CN107384842A - 一种复合菌种及其应用、复合菌剂 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种复合菌种,由皮特不动杆菌Acinetobacter pittii和铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosa组成;所述皮特不动杆菌和铜绿假单胞菌的有效菌数量比为1:2~3。该复合菌种中的皮特不动杆菌和铜绿假单胞菌能够对吲哚增溶和降解,提高了畜禽恶臭有机废气中吲哚的去除效率。实验结果表明:复合菌种对畜禽恶臭有机废气中吲哚的去除效率为97~98%。
Description
技术领域
本发明涉及禽畜养殖场恶臭废气处理技术领域,尤其涉及一种复合菌种及其应用、复合菌剂。
背景技术
随着畜牧业生产经营规模的不断扩大和集约化程度的不断提高,生产出大量畜禽产品的同时也排放出大量的恶臭物,混杂在一起散发出难闻的气味。禽畜养殖场恶臭废气的来源除了H2S和NH3外,在动物的粪便中大量存在的杂环芳烃吲哚也具有强烈的粪臭味。
常用的恶臭治理技术可分为两种,一种是传统处理方法,包括冷凝法、吸收法、吸附法、燃烧法;另一种是新兴处理技术,包括膜分离法、光催化氧化法、生物处理法和等离子体法等。
目前,禽畜规模化养殖场恶臭废气的处理主要采用水喷淋法:主要针对养殖圈舍废气中的H2S、NH3等无机成分,而吲哚(粪臭素)等有机废气成分在水相中易于饱和,去除效果不佳。
发明内容
有鉴于此,本发明的目的在于提供一种复合菌种及其应用、复合菌剂,该复合菌种去除禽畜恶臭有机废气中的吲哚效率较高。
本发明提供了一种复合菌种,由皮特不动杆菌Acinetobacter pittii和铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosa组成;
所述皮特不动杆菌和铜绿假单胞菌的有效菌数量比为1:2~3。
优选地,所述皮特不动杆菌和铜绿假单胞菌的有效菌数量比为1:2.3~2.7。
本发明提供了一种含吲哚的禽畜恶臭有机废气的处理方法,包括以下步骤:
将含吲哚的禽畜恶臭有机废气进行水洗预处理,得到预处理含吲哚的禽畜恶臭有机废气;
采用上述技术方案所述复合菌种与所述预处理含吲哚的禽畜恶臭有机废气接触,得到处理后的气体。
优选地,所述接触的方式为喷淋;
复合菌种的喷淋量与含吲哚的禽畜恶臭有机废气的流量为(10~300)L/min:(2000~30000)m3/h。
优选地,所述含吲哚的禽畜恶臭有机废气中吲哚的质量浓度为50~500mg/L。
优选地,所述接触的温度为37~55℃。
优选地,所述含吲哚的禽畜恶臭有机废气为集中式恶臭有机废气或面源式恶臭有机废气。
本发明提供了一种复合菌剂,由上述技术方案所述的复合菌种、包埋载体和交联剂组成,所述皮特不动杆菌和铜绿假单胞菌通过交联剂固定于所述包埋载体中;
所述包埋载体为包括聚乙烯醇和海藻酸钠的混合溶液;
所述交联剂为CaCl2溶液。
优选地,所述复合菌种的密度为107~108CFU/mL。
优选地,所述包埋载体中聚乙烯醇和海藻酸钠的质量比为6~10:2。
本发明提供了一种复合菌种,由皮特不动杆菌Acinetobacter pittii和铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosa组成;所述皮特不动杆菌和铜绿假单胞菌的有效菌数量比为1:2~3。该复合菌种中的皮特不动杆菌和铜绿假单胞菌能够对吲哚增溶和降解,提高了畜禽恶臭有机废气中吲哚的去除效率。实验结果表明:复合菌种对畜禽恶臭有机废气中吲哚的去除效率为97~98%。
附图说明
图1为不同初始浓度下Acinetobacter pittii对液相中吲哚的降解曲线图;
图2为不同包埋物固定化细胞小球;
图3为猪舍负压温控通风系统;
图4为抑尘与水帘废气处理图;
图5为本发明实施例2废气处理工艺流程图;
图6为废气处理循环菌液储罐;
图7为本发明实施例3提供的小型生物喷淋滤塔处理装置示意图。
具体实施方式
本发明提供了一种复合菌种,由皮特不动杆菌Acinetobacter pittii和铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosa组成;
所述皮特不动杆菌和铜绿假单胞菌的有效菌数量比为1:2~3。
该复合菌种中的皮特不动杆菌和铜绿假单胞菌能够对吲哚增溶和降解,提高了畜禽恶臭有机废气中吲哚的去除效率。实验结果表明:复合菌种对畜禽恶臭有机废气中吲哚的去除效率为97~98%。
在本发明中,所述皮特不动杆菌和铜绿假单胞菌的有效菌数量比优选为1:2.3~2.7,更优选为1:2.5。
在本发明中,所述皮特不动杆菌Acinetobacter pittii优选由广东工业大学环境微生物实验室提供。本发明对所述铜绿假单胞菌的来源没有特殊的限制,采用本领域技术人员熟知的铜绿假单胞菌即可,如采用其市售商品。
在本发明中,所述皮特不动杆菌的富集培养过程包括:
将LB培养基121℃灭菌30min,分装于150mL的三角瓶,皮特不动杆菌接种量为1%,摇床培养条件:转速为150r/min、温度为37℃、培养时间为18h。其中,LB培养基配方(g/L):蛋白胨,10;酵母粉,5;氯化钠,10。
所述铜绿假单胞菌的富集培养过程包括:
将甘油摇瓶培养基灭菌后,分装于150mL的三角瓶,铜绿假单胞菌的接种量为1%,摇床培养条件:温度为33℃、转速为150r/min,时间为24h。其中,甘油摇瓶培养基配方(g/L):甘油,30;KCl,1.0;NaCl,1.0;MgSO4,0.2;CaC12·2H2O,0.1;Na2HPO4·12H2O,3.0;NaNO3,4.0;KH2PO4,3.0;微量元素,2mL/L;pH 6.8。微量元素组成(g/L):CTAB,0.2;(NH4)6Mo7O24·4H2O,0.6;FeSO4·7H2O,2.0;pH 6.8。
皮特不动杆菌和铜绿假单胞菌种子扩培方法包括:
将上述培养好的皮特不动杆菌菌液和铜绿假单胞菌菌液各1.5L转接到30L反应器中进行扩培和驯化,营养液装液量80%,采用改进的LB培养基配方,培养温度37℃条件下进行曝气培养,96h后培养液中表面张力可低于27mN/m。
改进的LB培养基配方(g/L):蛋白胨,10;酵母粉,5;氯化钠,10;调和油45.0;硝酸钠4.0;微量元素0.35%(v/v)。微量元素组成(g/L):CTAB,0.2;(NH4)6Mo7O24·4H2O,0.6;FeSO4·7H2O,2.0;pH6.8。
该复合菌种可结合生物喷淋塔进行禽畜有机废气集中处理,或采用喷雾器进行面源恶臭废气污染治理。
本发明提供了一种含吲哚的禽畜恶臭有机废气的处理方法,包括以下步骤:
将含吲哚的禽畜恶臭有机废气进行水洗预处理,得到预处理含吲哚的禽畜恶臭有机废气;
采用上述技术方案所述复合菌种与所述预处理含吲哚的禽畜恶臭有机废气接触,得到处理后的气体。
本发明将含吲哚的禽畜恶臭有机废气进行水洗预处理,得到预处理含吲哚的禽畜恶臭有机废气。在本发明中,所述含吲哚的禽畜恶臭有机废气中吲哚的质量浓度优选为50~500mg/L。
在本发明中,所述接触的形式为喷淋;
复合菌种的喷淋量与含吲哚的禽畜恶臭有机废气的流量比优选为(10~300)L/min:(2000~30000)m3/h。
在本发明中,所述接触的温度优选为37~55℃。
在本发明中,所述含吲哚的禽畜恶臭有机废气为集中式恶臭有机废气或面源式恶臭有机废气。
本发明提供了一种复合菌剂,由上述技术方案所述的复合菌种、包埋载体和交联剂组成,所述皮特不动杆菌和铜绿假单胞菌通过交联剂固定于所述包埋载体中;
所述包埋载体为包括聚乙烯醇和海藻酸钠的混合溶液;
所述交联剂为CaCl2溶液。
在本发明中,所述复合菌种的密度优选为107~108CFU/mL。
在本发明中,所述包埋载体中聚乙烯醇和海藻酸钠的质量比为6~10:2。
该复合菌剂可结合生物喷淋塔进行禽畜有机废气集中处理,或采用喷雾器进行面源恶臭废气污染治理。
在本发明中,上述技术方案所述复合菌剂优选按照以下方法制备:
将复合菌种和包埋载体混合均匀,得到混合液,所述包埋载体为包括聚乙烯醇和海藻酸钠的混合溶液;
将所述混合液和交联剂交联反应,得到复合菌剂,所述交联剂为CaCl2溶液。
本发明将复合菌种和包埋载体混合均匀,得到混合液,所述包埋载体为包括聚乙烯醇和海藻酸钠的混合溶液。在本发明中,所述包埋载体中聚乙烯醇和海藻酸钠的质量比优选为6~10:2。
得到混合液后,本发明将所述混合液和交联剂交联反应,得到复合菌剂,所述交联剂为CaCl2溶液。本发明优选将交联剂以滴入的形式加入到混合液中。所述交联反应的温度优选为10~35℃,更优选为25℃;所述交联反应的时间优选为50~65min,更优选为60min。
本发明提供了一种复合菌种,由皮特不动杆菌Acinetobacter pittii和铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosa组成;所述皮特不动杆菌和铜绿假单胞菌的有效菌数量比为1:2~3。该复合菌种中的皮特不动杆菌和铜绿假单胞菌能够对吲哚增溶和降解,提高了畜禽恶臭有机废气中吲哚的去除效率。实验结果表明:复合菌种对畜禽恶臭有机废气中吲哚的去除效率为97~98%。
为了进一步说明本发明,下面结合实施例对本发明提供的一种复合菌种及其应用、复合菌剂进行详细地描述,但不能将它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
A、复合菌剂的制备
(1)皮特不动杆菌的扩培
将LB培养基121℃灭菌30min,分装于150mL的三角瓶,皮特不动杆菌接种量为1%,摇床培养条件:转速为150r/min、温度为37℃、培养时间为18h。其中,LB培养基配方(g/L):蛋白胨,10;酵母粉,5;氯化钠,10。
参见图1,皮特不动杆菌对液相中不同初始浓度吲哚的降解曲线图;由图1可以看出:在pH为7.0,37℃和150r/min的培养条件下,初始浓度浓度为100-400mg/L的吲哚在48h被完全降解。尤其当吲哚的浓度低于200mg/L时,能被皮特不动杆菌在18h内完全降解。当吲哚初始浓度为300mg/L和400mg/L时,30h以后开始滞后。说明吲哚初始浓度越高,对微生物的抑制毒性越大,菌株对底物的耐受性越低。
(2)铜绿假单胞菌的扩培
将甘油摇瓶培养基灭菌后,分装于150mL的三角瓶,铜绿假单胞菌的接种量为1%,摇床培养条件:温度为33℃、转速为150r/min,时间为24h。其中,甘油摇瓶培养基配方(g/L):甘油,30;KCl,1.0;NaCl,1.0;MgSO4,0.2;CaC12·2H2O,0.1;Na2HPO4·12H2O,3.0;NaNO3,4.0;KH2PO4,3.0;微量元素,2mL/L;pH 6.8。微量元素组成(g/L):CTAB,0.2;(NH4)6Mo7O24·4H2O,0.6;FeSO4·7H2O,2.0;pH 6.8。
(3)复合菌液的制备
将上述培养好的菌液各1.5L转接到30L反应器中进行扩培和驯化,营养液装液量80%,采用改进的LB培养基配方。培养温度37℃条件下进行曝气培养,96h后培养液中表面张力可低于27mN/m。
改进的LB培养基配方(g/L):蛋白胨,10;酵母粉,5;氯化钠,10;调和油45.0;硝酸钠4.0;微量元素0.35%(v/v)。微量元素组成(g/L):CTAB,0.2;(NH4)6Mo7O24·4H2O,0.6;FeSO4·7H2O,2.0;pH 6.8。
B、细胞固定化方法
(1)皮特不动杆菌菌悬液的制备:
从斜面培养基转接于100mL LB液体培养基,37℃,150r/min条件培养16h。4000r/min离心3min,4℃,弃去上清液,加入无菌水4000r/min离心10min,4℃,无菌水重悬,调节OD600nm值为1.0,作为皮特不动杆菌菌悬液备用,记为A液;
(2)铜绿假单胞菌菌悬液的制备:
从斜面培养基转接于100mL甘油摇瓶培养基,33℃,180r/min条件培养16h后;8000r/min离心3min,弃去上清液,加入无菌水8000r/min离心10min,4℃,无菌水重悬,调节OD600nm值为1.0,作为铜绿假单胞菌菌悬液备用,记为B液。
(3)配制4%CaCl2溶液(C液),10%聚乙烯醇(PVA)与2%海藻酸钠的混合溶液(D液),6%PVA与2%海藻酸钠的混合溶液(E液),2%海藻酸钠溶液(F液)。
(4)在超净工作台内按A液、B液、A与B混合液(1:2.5)分别按1:2的比例分别和D液、E液和F液混合均匀。
(5)将菌体混合液分别制成小球,用注射器将混合液先滴入4%CaCl2溶液,室温交联1小时后于4℃冰箱保存,保存待用,得到固定化细胞小球,即复合菌剂,参见图2,图2为不同包埋物固定化细胞小球。
表1各包埋物对液相中吲哚的降解效果
分别取制备的固定化小球3mL置于150mL无机盐培养基,其中吲哚浓度为200mg/L,37℃、150r/min摇床培养24h。测得不同组合对吲哚降解率为58%~67%(参见表1),其中ABE包埋物对吲哚降解效果最佳;当吲哚初始浓度为100mg/L时,37℃、150r/min摇床培养24h后吲哚降解率为100%。
实施例2
某养猪场设计规模为种猪2500头,年出栏生猪50000头。猪场采用全封闭式猪舍(每栋猪舍养殖种猪约100头),布置风机进行负压通风,采用温控通风,保持舍内温湿度处理合理状态。图3为猪舍负压温控通风系统;图4为抑尘与水帘废气处理图;图5为本发明实施例2废气处理工艺流程图;
采用图5所述的处理工艺,其中,第一级水帘循环喷淋主要去除废气中的H2S和NH3,第二级菌液喷淋采用皮特不动杆菌Acinetobacter pittii与铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)的混合菌剂,按菌种扩大培养所述方法进行扩培后,置于30L循环菌液储罐,见图6,图6为废气处理循环菌液储罐。采用0.75KW循环泵进行双层喷头循环喷淋,喷头间距1.5m。采用大气采样器采样,测定猪舍内吲哚初始浓度450mg/m3。经过菌液喷淋处理,循环系统稳定运行后测得网外吲哚浓度为13mg/m3,吲哚去除率为97.1%。
实施例3
将有效菌数量比为1:2.5的皮特不动杆菌与铜绿假单胞菌复合菌种和包埋载体混合均匀,得到混合液,所述包埋载体为包括质量浓度为6%的聚乙烯醇和2%的海藻酸钠的混合溶液;
将所述混合液和质量分数4%的CaCl2溶液交联反应,得到复合菌剂。
将复合菌剂与多面球一起填充于图7所示生物滤塔(空隙率0.8),图7为本发明实施例3提供的小型生物喷淋滤塔处理装置示意图;采用图7所述装置进行吲哚废气的生物降解处理。吲哚废气进气量为2500Nm3/h,进气吲哚初始浓度350mg/Nm3,气流速度0.9m/s,塔内废气停留时间为5s。
废气处理装置如图7所示,PVC材料,结构分为上下两段(直径1000mm,高5000mm,有效体积4m3),喷淋段和双层雾化喷头位于上段,有机废气经2KW风机增压,通过废气处理装置下部的布气装置进气,吲哚经生物填料段固定化细胞降解,经丝网除雾器除雾后排出达到除臭效果。
控制循环水箱温度为37℃,雾化喷淋量为8L/min的条件下稳定运行72h后进气。营养液回流循环泵功率0.75KW,25L/min,循环周期1h。采用大气采样器在进出口采样,紫外分光光度法和液相色谱仪检测气体浓度,测得装置对吲哚的去除率达到98%,净化后出口吲哚浓度≤8.5mg/Nm3。
对比例1
某养猪场设计规模为种猪2500头,年出栏生猪50000头。猪场采用全封闭式猪舍(每栋猪舍养殖种猪约100头),布置风机进行负压通风,采用温控通风,保持舍内温湿度处理合理状态。风机分为大小两组,功率分别为3KW和1.5KW,猪舍废气原来通过水洗和网捕后排出,吲哚(粪臭素)去除效率约35%。
由以上实施例可知,本发明提供了一种复合菌种,由皮特不动杆菌Acinetobacterpittii和铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosa组成;所述皮特不动杆菌和铜绿假单胞菌的有效菌数量比为1:2~3。该复合菌种中的皮特不动杆菌和铜绿假单胞菌能够对吲哚增溶和降解,提高了畜禽恶臭有机废气中吲哚的去除效率。实验结果表明:复合菌种对畜禽恶臭有机废气中吲哚的去除效率为97~98%。
以上所述仅是本发明的优选实施方式,应当指出,对于本技术领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明原理的前提下,还可以做出若干改进和润饰,这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一种复合菌种,由皮特不动杆菌Acinetobacter pittii和铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosa组成;
所述皮特不动杆菌和铜绿假单胞菌的有效菌数量比为1:2~3。
2.根据权利要求1所述的复合菌种,其特征在于,所述皮特不动杆菌和铜绿假单胞菌的有效菌数量比为1:2.3~2.7。
3.一种含吲哚的禽畜恶臭有机废气的处理方法,包括以下步骤:
将含吲哚的禽畜恶臭有机废气进行水洗预处理,得到预处理含吲哚的禽畜恶臭有机废气;
采用权利要求1~2任意一项所述复合菌种与所述预处理含吲哚的禽畜恶臭有机废气接触,得到处理后的气体。
4.根据权利要求3所述的处理方法,其特征在于,所述接触的方式为喷淋;
复合菌种的喷淋量与含吲哚的禽畜恶臭有机废气的流量为(10~300)L/min:(2000~30000)m3/h。
5.根据权利要求3所述的处理方法,其特征在于,所述含吲哚的禽畜恶臭有机废气中吲哚的质量浓度为50~500mg/L。
6.根据权利要求3所述的处理方法,其特征在于,所述接触的温度为37~55℃。
7.根据权利要求3所述的处理方法,其特征在于,所述含吲哚的禽畜恶臭有机废气为集中式恶臭有机废气或面源式恶臭有机废气。
8.一种复合菌剂,由权利要求1~2任意一项所述的复合菌种、包埋载体和交联剂组成,所述皮特不动杆菌和铜绿假单胞菌通过交联剂固定于所述包埋载体中;
所述包埋载体为包括聚乙烯醇和海藻酸钠的混合溶液;
所述交联剂为CaCl2溶液。
9.根据权利要求8所述的复合菌剂,其特征在于,所述复合菌种的密度为107~108CFU/mL。
10.根据权利要求8所述的复合菌剂,其特征在于,所述包埋载体中聚乙烯醇和海藻酸钠的质量比为6~10:2。
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CN201710864854.8A Pending CN107384842A (zh) | 2017-09-22 | 2017-09-22 | 一种复合菌种及其应用、复合菌剂 |
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Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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CN109337842A (zh) * | 2018-11-15 | 2019-02-15 | 中国农业科学院饲料研究所 | 一株具有吲哚降解能力的不动杆菌nta1-2a及其应用 |
CN109355218A (zh) * | 2018-10-18 | 2019-02-19 | 东北农业大学 | 用于畜禽粪便堆肥快速升温除味的多功能发酵复合菌剂及其制备方法与应用 |
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Citations (1)
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CN101659951A (zh) * | 2008-08-29 | 2010-03-03 | 天津市农业生物技术研究中心 | 一种“秸秆微贮生物添加剂”的固定化培养方法 |
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2017
- 2017-09-22 CN CN201710864854.8A patent/CN107384842A/zh active Pending
Patent Citations (1)
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