CN107466526A - 一种苹果杂交种子“一控二催三培养”三步层积培养法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种适于苹果杂交种子的“控温层积、25℃催芽、穴盘培养”三步相结合的层积培养方法，包括以下步骤：杂交苹果采收后，取出杂交种子洗干净，晾干保存。层积前，自来水浸泡8 h后，1%次氯酸钠消毒30 min，无菌水洗3次，2层湿纱布包裹，2℃冰箱控温层积。期间，每周自来水冲洗1次。待胚根露出0.1 cm左右时，转置于25℃培养箱催芽8‑12 h，胚根长至0.3‑0.5 cm，即可温室穴盘播种。本发明可控性强，克服了传统沙藏层积受冬季温度影响的不足，可准确控制种子发芽时间，萌芽率达95%以上，出苗率98%以上，播种时间可提前2‑3个月，达到提前播种、加快育种进程的目的。

Description

一种苹果杂交种子“一控二催三培养”三步层积培养法

技术领域

本发明涉及果树杂交育种领域，具体涉及一种苹果杂交种子“控温层积、25℃催芽、穴盘培养”三步相结合的简捷、精准层积培养方法。

技术背景

杂交育种是苹果育种的一个常规重要方法，杂交获得的种子需要打破休眠才能够萌发。通过低温层积处理打破种子休眠，是目前苹果育种最基本也是最重要的技术方法。层积处理的好坏直接影响到出苗率和苗木的生长状况，也直接影响到育种计划的完成。目前，苹果种子层积的处理方式多是利用花盆、深坑或地窖进行沙藏处理，操作简单，适用于大量种子层积，但这种沙藏的层积方法存在层积温度不可控制的缺陷，易造成冬季有效积温不足从而导致打破休眠不彻底、不能直观观察到杂交种子是否发芽等问题，层积处理完后进行种沙分离过程中种子也会有一定的损失，易把生长过长的胚根碰掉或者碰断。不同杂交种子打破休眠需要的有效积温不同，沙藏不能有效分辨不同需冷量的杂交种，容易造成出苗率不整齐的情况，从而造成种子的损失。对于苹果育种研究来说，每粒种子都是不同的杂交后代，这种沙藏层积的方法出苗率低，到最后获得的杂交苗一般只有杂交种子的40%左右，对育种工作造成较大的损失。

采用本发明的“控温层积、25℃催芽、穴盘培养”三步相结合的技术方法，可以有效克服以上缺点，本发明方法操作简单、可控性强，不需要昂贵的仪器设备，杂交种子萌芽率和整齐度高，不受室外温度及季节的限制，根据不同杂交组合杂交种子的需冷量不同，可以准确控制种子发芽长短及播种时间，萌芽率达到95%，穴盘播种后的出苗率在98%以上，使杂交种子播种时间提前2-3个月，达到了杂交种子提前播种、提前开花结果的目的，对于加快苹果育种进程有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于解决生产上常规沙藏层积种子中存在的受冬季有效积温不足造成种子发芽率不整齐、种子损失大、不易控制发芽长短以及不同杂交组合杂交种子的需冷量不同等问题，采用本发明的技术方法，操作简单、可控性强，不需要昂贵的仪器设备，杂交种子萌芽率和整齐度高，可以准确的控制种子发芽长短及播种时间，以达到杂交种子提前播种、提前开花结果的目的，从而加速苹果育种进程。

一种苹果杂交种子“一控二催三培养”三步层积培养法，是通过以下技术方案来实现：

（1）秋季在果实成熟前，用刀子小心打开杂交苹果，观察种子的颜色，当杂交种子颜色开始变褐色时、即果实接近成熟时，采收杂交授粉苹果，取出杂交种子，去掉种子表面的果肉，用自来水冲洗干净，于室内阴凉处晾干，去除发育不好的干瘪种子及破损不完整或者有虫害的种子后，将合格种子放置在室温保存，待层积；

（2）层积前，用自来水浸泡杂交种子8 h，用1%的次氯酸钠将种子消毒30 min，期间每隔10 min搅动种子；消毒完毕后用无菌水清洗种子3次；

（3）取干净的纱布，用清水湿润后，将消毒清洗过的杂交种子包裹2层，放到15-20 cm培养皿里，种子在平皿里平铺单层，避免种子过多引起种子发霉变质。然后将平皿放置于温度设定为2℃的冰箱中，期间每隔7d利用清水清洗种子和纱布，保证纱布湿润无积水且不结冰；

（4）层积过程中，注意经常观察冰箱里的温度，上下波动的范围不要超过1℃。并及时清理掉发霉或者烂掉的杂交种子。

（5）层积过程中，注意观察种子萌发情况，当种子胚根处露出0.1 cm左右的小芽时，结束层积处理，将装在平皿里的种子放置在25℃培养箱里催芽8-12 h。

（6）经过25℃催芽处理的杂交种子，胚芽可长至0.3-0.5 cm。然后在温室大棚内用穴盘进行播种。。

（7）播种选用PVC材质的54 孔穴盘，规格大小为54 cm × 28 cm，每穴大小为，上口径4.5 cm × 4.5 cm，下口径2.0 cm × 2.0 cm，高度4.5 cm，基质选用的为发酵过的菇渣。将催芽处理过的种子胚根朝下，深度约为0.5 cm播种到基质中，上层再覆盖一层基质。插上标签，浇透水。放置于温室大棚内小拱棚中。

与传统的沙藏层积相比，本发明所达到的有益效果是：

本发明操作简单、可控性强，不需要昂贵的仪器设备，杂交种子萌芽率和整齐度高，不受室外温度及季节的限制，可以准确控制不同苹果杂交种子打破休眠所需的有效积温以及杂交种子发芽长短和播种时间，一旦萌发即可播种，萌芽率达到95%，穴盘播种后的出苗率在98%以上，使杂交种子播种时间提前2-3个月，从而达到加速苹果育种进程的目的。

附图及附表说明：

表1 杂交种子数量以及萌发时间

图1 消毒清洗后纱布包裹置于平皿中的苹果杂交种子

图2 苹果杂交种子在冰箱里层积情况

图3 催芽后的苹果杂交种子萌发情况

图4 穴盘播种置于温室大棚的苹果杂交苗发芽及生长情况

具体实施方案：

本发明提供了一种苹果杂交种子“一控二催三培养”三步层积培养法，旨在准确控制苹果杂交种子的萌芽率和发芽时间及播种时间，不受室外温度及季节的限制，达到杂交种子提前播种、提前开花，从而加快育种进程的目的。下面结合层积实例对本发明进行详细说明，所述是对本发明的解释而非限定本实施例。

实施例

采用本专利方法进行4个苹果杂交组合的杂交种子利用冰箱进行层积，操作步骤如下：

（1）果实采收、取种：4个杂交组合的苹果果实为：‘福丽’×红肉苹果、‘富士’×红肉苹果、‘黄元帅’自然开放授粉、‘霞光’自然开放授粉。观察4个组合的果实成熟情况，待杂交种子颜色开始变为褐色时、即果实接近成熟时，采收4个组合的杂交授粉苹果，取出杂交种子，去掉种子表面的果肉，用自来水冲洗干净，于室内阴凉处晾干，去除发育不好的干瘪种子及破损不完整或者有虫害的种子后，将合格种子清点数量（表1）后放置在室温保存，待层积；

（2）种子消毒：层积前，用自来水浸泡杂交种子8 h，用1%的次氯酸钠将种子消毒30min，期间每隔10min搅动种子；消毒完毕后用无菌水清洗种子3次；

（3）层积处理：取干净的纱布，用清水湿润后，将消毒清洗过的杂交种子包裹2层，放到15-20 cm培养皿里（图1），种子在平皿里平铺单层，避免种子过多引起种子发霉变质。然后将平皿放置于温度设定为2℃的冰箱中（图2），在冰箱中放有温度计，每个平皿做好标记，期间每隔7d利用清水清洗种子和纱布，保证纱布湿润无积水且不结冰；层积过程中，经常观察冰箱里的温度，上下波动的范围不要超过1℃。及时清理掉发霉或者烂掉的杂交种子。

（4）催芽及播种：层积处理45天左右注意观察种子的萌发情况，记录种子开始萌发时间以及95%的种子萌发的时间（表1 ）。当种子胚根处露出0.1 cm左右的小芽时，结束层积处理，将装在平皿里的种子放置在25℃培养箱里催芽8-12 h。经过25℃催芽处理的杂交种子，胚芽可长至0.3-0.5 cm（图3）。然后在温室大棚内用穴盘进行播种。播种选用PVC材质的54 孔穴盘，规格大小为54 cm× 28 cm，每穴大小为，上口径4.5 cm × 4.5cm，下口径2.0cm × 2.0cm，高度4.5cm，基质选用的为发酵过的菇渣。将催芽处理过的种子胚根朝下，深度约为0.5 cm播种到基质中（图4），上层再覆盖一层基质。插上标签，浇透水。放置于温室大棚内小拱棚中。25-30 d后，杂交苗可生长至10-15cm，穴盘播种方法出苗率在98%以上（图4）。

采用本发明的方法，经过2℃冰箱低温层积71-103 d和25℃催芽8-12 h，可使苹果杂交种子胚根长至0.3-0.5 cm，萌芽率达到95%，达到了播种的要求。

最后应说明的是：以上所述仅为本发明的用冰箱层积的苹果杂交种子较佳实施例，并不用于限定本发明，凡依据本发明的技术实质所作的简单的任何修改、等同替换、修饰等，其他果树的杂交种子如梨等均应包括在本发明的保护范围之内。

表1 杂交种子数量以及萌发时间

Claims (9)

1.一种苹果杂交种子“一控二催三培养”三步层积培养法，其特征在于包括以下步骤：

（1）采收果实接近成熟的杂交授粉苹果，取出杂交种子，去掉种子表面的果肉，用自来水冲洗干净，室内晾干，去除发育不好的干瘪种子及破损不完整或者有虫害的种子后，将合格种子放置在室温保存；

（2）层积前，用自来水浸泡杂交种子8 h，用1%的次氯酸钠将种子消毒30 min，用无菌水清洗3次；

（3）将消毒清洗过的种子用2层湿润的纱布包裹放入到15-20 cm培养皿里，放置在温度设定为2℃的冰箱中进行层积，每周用自来水冲洗杂交种子和纱布一次；

（4）根据不同杂交组合种子的需冷量不同，观察和记录其层积时间，经过2℃低温层积的种子，其胚根处露出0.1 cm左右的小芽时，结束层积处理，将装在平皿里的种子放置在25℃培养箱里催芽8-12 h；

（5）经过25℃催芽处理的杂交种子，在温室用穴盘进行播种，用小拱棚进行覆盖。

2.根据权利要求1所述的培养法，其特征在于采收杂交苹果的时间为果实接近成熟，果实种子开始变成褐色。

3.根据权利要求1所述的培养法，其特征在于包裹在纱布里放置在平皿里的种子不宜过多，以单层铺满平皿为宜，否则，过多过密的种子因为呼吸热及潮湿的环境易引起发霉变质。

4.根据权利要求1所述培养法，其特征在于包裹杂交种子的纱布既要保持湿润状态，同时又不能有积水存在，积水的存在会引起杂交种子发霉变质。

5.根据权利要求1所述培养法，其特征在于设置2℃的冰箱，在层积过程中，温度上下波动的范围不要超过1℃。

6.根据权利要求1所述培养法，其特征在于在层积过程中，及时清理掉发霉或者烂掉的杂交种子。

7.根据权利要求1所述培养法，其特征在于不同杂交组合种子的需冷量不同，一般要经过71-103 d。

8.根据权利要求1所述培养法，其特征在于经过25℃催芽8-12 h处理的杂交种子，胚芽可长至0.3-0.5 cm。

9.根据权利要求1所述培养法，其特征在于使用本发明的“一控二催三培养”三步相结合的方法，可根据不同杂交组合种子的需冷量不同精确控制层积时间在71-103 d，苹果杂交种子胚根生长整齐度高，萌芽率达到95%，穴盘播种后的出苗率在98%以上，播种时间提前2-3个月。