CN107951903A - 富含硫化氢的复苏液在制备治疗失血性休克药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种富含硫化氢的复苏液在制备治疗失血性休克药物中的应用，上述应用中，所述治疗失血性休克药物为富含硫化氢的复苏液，所述富含硫化氢的复苏液的浓度为250～650umol/L。所述富含硫化氢的复苏液的制备方法包括以下步骤：取依次经过脱气处理和低温预处理的复苏液溶解固体硫氢化钠或固体硫化氢，过滤后进行深低温冻存，使用时取充分溶解后硫化氢溶液溶于复苏液中，获得富含硫化氢的复苏液。本发明公开的富含硫化氢的复苏液在制备治疗失血性休克药物中的应用中，经动物实验证明：富含硫化氢的复苏液可稳定失血性休克后复苏时的血流动力学，提高心功能，改善微循环，抑制心肌细胞损伤，从而提高失血性休克的救治率和存活率。

Description

富含硫化氢的复苏液在制备治疗失血性休克药物中的应用

技术领域

本发明涉及医药技术领域，尤其涉及一种富含硫化氢的复苏液在制备治疗失血性休克药物中的应用。

背景技术

失血性休克是指由各种原因引起的血液或血浆急性大量丢失，而导致有效循环血量与心输出量减少、组织灌注不足、细胞代谢紊乱和功能受损的病理生理过程。在休克的早期，即在代偿阶段，机体的全身小血管持续收缩痉挛，大量真毛细血管网关闭，微循环血液灌流减少，组织缺血缺氧。同时交感神经系统兴奋，交感肾上腺髓质系统兴奋引起体液中儿茶酚胺增多以及其他缩血管物质分泌增多引起心脏收缩力加强，腹腔小血管、皮肤、黏膜血管收缩，血压升高，从而得以保证心、肺、脑血液供应。但是，失代偿期：前阻力血管扩张，毛细血管大量开放，血液流速减慢，微循环淤血，组织灌流量进一步减少，组织呈淤血缺氧状态。因为此时期酸中毒加重扩血管代谢产物增多，最终导致血管扩张，血压进行性下降，心、肺、脑等重要脏器缺血缺氧，会导致死亡。

目前，失血性休克救治的主要策略即止血和补充血容量。由于条件受限，在救治失血性休克时往往存在血制品、促凝血药物缺乏，有效的复苏液对救治效果至关重要。因此关于等渗盐水、乳酸林格氏液、高渗盐水等复苏液体的研究受到广泛关注，但其复苏疗效仍不甚满意，甚至造成缺血再灌注，进一步加重组织细胞损伤。近年的研究发现，气体分子硫化氢不仅可以提高平均动脉压，同时可以减轻心肌损伤，进而改善心、肺功能。同时，大量研究亦证实硫化氢对肝脏、肾脏、胃肠以及神经系统均具有一定的保护作用。

失血性休克可导致组织灌注不足、细胞代谢紊乱、缺血再灌注损伤、器官功能衰竭和死亡，在其对应的治疗方式中至今未见有关采用富含硫化氢的复苏液防治失血性休克的相关报道，亦未见有关采用富含硫化氢的复苏液防治失血性休克所致的心肌细胞损伤。因此，有必要提供一种富含硫化氢的复苏液在制备治疗失血性休克药物中的应用。

发明内容

本发明的目的在于提供一种富含硫化氢的复苏液在制备治疗失血性休克药物中的应用。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

本发明提供了一种富含硫化氢的复苏液在制备治疗失血性休克药物中的应用。

所述治疗失血性休克药物为富含硫化氢的复苏液，所述富含硫化氢的复苏液的浓度为250～650umol/L。

所述富含硫化氢的复苏液的制备方法包括以下步骤：

取依次经过脱气处理和低温预处理的复苏液溶解固体硫氢化钠或固体硫化氢，过滤后进行深低温冻存，使用时取充分溶解后硫化氢溶液溶于复苏液中，获得富含硫化氢的复苏液。

所述脱气处理包括以下步骤：将复苏液常温下以0.4～0.8个绝对大气压减压处理2～24小时，取出后常温、常压下放置4～12小时，将析出的气体抽除。

所述低温预处理包括以下步骤：常压下将脱气处理后的复苏液在温度为0～4℃时冷却2～24小时。

所述依次经过脱气处理和低温预处理的复苏液溶解固体硫氢化钠或固体硫化氢，使硫化氢的浓度为2～65mmol/L。

所述深低温冻存是在温度至少为-20℃保存。

所述充分溶解后硫化氢溶液是在温度为25～45℃的条件下溶解1～2小时。

所述充分溶解后硫化氢溶液溶于复苏液中，其硫化氢溶液和复苏液的体积比是1：(1～100)。

所述复苏液为生理盐水、平衡液等。

由于采用上述技术方案，本发明具有以下优点和有益效果：

本发明的富含硫化氢的复苏液在制备治疗失血性休克药物中的应用，经动物实验证明：富含硫化氢的复苏液可稳定失血性休克后复苏时的血流动力学，提高心功能，改善微循环，抑制心肌细胞损伤，从而提高失血性休克的救治率和存活率。因此，本发明的富含硫化氢的复苏液可用做治疗失血性休克的药物。

本发明的富含硫化氢的复苏液在制备治疗失血性休克药物中的应用，包括了富含硫化氢复苏液的制备方法，动物实验结果证明：富含硫化氢的复苏液能更好地纠正失血性休克犬的模型，同时能够在不影响机体肝、肾功能的情况下，显著改善实验犬模型的心脏功能、保护心肌细胞，因此，可用于治疗失血性休克。

附图说明

图1是本发明的富含硫化氢的复苏液在实验犬失血性休克后抑制心肌细胞Beclin-1表达的情况示意图，左图为电泳图，右图为定量计算图；

图2是本发明的富含硫化氢的复苏液在实验犬失血性休克后抑制心肌细胞LC-3I/II表达的情况示意图，左图为电泳图，右图为定量计算图；

图3是本发明的富含硫化氢的复苏液在实验犬失血性休克后抑制心肌细胞c-Caspase3表达的情况示意图，左图为电泳图，右图为定量计算图；

图4是本发明的富含硫化氢的复苏液在实验犬失血性休克后谷草转氨酶变化的情况示意图；

图5是本发明的富含硫化氢的复苏液在实验犬失血性休克后血清尿素氮的变化情况示意图；以及

图6是本发明的富含硫化氢的复苏液在实验犬失血性休克后血清肌酐的变化情况示意图；

其中：Con为没有干预的空白对照组；NS或单纯复苏组为失血性休克单纯生理盐水复苏组；H₂S或H₂S复苏液复苏组为失血性休克富含硫化氢的复苏液复苏组。

具体实施方式

现结合实施例，对本发明作详细描述，但本发明的实施不仅限于此。

下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。

固体硫氢化钠购自美国Sigma公司。

实施例1：制备富含硫化氢的复苏液

第一步、脱气处理：将500mL生理盐水注射液软包装袋置于低压舱中，常温下以0.4个绝对大气压减压处理2小时，取出后常温、常压下放置4小时，将析出的气体用注射器抽除。

第二步、低温预处理：常压下将上述脱气处理后的生理盐水注射液软包装袋置于2℃环境下2小时充分冷却。

第三步、配置硫化氢溶液：从上述低温预处理后的软包装袋中抽出50mL的生理盐水，注入到放置有固体硫氢化钠8.4mg(分子量56)的密闭容器中，充分溶解后过滤，将过滤后的硫化氢溶液注入医用注射液软包装内，使硫化氢浓度达到3mmol/L(mM)。

第四步、深低温冻存：将硫化氢溶液置于-20℃保存备用，使用前于37℃水浴锅溶解1小时即可。

第五步、配置复苏液：抽取溶解后的硫化氢溶液10mL，注入100mL生理盐水即可使用，硫化氢溶液和生理盐水的体积比是1：10。

实施例2：动物实验

一、实验动物：成年健康比格犬，体质量为12-15kg，购于第二军医大学实验动物中心。

取成年健康比格犬13只，随机分成3组：

正常对照组(Con)，n＝3只；

单纯生理盐水复苏组(NS)，n＝5只；

富含硫化氢的复苏液复苏组(H₂S)，n＝5只。

除正常对照组外，其余各组分别构建失血性休克模型，不同复苏组在失血性休克模型构建成功后给予不同复苏液进行复苏。

二、失血性休克模型的制备：

实验犬戊巴比妥钠麻醉后固定于操作台上，左股动脉、左颈静脉、右股动脉分别置入PiCCO导管、漂浮导管、单腔深静脉管，50mL空针接单腔深静脉管缓慢抽血，使犬平均动脉血压降至(35±5)mmHg以下，通过放血和回输控制血压并维持60min后，给予适量晶体恢复平均动脉血压，观察6h；NS组和H₂S组，分别在复苏开始之前给予生理盐水和富含H₂S的复苏液(实施例1制备)。

上述各组实验犬在实验前、休克模型构建成功时、复苏开始时、复苏成功时、复苏成功后2h、复苏成功后4h、复苏成功后6h分别记录心率、平均动脉压、心指数、左心室收缩指数、动脉血剩余碱和动脉血乳酸水平。各组实验犬在实验前、休克模型构建成功时、复苏成功时和复苏成功后6h抽血检测肝、肾功能相关指标。记录实验过程中各组实验犬平均失血量、平均补液量、平均复苏时间、复苏成功率和复苏后尿量。复苏成功后6h处死实验犬，取心肌组织监测自噬和凋亡相关蛋白含量。

三、实验结果：

1.实验犬一般情况和终点事件

NS组和H₂S组实验犬在体重、平均失血量和平均补液量等方面无显著差(如表1所示，表1是本发明在失血性休克后复苏成功率的情况。)，表示两组实验犬基线稳定，可以进行比较。

表1实验犬一般情况和终点事件

	NS组	H2S组	P值
				体重(kg)	13.40±0.89	13.00±1.22	0.477
平均失血量(mL)	502.00±87.58	582.00±44.38	0.224
				平均补液量(mL)	4292.00±353.30	4120.00±1066.30	0.738
平均复苏时间(min)	231.00±33.24	105.00±14.58	0.0008
				复苏成功率(％)	60	100	0.024
复苏6h平均尿量(ml)	120.00±85.15	693.00±343.61	0.013

P＜0.05表示差异具有统计学意义

H₂S组实验犬平均复苏时间显著低于NS组(P＝0.0008)，且复苏成功率显著高于NS组(P＝0.024)。对复苏后6h尿量统计发现，H₂S组显著多于NS组(P＝0.013)(如表1所示)。

2.实验犬血流动力学指标变化

(1)心率(HR)

NS组实验犬与H₂S组实验犬实验前心率无明显差异，建模成功过后两组实验犬心率均出现一定下降，但两组间无差异，后NS组实验犬心率逐步增加，而H₂S组实验犬心率基本稳定，至复苏成功后6h，H₂S组实验犬心率显著低于NS组(P＝0.038)，提示休克得到有效纠正(如表2所示，表2是本发明在失血性休克后稳定心率的情况。)。

表2实验犬心率变化情况

P＜0.05表示差异具有统计学意义

(2)平均动脉压(MAP)

NS组实验犬和H₂S组实验犬实验前MAP无明显差异。从复苏成功开始，应用硫化氢复苏液的实验犬MAP显著高于NS组(P＜0.05)，提示其休克得到充分、快速的纠正(如表3所示，表3是本发明在失血性休克后提升平均动脉压的情况。)。

表3各组实验犬平均动脉压变化情况

P＜0.05表示差异具有统计学意义

3.实验犬心功能指标情况

(1)心指数(CI)

两组实验犬开始实验前及建模成功后CI无明显差异。复苏成功后2h，应用硫化氢复苏液的实验犬CI逐步升高，显著高于NS组(P＜0.05)，提示硫化氢具有改善心功能、提高心排量的作用，从而更有效的纠正休克(如表4所示，表4是本发明在失血性休克后提高心指数的情况。)。

表4实验犬心指数变化情况

P＜0.05表示差异具有统计学意义

(2)左心室收缩指数(dpMAX)

实验结果提示，两组实验犬实验前及建模成功时dpMAX无显著差异。从复苏成功后2h开始，应用硫化氢复苏液的实验犬dpMAX显著高于NS组实验犬(P＜0.05)，表明该组实验犬心肌收缩力增强，心功能恢复良好(如表5所示，表5是本发明在失血性休克后提高左心室收缩指数的情况。)。

表5实验犬左心室收缩指数变化情况

P＜0.05表示差异具有统计学意义

4.实验犬微循环指标变化

(1)动脉血剩余碱(BE)

检测实验犬动脉血BE发现，应用硫化氢复苏液复苏的实验犬在复苏成功后4h开始BE负值显著低于NS组(P＜0.05)，提示其体内代谢性酸中毒情况得到有效缓解(如表6所示，表6是本发明在失血性休克后降低动脉血剩余碱的情况。)。

表6实验犬动脉血剩余碱变化情况

P＜0.05表示差异具有统计学意义

(2)动脉血乳酸(LAC)

实验犬LAC变化发现，在复苏成功后4h开始，应用硫化氢复苏液的实验犬LAC水平显著低于NS组实验犬(P＜0.05)，提示其微循环功能得到显著改善，组织缺血、缺氧情况明显好转(如表7所示，表7是本发明在失血性休克后降低动脉血乳酸的情况。)。

表7实验犬动脉血乳酸变化情况

P＜0.05表示差异具有统计学意义

5.实验犬心肌细胞自噬、凋亡变化情况

通过western blot检测实验犬心肌细胞自噬相关蛋白表达发现，应用硫化氢复苏液能够显著抑制实验犬心肌细胞Beclin-1表达(如图1所示，图1是本发明的富含硫化氢的复苏液在实验犬失血性休克后抑制心肌细胞Beclin-1表达的情况示意图，左图为电泳图，右图为定量计算图；其中：Con为没有干预的空白对照组；NS或单纯复苏组为失血性休克单纯生理盐水复苏组；H₂S或H₂S复苏液复苏组为失血性休克富含硫化氢的复苏液复苏组。)，同时应用硫化氢复苏液组实验犬LC-3I和LC-3II比值明显下降，提示硫化氢具有抑制实验犬心肌细胞自噬的作用(如图2所示，图2是本发明的富含硫化氢的复苏液在实验犬失血性休克后抑制心肌细胞LC-3I/II表达的情况示意图，左图为电泳图，右图为定量计算图；)。

通过western blot检测实验犬心肌细胞凋亡相关蛋白c-Caspase 3表达发现，应用硫化氢复苏液实验犬心肌细胞c-Caspase 3表达显著减少(如图3所示，图3是本发明的富含硫化氢的复苏液在实验犬失血性休克后抑制心肌细胞c-Caspase3表达的情况示意图，左图为电泳图，右图为定量计算图；)，提示心肌细胞凋亡明显抑制。

6.富含硫化氢复苏液对犬肝、肾功能的影响

检测各组实验犬血清谷草转氨酶变化情况发现，实验犬模型构建成功后均出现显著升高。应用富含硫化氢复苏液的实验犬血清谷草转氨酶并无显著变化(P＞0.05)，提示富含硫化氢复苏液不会造成急性肝损伤的发生，亦不会加重原有的肝损伤情况(如图4所示，图4是本发明的富含硫化氢的复苏液在实验犬失血性休克后谷草转氨酶变化的情况示意图；)。同样，应用富含硫化氢复苏液实验犬均未出现血清尿素氮、肌酐快速升高等急性肾损伤表现(P＞0.05)，提示该复苏液无明显肾毒性(如图5和图6所示，图5是本发明的富含硫化氢的复苏液在实验犬失血性休克后血清尿素氮的变化情况示意图；以及图6是本发明的富含硫化氢的复苏液在实验犬失血性休克后血清肌酐的变化情况示意图；)。同时，应用富含硫化氢复苏液的实验犬因休克情况得到更好的纠正，其复苏后尿量显著多于NS组实验犬(如表1所示)，也间接纠正了休克犬的急性肾损伤。

上述实验表明，本发明公开的富含硫化氢的复苏液在制备治疗失血性休克药物中的应用中，经动物实验证明：富含硫化氢的复苏液可稳定失血性休克后复苏时的血流动力学，提高心功能，改善微循环，抑制心肌细胞损伤，从而提高失血性休克的救治率和存活率。

实施例3：制备富含硫化氢的复苏液

第一步、脱气处理：将500mL生理盐水注射液软包装袋置于低压舱中，常温下以0.8个绝对大气压减压处理24小时，取出后常温、常压下放置12小时，将析出的气体用注射器抽除。

第二步、低温预处理：常压下将上述脱气处理后的生理盐水注射液软包装袋置于0℃环境下2小时充分冷却。

第三步、配置硫化氢溶液：从上述低温预处理后的软包装袋中抽出50mL的生理盐水，注入到放置有固体硫氢化钠70mg(分子量56)的密闭容器中，充分溶解后过滤，将过滤后的硫化氢溶液注入医用注射液软包装内，使硫化氢浓度达到25mmol/L(mM)。

第四步、低温冻存：将硫化氢溶液置于-20℃保存备用，使用前于45℃水浴锅溶解1小时即可。

第五步、配置复苏液：抽取溶解后的硫化氢溶液2mL，注入100mL生理盐水即可使用，硫化氢溶液和生理盐水的体积比是1：50。

实施例4：制备富含硫化氢的复苏液

第一步、脱气处理：将500mL生理盐水注射液软包装袋置于低压舱中，常温下以0.6个绝对大气压减压处理13小时，取出后常温、常压下放置8小时，将析出的气体用注射器抽除。

第二步、低温预处理：常压下将上述脱气处理后的生理盐水注射液软包装袋置于4℃环境下24小时充分冷却。

第三步、配置硫化氢溶液：从上述低温预处理后的软包装袋中抽出50mL的生理盐水，注入到放置有固体硫化氢168mg(分子量52.10)的密闭容器中，充分溶解后过滤，将过滤后的硫化氢溶液注入医用注射液软包装内，使硫化氢浓度达到64.4mmol/L(mM)。

第四步、深低温冻存：将硫化氢溶液置于-80℃保存备用，使用前于25℃水浴锅溶解2小时即可。

第五步、配置复苏液：抽取溶解后的硫化氢溶液1mL，注入100mL生理盐水即可使用，硫化氢溶液和生理盐水的体积比是1：100。

以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等同物界定。

Claims (10)

1.一种富含硫化氢的复苏液在制备治疗失血性休克药物中的应用。

2.根据权利要求1所述的富含硫化氢的复苏液在制备治疗失血性休克药物中的应用，其特征在于：所述治疗失血性休克药物为富含硫化氢的复苏液，所述富含硫化氢的复苏液的浓度为250～650umol/L。

3.根据权利要求2所述的富含硫化氢的复苏液在制备治疗失血性休克药物中的应用，其特征在于：所述富含硫化氢的复苏液的制备方法包括以下步骤：

取依次经过脱气处理和低温预处理的复苏液溶解固体硫氢化钠或固体硫化氢，过滤后进行深低温冻存，使用时取充分溶解后硫化氢溶液溶于复苏液中，获得富含硫化氢的复苏液。

4.根据权利要求3所述的富含硫化氢的复苏液在制备治疗失血性休克药物中的应用，其特征在于：所述脱气处理包括以下步骤：将复苏液常温下以0.4～0.8个绝对大气压减压处理2～24小时，取出后常温、常压下放置4～12小时，将析出的气体抽除。

5.根据权利要求3所述的富含硫化氢的复苏液在制备治疗失血性休克药物中的应用，其特征在于：所述低温预处理包括以下步骤：常压下将脱气处理后的复苏液在温度为0～4℃时冷却2～24小时。

6.根据权利要求3所述的富含硫化氢的复苏液在制备治疗失血性休克药物中的应用，其特征在于：所述依次经过脱气处理和低温预处理的复苏液溶解固体硫氢化钠或固体硫化氢，使硫化氢的浓度为2～65mmol/L。

7.根据权利要求3所述的富含硫化氢的复苏液在制备治疗失血性休克药物中的应用，其特征在于：所述深低温冻存是在温度至少为-20℃保存。

8.根据权利要求3所述的富含硫化氢的复苏液在制备治疗失血性休克药物中的应用，其特征在于：所述充分溶解后硫化氢溶液是在温度为25～45℃的条件下溶解1～2小时。

9.根据权利要求3所述的富含硫化氢的复苏液在制备治疗失血性休克药物中的应用，其特征在于：所述充分溶解后硫化氢溶液溶于复苏液中，其硫化氢溶液和复苏液的体积比是1：(1～100)。

10.根据权利要求1至9任一项所述的富含硫化氢的复苏液在制备治疗失血性休克药物中的应用，其特征在于：所述复苏液为生理盐水、平衡液。