mouse von Willebrand factor receptor GPIb-IX with novel monoclonalantibodies（新型单克隆抗体对小鼠血管性血友病因子受体GPIb-IX的结构和功能鉴定）.Blood（血液学杂志）95, 886-893 (2000)；Becker, B.H. et al. Effects of anantiplatelet glycoprotein Ib antibody on hemostatic function in the guineapig（抗血小板糖蛋白Ib抗体对豚鼠凝血功能的影响）. Blood（血液学杂志）74, 690-694(1989)；Cadroy, Y. et al. Relative antithrombotic effects of monoclonalantibodies targeting different platelet glycoprotein-adhesive moleculeinteractions in nonhuman primates（在非人灵长类动物中针对不同血小板糖蛋白粘附分子相互作用的单克隆抗体的相对抗血栓作用）. Blood（血液学杂志）83, 3218-3224(1994)]。

我们进一步证明抗GPIba抗体通过Fc-非依赖机制使血小板在肝脏中被吞噬，有一篇报道显示[Li, J.et al. Desialylation is a mechanism of Fc-independentplatelet clearance and a therapeutic target in immune thrombocytopenia（在免疫性血小板减少症中去涎酸诱导Fc –非依赖的血小板清除）. Nat Commun（自然通讯）6,7737 (2015)]，抗小鼠GPIba单克隆抗体诱导Fc-非依赖的血小板激活和在肝的清除支持了我们的结论。GPIba的去涎酸作用使得肝细胞通过Ashwell-Morell受体依赖方式清除血小板。此外，剪切诱导GPIba机械感觉域解折叠也会引发血小板清除。因此，越来越多的证据表明抗GPIba抗体，不像抗GPIIb/IIIa的自身抗体，可能通过一种Fc-非依赖的方式引起血小板清除，而且抗GPIba抗体诱导血小板减少的机制仍不清楚。

GPIba包含了几个重要配体的结合位点，包括细胞外N端的VWF和凝血酶位点。VWF多聚体与GPIba的相互作用诱导了脂筏中GPIb-IX复合物的易位和聚集，触发信号级联反应，如Akt活化和钙离子动员，导致血小板活化和血栓形成。我们之前发现GPIba-VWF的相互作用也可以诱导血小板凋亡，但作用机制仍然未知。我们最近报道了蛋白激酶A（ProteinKinase A，PKA）介导的血小板凋亡在病理生理条件中广泛存在[Zhao, L. et al. Proteinkinase A determines platelet life span and survival by regulating apoptosis（蛋白激酶A通过调控血小板凋亡决定血小板寿命）. J Clin Invest（临床研究杂志）(2017)]。此外，越来越多的证据表明，各种病理刺激引起的血小板凋亡和活化导致许多常见疾病的血小板减少，如感染、癌症和糖尿病。然而，这些常见疾病中血小板减少的发病机制尚不完全清楚。

发明内容

要解决的技术问题：不同病因导致的血小板减少，其发病机制都是由于凋亡和活化导致的血小板寿命缩短，而被清除。ITP是一种常见的自身免疫性疾病，主要由抗GPIIb/IIIa和GPIb-IX自身抗体引起。抗GPIbα抗体的ITP患者对Fc依赖的治疗策略表现出难治性，而且其致病机制未明。我们要解决的技术问题是进一步研究抗GPIbα抗体诱导血小板减少的具体机制，进而公开磷脂酰肌醇-3-羟激酶（Phosphoinositide 3-kinase，PI3K）抑制剂在制备治疗血小板数量变化相关疾病药物中的用途。

技术方案：针对上述问题，本发明公开了PI3K抑制剂在制备治疗血小板数量减少相关疾病药物中的用途。

优选的，所述的PI3K抑制剂为无机物抑制剂、有机物抑制剂中的一种或几种。

优选的，所述的无机物抑制剂为氢化物、氧化物、酸、碱、盐中的一种或几种。

优选的，所述的有机物抑制剂为烃类、烃的衍生物、糖类、蛋白质、脂肪、核酸、合成高分子材料中的一种或几种。

优选的，所述的烃类为烯烃、烷烃、炔烃、芳香烃中的一种或几种；所述的烃的衍生物为卤代烃、醇、酚、醛、酸、酯中的一种或几种；所述的糖类为单糖、二糖、低聚糖、多糖中的一种或几种；所述的蛋白质为氨基酸、多肽中的一种或几种；所述的核酸为脱氧核糖核酸、核糖核酸中的一种或几种。

优选的，所述的PI3K抑制剂为：PI3K不同分类或亚型抑制剂、ATP竞争性抑制剂、酪氨酸和磷酸肌醇激酶双重抑制剂中的一种或几种。

优选的，所述的PI3K抑制剂为：PI3K/HDAC抑制剂、PX-866、TG100-115、PP121、MLN1117、NVP-QAV-572、PIK-III、AZD8186、VPS34-IN1、XL147、BEZ235、NVP-BEZ235、AMG319、PQR309、CAL-101、GS-1101、BGT226(NVP-BGT226)、GS-9820、保罗密得（Palomid529）、PIK-294、PIK-90、XL-147衍生物1、PF-04691502、SF1126、ON146040、XL-147衍生物2、BIP-135、S14161、LY294002、渥曼青霉素（Wortmannin）、PX-866、GDC-0084、ZSTK474、GDC-0941、布巴里斯（Buparlisib）、PI-103、NU7441（KU-57788）、TGX-221、IC-87114、XL147类似物、LY3023414、ZSTK474、GNE-493、BYL719、AS-605240、PIK-75、3-甲基腺嘌呤(3-MA)、A66、SAR245409及类似物、XL765及类似物、IPI-549、P7170、AK151761、PIK-93、GSK2126458、GSK458、槲皮黄酮（Sophoretin）、二水槲皮素（Sophoretin）、TGR-1202、PIK-90、AZD6482、PF-04691502、GDC-0980、RG7422、GSK1059615、IPI-145、INK1197、VS-5584(SB2343)、PF-05212384、PKI-587、TG100-115、AS-252424、BGT226(NVP-BGT226)、CNX-1351、LY303511、PI3k-Δ抑制剂1、PI3K-α抑制剂1、PI3K-γ抑制剂1、GNE477、ETP-46321、GNE-317、AZD8835、GDC0032、CUDC-907、PIK-294、AS-604850、TG100713、GSK2636771、CAL-130、PF-4989216、BAY80-6946、YM201636、CH5132799、CAY10505、PIK-293、PI-3065、托林（Torin）2、D-106669、AS-604850、AS-252424、AS605240、CZC24832、NVP-BAG956、PF-04691502、GSK1059615氢氧化钠、BIP-135、ETP-46464、KU-0060648、蛇孢菌素A、KU-0060648、PF-05212384、PIK93、维（WYE）-125132、XL388、米替福新、5-(2-苯并噻唑基)-3-乙烷基-2-[2-(methylphenylamino)乙烯基]-1-苯基-1氢-苯并咪唑碘、PIK-294、S14161、A66、KP372-1、PF-04979064、地喹氯铵、PKI-402、HS-173、BKM12、 NVP-BKM120中的一种或几种。

上述的PI3K抑制剂在制备治疗血小板数量减少相关疾病药物中的用途，其特征在于，所述的血小板数量减少相关疾病包括免疫性血小板减少症、感染所致的血小板减少疾病、继发性血小板减少疾病、药物引起的血小板减少疾病、血小板生成缺欠疾病、非免疫性血小板减少疾病、血小板生成减少导致的疾病、血小板破坏增多导致的疾病或血栓性血小板减少性紫癜。

优选的，所述的免疫性血小板减少症包括特发性血小板减少性紫癜。

优选的，所述的感染所致的血小板减少疾病包括细菌感染血小板减少疾病或病毒感染血小板减少疾病。

优选的，所述的继发性血小板减少疾病包括糖尿病病人体内的血小板减少疾病、肿瘤病人体内的血小板减少疾病、心脑血管疾病病人体内的血小板减少疾病、药物治疗过程中导致的血小板减少疾病、脾功能亢进疾病、妊娠过程中血小板减少疾病、继发于再生障碍性贫血的血小板减少疾病、继发于脾功能亢进的血小板减少疾病、继发于白血病的血小板减少疾病、继发于系统性红斑狼疮的血小板减少疾病、继发于干燥综合症的血小板减少疾病或继发于电离辐射的血小板减少疾病。

优选的，所述的药物引起的血小板减少疾病中，该药物为抗肿瘤药物、抗疟药、抗心律失常药、抗凝药物、抗生素、抗惊厥药物中的一种或几种。

优选的，所述的血小板生成缺欠疾病包括先天性血小板生成不良、无巨核细胞性血小板减少、范可尼综合征、血小板膜糖蛋白Ib-IX缺乏或功能异常引起的伯纳德-苏利耶综合征、灰色血小板综合征、湿疹血小板减少伴免疫缺陷综合征、再生障碍性贫血与骨髓增生异常综合征所引起的血小板减少疾病、获得性血小板生成不良、化疗药物所引起的血小板生成欠缺疾病或放射损伤引起的血小板生成欠缺疾病。

优选的，所述的血小板生成减少导致的疾病包括慢性再生障碍性贫血、骨髓增生异常综合征、放疗引起的血小板生成减少疾病或化疗引起的血小板生成减少疾病。

优选的，所述的血小板破坏增多导致的疾病包括自身免疫性疾病引起的血小板破坏增多疾病、抗磷脂综合征引起的血小板破坏增多疾病、人类免疫缺陷病毒引起的血小板破坏增多疾病或药物性血小板减少症引起的血小板破坏增多疾病。

优选的，所述的药物为片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、缓释制剂、控释制剂、口服液或贴剂。

优选的，所述的药物包含药学上有效剂量的PI3K抑制剂和药学上可接受的载体。

优选的，所述的药物通过口服、注射、喷雾吸入或经胃肠道进行给药。

有益效果：本发明首次通过实验探究了PI3K在调控抗GPIba抗体诱导血小板凋亡过程中的作用，研究证明抗GPIba抗体的ITP患者血小板不仅发生活化而且发生凋亡。抗GPIba抗体诱导PI3K活化和PI3K介导了的血小板活化和凋亡。PI3K通过Akt和磷酸二酯酶介导的PKA活化调控血小板凋亡。凋亡和活化血小板磷暴露脂酰丝氨酸（Phosphatidylserine，PS），使其被肝脏的巨噬细胞吞噬。抑制PI3K介导的血小板活化和凋亡可阻止结合抗体的血小板被清除，表明PI3K抑制剂可以参与抗GPIba抗体诱导血小板数量变化相关疾病的治疗过程，抑制外周循环血中血小板数量减少，因此，上述抑制剂具有开发成新型血小板保护药物和新型治疗血小板减少性疾病药物的潜力，极具科研和经济价值。

附图说明

图1抗GPIba自身抗体的ITP患者的血小板发生活化和凋亡的指标表征图，其中a为P-选择素的含量变化图，b为线粒体膜电位（Mitochondrial Transmembrane Potential，ΔΨm）去极化图，c为磷脂酰丝氨酸（Phosphatidylserine，PS）外翻表征图，图d为检测半胱天冬酶Caspase-3酶切的蛋白质印迹（Western blot）结果图（Caspase-3酶切活化代表发生凋亡），图e依据图d得到的酶切Caspase-3的统计结果；

图2抗GPIba抗体AN51、SZ2诱导血小板凋亡和活化的指标表征图，其中a为P-选择素的含量变化图，b为活化GPIIb/IIIa的含量变化图，c为线粒体膜电位（ΔΨm）去极化图，d为PS外翻表征图；

图3抗GPIba抗体R300诱导血小板凋亡和活化的指标表征图，其中a为P-选择素的含量变化图，b为活化GPIIb/IIIa的含量变化图，c为线粒体膜电位（ΔΨm）去极化图，d为PS外翻表征图；

图4检测Caspase-3酶切的western blot结果图（Caspase-3酶切代表发生凋亡），下图是依据上图得到的酶切Caspase-3的统计结果；

图5 PI3K在抗GPIba抗体诱导人的血小板凋亡和活化中起关键作用的指标表征图，图中a为a为P-选择素的含量变化图，b为线粒体膜电位（ΔΨm）去极化图，c为PS外翻表征图；

图6 PI3K通过激活依赖环磷酸腺苷（cAMP）的磷酸二酯酶（Phosphodiesterase，PDE3A）和PDE3A介导的蛋白激酶来调控血小板信号转导的Western blot结果图；

图7 PI3K抑制剂时间梯度拮抗抗GPIba抗体诱导血小板清除的计数结果。

具体实施方式

1、实验用小鼠

所有实验动物相关福利均严格按照中华人民共和国《实验动物管理条例》执行。动物实验经苏州大学医学伦理委员会批准。

2、洗涤血小板

健康成人志愿者自肘正中静脉采血。献血者无烟酒等不良生活习惯，献血前2周内未服用任何影响血小板功能的药物。女性献血者处于非月经期。献血者均知情同意并签署协议书。实验方案经苏州大学附属第一医院伦理委员会批准，符合赫尔辛基宣言。

抽取一定量健康人静脉血，用1/7体积的柠檬酸葡萄糖缓冲液（Acid-citratedextrose，ACD）（2.5％柠檬酸三钠，2.0%葡萄糖，1.5%柠檬酸）抗凝剂抗凝。抗凝后的全血在300g下离心10-15min，离心后下层为红细胞，上层为富含血小板的血浆。小心的将上层液体吸出至新的离心管。富含血小板的血浆（Platelet-rich Plasma，PRP）在1500g下离心10min，沉淀为血小板，上层液体为乏血小板血浆。弃上清后，将血小板重悬于与富含血小板血浆等体积的柠檬酸葡萄糖盐水（Citrate Glucose Saline，CGS）缓冲液（0.123MNaCl，0.033M葡萄糖，0.013M柠檬酸三钠，pH6.5）中，在1500g下离心5min以洗去血浆蛋白。重复此洗涤步骤一次。沉淀的血小板最终重悬于一定体积的改良Tyrode缓冲液（2.5mMHEPES，150mM NaCl，2.5mM KCl，12mM NaHCO₃，5.5mM D-glucose，1mM CaCl₂，1mM MgCl₂，pH7.4），浓度为3´10⁸/mL。重悬后的洗涤血小板在室温下放置1h以使其恢复至生理状态后用于后续实验。

3、流式检测血小板活化和凋亡

病人及正常人全血经3.8％柠檬酸钠抗凝后，1500g离心分离得到乏血小板血浆（Platelet-poor Plasma，PPP），与正常人血小板在37°C温育8h，分别用JC1（2µg/mL）检测线粒体膜电位去极化，FITC-lactadherin（10µg/mL）标记PS，FITC-human CD62P（20µg/mL）标记P选择素以及FITC-PAC-1（20µg/mL）标记活化αIIbβ3。

人洗涤血小板分别对照同型抗体mouse IgG（10µg/mL）、AN51（10µg/mL）、SZ2（10µg/mL）、R300（10µg/mL）和HIP1（10µg/mL）在37℃孵育，并在不同时间点（2h、4h、6h和8h），分别用JC1（2µg/mL）检测线粒体膜电位去极化，FITC-乳凝集素（lactadherin）（10µg/mL）标记PS，FITC-human CD62P（20µg/mL）标记P选择素以及FITC-PAC-1（20µg/mL）标记活化GPIIb/IIIa。

4、Western blot

常温下，3×10⁸ /mL的洗涤血小板分别与DMSO、LY294002（20µM）、Wortmannin（100nM）、MK2206（6µM）、AktI VIII（2µM）、Milirone（10µM）and Cilostazol（10µM）预处理孵育5min，然后与SZ2（10µg/mL）在37℃下温育8h，然后用Western blot分析。

5、血小板回输模型

钙黄绿素标记的小鼠血小板分别与对照抗体IgG（2µg/mL）或是R300（2µg/mL）室温下孵育1h，在抑制实验中，提前5min向受体小鼠注射对照溶剂或Wortmannin（0.05µg/mL、0.5µg/mL）；向受体小鼠通过眼眶静脉注射上述R300孵育的血小板1×10⁸个。在回输后指定时间通过眼眶静脉采血，经3.8%柠檬酸钠抗凝后，全血用PE标记小鼠CD41在室温下标记15min，1mL磷酸盐缓冲液（Phosphate-buffered Saline，PBS）稀释后流式检测。所有的血小板（受体小鼠自己的血小板和回输血小板）均能够被PE标记小鼠CD41标记，而回输的血小板还被钙黄绿素标记，因此用第一荧光通道（Fluorescent 1，FL1）和第二荧光通道（Fluorescent 2，FL2）双阳性血小板除以FL2单阳血小板比例绘制回输血小板清除曲线。

6、统计学分析

全部数据来源至少3次相互独立的实验，实验数据以Prism 5.1统计软件（GraphPad）进行分析。数据经正态性检验符合正态分布，以±s表示，采用不配对Student’s t检验进行组间比较。分组数据经方差齐性检验后，采用单因素方差分析（One-way Analysis ofVariance，ANOVA）进行组间比较；方差不齐者采用Kruskal-Wallis检验。p＜0.05作为显著性差异界值。

7、实验结果：

（1）抗GPIba自身抗体的ITP患者的血小板发生活化和凋亡

为了研究抗GPIba抗体诱发血小板减少症的发病机制，我们用微球蛋白筛选了23例有抗GPIba抗体的ITP患者。正常血小板与抗GPIba自身抗体血浆孵育后，抗GPIba自身抗体血浆明显诱导血小板P-选择素和PS外翻（图1a和1c），使血小板活化。

越来越多的证据表明血小板凋亡引发血小板减少。因此，我们研究了抗GPIba抗体血浆对血小板凋亡的影响。我们发现抗GPIba自身抗体血浆启动血小板内线粒体调控的凋亡程序，使血小板发生线粒体膜电位(Mitochondrial Transmembrane Potential，ΔΨm)去极化（图1b）。进一步检测发现，抗GPIba自身抗体血浆使血小板内半胱天冬酶3（caspase-3）活性明显升高（图1d和图1e）。这些数据表明，抗GPIba自身抗体血浆在体外可诱导血小板活化和凋亡。

（2）抗GPIba抗体SZ2可诱导血小板凋亡和活化

为了进一步探明抗GPIba抗体对血小板的影响，并避免来自血浆的非特异性效应，我们选择了单克隆抗GPIba抗体。我们发现抗GPIba抗体AN51、SZ2和R300诱导血小板P-选择素和PS暴露，促使血小板活化（图2a和2b，图3a和图3b）。然后我们发现，AN51、SZ2和R300显著诱导血小板ΔΨm去极化（图2c和图3c）和PS外翻（图2d和图3d）。此外，通过直接检测caspase-3活性和检测caspase-3底物酶切情况，发现AN51和SZ2显著促进caspase-3活化（图4）。这些数据进一步证明抗GPIba抗体可引起血小板活化和凋亡现象。

（3）PI3K在抗GPIba抗体诱导血小板凋亡和活化中起关键作用

我们进一步探讨了抗GPIba抗体诱导血小板凋亡和活化的机制。我们使用LY294002和Wortmannin，发现LY294002和Wortmannin明显减少SZ2诱导活化和凋亡现象，这两种抑制剂显著降低SZ2诱导ΔΨm去极化（图5b），PS（图5c）和P-选择素暴露（图5a）。这些结果表明，抗GPIba抗体通过诱导PI3K活化来启动血小板活化和凋亡，PI3K是与GPIba胞内域相互作用的下游执行蛋白，转导VWF-GPIba相互作用信号，导致血小板凋亡活化。通过抑制PI3K可明显降低抗GPIba抗体诱导的血小板凋亡和活化。

（4）PI3K通过激活依赖cAMP的磷酸二酯酶（Phosphodiesterase，PDE3A）和PDE3A介导的蛋白激酶来调控血小板凋亡

我们最近证实蛋白激酶A（Protein kinase A，PKA）在调控血小板凋亡中起关键作用，PKA抑制通过BAD脱磷酸化来抑制血小板凋亡。因此，我们在本研究中检测了PKA活性，发现SZ2处理的血小板中，PKA的活性确实降低了，而且PKA底物（vasodilator-associatedstimulated phosphoprotein，VASP）的脱磷酸化也证明了这一点（图6）。

我们进一步探讨了PI3K如何减少血小板PKA的活性，已有报道显示，PI3K调控下游Akt，而且Akt直接激活具有水解胞内的环磷酸腺苷（cAMP）作用的PDE3A，导致PKA活性的减少。我们研究发现PI3K、Akt或PDE3A抑制剂不仅均可抑制SZ2处理的血小板中的PKA活性（图6），而且相应的，也会抑制抗体诱导的凋亡现象。这些结果表明，PI3K通过Akt激活PDE3A抑制PKA活性和PKA介导的血小板凋亡，即PI3K通过调控PDE3A介导的PKA活性来调控血小板凋亡。

（5）抑制PI3K活化和PI3K介导的血小板活化和凋亡可以挽救抗GPIba抗体结合当地血小板在体内被清除

体外试验显示，Wortmannin抑制抗GPIba抗体诱导的血小板活化和凋亡。因此，Wortmannin应该可以挽救抗体诱导血小板在体内被清除。为了证实这一点，Wortmannin被注射到小鼠体内，而后，小鼠输入了R300预处理的钙黄绿素标记的血小板，实验结果显示，Wortmannin抑制了抗GPIbα抗体结合血小板的减少（图7）。

综上所述，这些实验结果证实了PI3K活化和PI3K介导的血小板活化和凋亡的在抗GPIba抗体诱导的血小板体内清除中发挥重要的作用。

综上可知，这些结果表明抗GPIba抗体的ITP患者血小板不仅发生活化而且发生凋亡。抑制PI3K介导的血小板活化和凋亡可阻止结合抗体的血小板被清除。本研究揭示了抗GPIba抗体ITP的发病机制，为自身抗体或其他致病因素引起的血小板减少症提出了新的治疗策略，极具科研和经济价值。

Claims (18)

1.PI3K抑制剂在制备治疗血小板数量减少相关疾病药物中的用途。

2.根据权利要求1所述的PI3K抑制剂在制备治疗血小板数量减少相关疾病药物中的用途，其特征在于，所述的PI3K抑制剂为无机物抑制剂、有机物抑制剂中的一种或几种。

3.根据权利要求2所述的PI3K抑制剂在制备治疗血小板数量减少相关疾病药物中的用途，其特征在于，所述的无机物抑制剂为氢化物、氧化物、酸、碱、盐中的一种或几种。

4.根据权利要求2所述的PI3K抑制剂在制备治疗血小板数量减少相关疾病药物中的用途，其特征在于，所述的有机物抑制剂为烃类、烃的衍生物、糖类、蛋白质、脂肪、核酸、合成高分子材料中的一种或几种。

5.根据权利要求4所述的PI3K抑制剂在制备治疗血小板数量减少相关疾病药物中的用途，其特征在于，所述的烃类为烯烃、烷烃、炔烃、芳香烃中的一种或几种；所述的烃的衍生物为卤代烃、醇、酚、醛、酸、酯中的一种或几种；所述的糖类为单糖、二糖、低聚糖、多糖中的一种或几种；所述的蛋白质为氨基酸、多肽中的一种或几种；所述的核酸为脱氧核糖核酸、核糖核酸中的一种或几种。

6.根据权利要求1所述的PI3K抑制剂在制备治疗血小板数量减少相关疾病药物中的用途，其特征在于，所述的PI3K抑制剂为：PI3K不同分类或亚型抑制剂、ATP竞争性抑制剂、酪氨酸和磷酸肌醇激酶双重抑制剂中的一种或几种。

7.根据权利要求1所述的PI3K抑制剂在制备治疗血小板数量减少相关疾病药物中的用途，其特征在于，所述的PI3K抑制剂为：PI3K/HDAC抑制剂、PX-866、TG100-115、PP121、MLN1117、NVP-QAV-572、PIK-III、AZD8186、VPS34-IN1、XL147、BEZ235、NVP-BEZ235、AMG319、PQR309、CAL-101、GS-1101、BGT226、GS-9820、保罗密得、PIK-294、PIK-90、XL-147衍生物1、PF-04691502、SF1126、ON 146040、XL-147衍生物2、BIP-135、S14161、LY294002、渥曼青霉素、PX-866、GDC-0084、ZSTK474、GDC-0941、布巴里斯、PI-103、NU7441、TGX-221、IC-87114、XL147类似物、LY3023414、ZSTK474、GNE-493、BYL719、AS-605240、PIK-75、3-甲基腺嘌呤、A66、SAR245409及类似物、XL765及类似物、IPI-549、P7170、AK151761、PIK-93、GSK2126458、GSK458、槲皮黄酮、二水槲皮素、TGR-1202、PIK-90、AZD6482、PF-04691502、GDC-0980、RG7422、GSK1059615、IPI-145、INK1197、VS-5584、PF-05212384、PKI-587、TG100-115、AS-252424、BGT226、CNX-1351、LY303511、PI3K-Δ抑制剂1、PI3K-α抑制剂1、PI3K-γ抑制剂1、GNE477、ETP-46321、GNE-317、AZD8835、GDC0032、CUDC-907、PIK-294、AS-604850、TG100713、GSK2636771、CAL-130、PF-4989216、BAY80-6946、YM201636、CH5132799、CAY10505、PIK-293、PI-3065、托林2、D-106669、AS-604850、AS-252424、AS605240、CZC24832、NVP-BAG956、PF-04691502、GSK1059615氢氧化钠、BIP-135、ETP-46464、KU-0060648、蛇孢菌素A、KU-0060648、PF-05212384、PIK93、维-125132、XL388、米替福新、5-(2-苯并噻唑基)-3-乙烷基-2-[2-(methylphenylamino)乙烯基]-1-苯基-1氢-苯并咪唑碘、PIK-294、S14161、A66、KP372-1、PF-04979064、地喹氯铵、PKI-402、HS-173、BKM12、NVP-BKM120中的一种或几种。

8.根据权利要求1至7任一所述的PI3K抑制剂在制备治疗血小板数量减少相关疾病药物中的用途，其特征在于，所述的血小板数量减少相关疾病包括免疫性血小板减少症、感染所致的血小板减少疾病、继发性血小板减少疾病、药物引起的血小板减少疾病、血小板生成缺欠疾病、非免疫性血小板减少疾病、血小板生成减少导致的疾病、血小板破坏增多导致的疾病或血栓性血小板减少性紫癜。

9.根据权利要求8所述的PI3K抑制剂在制备治疗血小板数量减少相关疾病药物中的用途，其特征在于，所述的免疫性血小板减少症包括特发性血小板减少性紫癜。

10.根据权利要求8所述的PI3K抑制剂在制备治疗血小板数量减少相关疾病药物中的用途，其特征在于，所述的感染所致的血小板减少疾病包括细菌感染血小板减少疾病或病毒感染血小板减少疾病。

11.根据权利要求8所述的PI3K抑制剂在制备治疗血小板数量减少相关疾病药物中的用途，其特征在于，所述的继发性血小板减少疾病包括糖尿病病人体内的血小板减少疾病、肿瘤病人体内的血小板减少疾病、心脑血管疾病病人体内的血小板减少疾病、药物治疗过程中导致的血小板减少疾病、脾功能亢进疾病、妊娠过程中血小板减少疾病、继发于再生障碍性贫血的血小板减少疾病、继发于脾功能亢进的血小板减少疾病、继发于白血病的血小板减少疾病、继发于系统性红斑狼疮的血小板减少疾病、继发于干燥综合症的血小板减少疾病或继发于电离辐射的血小板减少疾病。

12.根据权利要求8所述的PI3K抑制剂在制备治疗血小板数量减少相关疾病药物中的用途，其特征在于，所述的药物引起的血小板减少疾病中，该药物为抗肿瘤药物、抗疟药、抗心律失常药、抗凝药物、抗生素、抗惊厥药物中的一种或几种。

13.根据权利要求9所述的PI3K抑制剂在制备治疗血小板数量减少相关疾病药物中的用途，其特征在于，所述的血小板生成缺欠疾病包括先天性血小板生成不良、无巨核细胞性血小板减少、范可尼综合征、血小板膜糖蛋白Ib-IX 缺乏或功能异常引起的伯纳德-苏利耶综合征、灰色血小板综合征、湿疹血小板减少伴免疫缺陷综合征、再生障碍性贫血与骨髓增生异常综合征所引起的血小板减少疾病、获得性血小板生成不良、化疗药物所引起的血小板生成欠缺疾病或放射损伤引起的血小板生成欠缺疾病。

14.根据权利要求8所述的PI3K抑制剂在制备治疗血小板数量减少相关疾病药物中的用途，其特征在于，所述的血小板生成减少导致的疾病包括慢性再生障碍性贫血、骨髓增生异常综合征、放疗引起的血小板生成减少疾病或化疗引起的血小板生成减少疾病。

15.根据权利要求8所述的PI3K抑制剂在制备治疗血小板数量减少相关疾病药物中的用途，其特征在于，所述的血小板破坏增多导致的疾病包括自身免疫性疾病引起的血小板破坏增多疾病、抗磷脂综合征引起的血小板破坏增多疾病、人类免疫缺陷病毒引起的血小板破坏增多疾病或药物性血小板减少症引起的血小板破坏增多疾病。

16.根据权利要求1至7任一所述的PI3K抑制剂在制备治疗血小板数量减少相关疾病药物中的用途，其特征在于，所述的药物为片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、缓释制剂、控释制剂、口服液或贴剂。

17.根据权利要求1至7任一所述的PI3K抑制剂在制备治疗血小板数量减少相关疾病药物中的用途，其特征在于，所述的药物包含药学上有效剂量的PI3K抑制剂和药学上可接受的载体。

18.根据权利要求1至7任一所述的PI3K抑制剂在制备治疗血小板数量减少相关疾病药物中的用途，其特征在于，所述的药物通过口服、注射、喷雾吸入或经胃肠道进行给药。