CN107889953A - 一种仔猪专用新型复合微生态制剂及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种仔猪专用新型复合微生态制剂及其制备方法，该制剂由菌粉、中药和载体组成，所述的菌粉由枯草芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌和酿酒酵母按照重量比(3‑6):(2‑3)：1配制而成。大量实验研究表明，本发明的微生态制剂具有动态调节动物胃肠道菌群生态系统的作用，各菌复合后可协同提高饲料转化率、促进动物生长发育、增强仔猪免疫力、提高抗病菌和抗病毒的能力，进而取代抗生素防病、治病，减少兽药残留。

Description

一种仔猪专用新型复合微生态制剂及其制备方法
技术领域
本发明属于微生态制剂领域，具体而言，涉及一种用于猪的新型复合微生态制剂，尤其涉及一种用于仔猪的复合菌为主附配中药的复合微生态制剂及其应用。
背景技术
20世纪40年代末当学者们第一次发现抗生素对畜禽生长具有促进作用后，开始使用亚治疗剂量抗生素作饲料添加剂量，以促进动物的生长或预防病原菌感染及疾病的发生，从而开创了抗生素作为饲料添加剂的一个时代，这使畜禽产量大幅提高。在现代养殖过程中，由于乳仔猪生理的发育不成熟，仔猪腹泻是困扰规模化养猪生产的主要难题之一。因此，在配制乳仔猪教槽料时，额外添加大剂量抗生素，已成为企业解决乳猪腹泻的秘密武器。
但众所周知，长期滥用抗生素会破坏动物体内的菌群平衡，导致菌群紊乱免疫功能下降，而未被杀死的有害细菌会变成耐药性菌株，动物更容易致病，不易治疗。尤其是乳猪阶段，使用抗生素会破坏其体内的菌群平衡，导致消化功能紊乱，引起各种消化道疾病，降低其的免疫功能，影响后期的生长。同时，再加上药物残留问题不仅对环境造成了巨大的污染，还会影响畜禽产品质量对人类的健康造成严重的危害。因此，欧盟从1999年开始禁止在饲料中添加杆菌肽、螺旋霉素、维吉尼亚霉素、泰乐菌素4种抗生素；并在2006年开始全面禁止使用抗生素生长促进剂。
因此，寻求和开发应用一种既能替代抗生素，又能调节动物机体微生态平衡、预防疾病、提高饲料转化率、促进动物健康和保护生态环境等方面的新型添加剂，已是当前养殖业的一个热门话题。而运用动物微生态学理论，把微生态制剂运用到猪的日粮配制中，对改善猪肠道菌群的平衡，解决消化道疾病更具有重要意义。
发明内容
鉴于上述现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种专用于猪的新型复合微生态制剂，尤其提供一种特别适用于仔猪的复合菌为主附配中药的复合微生态制剂及其应用。
为了实现本发明的目的，发明人通过大量试验筛选研究并不懈努力，最终获得了如下技术方案：
一种用于仔猪的复合微生态制剂，该制剂由菌粉、中药和载体组成，所述的菌粉由枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)CCTCC No.M207086、嗜酸乳杆菌(Lactobacillusacidophilus)CGMCC NO.10188和酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)CCTCC NO：M207178按照重量比(3-6):(2-3)：1配制而成。
需要说明的是，本发明筛选的上述三种菌复合后可协同提高饲料转化率、促进断奶仔猪生长发育，同时增强仔猪免疫力，提高抗病菌和抗病毒的能力。如果去掉其中某个或某两个菌，或者将所筛选的菌种替换为其它菌种，则防病治病的效果大幅度降低，尤其显著降低断奶仔猪的料重比，达不到促进仔猪快速生长发育的目的。
进一步优选地，如上所述用于仔猪的复合微生态制剂，其中的菌粉由枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)CCTCC No.M207086、嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)CGMCC NO.10188和酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)CCTCC NO：M207178按照重量比5：3：1配制而成。
再进一步优选地，如上所述用于仔猪的复合微生态制剂，其中所述的中药为黄芪和甘草。
再进一步优选地，如上所述用于仔猪的复合微生态制剂，其中的中药为重量比(1-3):1的黄芪和甘草。
再进一步优选地，如上所述用于仔猪的复合微生态制剂，其中该制剂中菌粉和中药的重量比为100：(0.5-5)。
再进一步优选地，如上所述用于仔猪的复合微生态制剂，其中该制剂中菌粉和中药的重量比为100：(1-2)。
再进一步优选地，如上所述用于仔猪的复合微生态制剂，其中的载体选自土豆、麸皮、小麦粉和牛肉膏的一种或多种。
另外，本发明还提供了一种上述用于仔猪的复合微生态制剂的制备方法，该方法包括如下步骤：
A、活化斜面菌种：用pH为7-7.5、100-130℃高压灭菌20分钟-40分钟的LB培养基分别培养枯草芽孢杆菌CCTCC No.M207086、嗜酸乳杆菌CGMCC NO.10188和酿酒酵母CCTCCNO：M207178，在30-38℃培养条件下培养12小时-20小时；
B、一级液体扩大培养：对枯草芽孢杆菌CCTCC No.M207086、嗜酸乳杆菌CGMCCNO.10188和酿酒酵母CCTCC NO：M207178分别进行一级液体扩大培养，接种量10％-20％；
C、二级液体扩大培养：对一级液体扩大培养后的枯草芽孢杆菌CCTCCNo.M207086、嗜酸乳杆菌CGMCC NO.10188和酿酒酵母CCTCC NO：M207178分别进行二级液体扩大培养，接种量10％-20％；
D、配制复合微生态制剂：将枯草芽孢杆菌CCTCC No.M207086、嗜酸乳杆菌CGMCCNO.10188和酿酒酵母CCTCC NO：M207178发酵液，分别干燥得菌粉，按重量比为(3-6):(2-3)：1的比例混合，并加入粉碎的黄芪1-3％、甘草0.5-1％，以及加入载体后，得到复合微生态制剂。
进一步优选地，如上所述用于仔猪的复合微生态制剂的制备方法，其中配制复合微生态制剂时，枯草芽孢杆菌CCTCC No.M207086、嗜酸乳杆菌CGMCC NO.10188和酿酒酵母CCTCC NO：M207178经干燥得到的菌粉，按重量比为5：3：1的比例混合。
本发明人通过大量试验筛选活性菌和中药材及其用量比，从而获得了一种用于仔猪的复合微生态制剂，其可以起到治养同步的目的，在治疗病毒性疾病的同时提高仔猪机体免疫力；可在一定范围内代替抗生素和化学抗病药物，达到真正的绿色生态养殖。因此，本发明还提供一种产品新用途，即：上述的复合微生态制剂在制备仔猪饲料添加剂中的应用。
大量实验研究表明，本发明的复合微生态制剂具有动态调节动物胃肠道菌群生态系统的作用，各菌复合后可协同提高饲料转化率、促进动物生长发育、增强仔猪免疫力、提高抗病菌和抗病毒的能力，进而取代抗生素防病、治病，减少兽药残留。与现有技术相比，本发明涉及的复合微生态制剂具有如下优点和显著进步：
(1)目前市场所见的仔猪饲料添加剂都是单一的酵母及其培养物或单一的复合酶制剂，没有乳酸菌、酵母菌、芽孢杆菌多种生物制剂和中药材混合的复合添加剂，本发明筛选合适的菌种后复合而成的无污染生物制剂。
(2)使用本发明的仔猪饲料添加剂，一方面可通过生长繁殖消耗肠道内大量氧气，夺取其他氧型菌的生长条件；另一方面可通过自身产生一些物质以抑制其他有害菌生长，从而使肠道内有益菌重新占据优势地位，建立起良好的微生物群系。
(3)使用本发明实施例1的仔猪饲料添加剂能防治仔猪下痢、缓解断奶应激和提高仔猪成活率都有显著作用。在降低仔猪发病率和死亡率的试验中显示，实验组发病率为7.5％，相比对照组降低22.5％；死亡率为5％，相比对照组降低15％，均具有极显著性差异。在断奶仔猪日粮中不添加抗生素的情况下，添加本发明微生态制剂能显著提高仔猪饲料转化效率，降低断奶仔猪料重比(P<0.05)。在仔猪日粮中添加一定量的本发明微生态制剂显著降低仔猪的腹泻指数(P<0.05)。可见，微生态制剂可改善生长猪肠道健康，降低腹泻率，提高饲料效率。微生态制剂中药成分能促使微生物能产生促生长素、非特异性免疫调节因子、维生素等营养物质，同时还能抑制其它病源菌，控制病害发生，达到预防和治疗作用，使得畜产品中药物残留大大降低，生产安全奶、安全肉。
(4)采用本发明实施例1的仔猪饲料添加剂可促进营养物的消化吸收，在生长猪日粮中，添加0.1％微生态制剂的试验组与空白组相比，生长仔猪粪样中的大肠杆菌数量显著降低，同时乳酸菌和双歧杆菌数量都有升高的趋势，但差异不显著。
(5)本发明的仔猪饲料添加剂能抑制毒素，中药成分能增强动物对疾病的抵抗能力。如：本发明中的枯草芽孢杆菌产生复合酶能抑制或削弱黄曲霉毒素，并对其具有降解作用，还可通过与黄曲霉毒素形成赘合物经肠道排出体外。
(6)本发明的仔猪饲料添加剂具有无残留、无污染、不产生耐药性、药物残留和耐药菌株，可提高仔猪的生产性能、产奶率和抵抗力。适合添加在各种仔猪全价配合饲料、精料补充料、浓缩饲料和预混料中。
具体实施方式
下面通过具体实施方式对本发明作进一步详细说明。但本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。另外，实施例中未注明具体技术操作步骤或条件者，均按照本领域内的文献所描述的常规技术或条件或者按照产品说明书进行。另外，本发明实施例所采用的菌种均为现有技术已经公开并保藏的菌株。
实施例1：仔猪饲料添加剂的制备
A、活化斜面菌种：用pH为7-7.5、120℃高压灭菌30分钟的LB培养基分别培养枯草芽孢杆菌CCTCC No.M207086、嗜酸乳杆菌CGMCC NO.10188和酿酒酵母CCTCC NO：M207178，在34℃培养条件下培养16小时；
B、一级液体扩大培养：对枯草芽孢杆菌CCTCC No.M207086、嗜酸乳杆菌CGMCCNO.10188和酿酒酵母CCTCC NO：M207178分别进行一级液体扩大培养，接种量15％；
C、二级液体扩大培养：对一级液体扩大培养后的枯草芽孢杆菌CCTCCNo.M207086、嗜酸乳杆菌CGMCC NO.10188和酿酒酵母CCTCC NO：M207178分别进行二级液体扩大培养，接种量15％；
D、配制复合微生态制剂：将枯草芽孢杆菌CCTCC No.M207086、嗜酸乳杆菌CGMCCNO.10188和酿酒酵母CCTCC NO：M207178发酵液，分别于80℃干燥得菌粉，按重量比为5：3：1的比例混合，并加入粉碎的黄芪1％、甘草0.5％，以及加入一倍量的麸皮粉后，得到复合微生态制剂，即为仔猪饲料添加剂。
使用方法：在常规饲料中添加0.5％的仔猪饲料添加剂，均匀拌料后供仔猪自由采食，可全程饲喂。
实施例2：大鼠安全性与治病防病效果试验
下面结合试验说明本发明复合微生态制剂的安全性与治病防病效果：本发明复合微生态制剂在青岛农业大学实验室经大鼠急性毒性试验，实验组为50只大鼠，常规饲料自由饮食，同时饲喂实施例1制备的饲料添加剂，按0.6g/10g体重饲喂21天；空白对照组为50只大鼠，按照常规饲养自由饮食，不给予饲料添加剂。
结果表明：实验组大鼠全部存活，活动自如，毛发光滑，饮食正常，呼吸道、眼及口腔等处无分泌物外，未发现任何中毒症状，体重均有增加。与空白对照组比较，实验组的大鼠体重明显增加(P＜0.001)。21天观察期结束，将大鼠脱臼处死解剖，肉眼观察心、肝、脾、肺、肾、脑、肠、小肠等脏器均未见明显异常表现。另外，大鼠胸腺系数和脾脏系数结果表明，实验组与空白对照组比较，实验组大鼠脾脏系数明显增加(P＜0.01)，提示本发明的饲料添加剂具有免疫增强作用，属实际无毒类物质，安全度大。
实施例3：饲料添加剂对仔猪生长性能及发病率和腹泻率的影响试验
将200头临产母猪按预产日期、胎次随机分为试验组和对照组，每组100头。试验组的所产仔猪每1000kg日粮中添加0.5kg仔猪饲料添加剂(实施例1制备)，均匀拌入饲料中饲喂；对照组的母猪及其所产仔猪按常规饲喂，母猪自进入产房后开始试验直至断奶时结束。试验在同一栋无疾病猪舍内进行，试验期间按猪场常规方法进行饲养管理、免疫和消毒。
表1试验分组与饲喂组成
表2饲料添加剂对哺乳仔猪增重的影响
组别 窝数 仔猪总头数(头) 均出生重(Kg) 24日龄断奶重(Kg) ADG
对照组 12 100 1.53±0.23 6.56±1.23 0.207±0.05
试验组 12 100 1.62±0.24 7.16±1.31 0.231±0.07
生长性能指标测定：于仔猪出生、23日龄断奶时空腹称重，根据所得数字计算平均日增重(ADG)，日增重(ADG)＝增重/试验天数。
在仔猪出生时、24日龄断奶时分别对每头仔猪进行称重求其平均值，结果见表2。由SPSS软件进行方差分析可知，试验组和对照组仔猪出生时平均体重差异不显著(P>0.05)，24日龄时差异显著(P<0.05)。对照组和试验组的平均日增重分别为0.207kg和0.231kg，试验组仔猪比对照组仔猪平均日增重提高了11.6％，说明饲料添加剂对仔猪具有很好的促生长作用。
表3不同处理对仔长猪腹泻发病率和死亡率的影响
组别 原始头数 腹泻头数(头) 腹泻率(％) 死亡头数(头) 死亡率(％)
对照组 100 50 50.00 21 21
试验组 100 20 20.00 4 4
腹泻率测定：从试验开始到结束，每天观察并记录猪群的健康状况和排粪情况，记录腹泻个体及持续时间。腹泻的判断以粪不成形，且肛门处可见明显的湿稀粪粘附为准.最后以组为单位计算仔猪腹泻头数f1头猪腹泻1d记1次腹泻)。腹泻率(％)＝试验期内某组每日猪腹泻总次数/(试验期内某组猪总头数×饲养天数)×100％。
试验结果显示，使用本发明实施例1的仔猪饲料添加剂能防治仔猪下痢、缓解断奶应激和提高仔猪成活率都有显著作用。在降低仔猪发病率和死亡率的试验中显示，实验组腹泻发病率为50％，相比对照组降低30％；死亡率为4％，相比对照组降低17％，均具有极显著性差异。在断奶仔猪日粮中不添加抗生素的情况下，添加本发明微生态制剂能显著提高仔猪饲料转化效率，降低断奶仔猪料重比(P<0.05)。在仔猪日粮中添加一定量的本发明微生态制剂显著降低仔猪的腹泻指数(P<0.05)。可见，微生态制剂可改善生长猪肠道健康，降低腹泻发病率死亡率，提高饲料效率。
实施例4：饲料添加剂对仔猪血清抗体IgG的影响试验
将20头仔猪随机分为试验组和对照组，每组10头。试验组的母猪及其所产仔猪每1000kg日粮中添加0.5kg微生态制剂，均匀拌入饲料中饲喂；对照组的母猪及其所产仔猪按常规饲喂，母猪自进入产房后开始试验直至断奶时结束。试验在同一栋无疾病猪舍内进行，试验期间按猪场常规方法进行饲养管理、免疫和消毒。
IgG测定：血清免疫球蛋白IgG含量测定采用免疫浊度法，采集第1天及第25天的猪血清，用免疫球蛋白试剂盒在RX DAYTONA全自动生化分析仪上测定(按试剂盒使用说明书进行操作)。IgG试剂盒：武汉伊莱瑞特生物科技有限公司生产。
表5仔猪血清lgG浓度比较(mg/dL)
组别 1d 25d
对照组 9.00±0.51 6.23±0.59
试验组 10.22±0.56 7.89±0.70
结果表明：母猪产仔后的第1天和第25天，分别对仔猪采血进行IgG测定，结果如表5所示。试验组仔猪出生和25天时IgG浓度比对照组分别提高12.3％和26.90％，差异显著(P<0.05)：而且对照组仔猪抗体浓度下降较快，断奶时比出生时下降了31％：而试验组仅下降了21％。
试验结果显示，使用本发明实施例1的仔猪饲料添加剂能防治仔猪下痢、缓解断奶应激和提高仔猪成活率都有显著作用。在降低仔猪发病率和死亡率的试验中显示，实验组腹泻发病率为50％，相比对照组降低30％；死亡率为4％，相比对照组降低17％，均具有极显著性差异。在断奶仔猪日粮中不添加抗生素的情况下，添加本发明微生态制剂能显著提高仔猪饲料转化效率，降低断奶仔猪料重比(P<0.05)。在仔猪日粮中添加一定量的本发明微生态制剂显著降低仔猪的腹泻指数(P<0.05)。可见，微生态制剂可改善生长猪肠道健康，降低腹泻发病率死亡率，提高饲料效率。微生态制剂中药成分能促使微生物能产生促生长素、非特异性免疫调节因子、维生素等营养物质，同时还能抑制其它病源菌，控制病害发生，达到预防和治疗作用，使得畜产品中药物残留大大降低，生产安全奶、安全肉。
另外，采用本发明实施例1的仔猪饲料添加剂可促进营养物的消化吸收，在生长猪日粮中，添加0.1％微生态制剂的试验组与空白组相比，生长仔猪粪样中的大肠杆菌数量显著降低，同时乳酸菌和双歧杆菌数量都有升高的趋势，但差异不显著。

Claims (10)

1.一种用于仔猪的复合微生态制剂，该制剂由菌粉、中药和载体组成，其特征在于，所述的菌粉由枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)CCTCC No.M207086、嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)CGMCC NO.10188和酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)CCTCC NO：M207178按照重量比(3-6):(2-3)：1配制而成。
2.根据权利要求1所述用于仔猪的复合微生态制剂，其特征在于，所述的菌粉由枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)CCTCC No.M207086、嗜酸乳杆菌(Lactobacillusacidophilus)CGMCC NO.10188和酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)CCTCC NO：M207178按照重量比5：3：1配制而成。
3.根据权利要求1或2所述用于仔猪的复合微生态制剂，其特征在于，所述的中药为黄芪和甘草。
4.根据权利要求3所述用于仔猪的复合微生态制剂，其特征在于，所述的中药为重量比(1-3):1的黄芪和甘草。
5.根据权利要求4所述用于仔猪的复合微生态制剂，其特征在于，该制剂中菌粉和中药的重量比为100：(0.5-5)。
6.根据权利要求5所述用于仔猪的复合微生态制剂，其特征在于，该制剂中菌粉和中药的重量比为100：(1-2)。
7.根据权利要求1或2所述用于仔猪的复合微生态制剂，其特征在于，所述的载体选自土豆、麸皮、小麦粉和牛肉膏的一种或多种。
8.一种根据权利要求1或2所述用于仔猪的复合微生态制剂的制备方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：
A、活化斜面菌种：用pH为7-7.5、100-130℃高压灭菌20分钟-40分钟的LB培养基分别培养枯草芽孢杆菌CCTCC No.M207086、嗜酸乳杆菌CGMCC NO.10188和酿酒酵母CCTCC NO：M207178，在30-38℃培养条件下培养12小时-20小时；
B、一级液体扩大培养：对枯草芽孢杆菌CCTCC No.M207086、嗜酸乳杆菌CGMCCNO.10188和酿酒酵母CCTCC NO：M207178分别进行一级液体扩大培养，接种量10％-20％；
C、二级液体扩大培养：对一级液体扩大培养后的枯草芽孢杆菌CCTCC No.M207086、嗜酸乳杆菌CGMCC NO.10188和酿酒酵母CCTCC NO：M207178分别进行二级液体扩大培养，接种量10％-20％；
D、配制复合微生态制剂：将枯草芽孢杆菌CCTCC No.M207086、嗜酸乳杆菌CGMCCNO.10188和酿酒酵母CCTCC NO：M207178发酵液，分别干燥得菌粉，按重量比为(3-6):(2-3)：1的比例混合，并加入粉碎的黄芪1-3％、甘草0.5-1％，以及加入载体后，得到复合微生态制剂。
9.根据权利要求8所述用于仔猪的复合微生态制剂的制备方法，其特征在于，配制复合微生态制剂时，枯草芽孢杆菌CCTCC No.M207086、嗜酸乳杆菌CGMCC NO.10188和酿酒酵母CCTCC NO：M207178经干燥得到的菌粉，按重量比为5:3：1的比例混合。
10.权利要求1或2所述的复合微生态制剂在制备仔猪饲料添加剂中的应用。
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