CN107847657A - 用于诱导抗炎反应的组合物和方法 - Google Patents

Abstract

本发明总体上涉及代谢性解毒，并且更具体地涉及一种用于诱导细胞中的抗炎反应以及治疗受试者的疾病的组合物和方法。

Description

用于诱导抗炎反应的组合物和方法

相关申请的交叉引用

根据美国法典第35篇第119条(e)款，本申请要求2015年6月15日提交的美国临时专利申请序列号62/175,827和2015年7月8日提交的美国临时专利申请序列号62/190,067的优先权权益，所述临时专利申请的全部内容以引用的方式整体并入本文。

背景

发明领域

本发明总体上涉及细胞生物学，并且更具体地涉及一种用于诱导细胞中的抗炎反应以及治疗受试者的疾病的组合物和方法。

背景技术

包括但不限于细菌、病毒、物理损伤、化学损伤(例如，酒精、药物等)、癌症、化学疗法和放射疗法的各种药剂可取决于具体药剂和暴露于其的动物的遗传组成引起对细胞和组织的直接损伤，或者产生长时间和过度炎症的环境。在正常情况下，炎症是帮助动物从受伤中恢复的过程。急性炎症是组织对有害刺激的初始反应。它涉及复杂、高度调控的过程，所述过程在损伤组织中存在的细胞(包括巨噬细胞、树突细胞、组织细胞、库柏法细胞(Kupffer cell)和肥大细胞)感测与损伤相关的分子并变得活化时开始。在活化后，这些细胞释放炎性介质，如血管舒张剂。血管舒张剂诱导损伤附近的血管的血流量和通透性增加。这进而导致血浆和白细胞(包括嗜中性粒细胞和巨噬细胞)从血液向损伤组织中的移动增加。因为炎性介质通常快速降解，所以急性炎症需要不断的刺激才能持续。因此，一旦有害刺激被除去，急性炎症就结束。

慢性炎症据信是许多普遍和衰弱疾病的促成因素，包括肝病(如肝炎、肝硬化和脂肪性肝病)、心脏病、癌症、呼吸系统疾病、中风、神经系统疾病如阿尔茨海默氏病、糖尿病和肾病。慢性炎症的结果是正常组织的破坏及其被富含胶原的结缔组织置换。富含胶原的结缔组织(也被称为瘢痕组织)展现出与正常组织相比减弱的组织功能。瘢痕组织的持久和长时间形成进而导致纤维化。纤维化是影响肺、皮肤、肝、心脏和骨髓的疾病的常见症状，并且是诸如特发性肺纤维化、硬皮病、瘢痕疙瘩、肝硬化、心肌纤维化、糖尿病性肾病、骨髓增生异常综合征的疾病和其他病症中的关键因素。

慢性炎症和纤维化的研究已经表明，无论活化剂和受影响的组织，信号传导蛋白的共同网络倾向于共同起作用以建立促炎性状态。信号传导蛋白的这种网络包括许多不同的细胞因子、细胞因子受体、转录因子等，包括IL-1β和IL-6。

为了治疗目的，包括炎性肝病诸如肝炎，已经进行了血液处理以除去各种血液成分。血液处理方法的实例包括血液透析，其允许从患有肾功能不足的患者的血液中除去代谢废物。从患者流的血液被过滤以除去这些废物，且然后返回至患者。血浆除去法的方法也使用切向流膜分离来处理血液，以治疗多种疾病状态。可选择膜孔径来除去不想要的血浆成分。血液也可使用各种利用生物化学反应的装置进行处理，以改变存在于血液中的生物成分。例如，血液组分如胆红素或酚类可通过血浆体外循环跨过与膜表面结合的酶而进行葡糖酸化或硫酸化。

例如，目前使用的技术关于支持肝功能受损的患者通常是不足的。常规系统和方法遭受与维持此类患者相关的各种问题，直到可找到合适的供体器官用于移植或直到患者的天然肝脏可再生至健康状态。

诸如由酒精、药物或毒素引起的肝炎等炎性疾病的特征在于IL-1β、IL-6和TNFα的水平升高以及肝细胞上调急性期蛋白质(APP)的炎症级联反应。因此，需要血液解毒治疗的患者通常展现出升高的IL-1β、IL-6和TNFα水平。抗-TNFα或类固醇疗法尚未展现临床益处。

尽管越来越多的关于涉及过度炎症的病状的知识，但是用于此类病状的治疗仍然是难以捉摸的。已经表明许多药物和其他物质在体外或体内具有抗炎活性，但对于由炎症引起或增强的许多适应症，仍然没有治疗。另外，许多抗炎疗法与有害副作用相关。因此需要更先进的组合物和方法来治疗炎性疾病。

发明概述

一方面，本公开提供了一种用于诱导细胞中的抗炎反应的组合物。所述组合物包含一种或多种促炎性分子，如脂多糖(LPS)或促炎性细胞因子白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-1β(IL-1β)，其中所述抗炎反应包括诸如抗炎介质蛋白α-1-抗胰蛋白酶(AAT)和白细胞介素-1受体拮抗剂(IL-1Ra)的抗炎因子的表达增加。

另一方面，本公开提供了一种诱导细胞中的抗炎反应或抑制细胞中的炎症反应的方法。所述方法包括使所述细胞与本公开的组合物接触，从而诱导所述细胞中的抗炎反应或抑制所述细胞中的炎症反应。

又一方面，本公开提供了一种治疗受试者的疾病或病症的方法。所述方法包括向所述受试者施用本公开的组合物，由此治疗所述疾病或病症。

另一方面，本公开提供了一种源自亲本C3A细胞系的合格的C3A细胞系，其中所述细胞系的细胞展现出诸如抗炎介质蛋白AAT和IL-1Ra的抗炎因子响应于诸如LPS或促炎性细胞因子IL-6和IL-1β的一种或多种促炎性分子的表达增加。

附图简述

图1是描绘与本发明的实施方案有关的数据的图表。

图2是描绘与本发明的实施方案有关的数据的图表。

图3是描绘与本发明的实施方案有关的数据的图表。

图4是描绘与本发明的实施方案有关的数据的图表。

图5是描绘与本发明的实施方案有关的数据的图表。

图6是描绘与本发明的实施方案有关的数据的图表。

图7是描绘与本发明的实施方案有关的数据的图表。

图8是描绘与本发明的实施方案有关的数据的图表。

图9是描绘与本发明的实施方案有关的数据的图表。

图10是描绘与本发明的实施方案有关的数据的图表。

图11是描绘与本发明的实施方案有关的数据的图表。

图12是描绘与本发明的实施方案有关的数据的图表。

图13是描绘与本发明的实施方案有关的数据的图表。

图14是描绘与本发明的实施方案有关的数据的图表。

图15是描绘与本发明的实施方案有关的数据的图表。

图16是描绘与本发明的实施方案有关的数据的图表。

图17是描绘与本发明的实施方案有关的数据的图表。

图18是描绘与本发明的实施方案有关的数据的图表。

图19是描绘与本发明的实施方案有关的数据的图表。

图20是描绘与本发明的实施方案有关的数据的图表。

图21是描绘与本发明的实施方案有关的数据的一系列图表。

图22是描绘与本发明的实施方案有关的数据的一系列图表。

图23是描绘与本发明的实施方案有关的数据的图表。

图24是说明现有技术的体外过滤和解毒系统的简化框图。

发明详述

本公开是基于出人意料的发现，即某些细胞能够通过分泌特定抗炎因子而对促炎性因子做出反应。此类促炎性因子可用于诱导抗炎反应和/或抑制细胞中的炎症反应，从而治疗疾病。

在进一步描述本发明组合物和方法之前，应理解，本发明不限于所描述的具体组合物、方法和实验条件，因为此类组合物、方法和条件可变化。还应理解，本文中使用的术语仅出于描述特定实施方案的目的，并且无意具有限制性，因为本发明的范围将仅受所附权利要求书限制。

可参考附图和所附描述更好地理解根据本公开的方法的原理和操作。

如本说明书以及随附权利要求中所用，除非上下文另有清楚定义，否则单数形式的“一个/种(a/an)”和“所述”包括复数提及形式。因此，例如“所述方法”的引用包括一种或多种方法、和/或本文所描述的类型的步骤，在阅读完本公开等之后，这对本领域技术人员而言将变得显而易见。

除非另外定义，否则本文所用的所有技术和科学术语都具有与本公开所属领域的技术人员通常所理解相同的含义。尽管在本公开的实践或测试中可使用与本文描述的那些方法和材料类似或等同的任何方法和材料，但是现在描述一些优选的方法和材料。

本文所述的发明涉及一种包含一种或多种促炎性分子如促炎性细胞因子的促炎性组合物。所述组合物可用于生产用于治疗疾病、病症或其他异常病状(如炎性疾病或病症)的药物组合物。

如本文所用，术语“受试者”是指哺乳动物受试者。因此，设想治疗哺乳动物目的任何动物。此类动物包括但不限于马、猫、狗、兔、小鼠、山羊、绵羊、非人灵长类动物和人。因此，本公开的方法被考虑用于兽医学应用以及人使用。

本文中的受试者的“治疗”是指治疗性治疗和防治性或预防性措施。需要治疗的那些受试者包括已经患有疾病或病症的那些以及需要预防所述疾病或病症的那些。因此，所述受试者可能已被诊断为患有疾病或病症，或者可能易感或易患疾病或病症。

表述“有效量”是指有效预防、改善或治疗疾病或病症的促炎性分子(如促炎性细胞因子)的量。这种有效量通常将导致疾病或病症的病征、症状或其他指标的改善。例如，在肝病中，有效量使得指示肝功能不良的生物化学标志物减少。

疾病或病症的“症状”是受试者经历的结构、功能或感觉的任何病态现象或偏离正常并指示疾病或病症。

如本文所用，“炎性疾病、病症或其他异常病状”可包括与炎症相关的病症或具有炎症组分，如但不限于：败血症、感染(如病毒、细菌或真菌感染)、寻常痤疮、哮喘、慢性阻塞性肺病(COPD)、自身免疫性疾病、乳糜泻、慢性(斑块)前列腺炎、肾小球性肾炎、超敏反应、炎性肠病(IBD，克罗恩氏病、溃疡性结肠炎)、盆腔炎性疾病、再灌注损伤、类风湿性关节炎、肉样瘤病、移植排斥、血管炎、间质性膀胱炎、动脉粥样硬化、过敏症(1、2和3型超敏反应、枯草热)、炎性肌病如系统性硬化症，并且包括皮肌炎、多发性肌炎、包涵体肌炎、谢迪亚克—东综合征(Chediak-Higashi syndrome)、慢性肉芽肿病、维生素A缺乏症、癌症(实体肿瘤、胆囊癌)、牙周炎、肉芽肿性炎症(结核病、麻风病、肉样瘤病和梅毒)、纤维素性炎症、化脓性炎症、浆液性炎症、溃疡性炎症和缺血性心脏病、I型糖尿病和糖尿病性肾病。

在某些实施方案中，炎性疾病、病症或其他异常病状包括许多与炎症相关的自身免疫性疾病或病症或具有炎症组分，例如对应于一种或多种类型的超敏反应。对应于一种或多种类型的超敏反应的示例性自身免疫性疾病或病症包括：特应性过敏、特应性皮炎、自身免疫性溶血性贫血、自身免疫性肝炎、自身免疫性多内分泌腺综合征、自身免疫性荨麻疹、乳糜泻、冷凝集素病、接触性皮炎、克罗恩氏病、1型糖尿病、盘状红斑狼疮、胎儿成红细胞增多症、古德帕斯丘综合征、格雷夫斯氏病、格林-巴利综合征(GBS)、桥本氏脑病、桥本氏甲状腺炎、特发性血小板减少性紫癜、自身免疫性血小板减少性紫癜、IgA肾病、红斑狼疮、梅尼尔氏病、多发性硬化症、重症肌无力、发作性睡眠症、视神经脊髓炎、德维克病(Devic'sdisease)、神经性肌强直、眼瘢痕性类天疱疮、视性眼阵挛肌阵挛综合征、PANDAS(链球菌相关的小儿自身免疫性神经精神病症)、副肿瘤性小脑变性、寻常型天疱疮、恶性贫血、银屑病、银屑病性关节炎、类风湿性关节炎、风湿热、肉样瘤病、硬皮病、亚急性细菌性心内膜炎(SBE)、系统性红斑狼疮、红斑狼疮、颞动脉炎(也称为“巨细胞动脉炎”)、血小板减少症、溃疡性结肠炎、未分化结缔组织病、荨麻疹性血管炎和血管炎。

肝的炎性疾病、病症或其他异常病状可包括脂肪性肝病、肝硬化、肝癌以及由病毒感染(例如，由甲型、乙型、丙型、丁型和戊型肝炎)引起的急性或慢性肝炎、酒精性肝炎、药物或化学中毒(如四氯化碳、氨甲蝶呤、四环素、对乙酰氨基酚、非诺洛芬等)、单核细胞增多症、阿米巴痢疾以及由埃-巴二氏病毒(EBV)、巨细胞病毒(CMV)或细菌引起的其他全身性感染。

肾的炎性疾病、病症或其他异常病状可与急性或慢性肾炎、间质性肾炎、狼疮肾炎、IgA肾病(伯格氏病)、肾小球性肾炎、膜增生性肾小球性肾炎(MPGN)、与慢性肾病(CKD)和炎症相关的自身免疫性病症、古德帕斯丘综合征、韦格纳氏肉芽肿病、肾盂肾炎、运动性肾炎、肾结石和痛风。

炎性肠病(IBD)是一组结肠和小肠炎性病状。IBD的主要类型是克罗恩氏病和溃疡性结肠炎。其他形式的IBD(其并不总是分类为典型IBD)包括胶原性结肠炎、淋巴细胞性结肠炎、缺血性结肠炎、改道性结肠炎、白塞氏疾病和未确定型结肠炎。

胰腺的炎性疾病、病症或其他异常病状包括各种形式的具有各种病因和症状的胰腺炎，包括由酒精、胆结石、药物(例如，使用皮质类固醇如强的松龙、HIV药物如去羟肌苷和喷他脒、利尿剂、抗惊厥剂丙戊酸、化学治疗剂L-天冬酰胺酶和硫唑嘌呤、通过增加血甘油三酯的雌激素、降低胆固醇的他汀类药物和抗高血糖药如二甲双胍、维达列汀、西格列汀和糖尿病药物列汀类(gliptins))、创伤、腮腺炎、自身免疫性疾病、蝎螫伤、高血钙、高血甘油三酯、体温过低、内镜逆行胰胆管造影术(ERCP)、胰腺分裂、妊娠、2型糖尿病、胰腺癌、胰管结石、血管炎(胰腺中的小血管的炎症)、柯萨奇病毒感染和卟啉症--尤其是急性间歇性卟啉症和红细胞生成性原卟啉症、病毒感染(由柯萨奇病毒、巨细胞病毒、乙型肝炎、单纯疱疹病毒、腮腺炎、水痘-带状疱疹病毒感染)、细菌感染(军团菌、钩端螺旋体属、支原体、沙门氏菌)、真菌感染(曲霉属)或寄生虫感染(蛔虫、隐孢子虫、弓形体)引起的胰腺炎。

如本文所用，“与炎性疾病相关”是指促炎性细胞因子已知引起炎性疾病、病症或其他异常病状，加剧炎性疾病、病症或其他异常病状的至少一种症状，或者已知在炎性疾病、病症或其他异常病状中过度表达的情况。

本发明提供了一种包含一种或多种促炎性分子的促炎性组合物。在实施方案中，所述促炎性分子通过由所述分子接触的细胞诱导一种或多种多肽的表达。在一个实施方案中，所述促炎性分子通过由所述分子接触的细胞诱导一种或多种分泌或排泄因子的表达。在一个实施方案中，所述促炎性分子诱导一种或多种抗炎因子的表达。在实施方案中，所述促炎性分子诱导一种或多种选自α-1-抗胰蛋白酶(AAT)、白细胞介素-1受体拮抗剂(IL-1Ra)、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-10(IL-10)、白细胞介素-13(IL-13)、干扰素α(IFN-α)、凝溶胶蛋白、转化生长因子β(TGF-β)以及其任何组合的抗炎因子的表达。

在实施方案中，所述促炎性分子诱导一种或多种选自白蛋白、α-1-抗胰蛋白酶(AAT)、α-2-巨球蛋白(A2Macro)、α-胎蛋白(AFP)、双调蛋白(AR)、血管生成素-2(ANG-2)、载脂蛋白A-I(Apo A-I)、载脂蛋白A-II(Apo A-II)、载脂蛋白C-I(Apo C-I)、载脂蛋白C-III(Apo C-III)、载脂蛋白H(Apo H)、β-2-微球蛋白(β2M)、CD 40抗原(CD40)、补体C3(C3)、肌酸激酶-MB(CK-MB)、嗜酸性粒细胞趋化因子-1、促红细胞生成素(EPO)、可溶性Fas受体、因子VII、铁蛋白(FRTN)、纤维蛋白原、凝溶胶蛋白、肝细胞生长因子(HGF)、肝素结合表皮生长因子(HB-EGF)、人绒毛膜促性腺激素β(hCG)、细胞间粘附分子1(ICAM-1)、白细胞介素-1受体拮抗剂(IL-1Ra)、白细胞介素-8(IL-8)、巨噬细胞源性趋化因子(MDC)、神经元特异性烯醇酶(NSE)、嗜中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)、胎盘生长因子(PlGF)、纤溶酶原活化剂抑制剂1(PAI-1)、血小板源性生长因子BB(PDGF-BB)、血清转铁蛋白(转铁蛋白)、性激素结合球蛋白(SHBG)、干细胞因子(SCF)、T细胞特异性蛋白RANTES(RANTES)、甲状腺素结合球蛋白(TBG)、金属蛋白酶的组织抑制剂1(TIMP-1)、转化生长因子α(TGFα)、甲状腺素运载蛋白(TTR)、血管内皮生长因子(VEGF)、血管内皮生长因子C(VEGF-C)、可溶性Fas以及其任何组合的因子的表达。

在各种实施方案中，与在接触促炎性分子之前的表达相比，抗炎因子的表达增加了至少2.0倍、5.0倍、10倍、25倍、50倍、100倍、250倍、500倍、1,000倍、5,000倍或更多倍。

适用于本发明的促炎性分子可以是任何类型的分子，例如多核苷酸、肽、肽模拟物、类肽如插烯类肽、化学化合物如有机分子或小有机分子等。

在实施方案中，本公开的促炎性组合物包含一种或多种促炎性多肽，如促炎性细胞因子。在实施方案中，所述组合物是包含一种或多种促炎性分子(如多肽)和药学上可接受的载体的药物组合物。术语“多肽”、“肽”或“蛋白质”在本文中可互换使用来表示通过相邻残基的α-氨基和羧基之间的肽键彼此连接的一系列线性氨基酸残基。

在实施方案中，所述组合物包含单一类型的促炎性多肽。在其他实施方案中，所述药物组合物包含两种或更多种促炎性多肽如IL-6和IL-1β的组合。在实施方案中，所述组合物基本上不含在血液中发现的血液蛋白质和/或代谢物。在其他实施方案中，所述组合物包含血清白蛋白(例如人血清白蛋白)。在实施方案中，组合物中存在的任何多肽是重组产生的。在实施方案中，存在于组合物中的任何多肽由受试者中的细胞体内产生。

在实施方案中，所述组合物包含一种或多种选自TNF-α、白细胞介素-1(IL-1)、白细胞介素-5(IL-5)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、白细胞介素-11(IL-11)、白细胞介素-12(IL-12)、白细胞介素-17(IL-17)、白细胞介素-18(IL-18)、白细胞介素-1β(IL-1β)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、巨噬细胞炎性蛋白1-α(MIP-1α)、巨噬细胞炎性蛋白1-β(MIP-1β)、白细胞介素-8(IL-8)、干扰素γ(IFN-γ)、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、淋巴细胞趋化因子、分形趋化因子(fractalkine)或其任何组合的促炎性多肽。

Toll样受体(TLR)识别病原体相关分子模式(PAMP)以检测病原体的存在。TLR在免疫细胞、库柏法细胞、内皮细胞、树突细胞、胆管上皮细胞、肝星状细胞和肝细胞上均有表达。TLR信号传导在这些和其他细胞类型中诱导潜在先天性免疫应答。因此，所述组合物可包含一种或多种PAMP。

TLR还基于其识别内源性TLR配体(称为损伤相关分子模式(DAMP))的能力在调控炎症中起作用。因此，所述组合物可包含一种或多种DAMP。

在实施方案中，所述组合物可包含充当免疫刺激剂的toll样受体或NOD样受体。toll样受体可包括选自TLR-1、TLR-2、TLR-3、TLR-4、TLR-5、TLR-6、TLR-7、TLR-8和TLR-9的成员，但不限于此。NOD样受体可包括例如NLRA、NLRB、NLRC或NLRP，但不限于此。

在一个实施方案中，所述一种或多种促炎性分子包括LPS、聚(I:CU)、CpG、咪喹莫特、瑞喹莫德、dSLIM、MPLA、鞭毛蛋白、质粒DNA双链DNA、单链DNA、皂苷或其任何组合。

在实施方案中，所述促炎性分子是增加抗炎因子的表达和/或活性(直接或间接)的多核苷酸，如反义寡核苷酸或RNA分子。在各个方面，所述促炎性分子可以是多核苷酸，如反义寡核苷酸或RNA分子，如微小RNA、dsRNA、siRNA、stRNA和shRNA。

微小RNA(miRNA)是调控基因表达的单链RNA分子。miRNA由转录它们的DNA的基因编码，但是miRNA并未翻译成蛋白质；相反，每个初始转录物(初始-miRNA)均被加工为称作前体-miRNA的短茎-环结构并且最终成为功能性miRNA。成熟miRNA分子与一个或多个信使RNA(mRNA)分子完全或部分互补，并且其主要功能是下调基因表达。微小RNA可由独立基因编码，但也可从各种不同的RNA种类(包括内含子、mRNA的3'UTR、长的非编码RNA、snoRNA和转座子)加工(经由酶Dicer)。如本文所用，微小RNA还包括“模拟”微小RNA，所述微小RNA旨在表示外源引入细胞中的微小RNA，其具有与其内源对应物相同或基本上相同的功能。因此，虽然本领域的技术人员将理解，试剂可以是外源引入的RNA，但试剂还包括增加或减少细胞中的微小RNA的表达的化合物等。

术语“小干扰RNA”和“siRNA”在本文中也用于指短干扰RNA或沉默RNA，其是一类发挥多种生物学作用的短双链RNA分子。最值得注意的是，siRNA牵涉于RNA干扰(RNAi)途径中，其中所述siRNA干扰特定基因的表达。除了它们在RNAi途径中的作用之外，siRNA还在RNAi相关途径中起作用(例如，作为抗病毒机制或在成形基因组的染色质结构中起作用)。

术语“多核苷酸”或“核苷酸序列”或“核酸分子”在本文中广义地用于指通过磷酸二酯键连接在一起的两个或更多个脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸的序列。因此，所述术语包括RNA和DNA，其可以是基因或其部分、cDNA、合成聚脱氧核糖核酸序列等，并且可以是单链或双链的，以及DNA/RNA杂合体。此外，如本文所用的术语包括可从细胞中分离的天然存在的核酸分子，以及可例如通过化学合成的方法或通过酶促方法如通过聚合酶链式反应(PCR)制备的合成多核苷酸。应认识到，所述不同的术语只是为了便于讨论而使用，以便例如区分组合物的不同组分。

如本文所讨论，本公开的组合物可包含单一促炎性多肽或其组合。所述组合物可基本上不含为抗炎性的蛋白质和其他多肽。所述组合物可基本上不含任何抗炎分子。如本文所用，术语“基本上不含蛋白质和其他多肽”是指所述组合物的少于5％的蛋白质含量由不为促炎性多肽的蛋白质和其他多肽组成。如本文所用，术语“基本上不含抗炎性分子”是指所述组合物的少于5％的含量由抗炎分子组成。基本上不含非促炎性多肽的组合物可具有少于4％、3％、2％、1％、0.5％、0.1％、0.05％、0.01％或更少的为抗炎性的蛋白质或其他多肽。基本上不含抗炎分子的组合物可具有少于4％、3％、2％、1％、0.5％、0.1％、0.05％、0.01％或更少的此类分子。因此，所述组合物可基本上不含血液蛋白质，如血清白蛋白、球蛋白、纤维蛋白原和凝血因子。或者，所述组合物可包含血清白蛋白、球蛋白、纤维蛋白原和凝血因子中的一种或多种。

在实施方案中，所述促炎性多肽在人或其他哺乳动物或动物中不是天然存在的。例如，所述多肽可以是合成的、重组的等。然而，本发明的组合物可包含天然存在于人或其他哺乳动物或动物中的促炎性多肽。

在实施方案中，所述促炎性多肽可包括非天然存在的氨基酸。“氨基酸”是指天然存在的和合成的氨基酸，以及以类似于天然存在的氨基酸的方式起作用的氨基酸类似物和氨基酸模拟物。天然存在的氨基酸是由遗传密码编码的那些氨基酸，以及稍后被修饰的那些氨基酸，例如羟脯氨酸、γ-羧基谷氨酸和O-磷酸丝氨酸。“氨基酸类似物”是指具有与天然存在的氨基酸相同的基本化学结构，即与氢结合的α碳、羧基、氨基和R基团，例如高丝氨酸、正亮氨酸、甲硫氨酸亚砜、甲硫氨酸甲基锍的化合物。此类类似物具有修饰的R基团(例如，正亮氨酸)或修饰的肽主链，但保留了与天然存在的氨基酸相同的基本化学结构。“氨基酸模拟物”是指具有与氨基酸的一般化学结构不同的结构、但其作用的方式类似于天然存在的氨基酸的化学化合物。氨基酸可在本文中由其通常已知的三字母符号或由IUPAC-IUB生物化学命名委员会推荐的单字母符号来提及。

在实施方案中，所述组合物包含本发明的促炎性多肽的一种或多种保守性修饰的变体。在实施方案中，所述保守性修饰的变体在氨基酸水平下与天然存在的多肽具有至少80％序列相似性，通常至少85％序列相似性、90％序列相似性或至少95％、96％、97％、98％或99％序列相似性。

关于氨基酸序列，本领域的技术人员应认识到，改变、添加或缺失所编码序列中的单一氨基酸或较小百分比氨基酸的对核酸、肽、多肽或蛋白质序列的个别取代、缺失或添加是“保守性修饰的变体”，其中所述改变导致氨基酸被化学上相似的氨基酸取代。提供功能上相似的氨基酸的保守性取代表是本领域中熟知的。此类保守性修饰的变体是除了本发明的多态变体、种间同系物以及等位基因以外的变体并且不排除本发明的多态变体、种间同系物以及等位基因。

例如，可进行取代，其中脂肪族氨基酸(G、A、I、L或V)被所述基团的另一个成员取代，或诸如一个极性残基取代另一个极性残基如精氨酸取代赖氨酸、谷氨酸取代天冬氨酸或谷氨酰胺取代天冬酰胺的取代。以下八个组各自含有彼此为保守性取代的其他示例性氨基酸：1)丙氨酸(A)、甘氨酸(G)；2)天冬氨酸(D)、谷氨酸(E)；3)天冬酰胺(N)、谷氨酰胺(Q)；4)精氨酸(R)、赖氨酸(K)；5)异亮氨酸(I)、亮氨酸(L)、甲硫氨酸(M)、缬氨酸(V)；6)苯丙氨酸(F)、酪氨酸(Y)、色氨酸(W)；7)丝氨酸(S)、苏氨酸(T)；以及8)半胱氨酸(C)、甲硫氨酸(M)(参见，例如，Creighton,Proteins(1984))。

在两个或更多个多肽序列的背景下，术语“相同”或“同一性”百分比是指如使用BLAST或BLAST 2.0序列比较算法与默认参数参数或通过人工比对和目视检查所测量，两个或更多个序列或子序列相同或具有指定百分比的相同氨基酸残基(即，当比较和比对相对于比较窗或指定区的最大对应性时，相对于指定区具有约60％同一性，优选65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高同一性)。此类序列然后被认为是“基本上相同的”。

在实施方案中，所述组合物基本上不含与促炎性多肽体内缔合或与促炎性多肽共同纯化的生物分子(如非促炎性多肽、核酸、脂质、碳水化合物和代谢物)。如本文所用，术语“基本上不含生物分子”是指所述组合物的少于5％的干重由不为促炎性多肽的生物分子组成。基本上不含此类生物分子的组合物可具有少于4％、3％、2％、1％、0.5％、0.1％、0.05％、0.01％或更少的不为促炎性多肽的生物分子。因此，例如，所述组合物可基本上不含在血液中丰富的生物分子，如脂肪酸、胆固醇、非蛋白质凝血因子、代谢物等。此外，所述组合物可基本上不含细胞，包括红细胞、白细胞、血小板和细胞碎片。

在实施方案中，本发明的组合物包含至少1mg(例如，至少5、10、20、30、40、50、75、100、150、200、250、300、400、500、600、700、800、900、1000mg或更多)的促炎性分子。因此，例如，所述组合物可包含等于约1mg至约1000mg(例如，约5mg至约900mg、约5mg至约800mg、约5mg至约700mg、约5mg至约600mg、约10mg至约500mg、约10mg至约400mg、约10mg至约300mg、约10mg至约250mg、约10mg至约200mg、约10mg至约150mg、约10mg至约100mg、约50mg至约500mg、约50mg至约400mg、约50mg至约300mg、约50mg至约250mg、约50mg至约200mg、约50mg至约150mg、约50mg至约100mg、约75mg至约500mg、约75mg至约400mg、约75mg至约300mg、约75mg至约250mg、约75mg至约200mg、约75mg至约150mg、约75mg至约100mg、约100mg至约500mg、约100mg至约400mg、约100mg至约300mg、约100mg至约250mg、约100mg至约200mg，或包括上述端点中的两个的任何其他范围)的量的促炎性分子。

在实施方案中，本发明的组合物可包括含有至少1mg/ml(例如，至少5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100mg/ml或更多)的促炎性分子的溶液。因此，例如，所述组合物可包括具有约1mg/ml至约1000mg/ml(例如，约5mg/ml至约900mg/ml、约5mg/ml至约800mg/ml、约5mg/ml至约700mg/ml、约5mg/ml至约600mg/ml、约5mg/ml至约500mg/ml、约10mg/ml至约500mg/ml、约10mg/ml至约400mg/ml、约10mg/ml至约300mg/ml、约10mg/ml至约250mg/ml、约10mg/ml至约200mg/ml、约10mg/ml至约150mg/ml、约10mg/ml至约100mg/ml、约50mg/ml至约500mg/ml、约50mg/ml至约400mg/ml、约50mg/ml至约300mg/ml、约50mg/ml至约250mg/ml、约50mg/ml至约200mg/ml、约50mg/ml至约150mg/ml、约50mg/ml至约100mg/ml、约75mg/ml至约500mg/ml、约75mg/ml至约400mg/ml、约75mg/ml至约300mg/ml、约75mg/ml至约250mg/ml、约75mg/ml至约200mg/ml、约75mg/ml至约150mg/ml、约75mg/ml至约100mg/ml、约100mg/ml至约500mg/ml、约100mg/ml至约400mg/ml、约100mg/ml至约300mg/ml、约100mg/ml至约250mg/ml、约100mg/ml至约200mg/ml、约10mg/ml至约150mg/ml，或包括上述端点中的两个的任何其他范围)的促炎性分子浓度的溶液。

在实施方案中，本发明的组合物包含至少1pg(例如，至少5、10、20、30、40、50、75、100、150、200、250、300、400、500、600、700、800、900、1000pg或更多)的促炎性分子。因此，例如，所述组合物可包含等于约1pg至约1000pg(例如，约5pg至约900pg、约5pg至约800pg、约5pg至约700pg、约5pg至约600pg、约10pg至约500pg、约10pg至约400pg、约10pg至约300pg、约10pg至约250pg、约10pg至约200pg、约10pg至约150pg、约10pg至约100pg、约50pg至约500pg、约50pg至约400pg、约50pg至约300pg、约50pg至约250pg、约50pg至约200pg、约50pg至约150pg、约50pg至约100pg、约75pg至约500pg、约75pg至约400pg、约75pg至约300pg、约75pg至约250pg、约75pg至约200pg、约75pg至约150pg、约75pg至约100pg、约100pg至约500pg、约100pg至约400pg、约100pg至约300pg、约100pg至约250pg、约100pg至约200pg，或包括上述端点中的两个的任何其他范围)的量的促炎性分子。

在实施方案中，本发明的组合物可包括含有至少1pg/ml(例如，至少5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100pg/ml或更多)的促炎性分子的溶液。因此，例如，所述组合物可包括具有约1pg/ml至约1000pg/ml(例如，约5pg/ml至约900pg/ml、约5pg/ml至约800pg/ml、约5pg/ml至约700pg/ml、约5pg/ml至约600pg/ml、约5pg/ml至约500pg/ml、约10pg/ml至约500pg/ml、约10pg/ml至约400pg/ml、约10pg/ml至约300pg/ml、约10pg/ml至约250pg/ml、约10pg/ml至约200pg/ml、约10pg/ml至约150pg/ml、约10pg/ml至约100pg/ml、约50pg/ml至约500pg/ml、约50pg/ml至约400pg/ml、约50pg/ml至约300pg/ml、约50pg/ml至约250pg/ml、约50pg/ml至约200pg/ml、约50pg/ml至约150pg/ml、约50pg/ml至约100pg/ml、约75pg/ml至约500pg/ml、约75pg/ml至约400pg/ml、约75pg/ml至约300pg/ml、约75pg/ml至约250pg/ml、约75pg/ml至约200pg/ml、约75pg/ml至约150pg/ml、约75pg/ml至约100pg/ml、约100pg/ml至约500pg/ml、约100pg/ml至约400pg/ml、约100pg/ml至约300pg/ml、约100pg/ml至约250pg/ml、约100pg/ml至约200pg/ml、约10pg/ml至约150pg/ml，或包括上述端点中的两个的任何其他范围)的促炎性分子浓度的溶液。

本发明的组合物通常是药物组合物。这种药物组合物可包含一种或多种促炎性分子和药学上可接受的载体。药物组合物还可包含除本发明的促炎性分子之外的蛋白质。另一种蛋白质可以是治疗剂，如治疗性多肽。或者，另一种蛋白质可以是载体蛋白，如血清白蛋白(例如，HSA)。通过将药物组合物中的促炎性分子与血清白蛋白混合，可将促炎性分子有效地“负载”到血清白蛋白上。

在实施方案中，本发明的组合物包含抗凝剂，如肝素或柠檬酸盐。如本文所用，“柠檬酸盐”是指任何形式的柠檬酸根阴离子，包括柠檬酸(与三个质子络合的柠檬酸根阴离子)、含有柠檬酸根阴离子的盐和柠檬酸根阴离子的部分转角。柠檬酸根阴离子是有机三羧酸盐。已被指定为化学文摘登记号77-92-2的柠檬酸具有分子式HOC(CO₂H)(CH₂CO₂H)₂和192.12g/mol的式量。柠檬酸盐(即，含有柠檬酸根阴离子的盐)由与一种或多种生理学上可接受的阳离子缔合的一种或多种柠檬酸根阴离子组成。示例性的生理学上可接受的阳离子包括但不限于质子、铵阳离子和金属阳离子。合适的金属阳离子包括但不限于钠、钾、钙和镁，其中钠和钾是优选的，并且钠是更优选的。含有柠檬酸根阴离子的组合物可含有生理学上可接受的阳离子的混合物。

在一个实施方案中，所述组合物包含柠檬酸钠。柠檬酸钠可呈干化学粉末、晶体、丸剂或片剂的形式。可使用任何生理学上可耐受形式的柠檬酸或柠檬酸钠。例如，柠檬酸或柠檬酸钠可呈水合物，包括一水合物的形式。

本发明的药物组合物可通过将一种或多种具有所需纯度程度的促炎性分子与任选的药学上可接受的载体、赋形剂或稳定剂(Remington's Pharmaceutical Sciences,第16版,Osol,A.Ed.(1980))。可接受的载体、赋形剂或稳定剂在所用剂量和浓度下对于接受者是无毒的，并且可包括缓冲剂，如磷酸盐、柠檬酸盐以及其他有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸和甲硫氨酸；防腐剂(如十八烷基二甲基苄基氯化铵；氯化六烃季铵；苯扎氯铵、苄索氯铵；苯酚、丁醇或苯甲醇；对羟苯甲酸烷酯如对羟苯甲酸甲酯或丙酯；儿茶酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；以及间甲酚)；低分子量(少于约10个残基)多肽；蛋白质，如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖以及其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂，如EDTA；糖，如蔗糖、甘露糖醇、海藻糖或山梨糖醇；成盐抗衡离子，如钠；金属络合物(例如Zn-蛋白质络合物)；和/或非离子型表面活性剂，如TWEEN^TM、PLURONICS^TM或聚乙二醇(PEG)。

在实施方案中，本发明的组合物可包含活细胞。在一个实施方案中，所述组合物包含肝细胞。在一个实施方案中，所述组合物包含任选重组工程化HepG2细胞或C3A细胞。

本发明的促炎性分子提供用于诱导细胞中的抗炎反应和/或治疗诸如炎性疾病的疾病或病症的强有力的工具。

因此，本发明提供一种通过增加细胞中的至少一种(例如，2、3、4、5或更多种)抗炎肽的表达水平来诱导所述细胞中的抗炎反应或抑制所述细胞中的炎症反应的方法。所述方法包括使细胞与本发明的促炎性分子接触。在实施方案中，所述促炎性分子诱导一种或多种选自AAT、IL-1Ra、IL-4、IL-10、IL-13、IFN-α、凝溶胶蛋白、TGF-β以及其任何组合的抗炎因子的表达。在实施方案中，所述促炎性分子诱导一种或多种选自白蛋白、α-1-抗胰蛋白酶(AAT)、α-2-巨球蛋白(A2Macro)、α-胎蛋白(AFP)、双调蛋白(AR)、血管生成素-2(ANG-2)、载脂蛋白A-I(Apo A-I)、载脂蛋白A-II(Apo A-II)、载脂蛋白C-I(Apo C-I)、载脂蛋白C-III(Apo C-III)、载脂蛋白H(Apo H)、β-2-微球蛋白(β2M)、CD 40抗原(CD40)、补体C3(C3)、肌酸激酶-MB(CK-MB)、嗜酸性粒细胞趋化因子-1、促红细胞生成素(EPO)、可溶性Fas受体、因子VII、铁蛋白(FRTN)、纤维蛋白原、凝溶胶蛋白、肝细胞生长因子(HGF)、肝素结合表皮生长因子(HB-EGF)、人绒毛膜促性腺激素β(hCG)、细胞间粘附分子1(ICAM-1)、白细胞介素-1受体拮抗剂(IL-1Ra)、白细胞介素-8(IL-8)、巨噬细胞源性趋化因子(MDC)、神经元特异性烯醇酶(NSE)、嗜中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)、胎盘生长因子(PlGF)、纤溶酶原活化剂抑制剂1(PAI-1)、血小板源性生长因子BB(PDGF-BB)、血清转铁蛋白(转铁蛋白)、性激素结合球蛋白(SHBG)、干细胞因子(SCF)、T细胞特异性蛋白RANTES(RANTES)、甲状腺素结合球蛋白(TBG)、金属蛋白酶的组织抑制剂1(TIMP-1)、转化生长因子α(TGFα)、甲状腺素运载蛋白(TTR)、血管内皮生长因子(VEGF)、血管内皮生长因子C(VEGF-C)、可溶性Fas以及其任何组合的因子的表达。

在各种实施方案中，与在接触促炎性分子之前的表达相比，抗炎因子的表达增加了至少2.0倍、5.0倍、10倍、25倍、50倍、100倍、250倍、500倍、1,000倍、5,000倍、10,000倍、50,000倍或更多倍。

本发明还提供一种治疗受试者的疾病或病症的方法。所述方法包括将本发明的促炎性分子(或例如包含促炎性多肽的药物组合物)施用至受试者或其细胞或组织。

在本发明的方法中，所述促炎性分子诱导所接触的细胞表达一种或多种抗炎因子。在实施方案中，所接触的细胞是真核细胞，如哺乳动物细胞。在一个实施方案中，所接触的细胞是肝细胞。在一个实施方案中，所述细胞是肝母细胞瘤源性细胞。在一个实施方案中，所述细胞是HepG2细胞或C3A细胞系的C3A细胞。在一个实施方案中，所述细胞是来自亲本C3A细胞系的克隆衍生物。在一个实施方案中，所述细胞是重组工程化细胞。

术语“C3A细胞系”是指人肝母细胞瘤细胞系HepG2的亚克隆。C3A细胞系是在ATCC号CRL-10741下保藏于美国典型培养物保藏中心的合格细胞系。

可以任何合适的方式进行组合物的施用，所述方式包括例如静脉内、腹膜内、胃肠外、原位、皮下、局部、经鼻、经口、舌下、眼内、借助于可植入储库、使用基于纳米颗粒的递送系统、微针贴片、微球体、珠粒、渗透泵或机械泵和/或其他机械手段。

在各种实施方案中，细胞可在体内或体外被所述组合物接触。在一个实施方案中，所述细胞被离体接触，所述细胞被包含在包括活细胞的活性筒(生物反应器)内，如美国专利号8,105,491中描述的体外解毒系统的活性筒，所述专利以引用的方式整体并入本文。所述系统可流体联接至受试者或其细胞或器官，例如肝。

如图24中所示，体外解毒系统10通常包括血液回路100，其被配置为联接至患者并且可操作来将来自所述患者的血液传送通过超滤液发生器(UFG)40且返回至所述患者；再循环回路50，其与所述UFG 40联接并且可操作来从所述UFG 40抽吸超滤液并独立于所述血液的细胞组分处理超滤液；以及导管接合部15，其可操作来在重新引入至所述患者之前重组所述再循环回路50中的超滤液和所述血液回路100中的细胞组分。还在图24中示出布置在再循环回路50内的活性筒70和氧合器60。活性筒70被用来处理超滤液。

术语“活性筒”是指包括细胞(例如像，C3A细胞系的细胞)且在治疗应用和解毒过程中具有效用的基于中空纤维的筒。

术语“血液回路”是指连接至双腔导管并且可操作来使血液从患者循环至血液控制单元并回至患者的管回路。

术语“C3A细胞系”是指人肝母细胞瘤细胞系HepG2的亚克隆。在实施方案中，C3A细胞被包括于一个或多个活性筒的毛细管外空间中。C3A细胞系一直在ATCC号CRL-10741下保藏于美国典型培养物保藏中心。

术语“解毒装置”是指提供从流体流中除去特异性或非特异性分子的装置的筒、罐或其他装置。实例可以是透析筒、吸附筒或过滤器。

术语“毛细管外空间”(ECS)是指活性筒或超滤液发生器的中空纤维外部的空间。活性筒的ECS通常可容纳C3A细胞。

术语“毛细管内空间”(ICS)是指活性筒或超滤液发生器的中空纤维内部的空间。ICS是全血或超滤液流体的流动路径。

术语“再循环回路”是指通常能够对超滤液流体进行过滤、解毒和处理的回路；在一些实施方式中，再循环回路通常包括储库、氧合器和一个或多个活性筒。

术语“超滤液”(UF)是指跨过超滤液发生器的半透膜过滤的血浆流体和溶解的大分子。

术语“超滤液发生器”(UFG)是指包括或实施为“空白”活性筒(即，不包括治疗活性细胞的中空纤维筒)并且可操作来从细胞血液组分分离血浆流体(超滤液)的装置。所述中空纤维可由半透膜构成，在一些实施方式中，所述半透膜具有例如大约100,000道尔顿的标称分子量截留。在使用UFG期间，血液可通过中空纤维的ICS循环；包含血浆和各种大分子的超滤液穿过膜纤维壁进入再循环回路，其中其循环通过一个或多个活性筒。

术语“超滤”通常是指超滤液从全血抽离跨过UFG的半透膜的过程。在下文描述的一些实施方案中，超滤液泵可控制超滤液产生的速率，而UFG的中空纤维膜的孔径可控制渗透所述膜的超滤液的量。

在临床或治疗性治疗期间，UF可被泵送通过活性筒70内的中空纤维筒的腔(ICS)，从而允许来自UF的毒素、营养物、葡萄糖和溶解氧扩散穿过膜至ECS中，其中活细胞可代谢它们。代谢产物连同由所述细胞产生的白蛋白和其他蛋白质可穿过所述膜扩散回至UF中以返回至患者。

如上所述和本文所考虑，C3A细胞系是人肝母细胞瘤细胞系HepG2的亚克隆。这种亲本细胞系如C3A的一些亚克隆例如显示肝特异性功能能力如高白蛋白产生和α-胎蛋白(AFP)产生以及抗炎介质蛋白α-1-抗胰蛋白酶(AAT)和IL-1Ra响应于本发明的促炎性分子(包括例如细胞因子IL-6和IL-1β)的表达。

在各种实施方案中，所述系统可流体联接至受试者或其细胞或器官，例如肝。本发明的组合物被引入系统10的血液回路中。所述组合物可被引入受试者的循环系统中，或者直接引入所述系统的血液流动路径中。在一个实施方案中，所述组合物由所治疗受试者的细胞产生，并且在治疗期间流动至系统10的血液回路中。

一旦在系统10的血液回路100中，本发明组合物的促炎性分子就接触活性筒内的细胞，从而诱导抗炎因子表达并分泌至UF中。UF被重新引入血液流动路径中，并且被重新引入受试者中，其中由C3A细胞产生的抗炎因子接触受试者的细胞如肝细胞，由此促进疾病或病症的治疗。

尽管在本实施方案中活性筒的细胞被示为C3A细胞，但本领域的技术人员将理解，活性筒可包括任何数量的合适的细胞类型，所述细胞类型有益于治疗许多不同的疾病，例如如本文所公开的炎性疾病。在实施方案中，所述活性筒可包括重组工程化以响应受试者血液中的分子产生特定因子的细胞。

结合前述方法中的任一种，所述组合物可每天(或每隔一天或每周)施用，其中促炎性分子的量介于约1mg与约1000mg之间(例如，约5mg至约900mg、约5mg至约800mg、约5mg至约700mg、约5mg至约600mg、约10mg至约500mg、约10mg至约400mg、约10mg至约300mg、约10mg至约250mg、约10mg至约200mg、约10mg至约150mg、约10mg至约100mg、约50mg至约500mg、约50mg至约400mg、约50mg至约300mg、约50mg至约250mg、约50mg至约200mg、约50mg至约150mg、约50mg至约100mg、约75mg至约500mg、约75mg至约400mg、约75mg至约300mg、约75mg至约250mg、约75mg至约200mg、约75mg至约150mg、约75mg至约100mg、约100mg至约500mg、约100mg至约400mg、约100mg至约300mg、约100mg至约250mg、约100mg至约200mg，或包括上述端点中的两个的任何其他范围)。

结合前述方法中的任一种，所述组合物可每天(或每隔一天或每周)施用，其中促炎性分子的量介于约1pg与约1000pg之间(例如，约5pg至约900pg、约5pg至约800pg、约5pg至约700pg、约5pg至约600pg、约10pg至约500pg、约10pg至约400pg、约10pg至约300pg、约10pg至约250pg、约10pg至约200pg、约10pg至约150pg、约10pg至约100pg、约50pg至约500pg、约50pg至约400pg、约50pg至约300pg、约50pg至约250pg、约50pg至约200pg、约50pg至约150pg、约50pg至约100pg、约75pg至约500pg、约75pg至约400pg、约75pg至约300pg、约75pg至约250pg、约75pg至约200pg、约75pg至约150pg、约75pg至约100pg、约100pg至约500pg、约100pg至约400pg、约100pg至约300pg、约100pg至约250pg、约100pg至约200pg，或包括上述端点中的两个的任何其他范围)。

结合前述方法中的任一种，促炎性分子(或包含此类分子的药物组合物)可与适用于治疗疾病或病症的药物组合施用。在一个实施方案中，所述组合物与抗生素一起施用。适用于与本发明的组合物协同治疗的具体类别的抗生素的实例包括氨基糖苷类(例如，妥布霉素)、青霉素类(例如，哌拉西林)、头孢菌素类(例如，头孢他啶)、氟喹诺酮类(例如，环丙沙星)、碳青霉烯类(例如，亚胺培南)、四环素类和大环内酯类(例如，红霉素和克拉霉素)。除了以上列出的抗生素，典型的抗生素包括氨基糖苷类(阿米卡星、庆大霉素、卡那霉素、奈替米星、妥布霉素、链霉素、阿奇霉素、克拉霉素、红霉素、依托红霉素/琥乙红霉素/葡庚糖酸红霉素/乳糖酸红霉素/硬脂酸红霉素)、β-内酰胺如青霉素类(例如，青霉素G、青霉素V、甲氧西林、萘夫西林、苯唑西林、氯唑西林、双氯西林、氨苄西林、阿莫西林、替卡西林、羧苄青霉素、美洛西林、阿洛西林和哌拉西林)或头孢菌素类(例如，头孢噻吩、头孢唑啉、头孢克洛、头孢孟多、头孢西丁、头孢呋辛、头孢尼西、头孢美唑、头孢替坦、头孢丙烯、氯碳头孢、头孢他美、头孢哌酮、头孢哌酮、头孢噻肟、头孢唑肟、头孢曲松、头孢他啶、头孢吡肟、头孢克肟、头孢泊肟和头孢磺啶)。其他类别的抗生素包括碳青霉烯类(例如，亚胺培南)、单环β-内酰胺类(例如，氨曲南)、喹诺酮类(例如，氟罗沙星、萘啶酸、诺氟沙星、环丙沙星、氧氟沙星、依诺沙星、洛美沙星和西诺沙星)、四环素类(例如，多西环素、米诺环素、四环素)和糖肽类(例如，万古霉素，替考拉宁)。其他抗生素包括氯霉素、克林霉素、甲氧苄氨嘧啶、磺胺甲噁唑、呋喃妥因、利福平、莫匹罗星和阳离子肽。

本发明的任何前述方法还包括评估治疗性治疗的功效的步骤。因为本发明的促炎性分子具有诱导抗炎因子表达的可证明的能力，所以可通过测量此类因子(例如，在血清中)的水平来评估治疗性治疗的功效。

提供以下实施例来进一步说明本发明的实施方案，但并不意图限制本发明的范围。虽然它们是可使用的实施例中的典型实施例，但可替代地使用本领域的技术人员已知的其他程序、方法或技术。

实施例1

C3A细胞表达急性期蛋白质

背景

由酒精、药物或毒素引起的肝炎的特征在于IL-1β、IL-6和TNFα的水平升高以及肝细胞上调急性期蛋白质(APP)的炎症级联反应。抗-TNFα或类固醇疗法未展示临床益处，因此可能需要替代基于细胞的策略。

目的

本研究的目的是通过产生与炎症消退相关的因子来评估本发明的合格C3A细胞对在ALD患者中发现的所选炎性介质的做出反应的能力。

材料和方法

使用单重ELISA试剂盒(R&D Systems,abcam)、化学发光多重阵列试剂盒(Aushon)和/或签约服务(Myriad Rules Based Medicine)针对APP、细胞因子和其他影响炎症的介质测定来自本公开的治疗系统的活性筒的C3A细胞的条件培养基。将据报道存在于肝炎患者血清中的炎性细胞因子(IL-6[0、1、10、100ng/mL]±IL-1β[0、1、10、100ng/mL])与从治疗系统回收的单层细胞或C3A细胞一起孵育24或54小时，并且针对APP IL-1受体拮抗剂(IL-1Ra)、α-1-抗胰蛋白酶(AAT)和白蛋白测定条件培养基。将脂多糖(LPS)(0、0.01、0.1、1、10EU/mL)与单层C3A细胞一起孵育24小时并测定APP。

结果

当单层C3A细胞仅与IL-6或仅与IL-1β一起孵育时，IL-1Ra的水平不增加。然而，与两种细胞因子共孵育展示针对在24小时时IL-1Ra分泌增加的协同应答，其在54小时时进一步增加(图1)。

一般来说，AAT以C3A细胞中的IL-1Ra浓度的接近200倍的浓度分泌。AAT在24小时时显示对IL-6和IL-1β两者的更多剂量依赖性上调，并且虽然AAT的值在54小时时进一步增加，但剂量依赖性没有持续(图2)。

当将含有C3A细胞的组织与IL-6和IL-1β(各自10ng/mL)一起孵育24小时时，观察到IL-1Ra的增加(图3)，但是未观察到AAT的增加(图4)；然而，当存在针对AAT的中和抗体时，IL-1Ra应答没有减弱(图6)。白蛋白响应于IL-6和IL-1β而降低(图5)。

将单层C3A细胞直接暴露于LPS在所评估的所有浓度下增加了IL-1Ra(图7)并且仅在较高浓度下增加AAT水平(图8)，但两者均低于在IL-6和IL-1β刺激的情况下观察到的水平。

观察到在IL-6处理的单层C3A培养物中显著增加的其他因子包括纤维蛋白原(6倍)、IL-10(10倍)、IL-18(9倍)、MCP-1(15倍)和TNF-β(12倍)。观察到在IL-1β处理的单层C3A培养物中显著增加的因子包括G-CSF(50倍)、SCF(100倍)、IL-8(2,000倍)和TNFα(25倍)。当存在IL-6和IL-1β两者时观察到显著增加的因子包括ICAM-1(9倍)；然而，对于G-CSF(300倍)观察到IL-6与IL-1β之间的协同作用。

图例

图1：IL-1Ra的单层C3A细胞分泌在IL-6和IL-1β的组合存在下上调，并且随着暴露时间而增加。样品是汇集的一式三份孔的单个重复。

图2：AAT的单层C3A细胞分泌在仅IL-6、仅IL-1β或IL-6和IL-1β的组合存在中上调，并且随着暴露时间而增加。样品是汇集的一式三份孔的单个重复。

图3：IL-1Ra的C3A组织分泌也在IL-6(10ng/mL)和IL-1β(10ng/mL)的组合存在下在24小时时上调(*p＝0.0067)。结果是平均值±SD，n＝6个重复。

图4：AAT的C3A组织分泌在IL-6(10ng/mL)和IL-1β(10ng/mL)的组合存在下在24小时时不上调(p＝0.5140)。结果是平均值±SD，n＝6个重复。

图5：白蛋白的单层C3A细胞分泌在IL-6(10ng/mL)和IL-1β(10ng/mL)的组合存在下在24小时时下调(*p＝0.04724)，如对于此APP所预期。结果是平均值±SD，n＝3个重复。

图6：响应于IL-6(10ng/mL)和IL-1β(10ng/mL)的组合存在持续24小时IL-1Ra的单层C3A细胞分泌不受用声称的中和抗AAT抗体处理影响。结果是平均值±SD，n＝3个重复。

图7：IL-1Ra的单层C3A细胞分泌在LPS存在下24小时时上调。样品是汇集的一式三份孔的单个重复；粉红色线指示未处理的对照应答。

图8：AAT的单层C3A细胞分泌在较高浓度的LPS存在下24小时时上调。样品是汇集的一式三份孔的单个重复；粉红色线是未处理的对照。

讨论

在不存在刺激的情况下，治疗系统的活性筒中的C3A细胞释放若干抗炎APP，但是几乎没有促炎性细胞因子或趋化因子。在此，显示C3A细胞响应于已知与ALD–IL-1β和IL-6相关的促炎性细胞因子产生AAT和IL-1Ra的能力。外源性AAT和IL-1Ra已经显示通过干扰TNFα和IL-1β途径和增强IL-10产生来抑制促炎性细胞因子合成，其中后者具有广泛的抗炎特性。这种作用已经在三种不同的测定系统中再现。抗AAT抗体不能改变IL-1Ra的产生表明ATT对IL-1Ra没有自分泌作用，无论是正向还是负向。ALD患者中响应于细胞因子升高，促炎性细胞因子的减少和抗炎APP的增加可有助于通过ELAD系统消退炎症。

结论

C3A细胞具有通过分泌抗炎介质IL-1Ra和AAT对炎性损伤做出反应的能力。这可代表用本公开的治疗系统治疗的肝炎患者的治疗益处消退的多重机制之一。

实施例2

C3A细胞表达急性期蛋白质

方法

将来自包括合格C3A细胞的活性筒的条件培养基针对APP、细胞因子和其他影响炎症的介质进行测定。将患者血清中存在的炎性细胞因子(IL-6±IL-1β)与从所述系统中回收的单层细胞或C3A细胞孵育24或54小时，并且将培养基针对IL-1受体拮抗剂(IL-1Ra)和α-1-抗胰蛋白酶(AAT)进行测定。

结果

当将单层C3A细胞与IL-6或IL-1β孵育时，IL-1Ra不增加；然而，与两种细胞因子共孵育展示在24小时时针对增加的IL-1Ra分泌的协同应答，所述应答在54小时时进一步增加。AAT在24小时时显示对IL-6和IL-1β两者的更多剂量依赖性上调，并且虽然AAT的值在54小时时进一步增加，但剂量依赖性未持续。当将ELAD C3A细胞与IL-6和IL-1β(各自10ng/mL)孵育24小时时，观察到IL-1Ra的增加，但未观察到AAT的增加；然而，当存在针对AAT的中和抗体时，IL-1Ra应答未减弱。

结论

治疗系统的活性筒中的C3A细胞释放若干抗炎APP，但几乎没有被认为促炎性的促炎性细胞因子和趋化因子。外源性AAT和IL-1Ra已经显示通过干扰TNFα和IL-1β途径和增强IL-10产生来抑制促炎性细胞因子合成，其中后者具有广泛的抗炎特性。响应于细胞因子升高，促炎性细胞因子的减少和抗炎APP的增加可有助于通过ELAD系统消退炎症，并且可以是治疗益处的多重机制的一部分。

实施例3

C3A细胞表达急性期蛋白质

背景

酒精诱导的肝失代偿(AILD)的关键发病机制涉及不受调控的全身性炎症。AILD患者具有升高的血浆炎性因子(如IL-1β、IL-6、脂多糖(LPS)和TNF-α)水平。患病的肝脏不能对这些炎性介质做出适当的反应。这种受损的免疫应答使患者易患全身炎症综合征，其与患者死亡率增加相关。

在健康肝脏中，肝细胞是有助于控制全身炎症的急性期蛋白质(APP)的主要来源。健康肝细胞通过产生炎症消退介质如IL-1受体拮抗剂(IL-1Ra)和α1-抗胰蛋白酶(ATT)来对IL-1和IL-6(APP应答的主要调控因子)做出反应。IL-1Ra和ATT具有通过竞争性抑制、蛋白酶抑制和阻断炎症信号传导级联的产生来减轻全身炎症的能力。

向AILD患者提供抗炎AAP和其他免疫调节剂(例如IL-10)可提供治疗益处。

治疗，如抗TNF-α或类固醇给药尚未展示长期临床益处。利用本发明的合格C3A细胞系以及本文公开的治疗系统的多因素基于细胞的策略可能是有益的。

目的

本研究的目的是通过分泌与炎症消退相关的抗炎因子来评估本发明的C3A细胞对AILD患者血浆中常见的选定炎症介质(单独或组合)做出反应的能力。

材料和方法

将本发明的C3A细胞接种在单层中，并与LPS或与炎性细胞因子(IL-6、IL-1β和/或TNF-α)一起孵育24、48或54小时。如各图中所指示，细胞因子以0、1、10或100ng/mL单独或组合给药。将分离的C3A细胞与0、0.01、0.1、1或10EU/mL的LPS一起孵育24小时。

此外，从C3A细胞盒切下完整C3A组织(在聚砜中空纤维之间三维培养的C3A细胞)，并与10ng/mL IL-1β和10ng/mL IL-6结合给药24小时。经由内部和商业ELISA试剂盒(R&DSystems,abcam)，针对多重ELISA(Myriad)的签约服务或化学发光多重测定试剂盒(Aushon)来针对IL-1Ra、AAT、IL-10或白蛋白测定来自这些单层C3A细胞和ELAD C3A组织实验的上清液的。

当将单层C3A细胞与IL-1β和IL-6两者共孵育时，观察到针对增加的IL-1Ra分泌的协同反应，其在54小时时进一步增加(图9)。在这些相同的单层样品中白蛋白水平响应于IL-1β和IL-6在54小时时下降(图11)。然而，当将单层C3A细胞仅与IL-1β或IL-6孵育时，IL-1Ra的分泌未增加到高于未处理对照的水平。

一般来说，AAT在单层C3A细胞中以比IL-1Ra高近1,000倍的浓度分泌。然而，当暴露于IL-6、IL-1β或其组合时，对AAT分泌没有明显影响(图10)。在所有处理条件下，存在AAT浓度的时间依赖性增加。

观察到纤维蛋白原在IL-6处理的单层C3A培养物中显著增加。通过添加IL-1β消除表达(图12)。α-2巨球蛋白也响应于IL-6增加，但不响应于IL-1β增加(图13)。

当将单层C3A细胞与仅10ng/mL IL-1β、仅10ng/mL IL-6或组合一起孵育时，IL-10的分泌增加高于对照，并在48小时时进一步增加。IL-6的给药对IL-10分泌具有更大影响(图14)。

当将C3A组织与IL-1β和IL-6(各自10ng/mL)一起孵育24小时时，也观察到IL-1Ra(图15)的增加，但未观察到AAT的增加(图8)。将样品大小增加至6个重复，以帮助控制由于在给药后不能将结果标准化至细胞计数所致的可变性。

单层C3A细胞的TNF-α分泌响应于IL-1β和IL-6的组合而增加(图17)。在C3A组织中观察到类似的增加(数据未显示)。

尽管在最高剂量(100ng/mL)下观察到IL-1Ra的分泌减少，但单独TNF-α(1、10或100ng/mL)不会增加单层C3A细胞分泌IL-1Ra(图18)。单独IL-1β(10ng/mL)和与TNF-α的组合(各自10ng/mL)增加了IL-1Ra的分泌(图18)。再次，在任何剂量组中对AAT分泌没有影响(数据未显示)。

在所评估的所有浓度(0.01、0.1、1和10EU/mL)下，将单层C3A细胞直接暴露于LPS使IL-1Ra分泌增加约2倍(图19)。AAT水平仅在较高浓度(1和10EU/mL)下增加(图20)。

C反应蛋白低于测定的较低定量水平(0.012ng/mL)。结合珠蛋白水平在任何处理情况下均未显著变化(数据未显示)。

观察到在单层中在IL-6处理的C3A细胞中显著增加的其他因素包括以下：纤维蛋白原(约6倍对比对照(24、48小时))、IL-10(约10倍对比对照(24小时))、IL-18(约9倍对比对照(24、48小时))、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)(约15倍对比对照(24、48小时)、在IL-1β情况下约20倍对比对照(24小时、48小时))、肿瘤坏死因子-β(TNF-α)(约12倍对比对照(24、48小时)、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)(约50至75倍对比对照(24小时、48小时)；在IL-6情况下约300倍和500倍对比对照(24小时、48小时))、干细胞因子(SCF)(约100倍对比对照(24小时、48小时))、IL-7(约10和14倍对比对照(24小时、48小时))、IL-8(约2,000倍对比对照(24小时、48小时)和TNFα(约25倍对比对照(24小时、48小时))。

观察到在单层中在IL-1β和IL-6处理的C3A细胞中显著增加的其他因子包括细胞内粘附分子1(ICAM-1)(约9倍对比对照(24小时))和甲状腺素运载蛋白(约3倍降低对比对照(48小时))。

图例

图9：IL-1Ra的单层C3A细胞(1.3x10⁵个细胞/cm²)分泌在IL-6和IL-1β的组合存在下上调并且随着暴露时间而增加。结果是平均值±SD，n＝3个生物重复(对于每对柱左-24小时，右-54小时)。

图10：AAT的单层C3A细胞(1.3x10⁵个细胞/cm²)分泌随时间增加，但不受暴露于单独或组合的IL-6或IL-1β影响。结果是平均值±SD，n＝3个生物重复(对于每对柱左-24小时，右-54小时)。

图11：白蛋白的单层C3A细胞分泌(1.3x10⁵个细胞/cm²)在IL-6(10ng/mL)和IL-1β(10ng/mL)的组合存在下在54小时时下调(*p＝0.047)，如对于此APP所预期。结果是平均值±SD，n＝3个重复。

图12：纤维蛋白原的单层C3A细胞(1.3x10⁵个细胞/cm²)通过IL-6增加并被IL-1β消除。结果是汇集的一式三份孔的单个重复。

图13：α-2巨球蛋白(α-2M)的单层C3A细胞(1.3x10⁵个细胞/cm²)分泌似乎通过单独IL-6适度上调。结果是汇集的一式三份孔的单个重复。

图14：IL-10的单层C3A细胞(1.3x10⁵个细胞/cm²)分泌在IL-1β或IL-6存在下上调，并且更多由IL-6驱动。结果是汇集的一式三份孔的单个重复(对于每对柱左-24小时，右-48小时)。

图15：IL-1Ra的C3A组织(未标准化至细胞数目)分泌也在IL-6(10ng/mL)和IL-1β(10ng/mL)的组合存在下在24小时时上调(*p＝0.007)。结果是平均值±SD，n＝6个生物重复。

图16：AAT的C3A组织(未标准化至细胞数目)分泌未在IL-6(10ng/mL)和IL-1β(10ng/mL)的组合存在下在24小时时上调(p＝0.51)。结果是平均值±SD，n＝6个生物重复。

图17：TNFα的单层C3A细胞(2.6x10⁵个细胞/cm²)分泌在IL-1β或IL-6存在下上调。结果是汇集的一式三份孔的单个重复(对于每对柱左-24小时，右-48小时)。

图18：IL-1Ra的单层C3A细胞(2.6x10⁵个细胞/cm²)分泌在IL-1β(10ng/mL)和IL-1β与TNF-α(各自10ng/mL)的组合存在下上调，但在单独TNF-α存在下不上调。结果是汇集的一式三份孔的单个重复。

图19：IL-1Ra的单层C3A细胞(1.3x10⁵个细胞/cm²)分泌在LPS存在下在24小时时上调。结果是汇集的一式三份孔的单个重复(绿色线指示未处理的对照应答)。

图20：AAT的单层C3A细胞(1.3x10⁵个细胞/cm²)分泌在更高浓度的LPS存在下在24小时时上调。结果是汇集的一式三份孔的单个重复(绿色线指示未处理的对照应答)。

讨论

在这些研究中，证明了单层和C3A组织中的C3A细胞对急性期反应的促炎性细胞因子和关键介质IL-1β、IL-6和TNF-α以及对LPS做出反应的能力。

在单层和C3A组织中，C3A细胞通过抗炎APP的上调和/或组成型表达对在AILD患者中发现升高的这些炎性介质做出反应。

正如急性期反应的特征，IL-6和IL-1β的作用取决于所得因子而变化，并且可以是彼此抑制性(例如纤维蛋白原)或增强性(例如IL-1Ra)。与IL-1Ra分泌增加并行的降低的白蛋白产生也与急性期反应一致。

外源性AAT和IL-1Ra已经显示通过干扰TNF-α和IL-1β途径和增强IL-10产生来抑制促炎性细胞因子合成，其中后者具有广泛的抗炎特性。从这些研究中不清楚C3A细胞产生的IL-10增加是直接由IL-6暴露还是IL-1Ra的自分泌作用产生。

响应于IL-6、IL-1β和组合，C3A细胞产生低水平但升高的TNF-α水平。然而，TNF-α不显著影响APP表达，除非当比在培养物中测量高10,000倍给药时。

在AILD患者中响应细胞因子和LPS升高，促炎性细胞因子的减少和抗炎APP的增加可有助于通过治疗系统消退炎症。

结论

C3A细胞组成型地和响应于与IL-1β和IL-6共孵育而分泌抗炎因子。它们的反应是动态的，从而表现出抗炎介质IL-1Ra和AAT的时间和剂量依赖性分泌。另外，C3A细胞响应于LPS而上调IL-1Ra和AAT。

炎症消退反应可代表用治疗系统治疗的AILD患者中的治疗益处消退的多重机制之一。

实施例4

离体和体外模型支持C3A细胞分泌的因子有助于减轻与酒精性肝病相关的炎症和嗜中性粒细胞/巨噬细胞功能障碍以恢复免疫稳态

酒精性肝炎(AH)患者具有高水平的促炎性细胞因子并且损害了免疫细胞功能，这部分是由于来自慢性酒精消耗的肠通透性增加和细菌/内毒素易位至循环中所致。尽管进展为全身炎症反应综合征(SIRS)和多器官功能衰竭的机制尚未完全了解，但死亡率的相关增加已有详尽记载。

这些研究的目的是评估本文公开的具有本发明的C3A细胞的治疗系统使用先天免疫细胞功能的离体和体外模型来恢复免疫稳态的潜力。

在治疗开始之前和之后24小时测量从7名系统治疗的受试者(用于治疗急性慢性肝衰竭)和2名疾病严重程度匹配的对照受试者收集的血浆样品的细胞因子。在用治疗前、治疗期间和治疗后收集的受试者血浆处理的健康对照嗜中性粒细胞中测量氧化爆发和吞噬能力。

诱导THP-1单核细胞粘附、极化成促炎性(M1)巨噬细胞表型，并在存在/不存在C3A细胞条件培养基(CM)的情况下测量细胞因子产生和吞噬能力。

受试者血浆中的IL-1β、IL-6和TNFα水平在处理后24小时都趋于下降，从而表明从促炎性TH1样概况转变为抗炎TH2概况。对于用系统治疗前受试者血浆处理的嗜中性粒细胞，氧化爆发显著高于对照血浆，并且在ELAD治疗和之后趋于下降。FITC标记的大肠杆菌的吞噬作用在用ELAD治疗前血浆处理的嗜中性粒细胞中和在ELAD治疗24小时后最低，并且在用来自ELAD治疗的受试者的血浆处理的中性粒细胞中在治疗结束和30天随访时增加。

用CM处理促炎性(M1)THP-1细胞减少炎性细胞因子分泌(IL-1β、IL-6和TNFα)；吞噬作用在48小时内未恢复。

据先前报道，C3A细胞响应暴露于促炎性细胞因子IL-1β和IL-6而产生抗炎蛋白IL-1Ra，并且在病例研究(n＝3)中IL-1Ra浓度在治疗期间在系统治疗的受试者的血浆中增加。这些目前研究证明，C3A细胞恢复先天免疫细胞功能的离体和体外模型中的免疫稳态，并且提出治疗可提供益处的潜在机制。

受试者血浆中的凝溶胶蛋白水平在处理后24小时趋于显著上升，如图23中所示。

图例

图21：在用治疗系统治疗期间受试者血浆中的选定蛋白质水平。

图22：在用治疗系统治疗期间受试者血浆中的选定蛋白质水平。

图23：在用治疗系统治疗期间受试者血浆中的凝溶胶蛋白水平。

已参考特定实施方案仅以实例的方式而不是以限制的方式详细说明并描述了本发明。本领域的技术人员将认识到，对所描述的示例性实施方案的各种修改均在本公开的范围和考虑之内。因此，意图将本发明视为仅由所附权利要求的范围限制。

Claims (68)

1.一种用于诱导细胞中的抗炎反应的组合物，所述组合物包含一种或多种促炎性分子，其中所述抗炎反应包括抗炎因子的表达增加。

2.如权利要求1所述的组合物，其中所述细胞是真核细胞。

3.如权利要求1所述的组合物，其中所述细胞是哺乳动物细胞。

4.如权利要求3所述的组合物，其中所述细胞是人细胞。

5.如权利要求1所述的组合物，其中所述细胞是肝细胞。

6.如权利要求1所述的组合物，其中所述细胞是重组工程化细胞。

7.如权利要求1所述的组合物，其中所述细胞是肝母细胞瘤源性细胞。

8.如权利要求7所述的组合物，其中所述细胞是HepG2细胞或C3A细胞。

9.如权利要求8所述的组合物，其中所述细胞是来自亲本C3A细胞系的克隆衍生物。

10.如权利要求1所述的组合物，其中所述促炎性分子包含一种或多种细胞因子、损伤相关分子模式分子(DAMP)或病原体相关分子模式分子(PAMP)。

11.如权利要求1所述的组合物，其中所述促炎性分子包括以下各项中的一种或多种：肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-1(IL-1)、白细胞介素-5(IL-5)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、白细胞介素-11(IL-11)、白细胞介素-12(IL-12)、白细胞介素-17(IL-17)、白细胞介素-18(IL-18)、白细胞介素-1β(IL-1β)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、巨噬细胞炎性蛋白1-α(MIP-1α)、巨噬细胞炎性蛋白1-β(MIP-1β)、干扰素γ(IFN-γ)、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、淋巴细胞趋化因子、分形趋化因子或其任何组合。

12.如权利要求1所述的组合物，其中所述组合物来源于患有疾病的受试者的血液。

13.如权利要求12所述的组合物，其中所述疾病是炎性疾病。

14.如权利要求13所述的组合物，其中所述炎性疾病是选自由以下各项组成的组的肝病：肝硬化、肝炎和脂肪性肝病。

15.如权利要求13所述的组合物，其中所述疾病是自身免疫性疾病或自身炎性疾病。

16.如权利要求1所述的组合物，其中所述抗炎因子包括以下各项中的一种或多种：α-1-抗胰蛋白酶(AAT)、白细胞介素-1受体拮抗剂(IL-1Ra)、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-10(IL-10)、白细胞介素-13(IL-13)、干扰素α(IFN-α)、凝溶胶蛋白、转化生长因子β(TGF-β)或其任何组合。

17.如权利要求16所述的组合物，其中所述抗炎因子的所述表达增加了至少2.0倍、5.0倍、10倍、25倍、50倍、100倍、250倍、500倍、1000倍或更多倍。

18.如权利要求1所述的组合物，其中所述细胞在体外被接触。

19.如权利要求18所述的组合物，其中所述细胞被粘附至固体基质。

20.如权利要求18所述的组合物，其中所述细胞被包埋在半固体基质中。

21.如权利要求1所述的组合物，其中所述细胞在体内被接触。

22.如权利要求1所述的组合物，其中所述组合物还包含真核细胞。

23.如权利要求1所述的组合物，其中所述真核细胞是哺乳动物细胞。

24.如权利要求3所述的组合物，其中所述真核细胞是人细胞。

25.如权利要求1所述的组合物，其中所述真核细胞是肝细胞。

26.如权利要求1所述的组合物，其中所述真核细胞是重组工程化细胞。

27.如权利要求1所述的组合物，其中所述真核细胞是肝母细胞瘤源性细胞。

28.如权利要求7所述的组合物，其中所述真核细胞是HepG2细胞或C3A细胞。

29.如权利要求8所述的组合物，其中所述真核细胞是来自亲本C3A细胞系的克隆衍生物。

30.一种诱导细胞中的抗炎反应或抑制细胞中的炎症反应的方法，所述方法包括使所述细胞与根据权利要求1-29中任一项所述的促炎性组合物接触，其中所述抗炎反应包括抗炎因子的表达增加。

31.如权利要求30所述的方法，其中所述细胞是真核细胞。

32.如权利要求30所述的方法，其中所述细胞是哺乳动物细胞。

33.如权利要求32所述的方法，其中所述细胞是人细胞。

34.如权利要求30所述的方法，其中所述细胞是肝细胞。

35.如权利要求30所述的方法，其中所述细胞是重组工程化细胞。

36.如权利要求30所述的方法，其中所述细胞是肝母细胞瘤源性细胞。

37.如权利要求36所述的方法，其中所述细胞是HepG2细胞或C3A细胞。

38.如权利要求37所述的方法，其中所述细胞是来自亲本C3A细胞系的克隆衍生物。

39.如权利要求30所述的方法，其中所述细胞是C3A细胞。

40.如权利要求39所述的方法，其中所述疾病是肝硬化、肝炎或脂肪性肝病。

41.如权利要求30所述的方法，其中所述抗炎因子包括以下各项中的一种或多种：α-1-抗胰蛋白酶(AAT)、白细胞介素-1受体拮抗剂(IL-1Ra)、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-10(IL-10)、白细胞介素-13(IL-13)、干扰素α(IFN-α)、凝溶胶蛋白、转化生长因子β(TGF-β)或其任何组合。

42.如权利要求41所述的方法，其中所述抗炎因子的所述表达增加了至少2.0倍、5.0倍、10倍、25倍、50倍、100倍、250倍、500倍、1000倍或更多倍。

43.如权利要求30所述的方法，其中所述细胞在体外被接触。

44.如权利要求43所述的方法，其中所述细胞被粘附至固体基质。

45.如权利要求43所述的方法，其中所述细胞被包埋在半固体基质中。

46.如权利要求30所述的方法，其中所述细胞在体内被接触。

47.如权利要求46所述的方法，其中在与含有所述细胞的受试者联接的体外血液解毒系统的活性筒中产生所述抗炎因子。

48.如权利要求47所述的方法，其中由来自所述受试者的细胞产生所述组合物。

49.如权利要求48所述的方法，其中所述细胞是患病肝脏的细胞。

50.如权利要求49所述的方法，其中所述疾病是肝硬化、肝炎或脂肪性肝病。

51.如权利要求30所述的方法，其还包括检测所述抗炎因子的表达。

52.如权利要求30所述的方法，其中持续地接触所述细胞超过1小时、6小时、24小时、48小时、60小时、72小时或84小时。

53.一种治疗受试者的疾病或病症的方法，所述方法包括向所述受试者施用包含抗炎因子的组合物，从而治疗所述疾病或病症。

54.如权利要求53所述的方法，其中所述疾病或病症是炎性疾病。

55.如权利要求54所述的方法，其中所述疾病是自身免疫性疾病或自身炎性疾病。

56.如权利要求53所述的方法，其中所述疾病是选自由以下各项组成的组的肝病：肝硬化、肝炎和脂肪性肝病。

57.如权利要求53所述的方法，其中所述抗炎因子包括以下各项中的一种或多种：α-1-抗胰蛋白酶(AAT)、白细胞介素-1受体拮抗剂(IL-1Ra)、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-10(IL-10)、白细胞介素-13(IL-13)、干扰素α(IFN-α)、凝溶胶蛋白、转化生长因子β(TGF-β)或其任何组合。

58.如权利要求53所述的方法，其中由被根据权利要求1-29中任一项所述的促炎性组合物接触的细胞产生所述组合物。

59.如权利要求53所述的方法，其中将所述组合物施用于所述受试者的循环系统。

60.如权利要求59所述的方法，其中经由与所述受试者联接的体外血液解毒系统施用所述组合物。

61.如权利要求60所述的方法，其中由所述血液解毒系统的活性筒中的细胞响应于根据权利要求1-29中任一项所述的组合物而产生所述组合物。

62.如权利要求61所述的方法，其中所述血液解毒系统包括：

a)血液回路，其联接至所述受试者的所述循环系统并且可操作来将来自所述受试者的血液传送通过超滤液发生器并且返回至受试者；

b)再循环回路，其与所述超滤液发生器联接并且可操作来从所述超滤液发生器抽吸超滤液并独立于所述血液的细胞组分处理超滤液，其中处理包括：使所述超滤液通过包括所述细胞的活性筒，所述细胞产生包含所述抗炎因子的所述组合物；及将所述因子引入所述超滤液中；以及

c)导管接合部，其可操作来重新组合所述再循环回路中的所述超滤液和所述血液回路中的所述细胞组分，然后重新引入至所述受试者。

63.如权利要求62所述的方法，其还包括检测所述抗炎因子。

64.如权利要求59所述的方法，其中持续施用所述组合物超过1小时、6小时、24小时、48小时、60小时、72小时或84小时。

65.一种源自亲本C3A细胞系的合格C3A细胞系，其中所述细胞系的细胞展现出抗炎介质蛋白α-1-抗胰蛋白酶(AAT)和白细胞介素-1受体拮抗剂(IL-1Ra)响应于脂多糖(LPS)或促炎性细胞因子白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-1β(IL-1β)的表达增加。

66.如权利要求65所述的细胞系，其中与未与LPS或IL-6和IL-1β接触的细胞相比，AAT或IL-1Ra的表达的所述增加是至少2.0倍、5.0倍、10倍、25倍、50倍、100倍、250倍、500倍、1000倍或更多倍。

67.如权利要求65所述的细胞系，其中所述细胞进一步展现出凝溶胶蛋白的表达增加。

68.如权利要求67所述的细胞系，其中与未与LPS或IL-6和IL-1β接触的细胞相比，凝溶胶蛋白的所述表达是至少2.0倍、5.0倍、10倍、25倍、50倍、100倍、250倍、500倍、1000倍或更多倍。