CN107793397B

CN107793397B - 取代的嘧啶类pi3k抑制剂的光学异构体及其应用

Info

Publication number: CN107793397B
Application number: CN201710794442.1A
Authority: CN
Inventors: 赵立文; 沙向阳; 刘晓蓉; 叶仕春; 王超; 徐艳楠; 齐晓昕
Original assignee: Nanjing Sanhome Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Nanjing Sanhome Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2016-09-06
Filing date: 2017-09-05
Publication date: 2022-04-26
Anticipated expiration: 2037-09-05
Also published as: CN107793397A

Abstract

本发明属于医药化学领域，涉及一类取代的嘧啶类PI3K抑制剂的光学异构体及其应用，具体地，本发明提供式I或式II所示的光学异构体或其水合物、溶剂合物、结晶或药学上可接受的盐，它们的制备方法以及含有这些光学异构体或其水合物、溶剂合物、结晶或药学上可接受的盐的药物组合物和它们用于治疗肿瘤、组织增生类疾病或者炎性疾病的用途。本发明的化合物对PI3Kδ具有好的抑制活性，且选择性高，非常有希望成为疗效更高、副作用更小的肿瘤治疗剂、组织增生类疾病治疗剂或者炎性疾病治疗剂，

Description

取代的嘧啶类PI3K抑制剂的光学异构体及其应用

技术领域

本发明属于医药化学领域，具体涉及一类作为取代的嘧啶类磷脂酰肌醇3-激酶抑制剂的光学异构体或其水合物、溶剂合物、结晶或药学上可接受的盐，它们的制备方法以及含有这些化合物的药物组合物和这些化合物或组合物用于治疗肿瘤、组织增生类疾病或者炎性疾病的用途。

背景技术

PI3K(磷脂酰肌醇3-激酶)是独特和保守的细胞内脂质激酶家族的成员，其磷酸化磷脂酰肌醇上的3’-OH基团。根据结构和磷酸化底物的不同，PI3K可分为I、II、III三种类型，其中I型PI3K是目前研究的热点，其在调节具有PI3K活性、有助于炎症细胞促肿瘤生成效应的免疫细胞中起重要作用(Coussens和Werb，Nature，2002，420，860-867)，具有治疗各种形式的肿瘤疾病的治疗价值，包括实体瘤(例如癌和肉瘤)、白血病和淋巴恶性肿瘤。I型PI3K由p110单位和p85单位组成，目前已知的p110亚单位有四种，即p110α、p110β、 p110γ和p110δ，其中p110δ主要在脾和造血细胞包括白细胞如T细胞、树突细胞、嗜中性粒细胞、肥大细胞、B细胞和巨噬细胞中表达。PI3Kδ完整地参与了哺乳动物免疫系统功能如T细胞功能、树突细胞功能、嗜中性粒细胞活性、肥大细胞活化、B细胞活化。因此， PI3Kδ也参与多种与异常免疫相关的疾病，例如变态反应、炎性疾病、炎症介导的血管生成、类风湿性关节炎、自身性免疫性疾病如红斑性狼疮、哮喘、肺气肿和其他呼吸道疾病。

对于靶向PI3K途径的药物研究已进行了多年，临床上取得了一些成功，特别是近来发现选择性的PI3Kδ抑制剂在肿瘤等疾病的治疗中有明显的疗效。

此外，大量文献数据表明，手性药物的光学异构体具有不同的药效学、药代动力学和毒理学性质。而本申请的发明人前期通过一系列药理研究表明，取代的嘧啶类化合物作为磷脂酰肌醇3-激酶抑制剂，具有良好的成药性，因此，合成作为磷脂酰肌醇3-激酶抑制剂的取代的嘧啶类化合物的光学异构体，并对它们进行生物活性、毒性和副作用的研究，对于该类化合物的成药性研究具有重要的指导意义，值得进行深入的开发。

发明内容

本发明的一个目的是提供式I或式II所示的具有PI3K抑制活性的光学异构体或其水合物、溶剂合物、结晶或药学上可接受的盐，

本发明的另一个目的是提供制备本发明的式I或式II所示的光学异构体或其水合物、溶剂合物、结晶或其药学上可接受的盐的方法。

本发明的再一个目的是提供包含本发明的式I或式II所示的光学异构体或其水合物、溶剂合物、结晶或其药学上可接受的盐和药学可接受的载体的组合物，以及包含本发明的式I 或式II所示的光学异构体或其水合物、溶剂合物、结晶或其药学上可接受的盐和另一种或多种PI3K抑制剂的组合物。

本发明的还一个目的是提供本发明的式I或式II所示的光学异构体或其水合物、溶剂合物、结晶或其药学上可接受的盐治疗和/或预防肿瘤、组织增生类疾病或炎性疾病的方法，以及本发明的式I或式II所示的光学异构体或其水合物、溶剂合物、结晶或其药学上可接受的盐在制备用于治疗和/或预防肿瘤、组织增生类疾病或炎性疾病的药物中的应用。

针对上述目的，本发明提供以下技术方案：

第一方面，本发明提供式I或式II所示的光学异构体或其水合物、溶剂合物、结晶或其药学上可接受的盐：

在一些实施方案中，本发明的式I或II的化合物为基本上纯的异构体形式，异构体纯度为至少60％EE。在一个具体的实施方案中，本发明的式I或II的化合物的异构体纯度为至少90％ EE。在另一个具体的实施方案中，本发明的式I或II的化合物的异构体纯度为至少98％EE。在一个优选的实施方案中，本发明的式I或II的化合物的异构体纯度为至少99％EE。异构体过量值提供的是主要异构体的百分量超过与其同时存在的次要异构体的百分量的定量测量，可容易地通过本领域所建立的和公知的适当方法进行测量，例如手性高压液相色谱法 (HPLC)、手性气相色谱法(GC)、使用手性位移试剂的核磁共振(NMR)等。

在一些优选的实施方案中，本发明提供式I或式II的化合物的药学上可接受的盐，其中所述盐为所述化合物与酸形成的药学上可接受的盐，所述的酸为磷酸、硫酸、盐酸、氢溴酸、硝酸、柠檬酸、马来酸、羟基马来酸、丙酸、乙醇酸、硬脂酸、丙二酸、扁桃酸、琥珀酸、富马酸、乳酸、醋酸、三幅醋酸、谷氨酸、苹果酸、酒石酸、抗坏血酸、双羟萘酸、苯甲酸、苯乙酸、谷氨酸、水杨酸、草酸或反丁烯二酸。

另一方面，本发明提供本发明的式I或式II所示的光学异构体或其水合物、溶剂合物、结晶或其药学上可接受的盐的制备方法，包括：

a)式(1)的化合物与三光气反应得到式(2)的中间体；

b)式(2)的中间体与式(3)的化合物在强碱中反应得到式(4)的中间体；

c)式(4)的中间体经还原反应得到式(5)的中间体；

d)式(5)的中间体经氧化反应得到式(6)的中间体；

e)式(6)的中间体与甲基化试剂加成反应得到式(7)的中间体；

f)式(7)的中间体经氧化反应得到式(8)的中间体；

g)式(8)的中间体与羟胺反应得到式(9)的中间体；

h)式(9)的中间体经锌粉还原得到式(10)的中间体；

i)式(10)的中间体与

亲核反应得到式(11)的化合物；

g)式I或式II的光学异构体可以通过对式11的异构体混合物进行手性柱分离得到：

其中，X表示卤素，优选为氯、溴或碘。

在一些实施方案中，本发明提供式I或式II的光学异构体的溶剂合物的制备方法，包括将式I或式II的光学异构体溶解在溶剂中，然后挥发，制得式I或式II的光学异构体的溶剂合物。在一些实施方案中，所述的溶剂选自水、环己烷、石油醚、乙酸乙酯、乙酸异丙酯、丙酮、甲醇、乙醇、氯仿、苯、四氢呋喃、二氯甲烷、乙醚、异丙醚、异丙醇、正己烷、正庚烷、正丁烷、正戊烷、异戊烷和乙腈中的一种或者多种。在一些优选的实施方案中，所述溶剂选自水、氯仿、苯、四氢呋喃、石油醚、乙酸乙酯、乙酸异丙酯、正庚烷和乙腈中的一种或几种。

在一些实施方案中，本发明提供式I或式II的光学异构体的单晶的制备方法，包括将式 I或式II的光学异构体溶解在溶剂中，挥发，制得式I或式II的光学异构体的单晶。在一些实施方案中，所述的溶剂选自水、环己烷、石油醚、乙酸乙酯、乙酸异丙酯、丙酮、甲醇、乙醇、氯仿、苯、四氢呋喃、二氯甲烷、乙醚、异丙醚、异丙醇、正己烷、正庚烷、正丁烷、正戊烷、异戊烷和乙腈中的一种或者多种。在一些优选的实施方案中，所述溶剂选自水、氯仿、苯、四氢呋喃、石油醚、乙酸乙酯、乙酸异丙酯、正庚烷和乙腈中的一种或几种。

在一些优选的实施方案中，根据本发明的式I或式II的光学异构体的制备方法中步骤e) 中所述的甲基化试剂选自甲基锌试剂、甲基铜试剂、甲基铝试剂、甲基锂、甲基氯化镁、甲基溴化镁、甲基碘化镁和碘甲烷。进一步优选地，步骤e)中所述的甲基化试剂选自甲基氯化镁、甲基溴化镁和甲基碘化镁。

第三方面，本发明提供药物组合物，其包含本发明的式I或式II所示的光学异构体或其水合物、溶剂合物、结晶或其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，本发明提供药物组合物，其包含本发明的式I或式II所示的光学异构体或其水合物、溶剂合物、结晶或其药学上可接受的盐，还包含选自下列组成的一种或多种：酪氨酸蛋白酶抑制剂、EGFR抑制剂、VEGFR抑制剂、Bcr-Abl抑制剂、c-kit抑制剂、c-Met抑制剂、Raf抑制剂、MEK抑制剂、组蛋白去乙酰酶抑制剂、VEGF抗体、EGF抗体、 HIV蛋白激酶抑制剂、HMG-CoA还原酶抑制剂等。

可以将本发明的式I或式II所示的光学异构体或其水合物、溶剂合物、结晶或其药学上可接受的盐与药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂混合制备成药物制剂，以适合于经口或胃肠外给药。给药方法包括，但不限于皮内、肌内、腹膜内、静脉内、皮下、鼻内和经口途径。所述制剂可以通过任何途径施用，例如通过输注或推注，通过经上皮或皮肤粘膜(例如口腔粘膜或直肠等)吸收的途径施用。给药可以是全身的或局部的。经口施用制剂的实例包括固体或液体剂型，具体而言，包括片剂、丸剂、粒剂、粉剂、胶囊剂、糖浆、乳剂、混悬剂等。所述制剂可通过本领域已知的方法制备，且包含药物制剂领域常规使用的载体、稀释剂或赋形剂。

根据本发明，在一些实施方案中，本发明提供式11的化合物或其水合物、溶剂合物、结晶或药学上可接受的盐，

其中所述式11的化合物或其水合物、溶剂合物、结晶或药学上可接受的盐富含式I的光学异构体或其水合物、溶剂合物、结晶或药学上可接受的盐。在一些实施方案中，本发明的式11的化合物或其水合物、溶剂合物、结晶或药学上可接受的盐含有基本上为纯的式I的光学异构体或其水合物、溶剂合物、结晶或药学上可接受的盐。在一个具体的实施方案中，本发明的式11的化合物或其水合物、溶剂合物、结晶或药学上可接受的盐含有大于60％的式I的光学异构体或其水合物、溶剂合物、结晶或药学上可接受的盐。在另一个具体的实施方案中，本发明的式11的化合物或其水合物、溶剂合物、结晶或药学上可接受的盐含有大于90％的式I 的光学异构体或其水合物、溶剂合物、结晶或药学上可接受的盐。在另一个具体的实施方案中，本发明的式11的化合物或其水合物、溶剂合物、结晶或药学上可接受的盐含有大于98％的式I的光学异构体或其水合物、溶剂合物、结晶或药学上可接受的盐。在一个优选的实施方案中，本发明的式11的化合物或其水合物、溶剂合物、结晶或药学上可接受的盐含有大于 99％的式I的光学异构体或其水合物、溶剂合物、结晶或药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，本发明的式11的化合物为基本上纯的异构体形式，其基本上不含其它异构体。例如，在一个具体实施方案中，本发明的式11的化合物基本上不含其式II的异构体。在另一个具体实施方案中，本发明的式11的化合物为纯的异构体形式。

第四方面，本发明提供本发明式I或式II所示的光学异构体或其水合物、溶剂合物、结晶或其药学上可接受的盐，式11所示的化合物或其水合物、溶剂合物、结晶或其药学上可接受的盐或包含它们的药物组合物在制备治疗和/或预防肿瘤、组织增生类疾病或者炎性疾病的药物中的用途，其中所述的肿瘤选自黑素瘤、乳头状甲状腺肿瘤、胆管癌、结肠癌、卵巢癌、肺癌、恶性淋巴肿瘤，肝、肾、膀胱、前列腺、乳腺和胰腺的癌和肉瘤，以及皮肤、结肠、甲状腺、肺和卵巢的原发和复发性实体瘤或者白血病，所述的炎性疾病选自过敏、哮喘、类风湿性关节炎、骨关节炎、过敏性结膜炎、过敏性角膜炎、干眼症、慢性阻塞性疾病(COPD)、红斑狼疮、牛皮癣、多发性硬化和晚期肾病等。

在一些实施方案中，本发明提供本发明的式I或式II所示的光学异构体或其水合物、溶剂合物、结晶或其药学上可接受的盐、式11所示的化合物或其水合物、溶剂合物、结晶或其药学上可接受的盐及包含它们的药物组合物，所述化合物或药物组合物用于治疗和/或预防肿瘤、组织增生或炎性疾病，进一步优选的，所述肿瘤、组织增生或炎性疾病是PI3K抑制剂有关的肿瘤、组织增生或炎性疾病。

在一些实施方案中，本发明涉及一种治疗和/或肿瘤、组织增生类疾病或炎性疾病的方法，其包括给予所需患者治疗或预防有效量的式I或式II所示的光学异构体或其水合物、溶剂合物、结晶或其药学上可接受的盐，式11所示的化合物或其水合物、溶剂合物、结晶或其药学上可接受的盐或包含它们的药物组合物，其中所述的肿瘤选自黑素瘤、乳头状甲状腺肿瘤、胆管癌、结肠癌、卵巢癌、肺癌、恶性淋巴肿瘤，肝、肾、膀胱、前列腺、乳腺和胰腺的癌和肉瘤，以及皮肤、结肠、甲状腺、肺和卵巢的原发和复发性实体瘤或者白血病，所述的炎性疾病选自过敏、哮喘、类风湿性关节炎、骨关节炎、过敏性结膜炎、过敏性角膜炎、干眼症、慢性阻塞性疾病(COPD)、红斑狼疮、牛皮癣、多发性硬化和晚期肾病等。

术语说明

除非有相反陈述，在说明书和权利要求书中使用的术语具有下述含义。

本发明“光学异构体”是指分子结构完全相同，物理化学性质相近，但旋光性不同的物质。在光学活性化合物的描述中，前缀D和L或R和S用于表示与分子的手性中心有关的绝对构型。前缀(+)和(-)或d和l用于指定化合物引起的平面偏振光的旋转方向。用(-)或l表示化合物是左旋的。前缀为(+)或d的化合物是右旋的。许多有机化合物以光学活性形式存在，即它们能使平面偏振光的平面旋转。对于给定的化学结构，不同的光学活性化合物被称为立体异构体，除了彼此互为镜像之外，它们是相同的。一个具体的立体异构体也可称作对映异构体，这些异构体的混合物被称为对映异构体混合物或外消旋混合物。

在本发明中，当特定异构体在混合物的组成中超过50％时，外消旋混合物“富含”该特定异构体。“基本上不含”是指当使用本领域技术人员常规使用的传统分析方法确定时，该化合物包括少于大约10％不需要的异构体，例如不需要的异构体的量可以少于10％，例如， 9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％或甚至更少。含有大约95％或更多的所需异构体的富含异构体的化合物在此被称为“基本上纯的”异构体。含有大约99％或更多的所需异构体的富含异构体的化合物在此被称为“纯的”立体异构体。任何富含异构体的化合物的纯度可以使用传统的分析方法来确认。

本发明“卤素”是指氟、氯、溴、碘。

本发明“药物组合物”是指包含任何一种本文所述的化合物，包括对应的异构体、前药、溶剂化物、药学上可接受的盐或其化学的保护形式，和一种或多种药学上可接受载体的混合物。药用组合物的目的是促进化合物对生物体的给药。所述组合物通常用于制备治疗和/或预防由一种或多种激酶介导的疾病的药物。

本发明“药学上可接受的载体”是指对有机体不引起明显刺激性和不干扰所给予化合物的生物活性和性质的载体，包含所有的溶剂、稀释剂或其它赋形剂、分散剂、表面活性剂等渗剂、增稠剂或乳化剂、防腐剂、固体粘合剂、润滑剂等。除非任何常规载体介质与本发明化合物不相容。可以作为药学上可接受的载体的一些实例包括，但不限于糖类，如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉，如玉米淀粉和马铃薯淀粉；纤维素及其衍生物，如羧甲基纤维素钠、以及纤维素和乙酸纤维素；麦芽、明胶等。

本发明“赋形剂”指加入到药用组合物中以进一步促进给予化合物的惰性物质。赋形剂可以包括碳酸钙、磷酸钙、多种糖类和多种类型的淀粉、纤维素衍生物、明胶、植物油、聚乙二醇。

本发明“治疗和/或预防肿瘤、组织增生类疾病或炎性疾病的药物中的用途”是指可以使肿瘤、组织增生类疾病或炎性疾病得到改善，抑制肿瘤的生长、发展和/或转移，或降低患肿瘤、组织增生类疾病或炎性疾病的风险，主要向所需要的人或动物给予治疗和/或预防有效量的本发明的化合物以抑制、减慢或逆转受治疗者中肿瘤的生长、发展或扩散，使肿瘤、组织增生类疾病或炎性疾病得到改善，或降低患病风险，所述的肿瘤包括癌，例如包括膀胱癌、乳腺癌、肾癌、肝癌、肺癌(包括小细胞肺癌)、食道癌、胆囊癌、卵巢癌、胰腺癌、胃癌、宫颈癌、甲状腺癌、前列腺癌和皮肤癌(包括鳞状细胞癌)；淋巴系的造血肿瘤，例如包括白血病、急性淋巴细胞白血病、急性淋巴母细胞白血病、B细胞淋巴瘤、T-细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、毛细胞淋巴瘤和伯基特淋巴瘤；间充质细胞来源的肿瘤，例如包括纤维肉瘤、横纹肌肉瘤；髓系的造血肿瘤，例如包括急慢性骨髓性白血病、骨髓增生异常综合征和前髓细胞白血病；中枢和周围神经系统肿瘤，例如包括星形细胞瘤、成神经细胞瘤、神经胶质瘤和神经鞘瘤；和其它肿瘤，例如包括黑素瘤、精原细胞瘤、畸胎癌、骨肉瘤、色性干皮病、角化棘皮瘤、甲状腺滤泡癌和卡波济氏肉瘤。所述的炎性疾病选自过敏、哮喘、类风湿性关节炎、骨关节炎、过敏性结膜炎、过敏性角膜炎、干眼症、慢性阻塞性疾病(COPD)、红斑狼疮、牛皮癣、多发性硬化和晚期肾病等。

“治疗有效量”是指足以治疗具体的功能障碍或疾病或其一种或多种症状的化合物用量。对于肿瘤、组织增生类疾病或炎性疾病来说，除其它情况以外，治疗有效量包括足以导致肿瘤、增生组织萎缩或炎症消退或者降低肿瘤、组织增生的生长速率或炎症进行的用量。“预防有效量”是指足以防止受试者发生肿瘤、组织增生类疾病或炎性疾病的化合物用量。

本发明“药学上可接受的盐”是指本发明所述的化合物与某些酸形成的药学上可接受的盐，这类盐用于哺乳动物体内时具有安全性和有效性，且具有应有的生物活性，所述的酸可选自无机酸例如磷酸、硫酸、盐酸、氢溴酸、硝酸，有机酸例如柠檬酸、马来酸、羟基马来酸、丙酸、乙醇酸、硬脂酸、丙二酸、扁桃酸、琥珀酸、富马酸、乳酸、醋酸、三幅醋酸、谷氨酸、苹果酸、酒石酸、抗坏血酸、双羟萘酸、苯甲酸、苯乙酸、谷氨酸、水杨酸、草酸、反丁烯二酸。

说明书附图

图1为(S)-4-氨基-5-氰基-6-((1-(8-氯-4-氧代-2-苯基-1,4-二氢喹啉-3-基)乙基)氨基)嘧啶的单晶衍射谱图；

图2为(S)-4-氨基-5-氰基-6-((1-(8-氯-4-氧代-2-苯基-1,4-二氢喹啉-3-基)乙基)氨基)嘧啶的单晶衍射谱图中有关平伏键部分的局部放大情况。

具体实施方式

下面代表性的实施例是为了更好地说明本发明，而非用于限制本发明的保护范围。

实施例1 4-氨基-5-氰基-6-((1-(8-氯-4-氧代-2-苯基-1,4-二氢喹啉-3-基)乙基)氨基)嘧啶

步骤1 3-氯靛红酸酐的制备

在500ml三颈瓶中加入2-氨基-3-氯苯甲酸(34.2g，0.2mol)和175ml乙腈，加热至55℃, 然后滴加三光气的二氯甲烷溶液(三光气(29.6g，0.1mol)溶于150ml二氯甲烷中)，同时滴加吡啶(50ml，0.6mol)，30min左右滴加完毕，反应5h，TLC跟踪反应至反应完全。将反应液趁热抽滤，滤饼用100ml乙酸乙酯洗涤，滤液脱溶，得黑色油状物，加入冰水混合物，有大量固体析出,抽滤，烘干，乙酸乙酯石油醚体系重结晶，抽滤，烘干后得灰色固体30.8g，收率78.2％。

步骤2 8-氯-4-氧代-2-苯基-1,4-二氢喹啉-3-甲酸乙酯的制备

在250ml三颈瓶中加入苯甲酰乙酸乙酯(19.2g，0.1mol)和50ml DMF，降温至-20℃，然后分批加入60％NaH(4.0g，0.1mol)，有大量气泡冒出，保持温度不超过0℃，30min左右完毕，继续搅拌15min，升温至室温，搅拌待用。将3-氯靛红酸酐(19.7g，0.1mol)溶于100ml DMF中,通过恒压滴液漏斗滴加到上述反应液中，保持反应体系无水无氧，30min后，滴加完毕，将反应液升温至150℃，搅拌，TLC跟踪反应至反应完全。将反应液减压脱溶，黑色油状物，加入冰水混合物，用150ml×3乙酸乙酯萃取，合并有机层，干燥脱溶制砂，柱层析分离后得淡黄色固体18.3g，收率55.9％。

步骤3 8-氯-3-羟甲基-2-苯基喹啉-4-(1H)-酮的制备

将8-氯-4-氧代-2-苯基-1,4-二氢喹啉-3-甲酸乙酯(16.4g，0.05mol)和100mlTHF加入 250ml三颈瓶中，搅拌溶解，降温至-20℃，分批加入四氢锂铝(3.8g，0.1mol)，有气泡冒出，控制加入速度，维持温度不超过0℃，15min左右加毕，然后升温至室温，搅拌2h，TLC跟踪至反应完全。停止反应，分批加入3.8g十水硫酸钠，有气泡放出，控制加入速度，防止冲料。加完后,室温搅拌反应0.5h，抽滤，固体用四氢呋喃洗涤3次，滤液脱溶，旋干后得固体12.7g，收率88.6％。

步骤4 8-氯-4-氧代-2-苯基-1,4-二氢喹啉-3-甲醛的制备

将8-氯-3-羟甲基-2-苯基喹啉-4-(1H)-酮(11.4g，0.04mol)和100ml DMSO加入250ml三颈瓶中，搅拌溶解，然后加入IBX(14g，0.05mol)，升温至35℃，搅拌5h，TLC跟踪反应至反应完全。停止反应，加入300ml乙酸乙酯，升温至回流15min，趁热抽滤，固体用热乙酸乙酯洗涤3次，合并滤液，加入200ml水，分层，水层用100ml×2乙酸乙酯萃取，合并有机层，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂，得淡黄色固体9.9g，收率87.5％。

步骤5 8-氯-3-(1-羟乙基)-2-苯基喹啉-4(1H)-酮的制备

将8-氯-4-氧代-2-苯基-1,4-二氢喹啉-3-甲醛(8.5g，0.03mol)和50ml无水四氢呋喃加入 100ml两颈瓶中，搅拌溶解，降温至-35℃，氩气保护，然后用注射器加入甲基氯化镁四氢呋喃溶液(浓度为3M)(3ml，0.09mol)，加完升温至0℃，搅拌2h，TLC跟踪反应至反应完全。停止反应，加入5ml乙醇淬灭反应，减压蒸除溶剂，加入200ml水和100ml乙酸乙酯，分层，水层用100ml×2乙酸乙酯萃取，合并有机层，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得淡黄色固体8.2g，收率91.2％。

步骤6 3-乙酰基-8-氯-2-苯基喹啉-4(1H)-酮的制备

将8-氯-3-(1-羟乙基)-2-苯基喹啉-4(1H)-酮(6g，0.02mol)和60ml DMSO加入100ml三颈瓶中，搅拌溶解，然后加入IBX(8.4g，0.03mol)，升温至35℃，搅拌5h，TLC跟踪反应至反应完全。停止反应，加入300ml乙酸乙酯，升温至回流15min，热抽滤，固体用热乙酸乙酯洗涤3次，合并滤液，加入200ml水，分层，水层用100ml×2乙酸乙酯萃取，合并有机层，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂，得淡黄色固体5.4g，收率90.2％。

步骤7 8-氯-3-(1-(羟基亚氨基)乙基)-2-苯基喹啉-4(1H)-酮的制备

将3-乙酰基-8-氯-2-苯基喹啉-4(1H)-酮(4.5g，0.015mol)和50ml无水甲醇加入100ml三颈瓶中，搅拌溶解，然后加入盐酸羟胺(6.3g，0.09mol)和醋酸钠(9.8g，0.12mol)，升温至 45℃，搅拌5h，TLC跟踪反应至反应完全。停止反应，减压脱除溶剂，残留物加入100ml 水，有大量淡黄色固体析出，抽滤，水洗，滤饼烘干后得米色固体4.8g，收率87.1％。

步骤8 3-(1-氨基乙基)-8-氯-2-苯基喹啉-4(1H)-酮的制备

将8-氯-3-(1-(羟基亚氨基)乙基)-2-苯基喹啉-4(1H)-酮(3.1g，0.01mol)和50ml乙酸加入 100ml三颈瓶中，搅拌溶解，然后加入活化锌粉(3.3g，0.05mol)和10ml甲醇，升温至45℃，搅拌5h，TLC跟踪反应至反应完全。停止反应，抽滤，滤饼用大量乙酸乙酯洗涤，减压脱除溶剂，残留物加入50ml水和100ml乙酸乙酯，除去有机层，水层用5M氢氧化钠调节pH 值为12，有大量淡黄色固体析出，抽滤，水洗，滤饼烘干后得淡黄色固体1.7g，收率58.1％。

步骤9 4-氨基-5-氰基-6-((1-(8-氯-4-氧代-2-苯基-1,4-二氢喹啉-3-基)乙基)氨基)嘧啶的制备

将3-(1-氨基乙基)-8-氯-2-苯基喹啉-4(1H)-酮(1.5g，0.005mol)和50ml异丙醇加入100ml 三颈瓶中，搅拌溶解，然后加入4-氨基-5-氰基-6-氯嘧啶(0.93g，0.006mol)和碳酸钾(2.1g， 0.015mol)，升温至80℃，搅拌回流5h，停止反应，抽滤，滤饼用大量乙酸乙酯洗涤，减压脱除溶剂，残留物加入甲醇和硅胶制砂，柱层析分离，得白色固体1.3g，收率62.2％。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆):δ11.06(s,1H),8.23-8.21(d,1H,J＝10.0Hz),8.01-7.99(d,1H, J＝10.0Hz),7.90(s,1H),7.88(s,1H),7.59-7.52(m,5H),7.40-7.43(t,1H,J＝7.5Hz),7.24(s,2H), 5.14-5.17(m,1H),1.39-1.37(d,3H,J＝10.0Hz).ES:m/z 416.9[M+H]⁺。

实施例2(S)-4-氨基-5-氰基-6-((1-(8-氯-4-氧代-2-苯基-1,4-二氢喹啉-3-基)乙基)氨基)嘧啶

将实施例1中制得的粗产物4-氨基-5-氰基-6-((1-(8-氯-4-氧代-2-苯基-1,4-二氢喹啉-3-基)乙基)氨基)嘧啶(54.81mg)经HPLC制备分离(制备柱：CHIRALPAK AD-H，流动相：A:正己烷； B:乙醇)后得到25mg标题化合物(S)-4-氨基-5-氰基-6-((1-(8-氯-4-氧代-2-苯基-1,4-二氢喹啉-3- 基)乙基)氨基)嘧啶。ee＝99％；[α]D20＝+156.9°(c＝10mg/ml，DMF)。

实施例3(S)-4-氨基-5-氰基-6-((1-(8-氯-4-氧代-2-苯基-1,4-二氢喹啉-3-基)乙基)氨基)嘧啶单晶的制备

取约10mg实施例2制得的样品放于玻璃小瓶中，用0.6mL四氢呋喃及0.2mL水超声溶清，室温下小孔挥发，得到块状晶体。测定其单晶衍射图谱，检测仪器为热台偏振光显微镜(仪器型号为XP-500E，仪器编号为LY-01-006，生产厂家为上海长方光学仪器有限公司，方法参数：目镜倍数为10倍，物镜倍数为4倍)及单晶衍射仪(仪器型号为Bruker SMARTAPEX II，检测器型号为4K CCD，光源为增强型Mo光源和增强型Cu光源，方法参数：检测温度为 293(2)K，波长为

)，测得的单晶结构信息见表1，单晶衍射图谱见图1、2。

表1单晶结构信息表

实施例4(R)-4-氨基-5-氰基-6-((1-(8-氯-4-氧代-2-苯基-1,4-二氢喹啉-3-基)乙基)氨基)嘧啶

将实施例1中制得的粗产物4-氨基-5-氰基-6-((1-(8-氯-4-氧代-2-苯基-1,4-二氢喹啉-3-基) 乙基)氨基)嘧啶(54.81mg)经HPLC制备分离(制备柱：CHIRALPAK AD-H，流动相：A:正己烷；B:乙醇)后得到15mg标题化合物(R)-4-氨基-5-氰基-6-((1-(8-氯-4-氧代-2-苯基-1,4-二氢喹啉-3-基)乙基)氨基)嘧啶。ee＝99％；[α]D20＝-147.2°(c＝10mg/ml，DMF)。

实验例1化合物体外激酶活性评价

1实验材料

化合物：以上实施例制备的本发明的化合物，每个化合物用DMSO配制成10mM后，依次10倍稀释，测试终浓度为1μM、333nM、111nM、37nM、12.3nM、4.1nM、1.37nM、 0.45nM、0.15nM、0.05nM。

试剂：PI3Kα(p110α/p85a)，购自于Invitrogen公司，Cat.No.PV4788；PIK3Cδ(p110δ/p85a)，购自于Millipore公司，Cat.No.14-604-K；PIK3Cβ(p110β)，购自于Millipore 公司，Cat.No.14-603-K)；PIK3Cγ(pp110γ)，购自于Invitrogen公司，Cat.No.PR8641C；二甲基亚砜(DMSO)，购自于美国Sigma公司，Cat.No.D2650,Lot.No.474382；EDTA，购自于美国Sigma公司，Cat.No.E5134,CAS No.60-00-4；ATP，购自于美国Sigma公司， Cat.No.A7699-1G,CAS No.987-65-5；ADP-Glo Kinase Assay，购自于Promege公司，Cat. No.v9102/3,Lot.No.314795；Kiase-Glo Plus Luminescent KinaseAssay，购自于Promege公司，Cat.No.V3771。

仪器：LabChip EZ Reader，购自于美国Caliper公司。

2实验方法

化合物准备：取用一个96孔板作为初始板。用DMSO配制所需最高抑制浓度的100×化合物溶液，转移100μl到96孔板的一个孔中，通过转移30μl化合物溶液到60μl 100％DMSO进行连续稀释，共计10个浓度。加入100μl 100％DMSO到两个空的孔作为DMSO 对照组；再取用一个新的96孔板作为中间板，从初始板各孔转移4μl化合物溶液到中间板，再向各孔加入96μl 1×激酶缓冲液，摇板混匀；再取用一个新的384孔板作为测试板，从中间板各孔转移2.5μl化合物溶液到测试板，做两复孔。

PI3Kα激酶检测

1.将PI3Kα激酶溶于1×激酶缓冲液，配制成4×激酶溶液，测试终浓度为：PI3Kα1.65 nM。然后转移2.5μl激酶缓冲液至测定板上除无酶活对照组的各孔中，无酶活对照组加入 2.5μl不含激酶的1×激酶缓冲液；

2.将PIP2底物和ATP溶于1×激酶缓冲液，配制成2×底物溶液，终浓度为：PIP2 50μM， ATP 25μM。然后转移5μl 2×底物溶液至测定板的各孔中开始反应，室温下摇板孵育1h；

3.加入10μl Kinase-Glo reagent到测试板的各孔，摇板15min以终止反应，然后置于平板读数器上读取荧光数据。

4.从Synergy程序上复制RLU值，通过RLU值计算抑制率(％)，Inh(％)＝(Max-Com)/(Max-Min)×100，其中Max为DMSO对照组的RLU值，Min为无酶活对照组的 RLU值，Com为化合物处理组的RLU值。数据经GraphPad 5.0拟合IC₅₀曲线，IC₅₀结果见表2。

PI3Kδ、PI3Kβ和PI3Kγ激酶检测

1.将PI3Kδ，PI3Kβ和PI3Kγ激酶溶于1×激酶缓冲液，配制成4×激酶溶液，测试终浓度为：PI3Kδ2.4nM，PI3Kβ4.8nM和PI3Kγ7.6nM。然后转移2.5μl激酶缓冲液至测定板上除无酶活对照组的各孔中，无酶活对照组加入2.5μl不含激酶的1×激酶缓冲液。

2.将PIP2底物和ATP溶于1×激酶缓冲液，配制成2×底物溶液，终浓度为：PIP2 50μM， ATP 25μM。然后转移5μl 2×底物溶液至测定板的各孔中开始反应，室温下摇板，PI3Kδ孵育2h，PI3Kβ孵育1h，PI3Kγ孵育1h；

3.从384孔测试板转移5μl反应混合液至一个新的384孔板中，再加入5μl ADP-Glo试剂到新384孔板的各孔，摇板40min以终止反应。然后加入10μl Kinase DetectionReagent 到各孔，摇板1min，平衡60min后置于平板读数器上读取荧光数据。

表2

实验例2化合物体外细胞亚型特异性筛选评价

本实验例基于细胞水平测定本发明的化合物对PI3K不同亚型活性的抑制作用，其通过使用PerkinElmer公司的AlphaLISA技术检测不同细胞株的AKT的磷酸化水平来反应，其中 PI3Kα活性通过IGF-1刺激C2C12细胞后AKT的磷酸化水平来反应，PI3Kβ活性通过LPA刺激PC-3细胞后AKT的磷酸化水平来反应，PI3Kγ活性通过C5a刺激RAW264.7细胞后 AKT的磷酸化水平来反应，PI3Kδ活性通过anti-IgM刺激Raji细胞后AKT的磷酸化水平来反应。

1.实验材料

细胞：淋巴瘤细胞株Raji、PC-3、Raw264.7、C2C12购于美国典型培养物保藏中心(ATCC)。

试剂：RPMI-1640，购自于美国Invitrogen公司，Cat.No.A10491-01；DMEM，购自于美国GIBCO公司，Cat.No.11995-063；Penicillin-Streptomycin，购自于美国GIBCO公司，Cat.No.15140-122；Fetal Bovine Serum，购自于美国GIBCO公司，Cat.No.10099-141；HBSS，购自于美国Invitrogen公司，Cat.No.14065-056；DPBS，购自于美国GIBCO公司，Cat.No.14190-144；TrypLE^TM Express，购自于美国GIBCO公司，Cat.No.12604-013； DMSO，购自于美国Sigma公司，Cat.No.D8418-1L；Goat Anti-Human IgM，购自于美国 JacksonImmuno Research公司，Cat.No.109-006-129；IGF1Recombinant Human Protein，购自于美国Invitrogen公司，Cat.No.PHG0078；18:1Lyso PA1-oleoyl-2-hydroxy-sn-glycero-3-phosphate，购自于美国Sigma公司，Cat.No.L7260；Human Recombinant Human C5aProtein，购自于美国Biotang公司，Cat.No.RPR9899；AlphaLISA SureFire Ultra p-Akt1/2/3(Thr 308) assay kit，购自于美国Perkinelmer公司，Cat.No.ALSU-PAKT-A10K；AlphaLISA SureFire Ultra p-Akt 1/2/3(Ser 473)assay kit，购自于美国Perkinelmer公司，Cat.No.ALSU-PAKT- B10K；Centrifuge，购自于德国Eppendorf公司，Cat.No.5810R；Multidrop，购自于美国 Thermo Fisher公司，Cat.No.836。

2.实验方法

2.1细胞培养

细胞在下列条件下培养：Raji细胞和PC-3细胞在37℃，5％CO₂条件下使用含10％(v/v)FBS、100U/ml青霉素和100μg/ml链霉素的RPMI-1640培养液培养。RAW264.7和 C2C12细胞在37℃，5％CO₂条件下使用含10％(v/v)FBS、100U/ml青霉素和100μg/ml 链霉素的DMEM培养液培养。

2.2刺激因子试验浓度的优化

贴壁细胞(PC-3、RAW264.7、C2C12)：PC-3细胞用无FBS的基础培养液替换生长培养液，血清饥饿培养过夜；RAW264.7细胞用新鲜培养液替换生长培养液，过夜培养； C2C12细胞用新鲜培养液替换生长培养液，过夜培养。然后将细胞接种于384孔细胞培养板， 30,000cell/孔/4μl，接种后在37℃平衡2h。每孔加入2μl 1.2％DMSO(或4x化合物溶液)， 37℃平衡30min。然后再加入2μl 4x刺激因子溶液，起始浓度：PC-3细胞使用80μg/ml LPA；RAW264.7细胞使用400ng/ml C5a；C2C12细胞使用5000ng/ml IGF-1。将刺激因子依次两倍稀释为10个浓度，DMSO终浓度为0.3％。刺激时间：LPA加入PC-3细胞孵育20 min，C5a加入RAW264.7细胞孵育3min，C2C12细胞加入IGF-1孵育20min。然后加入 2μl 1x裂解缓冲液，将板密封后在室温下摇床孵育10min。细胞裂解后加入5μl试剂盒提供的受体混合物，再加入5μl试剂盒提供的配体混合物，密封细胞板后在摇板器振荡1-2分钟，再在室温下孵育2h。最后使用Envision仪器读数。

悬浮细胞(Raji)：将Raji细胞接种于284孔细胞培养板，60,000cell/孔/4μl，接种后在 37℃平衡2h。每孔加入2μl 1.2％DMSO(或4x化合物溶液)，37℃平衡30min。然后再加入2μl 4x刺激因子溶液，起始浓度：Raji细胞使用400μg/ml Anti-IgM，将Anti-IgM依次两倍稀释为10个浓度，DMSO终浓度为0.3％。刺激时间：Anti-IgM加入Raji细胞孵育20min，然后加入2μl 5x裂解缓冲液，将板密封后在室温下摇床孵育10min。细胞裂解后加入5μl试剂盒提供的受体混合物，再加入5μl试剂盒提供的配体混合物，密封细胞板后在摇板器振荡1-2分钟，再在室温下孵育2h。最后使用Envision仪器读数。

2.3刺激因子刺激时间的优化

贴壁细胞(PC-3、RAW264.7、C2C12)：参照上述贴壁细胞的试验方法(除刺激因子的刺激时间)进行刺激因子处理时间的优化。对于PC-3细胞，LPA的刺激时间为 0,10,20,40,60min；对于RAW264.7细胞，C5a刺激时间为0,3,5,10,20min；对于C2C12细胞， IGF-1的刺激时间为0,10,20,40,60min。LPA终浓度为15μg/ml，C5a终浓度为80ng/ml， IGF-1终浓度为1200ng/ml。

悬浮细胞(Raji)：参照上述悬浮细胞的试验方法(除刺激因子的刺激时间)进行刺激因子处理时间的优化。对于Raji细胞，Anti-IgM刺激时间为0、10、20、40、60min，终浓度为3μg/ml。

根据上述试验的试验结果，最终选择刺激因子的刺激条件分别为：LPA 15μg/ml，对 PC-3细胞刺激20min；C5a 80ng/ml，对RAW264.7细胞刺激5min；IGF-1 1200ng/ml，对C2C12细胞刺激20min；Anti-IgM 3μg/ml，对Raji细胞刺激10min。

2.4化合物测定

贴壁细胞(PC-3、RAW264.7、C2C12)：测试化合物的终浓度为：30000nM，10000 nM，3333nM，1111nM，370nM，123nM，41nM，14nM，4.6nM，1.5nM，0nM，各浓度做三复孔。

悬浮细胞(Raji)：测试化合物的终浓度为：10000nM，3333nM，1111nM，370nM，123nM，41nM，14nM，4.6nM，1.5nM，0nM，各浓度做三复孔。

2.5数据分析

使用Envision仪器读取Alpha信号，然后进行数据计算并拟合出一条剂量-反应曲线。 Y＝Bottom+(Top-Bottom)/(1+10^((LogIC₅₀-X)*Hill Slope))，其中X为化合物浓度的log值， Y为Alpha信号，top为读数最高点，bottom为读数最低点，hillslope为斜率。IC₅₀结果见表 3。

表3

从以上实验结果可以看出，相比于消旋体及其R异构体，本发明的S异构体((S)-4-氨基 -5-氰基-6-((1-(8-氯-4-氧代-2-苯基-1,4-二氢喹啉-3-基)乙基)氨基)嘧啶)在激酶水平和细胞水平均对PI3Kδ具有好的抑制活性，同时对PI3Kα、PI3Kβ和PI3Kγ具有低的抑制作用，选择性高，非常有希望成为疗效更高、副作用更小的肿瘤治疗剂、组织增生类疾病治疗剂或者炎性疾病治疗剂。

尽管以上已经对本发明作了详细描述，但是本领域技术人员理解，在不偏离本发明的精神和范围的前提下可以对本发明进行各种修改和改变。本发明的权利范围并不限于上文所作的详细描述，而应归属于权利要求书。

Claims

1.式I或式II所示的光学异构体或其药学上可接受的盐：

2.根据权利要求1所述的光学异构体或其药学上可接受的盐，其中所述式I或式II的光学异构体纯度为至少60％。

3.根据权利要求1所述的光学异构体或其药学上可接受的盐，其中所述式I或式II的光学异构体纯度为至少90％。

4.根据权利要求1所述的光学异构体或其药学上可接受的盐，其中所述式I或式II的光学异构体纯度为至少99％。

5.一种如权利要求1-4之任一项所述的光学异构体或其药学上可接受的盐的制备方法，其特征在于，式I或式II的光学异构体通过对式11的异构体混合物进行手性柱分离得到：

6.一种式11所示的化合物或其药学上可接受的盐，

其中所述式11的化合物或其药学上可接受的盐含有大于60％的如权利要求1所述的式I的光学异构体或其药学上可接受的盐。

7.根据权利要求6所述的式11的化合物或其药学上可接受的盐，其含有大于90％的如权利要求1所述的式I的光学异构体或其药学上可接受的盐。

8.根据权利要求6所述的式11的化合物或其药学上可接受的盐，其含有大于99％的如权利要求1所述的式I的光学异构体或其药学上可接受的盐。

9.一种药物组合物，其包含权利要求1-4之任一项所述的光学异构体或其药学上可接受的盐或者权利要求6-8之任一项所述的式11的化合物或其药学上可接受的盐；和药学上可接受的载体。

10.根据权利要求9所述的药物组合物，其还包含选自酪氨酸蛋白酶抑制剂、EGFR抑制剂、VEGFR抑制剂、Bcr-Abl抑制剂、c-kit抑制剂、c-Met抑制剂、Raf抑制剂、MEK抑制剂、组蛋白去乙酰酶抑制剂、VEGF抗体、EGF抗体、HIV蛋白激酶抑制剂和HMG-CoA还原酶抑制剂的一种或多种。

11.根据权利要求1-4之任一项所述的光学异构体或其药学上可接受的盐、权利要求6-8之任一项所述的式11的化合物或其药学上可接受的盐或权利要求9或10所述的药物组合物用于制备预防和/或治疗肿瘤、组织增生或炎性疾病的药物的用途。

12.根据权利要求11所述的用途，其中所述肿瘤、组织增生或炎性疾病是PI3K抑制剂有关的肿瘤、组织增生或炎性疾病。