CN108047312A - 一种稳定多肽类蛋白靶向嵌合体分子及其制备方法和用途 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种稳定多肽类蛋白靶向嵌合体分子，其氨基酸序列结构如下所示，本发明还提供了上述的一种的稳定多肽类蛋白靶向嵌合体分子在降解ERα蛋白中的用途。本发明还提供了上述的一种稳定多肽类蛋白靶向嵌合体分子在制备治疗乳腺癌的药物中的用途。本发明还提供了上述的一种的稳定多肽类蛋白靶向嵌合体分子的制备方法。通过荧光定量PCR实验证明本发明的多肽可以抑制ERα下游基因的表达。细胞增殖实验和凋亡实验也证明本发明的多肽通过凋亡途径杀死乳腺癌细胞。

Description

一种稳定多肽类蛋白靶向嵌合体分子及其制备方法和用途
技术领域
本发明涉及生物工程领域，特别是一种多肽，具体是一种稳定多肽类蛋白靶向嵌合体分子及其制备方法和用途。
背景技术
乳腺癌已成为当前社会的重大公共卫生问题。乳腺癌中99％发生在女性，男性仅占1％。全球乳腺癌发病率自20世纪70年代末开始一直呈上升趋势。近年我国乳腺癌发病率的增长速度高出高发国家1～2个百分点，全国肿瘤登记地区乳腺癌发病率位居女性恶性肿瘤的第1位。雌激素受体(ERα)在70％的乳腺癌中是高表达的。雌激素受体阳性的癌细胞的生长依赖于雌激素，它们可以用雌激素拮抗类的药物如他莫昔芬(tamoxifen)进行治疗，通常拥有较好的预后。昔芬类药物目前是乳腺癌治疗一线药物，但存在耐药的问题。针对雌激素受体阳性的癌细胞也可用抑制雌激素产生的芳化酶抑制剂进行治疗。芳化酶抑制剂适用于绝经女性使用。曲妥珠单抗(trastuzumab)是针对人类表皮生长因子受体2的单克隆抗体，可以阻止癌细胞的生长。然而，曲妥珠单抗价格高昂，并且牵涉严重的副反应。化疗药物常组合给药，常用的化疗组合是环磷酰胺和多柔比星，有时会加紫杉醇。然而化疗药物会伤害原本快速生长的正常细胞，进而造成严重的副反应。总体来说，各种疗法需要对应具体的情况，且存在耐药性和毒性的问题。因此发展治疗乳腺癌的新型疗法对解决上述问题很有意义。
长期以来人们关注的治疗性药物主要集中在两类：小分子药物(smallmolecules)、蛋白类药物(biologics)。而这两类治疗性药物由于其自身生物物理性质的局限性，并不能有效覆盖这所有已确证的重要分子靶点。多肽类药物则是另一类引起人们广泛关注和兴趣的靶向分子。与生物大分子类似，多肽类分子对于靶点也有较高的结合力与选择性，相对于小分子类药物具有更小的脱靶效应。而多肽在体内的代谢产物为氨基酸，最大限度地降低了毒性。传统的多肽类药物由于氨基酸残基数目有限，无法有效形成复杂二级结构，在生理溶液中有很高自由度并呈无规则线性状态，不仅降低了其特异性同时容易被蛋白酶所降解。并且多肽类药物的细胞膜穿透能力不是很好。通过化学手段修饰多肽将其稳定成为有二级结构的构象，不仅能够增加其对蛋白酶的稳定性，还能增强多肽的细胞膜穿透能力，并且还能够通过降低多肽与靶点结合时的熵变从而提高多肽与靶点的结合能力。通过各种化学修饰手段，将参与多种蛋白-蛋白相互作用的二级结构单元提取出来进行修饰，不仅通过稳定他们的二级构象来模拟原始蛋白质的相互作用，更重要的是通过修饰可以使得这些蛋白质二级结构单元具备穿透细胞膜的能力，进而靶向细胞内蛋白-蛋白相互作用。
自从2001年被Sakamoto等人报道以来，PROTAC技术被成功的应用到多种病变蛋白的诱导降解中。在自然情况下，E3泛素连接酶需要一个特殊的识别信号来招募并泛素化它的目标蛋白。而PROTAC技术的出现使E3泛素化任何一个蛋白成为可能。这项技术设计一个双重功能的分子，其一端可以结合目标蛋白，另一端结合E3连接酶，并将两者形成一个聚合物。此时E3就能够泛素化目标蛋白并引导其进入降解通路。靶向蛋白降解最有吸引力的地方在于它可以针对那些传统上认为不可成药的蛋白靶点，这些蛋白可能占了人类蛋白质组的80％以上。由于靶向蛋白降解策略可以通过结合蛋白上的几乎任何一个位点，而不是活性位点，来达到选择性的降解蛋白的目的，因此理论上这个策略可以用于任何一个蛋白质。此外，这个策略的另一个优势是可以对那些已经产生抗药性的肿瘤发挥作用。最后，靶向蛋白降解在除了癌症以外的其它疾病中也具有相当的潜力。虽然早期的PROTAC分子集中在多肽类，但是由于多肽类分子穿透细胞的效率很低，导致其效果不佳。后续的研究致力于开发真正的小分子PROTAC，也得到较大的发展。但是相较于小分子药物，多肽类药物也有其不可比拟的优势，这表现在多肽类分子的易修饰，靶点识别特异性等优势。但是多肽类分子一般稳定性较差，而且当针对细胞内靶点时又存在较差的穿透细胞膜的能力。通过化学方法将多肽类分子稳定成一定的构象，可以显著改善这方面的劣势。其中螺旋稳定多肽可以显著提高多肽类分子的穿膜性和稳定性，这也为多肽类PROTAC的发展提供新的可能性。
发明内容
(1)针对现有技术中的上述技术问题，本发明提供了一种稳定多肽类蛋白靶向嵌合体分子及其制备方法和用途，所述的这种稳定多肽类蛋白靶向嵌合体分子及其制备方法和用途要解决现有技术中的药物治疗乳腺癌的效果不佳，而且容易产生耐药性的技术问题。
本发明提供了一种的靶向雌激素受体alpha的稳定多肽类蛋白靶向嵌合体分子，其氨基酸序列结构如下所示，
本发明提供了上述稳定多肽类蛋白靶向嵌合体分子在降解ERα蛋白中的用途。
本发明提供了上述稳定多肽类蛋白靶向嵌合体分子在制备治疗乳腺癌的药物中的用途。
本发明提供了上述稳定多肽类蛋白靶向嵌合体分子在制备治疗由ERα高表达引起的乳腺癌的药物中的用途。
本发明通过荧光偏振检测、免疫印迹分析、荧光定量PCR和人源肿瘤异种移植模型等实验，证实该多肽可以很好的结合ERα蛋白，并通过泛素蛋白酶体途径降解ERα蛋白。此外该多肽可以抑制小鼠乳腺癌肿瘤的生长。
本发明的一种稳定多肽类PROTAC分子通过泛素蛋白酶体途径降解病变ERα。该发明有益于解决乳腺癌耐药的问题，同时拓宽稳定多肽的应用范围。
本发明采用了末端侧链-尾端连接手性二酸修饰多肽的方法来稳定靶向ERa 的螺旋多肽。采用之前文献报道的PROTAC技术，通过连接基团将一段可以结合Von Hippel-Lindau(VHL)E3泛素连接酶的五肽(LAP(OH)YI)和一段可以靶向ERα的多肽(TD-PERM)连接到一起得到多肽TD-PRTOAC。通过免疫印迹和免疫共沉淀分析证明该多肽通过泛素蛋白酶体途径降解ERα高表达乳腺癌细胞系中的ERα蛋白。通过荧光定量PCR实验证明该多肽可以抑制ERα下游基因的表达。
本发明和已有技术相比，其技术进步是显著的。通过细胞增殖实验和凋亡实验证明本发明具有对ERα蛋白很好的降解能力和对人源乳腺癌异种肿瘤生长的抑制作用。本发明的多肽通过凋亡途径杀死乳腺癌细胞。人源异种肿瘤模型证明该多肽能够很好的抑制乳腺癌瘤体的增殖。
附图说明
图1为具不同长度连接基团PROTAC分子对人乳腺癌细胞系MCF-7增殖抑制能力。
图2为FITC标记多肽与ERα蛋白结合图谱。
图3为TD-PROTAC的HPLC分离图谱。
图4为TD-PROTAC的MS鉴定图谱。
图5为多肽的CD谱图。
图6为人乳腺癌细胞系T47D中FITCTD-PROTAC流式细胞术检测的穿膜能力。
图7为人乳腺癌细胞系T47D中FITCTD-PROTAC与ERα的共定位图。
图8为人乳腺癌细胞系MCF-7中FITCTD-PROTAC与ERα的共定位图。
图9为多肽TD-PROTAC通过泛素蛋白酶体途径降解ERα蛋白。(A)人乳腺癌细胞系T47D中不同浓度TD-PROTAC多肽对ERα蛋白的降解水平；(B)人乳腺癌细胞系T47D中不同时间下相同浓度TD-PROTAC多ERα蛋白的降解能力； (C)人乳腺癌细胞系T47D中，不同多肽在相同浓度情况下多ERα蛋白的降解情况；(D)人乳腺癌细胞系T47D中，在同时加入多肽TD-PROTAC和蛋白酶体抑制剂MG-132的情况下，ERα蛋白的水平恢复到对照水平。并且TD-PROTAC 可以提高ERα蛋白的泛素化水平。
图10为多肽TD-PROTAC在人乳腺癌细胞系MCF-7中也可以降解ERα蛋白。 (A)人乳腺癌细胞系MCF-7中，不同多肽对ERα的降解能力；(B)人乳腺癌细胞系MCF-7中，同时加入多肽TD-PROTAC和蛋白酶体抑制剂MG-132可以将 ERα恢复到对照水平。
图11为不同多肽对人乳腺癌细胞系T47D增殖抑制能力。
图12为不同多肽对人乳腺癌细胞系MCF-7增殖抑制能力。
图13为不同多肽在相同浓度下对ERα下游基因ps2的表达水平的影响。
图14为多肽TD-PROTAC对人乳腺癌细胞系MDA-MB-231和人肾上皮细胞系HEK 293T增殖抑制能力。
图15为不同浓度多肽TD-PROTAC对人乳腺癌细胞系T47D凋亡水平的影响。
图16为不同浓度多肽TD-PROTAC对人乳腺癌细胞系T47D周期的影响。
图17为不同药物处理下MCF7细胞人乳腺癌异种移植裸鼠模型中肿瘤体积变化情况。
图18为不同药物处理下小鼠体重的变化情况。
图19为多肽TD-PROTAC处理后通过免疫组化实验检测瘤体ERα的表达情况。
图20为多肽TD-PROTAC处理后小鼠的器官组织部位H&E染色结果。
图21为本发明的原理图。
具体实施方式
下面结合附图对本发明进一步说明。
实施例1
本发明采用采用蛋白靶向嵌合体技术，通过连接基团将一段可以结合VonHippel-Lindau(VHL)E3泛素连接酶的五肽(LAP(OH)YI)和一段可以靶向 ERα的多肽(TD-PERM)连接到一起来设计多肽。然后招募VHL泛素连接酶，进而将ERα泛素化，通过启动蛋白酶体将ERα降解，进而影响ERα的下游通路，抑制ERα高表达乳腺癌细胞系的增值能力。
如图21所示，通过末端侧链-尾端连接手性二酸修饰多肽的方法得到靶向 ERa的稳定螺旋多肽(TD-PERM)，再与一段可以结合Von Hippel-Lindau(VHL) E3泛素连接酶的五肽(LAP(OH)YI)连接得到的一种靶向雌激素受体alpha 的稳定多肽类蛋白靶向嵌合体分子(TD-PROTAC)，再通过泛素蛋白酶体途径降解ERα蛋白。
在蛋白靶向嵌合体技术中，连接基团的选择起到很关键的作用，主要是其长度的筛选。在该项研究中，我们对连接基团的长度进行筛选。我们合成了三条具有不同长度连接子的蛋白靶向嵌合体分子，如表1所示。然后通过对ERα高表达细胞系MCF-7增值抑制能力来筛选合适长度的连接子。如图1所示，当连接基团是6-氨基己酸时，该蛋白靶向嵌合体分子较其他分子表现出更好的抑制癌细胞增值的能力。我们将该多肽命名为TD-PROTAC。
表1：具不同长度连接子PROTAC分子序列(Dap，2,3-二氨基丙酸。ABU，
4-氨基丁酸。AHX，6-氨基己酸。Pro(OH)，顺式-4-羟基-L-脯氨酸)
实施例2
为了更好的进行接下来的研究，对照多肽的设计是必须的。如表2所示，我们设计了一系列的对照多肽。我们课题组之前开发采用末端天冬氨酸策略稳定的雌激素受体调节多肽命名为TD-PERM，而结合结合VHL E3泛素连接酶的五肽命名为HIF。此外，我们将TD-PERM序列进行打乱得到对照多肽TD-PROTACsc，将HIF多肽中结合VHL E3连接酶关键的氨基酸残基突变成丙氨酸得到对照多肽 TD-PROTACmut。另外，我们还合成了一条没有采用关环策略的多肽 PROTAClinear。
表2：TD-PROTAC及其对照多肽序列(序列中没有Tyr残基的多肽在氮端引入Try以用来测定多肽的浓度。对于荧光偏振实验和多肽穿膜性实验，在氮端引入FITC荧光基团。Dap，2,3-二氨基丙酸。ABU，4-氨基丁酸。AHX，6-氨基己酸。Pro(OH)，顺式-4-羟基-L-脯氨酸)
实施例3多肽的制备及分离纯化步骤：
按照氨基酸序列固相合成多肽，制备上述稳定多肽的核心步骤如下(以 TD-PROTAC为例)：
具体操作步骤为：
(1)多肽固相合成：称取100mg Rink amide MBHA树脂于10ml接肽管中，加入二氯甲烷(DCM)，鼓氮气溶胀30min。加入50％(v/v)吗啡啉的N,N-二甲基甲酰胺(DMF)溶液，鼓氮气30min，脱去Fmoc保护基团。用DMF和DCM交替洗涤10遍树脂之后，将配好的⑴Fmoc-Ile-OH(5eq,0.4M,DMF)溶液，6-氯苯并三氮唑-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯(HCTU)(5eq，0.38M，DMF)溶液，N,N- 二异丙基乙胺(DIPEA)(10eq)混匀后加入树脂中鼓氮气1h。抽掉反应液，按上述方法洗树脂后进行下一步操作。
(2)第二到第十四个氨基酸与上述方法相同，即在用吗啡啉脱掉树脂上Fmoc 保护基团之后，将配制好⑵Fmoc-Tyr(tBu)-OH或者⑶Fmoc-Hyp(tBu)-OH或者⑷Fmoc-Ala-OH或者⑸Fmoc-Leu-OH或者⑹FMOC-AHX(6)-OH或者⑺Fmoc-Gln (Trt)-OH或者⑻Fmoc-Leu-OH或者⑼Fmoc-Leu-OH或者⑽Fmoc-Arg(Pbf)-OH 或者⑾Fmoc-Dap(Alloc)-OH或者⑿Fmoc-Leu-OH或者⒀Fmoc-Ile-OH或者⒁ Fmoc-Asp(OH)-OAllyl，HCTU和DIPEA溶液混匀后加入树脂中鼓氮气1h；抽掉反应液，按上述方法洗涤树脂后进行下一步操作。其中第六个氨基酸是，和第十一个和十四个氨基酸推荐偶联时间2-3h。
(3)钯催化脱保护：二甲基巴比妥酸(4eq)与树脂在氮气保护下加入四三苯基膦钯的DCM溶液(1eq)，避光搅拌2h。再重复一次。反应完后用二乙基二硫代氨基甲酸钠(0.5％，DMF)溶液洗5遍，再用DMF和DCM交替洗十遍。
(4)分子内酰胺键关环：加入六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷(PyBOP，3.2eq)，HOBt(3.2eq)，N-甲基吗啡啉(NMM，3.2eq)溶液，鼓氮气 4h，可重复一次。
(5)接下来用吗啡啉脱去Fmoc保护基团，将配好的⒂Fmoc-Arg-OH (5eq,0.4M,DMF)溶液，6-氯苯并三氮唑-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯(HCTU) (5eq，0.38M，DMF)溶液，N,N-二异丙基乙胺(DIPEA)(10eq)混匀后加入树脂中鼓氮气1h。
(5)多肽纯化：用三氟乙酸(TFA)，三异丙基硅烷(TIPS)和H2O (v:v:v＝9.5:0.25:0.25)剪切液将多肽从树脂上切下来，除去剪切液。用高效液相色谱进行纯化分离。(图2和3)
实施例4多肽二级构象分析和结合ERα的能力
对于每种肽，用圆二色谱测定在水中的构象，证明通过末端侧链-尾端连接手性二酸修饰多肽的方法稳定的多肽具有稳定α螺旋构象。(图4)
采用荧光偏振测定法用于测量FITC标记的多肽和ERα蛋白之间的亲和力。荧光偏振实验在96孔板中进行，多肽的浓度用根据FITC的494nm吸收来确定。 (图5)
实施例5多肽TD-PROTAC的穿透细胞膜能力的评估
采用流式细胞实验和共聚焦显微镜研究多肽TD-PROTAC的穿膜能力。在细胞中分别加入不同浓度的FITC荧光标记多肽化合物12个小时。对于流式细胞实验，用0.25％胰酶消化细胞10min后，收集细胞，将细胞重悬到PBS中，通过流式细胞仪来检测多肽的穿膜能力。(图6)对于共聚焦成像实验，通过免疫荧光标记细胞内的ERα蛋白，然后进行细胞显微成像。细胞内的ERα通过抗体标记发红光，荧光标记多肽化合物发绿光，两者如果有共定位，这两个通道叠加之后的图片呈现黄色，进而说明多肽抑制剂的确能够靶向细胞内的ERα蛋白。(图7和图 8)
实施例6多肽TD-PROTAC在乳腺癌细胞中通过泛素蛋白酶体降解ERα蛋白
为了评估该多肽降解ERα蛋白的能力，采用最直观的Western Blot来验证多肽对ERα高表达乳腺癌细胞系中ERα蛋白的降解能力。接下来用免疫沉淀实验来研究是否是通过泛素蛋白酶体途径发挥作用。多肽处理24小时后的细胞用 RIPA裂解液收集，离心取上清，蛋白定浓度之后，采用SDS-PAGE分离，用ERα抗体来检测蛋白的表达水平。对于免疫沉淀实验，用结合有ERα抗体的beads 从细胞裂解液中分离出来ERα蛋白，然后用Western Blot实验来进行接下来的检测。如图9，证明该多肽是通过泛素蛋白酶体途径降解ERα蛋白。图10也证明TD-PROTAC在MCF-7也可以通过蛋白酶体途径降解ERα蛋白。
实施例7多肽TD-PROTAC抑制ERα相关蛋白pS2的表达
细胞中ERα相关基因表达可以进一步评估该多肽的生物活性。采用Trizol 将多肽处理后的细胞中的RNA提取出来，接着进行反转录和荧光定量PCR实验来 检测下游基因的表达水平。qPCR结果表明多肽TD-PROTAC可以抑制ERα相关基 因pS2的表达。(图11)
实施例8多肽TD-PROTAC特异性杀死ERα高表达乳腺癌细胞
为了评估该多肽对乳腺癌细胞的杀伤能力，选择了ERα高表达乳腺癌细胞系 T47D和MCF-7作为代表。同时选择ERα不表达乳腺癌细胞系MDA-MB-231和正常细胞HEK293T来排除多肽TD-PROTAC的非特异性毒性。
细胞活力通过MTT测定法(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl) -2,5-diphenylt-etrazolium bromide))。细胞在96孔板中以4×103接种，用溶于培养基(5％血清)的多肽处理24h，将MTT加入培养基孵育4h。然后加入 DMSO溶解沉淀物，采用酶标仪在490nm测定吸光度。其中未处理的细胞存活率为100％。
结果表明，多肽TD-PROTAC只有对T47D和MCF-7细胞具有明显的细胞增殖抑制以及浓度依赖性。对MDA-MD-231和HEK 293T细胞基本没有毒副作用。这些结果表明该多肽的特异性。(图12、13、14)
实施例9多肽TD-PROTAC对细胞凋亡作用的影响
接下来，通过细胞凋亡和细胞周期实验来研究多肽TD-PROTAC是否通过凋亡途径杀死癌细胞以及对癌细胞细胞周期的影响。将多肽处理后的细胞用胰酶收集，采用FITCAnnexin V凋亡试剂盒检测，用流式细胞仪分析。对于细胞周期实验，收集的细胞先用70％冰乙醇，在-20℃孵育过夜，PI染色，再用流式细胞仪分析。结果表明TD-PROTAC通过细胞凋亡途径杀死T47D，并造成细胞S期细胞周期阻滞。(图15和图16)
实施例10多肽TD-PROTAC通过降解ERα蛋白抑制体内乳腺癌肿瘤生长
本项目采用裸小鼠为实验模型，通过在裸小鼠皮下注射培养MCF-7肿瘤细胞悬浮液建立肿瘤模型，细胞接种前两天接种雌激素缓释片，等肿瘤长到肉眼可见时，每隔3天用游标尺测量一次肿瘤的大小，待肿瘤大小为100-150mm3后进行后续实验。选取18只瘤体大小均一的裸小鼠分为3组，分别注射PBS、 TD-PROTAC多肽抑制剂、小分子他莫昔芬正对照，每天注射一次，并且通过游标卡尺测量一次肿瘤的大小，统计数据。治疗一个月后，通过对裸小鼠的组织切片以及免疫组化技术，检测多肽化合物的治疗效果和药物毒性。
结果如图17所示，TD-PROTAC表现出高到75％的肿瘤抑制效果，而小鼠的体重没有显著变化(图18)。通过免疫组织化学也在体内证明该多肽能够降低肿瘤组织的ERα蛋白的表达水平，再次证明该多肽是通过降解ERα蛋白来发挥作用的(图19)。另外，组织切片用苏木精和伊红(H&E)染色分析多肽的毒性，结果表明多肽对心，肝，脾，肺，肾和脑基本没有显著的毒性(图20)。

Claims (4)

1.一种靶向雌激素受体alpha的稳定多肽类蛋白靶向嵌合体分子，其特征在于：
其氨基酸序列结构如下所示，
2.权利要求1所述的一种稳定多肽类蛋白靶向嵌合体分子在降解ERα蛋白中的用途。
3.权利要求1所述的一种稳定多肽类蛋白靶向嵌合体分子在制备治疗乳腺癌的药物中的用途。
4.权利要求1所述的一种稳定多肽类蛋白靶向嵌合体分子在制备治疗由ERα高表达引起的乳腺癌的药物中的用途。
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Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111303300A (zh) * 2020-03-17 2020-06-19 清华大学 一种降解crept多肽抑制剂及其在抑制胰腺癌细胞增殖与肿瘤发生过程中的应用
CN112321686A (zh) * 2020-11-16 2021-02-05 北京大学深圳研究生院 一种靶向新冠肺炎病毒刺突蛋白的稳定多肽及其用途
CN112794880A (zh) * 2020-11-17 2021-05-14 北京大学深圳研究生院 一种稳定多肽类蛋白靶向抑制剂及其用途
CN114437174A (zh) * 2022-01-28 2022-05-06 深圳湾实验室坪山生物医药研发转化中心 一种用于抗雌激素受体α的氮杂稳定肽、其制备方法及其用途

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105085620A (zh) * 2015-06-25 2015-11-25 中山大学附属第一医院 一种靶向泛素化降解Smad3的化合物
WO2017201449A1 (en) * 2016-05-20 2017-11-23 Genentech, Inc. Protac antibody conjugates and methods of use

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105085620A (zh) * 2015-06-25 2015-11-25 中山大学附属第一医院 一种靶向泛素化降解Smad3的化合物
WO2017201449A1 (en) * 2016-05-20 2017-11-23 Genentech, Inc. Protac antibody conjugates and methods of use

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
HUI ZHAO等: "Crosslinked Aspartic Acids as Helix-Nucleating Templates", 《ANGEW. CHEM. INT. ED》 *
PAOLA BARGAGNA-MOHAN等: "Use of PROTACS as molecular probes of angiogenesis", 《BIOORG MED CHEM LETT》 *

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111303300A (zh) * 2020-03-17 2020-06-19 清华大学 一种降解crept多肽抑制剂及其在抑制胰腺癌细胞增殖与肿瘤发生过程中的应用
CN112321686A (zh) * 2020-11-16 2021-02-05 北京大学深圳研究生院 一种靶向新冠肺炎病毒刺突蛋白的稳定多肽及其用途
CN112794880A (zh) * 2020-11-17 2021-05-14 北京大学深圳研究生院 一种稳定多肽类蛋白靶向抑制剂及其用途
CN114437174A (zh) * 2022-01-28 2022-05-06 深圳湾实验室坪山生物医药研发转化中心 一种用于抗雌激素受体α的氮杂稳定肽、其制备方法及其用途
CN114437174B (zh) * 2022-01-28 2024-01-30 深圳湾实验室坪山生物医药研发转化中心 一种用于抗雌激素受体α的氮杂稳定肽、其制备方法及其用途

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