CN107421936A - 一种检测乳腺癌细胞耐药性的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供检测乳腺癌细胞耐药性的方法，属于化疗药物耐药性检测领域，通过分离乳腺癌患者外周血中的循环外泌体，并与乳胶株吸附，而后通过流式细胞术检测循环外泌体携带的TRPC5的蛋白水平，动态检测化疗前后循环外泌体携带的循环外泌体，当化疗后循环外泌体携带的TRPC5蛋白水平升高超过9％时，可预判乳腺癌出现化疗耐药；该方法能够克服现有技术中采用RECIST标准来判断乳腺癌细胞的耐药性导致获取结论滞后、结论不准确的问题，简便快捷的获得乳腺癌细胞耐药状态，进一步的能够指导临床及时调整化疗方案，减少不必要的医疗资源浪费。

Description

一种检测乳腺癌细胞耐药性的方法
技术领域
本发明涉及化疗药物耐药性检测领域，尤其涉及一种检测乳腺癌细胞耐药性的方法。
背景技术
乳腺癌居我国城市女性恶性肿瘤发病率的第一位，严重威胁女性身心健康。化疗是乳腺癌的主要治疗手段之一，据美国癌症协会统计，90％以上的肿瘤患者死亡缘于化疗耐药。目前临床上对实体瘤化疗疗效评价，是根据实体瘤化疗疗效评价(RECIST)标准进行，利用影像学技术监测肿瘤大小的变化，以化疗前肿瘤各病灶(最多10个，每个器官最多5个)最大径之和作为基线，将化疗后肿瘤各病灶最大径之和增大超过20％的定义为化疗进展。
然而，现有的RECIST标准存在以下缺点：
(1)肿瘤存在异质性，其增大可能是由于部分耐药肿瘤细胞的增加引起，而与其中的敏感细胞无关，RECIST标准缺乏对耐药机制的阐释，对此无法进行区分。
(2)RECIST标准作为回顾性的评价，其对于耐药患者的判断，均需要客观确切进展的出现，即在出现确切的耐药才能做出评判，而此时患者已经接受了无效的化疗(化疗已经耐药)，无法做到对耐药的预测，不可避免地使患者接受进展之后的无效化疗。
(3)肿瘤异常活跃的增殖特性可能导致化疗杀灭肿瘤细胞的速度低于肿瘤细胞自身增殖的速度，这种情况下，RECIST标准所判断的进展(肿瘤增大)并不是肿瘤耐药，而由此更换化疗方案是错误的选择。
由此可知，采用现有技术中的RECIST标准来判断乳腺癌在经过某一化疗方案治疗后是否存在耐药性，得到结论是滞后的，同时结论还往往误导医生判断错误，从而耽误病人病情。
发明内容
针对上述存在的问题，本发明提供了一种检测乳腺癌细胞耐药性的方法，以克服现有技术中采用RECIST标准来判断乳腺癌细胞的耐药性导致获取结论滞后、结论不准确的问题，能够简便快捷的获得乳腺癌细胞耐药状态，进一步的能够指导临床及时调整化疗方案，减少不必要的医疗资源浪费。
为了实现上述目的，本发明采取的技术方案为：
一种检测乳腺癌细胞耐药性的方法，其中，包括：
(1)获取化疗前外周血液；
(2)以梯度高速离心法分离所述化疗前外周血液，获得化疗前循环外泌体；
(3)采用乳胶株吸附所述化疗前循环外泌体；
(4)采用流式细胞术检测附着有所述化疗前循环外泌体的乳胶株，获得所述化疗前循环外泌体中TRPC5的荧光初始值；
(5)获取化疗后外周血液；
(6)以梯度高速离心法分离所述化疗后外周血液，获得化疗后循环外泌体；
(7)采用乳胶株吸附所述化疗后循环外泌体；
(8)采用流式细胞术检测附着有所述化疗后循环外泌体的乳胶株，获得所述化疗后循环外泌体中TRPC5的荧光化疗值；
(9)当所述化疗后循环外泌体中TRPC5的荧光化疗值较所述化疗前循环外泌体中TRPC5的荧光初始值增加大于等于9％时，提示所述乳腺癌细胞出现耐药。
上述的检测乳腺癌细胞耐药性的方法，其中，步骤(1)和步骤(5)中获取的化疗前外周血液和化疗后外周血液的血液量为1.8～2.2ml。
上述的检测乳腺癌细胞耐药性的方法，其中，以21天为周期进行步骤(5)获取化疗后的外周血液，并执行步骤(6)～(9)。
上述技术方案具有如下优点或者有益效果：
本发明提供的检测乳腺癌细胞耐药性的方法，通过分离乳腺癌患者外周血中的循环外泌体，并与乳胶株吸附，而后通过流式细胞术检测循环外泌体携带的TRPC5的蛋白水平，动态检测化疗前后循环外泌体携带的循环外泌体，当化疗后循环外泌体携带的TRPC5蛋白水平升高大于等于9％时，可预判乳腺癌出现化疗耐药；该方法能够克服现有技术中采用RECIST标准来判断乳腺癌细胞的耐药性导致获取结论滞后、结论不准确的问题，简便快捷的获得乳腺癌细胞耐药状态，进一步的能够指导临床及时调整化疗方案，提高病人的治愈机率，并且减少不必要的医疗资源浪费。
附图说明
通过阅读参照以下附图对非限制性实施例所作的详细描述，本发明及其特征、外形和优点将会变得更加明显。在全部附图中相同的标记指示相同的部分，并未刻意按照比例绘制附图，重点在于示出本发明的主旨。
图1是用westernblot和FCM两方法证实乳胶株吸附循环外泌体的可行性的示意图；
图2是循环外泌体中TRPC5荧光值与免疫组化水平之间的关系示意图；
图3是采用流式细胞术检测循环外泌体携带不同水平的TRPC5的示意图；
图4是敏感病人循环外泌体携带的TRPC5水平和耐药病人循环外泌体携带的TRPC5水平的示意图；
图5是循环外泌体携带的TRPC5的水平与肿瘤的退缩程度之间的关系示意图；
图6是采用本发明实施例1提供的检测乳腺癌细胞耐药性的方法，根据携带的TRPC5水平的动态变化可提前预测乳腺癌细胞耐药的示意图。
具体实施方式
下面结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整的说明，显然所描述的实施例仅仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。通常此处附图中描述和示出的本发明的实施例的组件可以按照不同的配置来布置和设计。因此，以下对附图中提供的本发明的实施例的详细描述并非旨在限制要求保护的本发明的范围，而是仅仅表示本发明的选定实施例。基于本发明的实施例，本领域技术人员在没有作出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明的保护范围。
实施例1：
如图1所示，本发明实施例1提供的检测乳腺癌细胞耐药性的方法，包括：
(1)获取化疗前外周血液；
(2)以梯度高速离心法分离化疗前外周血液，获得化疗前循环外泌体；
(3)采用乳胶株吸附化疗前循环外泌体；
(4)采用流式细胞术检测附着有化疗前循环外泌体的乳胶株，获得化疗前循环外泌体中TRPC5的荧光初始值；
(5)获取化疗后外周血液；
(6)以梯度高速离心法分离化疗后外周血液，获得化疗后循环外泌体；
(7)采用乳胶株吸附化疗后循环外泌体；
(8)采用流式细胞术检测附着有化疗后循环外泌体的乳胶株，获得化疗后循环外泌体中TRPC5的荧光化疗值；
(9)当化疗后循环外泌体中TRPC5的荧光化疗值较化疗前循环外泌体中TRPC5的荧光初始值增加大于等于9％时，提示乳腺癌细胞出现耐药。
在本发明实施例1提供的检测乳腺癌细胞耐药性的方法中，步骤(1)和步骤(5)中获取的化疗前外周血液和化疗后外周血液的血液量为1.8～2.2ml，这么多量的血液分离出的外泌体量能够用在后续的流式细胞术的检测中，过多或者多少的血液量，其分离的外泌体，要么量少无法检测要么量多影响检测结果。
在本发明实施例1提供的检测乳腺癌细胞耐药性的方法中，以21天为周期进行步骤(5)，获取化疗后的外周血液，并执行步骤(6)～(9)。由于血液是从外周血中获取，并且仅仅获取1.8～2.2ml，对于病人而言，属于无创伤的操作，因此，可以较为频繁的检测，这样一旦发现异常，可以及时调整化疗方案，能够对病人的治疗产生极大的好处。
图1是用westernblot和FCM两种方法证实乳胶株吸附循环外泌体的可行性的示意图；如图所示，外泌体中存在若干的蛋白，通过westernblot和FCM这两种方法，可以发现完全可以在外泌体中检测到TRPC5、CD63、MUC1和Flotillin1，TRPC5的条带表示通过乳胶株吸附外泌体，可以检测到TRPC5的荧光值，CD63和Flotillin1的条带表示检测的是外泌体，吸附在乳胶株上的是外泌体，而MCU1的条带表示该外泌体是从一个具有乳腺癌细胞的患者血液中分离的。所以，通过乳胶株吸附外泌体，而后通过流式细胞术检测外泌体中的TRPC5是可行的。
图2是循环外泌体中TRPC5荧光值与免疫组化水平之间的关系示意图；由图可知，横坐标为外泌体中TRPC5的荧光值(也称之为含量)，纵坐标为免疫组化水平，通过对54个人的检测，可以发现，TRPC5荧光值与免疫组化水平是呈正相关的，由此可以判定，循环外泌体中携带的TRPC5水平可实时正确反映原位肿瘤组织中TRPC5的表达水平。
图3是采用流式细胞术检测循环外泌体携带不同水平的TRPC5的代表性示意图；图3是采用流式细胞术检测五个循环外泌体中的TRPC5，采用更为直观的方式表述五个具备代表性的不同水平的TRPC5。
图4是敏感病人循环外泌体携带的TRPC5水平和耐药病人循环外泌体携带的TRPC5水平的示意图；由图可知，敏感病人循环外泌体携带的TRPC5水平低于耐药病人循环外泌体携带的TRPC5水平。由此可知，循环外泌体携带的TRPC5的高低可反映耐药水平。
图5是循环外泌体携带的TRPC5的水平与肿瘤的退缩程度之间的关系示意图；由图可知，化疗前循环外泌体携带的TRPC5的水平与肿瘤的退缩程度呈正相关的。
图6是采用本发明实施例1提供的检测乳腺癌细胞耐药性的方法，根据携带的TRPC5水平的动态变化可提前预测乳腺癌细胞耐药的示意图；如图所示，基于化疗后进展风险的cox风险比例模型，计算出可预测耐药的循环外泌体携带TRPC5升高的最佳截断值，其升高超过9％可强烈预测耐药的发生，且较CT证实耐药的出现可提前平均2个月。这样就能够较为及时的提醒医生给病人进行换方案治疗，避免了不必要的治疗，并且增加了病人治愈的机率。
综上所述，本发明实施例1提供的检测乳腺癌细胞耐药性的方法，通过分离乳腺癌患者外周血中的循环外泌体，并与乳胶株吸附，而后通过流式细胞术检测循环外泌体携带的TRPC5的蛋白水平，动态检测化疗前后循环外泌体携带的循环外泌体，当化疗后循环外泌体携带的TRPC5蛋白水平升高超过9％时，可预判乳腺癌出现化疗耐药；该方法能够克服现有技术中采用RECIST标准来判断乳腺癌细胞的耐药性导致获取结论滞后、结论不准确的问题，简便快捷的获得乳腺癌细胞耐药状态，进一步的能够指导临床及时调整化疗方案，提高病人的治愈机率，并且减少不必要的医疗资源浪费。
本领域技术人员应该理解，本领域技术人员结合现有技术以及上述实施例可以实现所述变化例，在此不予赘述。这样的变化例并不影响7本发明的实质内容，在此不予赘述。
以上对本发明的较佳实施例进行了描述。需要理解的是，本发明并不局限于上述特定实施方式，其中未尽详细描述的设备和结构应该理解为用本领域中的普通方式予以实施；任何熟悉本领域的技术人员，在不脱离本发明技术方案作出许多可能的变动和修饰，或修改为等同变化的等效实施例，这并不影响本发明的实质内容。因此，凡是未脱离本发明技术方案的内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所做的任何简单修改、等同变化及修饰，均仍属于本发明技术方案保护的范围内。

Claims (3)

1.一种检测乳腺癌细胞耐药性的方法，其特征在于，包括：
(1)获取化疗前外周血液；
(2)以梯度高速离心法分离所述化疗前外周血液，获得化疗前循环外泌体；
(3)采用乳胶株吸附所述化疗前循环外泌体；
(4)采用流式细胞术检测附着有所述化疗前循环外泌体的乳胶株，获得所述化疗前循环外泌体中TRPC5的荧光初始值；
(5)获取化疗后外周血液；
(6)以梯度高速离心法分离所述化疗后外周血液，获得化疗后循环外泌体；
(7)采用乳胶株吸附所述化疗后循环外泌体；
(8)采用流式细胞术检测附着有所述化疗后循环外泌体的乳胶株，获得所述化疗后循环外泌体中TRPC5的荧光化疗值；
(9)当所述化疗后循环外泌体中TRPC5的荧光化疗值较所述化疗前循环外泌体中TRPC5的荧光初始值增加大于等于9％时，提示所述乳腺癌细胞出现耐药。
2.如权利要求1所述的检测乳腺癌细胞耐药性的方法，其特征在于，步骤(1)和步骤(5)中获取的化疗前外周血液和化疗后外周血液的血液量为1.8～2.2ml。
3.如权利要求1所述的检测乳腺癌细胞耐药性的方法，其特征在于，以21天为周期进行步骤(5)，获取化疗后外周血液，并执行步骤(6)～(9)。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113075192A (zh) * 2021-03-19 2021-07-06 中国科学院苏州生物医学工程技术研究所 基于拉曼光谱的多药耐药肿瘤细胞鉴定方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105256036A (zh) * 2015-10-26 2016-01-20 中国人民解放军第二军医大学 一种检测血清中lncARSR的试剂盒及其在检测肾癌舒尼替尼耐药中的应用
CN105861695A (zh) * 2016-05-11 2016-08-17 江苏省肿瘤医院 一种检测乳腺癌细胞耐药性的方法及检测试剂盒

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105256036A (zh) * 2015-10-26 2016-01-20 中国人民解放军第二军医大学 一种检测血清中lncARSR的试剂盒及其在检测肾癌舒尼替尼耐药中的应用
CN105861695A (zh) * 2016-05-11 2016-08-17 江苏省肿瘤医院 一种检测乳腺癌细胞耐药性的方法及检测试剂盒

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
《中国肿瘤临床年鉴》编辑部: "《中国肿瘤临床年鉴》", 30 September 2016 *
TENG WANG ET AL: ""Increasing circulating exosomes-carrying TRPC5 predicts chemoresistance in metastatic breast cancer patients"", 《CANCER SCI》 *
XIN MA ET AL: "Essential role for TrpC5-containing extracellular vesicles in breast cancer with chemotherapeutic resistance", 《PNAS》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113075192A (zh) * 2021-03-19 2021-07-06 中国科学院苏州生物医学工程技术研究所 基于拉曼光谱的多药耐药肿瘤细胞鉴定方法
CN113075192B (zh) * 2021-03-19 2023-03-14 中国科学院苏州生物医学工程技术研究所 基于拉曼光谱的多药耐药肿瘤细胞鉴定方法

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