CN107771740A - 一种焦虑性抑郁症动物模型的获得方法及其应用 - Google Patents
一种焦虑性抑郁症动物模型的获得方法及其应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明提供了一种焦虑性抑郁症动物模型的获得方法及其应用，具体地，提供一种非诊断性和非治疗性地获得焦虑性抑郁症动物模型的方法，用该方法获得的焦虑性抑郁症动物模型不仅表型出抑郁性行为，还可表现出焦虑性行为，用该模型可有效的评价焦虑性抑郁症的治疗效果，并且还可用于筛选治疗焦虑性抑郁症的治疗剂。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体地，涉及一种焦虑性抑郁症动物模型的获得方法及其应用。
背景技术
抑郁症是一种常见的心境障碍，严重者可出现自杀念头和行为，人群中有16％的人会在其一生的某个时期受其影响。抑郁障碍是具有高患病率、高复发率、高致残率以及高自杀率等特点的一类严重的精神障碍性疾病。抑郁症在严重影响患者身心健康的同时也带来不小的经济负担。从临床诊断学、病理机制以及治疗结局上综合分析，抑郁障碍都是一类极为复杂的精神疾病。
抑郁症治疗的难度大，一个重要原因是抑郁障碍的复杂性。由于抑郁障碍是一类异质性精神疾病，作为单一疾病实体难以保证其在生物学上的同质性，为此研究者试图根据诸多的临床症状来区分亚型，通过“精准对焦”解析抑郁障碍的复杂性，提高抑郁治疗的精确性和治愈率。由于抑郁症临床症状表现不一，个体差异明显，因此对其亚型的分析非常重要。从较早期的隐匿性抑郁症、老年抑郁症、产后抑郁症、激越性抑郁症及不典型抑郁症等，到近年来焦虑性抑郁症(anxious depression)的临床诊断和分型标准，都受到很多关注。焦虑性抑郁症由于共患焦虑特征(焦虑症状或综合征,即焦虑障碍共病)成为导致抑郁障碍临床诊断症状的复杂化和治疗结局不理想最重要的因素之一。有报道显示：约70％的抑郁症有不同程度的焦虑症状，逾57％的患者至少共病一种焦虑障碍，在精神疾病的共患病中居首。因此抑郁障碍共患焦虑大大增加了抑郁障碍的诊断难度，也是导致治疗阻抗最常见的因素之一。
焦虑性抑郁症患者比普通抑郁症的病情更严重，自杀观念发生率更高，更易于患广泛性焦虑、惊恐障碍、强迫障碍、创伤后应激障碍等抑郁焦虑共病。从流行病学上看，焦虑性抑郁症危害更大，国内针对难治性抑郁群体的研究发现：70％的抑郁症患者是焦虑性抑郁症，与非焦虑性抑郁症相比，抑郁程度更严重，自杀意念和强迫症状是该型抑郁障碍的危险因素。从治疗结局的影响上 看，焦虑性抑郁症药物治疗的有效率和治愈率均显著低于非焦虑抑郁症，且药物起效更慢，不良反应发生率和严重程度均较高。可见，在抑郁治疗总体结局尚不理想的大背景下，焦虑性抑郁症加重了抑郁障碍的病情，加大了预后不良影响，若采用惯常的同质性的治疗方案，不仅不利于患者治愈，且易使病人耽误治疗而发展成为难治性抑郁症。因此，亟需发展更“积极”且基于不同亚型评估的策略，“精准对焦”抑郁症，发现药物的个性化特征，寻求个性化治疗方案，以期改善治疗结局，这将是今后个性化抗抑郁新药研发的重要方向。
目前抗抑郁药的药效评价方法，尚缺乏针对抑郁症疾病分型的系统药效评价方法，也缺乏针对临床症状的动物模型。目前常用的药效评价方法仅反映了应激、绝望等抑郁特征，同样常用的抗焦虑药效评价方法也没有反映动物的抑郁特征。
因此，本领域迫切需要开发一种能够根据临床上抑郁症的分型，重点针对焦虑性抑郁症的核心症状，能够很好的进行抗焦虑性抑郁症的药效评价的动物模型。
发明内容
本发明的目的在于提供一种能够根据临床上抑郁症的分型，重点针对焦虑性抑郁症的核心症状，能够很好的进行抗焦虑性抑郁症的药效评价的动物模型。
本发明的第一方面提供了一种非诊断性和非治疗性地获得焦虑性抑郁症动物模型的方法，所述方法包括步骤：
(i)提供待分类的模型动物，其中所述的模型动物为啮齿动物；
(ii)对所述的模型动物进行动物行为学测试，并获得相应的测试指标，其中，所述的动物行为学测试包括A组行为测试和B组行为测试，
其中，所述的A组行为测试包括选自下组的一个或多个行为测试：
(A1)强迫游泳不动行为测试；
(A2)悬尾不动行为测试；
(A3)蔗糖水消耗行为测试；
所述的B组行为测试包括选自下组的一个或多个行为测试：
(B1)明暗场穿梭行为测试；
(B2)新异进食行为测试；
(B3)高架十字迷宫行为测试；
并且，所述的测试指标分别为：
(A1a)强迫游泳不动行为测试的测试指标为：强迫游泳不动时间；
(A2a)悬尾不动行为测试的测试指标为；悬尾不动时间；
(A3a)蔗糖水消耗行为测试的测试指标为：蔗糖水消耗的体积量；
(B1a)明暗场穿梭行为测试的测试指标为：明暗场穿梭的次数和活动时间；
(B2a)新异进食行为测试的测试指标为：新异进食的时间；
(B3a)高架十字迷宫行为测试的测试指标为：高架十字迷宫活动的次数和时间；
(iii)基于所述动物行为学测试的测试指标，对所述模型动物进行评估，其中，如果所述模型动物的A组行为测试的测试指标显著高于正常对照，并且所述模型动物的B组行为测试的测试指标显著高于正常对照，则表示所述模型动物被分类为焦虑性抑郁症动物；
(iv)将上一步骤中分类为焦虑性抑郁症动物标记为焦虑性抑郁症动物模型，从而获得所述的焦虑性抑郁症动物模型。
在另一优选例中，所述强迫游泳不动时间为动物在强迫游泳过程中，停止挣扎，静止不动的时间。
在另一优选例中，所述悬尾不动时间指小鼠悬尾后，停止挣扎静止不动的时间。
在另一优选例中，所述蔗糖水消耗的体积量指动物每日或者每周饮用蔗糖水的体积，与饮用纯净水的体积做比值对照。
在另一优选例中，所述明暗场穿梭的次数和活动时间指动物在明暗场中来回穿梭的次数和时间。
在另一优选例中，所述新异进食的时间指在旷场箱中放入动物不熟悉新异食物，动物靠近闻、嗅探索活动，以及从放入动物到开始进食的时间。
在另一优选例中，所述高架十字迷宫活动的次数和时间指动物放入高架十字迷宫后，从闭壁端进入开壁端的次数以及在开壁端停留的时间。
在另一优选例中，所述的正常对照是同种的啮齿动物。
在另一优选例中，所述的正常对照是野生型的啮齿动物。
在另一优选例中，所述显著高于指模型组(测试组)与正常对照组经单因素反差分析，组间差别显著(one way ANOVA，p<0.05)，其中，模型组(测试组)的测试指标显著高于对照组的测试指标。
在另一优选例中，所述“显著高于”指测试的测试指标/正常对照的测试指标之比值≥2，较佳地，≥3，更佳地，≥4。
在另一优选例中，所述测试指标包括选自下组的2个或2个以上的指标：
(A1a)强迫游泳不动行为测试的测试指标为：强迫游泳不动时间；
(A2a)悬尾不动行为测试的测试指标为；悬尾不动时间；
(A3a)蔗糖水消耗行为测试的测试指标为：蔗糖水消耗的体积量；
(B1a)明暗场穿梭行为测试的测试指标为：明暗场穿梭的次数和活动时间；
(B2a)新异进食行为测试的测试指标为：新异进食的时间；
(B3a)高架十字迷宫行为测试的测试指标为：高架十字迷宫活动的次数和时间；
在另一优选例中，所述测试指标包括抑郁性行为指标和焦虑性行为指标。
在另一优选例中，所述抑郁性行为指标包括选自下组的一个或多个指标：
(A1a)强迫游泳不动行为测试的测试指标为：强迫游泳不动时间；
(A2a)悬尾不动行为测试的测试指标为；悬尾不动时间；
(A3a)蔗糖水消耗行为测试的测试指标为：蔗糖水消耗的体积量。
在另一优选例中，所述焦虑性行为指标包括选自下组的一个或多个指标：
(B1a)明暗场穿梭行为测试的测试指标为：明暗场穿梭的次数和活动时间；
(B2a)新异进食行为测试的测试指标为：新异进食的时间；
(B3a)高架十字迷宫行为测试的测试指标为：高架十字迷宫活动的次数 和时间。
在另一优选例中，所述模型动物为小鼠或大鼠。
本发明第二方面提供了一种用本发明第一方面所述方法获得的焦虑性抑郁症动物模型的用途，该模型被用于筛选或鉴定可减轻或治疗焦虑性抑郁症的物质(治疗剂)。
在另一优选例中，所述焦虑性抑郁症指抑郁症状共患至少共病一种焦虑障碍，包括激越性抑郁症。
本发明第三方面提供了一种非治疗性地筛选治疗或缓解焦虑性抑郁症的潜在治疗剂的方法，包括步骤：
(a)在测试组中，在测试化合物的存在下，将测试化合物施用于本发明第一方面所述方法获得的焦虑性抑郁症动物模型，对测试组的所述动物模型的行为进行动物行为学测试；并且在不施用所述测试化合物且其他条件相同的对照组中，对对照组的所述动物模型的行为进行动物行为学测试；
(b)对测试组和对照组动物模型的行为进行比较，其中，与对照组相比，如果施用了测试化合物的动物模型中表征焦虑性抑郁的行为得到改善，则表明该测试化合物可作为焦虑性抑郁症的潜在治疗剂。
在另一优选例中，所述的动物行为学测试包括A组行为测试和B组行为测试，
其中，所述的A组行为测试包括选自下组的一个或多个行为测试：
(A1)强迫游泳不动行为测试；
(A2)悬尾不动行为测试；
(A3)蔗糖水消耗行为测试；
所述的B组行为测试包括选自下组的一个或多个行为测试：
(B1)明暗场穿梭行为测试；
(B2)新异进食行为测试；
(B3)高架十字迷宫行为测试；
并且，所述的测试指标分别为：
(A1a)强迫游泳不动行为测试的测试指标为：强迫游泳不动时间；
(A2a)悬尾不动行为测试的测试指标为；悬尾不动时间；
(A3a)蔗糖水消耗行为测试的测试指标为：蔗糖水消耗的体积量；
(B1a)明暗场穿梭行为测试的测试指标为：明暗场穿梭的次数和活动时 间；
(B2a)新异进食行为测试的测试指标为：新异进食的时间；
(B3a)高架十字迷宫行为测试的测试指标为：高架十字迷宫活动的次数和时间。
在另一优选例中，所述方法包括步骤(c)，将步骤(b)筛选或鉴定的潜在治疗剂施用于本发明第一方面所述方法获得的焦虑性抑郁症动物模型，从而测定其对所述动物模型的行为的影响。
在另一优选例中，所述改善是在统计学上具有显著性意义的改善。
应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。
附图说明
图1显示了1-SPD有抗抑郁样药效和抗焦虑样的药效，正常C57小鼠用1-SPD(5mg/kg或10mg/kg,i.p.)、氟西汀(10mg/kg，i.p.)或溶剂对照(0.1M硫酸水溶液，PH 5.0-5.5,i.p.)处理10天，在最后一次给药24小时后进行行为学实验。其中，(A)悬尾实验，统计小鼠在试验过程中的不动时间。(B)高架实验，统计小鼠在实验过程中的开臂运动路程的百分比。*p<0.05，表示与溶剂对照比。。
图2显示了1-SPD可以逆转CMS抑郁症动物模型的抑郁样和焦虑样行为，其中，(A)大鼠用CMS刺激处理28天，之后用1-SPD(5mg/kg或10mg/kg,i.p.)、氟西汀(10mg/kg,i.p.)和空白对照(溶剂对照)处理3周，每天给药一次，给药期间仍然给予CMS刺激，同时每周进行一次行为学评估。在行为学实验结束后，取大鼠mPFC，进行后续western blot实验。(B)矿场试验(第0周)，分析实验过程中大鼠的运动速度。(C)强迫游泳实验(第0、1、2、3周)，分析实验过程中大鼠的不动时间。(D)高架迷宫实验(第0、1、2、3周)，分析实验过程中大鼠在开臂运动路程百分比。*p<0.05,**p<0.01，表示与空白对照(溶剂对照)比较；#p<0.05,##p<0.01,表示与CMS抑郁组比较。
具体实施方式
本发明人经过广泛而深入的研究，经过大量的筛选实验，意外的分选出一种焦虑性抑郁症动物模型，该模型不仅表型出抑郁性行为，还可表现出焦虑性行为，用该模型可有效的评价焦虑性抑郁症的治疗效果，并且还可用于筛选治疗焦虑性抑郁症的治疗剂。在此基础上，完成了本发明。
焦虑性抑郁症
焦虑性抑郁症也称为焦虑和抑郁共病，是临床上抑郁症中的一个重要分型。约70％的抑郁症有不同程度的焦虑症状，逾57％的患者至少共病一种焦虑障碍，在精神疾病的共患病中居首。焦虑性抑郁症患者比普通抑郁症的病情更严重，自杀观念发生率更高，更易于患广泛性焦虑、惊恐障碍、强迫障碍、创伤后应激障碍等抑郁焦虑共病。
在本发明中，所述焦虑性抑郁症指抑郁症状共患至少共病一种焦虑障碍，包括激越性抑郁症。
动物模型
在本发明中，提供了一种有效的焦虑性抑郁症动物模型。
在本发明中，所述焦虑性抑郁症动物模型用如下方法获得：
(i)提供待分类的模型动物，其中所述的模型动物为啮齿动物；
(ii)对所述的模型动物进行动物行为学测试，并获得相应的测试指标，其中，所述的动物行为学测试包括A组行为测试和B组行为测试，
其中，所述的A组行为测试包括选自下组的一个或多个行为测试：
(A1)强迫游泳不动行为测试；
(A2)悬尾不动行为测试；
(A3)蔗糖水消耗行为测试；
(A4)高架十字迷宫行为测试；
所述的B组行为测试包括选自下组的一个或多个行为测试：
(B1)明暗场穿梭行为测试；
(B2)新异进食行为测试；
(B3)高架十字迷宫行为测试；
并且，所述的测试指标分别为：
(A1a)强迫游泳不动行为测试的测试指标为：强迫游泳不动时间；
(A2a)悬尾不动行为测试的测试指标为；悬尾不动时间；
(A3a)蔗糖水消耗行为测试的测试指标为：蔗糖水消耗的体积量；
(B1a)明暗场穿梭行为测试的测试指标为：明暗场穿梭的次数和活动时间；
(B2a)新异进食行为测试的测试指标为：新异进食的时间；
(B3a)高架十字迷宫行为测试的测试指标为：高架十字迷宫活动的次数和时间；
(iii)基于所述动物行为学测试的测试指标，对所述模型动物进行评估，其中，如果所述模型动物的A组行为测试的测试指标显著高于正常对照，并且所述模型动物的B组行为测试的测试指标显著高于正常对照，则表示所述模型动物被分类为焦虑性抑郁症动物；和
(iv)将上一步骤中分类为焦虑性抑郁症动物标记为焦虑性抑郁症动物模型，从而获得所述的焦虑性抑郁症动物模型。
候选药物或治疗剂
在本发明中，还提供了一种利用本发明的动物模型，筛选治疗焦虑性抑郁症的候选药物或治疗剂的方法。
在本发明中，候选药物或治疗剂是指已知具有某种药理学活性或正在被检测的可能具有某种药理学活性的物质，包括但不限于核酸、蛋白、糖类、化学合成的小分子或大分子化合物、细胞等。候选药物或治疗剂的给药方式可以是口服、静脉注射、腹腔注射、皮下注射、椎管给药或直接脑内注射。
本发明的主要优点包括：
(1)本发明可以较好地模拟临床上原发性的焦虑性抑郁症。
(2)本发明针对焦虑性抑郁症的核心症状，建立了一组新的药效评价方法，能够很好的进行抗焦虑性抑郁症的药效评价。
(3)本发明的焦虑性抑郁症动物模型可以应用于多种精神疾病的新药研发和药效评价，包括抗抑郁、抗焦虑、抗精神分裂症等多种情绪和认知功能障碍疾病。
(4)本发明的焦虑性抑郁症动物模型既表现出抑郁性的行为，又表现出焦虑 性的行为，因此，可广泛用于焦虑性抑郁症的药物筛选和测试。
(5)本发明的焦虑性抑郁症动物模型可以综合评价实验动物的抑郁、焦虑和认知能力指标，可以从多个角度评价待测药物的抗焦虑性抑郁症的药效，也可以用于抗抑郁、抗焦虑、抗精神分裂症等药效评价。
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如Sambrook等人，分子克隆：实验室手册(New York:Cold Spring HarborLaboratory Press,1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数是重量百分比和重量份数。
如无特别说明，实施例所用的材料均为市售产品。
通用方法
1.急性应激模型
原理：动物在恶劣环境下会出现逃逸行为，当不能逃逸时便出现行为绝望(behavioral despair)。建立行为绝望动物模型主要是指大鼠和小鼠强迫游泳模型以及小鼠悬尾模型，这一类动物模型具有简单、快速、敏感等特点。评价指标包括悬尾不动时间、强迫游泳不动时间、旷场自发活动时间、高台狮子迷宫和明暗场穿梭活动时间等，常用于抗抑郁药的初筛和早期评价。
2.慢性温和不可预知应激模型(chronic unpredictable stress)
原理：由于慢性不可预知性应激缺点较多，如过强的应激刺激往往导致动物的死亡等，Willner等人对这一方法进行了改进，降低了应激强度，使之更现实地模拟人们日常生活中遭遇的“困难”，称之为慢性不可预知性温和应激实验。动物在经历一系列的温和刺激之后会出现行为学、生化以及生理学的变化，这些改变可以通过动物对蔗糖水的消耗量进行量化判断。遭受慢性应激刺激的大鼠会出现蔗糖水饮用量下降的现象，该症状反映了抑郁症的核心症状——快感缺失(anhedonia)。该模型可以模拟临床抑郁症的发生，因而被广泛的使用。大多数抗抑郁剂在5周之内逆转慢性应激所导致的蔗糖饮水量的下降，如果药物治疗5周仍然无效，很可能是由于该药物抗抑郁能力较弱。
方法：①自发活动测定：选用雄性大鼠或者小鼠，事先随机分为非应激对照组、应激对照组和用药组。给予药物或溶剂对照后适当时间给与应激刺激。 大鼠在21天中受的应激刺激包括：三次1h电击(平均1mA，持续1-10秒，平均每分钟一次电击)；两次40h禁食；三次4℃游泳5分钟，两次40h禁水，两次40℃环境中5分钟，两次高速水平振荡30分钟，两次昼夜循环颠倒。每2—3d给与一次应激，以半随机的方式给予。应激同时伴随每日一次给药。末次应激后48—72小时，将大鼠置于95dB的白噪音中1h，然后立即将大鼠放入1.22m2×45cm高的敞箱中(4×4方格)中测试6分钟，记录大鼠前3分钟内方格间的穿行次数以及整个6分钟的排粪次数。慢性不可预知性应激实验可以导致敞箱实验大鼠前3分钟内方格间的穿行次数减少以及整个6分钟的排粪次数增多。
②蔗糖饮水基线(baseline sucrose tests)测定：实验前夜禁水禁食，实验一般开始于第二天早上，将大鼠的饮用水改为150ml 1％新鲜蔗糖溶液，1h后撤走水瓶，通过称饮水瓶的重量计算大鼠蔗糖饮水量。实验结束1小时之后，大鼠自由饮食。蔗糖饮水基线测定总共进行8-10次(每周两次)。
③穿梭箱实验方法：大鼠在14天中受的应激刺激包括：两次30分钟电击(平均1mA，持续1—10秒，平均每分钟一次电击)；一次24h禁食；两次4℃游泳5分钟，两次24h禁水，两次高速水平振荡1h，两次24h转移至另一屋中的新笼中；一次1分钟夹尾；一次24h孤养。每日随机给与一种刺激。每次应激前1h腹腔注射受试药物一次，共14天。第15天将大鼠放入穿梭箱的一端，使之先适应环境3分钟，然后进行30次回避实验：每次实验的前4秒均出现噪音信号，若此期间无回避反应发生，大鼠将受到0.8mA的电击一次；若此期间有逃避反应发生，则电击和噪音信号均消失。记录动物在整个实验过程中逃避失败的次数，即电击出现时动物未到达另一端箱子的次数。
④药物处理：当应激组动物的蔗糖饮水量显著低于末次基线水平时，将其再次分组：应激对照组和给药组，每组不少于8只，继续进行应激的同时进行长期给药(4-5周)。慢性给药过程中每周进行蔗糖饮水检测，为避免药物的非特异影响因素(如液体摄入量)，末次给药24h后进行蔗糖饮水实验，比较各组动物饮水量的差异。
药效评价指标包括强迫游泳不动时间、悬尾不动时间、蔗糖水消耗、高架十字迷宫、明暗场穿梭、新异进食时间等。
实施例1左旋千金藤啶碱(l-SPD)抗焦虑性抑郁症的药效评价
为全面评估l-SPD是否有抗抑郁性抑郁症的药效作用，分别进行了急性应激实验和慢性温和不可预知应激动物模型实验。
1.1急性应激实验
正常C57小鼠(购自中科院上海实验动物中心)随机分成四组(每组10只)，腹腔给予溶剂对照(0.1M硫酸水溶液，购自Sigma公司)，pH 5.0-5.5,i.p.)，1-SPD(由中科院上海药物所提供，5mg/kg和10mg/kg,i.p.)和阳性对照药物(氟西汀，购自Sigma公司)，10mg/kg,i.p.)，连续给药10天后进行行为学评估。
在强迫游泳实验中，10mg/kg组小鼠不动时间显著减少。同时阳性对照氟西汀组与空白相比较没有显著减少，表明l-SPD有抗抑郁样作用(图1A,one-way ANOVA,F(3,34)＝2.907,p＝0.049)。为进一步评价抗焦虑性抑郁样的药效，对小鼠进行了高架迷宫实验。实验结果显示，10mg/kg组小鼠在开臂路程百分比显著增加(图1B,one-way ANOVA,F(3,24)＝3.282,p＝0.042)。结果表明，l-SPD也具有抗焦虑样作用。
1.2慢性温和不可预知应激动物模型(CMS)的建立
如图2A所示，慢性温和不可预知应激动物模型(CMS)建立的实验流程如下：大鼠给予CMS(购自上海斯莱克实验动物公司)28天刺激，之后进行了三种行为学评估：在旷场实验中CMS刺激没有改变大鼠的运动速度，表明CMS对大鼠的运动能力没有影响(图2B,one-wayANOVA,F(4,34)＝0.018,p＝0.999for total distance moved；F(4,34)＝0.047,p＝0.996for velocity)。在强迫游泳实验中，CMS刺激使得大鼠的不动时间显著减少。在高架实验中，CMS使得大鼠在开臂的运动路程占总路程的百分比显著减少。结果提示，CMS刺激可以得到比较理想的抑郁症动物模型。
确定成功建立了CMS抑郁症动物模型后，再刺激28天，对CMS抑郁症动物进行药物干预。强迫游泳实验的结果显示，在给药第一周结束后l-SPD 5mg/kg和10mg/kg组大鼠的不动时间就显著少于CMS溶剂对照(0.1M硫酸水溶液，pH5.0-5.5,i.p.，购自Sigma公司)，恢复至正常水平。而阳性对照组(氟西汀，购自Sigma公司)只有在第三周给药结束后才恢复至正常水平(图2C,arepeated ANOVA measurement by drug treatment,F(4,29)＝24.002,p<0.001)。提示l-SPD可以逆转CMS诱导的绝望情绪。高架迷宫的实验结果显示，在给药一周结束后只有l-SPD 10mg/kg组大鼠在开臂运动路程百分比恢复至正常值，即便到了第三周给药结束l-SPD 5mg/kg组大鼠在开臂运动路程百分比也没有恢复至正常值。氟西汀在第三周给药结束后大鼠在开臂运动路程百分比只有回升趋势(图2D,a repeated ANOVAmeasurement by drug treatment,F(4,30)＝8.045,p<0.001)。提示l-SPD可以逆转CMS导致的焦虑样情绪。
上述结果表明，l-SPD对CMS刺激诱导的抑郁样表型有治疗作用，而且起效时间要快于阳性对照氟西汀,同时l-SPD具有抗焦虑和抗焦虑性抑郁症的药效，而阳性对照药则无此作用。
在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
Claims (10)
1.一种非诊断性和非治疗性地获得焦虑性抑郁症动物模型的方法，其特征在于，所述方法包括步骤：
(i)提供待分类的模型动物，其中所述的模型动物为啮齿动物；
(ii)对所述的模型动物进行动物行为学测试，并获得相应的测试指标，其中，所述的动物行为学测试包括A组行为测试和B组行为测试，
其中，所述的A组行为测试包括选自下组的一个或多个行为测试：
(A1)强迫游泳不动行为测试；
(A2)悬尾不动行为测试；
(A3)蔗糖水消耗行为测试；
所述的B组行为测试包括选自下组的一个或多个行为测试：
(B1)明暗场穿梭行为测试；
(B2)新异进食行为测试；
(B3)高架十字迷宫行为测试；
并且，所述的测试指标分别为：
(A1a)强迫游泳不动行为测试的测试指标为：强迫游泳不动时间；
(A2a)悬尾不动行为测试的测试指标为；悬尾不动时间；
(A3a)蔗糖水消耗行为测试的测试指标为：蔗糖水消耗的体积量；
(B1a)明暗场穿梭行为测试的测试指标为：明暗场穿梭的次数和活动时间；
(B2a)新异进食行为测试的测试指标为：新异进食的时间；
(B3a)高架十字迷宫行为测试的测试指标为：高架十字迷宫活动的次数和时间；
(iii)基于所述动物行为学测试的测试指标，对所述模型动物进行评估，其中，如果所述模型动物的A组行为测试的测试指标显著高于正常对照，并且所述模型动物的B组行为测试的测试指标显著高于正常对照，则表示所述模型动物被分类为焦虑性抑郁症动物；和
(iv)将上一步骤中分类为焦虑性抑郁症动物标记为焦虑性抑郁症动物模型，从而获得所述的焦虑性抑郁症动物模型。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述强迫游泳不动时间为动物在强迫游泳过程中，停止挣扎，静止不动的时间。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述悬尾不动时间指小鼠悬尾后，停止挣扎静止不动的时间。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述蔗糖水消耗的体积量指动物每日或者每周饮用蔗糖水的体积，与饮用纯净水的体积做比值对照。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述明暗场穿梭的次数和活动时间指动物在明暗场中来回穿梭的次数和时间。
6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述新异进食的时间指在旷场箱中放入动物不熟悉新异食物，动物靠近闻、嗅探索活动，以及从放入动物到开始进食的时间。
7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述高架十字迷宫活动的次数和时间指动物放入高架十字迷宫后，从闭壁端进入开壁端的次数以及在开壁端停留的时间。
8.一种用权利要求1所述方法获得的焦虑性抑郁症动物模型的用途，其特征在于，该模型被用于筛选或鉴定可减轻或治疗焦虑性抑郁症的物质(治疗剂)。
9.一种非治疗性地筛选治疗或缓解焦虑性抑郁症的潜在治疗剂的方法，其特征在于，包括步骤：
(a)在测试组中，在测试化合物的存在下，将测试化合物施用于权利要求1所述方法获得的焦虑性抑郁症动物模型，对测试组的所述动物模型的行为进行动物行为学测试；并且在不施用所述测试化合物且其他条件相同的对照组中，对对照组的所述动物模型的行为进行动物行为学测试；
(b)对测试组和对照组动物模型的行为进行比较，其中，与对照组相比，如果施用了测试化合物的动物模型中表征焦虑性抑郁的行为得到改善，则表明该测试化合物可作为焦虑性抑郁症的潜在治疗剂。
10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述方法包括步骤(c)，将步骤(b)筛选或鉴定的潜在治疗剂施用于权利要求1所述方法获得的焦虑性抑郁症动物模型，从而测定其对所述动物模型的行为的影响。
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