CN107988047A - 一种用于原代细胞提取实验中的冰盒及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种用于原代细胞提取实验中的冰盒，该冰盒包括三个部分，第一部分1位于左侧，为一个存储烧杯的长方体冰盒，用于存放装有预冷培基及无菌器械的烧杯；第二部分2位于中间，为三个纵向排列于长方体冰架上存储培养皿的冰盒，用于存放装有离体组织的培养第三部分3位于右侧，为一个存储烧杯的长方体冰盒，用于存放装有酒精及使用后器械的烧杯；第二部分2通过其侧壁上的凸起201与第一部分1和第三部分3侧壁上的对应凹槽101、301相互卡合而组装；所述各盒体的底部设有防滑装置。本发明装配简单可靠、操作简单便利，可以有效的避免传统泡沫冰盒融化的水分可能渗入暂存组织的培养皿造成组织污染或所获取细胞活力低下及实验操作台凌乱的问题，具有实际操作意义。

Description

一种用于原代细胞提取实验中的冰盒及其应用

本发明得到国家自然科学基金国际合作与交流项目（81620108018），国家自然科学基金青年项目（81501899）的资助。

技术领域

本发明涉及医疗器械领域，具体的说是一种用于原代细胞提取实验中的冰盒及其应用。

背景技术

原代培养是直接从生物体获取细胞进行培养，为研究生物体细胞的生长、代谢、繁殖、临床实践等提供有力的手段。因此，获取高活力的各种原代细胞成为研究的必要前提。由于在常温下，离体组织的细胞成分得不到正常的血液供应，会很快发生降解，低温环境降低组织细胞的新陈代谢水平，因此，在低温条件下进行组织解剖分离取材，离体组织的代谢活性会降低，从而获取高活力的原代细胞。所以，全程低温条件成为离体组织的解剖分离取材获取高活力原代细胞的重要手段。目前，在原代细胞的实验操作过程中，针对解剖分离取材过程中的低温操作一般的方法是制作冰盒，通常是将装有碎冰的泡沫盒制成一个简易的冰盒，将装有预冷培基的培养皿挤入冰层用于临时存放组织。但是在解剖组织较多的情况下，解剖耗时较长，泡沫冰盒里的部分碎冰发生融化，造成冰层中掺杂大量水分，水分容易渗入培养皿造成组织污染，进而造成所提取的原代细胞污染。同时，在体视显微镜下进行解剖分离操作时一般的方法是直接将盛放有组织的预冷培基的培养皿放置于体视显微镜下，在解剖组织较多的情况下，解剖耗时较长，预冷培养皿里的培基温度逐渐升高，进而影响高活力原代细胞的获取。另外，提取原代细胞的解剖分离操作过程中使用到镊子、剪刀等多个手术器械，一般方法是直接放置于无菌解剖盘，但在解剖组织较多的情况下，容易造成实验操作台较为凌乱。因此，设计一种用于原代细胞培养的冰盒装置具有重大意义。

发明内容

本发明针对以上问题的提出，而研究设计一种用于原代细胞提取实验中的冰盒。与现有技术相比，本发明提供的冰盒结构简单，使用方便，适用于多种原代细胞提取实验过程中体视显微镜下组织的解剖分离和组织及手术器械的暂时存放，保证全程低温条件下进行原代细胞的提取。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：

一种用于原代细胞提取实验中的冰盒，其特征在于该冰盒包括三个部分，第一部分1位于左侧，为一个存储烧杯的长方体冰盒，用于存放装有预冷培基及无菌器械的烧杯；第二部分2位于中间，为三个纵向排列于长方体冰架上存储培养皿的冰盒，用于存放装有离体组织的培养皿；第三部分3位于右侧，为一个存储烧杯的长方体冰盒，用于存放装有酒精及使用后器械的烧杯；部分2通过其侧壁上的凸起201与第一部分1和第三部分3侧壁上的对应凹槽101、301相互卡合而组装。

本发明所述的用于原代细胞提取实验中的冰盒，其中第一部分1中烧杯承接孔102规格有25ml、50ml、100ml，根据实验要求，调整安装或拆卸不同规格的冰盒使用；第二部分2中培养皿承接孔202规格有3.5cm、6cm、10cm，根据实验要求，调整安装或拆卸不同规格的冰盒使用；第三部分3中烧杯承接孔302规格有25ml、50ml、100ml，根据实验要求，调整安装或拆卸不同规格的冰盒使用。

所述第二部分2为一个前面未封闭的中空长方体冰架203，中间设有左右对称三组水平凹槽204，用于存放存储培养皿的冰盒；其左右两侧设有能与第一部分1和第三部分3侧壁上的凹槽相嵌合的凸起201。

所述第二部分2，有三个长方体培养皿冰盒205，每个培养皿冰盒由盒体205-1、盒盖205-2组成，盒盖205-2上设置盒盖锁扣205-3，盒体上对应盒盖锁扣位置设置锁205-4，盒体两侧设有与支架内侧凹槽相卡合的凸起205-5，盒体培养皿承接孔202用于存放含有离体组织的培养皿，盒盖上对应培养皿承接孔位置设置与培养皿盒盖相配套的凹槽205-6，也可抽取任意一层培养皿冰盒放置于体视显微镜下进行使用，使显微镜下解剖分离组织的过程在低温环境下进行，从而保证涉及离体组织的所有过程都在低温环境下进行，有利于高活力原代细胞的获取。

所述各盒体的底部设有防滑装置4，便于操作时不慎碰到冰盒而将组织、培养皿或器械洒出。所述第一部分1和第三部分3的冰盒及第二部分2的培养皿冰盒盒体偏下部设有凹形手持部103，303，第二部分2冰架左右后侧偏下部设有凹形手持部206，便于对冰盒的转移。所述各盒盖表面设有可活动的标签夹207，可以夹住写有实验信息的标签。

本发明进一步公开了用于原代细胞提取实验中的冰盒的使用方法，其特征在于按如下的步骤进行：

（1）使用前将实验冰盒放在冰箱内，使得盒体内部的高分子聚冷材料充分蓄冷，需要使用时，将实验冰盒从冰箱中拿出，将装有预冷培基的培养皿和烧杯分别放置入对应的冰盒中，盒体内部的高分子聚冷材料通过盒体使得培养皿和烧杯的温度降低，降低培养皿和烧杯内的液体温度，再进行实验操作。

（2）实验开始后，可抽取部分二中任意一层培养皿冰盒205放置于体视显微镜下进行使用，使显微镜下解剖分离组织的过程在低温环境下进行。

本发明中，冰盒及冰盖的材质为高密度聚乙烯，化学稳定性好，能耐除具有氧化性质的酸之外的大多数酸碱的侵蚀。而且，冰盒及冰盖在常温下不溶于一般溶剂，吸水性小，且不发生溶胀，电绝缘性能优良，可使得冰冻后装配组合偏差非常小。

本发明重点解决的是保证全程低温条件下进行原代细胞的提取，主要的创新在于培养皿冰盒的设计应用，及三大部分的组装与拆卸使用，设计中遇到的主要问题是部分1、2、3间的互相组装与拆卸的设计。

本发明更进一步公开了用于原代细胞提取实验中的冰盒在避免传统泡沫冰盒融化的水分可能渗入暂存组织的培养皿造成所提取原代细胞污染、实验台凌乱方面，及促进高活力原代细胞获取方面的应用。实验结果显示此发明能保证全程低温条件下进行原代细胞的提取，避免传统泡沫冰盒融化的水分可能渗入暂存组织的培养皿造成所提取原代细胞污染及多个手术器械造成的实验台凌乱，并加速原代细胞提取的过程，促进高活力原代细胞的获取。

本发明公开的用于原代细胞提取实验中的冰盒的有益效果是：

本发明通过设计用于原代细胞提取实验中的冰盒来用于多种原代细胞提取实验过程中体视显微镜下组织的解剖分离和组织及手术器械的暂时存放等，避免传统泡沫冰盒融化的水分可能渗入暂存组织的培养皿造成组织污染或所获取细胞活力低下及实验操作台凌乱的问题。本发明装配简单可靠、操作简单便利，具有实际操作意义。

附图说明

图1为本发明的整体结构示意图；

图2为本发明的左部分的整体结构示意图；

图3为本发明的中间部分的整体结构示意图；

图4为本发明的中间部分冰架的结构示意图；

图5为本发明的中间部分培养皿冰盒的结构示意图；

图6为本发明的右部分的整体结构示意图；

图7为本发明的各部分的底部结构示意图；

其中，1-第一部分，2-第二部分，3-第三部分，4-防滑装置，101-左侧部分凹槽，

102-左侧部分烧杯承接孔，103-左侧部分凹形手持部，201-中间部分冰架凸起，

202-培养皿承接孔，203-冰架，204-冰架水平凹槽，205-培养皿冰盒，

205-1-培养皿冰盒盒体，205-2培养皿冰盒盒盖，205-3培养皿冰盒锁扣，

205-4培养皿冰盒锁，205-5培养皿冰盒盒体凸起，205-6培养皿冰盒盒盖凹槽，

206-中间部分凹形手持部，207-标签夹，301-右侧部分凹槽，302-右侧部分烧杯承接孔，303-右侧部分凹形手持部。

具体实施方式

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。

实施例1

一种用于原代细胞提取实验中的冰盒，其特征在于该冰盒包括三个部分，第一部分1位于左侧，为一个存储烧杯的长方体冰盒，用于存放装有预冷培基及无菌器械的烧杯；第二部分2位于中间，为三个纵向排列于长方体冰架上存储培养皿的冰盒，用于存放装有离体组织的培养皿；第三部分3位于右侧，为一个存储烧杯的长方体冰盒，用于存放装有酒精及使用后器械的烧杯；部分2通过其侧壁上的凸起201与第一部分1和第三部分3侧壁上的对应凹槽101、301相互卡合而组装。

第二部分2位于中间，为三个纵向排列于长方体冰架上存储培养皿的冰盒，用于存放装有离体组织的培养皿；第二部分2前面为未封闭的中空长方体冰架203，中间设有左右对称三组水平凹槽204，用于存放存储培养皿的冰盒；其左右两侧设有能与第一部分1和第三部分3侧壁上的凹槽相嵌合的凸起201。第二部分2，有三个长方体培养皿冰盒205，每个培养皿冰盒由盒体205-1、盒盖205-2组成，盒盖205-2上设置盒盖锁扣205-3，盒体上对应盒盖锁扣位置设置锁205-4，盒体两侧设有与支架内侧凹槽相卡合的凸起205-5，盒体培养皿承接孔202用于存放含有离体组织的培养皿，盒盖上对应培养皿承接孔位置设置与培养皿盒盖相配套的凹槽205-6，也可抽取任意一层培养皿冰盒放置于体视显微镜下进行使用，使显微镜下解剖分离组织的过程在低温环境下进行，从而保证涉及离体组织的所有过程都在低温环境下进行，有利于高活力原代细胞的获取。

第三部分3位于右侧，为一个存储烧杯的长方体冰盒，用于存放装有酒精及使用后器械的烧杯；第二部分2通过其侧壁上的凸起201与部分1和部分3侧壁上的对应凹槽101、301相互卡合而组装。

所述各盒体的底部设有防滑装置4，便于操作时不慎碰到冰盒而将组织、培养皿或器械洒出。所述第一部分1和第三部分3的冰盒及第二部分2的培养皿冰盒盒体偏下部设有凹形手持部103，303，部分2冰架左右后侧偏下部设有凹形手持部206，便于对冰盒的转移。所述各盒盖表面设有可活动的标签夹207，可以夹住写有实验信息的标签。

实施例2

使用前将实验冰盒放在冰箱内，使得盒体内部的高分子聚冷材料充分蓄冷，需要使用时，将实验冰盒从冰箱中拿出，将装有预冷培基的培养皿和烧杯分别放置入对应的冰盒中，盒体内部的高分子聚冷材料通过盒体使得培养皿和烧杯的温度降低，降低培养皿和烧杯内的液体温度，再进行实验操作。另外，为了便于记录实验信息，可以制作标签用标签夹207夹住。实验开始后，可抽取第二部分中任意一层培养皿冰盒205放置于体视显微镜下进行使用，使显微镜下解剖分离组织的过程在低温环境下进行。本发明装配简单可靠、操作简单便利，具有实际操作意义。

下面给出一个典型的胎龄为15.5天的C57BL胎鼠大脑皮层原代神经元提取的实验为实例，其操作过程如下：

（1）实验前一天将实验冰盒倒置放在-20℃冰箱内，使得盒体内的高分子聚冷材料充分蓄冷；

（2）进行实验前，将实验冰盒从冰箱中取出，各部分进行拆卸使用；将装有预冷75%酒精的100ml烧杯放置入部分1中规格为100ml的烧杯承接孔102中，将装有预冷75%酒精的的100ml烧杯放置入部分3中规格为100ml的烧杯承接孔302中，将装有预冷DMEM培基的10cm的培养皿放置入部分2中规格为10cm的培养皿承接孔205中，盒体内部的高分子聚冷材料通过盒体使得烧杯和培养皿的温度降低，降低烧杯和培养皿内的75%酒精和DMEM培基的温度，并将解剖所用手术器械放入第一部分1中烧杯承接孔102中的烧杯，再进行实验操作（各部分冰盒位置的摆放可根据操作者习惯摆放）；

（3）开始进行实验，首先将75%酒精消毒后的C57BL孕鼠进行解剖，取出胎鼠放于部分2中一个培养皿冰盒里的10cm培养皿里（根据胎鼠的数量进行不同规格培养皿的选择，从而选择对应规格的培养皿冰盒）；

（4）取出第二部分2中新一个存储有10cm的培养皿的培养皿冰盒中，将其放置于体视显微镜下，取出步骤（3）中培养皿里的一个胎鼠放于显微镜下培养皿冰盒的10cm培养皿里进行显微解剖，取出其大脑皮层组织放入另一个新的培养皿冰盒里的10cm培养皿里，直至取出所有胎鼠的大脑皮层；使用后的显微器械放于部分3中烧杯承接孔302中的烧杯；

（5）换新一个10cm培养皿放置于显微镜下的培养皿冰盒里，将步骤（4）中取出的大脑皮层放于显微镜下的10cm培养皿，显微镜下操作剥离软脑膜，并将剥离软脑膜后的大脑皮层放于培养皿冰盒中的新一个10cm培养皿中，直至所有大脑皮层的软脑膜剥离完全；使用后的显微器械放于第三部分3中烧杯承接孔302中的烧杯；

（6）将储存有盛有剥离完全软脑膜的大脑皮层的培养皿冰盒取出，使用显微剪刀剪碎剥离完软脑膜的大脑皮层组织，使用后的显微器械放于第三部分3中烧杯承接孔302中的烧杯，收集组织离心进行消化，神经元计数并铺板；

（7）取出各部分承接孔里的烧杯和培养皿，将培养皿冰盒放回第二部分2的冰架203上，三部分进行组装后倒置放在-20℃冰箱内，便于下次实验使用；

（8）实验过程中，为了便于记录实验信息，可以制作标签用标签夹207夹住。

实施例3

对比试验

本发明提供的冰盒结构简单，使用方便，适用于包括原代神经元及神经干细胞等多种原代细胞提取实验过程中体视显微镜下组织的解剖分离和组织及手术器械的暂时存放。在提取神经干细胞、神经元等原代细胞的过程中，由于传统泡沫盒高度的问题我们常常直接将培养皿置于显微镜下进行大脑组织的解剖分离等，所以不能保证原代神经干细胞、神经元等的提取所要求的全程低温条件。本发明设计的培养皿冰盒方便置于显微镜下，保证了解剖分离全大脑、大脑皮层、海马组织，及剥离软脑膜等操作在低温环境下进行，同时培养皿冰盒能暂时存放未解剖及解剖好的全脑、大脑皮层及海马组织，从而确保了原代神经干细胞、神经元等提取的整个过程所需的低温环境。另外，传统常常采用泡沫冰盒来存储暂存全脑、大脑皮层及海马组织的培养皿，但会出现冰盒融化的水分可能渗入暂存组织的培养皿的情况，本发明设计的培养皿冰盒则能完全避免此问题，使得由于此原因导致的组织污染率为0。传统方法直接将解剖使用的器械放于解剖盘内，一旦使用器械多就会造成实验台凌乱，而本发明设计的两个烧杯冰盒能用于分别存放使用前后装有酒精及显微镊、显微剪刀等手术器械的烧杯，不仅能解决实验台凌乱，还能保证酒精及手术器械处于低温环境中。本发明装配简单可靠、操作简单便利，具有实际操作意义。

最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (8)

1.一种用于原代细胞提取实验中的冰盒，其特征在于该冰盒包括三个部分，第一部分（1）位于左侧，为一个存储烧杯的长方体冰盒，用于存放装有预冷培基及无菌器械的烧杯；第二部分（2）位于中间，为三个纵向排列于长方体冰架上存储培养皿的冰盒，用于存放装有离体组织的培养皿；第三部分（3）位于右侧，为一个存储烧杯的长方体冰盒，用于存放装有酒精及使用后器械的烧杯；第二部分（2）通过其侧壁上的凸起（201）与第一部分（1）和第三部分（3）侧壁上的对应凹槽（101）（301）相互卡合而组装；所述各盒体的底部设有防滑装置（4），便于操作时不慎碰到冰盒而将组织、培养皿或器械洒出。

2.根据权利要求1所述的用于原代细胞提取实验中的冰盒，其特征在于：第一部分（1）中烧杯承接孔（102）规格有25ml、50ml、100ml，根据实验要求，调整安装或拆卸不同规格的冰盒使用；第二部分（2）中培养皿承接孔（202）规格有3.5cm、6cm、10cm，根据实验要求，调整安装或拆卸不同规格的冰盒使用；第三部分（3）中烧杯承接孔（302）规格有25ml、50ml、100ml，根据实验要求，调整安装或拆卸不同规格的冰盒使用。

3.根据权利要求1所述的用于原代细胞提取实验中的冰盒，其特征在于：第二部分（2）为一个前面未封闭的中空长方体冰架（203），中间设有左右对称三组水平凹槽（204），用于存放存储培养皿的冰盒；其左右两侧设有能与第一部分（1）和第三部分（3）侧壁上的凹槽相嵌合的凸起（201）。

4.根据权利要求1所述的用于原代细胞提取实验中的冰盒，其特征在于：第二部分（2），有三个长方体培养皿冰盒（205），每个培养皿冰盒由盒体（205-1）、盒盖（205-2）组成，盒盖（205-2）上设置盒盖锁扣（205-3），盒体上对应盒盖锁扣位置设置锁（205-4），盒体两侧设有与支架内侧凹槽相卡合的凸起（205-5），盒体培养皿承接孔（202）用于存放含有离体组织的培养皿，盒盖上对应培养皿承接孔位置设置与培养皿盒盖相配套的凹槽（205-6），也可抽取任意一层培养皿冰盒放置于体视显微镜下进行使用，使显微镜下解剖分离组织的过程在低温环境下进行，从而保证涉及离体组织的所有过程都在低温环境下进行，有利于高活力原代细胞的获取。

5.根据权利要求1所述的用于原代细胞提取实验中的冰盒，其特征在于：第一部分（1）和第三部分（3）的冰盒及第二部分（2）的培养皿冰盒盒体偏下部设有凹形手持部（103，303），第二部分（2）冰架左右后侧偏下部设有凹形手持部（206），便于对冰盒的转移。

6.根据权利要求1所述的用于原代细胞提取实验中的冰盒，其特征在于：所述各盒盖表面设有可活动的标签夹（207），可以夹住写有实验信息的标签。

7.权利要求1所述用于原代细胞提取实验中的冰盒的使用方法，其特征在于按如下的步骤进行：

（1）使用前将实验冰盒放在冰箱内，使得盒体内部的高分子聚冷材料充分蓄冷，需要使用时，将实验冰盒从冰箱中拿出，将装有预冷培基的培养皿和烧杯分别放置入对应的冰盒中，盒体内部的高分子聚冷材料通过盒体使得培养皿和烧杯的温度降低，降低培养皿和烧杯内的液体温度，再进行实验操作；

（2）实验开始后，可抽取部分2中任意一层培养皿冰盒（205）放置于体视显微镜下进行使用，使显微镜下解剖分离组织的过程在低温环境下进行。

8.权利要求7所述用于原代细胞提取实验中的冰盒的使用方法在避免传统泡沫冰盒融化的水分可能渗入暂存组织的培养皿造成所提取原代细胞污染及促进高活力原代细胞获取方面的应用。