CN107629969A - 一种分离鉴别大丽轮枝菌的方法 - Google Patents

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张昕
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Abstract

本发明涉及一种分离鉴别大丽轮枝菌的方法，其特征在于将采集到的病样用纸袋保存，新鲜病样用火焰灼烧法，干燥病样用次氯酸钠消毒法分离病原菌，纯化获取单孢菌株后，‑70℃保存。刮取在铺有玻璃纸的PDA平板上的菌丝体，提取基因组DNA，用引物D‑1/D‑2和ND‑1/ND‑2 PCR检测菌株的致病类型。对检测不到条带的菌株，用通用引物ITS1/ITS4 PCR扩增其rDNA‑ITS区段，纯化测序后BLAST比对分析，从而鉴别是否为大丽轮枝菌。本发明避免对所有菌株都进行测序比对，大大缩短了病原菌鉴定的时间，对黄萎病抗病育种和综合防治具有重要价值。

Description

一种分离鉴别大丽轮枝菌的方法
技术领域：
本发明涉及一种分离鉴别大丽轮枝菌的方法。
背景技术：
大丽轮枝菌(Verticillium dahliae.Kleb.)是世界性的土传植物病原真菌，属于子囊菌亚门(Ascomycota)、子囊菌纲(Sordariomycetes)、轮枝菌属(Verticillium)，广泛分布在温带和亚热带地区，可危害200多种双子叶植物，导致棉花、茄子、草莓、番茄、马铃薯等多种重要的经济作物和园艺作物发生黄萎病，造成重大经济损失。据统计，在全球范围内每年导致的农业经济损失就达到数十亿美元。在国内，仅从棉花的统计数据来看，由大丽轮枝菌引起的黄萎病数次大规模爆发，造成极大的危害。由于大丽轮枝菌变异频繁，导致致病机理复杂、抗病育种滞后、抗病品种抗性丧失过快，难以有效防止黄萎病的暴发。因此，有效的识别鉴定病原菌，对于抗病育种和病害的综合防治具有重要意义。
在大丽轮枝菌的众多寄主作物中，仅仅番茄和莴苣这2种作物表现出对大丽轮枝菌的小种特异性抗性，因此，目前只有危害番茄和莴苣的大丽轮枝菌被划分为2个生理小种，race 1和race 2。而危害其他作物的大丽轮枝菌则无法划分为生理小种，只能称之为生理型。大丽轮枝菌致病力变异性强，在与寄主协同进化的过程中，常出现生理分化，产生新的生理型。对于大丽轮枝菌生理型的主要鉴定方法有鉴别寄主鉴定、培养性状鉴定、营养亲和性鉴定、同工酶技术鉴定、免疫技术鉴定、分子标记技术鉴定等，其中通过鉴别寄主鉴定可将大丽轮枝菌划分为强、中、弱3个生理型；通过培养性状鉴定一般多被用来研究病原菌形态方面的变异，方法简单而且直观，可将大丽轮枝菌分为菌丝型、菌核型和中间型；通过分子技术标记鉴定，用特异性引物D-1/D-2、ND-1/ND-2可将落叶型和非落叶型菌株区分开。
大丽轮枝菌在PDA平板上的培养性状差异明显，已有研究表明棉花黄萎菌株中以来源自长江流域的培养性状变异最大。按照各单孢菌株在PDA培养基上培养第14d时产生黑色微菌核的多少，将供试菌株分为菌核型(VH)、菌丝型(VS)和中间型(VM)3种类型。菌核型产生大量黑色微菌核，菌落正面或反面至少有一面呈现完全黑色，典型的正面和反面都为完全黑色，有的表面有辐射状条纹；有的正面完全为黑色，但反面中心圈为白色；有的反面完全为黑色，但正面中心圈覆盖白色气生菌丝。菌丝型不产生黑色微菌核，菌落正反面完全呈白色或浅黄色，有的表面有辐射状条纹，有的正面完全覆盖白色气生菌丝或者仅中心圈覆盖白色气生菌丝。中间型仅产生少量微菌核，介于菌核型和菌丝型之间，菌落正面和反面夹杂有一圈黑色，表现为有的中心圈为白色，覆盖白色气生菌丝，而周圈为黑色；有的中心圈为白色，中圈为黑色，有辐射状条纹，而周圈为白色；有的中心圈为黑色，覆盖白色气生菌丝或者有辐射状条纹，而周圈为白色。
正是由于大丽轮枝菌在PDA培养基上的菌落特征变异很大，因此，在病原菌的分离工作中往往会将其它真菌误判为大丽轮枝菌。由于在大丽轮枝菌致病性研究中，往往分离获得的菌株较多，不可能对所有分离到的菌株都进行病原菌的鉴定。本发明实现了快捷地从众多分离物中识别非大丽轮枝菌，对于黄萎病的抗病育种和综合防治具有重要意义。
发明内容：
本发明的目的在于：针对目前黄萎病菌分离鉴定中存在的实际问题，提供一种识别非大丽轮枝菌的方法。
本发明的目的是这样实现的：一种分离鉴别大丽轮枝菌的方法，其特征在于：
a、病样的采集：在黄萎病地中，选择症状典型的重病株；剪取植株的一段主干，去除侧枝；装于纸质信封中或者用纸包好；在信封或报纸上写明采集地点，采集品种，采集人和采集时间；对病样进行编号，室温晾干，4℃保存；
b、病原菌的分离：新鲜的病样采用火焰灼烧法，在超净台中，将剪刀、镊子分别蘸酒精后，再将酒精烧去，重复两次，进行消毒；然后将病杆在70％的酒精中浸过后，将酒精烧去，如病杆表皮容易剥离，则将表皮组织拨开，用剪刀剪去；然后将维管束剪成小块(1cm×2cm)，用镊子选取小块变色的维管束组织，移至含有氯霉素的PDA平板上，每个平板4-5个小块，28℃培养5-7d；如果病杆特别干燥，不适合用火焰灼烧法，则采用次氯酸钠消毒法，在超净台中，将剪刀、镊子分别蘸酒精后，再将酒精烧去，重复两次，进行消毒；将病杆用自来水冲洗干净晾干，如病杆表皮容易剥离，则将表皮组织拨开，用剪刀剪去，再将病杆剪成约1cm×2cm大小的小块；然后置于70％的乙醇中2-5min后，用无菌水洗涤1次；再将病杆小块移至4％次氯酸钠中8-10min，然后用无菌水中洗涤4-5次；用镊子选取小块变色的维管束组织，移在含有氯霉素的PDA平板上，每个平板4-5个小块，28℃培养5-7d；
c、病原菌的纯化与保存：在超净台中，根据平板中病杆小块周围长出菌落的形态，选取菌落边缘少量菌丝块接种于PDA平板上，28℃培养3-5d。同时，挑取少量菌丝加入含有1mL无菌水的1.5mL的离心管中，涡旋振荡1min，取10-20μL涂布在PDA平板中，25℃培养至长出单克隆，挑出单克隆至装有液体PDA培养基的三角瓶中，25℃，150r/min摇床培养3-7d。取摇好的菌液0.5mL与50％甘油1∶1混合，-70℃超低温冰箱保存；
d、菌株基因组DNA提取：将活化后菌株的孢子液均匀涂布在铺有玻璃纸的PDA平板上，25℃培养5d，从玻璃纸上刮取菌丝体，在吸水纸上压干，放入2mL离心管中，加入适量石英砂混匀。液氮冷冻后，用电钻(博世GBM10RE)将菌丝体研磨成细粉状。采用CTAB法提取菌株基因组DNA；
e、PCR检测菌株的致病类型：采用Pérez-Artés E等设计的特异性引物，D-1(CATGTT GCT CTG TTG ACT GG)、D-2(GAC ACG GTA TCT TTG CTG AA)，检测菌株是否为落叶型菌系，扩增产物大小为550bp；ND-1(CAG GGG ATA CTG GTA CGA GACG)、ND-2(ATG AGT ATTGCC GAT AAG AAC A)，检测菌株是否为非落叶型菌系，扩增产物大小为1500bp；PCR扩增的反应液总量为25μL，以稀释10倍的基因组DNA为模板，退火温度为58℃；PCR扩增产物在0.8％琼脂糖凝胶上电泳，于紫外凝胶成像仪上观察结果；
f、ITS序列PCR鉴定：对于特异性引物D-1/D-2和ND-1/ND-2都PCR检测不到条带的菌株，采用真核生物核糖体DNA通用引物ITS1(TCC GTA GGT GAA CCT GCGG)、ITS4(TCC TCCGCT TAT TGA TAT GC)PCR扩增菌株的rDNA-ITS区段，扩增产物大小为540bp左右；PCR扩增的反应液总量为25μL，以稀释10倍的基因组DNA为模板，退火温度为50℃；PCR扩增产物在0.8％琼脂糖凝胶上电泳，于紫外凝胶成像仪上观察结果；对PCR产物进行纯化和测序，将测序结果在GenBank中进行BLAST比对分析，从而鉴别是否为大丽轮枝菌。
本发明的优点在于：对采集的病样是以纸袋进行保存，避免使用塑料袋，纸袋透气性好，样品干燥，保存时间长。首先对分离到的菌株进行PCR检测致病类型，只有那些对特异性引物D-1/D-2和ND-1/ND-2都PCR检测不到目的条带的菌株，才进行ITS序列PCR检测，从而避免对所有菌株都进行PCR产物的纯化和测序，以及测序结果的BLAST比对分析，大大缩短了大量病原菌样品鉴定的时间。本发明实现了在众多分离物中识别非大丽轮枝菌，对于黄萎病的抗病育种和综合防治具有重要意义。
具体实施方式：
下面用实施例来进一步详述本发明，但本发明的内容并不局限于此。
实施例1 大丽轮枝菌的分离与纯化保存
病样的收集与采集：
选择黄萎病发生的重病田，每块田选择症状典型的重病株2株，取发病植株的一段主干分装在不同的信封中，在信封背面注明采集地点，采集品种，采集人，采集时间。对病样进行编号，室温晾干，4℃保存。
大丽轮枝菌的分离：
所用的培养基为马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)，具体配方：马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂15.0-20.0g，蒸馏水1000mL，pH自然。配制方法：将马铃薯洗净去皮，称量，切成小块(1cm3左右)，放入锅中，加1000mL蒸馏水，煮烂大约需15min，待冷却后用三层纱布滤去马铃薯残渣，加入葡萄糖后定容至1000mL。分装三角瓶后加入琼脂，121℃灭菌20min。灭菌过后的PDA培养基冷却至45-50℃，加入氯霉素至终浓度达50μg/mL，倒入无菌平板中，冷却后备用。PDA液体培养基的成分和配制方法同PDA固体培养基，但不用加琼脂。
在超净台中，将剪刀、镊子分别蘸酒精后，再将酒精烧去，重复两次，进行消毒。新鲜的病样采用火焰灼烧法，将病杆在70％的酒精中浸过后，将酒精烧去，如病杆表皮容易剥离，则将表皮组织拨开，用剪刀剪去；然后将维管束剪成小块(1cm×2cm)，用镊子选取小块变色的维管束组织，移至含有氯霉素的PDA平板上，每个平板4-5个小块，28℃培养5-7d；如果病杆特别干燥，不适合用火焰灼烧法，则采用次氯酸钠消毒法，将病杆用自来水冲洗干净晾干，如病杆表皮容易剥离，则将表皮组织拨开，用剪刀剪去，再将病杆剪成约1cm×2cm大小的小块；然后置于70％的乙醇中2-5min后，用无菌水洗涤1次；再将病杆小块移至4％次氯酸钠中8-10min，然后用无菌水中洗涤4-5次；用镊子选取小块变色的维管束组织，移在含有氯霉素的PDA平板上，每个平板4-5个小块，28℃培养5-7d；
大丽轮枝菌的纯化保存：
在超净台中，根据平板中病杆块周围长出菌落的形态，选取菌落边缘少量菌丝块接种于PDA平板上，25℃纯化培养3-5d。挑取少量菌丝，在显微镜下观察确认其轮枝状的分生孢子梗和无色、卵圆形的分生孢子。同时，用稀释平板法从目标菌落获取单孢菌株，挑取少量菌丝加入含有1mL ddw的无菌1.5mL的离心管中，涡旋振荡1min，取10-20μL涂布在PDA平板中，25℃培养至长出单克隆，挑出单克隆至加入含有液体PDA培养基的三角瓶中，25℃，150r/min摇床培养3-7d。取摇好的菌液0.5mL与50％甘油1∶1混合，-70℃超低温冰箱保存。用此方法2002-2016年从棉花和茄子病株中共计分离获得290个单孢菌株。
实施例2 PCR检测大丽轮枝菌的致病类型
菌株基因组DNA提取：
将活化后菌株的孢子液均匀涂布在铺有玻璃纸的PDA平板上，25℃培养5d，从玻璃纸上刮取菌丝体，在吸水纸上压干，放入2mL离心管中，加入适量石英砂混匀。液氮冷冻后，用电钻(博世GBM10RE)将菌丝体研磨成细粉状。采用CTAB法提取菌株基因组DNA；
PCR检测菌株的致病类型：
采用Pérez-Artés E等设计的特异性引物，D-1(CAT GTT GCT CTG TTG ACTGG)、D-2(GAC ACG GTA TCT TTG CTG AA)，检测菌株是否为落叶型菌系，扩增产物大小为550bp；ND-1(CAG GGG ATA CTG GTA CGA GAC G)、ND-2(ATG AGT ATT GCC GAT AAGAAC A)，检测菌株是否为非落叶型菌系，扩增产物大小为1500bp；PCR扩增的反应液总量为25μL，以稀释10倍的基因组DNA为模板，其中，模版1.0μL，TaKaRa ExTaq酶0.2μL，10×ExTaq Buffer 2.5μL，dNTP Mix 2.0μL，25mol/L MgCl21.5μL，上游引物0.5μL，下游引物0.5μL，加dd H2O至25μL。PCR扩增反应程序：95℃预变性5min；95℃变性1min，58℃退火45s，72℃延伸1min，30个循环；72℃延伸2min，4℃保存。PCR扩增产物在0.8％琼脂糖凝胶上电泳，于紫外凝胶成像仪上观察结果。用此方法对2002-2016年从棉花和茄子病株中分离获得290个单孢菌株进行检测，结果208个菌株由落叶型菌系的特异性引物D-1/D-2PCR扩增出0.55kb的目的条带，39株由非落叶型菌系的特异性引物ND-1/ND-2 PCR扩增出1.5kb的目的条带，没有扩增出条带的有43株。
实施例3 ITS序列PCR鉴定菌种
对于特异性引物D-1/D-2和ND-1/ND-2都PCR检测不到条带的菌株，采用真核生物核糖体DNA通用引物ITS1(TCC GTA GGT GAA CCT GCG G)、ITS4(TCC TCC GCT TAT TGA TATGC)PCR扩增菌株的rDNA-ITS区段，扩增产物大小为540bp左右；PCR扩增的反应液总量为25μL，以稀释10倍的基因组DNA为模板，其中，模版1.0μL，TaKaRa ExTaq酶0.2μL，10×ExTaqBuffer 2.5μL，dNTP Mix 2.0μL，25mol/L MgCl21.5μL，上游引物0.5μL，下游引物0.5μL，加dd H2O至25μL。PCR扩增反应程序：94℃预变性2min；94℃变性45s，50℃退火45s，72℃延伸50s，30个循环；72℃延伸10min，4℃保存。PCR扩增产物在0.8％琼脂糖凝胶上电泳，于紫外凝胶成像仪上观察结果。然后对PCR产物进行纯化和测序，将测序结果在GenBank中进行BLAST比对分析，进行菌种鉴定。用此方法对43个用特异性引物D-1/D-2和ND-1/ND-2PCR都没有扩增出条带的菌株进行菌种鉴定，结果发现其中有4个菌株不是大丽轮枝菌，而是Gibellulopsis nigrescens，这4株菌分别是V08sy-3①、DF-j4-2、V13DF14、DF-j2。

Claims (1)

1.一种分离鉴别大丽轮枝菌的方法，其特征在于：
a、病样的采集：在黄萎病地中，选择症状典型的重病株；剪取植株的一段主干，去除侧枝；装于纸质信封中或者用纸包好；在信封或报纸上写明采集地点，采集品种，采集人和采集时间；对病样进行编号，室温晾干，4℃保存；
b、病原菌的分离：新鲜的病样采用火焰灼烧法，在超净台中，将剪刀、镊子分别蘸酒精后，再将酒精烧去，重复两次，进行消毒；然后将病杆在70％的酒精中浸过后，将酒精烧去，如病杆表皮容易剥离，则将表皮组织拨开，用剪刀剪去；然后将维管束剪成小块(1cm×2cm)，用镊子选取小块变色的维管束组织，移至含有氯霉素的PDA平板上，每个平板4-5个小块，28℃培养5-7d；如果病杆特别干燥，不适合用火焰灼烧法，则采用次氯酸钠消毒法，在超净台中，将剪刀、镊子分别蘸酒精后，再将酒精烧去，重复两次，进行消毒；将病杆用自来水冲洗干净晾干，如病杆表皮容易剥离，则将表皮组织拨开，用剪刀剪去，再将病杆剪成约1cm×2cm大小的小块；然后置于70％的乙醇中2-5min后，用无菌水洗涤1次；再将病杆小块移至4％次氯酸钠中8-10min，然后用无菌水中洗涤4-5次；用镊子选取小块变色的维管束组织，移在含有氯霉素的PDA平板上，每个平板4-5个小块，28℃培养5-7d；
c、病原菌的纯化与保存：在超净台中，根据平板中病杆小块周围长出菌落的形态，选取菌落边缘少量菌丝块接种于PDA平板上，28℃培养3-5d。同时，挑取少量菌丝加入含有1mL无菌水的1.5mL的离心管中，涡旋振荡1min，取10-20μL涂布在PDA平板中，25℃培养至长出单克隆，挑出单克隆至装有液体PDA培养基的三角瓶中，25℃，150r/min摇床培养3-7d。取摇好的菌液0.5mL与50％甘油1∶1混合，-70℃超低温冰箱保存；
d、菌株基因组DNA提取：将活化后菌株的孢子液均匀涂布在铺有玻璃纸的PDA平板上，25℃培养5d，从玻璃纸上刮取菌丝体，在吸水纸上压干，放入2mL离心管中，加入适量石英砂混匀。液氮冷冻后，用电钻(博世GBM10RE)将菌丝体研磨成细粉状。采用CTAB法提取菌株基因组DNA；
e、PCR检测菌株的致病类型：采用Pérez-Artés E等设计的特异性引物，D-1(CAT GTTGCT CTG TTG ACT GG)、D-2(GAC ACG GTA TCT TTG CTG AA)，检测菌株是否为落叶型菌系，扩增产物大小为550bp；ND-1(CAG GGG ATA CTG GTA CGA GAC G)、ND-2(ATG AGT ATT GCCGAT AAG AAC A)，检测菌株是否为非落叶型菌系，扩增产物大小为1500bp；PCR扩增的反应液总量为25μL，以稀释10倍的基因组DNA为模板，退火温度为58℃；PCR扩增产物在0.8％琼脂糖凝胶上电泳，于紫外凝胶成像仪上观察结果；
f、ITS序列PCR鉴定：对于特异性引物D-1/D-2和ND-1/ND-2都PCR检测不到条带的菌株，采用真核生物核糖体DNA通用引物ITS1(TCC GTA GGT GAA CCT GCG G)、ITS4(TCC TCC GCTTAT TGA TAT GC)PCR扩增菌株的rDNA-ITS区段，扩增产物大小为540bp左右；PCR扩增的反应液总量为25μL，以稀释10倍的基因组DNA为模板，退火温度为50℃；PCR扩增产物在0.8％琼脂糖凝胶上电泳，于紫外凝胶成像仪上观察结果；对PCR产物进行纯化和测序，将测序结果在GenBank中进行BLAST比对分析，从而鉴别是否为大丽轮枝菌。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111378779A (zh) * 2020-04-09 2020-07-07 中国科学院微生物研究所 轮枝菌属多基因谱系筛查方法
CN117363792A (zh) * 2023-12-08 2024-01-09 北京林业大学 一种基于rpa-crispr双重检测大丽轮枝菌的方法及应用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5527671A (en) * 1994-11-07 1996-06-18 Wisconsin Alumni Research Foundation Assay for verticillium dahliae
CN101880720A (zh) * 2010-07-20 2010-11-10 云南省农业科学院甘蔗研究所 甘蔗黑穗病菌快速检测方法
CN106906298A (zh) * 2017-04-14 2017-06-30 新疆农垦科学院 棉花黄萎病原菌遗传多样性的研究方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5527671A (en) * 1994-11-07 1996-06-18 Wisconsin Alumni Research Foundation Assay for verticillium dahliae
CN101880720A (zh) * 2010-07-20 2010-11-10 云南省农业科学院甘蔗研究所 甘蔗黑穗病菌快速检测方法
CN106906298A (zh) * 2017-04-14 2017-06-30 新疆农垦科学院 棉花黄萎病原菌遗传多样性的研究方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
朱阳阳: "陕西省棉花黄萎菌致病类型的研究", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库 农业科技辑》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111378779A (zh) * 2020-04-09 2020-07-07 中国科学院微生物研究所 轮枝菌属多基因谱系筛查方法
CN117363792A (zh) * 2023-12-08 2024-01-09 北京林业大学 一种基于rpa-crispr双重检测大丽轮枝菌的方法及应用

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Application publication date: 20180126