CN107875448A - 一种多层向心取向性纳米纤维人工硬脑膜及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种多层向心取向性纳米纤维人工硬脑膜，包含三层，面疏水性的内层，亲水性的外层和编织型中间层。编织型中间层，利用“相似相容原理”可靠地把内外两层连接在一起。外层采用分层结构，外层的第二层为取向性纳米纤维细条构成的向心结构，细条从四周汇聚到中间的圆饼上。本发明还提供了所述一种多层向心取向性纳米纤维人工硬脑膜的制备方法，包括以下步骤：电纺丝制备疏水性内层；制备编织层；在编织层上电纺丝制备外层，最后得到人工硬脑膜。本发明人工硬脑膜，外层取向性纳米纤维促进了细胞的生产，细条向心状结构对新生的脑硬膜组织起到固定引导作用，编织型中间层有效解决了人工硬脑膜分层问题，而且可任意裁剪，应用前景广阔。

Description

一种多层向心取向性纳米纤维人工硬脑膜及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种多层向心取向性纳米纤维人工硬脑膜及其制备方法，属于生物微纳制造技术领域。

背景技术

硬脑膜缺损在神经外科临床工作中常见，开放性颅脑损伤(工业、交通、战争等)、肿瘤的侵蚀、先天性脑膜缺损及其它颅脑疾患原因均可引发硬脑膜缺损。硬脑膜缺损需及时修补以防脑脊液外溢，防止脑的膨出和大气压的压迫，否则将危及人体生命。硬脑膜缺损还能引发颅内感染、脑粘连、皮下积液等并发症，经常会引起如头痛、脑功能障碍等疾病。

硬脑膜是包裹在脑和脊髓外的膜结构最外层，是一种较为坚固的结缔组织薄膜，天然硬脑膜结构的内表面为一层结构致密的单层成纤维细胞，薄而光滑；中间层含有较多的成纤维细胞和少量胶原；外层较厚，含有较多的胶原成分和少量的成纤维细胞。这样的结构内面光滑平整而整体又十分的坚韧，能够很好的发挥保护大脑和防止脑脊液渗漏的作用。

目前己有多种材料制成的人工硬脑膜正在临床使用，主要可分为两大类:生物衍生材料和人工合成高分子材料。生物衍生材料主要有同种异体的人体硬脑膜及异种的猪/牛源心包膜、真皮基质以及利用牛肌键I型胶原制备的生物膜等。人工合成高分子材料主要包括聚酯类可降解高分子，如聚乳酸、聚乙醇酸、聚己内酯以及聚氨酯等。此外还包括聚四氟乙烯等不可降解高分子材料。

目前脑膜损伤修复效果比较理想的是多层人工硬脑膜。这种多层人工硬脑膜通过分层来达到模拟脑膜生理功能的目的。这类人工硬脑膜一般有内层和外层两层组成。其中内层由疏水材料制成，外层由亲水材料制成。由于外层脑膜支架采用静电纺丝工艺制备，得到的人工硬脑膜外层纤维分布杂乱无章。成纤维细胞在这样的人工硬脑膜上生长缓慢，导致缺损脑膜恢复周期过长。

2007年，《NANO LETTERS》报道的一篇文章中，利用生物可降解材料PLLA溶液，收集到无纺布和平行排布的电纺膜，通过细胞培养，说明了平行排布的电纺膜能够诱导神经突的生长，增强皮肤细胞的迁移。Kyle T. Kurpinski等。在《Biomaterials》发表的文章中，利用聚左旋乳酸（PLLA）制作了3D电纺膜，通过试管培养和动物实验也证明了平行排布的电纺膜增强了细胞生长。

2010年，在《ASC Nano》刊登的一篇文章中，利用针状和环形电极收集到了放射状电纺丝（如图8所示），并且利用这种新型电纺膜培养细胞，引导细胞从外围向内生长，通过与无纺布电纺膜进行对比，证明了放射状电纺膜可以加快细胞向中心生长的速度，缩短了伤口愈合的时间。放射状的电纺膜对于圆形或方形的伤口可能取得良好的效果。

脑膜主要分布成纤维细胞及其分泌的胶原纤维。一般成纤维细胞直径在20-30μm之间。文献报道，当静电纺丝纤维径在50-1000nm之间时,平均孔径可达到2μm。平均孔径在3μm以下，可以有效的防止细胞的进入静电纺丝纤维薄膜中，有效脑粘连的产生。当纤维直径在5-200μm之间，平均孔径达到20-100μm。这样有利于成纤维细胞的迁入、粘附、增殖和生长分化。

中国发明专利CN 103480042 A，发明名称为:“一种人工硬脊膜及其制备方法和使用方法”，公开了一种具有双层结构的人工硬脊膜，由取向性的聚乳酸/乙醇酸共聚物纤维膜内层，和无取向性的聚乳酸/乙醇酸共聚物-壳聚糖纤维膜外层组成。该人工硬脊膜虽然可实现硬膜再生及预防疤痕及粘连的目的，但存在如下缺点:第一，内层为取向性共聚物纤维膜，可以加速脑膜细胞的增长速度，但是人工硬脑膜与患者本身的硬脑膜结合力度不够，易发生人工脑膜错位和褶皱等隐患。第二，在使用过程中，先用内层覆盖受损硬脑膜，而人的硬脑膜外层主要是胶原成分和少量的成纤维细胞，取向性纤维诱导细胞生长的优点没有充分发挥。第三，取向性纤维膜制备效率低下，导致人工脑膜成本过高。

中国发明专利CN 101507661 A，发明名称为:“一种具备多个功能层的纳米人工硬脑膜及其制备方法”，公开了一种具有双层结构的人工硬脑膜。该人工硬脑膜虽然可实现硬膜再生目的，但存在如下缺点:内层采用静电纺丝工艺制备，内层中的纳米纤维杂乱无章，硬脑膜恢复周期过长。

因此，目前临床上迫切需要一种促进脑部缺损快速愈合，又不会导致脑膜错位和褶皱等缺陷的人工硬脑膜，使用方便，价格低廉，产业化前景广阔的人工硬脑膜。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明目的是提供一种多层向心取向性纳米纤维人工硬脑膜，该人工硬脑膜与传统人工硬脑膜的区别是：内层为非取向性纳米纤维构成，外层由取向性纳米纤维构成。外层由两层构成，从下到上，第一层由非取向性纳米纤维构成；第二层由取向性纳米纤维制备的细条构成，并且细条呈向心结构汇聚到圆饼上。取向性纳米纤维可以引导细胞生产，加速脑损伤的愈合。向心状结构的细条对新生的脑硬膜组织起到固定引导作用。使用时，需将人工硬脑膜置于硬脑膜下方。

在人工硬脑膜的内层和外层中间设有编织型中间层，中间层采用疏水材料和亲水材料编织而成，根据“相似相容”原理,编织层中的疏水材料制备的细条和人工硬脑膜内层（疏水材料电纺丝制备）可靠结合，亲水材料制备的细条和人工硬脑膜外层（亲水材料电纺丝制备）可靠结合，而这两种细条又是重叠交织在一起的，亲水材质的细条透过疏水材质的细条的空隙与外层结合，疏水材质的细条透过亲水材质的细条的空隙与内层结合，这样内外两层就可靠地结合在一起。总之，这种结构的人工硬脑膜，提高了内层与外层之间的结合力，不易在外力的作用下发生层与层之间的剥离。

本发明的另一目的是提供一种多层向心取向性纳米纤维人工硬脑膜的制备方法。

本发明解决上述问题所采用的技术方案是：

一种多层向心取向性纳米纤维人工硬脑膜，包含三层，面向大脑的一层为疏水性内层，背向大脑的一层为亲水性外层；两层之间为编织型中间层。所述亲水性外层由静电纺丝制成，即外层为了有效诱导干细胞及成纤维细胞的迁入，该层则采用采用生物相容性好的亲水性材料。

外层分两层制备，从下到上，第一层为非取向性纳米纤维，通过静电纺丝参数调整，使平均孔径达到20-100μm，一般成纤维细胞直径在20-30μm之间。这样有利于成纤维细胞的迁入、粘附、增殖和生长分化。第二层为取向性纳米纤维细条构成的向心结构，细条从四周汇聚到中间的圆饼上。圆饼由静电纺丝工艺制备，通过静电纺丝参数调整，使平均孔径达到20-100μm；第二层中的细条由取向性电纺丝工艺制备，细条中的纳米纤维方向与细条长度方向一致。向心结构用于加强外层与硬脑膜的结合强度，防止错位和褶皱的生成。取向纤维可以加速硬脑膜细胞的生长。

所述内层是采用疏水性材料，防止细胞的迁入，从而达到防粘连的目的；对制备该层材料的静电纺丝参数进行调整，使其孔隙孔径在纳米以下，比细胞小一到二个数量级（一般成纤维细胞直径在20-30μm之间），从而阻止细胞进入，防止脑粘连产生。

所述中间层是采用疏水性材料和亲水材料编织而成。

一种多层向心取向性纳米纤维人工硬脑膜，包括内层、中间层、外层，其制备方法按以下步骤制备而成：

(1) 内层的制备：内层材料成分为聚己内酯（深圳市博立生物材料有限公司），溶解于六氟异丙醇 (苏州昊帆生物股份有限公司) 中，纺丝液浓度7％（wt），搅拌4小时，电纺丝参数为流速为0.9 ml/h、电压为13kV、接收距离为20cm，静电纺丝时间为4h；

(2) 中间层制备。第一层材料为聚乙醇酸（深圳市博立生物材料有限公司），通过静电纺丝制备的薄膜，薄膜厚度为40μm。

将薄膜制成宽3mm，长1000mm的细条。

将细条与内层任意侧边平行放置，按照6mm的间距，3mmX1000mm面朝向内层，均匀排满整个内层。

第二层材料为用聚己内酯（深圳市博立生物材料有限公司）静电纺丝制备的薄膜，薄膜厚度为40μm。

将薄膜制成宽3mm，长1000mm的细条。

将第二层细条与第一层细条呈90°角放置，按照6mm的间距，3mmX1000mm面朝向内层，均匀排满整个第一层。

特别地，上述细条放置过程，应该在内层固化之前完成。

最后，用50N的压力对上边摆放的细条向下挤压，保持1min。

(3) 外层分两层制备。

从下到上，第一层材料为聚乙醇酸（深圳市博立生物材料有限公司），溶解于六氟异丙醇 (苏州昊帆生物股份有限公司) 中，纺丝液浓度6％（wt），搅拌1小时，电纺参数为：流速1 .4ml/h、电压12kV、接收距离10cm，静电纺丝2h。

从下到上，第二层材料为聚乙醇酸（深圳市博立生物材料有限公司），溶解于六氟异丙醇 (苏州昊帆生物股份有限公司) 中，纺丝液浓度6％（wt），搅拌1小时，电纺参数为：流速1 .4ml/h、电压12kV、接收距离10cm，静电纺丝2h。制备直径为φ200mm，厚度为10μm的圆饼。

电纺参数为：流速0 .4ml/h、电压0.9kV、接收距离1mm，取向性静电纺丝工艺制备2h，得到取向性纳米纤维层细条，10μmX10μmX400mm的细条汇聚到直径为φ200mm，厚度为10μm的圆饼的外圆柱面上，细条上下底边与圆饼上下底面平行，细条与细条间的夹角均为10°。

(4) 将制得的人工脑膜从培养皿中取出，用蒸馏水漂洗3遍，经冻干后真空包装，经25kGy钴-60灭菌后-20℃低温保存。

制备得到的多层静电纺丝人工硬脑膜每层的厚度为：内层厚度为80μm±10μm，外层厚度为30μm±20μm，中间层厚度为80μm±20μm。

中间层的两层厚度分别为：从下到上的顺序，第一层厚度为：40μm±10μm，第二层厚度为：40μm±10μm。

外层的两层厚度分别为：从下到上的顺序，第一层厚度为：非取向性纳米纤维层，厚度为20μm±10μm，第二层为：取向性纳米纤维层，厚度为10μm±10μm。第二层有圆饼和细条构成，细条汇聚到圆饼圆周，细条上下底边与圆饼上下地面平行，细条与细条间的夹角均为10°。圆饼直径为φ200mm，厚度为10μm。细条厚度为：10μm，细条宽度为：10μm，细条长度为：400mm。第二层中的圆饼由静电纺丝工艺制备，细条由取向性电纺丝工艺制备，细条中的纳米纤维方向与细条长度方向一致。

内层制备时，静电纺丝纤维直径控制在50-1000nm之间,平均孔径为2μm；

外层制备时，静电纺丝纤维直径控制在5-200μm之间,平均孔径为20-100μm。

本发明的有益效果是：

(1)本发明人工硬脑膜采用三层结构，通过中间层加强内层和外层的结合强度。

(2)本发明人工硬脑膜外层采用分层结构，外层的第二层为取向性纳米纤维细条构成的向心结构，细条从四周汇聚到中间的圆饼上。取向性纳米纤维促进了细胞的生产，细条向心状结构对新生的脑硬膜组织起到固定引导作用。

(3)本发明人工硬脑膜内层是采用疏水性材料，防止细胞的迁入，从而达到防粘连的目的；对制备该层材料的静电纺丝参数进行调整，使其孔隙孔径在纳米以下，比细胞小一到二个数量级（一般成纤维细胞直径在20-30μm之间），从而阻止细胞进入，防止脑粘连产生。

附图说明

图1为人工硬脑膜结构示意图，其中1为内层，2为中间层，3为外层。

图2为人工硬脑膜外层示意图，2-1为中间层中第一层，2-2为中间层中第二层。

图3为人工硬脑膜外层示意图，3-1为外层中第一层，3-2为外层中第二层。

图4为人工硬脑膜外层3维立体效果图，3-1为外层中第一层,3-2-1为外层中第二层中的圆饼，3-2-2位外层中第二层中的细条。

具体实施方式

下面通过具体实施例对本发明进行说明，但本发明并不局限于此。

下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法：下述实施例中所用的试剂、材料等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

实施例1

(1) 内层的制备：内层材料成分为聚己内酯（深圳市博立生物材料有限公司），溶解于六氟异丙醇 (苏州昊帆生物股份有限公司) 中,纺丝液浓度5％（wt），搅拌1小时，电纺丝参数为流速为1 .0ml/h、电压12kV、接收距离15cm，静电纺丝2h；

(2) 中间层制备。第一层材料为用聚乙醇酸（深圳市博立生物材料有限公司）静电纺丝制备的薄膜，薄膜厚度为30μm。

将薄膜制成宽4mm，长1000mm的细条。

将细条与内层任意侧边平行放置，按照8mm的间距，4mmX1000mm面朝向内层，均匀排满整个内层。

第二层材料为用聚己内酯（深圳市博立生物材料有限公司）静电纺丝制备的薄膜，薄膜厚度为30μm。

将薄膜制成宽4mm，长1000mm的细条。

将细条与第一层细条呈90°角放置，按照8mm的间距，4mmX1000mm面朝向内层，均匀排满整个第一层细条层。

特别地，上述细条放置过程，应该在内层固化之前完成。

用50N的压力对上边摆放的细条向下挤压，保持1min。

(3) 外层分两层制备。

从下到上，第一层材料为聚乙醇酸（深圳市博立生物材料有限公司），溶解于六氟异丙醇 (苏州昊帆生物股份有限公司) 中，纺丝液浓度6％（wt），搅拌1小时，电纺参数为：流速1 .2ml/h、电压10kV、接收距离8cm，静电纺丝2h。

从下到上，第二层材料为聚乙醇酸（深圳市博立生物材料有限公司），溶解于六氟异丙醇 (苏州昊帆生物股份有限公司) 中，纺丝液浓度6％（wt），搅拌1小时，电纺参数为：流速1 .3ml/h、电压10kV、接收距离8cm，静电纺丝2h。制备直径为φ250mm，厚度为10μm的圆饼。

电纺参数为：流速0 .4ml/h、电压0.9kV、接收距离1mm，取向性静电纺丝工艺制备2h，得到取向性纳米纤维层细条，取向性纳米纤维层，细条汇聚到直径为φ250mm，厚度为10μm的圆饼外圆柱面上，细条上下底边与圆饼上下地面平行，细条与细条厚度为：10μm，细条宽度：10μm，细条长度为：375mm，细条与细条间的夹角均为10°。

(4) 将制得的人工脑膜从培养皿中取出，用蒸馏水漂洗3遍，经冻干后真空包装，经25kGy钴-60灭菌后-20℃低温保存。

实施例2

(1) 内层的制备：内层材料成分为聚己内酯（深圳市博立生物材料有限公司），溶解于六氟异丙醇 (苏州昊帆生物股份有限公司) 中，纺丝液浓度7％wt，搅拌4小时，电纺丝参数为流速为0.9 ml/h、电压13kV、接收距离20cm，静电纺丝4h；

(2) 中间层制备。第一层材料为用聚乙醇酸（深圳市博立生物材料有限公司）静电纺丝制备的薄膜，薄膜厚度为40μm。

将薄膜制成宽3mm，长1000mm的细条。

将细条与内层任意侧边平行放置，按照6mm的间距，3mmX1000mm面朝向内层，均匀排满整个内层。

第二层材料为用聚己内酯（深圳市博立生物材料有限公司）静电纺丝制备的薄膜，薄膜厚度为40μm。

将薄膜制成宽3mm，长1000mm的细条。

将细条与第一层细条呈90°角放置，按照6mm的间距，3mmX1000mm面朝向内层，均匀排满整个第一层细条层。

特别地，上述细条放置过程，应该在内层固化之前完成。

用50N的压力对上边摆放的细条向下挤压，保持1min。

(3) 外层分两层制备。

从下到上，第一层材料为聚乙醇酸（深圳市博立生物材料有限公司），溶解于六氟异丙醇 (苏州昊帆生物股份有限公司) 中，纺丝液浓度6％（wt），搅拌1小时，电纺参数为：流速1 .4ml/h、电压12kV、接收距离10cm，静电纺丝2h。

从下到上，第二层材料为聚乙醇酸（深圳市博立生物材料有限公司），溶解于六氟异丙醇 (苏州昊帆生物股份有限公司) 中，纺丝液浓度6％（wt），搅拌1小时，电纺参数为：流速1 .4ml/h、电压12kV、接收距离10cm，静电纺丝2h。制备直径为φ200mm，厚度为10μm的圆饼。

电纺参数为：流速0 .4ml/h、电压0.9kV、接收距离1mm，取向性静电纺丝工艺制备2h，得到取向性纳米纤维层细条，取向性纳米纤维层，细条汇聚到直径为φ200mm，厚度为10μm的圆饼外圆柱面上，细条上下底边与圆饼上下地面平行，细条与细条厚度为：10μm，细条宽度：10μm，长度为：400mm，细条与细条间的夹角均为10°。

(4) 将制得的人工脑膜从培养皿中取出，用蒸馏水漂洗3遍，经冻干后真空包装，经25kGy钴-60灭菌后-20℃低温保存。

实施例3

(1) 内层的制备：内层材料成分为聚己内酯（深圳市博立生物材料有限公司），溶解于六氟异丙醇 (苏州昊帆生物股份有限公司) 中，纺丝液浓度5％wt，搅拌4小时，电纺丝参数为流速为1 .0ml/h、电压15kV、接收距离25cm，静电纺丝5h。

(2) 中间层制备。第一层材料为用聚乙醇酸（深圳市博立生物材料有限公司）静电纺丝制备的薄膜，薄膜厚度为40μm。

将薄膜制成宽5mm，长1000mm的细条。

将细条与内层任意侧边平行放置，按照10mm的间距，5mmX1000mm面朝向内层，均匀排满整个内层。

第二层材料为用聚己内酯（深圳市博立生物材料有限公司）静电纺丝制备的薄膜，薄膜厚度为50μm。

将薄膜制成宽5mm，长1000mm的细条。

将细条与第一层细条呈90°角放置，按照10mm的间距，5mmX1000mm面朝向内层，均匀排满整个第一层细条层。

特别地，上述细条放置过程，应该在内层固化之前完成。

用50N的压力对上边摆放的细条向下挤压，保持1min。

(3) 外层分两层制备。

从下到上，第一层材料为聚乙醇酸（深圳市博立生物材料有限公司），溶解于六氟异丙醇 (苏州昊帆生物股份有限公司) 中，纺丝液浓度6％（wt），搅拌1小时，电纺参数为：流速1 .8ml/h、电压20kV、接收距离15cm，静电纺丝2h。

从下到上，第二层材料为聚乙醇酸（深圳市博立生物材料有限公司），溶解于六氟异丙醇 (苏州昊帆生物股份有限公司) 中，纺丝液浓度6％（wt），搅拌1小时，电纺参数为：流速1 .6ml/h、电压15kV、接收距离15cm，静电纺丝2h。制备直径为φ150mm，厚度为10μm的圆饼。

电纺参数为：流速0 .5ml/h、电压1kV、接收距离2mm，取向性静电纺丝工艺制备2h，得到取向性纳米纤维层细条，取向性纳米纤维层，细条汇聚到直径为φ150mm，厚度为10μm的圆饼外圆柱面上，细条上下底边与圆饼上下地面平行，细条与细条厚度为：10μm，细条宽度：10μm，长度为：425mm，细条与细条间的夹角均为10°。

(4) 将制得的人工脑膜从培养皿中取出，用蒸馏水漂洗3遍，经冻干后真空包装，经25kGy钴-60灭菌后-20℃低温保存。

Claims (10)

1.一种多层向心取向性纳米纤维人工硬脑膜，包含三层：面向大脑的内层，背向大脑的外层和两层之间的编织型中间层。

2.根据权利要求1所述的一种多层向心取向性纳米纤维人工硬脑膜，其特征在于，所述内层厚度为80μm±10μm，由静电纺丝工艺制备而成，纤维直径控制在50-1000nm之间,平均孔径为2μm。

3.根据权利要求1所述的一种多层向心取向性纳米纤维人工硬脑膜，其特征在于，所述外层厚度为30μm±10μm，由静电纺丝工艺和取向性电纺丝工艺制备而成，纤维直径控制在5-200μm之间,平均孔径为20-100μm。

4.根据权利要求1所述的一种多层向心取向性纳米纤维人工硬脑膜，其特征在于，所述中间层厚度为80μm±20μm，由两层构成。

5.根据权利要求4所述的中间层，其特征在于，所述中间层从下到上的顺序，第一层为亲水性材料制备的宽度为3mm，长度为1000mm的细条；第二层为疏水性材料制备的宽度为3mm，长度为1000mm的细条。

6.根据权利要求5所述的细条，其特征在于，所述第一层细条，由电纺丝工艺制备成厚度为40μm±10μm薄膜，切制而成；第二层细条，由电纺丝工艺制备成厚度为40μm±10μm薄膜，切制而成。

7.根据权利要求5所述的细条，其特征在于，所述第一层细条，将细条与内层任意侧边平行放置，按照6mm的间距，3mmX1000mm面朝向内层，均匀排满整个内层；第二层细条与第一层细条呈90°角放置，按照6mm的间距，3mmX1000mm面朝向内层，均匀排满整个第一层。

8.根据权利要求3所述的外层，其特征在于， 所述外层，从下到上的顺序，第一层为非取向性纳米纤维层，厚度为20μm±10μm。第二层为取向性纳米纤维层。10μmX10μmX400mm的细条汇聚到直径为φ200mm，厚度为10μm的圆饼的外圆柱面，细条上下底边与圆饼上下底面平行，细条与细条间的夹角均为10°。

9.根据权利要求8所述的外层，其特征在于， 所述外层中的第二层中的圆饼由静电纺丝工艺制备，第二层中的细条由取向性电纺丝工艺制备，细条中的纳米纤维方向与细条长度方向一致。

10.一种制备权利要求1-9中任一项所述的一种多层向心取向性纳米纤维人工硬脑膜的方法，包括下述步骤：

(1) 内层的制备：内层材料成分为聚己内酯，溶解于六氟异丙醇中，纺丝液浓度7％（wt），搅拌4小时，电纺丝参数为流速为0.9 ml/h、电压13kV、接收距离20cm，静电纺丝4h；

(2) 中间层制备。第一层材料为用聚乙醇酸静电纺丝制备的薄膜，薄膜厚度为40μm。

将薄膜制成宽3mm，长1000mm的细条。

将细条与内层任意侧边平行放置，按照6mm的间距，3mmx1000mm面朝向内层，均匀排满整个内层。

第二层材料为聚己内酯，通过静电纺丝制备得到薄膜，薄膜厚度为40μm。

将薄膜制成宽3mm，长1000mm的细条。

将第二层细条与第一层细条夹角呈90°角放置，按照6mm的间距，3mmx1000mm面朝向内层，均匀排满整个第一层细条层。

特别地，上述两层细条放置过程，应该在内层固化之前完成。

最后，用50N的压力对摆放的细条向下挤压，保持1min。

从下到上，第一层材料为聚乙醇酸，溶解于六氟异丙醇中，纺丝液浓度6％（wt），搅拌1小时，电纺参数为：流速1 .4ml/h、电压12kV、接收距离10cm，静电纺丝2h。

从下到上，第二层材料为聚乙醇酸，溶解于六氟异丙醇中，纺丝液浓度6％（wt），搅拌1小时，电纺参数为：流速1 .4ml/h、电压12kV、接收距离10cm，静电纺丝2h。制备直径为φ200mm，厚度为10μm的圆饼。

电纺参数为：流速0 .4ml/h、电压0.9kV、接收距离1mm，取向性静电纺丝工艺制备2h，得到取向性纳米纤维层细条，10μmX10μmX400mm的细条汇聚到直径为φ200mm，厚度为10μm的圆饼的外圆柱面上，细条上下底边与圆饼上下底面平行，细条与细条间的夹角均为10°。

(4) 将制得的人工脑膜从培养皿中取出，用蒸馏水漂洗3遍，经冻干后真空包装，经25kGy钴-60灭菌后-20℃低温保存。