CN108040848A - 一种花生幼苗期耐盐性鉴定方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种花生幼苗期耐盐性鉴定方法，属于农业领域品种评价技术领域，包括以下步骤：材料准备‑‑盐分胁迫处理，本发明建立一套全新的花生幼苗期耐盐性鉴定方法，借助发芽袋并直接使用Hoagland's营养液培养，能够观测盐胁迫过程中花生根系生长的动态变化，为花生幼苗期盐胁迫检测动态指标提供基础，同时，取材时能够保持根系的完整性，避免损伤根系。
Description
技术领域
本发明属于农业领域品种评价技术领域，具体地说涉及一种花生幼苗期耐盐性鉴定方法。
背景技术
花生是我国重要的油料作物和经济作物。花生生长过程中主要包括种子发芽出苗期、幼苗期、开花下针期、结荚期和荚果成熟期等，其中，幼苗期是花生逆境胁迫下的敏感时期之一，如盐胁迫，目前对花生幼苗期的研究主要采用盆栽土壤条件培养、以蛭石或石英砂为介质的营养液培养方法。王宝枝(2010)在开展“花生耐盐基因的克隆与表达谱分析”时培养幼苗的方法是：新鲜花生临花5号，于蛭石栽培，浇灌Hoagland's营养液，温室培养，待花生幼苗长至2周龄时，开展耐盐性鉴定。慈敦伟等(2014)在开展“花生苗期耐盐性评价及耐盐指标筛选”时，采用室内盆栽方法设置不同盐胁迫浓度，对200个花生品种(系)萌发至幼苗期通过出苗速度、植株形态和生物量等指标进行耐盐性系统评价。上述方式对花生根系生长观察存在限制，并且取样过程中可能导致根系损伤。
发明内容
针对现有技术的不足，为了解决上述问题，现提出一种利用发芽袋对花生幼苗期耐盐性鉴定方法。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种花生幼苗期耐盐性鉴定方法，包括以下步骤：
S1：挑选种子并将种子置于培养皿中；
S2：将培养皿置于温度为28-30℃的水中浸泡6-8h，倒掉水，加入蒸馏水，继续培养60-72h；
S3：将胚根长度大于1cm的种子置于发芽袋中，向发芽袋内加入20ml 1/2浓度Hoagland's营养液，并将发芽袋置于光照培养箱中培养，直至植株长成两叶一心，取出植株并进行扫描存档，获取植株根系长作为处理前根系长；
S4：选择生长状况一致的植株分为对照组和处理组，将对照组的植株置于新的发芽袋中，并向发芽袋内加入20ml 1/2浓度Hoagland's营养液，将处理组的植株置于新的发芽袋中，并向发芽袋内加入20ml 1/2浓度Hoagland's营养液和200mM NaCl；
S5：将对照组和处理组均置于光照培养箱中培养6-7天，取出植株并用清水清洗根系，扫描存档，获取植株的成长指标；
S6：以处理组与对照组的成长指标相对值作为耐盐性评价指标，所述耐盐性评价指标越接近1或越高于1，说明植株的耐盐性越强。
进一步，所述步骤S1中，新收的花生品种荚果晾晒干后室温放置，通过发芽试验检测各花生品种的种子发芽率，选择发芽率高于90％的花生品种，将所述花生品种的荚果剥壳，挑选饱满、大小一致的种子，放置于铺有两层滤纸的培养皿中，加入蒸馏水使种子处于悬浮状态，盖好培养皿盖子。
进一步，所述发芽试验为：取20粒成熟饱满的花生种子，将花生种子置于铺有两张滤纸的12cm培养皿内，加蒸馏水于30℃条件下暗培养，检测第7天的发芽率，以胚根和胚轴长度≥种子长度作为发芽标准。
进一步，所述步骤S3中，每个发芽袋放置1粒种子，发芽袋顶部开有生长孔，将种子的胚根插入生长孔中。
进一步，所述步骤S4中，对照组和处理组的植株均超过10株，用回形针夹在植株两侧以减少发芽袋内营养液蒸发。
进一步，所述步骤S4中，将植株的叶数、株高和根系作为典型指标，目测典型指标相同的植株视为生长状况一致。
进一步，所述步骤S5中，成长指标包括主茎高、处理后根系长、茎叶鲜重、茎叶干重、根系鲜重、根系干重和根冠比。
本发明的有益效果是：
1、建立一套全新的花生幼苗期耐盐性鉴定方法，借助发芽袋并直接使用Hoagland's营养液培养，能够观测盐胁迫过程中花生根系生长的动态变化，为花生幼苗期盐胁迫检测动态指标提供基础，同时，取材时能够保持根系的完整性，避免损伤根系。
2、相较于传统的根据目测地上部表现再进行不同处理的方式，本发明能对不同品种以及相同品种不同单株进行成长量化评价，选择生长状况一致的植株再进行分组处理，消除品种内不同单株生长差异对处理的影响，有利于合理分组，保障相同品种不同单株起始生长状态具有一致性。
3、相较于传统的处理方式，本发明通过扫描获取处理前根系长和处理后根系长，能够获取处理前后根系增量。
附图说明
图1是6个花生品种置于发芽袋内生长一周左右的生长进程图。
其中，横坐标表示花生品种，纵坐标表示处理前根系长，单位为cm。
具体实施方式
为了使本领域的人员更好地理解本发明的技术方案，下面结合本发明的附图，对本发明的技术方案进行清楚、完整的描述，基于本申请中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的其它类同实施例，都应当属于本申请保护的范围。此外，以下实施例中提到的方向用词，例如“上”“下”“左”“右”等仅是参考附图的方向，因此，使用的方向用词是用来说明而非限制本发明创造。
实施例一：
一种花生幼苗期耐盐性鉴定方法，包括以下步骤：
S1：材料准备
S11：新收的花生品种荚果晾晒干后室温放置，通过发芽试验检测各花生品种的种子发芽率，选择发芽率高于90％的花生品种，将所述花生品种的荚果剥壳，挑选饱满、大小一致的种子，放置于铺有两层滤纸的培养皿中，加入蒸馏水使种子处于悬浮状态，盖好培养皿盖子；
S12：将培养皿置于温度为28-30℃的水中浸泡6-8h，倒掉水，加入蒸馏水，继续培养60-72h；
S13：当大多数种子发芽时，将胚根长度大于1cm的种子置于发芽袋中，每个发芽袋放置1粒种子，发芽袋顶部开有生长孔，将种子的胚根插入生长孔中，向发芽袋内加入20ml1/2浓度Hoagland's营养液，并将发芽袋置于光照培养箱中培养，根据生长状况，及时补充营养液，直至植株长成两叶一心(培养一周左右)，取出植株并进行扫描存档，获取植株根系长作为处理前根系长。
其中，所述发芽试验为：取20粒成熟饱满的花生种子，将花生种子置于铺有两张滤纸的12cm培养皿内，加蒸馏水于30℃条件下暗培养，检测第7天的发芽率，以胚根和胚轴长度≥种子长度作为发芽标准。
S2：盐分胁迫处理
S21：将植株的叶数、株高和根系作为典型指标，目测典型指标相同的植株视为生长状况一致，选择生长状况一致的植株分为对照组和处理组，将对照组的植株置于新的发芽袋中，并向发芽袋内加入20ml 1/2浓度Hoagland's营养液，将处理组的植株置于新的发芽袋中，并向发芽袋内加入20ml 1/2浓度Hoagland's营养液和200mM NaCl，对照组和处理组的植株均超过10株，用回形针夹在植株两侧以减少发芽袋内营养液蒸发；
S22：将对照组和处理组均置于光照培养箱中培养6-7天，取出植株并用清水清洗根系，扫描存档，获取植株的成长指标，成长指标包括主茎高、处理后根系长、茎叶鲜重、茎叶干重、根系鲜重、根系干重和根冠比；
S23：以处理组与对照组的成长指标相对值作为耐盐性评价指标，所述耐盐性评价指标越接近1或越高于1，说明植株的耐盐性越强。
按照本实施例对Tifrunner、NM Valencia A、NC3033、SPT06-06、Florunner和Florida07进行耐盐性鉴定，所用NaCl浓度为0、100mM和200mM。
将上述6个花生品种置于发芽袋内生长一周左右，各品种生长进程有差异，如图1所示。由图1可以看出：Florunner根系总量较低，NM根系总量较高，同时，同一品种不同个体间也存在差异，因此，为消除品种内不同单株生长差异对处理的影响，根据生长状态进行分组，保障相同品种不同盐分胁迫处理的起始生长状态具有一致性。
当植株长成两叶一心时，转移到新发芽袋，加入20ml 1/2浓度Hoagland's营养液和不同浓度NaCl，培养6天，取出植株并用清水清洗根系，扫描获取植株的成长指标，表1所示为对照组处理前后各项指标表现。
表1：
表1中，MSL6、ARL6、SFW、RFW、SDW、RDW分别表示培养第6天的主茎高(cm)、根系长(cm)、茎叶鲜重(g)、根系鲜重(g)、茎叶干重(g)、根系干重(g)。ARL0表示处理前根系长。ARL6-0表示处理前后根系增量。根冠比是指根系与茎叶的鲜重或干重的比值，RDW6/SDW6表示培养第6天的根系干重与茎叶干重的相对值，ARL6/MSL6表示培养第6天的根系长与主茎高的相对值。A、B、C表示各品种之间的显著性差异。
由表1可以看出：不同品种在茎叶和根系生长方面存在显著性差异，因此，采用以处理组与对照组的成长指标相对值作为耐盐性评价指标更能反映品种耐盐性水平。
采用处理组与对照组的成长指标相对值作为评价指标，将不同品种进行耐盐性评价，如表2所示。
表2：
由表2可以看出：NaCl浓度为100mM时，NM主茎高降幅最小，Tifrunne在根系长、根系增量、茎叶鲜重、根系鲜重、根系干重、根系/茎叶干重比、根系长/主茎高方面均表现最好，品种间仅在茎叶鲜重、根系干重、根系长/主茎高方面表现显著性差异。NaCl浓度为200mM时，Tifrunner表现出较强的耐盐特性，而SPT06耐盐性弱。
以上已将本发明做一详细说明，以上所述，仅为本发明之较佳实施例而已，当不能限定本发明实施范围，即凡依本申请范围所作均等变化与修饰，皆应仍属本发明涵盖范围内。
Claims (7)
1.一种花生幼苗期耐盐性鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1：挑选种子并将种子置于培养皿中；
S2：将培养皿置于温度为28-30℃的水中浸泡6-8h，倒掉水，加入蒸馏水，继续培养60-72h；
S3：将胚根长度大于1cm的种子置于发芽袋中，向发芽袋内加入20ml 1/2浓度Hoagland's营养液，并将发芽袋置于光照培养箱中培养，直至植株长成两叶一心，取出植株并进行扫描存档，获取植株根系长作为处理前根系长；
S4：选择生长状况一致的植株分为对照组和处理组，将对照组的植株置于新的发芽袋中，并向发芽袋内加入20ml 1/2浓度Hoagland's营养液，将处理组的植株置于新的发芽袋中，并向发芽袋内加入20ml 1/2浓度Hoagland's营养液和200mM NaCl；
S5：将对照组和处理组均置于光照培养箱中培养6-7天，取出植株并用清水清洗根系，扫描存档，获取植株的成长指标；
S6：以处理组与对照组的成长指标相对值作为耐盐性评价指标，所述耐盐性评价指标越接近1或越高于1，说明植株的耐盐性越强。
2.根据权利要求1所述的鉴定方法，其特征在于，所述步骤S1中，新收的花生品种荚果晾晒干后室温放置，通过发芽试验检测各花生品种的种子发芽率，选择发芽率高于90％的花生品种，将所述花生品种的荚果剥壳，挑选饱满、大小一致的种子，放置于铺有两层滤纸的培养皿中，加入蒸馏水使种子处于悬浮状态，盖好培养皿盖子。
3.根据权利要求2所述的鉴定方法，其特征在于，所述发芽试验为：取20粒成熟饱满的花生种子，将花生种子置于铺有两张滤纸的12cm培养皿内，加蒸馏水于30℃条件下暗培养，检测第7天的发芽率，以胚根和胚轴长度≥种子长度作为发芽标准。
4.根据权利要求1所述的鉴定方法，其特征在于，所述步骤S3中，每个发芽袋放置1粒种子，发芽袋顶部开有生长孔，将种子的胚根插入生长孔中。
5.根据权利要求2-4任一所述的鉴定方法，其特征在于，所述步骤S4中，对照组和处理组的植株均超过10株，用回形针夹在植株两侧以减少发芽袋内营养液蒸发。
6.根据权利要求5所述的鉴定方法，其特征在于，所述步骤S4中，将植株的叶数、株高和根系作为典型指标，目测典型指标相同的植株视为生长状况一致。
7.根据权利要求6所述的鉴定方法，其特征在于，所述步骤S5中，成长指标包括主茎高、处理后根系长、茎叶鲜重、茎叶干重、根系鲜重、根系干重和根冠比。
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