CN107456453A - 乙基苄氧基苯甲酰吡啶胺在制备预防和治疗动脉粥样硬化药物中的用途 - Google Patents

乙基苄氧基苯甲酰吡啶胺在制备预防和治疗动脉粥样硬化药物中的用途 Download PDF

Info

Publication number
CN107456453A
CN107456453A CN201610392529.1A CN201610392529A CN107456453A CN 107456453 A CN107456453 A CN 107456453A CN 201610392529 A CN201610392529 A CN 201610392529A CN 107456453 A CN107456453 A CN 107456453A
Authority
CN
China
Prior art keywords
compound
benzoylpyridine
macrophage
amine
purposes
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201610392529.1A
Other languages
English (en)
Inventor
程能能
黄滔敏
楼滨
蒋宪成
叶德泳
李亚莉
周璐
楚勇
李小霞
胡霜
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Fudan University
Original Assignee
Fudan University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Fudan University filed Critical Fudan University
Priority to CN201610392529.1A priority Critical patent/CN107456453A/zh
Publication of CN107456453A publication Critical patent/CN107456453A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/4406—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof only substituted in position 3, e.g. zimeldine

Abstract

本发明属制药领域，涉及式(I)结构的乙基苄氧基苯甲酰吡啶胺(化合物I)在制药中的新用途。本发明经高脂饮食喂养的动脉粥样硬化小鼠模型实验和肝细胞及巨噬细胞模型实验，结果表明，所述化合物I具有适宜的生物利用度，通过降低体内鞘磷脂合酶活性和鞘磷脂水平，减少肝细胞分泌apoB,促进巨噬细胞胆固醇外流，抑制巨噬细胞分泌炎症因子，减少动脉粥样硬化斑块中巨噬细胞的数量，减少血中炎症细胞，并显著抑制主动脉弓及主动脉根部的粥样硬化斑块形成，可用于制备预防和治疗动脉粥样硬化的药物。

Description

乙基苄氧基苯甲酰吡啶胺在制备预防和治疗动脉粥样硬化药 物中的用途
技术领域
本发明属制药领域，涉及乙基苄氧基苯甲酰吡啶胺(化合物I)在制药中的新用途，尤其涉及乙基苄氧基苯甲酰吡啶胺在制备预防和治疗动脉粥样硬化药物中的应用。
背景技术
现有技术公开了动脉粥样硬化(atherosclerosis，AS)是人类死亡的主要原因之一，其临床症状有中风、心肌梗塞、外周血管疾病，常伴有高血压、糖尿病等。所述病症的临床检验项目上表现为低密度脂蛋白(low-density lipoprotein,LDL)和极低密度脂蛋白(very low-density lipoprotein,VLDL)水平升高以及高密度脂蛋白(high-densitylipoprotein,HDL)水平下降。临床实践中的一线治疗AS药物为他汀类，该类药物是羟甲戊二酰辅酶A(HMG-CoA)还原酶抑制剂，能调节血浆中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)水平，但通过单独调节TC、TG水平所带来的益处存在一定的限度。大量研究表明，他汀类药物仅能降低急性冠脉事件发生率及冠心病死亡率的30％，而且不良反应大，容易发生严重不良反应，如横纹肌溶解、过敏反应等。
研究表明，鞘磷脂(sphingomyelin,SM)是细胞膜和血管中广泛存在并具有重要生理意义的内源性物质，约70％的SM与鞘糖脂、胆固醇组成细胞膜上的微结构-脂筏，从而维持着细胞膜的稳定性；SM参与血浆脂蛋白的组成，在体内主要有两种形式，70～75％存在于LDL/VLDL中，25～30％存在于HDL中；SM还具有信使分子的功能，它主要通过以下方式影响脂质代谢从而促使AS的形成：(a)影响HDL介导的胆固醇逆转运，阻碍胆固醇的清除(SanoO,Kobayashi A,et al.J LipidRes.2007,48(11):2377-2384；Marmillot P,Patel S,etal.Metabolism.2007,56(2):251-259.)；(b)阻碍致AS脂蛋白的清除(Schlitt A,HojjatiMR,et al.J Lipid Res.2005,46(2):196-200.)；(c)抑制甘油三酯(TG)的脂解(Park TS,Panek RL,et al.Atherosclerosis.2006,189(2):264-272.)；(d)相关产物通过相应的调节因子，促使AS斑块的生长(ParkTS,Panek RL,et al.Circulation.2004,110(22),3465-3471.)；(e)富含SM的LDL具有很强的凝聚力和黏附力，导致巨噬细胞更易于在动脉壁滞留聚集而形成泡沫细胞(Fan Y,Shi S,et al.ArteriosclerThrombVascBiol,2010,30:2114-2120.)。
流行病学及动物实验均表明，AS同SM呈正相关。在动脉粥样硬化经典模型apoE-/-小鼠中，SM水平是正常小鼠的4倍，血浆中SM水平对评价AS发展过程具有重要的意义(JiangXC,PaultreF,et al.Arterioscler.Thromb.Vasc.Biol.2000,20(12),2614-2618；Li Z,BasterrMJ,et al.Biochimica et BiophysicaActa.2005,1735(2),130–134.)。SMS是从头合成SM的最后步骤的关键酶，其主要有2种亚型，即SMS1和SMS2。SMS过表达会增加AS发生(Dong J,Liu J,et al.J Lipid Res,2006,47(6),1307–1314.)，相反，SMS缺陷会减少AS发生(Fan Y,Shi S,et al.Arterioscler.Thromb.VascBiol,2010,30(11):2114-20.)，这些均说明SMS是一个潜在的治疗AS靶点。尽管SMS基因敲除小鼠及流行病学已经证明SMS可作为治疗AS靶点，但是SMS是否可以作为药物治疗靶点，是否可通过给予SMS抑制剂来发挥抗AS作用，目前尚未可知。复旦大学有关研究组在前期发现了2-烷氧基苯甲酰芳胺类化合物具有SMS抑制作用(2-烷氧基苯甲酰芳胺类化合物及其药物用途，中国发明专利，申请号201410419334.2，申请日2014.8.24，申请公布号CN105348182A，申请公布日2016.02.24；PCT/CN2015/085077，申请日2015.7.24日，国际公布号WO2016029767，国际公布日2016.3.3)，其中包含化合物I，但未见有经实验证实其抗AS作用的报道。
发明内容
本发明针对现有技术的上述问题提供式乙基苄氧基苯甲酰吡啶胺(化合物I)在制药中的新用途。具体涉及2-烷氧基苯甲酰芳胺类化合物(化合物I)在制备抗动脉粥样硬化药物中的应用，本发明实验证实化合物I制备的抗动脉粥样硬化的药物，具有较好的疗效。
本发明的药物可用作抗人或动物的动脉粥样硬化。
本发明所述药物可通过口服或腹腔注射给予。本领域技术人员可根据实际情况容易地确定给药剂量。
本发明所述化合物I分子量为368.86，结构如式(I)所示：
本发明进行了高脂饮食诱导动脉粥样硬化小鼠模型实验，结果表明，化合物I可降低体内鞘磷脂合酶活性和鞘磷脂水平，降低全血中淋巴细胞(lymphocytes)，单核细胞(monocytes)，CD4+与CD8+细胞比值(CD4-CD8ratios)，树突状细胞(CD11b+CD11c+subsetof dendritic cells)，CD11b+Ly6C++Ly6G+细胞水平，但不改变血中胆固醇、甘油三酯水平。
本发明的实验中，体视显微镜拍摄主动脉弓图、主动脉弓油红O染色图、主动脉根部HE染色图，证明了无论是预防性给药，还是治疗性给药，化合物I均能缩小AS斑块面积并呈现一定的剂量相关性。
本发明对动脉粥样硬化斑块好发部位主动脉根部进行进一步的病理学检查，结果显示，化合物I能减少动脉粥样硬化斑块中巨噬细胞的生成；其抗动脉粥样硬化的作用是化合物I具有适宜的生物利用度，通过降低体内鞘磷脂合酶活性和鞘磷脂水平，减少肝细胞分泌apoB，促进巨噬细胞胆固醇外流，抑制巨噬细胞分泌炎症因子，减少动脉粥样硬化斑块中巨噬细胞的数量，减少血中炎症细胞，并显著抑制主动脉弓及主动脉根部的粥样硬化斑块形成，可用于预防和治疗动脉粥样硬化。
下面结合具体实施例和附图，进一步阐述本发明。这些实施例应理解为仅用于说明本发明而不是用于限制本发明的保护范围。在阅读了本发明记载的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等效变化和修饰同样落入本发明权利要求书所限定的范围。
附图说明
图1是C57BL/6J小鼠中化合物I灌胃(i.g.)给药后药时曲线图，其中，数值以均数±标准误差表示，n＝6。
图2是C57BL/6J小鼠中化合物I静脉(i.v.)给药后药时曲线图，其中，数值以均数±标准误差表示，n＝6。
图3是C57BL/6J小鼠中化合物I腹腔注射(i.p.)给药后药时曲线图，其中，数值以均数±标准误差表示，n＝6。
图4是化合物I各剂量对高脂饮食喂养后apoE-/-小鼠主动脉弓斑块的影响(体视显微图，其中箭头所示为斑块，灌胃给药，治疗性给药)。
图5是主动脉弓斑块油红O染色结果，其中，a是主动脉弓油红O染色代表图；b是主动脉弓油红O染色定量结果，数值以均数±标准误差表示，n＝10；*P<0.05，**P<0.01。
图6是HE染色主动脉根部斑块，其中，a是主动脉根部斑块HE染色代表图(绿色圈出部分，放大50倍)；b是HE染色定量结果，数值以均数±标准误差表示，n＝10；*P<0.05，**P<0.01。
图7是化合物I减少斑块中巨噬细胞含量比，其中，a是巨噬细胞免疫组化染色代表图(蓝色箭头所示，放大200倍)；b是巨噬细胞含量比定量，数值以均数±标准误差表示，n＝10；*P<0.05，**P<0.01。
图8是SMS活性测定图。a是空白肝组织色谱图；b是空白肝组织加标准品C6-NBD-SM和C6-NBD-Cer色谱图；c是实际样品SMS活性测定时色谱图；d是SMS活性测定结果；1：C6-NBD-SM，2：C6-NBD-Cer；数值以均数±标准误差表示，n＝10，*P<0.05，**P<0.01。
图9是流式细胞仪测定化合物I给药后apoE KO小鼠血细胞图，其中，a是测定中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞代表性细胞分群图；b是测定CD4+T细胞和CD8+T细胞代表性细胞分群图；c是CD11b+CD11c粒细胞代表性细胞分群图；d是CD11b+Ly6G+Ly6G+细胞代表性细胞分群图；e-f是淋巴细胞和单核细胞的定量分析；g是CD4+与CD8+T细胞比值定量分析；h是CD11b+CD11c粒细胞定量分析；(i)CD11b+Ly6G+Ly6G+细胞定量分析；数值以均数±标准误差表示，n＝5，*P<0.05，**P<0.01。
图10是化合物I对高脂饮食喂养后apoE-/-小鼠主动脉弓斑块的影响(体视显微图，红色箭头所示为斑块，腹腔注射给药，预防性给药)。
图11是主动脉弓斑块油红O染色结果，其中，(a)主动脉弓油红O染色代表图；(b)主动脉弓油红O染色定量结果；数值以均数±标准误差表示，n＝10；*P<0.05，**P<0.01。
图12是化合物Ⅰ抑制巨噬细胞SMS活性。
图13是化合物I抑制巨噬细胞IL-6和MCP-1的分泌，其中，13a为化合物I抑制LPS诱导巨噬细胞分泌IL-6；13b为化合物I抑制IκB降解；13c为化合物I抑制巨噬细胞趋化因子-1(MCP-1)分泌。
图14是化合物I抑制肝细胞分泌致AS载脂蛋白apoB并促进巨噬细胞胆固醇外流，其中，14a为化合物I抑制肝细胞分泌致AS载脂蛋白apoB；14b为化合物I促进巨噬细胞胆固醇外流。
具体实施方式
实施例1：化合物I具有适宜的生物利用度，可用于抗动脉粥样硬化。
化合物I在C57BL/6J小鼠中药时曲线见图1-3，主要药代数据见表1-2。以50mg/kg剂量给小鼠灌胃给予化合物I后，其绝对生物利用度为26.4％，Cmax为6.1μg/mL，远大于其体外抑制鞘磷脂酶活性的IC50值(0.30μg/mL)，且在小鼠中腹腔注射和灌胃给药基本符合线性动力学特征。SD大鼠中组织分布研究发现，肝中药物浓度约为同时间点的血中药物浓度的6倍左右(表3)。化合物I的作用靶器官为肝脏，肝中的药物蓄积有利于药效的发挥。因此，化合物I具有适宜的生物利用度，可用于抗动脉粥样硬化。
表1 C57BL/6J小鼠中化合物I灌胃(i.g.)给药及静脉(i.v.)给药后主要药代动力学参数(n＝6)
a Statistically insignificant(P＝0.3679)
b Statistically insignificant(P＝0.6160)
注:AUC,area under the curve；Cmax,maximum concentration；Lambda-z,elimination rate；t1/2,half-life；Vz/F,volume of distribution；Cl/F,clearances；MRT,mean residence time.
表2 C57BL/6J小鼠中化合物I腹腔注射(i.p.)给药后主要药代动力学参数(n＝6)
a Statistically insignificant(P＝0.6132)；b Statistically insignificant(P＝0.4900).
注:AUC,area under the curve；Cmax,maximum concentration；Lambda-z,elimination rate；t1/2,half-life；Vz/F,volume of distribution；Cl/F,clearances；MRT,mean residence time.
表3化合物I静脉给药8h后，大鼠血浆和肝中药物浓度(10mg/kg)
实施例2：化合物I不影响血液中的胆固醇、甘油三酯水平，仅降低鞘磷脂水平，无肝毒性
7周龄apoE-/-小鼠，适应性喂养1周后，8周龄的30只小鼠给予高脂饮食(0.21％胆固醇加21％脂肪)造模，正常饮食，试验期间保持通风、清洁卫生。室内温度：24±1℃，湿度：55±5％，可自由摄食饮水。造模6周后，所有小鼠随机分为3组，每组10只，造模的同时给予药物干预，连续灌胃7周，模型组采用溶媒代替药物。具体分组如下。A组：模型组(Vehicle-treated group)，30％PEG-400/10％DMSO/0.9％NaCl溶液(placebo group,0.1mL/10g/day)；B组：化合物I低剂量组(化合物I low dose)：称取化合物I原料，溶解配制于30％PEG-400/10％DMSO/0.9％NaCl溶液中，12.5mg/kg/day；C组：化合物I高剂量组(化合物I highdose)：称取化合物I原料，溶解配制于30％PEG-400/10％DMSO/0.9％NaCl溶液中，40mg/kg/day。每周称重1次，记录体重变化情况；同时观察记录进食、饮水、脱毛、蜷卧、精神状态、反应性等，以及有无发热、伤口感染和其他疾病情况，若发生异常需采取措施及时处理。小鼠20周齡时，从小鼠的后眼窝丛取血，应尽量减少创伤，将血置于预先肝素化的1.5mL EP管中，4℃5000rpm离心10分钟，分离血清，待全自动生化分析仪测定TG、TC、HDL-C、LDL-C、丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酸(AST)用。SM测定采用已报道的酶法(Ohkawa R,Kishimoto T,et al.ClinBiochem,2012,45(16-17):1463-1470.)
结果如表4所示，在高TC血症模型中，采用酶法测定血浆中SM水平，发现化合物I低剂量组和高剂量组显著地并且剂量依赖性地降低了血浆中的SM浓度，分别降低了23％(P<0.05)和37％(P<0.01)。同模型组相比，化合物I低剂量组和高剂量组对血浆中TC、TG，HDL-C、LDL-C影响无统计学意义，说明化合物I是独立于调TC、TG的新型抗AS靶点药物。所有小鼠肝功能指标AST和ALT测定结果均正常，各组间无统计学差异，说明化合物I在该实验条件下对小鼠肝功能无影响。
表4小鼠血浆中脂质水平测定结果
aValues are P<0.05.b Values are P<0.01.Values are as follows:mean±SD.The abbreviations used are as follows:SM,sphingomyelin(n＝10)；TC,cholesterol(n＝6)；TG,triglyceride(n＝6)；HDL-C,HDL cholesterol(n＝6)；LDL-C,LDLcholesterol(n＝6)；ALT,alanine aminotransferase(n＝6)；AST,aspartateaminotransferase(n＝6).。
实施例3：灌胃给予化合物I抑制动脉粥样硬化斑块的形成
apoE-/-小鼠，在高脂喂养6周后，用化合物I分别以12.5mg/kg/day和40mg/kg/day剂量，于第7周高脂喂养的同时灌胃给予化合物I，连续给药7周。取材之前禁食8h，不禁水，小鼠采用25％乌拉坦水溶液麻醉(0.2mL/30g)，在体视显微镜下分离心脏和主动脉弓，并仔细清除外周脂肪组织及结缔组织，洗去残血，分离结束，在其下面放置一小块黑色或其它色电工胶布作为拍摄心脏和主动脉弓时的背景，以突出心脏和主动脉弓，拍摄体视显微镜图，保存图片。分离胸腹部主动脉至髂总动脉分叉处，将其纵向切割并置于滴有一滴生理盐水的培养皿上，分离干净脂肪，放于载玻片上，待油红O染色分析，评估主动脉弓斑块面积。心脏部分用4％中性甲醛溶液灌流固定，用不同浓度的乙醇脱水后进行石蜡包埋，连续切成厚度为4μm厚的蜡片。蜡片的收集从主动脉瓣膜根部开始，连续约300μm长度的区域，在三尖瓣膜处每间隔5张取1张，HE染色切片用Leica Q550IW图像分析仪分析，每只小鼠取6张连续切片的均值进行统计学分析，作斑块面积比较。结果如图4-6所示，与模型组相比，化合物I低剂量组和高剂量组主动脉弓(图4)斑块面积明显减少。油红O染色(图5)显示化合物I低剂量组和高剂量组主动脉弓斑块面积占整个主动脉弓面积比明显降低，分别降低了22％(P<0.01)和37％(P<0.001)，并且化合物I抑制斑块的程度呈现一定的剂量相关性。HE染色法评估主动脉根部斑块面积大小显示(图6)，与模型组相比，化合物I低剂量组和高剂量组HE染色斑块面积明显减少，分别减少了35％(P<0.01)和47％(P<0.01)。体视显微镜拍摄主动脉弓图、主动脉弓油红O染色图、主动脉根部HE染色图结果均显示化合物I能缓解动脉粥样硬化斑块的形成，可用于治疗动脉粥样硬化。
实施例4：化合物I减少动脉粥样硬化斑块中巨噬细胞的生成
巨噬细胞免疫组化取用4μm的石蜡切片进行，选用macrophage-specificantibody(MOMA)(Nachtigal P,Pospisilova N,et al.Life Sci,2008,82(13-14):708-717.)
结果如图7所示，尽管所有的免疫组化切片染色结果均呈阳性，然而，化合物I低剂量组和高剂量组中巨噬细胞的含量比明显降低，分别降低了33％(P<0.05)和53％(P<0.01)。说明化合物I具有减少动脉粥样硬化斑块中巨噬细胞数量的作用。
实施例5：化合物I降低小鼠肝中SMS活性
SMS活性测定采用文献报道的HPLC法(Deng XD,Sun H,et al.Anal Lett,2012,45(12):1581-1589.)。该方法为半体内活性测定方法，是在含有SMS蛋白的组织匀浆液里，加入酶的两个底物卵磷脂(PC)和荧光标记神经酰胺(C6-NBD-Cer)，酶促反应发生后，生成具有荧光吸收的鞘磷脂(C6-NBD-SM)和二酰甘油(diacylglycerol,DAG)。C6-NBD-Cer和C6-NBD-SM均为具有荧光吸收的物质，采用HPLC-FLD可以测定C6-NBD-Cer和C6-NBD-SM的相对值，从而比较化合物I对于SMS的抑制作用。
SMS粗酶提取匀浆缓冲液(50mMTris-HCl pH 7.4，0.25M sucrose，l mM EDTA)：称取1.2114g Tris溶解于100mL蒸馏水中，加入84mL 0.l M的HCl(0.9mL浓HCl稀释到100mL即为0.l M HCl)，将混合液定容至200mL。称取无水蔗糖17.1g，EDTA 58.45mg溶解于上述溶液中。
10×SMS测试缓冲液(测定缓冲液)(100mMHepes pH 7.4，30mM MnC12，3％fattyacid free BSA):取Hepes酸1.1916g，MnC12·4H2O 0.2969g，脱脂BSA 1.5g，蒸馏水溶解，定容至50mL。
样品处理：取小鼠肝脏加入匀浆缓冲液中，加入比例为每0.1g组织加500μL匀浆缓冲液，冰浴中在超声波细胞粉碎机上进行粉碎。将匀浆液12000rpm离心10min。上清液即为SMS粗酶提取物，可直接用于SMS活性测定。
匀浆蛋白含量的测定：蛋白含量采用牛血清白蛋白(BSA)试剂盒测定。配制1mL0.5mg/mL的蛋白标准液母液。取待测样品20μL，加入96孔板中，另取20μL肝匀浆缓冲液设置为空白对照，加入200μL BSA工作液。37℃放置30min，取出。在562nm波长下，以空白对照调零，测定光吸收值，最后计算出待测样品的浓度。用匀浆缓冲液调整不同样品的蛋白含量至40mg/mL。
取50μL(相当于2mg蛋白)粗酶提取物，加入30μL 10×SMS测试缓冲液，3μL PCsolution(20mg/mL,29.5mM)，2μL NBD-Ceramide(1mg/mL,1.737mM)，加水至300μL，使各物质的浓度如下：6.7μg/mL C6-NBD-Cer，20μg/mL PC，10mMHepes(pH 7.4)，3mM MnCl2，0.3％BSA。37℃温浴2h，加入600μL无水乙醇，漩涡混匀30s，离心去除蛋白，上清液进行HPLC分析。色谱柱为Agilent C18RP(250mm x 4.6mm 5μm)。流动相为：甲醇/水/三氟乙酸(88:12:0.1,v:v:v)，流速1.0mL/min。FLD检测，λexcitation＝475nm,λemission＝525nm。进样体积：20μL。
结果如图8所示，由色谱图可知，在样品位置无明显内源性物质干扰测定。与模型组相比，在肝组织匀浆中，化合物I给药组SMS活性明显降低，低剂量组和高剂量组分别降低了35％和39％(P<0.05)。说明化合物I是通过降低体内鞘磷脂合酶活性而发挥抗动脉粥样硬化作用的。
实施例6：化合物I降低血中炎症相关细胞水平
取全血放置于肝素化的塑料管中，加入红细胞裂解液使红细胞裂解，放置20min，3000rpm 5min去上清液，200μLPBS重悬下层细胞，细胞计数在电镜下观察约为2×106个。再加抗体孵育，离心，复溶重悬，得单细胞悬液，流式仪分析(BD FACSAriaTM III FlowCytometry System)。分别测定中性粒细胞(Neutrophile granulocyte)，淋巴细胞(Lymphocyte)，单核细胞(monocyte)，CD4+/CD8+细胞比例，树突状细胞(CD11b+CD11c+subset of dendritic cells)，CD11b+Ly6C++Ly6G+细胞(granulocytic Myeloid-derivedsuppressor cells，granulocytic MDSCs)。
结果如图9所示，与模型组相比，化合物I低剂量组和高剂量组淋巴细胞明显减少，分别减少了21％(P<0.05)和24％(P<0.01)；单核细胞明显减少，分别减少了51％(P<0.01)和50％(P<0.01)；CD4+/CD8+细胞比值明显降低，分别降低了34％(P<0.01)和37％(P<0.01)；各组间中性粒细胞未发现有明显差异。据文献(HedrickCC.ArteriosclerThrombVasc Biol.2015,35(2):253-257；Kyaw T,WinshipA.Circulation.2013,127(9):1028-1039)报道，AS形成早期，CD8+细胞表达增多，以抑制斑块的形成；随着斑块的增加，CD4+细胞表达也随之增多。因此，CD4+/CD8+细胞比值更能反映斑块的大小。在AS形成过程中，树突状细胞(DCs)快速增多。与模型组相比，化合物I高剂量组树突状细胞明显减少，减少了57％(P<0.05)；化合物I低剂量组无显著性变化。CD11b+Ly6C++Ly6G+细胞与炎症呈正相关，与模型组相比，化合物I高剂量组CD11b+Ly6C++Ly6G+细胞明显减少，减少了43％(P<0.01)；而化合物I低剂量组无显著性变化。化合物I可降低体内炎症相关细胞水平，说明化合物I具有抗炎作用。
实施例7：腹腔注射给予化合物I缓解动脉粥样硬化斑块的形成
7周龄apoE-/-小鼠，适应性喂养1周后，分为2组，每组10只。8周龄时，给予高脂饮食(0.21％胆固醇加21％脂肪)造模，同时腹腔注射给予化合物I干预13周，正常饮食，试验期间保持通风、清洁卫生。室内温度：24±1℃，湿度：55±5％，可自由摄食饮水。A组：模型组(Vehicle-treated group)，30％PEG-400/10％DMSO/0.9％NaCl溶液(placebo group,0.1mL/10g/day)。B组：化合物I腹腔注射给药组：称取化合物I原料，溶解配制于30％PEG-400/10％DMSO/0.9％NaCl溶液中，12.5mg/kg/day。预防性给药13周后，进行取样。在体视显微镜下进行主动脉弓分离，然后拍照，以评估抗AS作用。与模型组相比，化合物I给药组主动脉弓斑块面积明显减少(图10，红色箭头指示部分为斑块)。分离胸腹部主动脉至髂总动脉分叉处，油红O染色分析，评估主动脉弓的斑块面积情况，结果与体视显微图结果一致(图11)。证明在预防性给药情况下，化合物I也能缓解动脉粥样硬化斑块的形成，可用于预防动脉粥样硬化。
实施例8：化合物I抑制巨噬细胞SMS活性
在巨噬细胞匀浆液中加入不同浓度的化合物I和底物NBD-ceramide及phosphatidylcholine，生成的产物NBD-SM用TLC检测。结果显示，化合物I抑制巨噬细胞匀浆中SMS活性，并具有剂量依赖性(图12)。
实施例9：化合物I抑制巨噬细胞IL-6和MCP-1的分泌
不同浓度的化合物I作用于小鼠骨髓源巨噬细胞，17h后，接着加入50ng/mL的LPS，作用6h后，用ELISA法按照试剂盒的要求检测培养基中IL-6和MCP-1的分泌水平。结果显示，化合物I抑制LPS诱导巨噬细胞分泌IL-6(图13a)，该作用与抑制NF-κB炎症信号通路活化有关(图13b)，化合物I也抑制致炎的巨噬细胞趋化因子-1(MCP-1)分泌(图13c)，并有剂量依赖关系。
实施例10：化合物I抑制肝细胞分泌致AS载脂蛋白apoB并促进巨噬细胞胆固醇外流。
不同浓度的化合物I与Huh-7细胞孵育，在培养基中加入35S-甲硫氨酸标记新生apoB，放射自显影测定培养液中分泌的新生apoB含量(图14a)。
不同浓度的化合物I作用于小鼠骨髓源巨噬细胞17h，培养基中加入ac-LDL的和3H-胆固醇，标记细胞内胆固醇。2小时后除去含有ac-LDL和3H-胆固醇的培养液，加入含有HDL培养液，测定培养液中的放射性，结果以培养液中放射性占总放射性百分比表示(图14b)。

Claims (6)

1.式(I)结构的乙基苄氧基苯甲酰吡啶胺在制备预防和治疗动脉粥样硬化药物中的用途；
所述的乙基苄氧基苯甲酰吡啶胺分子量为368.86，其化学系统名：2-((2-乙基)苄氧基)-N-(吡啶-3-基)苯甲酰胺，
2.按权利要求1所述的用途，其特征是，所述乙基苄氧基苯甲酰吡啶胺具有适宜的生物利用度，其绝对生物利用度为26.4％，Cmax为6.1μg/mL。
3.按权利要求1所述的用途，其特征是，所述乙基苄氧基苯甲酰吡啶胺通过降低体内鞘磷脂合酶活性和鞘磷脂水平，减少肝细胞分泌apoB,促进巨噬细胞胆固醇外流，抑制巨噬细胞分泌炎症因子，减少动脉粥样硬化斑块中巨噬细胞的数量，减少血中炎症细胞。
4.按权利要求1所述的用途，其特征是，所述乙基苄氧基苯甲酰吡啶胺抑制主动脉弓及主动脉根部的粥样硬化斑块形成。
5.按权利要求1所述的用途，其特征是，所述的药物为用作抗人或动物的动脉粥样硬化的药物。
6.按权利要求5所述的用途，其特征是，所述的药物给药途径为通过口服或腹腔注射途径。
CN201610392529.1A 2016-06-03 2016-06-03 乙基苄氧基苯甲酰吡啶胺在制备预防和治疗动脉粥样硬化药物中的用途 Pending CN107456453A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610392529.1A CN107456453A (zh) 2016-06-03 2016-06-03 乙基苄氧基苯甲酰吡啶胺在制备预防和治疗动脉粥样硬化药物中的用途

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610392529.1A CN107456453A (zh) 2016-06-03 2016-06-03 乙基苄氧基苯甲酰吡啶胺在制备预防和治疗动脉粥样硬化药物中的用途

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN107456453A true CN107456453A (zh) 2017-12-12

Family

ID=60544658

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201610392529.1A Pending CN107456453A (zh) 2016-06-03 2016-06-03 乙基苄氧基苯甲酰吡啶胺在制备预防和治疗动脉粥样硬化药物中的用途

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN107456453A (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109369554A (zh) * 2018-10-18 2019-02-22 中国药科大学 一种含有异羟肟酸的取代杂环类化合物及其制备方法和用途
WO2021223713A1 (zh) * 2020-05-06 2021-11-11 石家庄以岭药业股份有限公司 Sms2抑制剂在制备治疗高侵袭性乳腺癌药物中的应用

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105348182A (zh) * 2014-08-24 2016-02-24 复旦大学 2-烷氧基苯甲酰芳胺类化合物及其药物用途

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105348182A (zh) * 2014-08-24 2016-02-24 复旦大学 2-烷氧基苯甲酰芳胺类化合物及其药物用途

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109369554A (zh) * 2018-10-18 2019-02-22 中国药科大学 一种含有异羟肟酸的取代杂环类化合物及其制备方法和用途
WO2021223713A1 (zh) * 2020-05-06 2021-11-11 石家庄以岭药业股份有限公司 Sms2抑制剂在制备治疗高侵袭性乳腺癌药物中的应用

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Traber et al. Bovine milk lipoprotein lipase transfers tocopherol to human fibroblasts during triglyceride hydrolysis in vitro.
Platt et al. Extensive glycosphingolipid depletion in the liver and lymphoid organs of mice treated with N-butyldeoxynojirimycin
Kathirvel et al. Betaine improves nonalcoholic fatty liver and associated hepatic insulin resistance: a potential mechanism for hepatoprotection by betaine
CN110087647A (zh) 氨基酸组合物及肝疾病的治疗方法
Vidal et al. Apple procyanidins decrease cholesterol esterification and lipoprotein secretion in Caco-2/TC7 enterocytes
Levy et al. Localization, function and regulation of the two intestinal fatty acid-binding protein types
Ma et al. Paeoniflorin alleviates non-alcoholic steatohepatitis in rats: Involvement with the ROCK/NF-κB pathway
Nicholas et al. 1H NMR-based metabolomic analysis of liver, serum, and brain following ethanol administration in rats
Martín-Castillo et al. Effect of atorvastatin and diet on non-alcoholic fatty liver disease activity score in hyperlipidemic chickens
Field et al. Esterification of plasma membrane cholesterol and triacylglycerol-rich lipoprotein secretion in CaCo-2 cells: possible role of p-glycoprotein
Li et al. Determination of key active components in different edible oils affecting lipid accumulation and reactive oxygen species production in HepG2 cells
Shimoda et al. Changes in ceramides and glucosylceramides in mouse skin and human epidermal equivalents by rice-derived glucosylceramide
Mehran et al. Tumor necrosis factor-alpha inhibits lipid and lipoprotein transport by Caco-2 cells
CN110121339A (zh) 含单乙酰基二酰基甘油化合物的用于预防或者治疗肝炎的组合物
Chang et al. Fenofibrate exhibits a high potential to suppress the formation of squamous cell carcinoma in an oral-specific 4-nitroquinoline 1-oxide/arecoline mouse model
Fukuda et al. Adenine inhibits TNF-α signaling in intestinal epithelial cells and reduces mucosal inflammation in a dextran sodium sulfate-induced colitis mouse model
CN107456453A (zh) 乙基苄氧基苯甲酰吡啶胺在制备预防和治疗动脉粥样硬化药物中的用途
Ikewaki et al. Cilostazol, a potent phosphodiesterase type III inhibitor, selectively increases antiatherogenic high-density lipoprotein subclass LpA-I and improves postprandial lipemia in patients with type 2 diabetes mellitus
US7528168B2 (en) Inhibitors of the fatty acid oxidation for the prophylaxis and/or the treatment of chronic and/or atopic skin diseases
Grenier et al. Role of the apical and basolateral domains of the enterocyte in the regulation of cholesterol transport by a high glucose concentration.
Wennicke et al. Glycosylphosphatidylinositol-induced cardiac myocyte death might contribute to the fatal outcome of Plasmodium falciparum malaria
CA2883176A1 (en) Composition comprising scirpusin a and scirpusin b and anti-obesity potential thereof
Felker et al. Properties of lipoproteins in blood plasma and liver perfusates of rats with cholestasis
Pathania et al. 1H NMR-based metabolic signatures in the liver and brain in a rat model of hepatic encephalopathy
JP6576445B2 (ja) ファルネシル類の芳香族化合物及びその応用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20171212