CN108300680A - 幽门螺杆菌转运培养基 - Google Patents

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王洪涛
林骏
刘尧
马伟民
张永顶
刘谦
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SHENZHEN CITY BOLAOTE BIOLOGICAL PRODUCTS CO Ltd
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Abstract

本发明涉及菌种保存技术领域，尤其涉及幽门螺杆菌转运培养基。本发明提供的培养基由水和多种营养物质制成，其配方针对幽门螺杆菌设置，能够维持幽门螺杆菌的活性，使其在本发明的转运培养基可以使活检样本在4℃环境下存活10天以上。从而提高幽门螺杆菌分离培养检测的准确性。

Description

幽门螺杆菌转运培养基
技术领域
本发明涉及菌种保存技术领域，尤其涉及幽门螺杆菌转运培养基。
背景技术
幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori，HP)是一种革兰氏阴性菌，定植于胃粘膜的病原菌，世界范围内约有高达50％～70％的感染率。流行病学分析显示，慢性活动性胃炎HP检出率为92.43％，十二指肠溃疡中检出率为89.47％，胃溃疡检出率为83.35％，胃癌中检出率为58.99％。可见，幽门螺杆菌感染是慢性胃炎的主要原因。同时长期的HP感染还会引发严重的萎缩性胃炎、伴随性肠上皮化生，严重的还能导致胃癌。
目前，对HP感染的诊断方法有很多，例如：快速尿素酶试验、病理涂片、组织学检测、血清HP抗体检测、14C、15C、尿素呼气检测，15N尿素排除试验、聚合酶链式反应、甘蓝红色素内镜检测、SSCP技术、间接免疫荧光检测等。其中，取胃粘膜样品，进行细菌培养的方法最为可靠，其特异性可达100％，被认为是幽门螺杆菌诊断的金标准。
幽门螺杆菌稳定生长需要依赖微需氧环境，并且对温度和湿度也有较高要求，在自然环境中不能生长繁殖。目前很多医院还没有资质做幽门螺杆菌分离培养，因此，临床从采集样本到送往相关实验室培养检测还需要一段时间，这段时间对幽门螺杆菌后续的培养繁殖至关重要。由于没有较合适的转运培养基，活检标本在运送到细菌组织培养的过程中，幽门螺杆菌的活力大幅降低，从而导致阳性检出率受到很大影响，最终导致阳性样品幽门螺杆菌的检出率只能达到50％～70％，大大的降低了幽门螺杆菌细菌培养的检测准确性。
因此，如何维持从标本采集到细菌培养这段时间内幽门螺杆菌的存活率，提升幽门螺杆菌分离培养的使用价值，仍是目前亟待解决的问题。
发明内容
有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供幽门螺杆菌转运培养基，本发明提供的培养基能够维持幽门螺杆菌的存活率。
本发明提供的培养基，由水和如下组分组成：
一些实施例中，所述培养基由水和如下组分组成：
一些实施例中，所述培养基由水和如下组分组成：
一些实施例中，所述培养基由水和如下组分组成：
本发明提供的培养基的pH值为7.0。
本发明提供的培养基中，所述水为双蒸水。
本发明所述培养基的配制方法包括：
步骤1：维生素B12、L-谷氨酸、腺嘌呤、盐酸胍、对氨基苯甲酸、腺嘌呤二核苷酸、硫胺素焦磷酸、硝酸铁、盐酸硫酸素、半胱氨酸盐酸盐、L-胱氨酸与水混合，定容至1L，121℃灭菌20min，制得营养液A；
步骤2：10mL所述营养液A，琼脂粉、酪蛋白酶、多聚蛋白胨、酵母提取物与水混合，定容至0.8～0.9L，调节pH值为7.0，121℃灭菌20min，制得营养液B；
步骤3：葡萄糖与水混合，定容至0.1～0.2L，灭菌后，与所述营养液B混合，定容至1L，制得培养基。
本发明所述的培养基在幽门螺杆菌转运中的应用。
本发明还提供了一种转运幽门螺杆菌的方法，将样品接种于18℃～25℃的本发明所述培养基上0℃～4℃转运。
具体的，本发明培养基灭菌后，冷却至60℃倒入试管，然后将试管水平放置至凝固；使用前，将培养基调整至室温(18℃～25℃)，然后将取下的胃粘膜组织面涂布接种至凝固的培养基上4℃环境下，运送至细菌分离培养实验室。
本发明实施例中，所述样品为胃窦和/或胃底粘膜组织。
本发明提供的培养基由水和多种营养物质制成，其配方针对幽门螺杆菌设置，能够维持幽门螺杆菌的活性，使其在本发明的转运培养基可以使活检样本在4℃环境下存活10天以上。从而提高幽门螺杆菌分离培养检测的准确性。
具体实施方式
本发明提供了幽门螺杆菌转运培养基，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
本发明采用的试材皆为普通市售品，皆可于市场购得。
下面结合实施例，进一步阐述本发明：
实施例
1、按表1配方配制培养基：
表1培养基配方
按表1配方，将维生素B12、L-谷氨酸、腺嘌呤、盐酸胍、对氨基苯甲酸、腺嘌呤二核苷酸、硫胺素焦磷酸、硝酸铁、盐酸硫酸素、半胱氨酸盐酸盐、L-胱氨酸与水混合，定容至1L，121℃灭菌20min，制得营养液A；
10mL所述营养液A，琼脂粉、酪蛋白酶、多聚蛋白胨、酵母提取物与水混合，定容至0.8～0.9L，调节pH值为7.0，121℃灭菌20min，制得营养液B；
葡萄糖与水混合，定容至0.1～0.2L，灭菌后，与所述营养液B混合，定容至1L，制得培养基。
待培养基温度降至60℃时，充分混匀，每支试管倒入5ml转运培养基，注意避免产生气泡，密封好。倒好将试管水平放置，动作迅速，避免培养基凝固导致成分不均匀。
2、保存效果检测
选择UBT法检测阳性的13个阳性样本，取不同部位胃粘膜组织，作为实验样品。
2.1.试验前准备：取出所需用的培养基，恢复至室温(18℃～25℃)
2.2.内镜直视下，钳取不同部位胃粘膜组织
2.3.在超净工作台上，直接将取下的胃粘膜组织面涂布接种至HP转运培养基上
2.4.将转运培养基放入4℃环境下，运送至细菌分离培养实验室并继续于4℃下保存。
实验以BHI-VAN培养基和MH-CE培养基为阳性对照。
其中，组1配方培养基的检测结果如表2：
表2活检标本内幽门螺杆菌在转运培养基4℃条件下分离培养效果
结果表明，从来源于UBT检测阳性的13个阳性标本中分别取胃窦和胃底活检组织，在组1的转运培养基在4℃条件下进行培养，第1天全部检测为阳性，至第10天止，仍然全是阳性。第11天起，胃窦样本有3例出现阴性，胃底样本有4例出现阴性。可见，组1的转运培养基可以使活检样本在4℃环境下存活10天以上。
对组2的转运培养基进行检测，第10天时，阳性率为84.6％，组3的培养基在第10天时，阳性率为92.3％。重复检测，经统计学分析，组1提供的培养基能够更显著的保护幽门螺杆菌的活性，该效果与组2～3存在统计学意义，p<0.05。
阳性对照培养基：BHI-VAN培养基培养5天组织培养阳性率为75％、MH-CE培养基培养4天组织培养阳性率为61％。效果显著低于本申请提供的培养基。
以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (9)

1.一种培养基，其特征在于，由水和如下组分组成：
2.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于，由水和如下组分组成：
3.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于，由水和如下组分组成：
4.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于，由水和如下组分组成：
5.根据权利要求1～4任一项所述的培养基，其特征在于，其pH值为7.0。
6.权利要求1～5任一项所述培养基的配制方法，其特征在于，包括：
步骤1：维生素B12、L-谷氨酸、腺嘌呤、盐酸胍、对氨基苯甲酸、腺嘌呤二核苷酸、硫胺素焦磷酸、硝酸铁、盐酸硫酸素、半胱氨酸盐酸盐、L-胱氨酸与水混合，定容至1L，121℃灭菌20min，制得营养液A；
步骤2：10mL所述营养液A，琼脂粉、酪蛋白酶、多聚蛋白胨、酵母提取物与水混合，定容至0.8～0.9L，调节pH值为7.0，121℃灭菌20min，制得营养液B；
步骤3：葡萄糖与水混合，定容至0.1～0.2L，灭菌后，与所述营养液B混合，定容至1L，制得培养基。
7.权利要求1～5任一项所述的培养基在幽门螺杆菌转运中的应用。
8.一种转运幽门螺杆菌的方法，其特征在于，将样品接种于18℃～25℃的权利要求1～5任一项所述的培养基上0℃～4℃转运。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述样品为胃窦和/或胃底粘膜组织。
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