CN107714235A - 一种利用母牛超排卵母细胞生产体外胚胎的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种利用母牛超排卵母细胞生产体外胚胎的方法，依次进行药物诱导多卵泡发育工序、阴道超声取卵工序、体外受精和胚胎培养工序、胚胎移植工序和黄体支持工序以及精准的操作和严格的时间控制来进行母牛超排卵和生产体外胚胎，在阴道超声取卵工序和胚胎移植工序对母牛进行局部麻醉，使其配合进行取卵和以及受精卵着床，黄体支持工序很好的保证了母牛体内的受精卵安全的转变为牛犊，从而提高了母牛对牛犊的孕育效率，解决了目前人们根据自身的经验和感觉进行母牛超排卵母细胞生产体外胚胎，导致的外胚胎操作效率低下以及成功率不高的问题，以及提升了畜牧生产者的经济效益，具有很好的实用价值。
Description
技术领域
本发明涉及一种生产体外胚胎的方法，特别涉及一种利用母牛超排卵母细胞生产体外胚胎的方法。
背景技术
牛是对人类的生产和发展提供非常强大的助力的动物，最初人们驯服野牛进行饲养是为了食肉增加营养，后来人们发现牛可以耕地，因此成为农民的帮手，促进了经济的发展和社会的进步，到了现代人们又发现牛乳是一种物美价廉且供给稳定的奶制品来源。因此饲养肉牛和奶牛成为一个非常重要的产业。但是牛相对于其它的牲畜，其生育能力有限，由此制约了畜牧业的快速发展。由此人们采用超排卵技术来促进牛的排卵数量。研究表明初生母牛有99%的有腔卵泡因发生闭锁而退化，只有1%的有腔卵泡在排卵时排出。闭锁卵泡就是因为未获取足够数量的促性腺激素所致。为此，我们可以利用超过体内正常量的外源性激素，来拯救99%的将要闭锁的卵泡，使其成为优势卵泡，而发育成熟、排卵，即在家畜发情的一定时期，注射FSH类的激素制剂，使其大量的卵泡不闭锁退化而进行正常发育、成熟，在排卵前LH类激素和前列腺素来补充内源性激素的不足，以确保所有的卵泡均能成熟、破裂和排卵。
当母牛进行超排卵之后，所产生的卵子就要与精子结合完成受精和发育，而目前没有一种标准的母牛超排卵母细胞生产体外胚胎的方法，因此不同的操作人员通常根据自身的经验进行母牛的超排卵和体外胚胎方法，如此就导致母牛超排卵母细胞生产体外胚胎操作效率低下以及成功率不高的问题，因此人们下网有一种生产体外胚胎的指导方法来指导畜牧工作人员很好的进行母牛超排卵母细胞生产体外胚胎。
发明内容
本发明提出了一种利用母牛超排卵母细胞生产体外胚胎的方法，解决了目前人们根据自身的经验和感觉进行母牛超排卵母细胞生产体外胚胎，导致的母牛外胚胎操作效率低下以及成功率不高的问题，采用精准的操作和严格的时间控制来进行母牛超排卵和生产体外胚胎，从而提高了生产效率和经济效益。
为了解决上述技术问题，本发明提供了如下的技术方案：
本发明一种利用母牛超排卵母细胞生产体外胚胎的方法，包括药物诱导多卵泡发育工序、阴道超声取卵工序、体外受精和胚胎培养工序、胚胎移植工序和黄体支持工序，所述药物诱导多卵泡发育工序是对母牛做阴道超声扫描并确认卵巢状态，当合适时进行用药，用药一周后复查母牛阴道超声若发现卵泡激活即应做囊肿穿刺，用药二周即进行注射促性腺激素或促卵泡生成素刺激多卵泡发育，促排卵过程中用阴道超声及血液性激素测定监测卵泡发育，当卵泡发育成熟时注射绒毛膜促性腺激素（HCG），注射HCG后36小时左右经阴道超声取卵，一般注射HCG当日停用促性腺激素。
作为本发明分进一步操作，所述阴道超声取卵工序是在母牛阴道超声指导下将穿刺针经阴道穹隆刺入卵泡中抽吸卵泡液以及含有的所需卵子，取出的卵子经清洗后放培养箱内培养等待授精。
作为本发明分进一步操作，所述体外受精和胚胎培养工序是取卵后4-6小时将经处理的公牛精子与母牛卵子一起培养。
作为本发明分进一步操作，所述胚胎移植工序是将体外培养形成的胚胎装入细管中经母牛的阴道和宫颈管送入宫腔中进行着床的过程，一般在取卵后2-3天，少数在取卵后5-6天进行移植。
作为本发明分进一步操作，所述黄体支持工序是取卵后使用黄体酮或绒毛膜促性腺激素支持黄体，胚胎移植后14天做母牛妊娠实验，若怀孕继续黄体支持至妊娠三个月。直至母牛体内的受精卵分裂成牛犊。
作为本发明的优选技术方案，在牛角上设置一个标识牌记录母牛进行超排卵和人工受精的日期和进程。
本发明所达到的有益效果是：本发明方法简单、便于操作，解决了目前人们根据自身的经验和感觉进行母牛超排卵母细胞生产体外胚胎，导致的外胚胎操作效率低下以及成功率不高的问题，采用药物诱导多卵泡发育工序、阴道超声取卵工序、体外受精和胚胎培养工序、胚胎移植工序和黄体支持工序以及精准的操作和严格的时间控制来进行母牛超排卵和生产体外胚胎，同时保证了母牛体内的受精卵安全的转变为牛犊，从而提高了母牛对牛犊的孕育效率，以及提升了畜牧生产者的经济效益。
附图说明
附图用来提供对本发明的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本发明的实施例一起用于解释本发明，并不构成对本发明的限制。在附图中：
图1是本发明的工艺流程示意图；
图中：1、药物诱导多卵泡发育工序；2、阴道超声取卵工序；3、体外受精和胚胎培养工序；4、胚胎移植工序；5、黄体支持工序。
具体实施方式
以下结合附图对本发明的优选实施例进行说明，应当理解，此处所描述的优选实施例仅用于说明和解释本发明，并不用于限定本发明。
实施例1
如图1所示，本发明提供一种利用母牛超排卵母细胞生产体外胚胎的方法，包括药物诱导多卵泡发育工序1、阴道超声取卵工序2、体外受精和胚胎培养工序3、胚胎移植工序4和黄体支持工序5药物诱导多卵泡发育工序1是对母牛做阴道超声扫描并确认卵巢状态，当合适时进行用药，用药一周后复查母牛阴道超声若发现卵泡激活即应做囊肿穿刺，用药二周即进行注射促性腺激素或促卵泡生成素刺激多卵泡发育，促排卵过程中用阴道超声及血液性激素测定监测卵泡发育，当卵泡发育成熟时注射绒毛膜促性腺激素HCG，注射HCG后36小时左右经阴道超声取卵。一般注射HCG当日停用促性腺激素。
进一步，阴道超声取卵工序2是在母牛阴道超声指导下将穿刺针经阴道穹隆刺入卵泡中抽吸卵泡液以及含有的所需卵子，取出的卵子经清洗后放培养箱内培养等待授精，阴道超声取卵是一个简单的手术如果使用局部麻醉一般无疼痛或仅有轻微的酸胀感，一般需要对母牛进行局部麻醉或轻微麻醉，以便其配合。
进一步，体外受精和胚胎培养工序3是取卵后4-6小时将经处理的公牛精子与母牛卵子一起培养，精子将依靠自身的运动进入到卵细胞中两性的遗传物质结合形成受精卵，一般授精后12-18小时就可看到受精卵形成，进一步培养受精卵就会形成两细胞、四细胞、八细胞的胚胎。
进一步，胚胎移植工序4是将体外培养形成的胚胎装入细管中经母牛的阴道和宫颈管送入宫腔中进行着床的过程，一般在取卵后2-3天，少数在取卵后5-6天进行移植，此时需要对母牛进行局部麻醉或轻微麻醉，以便其配合。
进一步，黄体支持工序5是取卵后使用黄体酮或绒毛膜促性腺激素支持黄体，胚胎移植后14天做母牛妊娠实验，若怀孕继续黄体支持至妊娠三个月。直至母牛体内的受精卵分裂成牛犊。
作为本发明的优选技术方案，在牛角上设置一个标识牌记录母牛进行超排卵和人工受精的日期和进程，从而方便工作人员对母牛的人工受精和妊娠状态进行观察。
本发明方法简单、便于操作，采用药物诱导多卵泡发育工序1、阴道超声取卵工序2、体外受精和胚胎培养工序3、胚胎移植工序4和黄体支持工序5以及精准的操作和严格的时间控制来进行母牛超排卵和生产体外胚胎，同时保证了母牛体内的受精卵安全的转变为牛犊，从而提高了母牛对牛犊的孕育效率，解决了目前人们根据自身的经验和感觉进行母牛超排卵母细胞生产体外胚胎，导致的外胚胎操作效率低下以及成功率不高的问题，以及提升了畜牧生产者的经济效益，具有很好的使用价值。
最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (8)
1.一种利用母牛超排卵母细胞生产体外胚胎的方法，包括药物诱导多卵泡发育工序（1）、阴道超声取卵工序（2）、体外受精和胚胎培养工序（3）、胚胎移植工序（4）和黄体支持工序（5），其特征在于，所述药物诱导多卵泡发育工序（1）是对母牛做阴道超声扫描并确认卵巢状态，当合适时进行用药，用药一周后复查母牛阴道超声若发现卵泡激活即应做囊肿穿刺，用药二周即进行注射促性腺激素或促卵泡生成素刺激多卵泡发育，促排卵过程中用阴道超声及血液性激素测定监测卵泡发育，当卵泡发育成熟时注射绒毛膜促性腺激素（HCG），注射HCG后36小时左右经阴道超声取卵。
2.一般注射HCG当日停用促性腺激素。
3.根据权利要求1所述的一种利用母牛超排卵母细胞生产体外胚胎的方法，其特征在于，所述阴道超声取卵工序（2）是在母牛阴道超声指导下将穿刺针经阴道穹隆刺入卵泡中抽吸卵泡液以及含有的所需卵子，取出的卵子经清洗后放培养箱内培养等待授精。
4.根据权利要求1所述的一种利用母牛超排卵母细胞生产体外胚胎的方法，其特征在于，所述体外受精和胚胎培养工序（3）是取卵后4-6小时将经处理的公牛精子与母牛卵子一起培养。
5.根据权利要求1所述的一种利用母牛超排卵母细胞生产体外胚胎的方法，其特征在于，所述胚胎移植工序（4）是将体外培养形成的胚胎装入细管中经母牛的阴道和宫颈管送入宫腔中进行着床的过程，一般在取卵后2-3天，少数在取卵后5-6天进行移植。
6.根据权利要求1所述的一种利用母牛超排卵母细胞生产体外胚胎的方法，其特征在于，所述黄体支持工序（5）是取卵后使用黄体酮或绒毛膜促性腺激素支持黄体，胚胎移植后14天做母牛妊娠实验，若怀孕继续黄体支持至妊娠三个月。
7.直至母牛体内的受精卵分裂成牛犊。
8.根据权利要求1所述的一种利用母牛超排卵母细胞生产体外胚胎的方法，其特征在于，在牛角上设置一个标识牌记录母牛进行超排卵和人工受精的日期和进程。
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|---|---|---|---|---|
| CN110283780A (zh) * | 2019-07-18 | 2019-09-27 | 天津博裕力牧科技有限公司 | 牛活体超排采卵方法和所用的制剂 |
| CN113180878A (zh) * | 2021-04-23 | 2021-07-30 | 广西壮族自治区畜牧研究所 | 提高母牛双胎率的方法 |
| CN116218764A (zh) * | 2022-12-13 | 2023-06-06 | 呼伦贝尔市农牧科学研究所 | 一种牛胚胎生产制作方法 |
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| CN110283780B (zh) * | 2019-07-18 | 2022-06-07 | 天津力牧生物科技有限公司 | 牛活体超排采卵方法和所用的制剂 |
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