CN107505416A - 一种分离检测白术内酯ⅱ和白术内酯v的hplc方法 - Google Patents

一种分离检测白术内酯ⅱ和白术内酯v的hplc方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种分离检测白术内酯Ⅱ和白术内酯V的HPLC方法，以十八烷基硅烷键合硅胶(碳十八)为固定相，以含有三氟乙酸的有机溶剂水溶液为流动相；具体地，所述有机溶剂水溶液为乙腈体积百分浓度34‑38％的乙腈水溶液，含有体积百分浓度2.5‑4.5％的三氟乙酸，或所述有机溶剂水溶液为甲醇体积百分浓度47‑51％的甲醇水溶液，含有体积百分浓度2‑4％的三氟乙酸。本发明提供的HPLC方法可以有效将白术内酯Ⅱ和白术内酯V进行分离，分离度大于1.5，符合规定；该方法仅需使用普通的碳十八色谱柱和普通的有机溶剂，且无需梯度洗脱，重复性高，易于在不同实验室转移。

Description

一种分离检测白术内酯Ⅱ和白术内酯V的HPLC方法
技术领域
本发明属于检测领域，涉及白术内酯的分离检测，具体涉及一种分离检测白术内酯Ⅱ和白术内酯V的HPLC方法。
背景技术
白术内酯类成分为白术的主要有效成分，目前已发现如下结构的白术内酯：
其中，白术内酯Ⅱ和白术内酯V是同分异构体，均由白术内酯Ⅲ脱水形成。二者理化性质相近，常规方法难以将二者分离检测。
发明内容
本发明的目的在于提供一种分离检测白术内酯Ⅱ和白术内酯V的HPLC方法。
实现本发明上述目的技术方案如下：
一种分离检测白术内酯Ⅱ和白术内酯V的HPLC方法，以十八烷基硅烷键合硅胶(碳十八)为固定相，以含有三氟乙酸的有机溶剂水溶液为流动相。
优选地，所述有机溶剂为甲醇或乙腈。
优选地，所述有机溶剂水溶液为乙腈体积百分浓度34-38％的乙腈水溶液，含有体积百分浓度2.5-4.5％的三氟乙酸。
优选地，所述有机溶剂水溶液为甲醇体积百分浓度47-51％的甲醇水溶液，含有体积百分浓度2-4％的三氟乙酸。
优选地，检测波长为276nm。
优选地，流速为1.0mL/min。
优选地，柱温为35±2℃。
三氟乙酸在分离检测白术内酯Ⅱ和白术内酯V方面的应用。
本发明的突出优点：
本发明提供的HPLC方法可以有效将白术内酯Ⅱ和白术内酯V进行分离，分离度大于1.5，符合规定；该方法仅需使用普通的碳十八色谱柱和普通的有机溶剂，且无需梯度洗脱，重复性高，易于在不同实验室转移。
附图说明
图1为实施例1的HPLC色谱图，流动相为乙腈体积百分浓度36％的乙腈水溶液，含有体积百分浓度3.5％的三氟乙酸(A)或乙酸(B)；
图2为实施例2的HPLC色谱图，流动相为甲醇体积百分浓度49％的甲醇水溶液，含有体积百分浓度3％的三氟乙酸(A)或乙酸(B)；
图3为实施例3(A)、实施例4(B)、实施例5(C)、实施例6(D)HPLC色谱图。
具体实施方式
下面就结合实施例具体介绍本发明的实质性内容，由于篇幅原因，实验过程的描述无法做到非常详细，凡是实验中未详细描述的部分均为本领域技术人员熟知的常规操作。
实施例1
一、实验仪器和材料
ACQUITY型超高效液相色谱仪(美国沃特世科技有限公司)；
BT224S型电子天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司)；
白术内酯Ⅱ和白术内酯V自制，纯度大于98％；
水为超纯水，乙腈、甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯。
二、实验方法和结果
1、溶液配制
对照品溶液：分别称取白术内酯Ⅱ、白术内酯V配制成浓度为0.1mg/mL的白术内酯Ⅱ对照品溶液和白术内酯V对照品溶液；
供试品溶液：称取白术内酯Ⅱ和白术内酯V配制成白术内酯Ⅱ0.5mg/mL和白术内酯V0.5mg/mL的供试品溶液。
2、色谱条件
Agilent ZORBAX Extend-C18(250×4.6mm，5μm)，流速1.0mL/min，柱温35℃，检测波长276nm，进样量10μL，流动相为乙腈体积百分浓度36％的乙腈水溶液，含有体积百分浓度3.5％的三氟乙酸，等度洗脱。同时设置对比试验，对比试验采用乙酸替代三氟乙酸，调节pH值与上述含有三氟乙酸的流动相一致。
色谱图如图1所示，1A为添加三氟乙酸，1B为添加乙酸。
实施例2
一、实验仪器和材料
ACQUITY型超高效液相色谱仪(美国沃特世科技有限公司)；
BT224S型电子天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司)；
白术内酯Ⅱ和白术内酯V自制，纯度大于98％；
水为超纯水，乙腈、甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯。
二、实验方法和结果
1、溶液配制
对照品溶液：分别称取白术内酯Ⅱ、白术内酯V用流动相配制成浓度为0.1mg/mL的白术内酯Ⅱ对照品溶液和白术内酯V对照品溶液；
供试品溶液：称取白术内酯Ⅱ和白术内酯V用流动相配制成白术内酯Ⅱ0.5mg/mL和白术内酯V 0.5mg/mL的供试品溶液。
2、色谱条件
Agilent ZORBAX Extend-C18(250×4.6mm，5μm)，流速1.0mL/min，柱温35℃，检测波长276nm，进样量10μL，流动相为甲醇体积百分浓度49％的甲醇水溶液，含有体积百分浓度3％的三氟乙酸，等度洗脱。同时设置对比试验，对比试验采用乙酸替代三氟乙酸，调节pH值与上述含有三氟乙酸的流动相一致。
色谱图如图2所示，2A为添加三氟乙酸，2B为添加乙酸。
实施例3
一、实验仪器和材料
ACQUITY型超高效液相色谱仪(美国沃特世科技有限公司)；
BT224S型电子天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司)；
白术内酯Ⅱ和白术内酯V自制，纯度大于98％；
水为超纯水，乙腈、甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯。
二、实验方法和结果
1、溶液配制
对照品溶液：分别称取白术内酯Ⅱ、白术内酯V配制成浓度为0.1mg/mL的白术内酯Ⅱ对照品溶液和白术内酯V对照品溶液；
供试品溶液：称取白术内酯Ⅱ和白术内酯V配制成白术内酯Ⅱ0.5mg/mL和白术内酯V0.5mg/mL的供试品溶液。
2、色谱条件
Agilent ZORBAX Extend-C18(250×4.6mm，5μm)，流速1.0mL/min，柱温35℃，检测波长276nm，进样量10μL，流动相为乙腈体积百分浓度34％的乙腈水溶液，含有体积百分浓度4.5％的三氟乙酸，等度洗脱。色谱图如图3A所示。
实施例4
一、实验仪器和材料
ACQUITY型超高效液相色谱仪(美国沃特世科技有限公司)；
BT224S型电子天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司)；
白术内酯Ⅱ和白术内酯V自制，纯度大于98％；
水为超纯水，乙腈、甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯。
二、实验方法和结果
1、溶液配制
对照品溶液：分别称取白术内酯Ⅱ、白术内酯V配制成浓度为0.1mg/mL的白术内酯Ⅱ对照品溶液和白术内酯V对照品溶液；
供试品溶液：称取白术内酯Ⅱ和白术内酯V配制成白术内酯Ⅱ0.5mg/mL和白术内酯V0.5mg/mL的供试品溶液。
2、色谱条件
Agilent ZORBAX Extend-C18(250×4.6mm，5μm)，流速1.0mL/min，柱温35℃，检测波长276nm，进样量10μL，流动相为乙腈体积百分浓度38％的乙腈水溶液，含有体积百分浓度2.5％的三氟乙酸，等度洗脱。色谱图如图3B所示。
实施例5
一、实验仪器和材料
ACQUITY型超高效液相色谱仪(美国沃特世科技有限公司)；
BT224S型电子天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司)；
白术内酯Ⅱ和白术内酯V自制，纯度大于98％；
水为超纯水，乙腈、甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯。
二、实验方法和结果
1、溶液配制
对照品溶液：分别称取白术内酯Ⅱ、白术内酯V用流动相配制成浓度为0.1mg/mL的白术内酯Ⅱ对照品溶液和白术内酯V对照品溶液；
供试品溶液：称取白术内酯Ⅱ和白术内酯V用流动相配制成白术内酯Ⅱ0.5mg/mL和白术内酯V 0.5mg/mL的供试品溶液。
2、色谱条件
Agilent ZORBAX Extend-C18(250×4.6mm，5μm)，流速1.0mL/min，柱温35℃，检测波长276nm，进样量10μL，流动相为甲醇体积百分浓度47％的甲醇水溶液，含有体积百分浓度4％的三氟乙酸，等度洗脱。色谱图如图3C所示。
实施例6
一、实验仪器和材料
ACQUITY型超高效液相色谱仪(美国沃特世科技有限公司)；
BT224S型电子天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司)；
白术内酯Ⅱ和白术内酯V自制，纯度大于98％；
水为超纯水，乙腈、甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯。
二、实验方法和结果
1、溶液配制
对照品溶液：分别称取白术内酯Ⅱ、白术内酯V用流动相配制成浓度为0.1mg/mL的白术内酯Ⅱ对照品溶液和白术内酯V对照品溶液；
供试品溶液：称取白术内酯Ⅱ和白术内酯V用流动相配制成白术内酯Ⅱ0.5mg/mL和白术内酯V 0.5mg/mL的供试品溶液。
2、色谱条件
Agilent ZORBAX Extend-C18(250×4.6mm，5μm)，流速1.0mL/min，柱温35℃，检测波长276nm，进样量10μL，流动相为甲醇体积百分浓度51％的甲醇水溶液，含有体积百分浓度2％的三氟乙酸，等度洗脱。色谱图如图3D所示。
由此可见，本发明提供的HPLC方法可以有效将白术内酯Ⅱ和白术内酯V进行分离，分离度大于1.5，符合规定；该方法仅需使用普通的碳十八色谱柱和普通的有机溶剂，且无需梯度洗脱，重复性高，易于在不同实验室转移。
上述实施例是对本发明实质性内容的体现，用于更好地解释本发明，但本领域技术人员应当知晓，不应将本发明的保护范围局限于上述具体的实施例。

Claims (8)

1.一种分离检测白术内酯Ⅱ和白术内酯V的HPLC方法，其特征在于：以十八烷基硅烷键合硅胶(碳十八)为固定相，以含有三氟乙酸的有机溶剂水溶液为流动相。
2.根据权利要求1所述的HPLC方法，其特征在于：所述有机溶剂为甲醇或乙腈。
3.根据权利要求2所述的HPLC方法，其特征在于：所述有机溶剂水溶液为乙腈体积百分浓度34-38％的乙腈水溶液，含有体积百分浓度2.5-4.5％的三氟乙酸。
4.根据权利要求2所述的HPLC方法，其特征在于：所述有机溶剂水溶液为甲醇体积百分浓度47-51％的甲醇水溶液，含有体积百分浓度2-4％的三氟乙酸。
5.根据权利要求1-4任一所述的HPLC方法，其特征在于：检测波长为276nm。
6.根据权利要求1-4任一所述的HPLC方法，其特征在于：流速为1.0mL/min。
7.根据权利要求1-4任一所述的HPLC方法，其特征在于：柱温为35±2℃。
8.三氟乙酸在分离检测白术内酯Ⅱ和白术内酯V方面的应用。
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