CN108114319A - 一种脱细胞异体真皮基质及在阴茎背神经隔离中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种脱细胞异体真皮基质及在阴茎背神经隔离中的应用。为了适应背神经隔离手术，提供合适的内置生物套材料，本发明经过酶处理、表面活性剂超声处理、DNA降解处理等多步骤协同操作，发明制备了一种新的脱细胞异体真皮基质材料，并将其制作成内置生物套，用于早泄的治疗。本发明脱细胞异体真皮基质或内置生物套用于阴茎增粗或延长或背神经隔离手术方式不切断背神经，从而避免了由于患者对切断背神经的担心而导致心理性勃起功能障碍的几率。

Description

一种脱细胞异体真皮基质及在阴茎背神经隔离中的应用
技术领域
本发明属于生物医用材料的组织工程技术领域，具体是一种利用脱细胞异体真皮基质和/或内置生物套进行背神经隔离的方法。
背景技术
早泄(PE，premature ejaculation)是临床上常见的男科疾病之一，发病率占成年男性的14％-41％。它严重影响着性生活的质量，不仅给广大患者的身心造成极大的伤害，还威胁着夫妻感情和家庭和谐。既往对早泄的病因认为是精神心理因素所致，如抑郁、精神高度紧张等因素，但是近来研究结果表明，部分早泄存在着神经病理性器质性病变，即阴茎头感觉过敏或阴茎头感觉神经兴奋性过高，造成射精阈值低，使射精潜伏期过短而引起早泄。
临床上把早泄分为原发性早泄：是指从首次性生活至今，射精潜伏期始终少于2分钟者。继发性早泄：是指过去曾有正常射精潜伏期的男子，以后逐渐出现射精潜伏期过短者。目前临床上对早泄，特别是原发性早泄，缺乏有效地治疗方法，使早泄治疗长期困扰着泌尿外科医生和男科医生。哈尔滨医科大学附属第二医院张春影教授设想通过降低阴茎头敏感性，提高射精阈值达到延长射精潜伏期，提高性生活质量来治疗原发性早泄。针对此病因，在国内首先开展了Tullii RE阴茎神经切断术，以期通过降低阴茎头敏感性，提高射精阈值，达到延长性生活时间来治疗原发性早泄，但是临床效果不稳定。为了进一步探究，对38例成人男性尸体阴茎背神经的局部解剖学进行了研究，结果发现阴茎背神经平均为3.55支，这样更改了以往认为于阴茎背动脉伴行的2至阴茎背神经的学术观点。这样张春影教授等根据新的学术观点设计了阴茎背神经选择性切断术。
阴茎感觉通路起始于阴茎皮肤、阴茎头、尿道及阴茎海绵体内的感受器，发出神经纤维融合形成阴茎背神经束，加入其他神经纤维成为阴部内神经，然后经S2～4神经的背根上升到脊髓。感受器激活后通过阴茎背神经、阴部神经、脊髓、脊髓丘脑束，将痛、温、触觉信息传送到下丘脑和皮层进行感知。性接触刺激阴茎皮肤和阴茎头，神经冲动通过阴茎背神经传入，始动和维持反射性阴茎勃起。原发性早泄存在阴茎头敏感性过高，决定阴茎头敏感性的主要因素是阴茎神经的分布、感受器的数量于阈值以及神经传导通路等。行阴茎背神经远端选择性切断术后，可以降低阴茎头的敏感性，提高射精刺激阈值，延长射精潜伏期，改善患者的性生活质量。
近年来发现，经过阴茎背神经切断术的部分患者会有严重的心理障碍，在阴茎头麻木的同时认为自己快感下降，勃起困难，从而导致心理性勃起功能障碍，给患者造成痛苦的同时，也给医生带来了困扰。
脱细胞内置生物套，全称为脱细胞异体真皮基质医用组织内置生物套，取自人类异体的片状或膜状组织，是通过脱细胞技术，对生物真皮进行生物和化学处理，完全脱除各种可被宿主识别的、能够引起免疫排斥反应的细胞成分，如果移植用的皮肤是含有细胞的，那么移植后内皮细胞的免疫反应可能导致血管收缩、组织缺血和组织变性坏死，一旦经过脱细胞处理，将人体组织变成没有细胞的基质与支架，这种材料就会产生免疫惰性，因此不会发生免疫排斥反应，同时完整地保留了细胞外基质成分及其三维空间框架结构。
基于以上缺陷，研究一种能够用于背神经隔离的脱细胞异体真皮基质或内置生物套具有实际意义。
发明内容
为了适应背神经隔离手术，提供合适的内置生物套材料，本发明经过酶处理、表面活性剂超声处理、DNA降解处理等多步骤协同操作，发明制备了一种新的脱细胞异体真皮基质材料，并将其制作成内置生物套，用于早泄、阴茎短小的治疗。
本发明的目的在于提供一种脱细胞异体真皮基质和/或内置生物套的制备方法及背神经隔离手术方法，具有手术创伤小、手术时间短、安全无痛、出血少、术后恢复快、抗感染能力强、兼容性良好的特点。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种脱细胞异体真皮基质的制备方法，包括如下步骤：
步骤一，将异体皮原料投入酶溶液中，浸泡振荡处理，得半成品A；所述酶为磷脂酶，或者所述酶为磷脂酶和蛋白酶；
步骤二，将半成品A取出，用生理盐水浸泡，振荡处理，得半成品B；
步骤三，将半成品B投入表面活性剂溶液中，超声浸泡处理，得半成品C；
步骤四，将半成品C用生理盐水浸泡，振荡处理，得半成品D；
步骤五，将半成品D投入盛有DNA水解酶溶液的容器中，振荡处理，得半成品E；
步骤六，将半成品E用生理盐水浸泡，振荡处理，得半成品F；
步骤七，将半成品F用注射用水清洗浸泡，得成品G；即为脱细胞异体真皮基质；可以直接作为阴茎背神经手术材料使用或用作制备阴茎背神经手术材料。
一般地，可将上述方法制得的脱细胞异体真皮基质保存于生理盐水中；为延长其保存期，也可进行灭菌处理(例如辐照灭菌)。
为便于上述脱细胞异体真皮基质的储存及运输，延长其有效期，进一步地，上述方法还包括以下步骤：
步骤八，将成品G取出，包装，灭菌，得成品H；或者将成品G取出，置于含有冻干保护剂的溶液中进行冷冻干燥；包装，灭菌，得成品H。
进一步地，步骤一中所述蛋白酶包括胰蛋白酶、菠萝蛋白酶、木瓜蛋白酶、dispase酶(中性蛋白酶，分散酶)等中的一种或多种。
在某些实施方式中，前述步骤一中的酶为磷脂酶、或磷脂酶与胰蛋白酶、菠萝蛋白酶、木瓜蛋白酶、dispase酶中的一种或多种。进一步地，所述酶溶液pH值为7.0-8.0。优选地，磷脂酶浓度为0.1g/L-0.4g/L，和/或所述蛋白酶(或其中胰蛋白酶、菠萝蛋白酶、木瓜蛋白酶、dispase酶任一种)的浓度为0.1g/L-0.3g/L。更进一步地，所述磷脂酶为磷脂酶A1、磷脂酶A2、磷脂酶C、磷脂酶D的一种或多种，优选磷脂酶A1、磷脂酶A2、磷脂酶C、磷脂酶D的质量比为1:1:1:1。
在某些实施方式中，前述步骤一振荡处理条件为振荡0.5-4小时，振荡转速为10-200rpm，温度为10-40℃。
在某些实施方式中，前述步骤三所述表面活性剂溶液中含有0.1-0.3g/L的SDS(十二烷基硫酸钠)，或所述表面活性剂溶液中含有0.1-0.3g/L的Triton X-100(聚乙二醇辛基苯基醚)。进一步地，超声浸泡条件为：40-80KHz，100-400W，温度为1-20℃，超声3-8分钟，浸泡2-4小时，重复2-4次。
在某些实施方式中，前述步骤五中所述DNA水解酶溶液的浓度为4-8g/L，pH 7.0-8.0；优选浓度为4-6g/L。
在某些实施方式中，前述步骤五中振荡处理条件为振荡2-8小时，振荡转速为10-200rpm，温度为10-40℃。
在某些实施方式中，所述步骤二、步骤四、步骤六振荡处理条件为振荡1-2小时，振荡转速为80-150rpm，更换生理盐水，继续振荡处理，重复该操作4-6次，温度为1-5℃。
在某些实施方式中，所述步骤七注射用水清洗浸泡条件为振荡2小时，振荡转速为80-150rpm，温度为1-5℃，更换注射用水，继续振荡处理，重复该操作4-6次。
在某些实施方式中，步骤八所述冻干保护剂溶液包括磷酸盐缓冲液、透明质酸和糖，其中透明质酸的浓度为0.4-0.8mg/100mL，糖的浓度为10-20mg/100mL，所述糖为海藻糖、乳糖、蔗糖、甘油、甘露醇、山梨醇、甘露糖、葡萄糖中的一种或几种。所述磷酸盐缓冲溶液(PBS)可按本领域常规方法配制，优选为10mmol/L pH 7.0磷酸盐缓冲液。
所述冷冻干燥步骤具体为：将成品G于5℃进箱，于5℃进箱，保持1小时，降温到-40℃并保持1小时，升温到-18℃并保持1小时，再次降温至-35℃保持1小时，启动真空泵，将干燥箱真空度抽到5-10Pa；用2小时将隔板升温到-30℃，干燥箱真空度抽到1-5Pa，维持15h；用1小时将隔板升温到0℃，并维持10h后，测定压力升，直至压力升小于1pa；用1小时将隔板升温到10℃，并维持10h，测定压力升，直至压力升小于1pa；用0.5小时将隔板升温到25℃，并维持8h，测定压力升，直至压力升小于1pa；整个干燥过程中前箱真空度不应高于30Pa。
在某些实施方式中，前述步骤八的包装为将半成品G装入包装袋中，封口包装完毕；所述灭菌为钴-60照射，照射剂量为20-30kGy。
在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可以相互组合，即得本发明各较佳实例。
本发明异体皮原料来源于自愿捐献者(例如非活体)的皮肤。
本发明还包括上述方法制备的脱细胞异体真皮基质(也可称做阴茎背神经手术材料、阴茎内置生物套)。
本发明制备的脱细胞异体真皮基质的缝合强度16N-18N。
所述脱细胞异体真皮基质(阴茎背神经手术材料、阴茎内置生物套)在使用前需先进行如下操作：20℃-35℃生理盐水中完全浸泡(复水)15分钟。
可以根据实际需要将上述脱细胞异体真皮基质制成适当的尺寸。
本发明脱细胞异体真皮基质的保存条件为阴凉干燥处，相对湿度小于等于45％。
本发明还包括上述脱细胞异体真皮基质在制备阴茎背神经手术材料或阴茎内置生物套中的应用。
本发明另一方面提供一种用于背神经隔离手术的试剂盒，包含前述的脱细胞异体真皮基质(阴茎背神经手术材料、阴茎内置生物套)。所述试剂盒，可以进一步包含手术刀、手术剪、止血钳、镊子、缝合针、5-0可吸收手术线、含注射用水的安瓿瓶、注射器。
本发明根据背神经隔离手术的需要，改进和优化了脱细胞异体真皮基质的制备工艺。该产品是将人体捐献体的皮肤，经过特殊的生物技术处理，将组织中可引起宿主免疫排斥反应的所有细胞清除掉，同时完整地保留与原有组织结构相同的细胞外基质；并根据需要，通过冷冻干燥处理，使其更便于储存和运输。通过对该产品不断地深入研究发现，由于在去除免疫排异反应成分的同时，完整地保留了原有组织的立体支架结构，作为细胞支架，它具有诱导组织生成的作用，在植入人体后能被人体组织细胞识别为自体组织，很快有新生血管和成纤维细胞长入，引导细胞沿其胶原框架有序生长，达到补充、特别是快速修复的目的，它具有良好的组织相容性和力学性能，能够长期存在，成为人体组织的一部分，从而完成了对组织缺损的修复和重建。
本领域使用脱细胞异体真皮基质进行背神经隔离手术时，阴茎根部神经阻滞麻醉后，包皮过长者环形切除包皮，已行包皮环切术者于阴茎背侧沿原切口切开3-5cm长皮肤。依次切开浅筋膜、深筋膜直至充分暴露白膜。仔细分离至冠状沟，将脱细胞异体真皮基质按需要制备成内置生物套缝合固定于白膜上，远端至冠状沟，两侧不包绕尿道。逐层缝合筋膜及皮肤。阴茎适度加压包扎。同时，脱细胞异体真皮基质或内置生物套植到人体后，需要与人体正常组织具有高度的亲和性，这要求具有一定的柔软度。
本发明脱细胞异体真皮基质或内置生物套能够满足阴茎增粗、阴茎延长、背神经隔离手术需求。本发明通过酶处理、表面活性剂溶液超声处理联合进行脱细胞，能够达到很好地脱细胞效果，且对真皮基质的损伤较小，有利于提高组织产品机械性能，获得较好的弹性和韧性，提高组织的撕裂、缝合强度，且有助于DNA水解酶处理步骤中除去真皮基质中残留的DNA，降低了细胞毒性和排斥反应。
综上，本发明的脱细胞异体真皮基质或内置生物套作为阴茎增粗、阴茎延长、背神经隔离手术材料具有以下优点：(1)就产品性能来说，本发明的脱细胞异体真皮基质或内置生物套是经过工艺改进的产品，产品的机械性能适用于手术，缝合强度16N-18N。(2)就产品效果来说，本发明的脱细胞异体真皮基质或内置生物套具有无免疫排斥反应、快速诱导组织再生、植入后质地柔软、无轮廓感、体内相容性好、稳定的支架或模版作用。(3)脱细胞异体真皮基质或内置生物套用于阴茎增粗或延长或背神经隔离手术方式不切断背神经，从而避免了由于患者对切断背神经的担心而导致心理性勃起功能障碍的几率。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件，或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可通过正规渠道商购买得到的常规产品。
实施例1脱细胞异体真皮基质的制备方法
将异体真皮原料投入浓度为0.3g/L磷脂酶和0.1g/L胰蛋白酶溶液中，酶溶液pH值为7.0，温度为37℃，100rpm振荡2小时，更换一次酶溶液，重复此过程一次，得半成品A；磷脂酶为磷脂酶A1：磷脂酶A2：磷脂酶C：磷脂酶D按照质量比为1:1:1:1的混合物。
将半成品A取出，投入盛有生理盐水溶液的容器中用生理盐水浸泡，振荡3次，每次振荡2小时，振荡转速为80rpm，温度为2℃，得半成品B。
将半成品B投入到含有0.2g/LTritonX-100溶液中，50KHz，220W，超声5分钟，浸泡3小时，重复此过程3次，得半成品C。
将半成品C取出，投入盛有生理盐水溶液的容器中用生理盐水浸泡，振荡3次，每次振荡2小时，温度为2℃，振荡转速为80rpm，得半成品D。
将半成品D投入到盛有浓度为5g/L，pH为7.0的DNA水解酶溶液中，温度为37℃，振荡处理4小时，振荡转速为20rpm，得半成品E。
将半成品E投入盛有生理盐水溶液的容器中用生理盐水浸泡，振荡3次，每次振荡2小时，温度为2℃，振荡转速为80rpm，得半成品F。
将半成品F投入盛有注射用水的容器中用生理盐水浸泡，振荡3次，每次振荡2小时，温度为2℃，振荡转速为80rpm，得成品G。
将成品G取出，装入包装袋中，铺平，封口，进行钴-60照射，照射剂量为20-30kGy,取出，终得成品H。缝合强度为17.7N。
实施例2脱细胞异体真皮基质的制备方法
将异体真皮原料投入浓度为0.2g/L磷脂酶和0.2g/L胰蛋白酶溶液中，酶溶液pH值为7.0，温度为37℃，100rpm振荡2小时，更换一次酶溶液，重复此过程一次，得半成品A；磷脂酶为磷脂酶A1、磷脂酶A2、磷脂酶C和磷脂酶D按照质量比1:1:1:1的混合物。
将半成品A取出，投入盛有生理盐水溶液的容器中用生理盐水浸泡，振荡3次，每次振荡2小时，振荡转速为80rpm，温度为2℃，得半成品B。
将半成品B投入到含有0.2g/LSDS溶液中，10mMEDTA，50KHz，220W，超声7分钟，浸泡2小时，重复此过程3次，得半成品C。
将半成品C取出，投入盛有生理盐水溶液的容器中用生理盐水浸泡，振荡3次，每次振荡1小时，振荡转速为100rpm，温度为4℃，得半成品D。
将半成品D投入到盛有浓度为7g/L，pH为7.0的DNA水解酶溶液中，温度为30℃，振荡处理3小时，振荡转速为30rpm，得半成品E。
将半成品E投入盛有生理盐水溶液的容器中用生理盐水浸泡，振荡3次，每次振荡1小时，振荡转速为100rpm，温度为4℃，得半成品F。
将半成品F投入盛有注射用水的容器中用生理盐水浸泡，振荡3次，每次振荡2小时，温度为2℃，振荡转速为80rpm，得成品G。
将成品G取出，置于冻干保护剂溶液中；于5℃进箱，保持1小时，降温到-40℃并保持1小时，升温到-18℃并保持1小时，再次降温至-35℃保持1小时，启动真空泵，将干燥箱真空度抽到5-10Pa；用2小时将隔板升温到-30℃，干燥箱真空度抽到1-5Pa，维持15h；用1小时将隔板升温到0℃，并维持10h后，测定压力升，直至压力升小于1pa；用1小时将隔板升温到10℃，并维持10h，测定压力升，直至压力升小于1pa；用0.5小时将隔板升温到25℃，并维持8h，测定压力升，直至压力升小于1pa；整个干燥过程中前箱真空度不应高于30Pa；得半成品G1。
所述冻干保护剂溶液由10mmol/LpH 7.0的磷酸盐缓冲液、透明质酸和海藻糖组成，其中透明质酸的浓度为0.6mg/100mL，海藻糖的浓度为10mg/100mL。
将半成品G1取出，装入包装袋中，铺平，封口，进行钴-60照射，照射剂量为20-30kGy，取出，终得成品H。缝合强度为16.8N。
实验例1脱细胞异体真皮基质(内置生物套)用于背神经隔离手术
手术方法：阴茎根部神经阻滞麻醉后，包皮过长者环形切除包皮，已行包皮环切术者于阴茎背侧沿原切口切开3-5cm长皮肤。依次切开浅筋膜、深筋膜直至充分暴露白膜。仔细分离至冠状沟，将脱细胞异体真皮基质按需要制备成内置生物套缝合固定于白膜上，远端至冠状沟，两侧不包绕尿道。逐层缝合筋膜及皮肤。阴茎适度加压包扎。
术后处理：
1、术后阴茎适度加压包扎1-3周。
2、术后注意包皮水肿情况，注意阴茎血运。
3、抑制阴茎勃起，可提前两天口服氯丙嗪12.5mg，1次/日，异丙嗪25mg，1次/日。
4、术后8-10天拆线(可吸收线，也可不拆)。
典型病例1
李某，男，37岁，射精过快，进行阴茎背神经隔离术：阴茎背侧5cm横切口，依次切开阴茎浅筋膜、深筋膜，直至充分暴露阴茎白膜，将实施例1脱细胞异体真皮基质制备成内置生物套(2*3cm)缝合固定于阴茎白膜上，远端紧贴冠状沟，用5-0可吸收手术线逐层缝合。
术后阴茎弹力绷带包扎，每日换药观察伤口情况及皮肤血运。
术前射精潜伏期1分钟，6周后回访射精潜伏期8分钟。
术后3个月回访，射精潜伏期在5-10分钟之间。
典型病例2
李某，男，27岁，射精过快，进行阴茎背神经隔离术：阴茎背侧5cm横切口，依次切开阴茎浅筋膜、深筋膜，直至充分暴露阴茎白膜，将实施例2脱细胞异体真皮基质制备成内置生物套(2*3cm)缝合固定于阴茎白膜上，远端紧贴冠状沟，用5-0可吸收手术线逐层缝合。
术后阴茎弹力绷带包扎，每日换药观察伤口情况及皮肤血运。
术前射精潜伏期2分钟，6周后回访射精潜伏期9分钟。
术后3个月回访，射精潜伏期在5-10分钟之间。
对比例1(阴茎背神经阻断术)
王先生，男，38岁，原发性早泄。
进行阴茎背神经阻断术治疗：在局麻下做阴茎背部冠状沟处横切口，在Buck筋膜与白膜间分离显露阴茎背神经的分枝，发现其神经分枝多达7枝，保留阴茎背神经主干及3枝分枝，其余四枝神经分枝游离出2-3CM，予以切除，缝合切口。
术后切口愈合良好，术后三周开始性生活，勃起良好，射精时间明显延长，两个月后可以达到6分钟左右。
对比例2(阴茎埋线降敏术)
周××，男，32岁，射精过快，进行阴茎埋线降敏术：常规消毒，将包皮向后推，充分暴露包皮内板，将系带展开，但不能将系带绷的过紧，以免羊肠线过于靠近尿道口。小圆针穿2-0羊肠线，从距离系带根部约1-1.5cm进针，在系带的皮下潜行，潜行长度约1cm，在距离系带根部约0.2cm处出针，在进针和出针的两头剪断肠线，再次充分拉紧系带，使肠线埋入系带内。
术后5天始嘱患者每日挤压系带处羊肠线3-5分钟直到4周后可以规律性生活止，术后7天拆除内外板缝线。
术前射精潜伏期1分钟，6周后回访射精潜伏期6分钟。
术后3个月回访，射精潜伏期在5-9分钟之间。
由实验例1和对比例1-2结果可知，用本发明方法制备的脱细胞异体真皮基质内置生物套用于背神经隔离手术，由术前射精潜伏期1分钟，术后3个月回访，射精潜伏期在5-10分钟之间；主要是利用脱细胞异体真皮基质医用组织内置生物套覆盖阴茎背神经，从而降低性生活中阴茎冠状沟及包皮皮肤的敏感性，延长射精潜伏期，提高性生活质量；而且脱细胞异体真皮基质内置生物套用于阴茎增粗、延长、背神经隔离手术方式不切断背神经，从而避免了由于患者对切断背神经的担心而导致心理性勃起功能障碍的几率。阴茎背神经阻断术由术前射精潜伏期1分钟，术后3个月回访，射精潜伏期在5-9分钟之间，阴茎背神经阻断术通过降低阴茎头敏感性，提高射精阈值，达到延长性生活时间来治疗原发性早泄，但是临床效果不稳定；近年来发现，经过阴茎背神经阻断术的部分患者会有严重的心理障碍，在阴茎头麻木的同时认为自己快感下降，勃起困难，从而导致心理性勃起功能障碍，给患者造成痛苦的同时，也给医生带来了困扰。阴茎埋线降敏术由术前射精潜伏期1分钟，术后3个月回访，射精潜伏期在5-9分钟之间；阴茎埋线降敏术根据埋线疗法的选穴原则，在阴茎系带处植入羊肠线，利用埋置于穴位或神经敏感区的羊肠线代替针灸针，对穴位局部发挥持续微弱而温和的良性兴奋刺激作用，可加强对大脑射精中枢的抑制，让阴茎神经不再那么“敏感”，大脑对射精行为的控制加强，从而达到解决早泄问题的目的。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (13)

1.一种脱细胞异体真皮基质的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤一，将异体皮原料投入酶溶液中，浸泡振荡处理，得半成品A；所述酶为磷脂酶，或者所述酶为磷脂酶和蛋白酶；
步骤二，将半成品A取出，用生理盐水浸泡，振荡处理，得半成品B；
步骤三，将半成品B投入表面活性剂溶液中，超声浸泡处理，得半成品C；
步骤四，将半成品C用生理盐水浸泡，振荡处理，得半成品D；
步骤五，将半成品D投入盛有DNA水解酶溶液的容器中，振荡处理，得半成品E；
步骤六，将半成品E用生理盐水浸泡，振荡处理，得半成品F；
步骤七，将半成品F用注射用水清洗浸泡，得成品G；或者，进一步地，还包括以下步骤：
步骤八，将成品G取出，包装，灭菌，得成品H；或者将成品G取出，置于含有冻干保护剂的溶液中进行冷冻干燥；包装，灭菌，得成品H。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤一中所述磷脂酶为磷脂酶A1、磷脂酶A2、磷脂酶C、磷脂酶D的一种或多种，更优选地，所述磷脂酶为磷脂酶A1、磷脂酶A2、磷脂酶C、磷脂酶D按照质量比为1:1:1:1的混合物；和/或，
所述蛋白酶包括胰蛋白酶、菠萝蛋白酶、木瓜蛋白酶、dispase酶中的一种或多种。
3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，步骤一中所述酶溶液pH值为7.0-8.0；和/或，
优选地，磷脂酶浓度为0.1g/L-0.4g/L；和/或，
优选地，所述蛋白酶的浓度为0.1g/L-0.3g/L。
4.根据权利要求1-3任一项所述的制备方法，其特征在于，步骤一振荡处理条件为振荡0.5-4小时，振荡转速为10-200rpm，温度为10-40℃。
5.根据权利要求1-4任一项所述的制备方法，其特征在于，步骤三所述表面活性剂溶液中含有0.1-0.3g/L的SDS，或所述表面活性剂溶液中含有0.1-0.3g/L的Triton X-100；
优选地，超声浸泡条件为：40-80KHz，100-400W，温度为1-20℃，超声3-8分钟，浸泡2-4小时，重复2-4次。
6.根据权利要求1-5任一项所述的制备方法，其特征在于，步骤五中所述DNA水解酶溶液的浓度为4-8g/L，pH 7.0-8.0；优选浓度为4-6g/L；和/或，
所述步骤五中振荡处理条件为振荡2-8小时，振荡转速为10-200rpm，温度为10-40℃。
7.根据权利要求1-6任一项所述的制备方法，其特征在于，所述步骤二、步骤四、步骤六、振荡处理条件为振荡1-2小时，振荡转速为80-150rpm，更换生理盐水，继续振荡处理，重复该操作4-6次，温度为1-5℃；和/或，
所述步骤七注射用水清洗浸泡条件为振荡2小时，振荡转速为80-150rpm，温度为1-5℃，更换注射用水，继续振荡处理，重复该操作4-6次。
8.根据权利要求1-7任一项所述的制备方法，其特征在于，步骤八所述冻干保护剂溶液由磷酸盐缓冲液、透明质酸和糖组成，其中透明质酸的浓度为0.4-0.8mg/100mL，糖的浓度为10-20mg/100mL，所述糖为海藻糖、乳糖、蔗糖、甘油、甘露醇、山梨醇、甘露糖、葡萄糖中的一种或几种；优选地，所述磷酸盐缓冲液浓度为10mmol/L、pH为7.0。
9.根据权利要求1-8任一项所述的制备方法，其特征在于，步骤八所述冷冻干燥包括：将成品G于5℃进箱，保持1小时，降温到-40℃并保持1小时，升温到-18℃并保持1小时，再次降温至-35℃保持1小时，启动真空泵，将干燥箱真空度抽到5-10Pa；用2小时将隔板升温到-30℃，干燥箱真空度抽到1-5Pa，维持15h；用1小时将隔板升温到0℃，并维持10h后，测定压力升，直至压力升小于1pa；用1小时将隔板升温到10℃，并维持10h，测定压力升，直至压力升小于1pa；用0.5小时将隔板升温到25℃，并维持8h，测定压力升，直至压力升小于1pa；整个干燥过程中前箱真空度不应高于30Pa。
10.权利要求1-9任一项所述方法制备的脱细胞异体真皮基质；优选地，所述脱细胞异体真皮基质的缝合强度为16N-18N。
11.一种脱细胞异体真皮基质，其特征在于，是由异体皮原料经完全去除可引起宿主免疫排斥反应的所有细胞、完整地保留与原有组织结构相同的细胞外基质而制成；优选地，所述脱细胞异体真皮基质的缝合强度为16N-18N。
12.权利要求10或11所述脱细胞异体真皮基质在制备阴茎背神经手术材料中的应用。
13.一种用于背神经隔离手术的试剂盒，其特征在于，含有权利要求10或11所述脱细胞异体真皮基质；或者，所述试剂盒还可以进一步包含手术刀、手术剪、止血钳、镊子、缝合针、5-0可吸收手术线、含注射用水的安瓿瓶、注射器中的一种或几种。
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